Orientador :Rosilene Fernandes da Rocha / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Co-orientador: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: A alta incidência de candidoses causadas por Candida albicans e a capacidade de adaptação desta espécie, assim como resistência aos antifúngicos impulsionam o desenvolvimento de pesquisas com terapias alternativas para controle dessa infecção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosus e produtos do seu metabolismo contra C. albicans, avaliando-se a patogenicidade e a expressão de genes que regulam a formação do biofilme de C. albicans, in vitro e in vivo em modelo invertebrado de Galleria mellonella. Foram utilizadas cepas de C. albicans ATCC 18804 e L. rhamnosus ATCC 9595 (provenientes do Laboratório de Microbiologia do Instituto de Ciências e Tecnologia de São José dos Campos / UNESP). Para o estudo foram preparadas duas suspensões de L. rhamnosus, uma contendo a porção celular e a outra com o sobrenadante da cultura, livre de células. O estudo da patogenicidade in vitro de C. albicans foi avaliado pelos testes de formação de biofilme e quantificação de UFC/mL de C. albicans, análise da atividade metabólica pelo método do XTT e filamentação de C. albicans. A análise da curva de sobrevivência de Galleria mellonella foi utilizada para a avaliação in vivo da influência de L. rhamnosus na infecção causada por C. albicans. Os genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 e ALS3 de C. albicans foram quantificados pela RT-PCR após a interação em modelo de biofilme. No estudo in vitro L. rhamnosus foi capaz de inibir a formação do biofilme, filamentação e reduzir a atividade metabólica de C. albicans. Esses efeitos também foram observados quando utilizado a suspensão do sobrenadante da cultura de L. rhamnosus, apontando possível produção de substâncias com efeito inibitório. Os resultados obtidos in vivo apontam que L. rhamnosus e seu sobrenadante protegeram G. mellonella da infecção por C. albicans, porém a suspensão do sobrenadante apresentou melhores resultados, visto.... / Abstract: The high incidence of candidiasis caused by Candida albicans and the adaptability of this species, as well as resistance to antifungal drive the development of research on alternative therapies to control this infection. The aim of this study was to evaluate the influence of Lactobacillus rhamnosus and products of their metabolism against C. albicans, evaluating the pathogenicity and the expression of genes that regulate the formation of C. albicans biofilms in vitro and in vivo in invertebrate model Galleria mellonella. Strains of C. albicans ATCC 18804 and L. rhamnosus ATCC 9595 were used (from the Microbiology Laboratory of the Institute of Science and Technology of São José dos Campos / UNESP). For the study were prepared from L. rhamnosus two suspensions, one containing the serving cell and the other with the culture supernatant free cells. The study of in vitro pathogenicity of C. albicans was assessed by biofilm formation testing and quantitation of CFU / ml of C. albicans, analysis of metabolic activity by XTT method and C. albicans filamentation. The analysis of the Galleria mellonella survival curve was used to evaluate in vivo the influence of L. rhamnosus in infection caused by C. albicans. Genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 and ALS3 of C. albicans were quantified by RT-PCR after interacting in biofilm model. In vitro evaluation L. rhamnosus was able to inhibit biofilm formation, filamentation and reduce the metabolic activity of C. albicans. These effects were also observed when using the suspension culture supernatant of L. rhamnosus, indicating the possible of production substances with inhibiting effect. The results obtained in vivo indicate that L. rhamnosus and its supernatant protected G. mellonella of C. albicans infection, but the suspension of the supernatant showed better results, as it increased the survival caterpillar G. mellonella. The results of gene expression have shown that .... / Mestre

Orientador: Cristiane Yumi Koga-Ito / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Marcia de Souza Carvalho / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal de pacientes hansenianos, comparando os resultados com indivíduos controle. Foram utilizados enxágües bucais de trinta e oito indivíduos com idade entre 10 a 89 anos, diagnosticados como portadores de hanseníase clinicamente e por exame baciloscópico, que estejam sob poliquimioterapia por no mínimo 45 dias. Para o grupo controle o mesmo número de indivíduos saudáveis e com perfil semelhante (quanto à idade, gênero e condições bucais) aos pacientes do grupo em estudo. As amostras foram processadas e semeadas em ágar Sabouraud dextrose acrescido de cloranfenicol. Após o crescimento, as colônias foram examinadas quanto às características morfológicas, contadas as unidades formadoras de colônias (ufc). As colônias representativas de cada morfologia diferente foram isoladas. A identificação foi realizada por provas de formação de tubo germinativo, produção de hifas/pseudohifas e clamidoconídeos, fermentação, assimilação de carboidratos. Para identificação presuntiva de Candida dubliniensis foi realizado o teste à temperatura diferencial de 45ºC. Também foram realizadas provas de susceptibilidade aos antifúngicos anfotericina B, fluconazol, cetoconazol e 5- fluorocitosina. As contagens de leveduras nos grupos hansenianos e controle foram comparadas estatisticamente por ANOVA teste de Mann-Whitney (5%). O porcentual de pacientes hansenianos positivos para leveduras foi superior aos de indivíduos controle; porém não foi observada diferença significativa entre as contagens de leveduras nos grupos estudados. Houve maior prevalência de C. albicans e C. tropicalis em ambos os grupos estudados. Apenas uma amostra de C. tropicalis foi resistente à anfotericina B e todas as demais cepas foram sensíveis aos antifúngicos testados. / Abstract: The present study aimed to evaluated the presence of Candida genus yeasts in the oral cavity of patients with hanseniasis, comparing the results with control individuals. Mouth rinses of thirty eight individuals aged between 10 to 89 years, diagnosed clinically and by baciloscopic examinations as hanseniasis positive, and who were under multi-drug therapy for at least 45 days were included. Control group was constituted by the same number of healthy individuals and same profile (in relation to age, gender and oral conditions) in relation to the study-group. Samples were processed and plated on Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol. After the growth, colonies were examined in relation to their morphologic characteristics and the number of colony-forming units were counted. The colonies representative of each morphology were isolated. The identification was performed by germ tube formation test, production of hyphae/pseudohyphae and chlamidoconidea, fermentation and assimilation of carbohydrates. Candida dubliniensis presuntive identification was performed by growth at 45°C test. Antifungal susceptibility was tested with amphotericin B, fluconazole, ketoconazole and flucytosine. Counts of yeasts in the hanseniasis and control groups were compared by ANOVA Mann-Whitney's test (5%). The porcentage of hanseniasis patients positive to yeasts was higher in relation to the control group, however no significant differences were observed between the counts of yeasts in the studied groups. Higher prevalence of C. albicans and C. tropicalis was observed in both groups. Only one isolate of C. tropicalis was resistant to amphotericin B and all the other isolates were susceptible to the antifungal drugs tested. / Mestre

Orientador: Débora Barros Barbosa / Banca: Wirley Gonçalves Assunção / Banca: Cristiane Yumi Koga Ito / Resumo: O objetivo do presente estudo foi verificar a atividade antimicrobiana de uma resina acrílica à base de poli (metil metacrilato) (PMMA) contendo nanopartículas de prata frente ao microorganismo Candida albicans. Utilizou-se a resina acrílica termopolimerizável Lucitone 550 e as nanopartículas de prata foram sintetizadas por meio da redução dos íons prata do nitrato de prata pelo citrato de sódio. A forma e o tamanho das partículas foram confirmados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET), tendo-se obtido partículas na forma esférica e com tamanhos médios de 5 e 10 nm. A resina acrílica foi proporcionada de acordo com as instruções do fabricante e a solução coloidal de nanopartículas de prata foi adicionada ao componente líquido da resina acrílica nas concentrações de 0,05%, 0,5% e 5% baseadas na massa do polímero. Após o processamento, os espécimes foram esterilizados por radiação de Co-60. Foram analisados a adesão de microorganismos à superfície do poli (metil metacrilato)/prata (PMMA/Ag) e a formação de biofilme por Candida albicans sobre a superfície polimérica através de microscopia de luz e de MEV. Os resultados mostraram redução estatisticamente significante (P < 0,05) da adesão de microorganismos à superfície do nanocompósito para os grupos com 0,05 e 0,5% de nanopartículas de prata com tamanho de 5nm quando comparados ao grupo controle. A microscopia de luz nãomostrou diferença na formação de biofilme entre os grupos dos nanocompósitos e o grupo controle. A MEV sugeriu uma redução na quantidade de células na superfície dos grupos contendo nanopartículas de prata, especialmente até 12 horas de crescimento fúngico. Os resultados sugerem ação inibitória sobre a adesão e formação de biofilme por Candida albicans quando da adição de nanopartículas de prata de tamanho 5 nm à resina acrílica nas concentrações de 0,05% e 0,5% / Abstract: The aim of this study was to verify the antimicrobial activity of a poly (methyl methacrylate) acrylic resin containing silver nanoparticles against Candida albicans microorganism. The heat-polymerized acrylic resin Lucitone 550 was used and the silver nanoparticles were synthesized through the reduction of silver ions of silver nitrate by sodium citrate. The shape and size of the particles were confirmed by scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM), and showed spherical particles with medium size of 5 and 10 nm. The acrylic resin was proportioned according to the manufacturer's instructions and the silver nanoparticles colloid solution was added to the liquid of the acrylic resin in 0.05%, 0.5% and 5% of concentration based on the polymer mass. After being processing, the specimens were sterilized by Co-60 radiation. The adhesion of cells of Candida albicans and the biofilm formation on the surface of the polymer were evaluated by light microscopy and SEM. The results demonstrated significantly reduction (P < .05) of the microorganisms adhesion on the surface of the nanocomposites for the groups containing 0.05 and 0.5% of silver nanoparticles with size of 5nm when compared to the control group. The light microscopy did not show difference in the biofilm formation among the groups evaluated. The SEM images suggested reduction of growth of Candida albicans cells for the nanocomposite groups, mainly up to the period of 12 hours. It was concluded that the addition of silver nanoparticles with size of 5 nm to the PMMA in 0.05% and 0.5% concentrations showed antimicrobial effect against Candida albicans / Mestre

A natamicina é um composto antifúngico bastante utilizado na indústria alimentar, pois é seguro para o consumo e não afeta a qualidade dos alimentos. Recentemente surgiu uma preocupação em relação ao seu uso aditivo em bebidas e iogurtes, uma vez que a natamicina poderia exercer pressão seletiva e desencadear o desenvolvimento de resistência aos polienos in vivo na microbiota comensal do hospedeiro. Diante dessa incerteza, abordamos o possível desenvolvimento da resistência contra a natamicina. Uma seleção de 17 isolados de Candida spp. foi submetida a concentrações crescentes de natamicina durante um tempo prolongado. A exposição à natamicina provocou um aumento de MIC em 14 dos 17 isolados testados e o desenvolvimento de resistência à natamicina foi evidenciado em 5 destes 14 isolados. Dezesseis isolados apresentaram aumento de MIC para anfotericina B e 4 destes isolados mostraram resistência à anfotericina B. A capacidade de formação de biofilmes desses isolados também foi realizada e 3 isolados apresentaram aumento da capacidade de formação de biofilmes após indução de resistência à natamicina. Foi possível evidenciar que a resistência adquirida à natamicina foi maior em isolados que apresentavam baixa suscetibilidade antes da exposição à natamicina. Em vista dos resultados acima mencionados, ressalta-se a importância do monitoramento da natamicina aditivada nos alimentos, pois seus níveis residuais em concentrações elevadas podem exercer uma pressão seletiva sobre as espécies de Candida constituintes da microbiota comensal humana gastrointestinal, no que tange a sua virulência e resistência. / Natamycin is a antifungal compound used in the food industry because it is safe for consumption and has no effect on quality of foods. Recently a concern has arisen over its additive use in beverages and yogurts since natamycin could exert selective pressure and trigger the development of polyene resistance in vivo in the commensal microbiota of host. In view of this uncertainty, we address the possible development of resistance against the natamycin. A selection of 17 isolates of Candida spp. was subjected to increasing concentrations of natamycin for prolonged time. The natamycin-exposure caused an increase of M.I.C. in 14 out of 17 tested isolates and the development of natamycin resistance was evidenced in 5 of these 14 isolates. Sixteen isolates showed increased of M.I.C to amphotericin B and 4 of these isolates showed resistance to amphotericin B. The biofilm forming capacity of the isolates also was performed and 3 isolates presented increasing the capacity to form biofilms after induction of natamycin resistance. It was possible to show that acquired natamycin resistance was increased in isolates that showed low susceptibility before natamycin exposure. In view of the aforementioned results, the importance of the monitoring of natamycin in food is highlighted, since its residual levels in high concentrations may exert a selective pressure on Candida species constituting the gastrointestinal human commensal microbiota, in relation to its virulence and resistance.

Resíduos lignocelulósicos agroindustriais são fontes abundantes e de baixo custo para produção biotecnológica de compostos de alto valor agregado, como xilitol e etanol. O presente trabalho teve como objetivo ampliar os conhecimentos sobre a produção biotecnológica de etanol e xilitol mediante o cultivo de Candida guilliermondii e Spathaspora arborariae sobre hidrolisado de casca de soja (HCS). S. arborariae foi cultivada em biorreatores submersos sobre meio sintético e HCS, em condições anaeróbias (150 rpm) e microaerófilas (180 rpm e 0,33 vvm). Em meio sintético a cepa apresentou maior produtividade em etanol (0,22 g L-1 h-1) sob microaerofilia. Porém, quando cultivada sobre HCS o metabolismo foi altamente afetado. Verificou-se que a adição de cloreto de alumínio ao meio sintético não afetou a produção de biomassa e viabilidade celular. No entanto, há inibição celular com o aumento da pressão osmótica dos meios, sendo a sua tolerância máxima de 1390 mOsm kg-1. Em relação a C. guilliermondii, foi realizado o planejamento Plackett-Burman para determinar o efeito da suplementação do HCS sobre a produção de etanol. A suplementação do hidrolisado não se mostrou necessária. Um segundo planejamento experimental foi realizado para otimizar as condições de fermentação de temperatura, pH e concentração de inóculo. O ponto máximo de resposta foi em 28 °C, pH 5,0 e 109 UFC mL-1, respectivamente. Após foram realizados cultivos sobre HCS ácido-enzimático nas condições otimizadas, resultando em alta produtividade em etanol (1,4 g L- 1 h-1) com rendimento de 0,41 g g-1, representando 80,4 % de eficiência quando comparado com o rendimento teórico. / Lignocellulosic agro-industrial residues are abundant supplies of carbohydrates and a low cost substrate for the biotechnological production of compounds of high added value such as xylitol and ethanol. This study aimed at the investigation on the biotechnological production of ethanol and xylitol by cultivation of Candida guilliermondii and Spathaspora arborariae in soybean hull hydrolyzate (SHH). S. arborariae was cultivated in submerged bioreactors on SHH and semi-synthetic medium under anaerobiosis (150 rpm) and microaerobiosis conditions (0.33 vvm and 180 rpm). On semi-synthetic medium, the strain showed higher ethanol productivity (0.22 g L-1 h-1) under microaerobiosis. However, when grown on hydrolyzate metabolism was highly affected. It was found that concentrations up to 300 mg L-1 of aluminum chloride in semi-synthetic medium did not affect biomass production and cell viability. But increasing the osmotic pressure of the medium caused cellular inhibition, with maximum yeast tolerance of 1390 mOsm kg-1. Plackett-Burman design was performed to determine the effect of supplementation on the production of ethanol by C. guilliermondii on SHH. It was found that supplementation was not necessary. A second experimental design was carried out to optimize the fermentation conditions of temperature, pH and inoculum size. The best conditions were 28 °C, pH 5.0 and 109 CFU mL-1, respectively. Finally, cultivations in acid-enzymatic SHH under the optimized conditions were run, resulting in high volumetric productivity (1.4 L g-1 h-1), with ethanol yield of 0.41 g g-1, representing 80.4 % efficiency compared with the theoretical yield.

Infecções fúngicas causadas por leveduras oportunistas de Candida não – albicans (CNA) têm aumentado drasticamente nas últimas décadas, podendo estar relacionadas com o elevado número de pacientes imunocomprometidos, mais susceptíveis a essas infecções. CNA possuem maior resistência aos antifúngicos tradicionais como o fluconazol (FLZ), fármaco de escolha para o tratamento de infecções por Candida spp. A resistência antifúngica conduz a falhas na terapia clínica podendo levar ao aumento das taxas de morbidade e mortalidade. Associações entre fármacos e substâncias naturais pode ser uma alternativa viável para superar a resistência antifúngica em CNA. Acca sellowiana (O.Berg) Burret, é uma goiabeira pertencente à família Myrtaceae, possuindo diversas atividades biológicas comprovadas. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar a atividade antifúngica de frações ativas obtidas a partir do extrato aquoso liofilizado de folhas de A. sellowiana frente a isolados resistentes de CNA. Como resultado, isolados de Candida glabrata foram os mais susceptíveis as frações ativas quando comparados aos demais isolados. As frações ativas F1, F2 e F3 apresentaram melhor atividade antifúngica comparadas às demais, sendo a fração ativa F2, a mais eficaz. Foi demonstrado efeito sinérgico em 80% dos isolados de C. glabrata entre a combinação de FLZ e a fração ativa F2. Na determinação de compostos fenólicos foi identificada a presença de catequina nas frações ativas. A análise dos espectros no UV dos demais picos cromatográficos encontrados nessas frações indica a presença de flavonoides e compostos fenólicos, correlacionando a possível atividade antifúngica dessas frações com a combinação dessas substâncias. O ensaio do sorbitol indicou que a ação da fração ativa F2 ocorre na parede celular das leveduras, corroborando com o dano estrutural observado através de microscopia eletrônica de varredura (MEV). / Fungal infections caused by opportunistic yeast non - albicans Candida (NAC) have dramatically increased in recent decades and could be related to the high number of immunocompromised patients. NAC have greater resistance to traditional antifungal agents such as fluconazole (FLZ), the drug of choice for the treatment of infections caused by Candida spp. The antifungal resistance leads to failures in clinical therapy and may cause an increase in morbidity and mortality rates. Associations between drugs and natural substances can be a feasible alternative to overcome antifungal resistance in NAC. Acca sellowiana (O.Berg) Burret is a guava tree belonging to the Myrtaceae and has several proven biological activities. Thus, the aim of this study was to evaluate the antifungal activity of fractions obtained from the freeze-dried aqueous extract of leaves of A. sellowiana against resistant isolates of NAC. As a result, Candida glabrata isolates were the most susceptible to active fractions when compared to the others isolates. The F1, F2 and F3 active fractions showed the better antifungal activity and the F2 active fraction was the most effective. Synergistic effect of FLZ with F2 active fraction was demonstrated in 80% of C. glabrata isolates. The UV spectra analysis of the chromatographic peaks found in these other fractions indicate the presence of flavonoids and phenolic compounds, correlating the antifungal activity of these fractions with the combination of these substances. The sorbitol test indicates that the action of F2 active fraction possibly occurs in the cell wall of yeasts, confirming structural damage observed by scanning electron microscopy (SEM).

As Candida spp. têm grande habilidade para colonizar e formar biofilmes em dispositivos médicos e biomateriais, provocando infecções nos hospedeiros humanos. O Polietileno de Alta Densidade (PEAD), Polihidroxibutirato (PHB) e o Ácido Polilático (PLA) apresentam propriedades interessantes para aplicações em dispositivos médicos. Os sais imidazólicos (SI) apresentam propriedades avançadas, inclusive antifúngicas, podendo ser utilizados como aditivos nestes polímeros. Neste estudo, foram preparados filmes poliméricos com diferentes teores dos SI cloreto de 1-n-hexadecil-3-metilimidazólico (C16MImCl) e metanossulfonato de 1-n-hexadecil-3- metilimidazólico (C16MImMeS), através dos processos de mistura no estado fundido (PEAD e PHB) e de Solvent Casting (PLA). Para avaliar se esses biomateriais apresentavam atividade antibiofilme foram realizados ensaios Antibiofilme, testados frente a isolados de Candida spp. Para determinar a porcentagem de impedimento da formação do biofilme foram realizados ensaios de Menor Concentração Antibiofilme, frente a isolados de Candida tropicalis. Análises de Microscopia Eletrônica de Varredura foram realizadas para verificar se ocorre o impedimento da formação do biofilme nos biomateriais. Foram avaliadas a citotoxicidade dos SI, a adesão celular e a biocompatibilidade celular de células-tronco mesenquimais humanas (CTMh) nos filmes de PEAD, PHB e PLA. Foram realizados ensaios histopatológicos dos biomateriais em pele de orelha de suínos para verificar se ocorre lesões microscópicas. Os filmes de PEAD, PHB e PLA foram caracterizados para avaliar a morfologia, a presença dos SI na superfície e as propriedades físicoquímicas dos mesmos. Os filmes de PEAD, PHB e PLA com diferentes teores dos SI C16MImCl e C16MImMeS apresentaram atividade antibiofilme frente a isolados de Candida tropicalis, C. parapsilosis e C. albicans. Com o ensaio MCA foi possível verificar que com o aumento do teor dos SI (C16MImCl e C16MImMeS) no PLA e PHB ocorre em geral um aumento na porcentagem de impedimento da formação do biofilme, sendo que isso em geral não ocorre com o PEAD. As micrografias de MEV mostraram o efetivo impedimento da formação do biofilme. Em geral os SI não apresentaram citotoxicidade em baixas concentrações. Os biomateriais mostraram uma boa adesão celular e são biocompatíveis com CTMh. Na avaliação histopatológica de pele da orelha suína com os biomateriais não foram observadas lesões microscópicas agudas. Em combinação com as boas propriedades morfológicas, físico-químicas e mecânicas, estes biomateriais são promissores para serem utilizados na confecção de dispositivos médicos. / Candida spp. have great ability to colonize and form biofilms on medical devices and biomaterials, causing infections in human hosts. High-density polyethylene (HDPE), Polyhydroxybutyrate (PHB) and Polylactic acid (PLA) exhibit interesting properties for applications in medical devices. Imidazolium salts (IS) have advanced properties, including antifungal, which could be explored as additives in these polymers. In this study, polymer films with different IS (1-n-hexadecyl-3- methylimidazolium chloride (C16MImCl) and 1-n-hexadecyl-3-methylimidazolium methanesulfonate (C16MImMeS)) contents were prepared, using either the melt blending (HDPE and PHB) or the solvent casting process (PLA). The antibiofilm assay with Candida spp. isolates was performed to assess the antibiofilm activity of these biomaterials. Inhibition percentages of biofilm formation of Candida tropicalis isolates were determined by the minor antibiofilm concentration (MAC) assay. Scanning electron microscopy was applied to verify the inhibition of biofilm formation on these biomaterials. The cytotoxicity of IS and the cell adhesion and biocompatibility of human mesenchymal stem cells (hMSC) of the HDPE, PHB and PLA films was studied. Histopathologic assays were performed with these biomaterials on ear pigskin to verify the occurrence of microscopic lesions. The HDPE, PHB and PLA films were characterized to understand their surface morphology, the presence of IS on the surface and the physicochemical properties thereof. The polymer films with different concentrations of the IS C16MImCl and C16MImMeS presented antibiofilm activity against isolates of Candida tropicalis, C. parapsilosis and C. albicans. The MAC assay enabled to determine that an increasing IS (C16MImCl and C16MImMeS) content in the PLA and PHB biomaterials promoted, in general, an increase in the inhibition percentage of biofilm formation, which was not observed for the HDPE films. The SEM micrographs showed the effective prevention of biofilm formation on the IS containing biomaterials. Lower concentrations of the IS showed no cytotoxicity. The biomaterials presented good cell adhesion percentages and biocompatibility with hMSC. Furthermore, no acute microscopic lesions were identified in the histopathological evaluation after contact between the biomaterials and ear pigskin. In combination with the good morphological, physicochemical and mechanical properties, these biomaterials can be considered as promising for use in the manufacturing of medical devices.

O uso de antissépticos complementa a higienização bucal reduzindo a microbiota e, consequentemente minimizando a colonização, a formação de biofilme e, assim promovendo a saúde bucal. Diante das opções de antissépticos bucais e produtos naturais, faz-se necessária a análise microbiológica da eficácia desses produtos e suas implicações no controle do biofilme. Neste sentido, têm-se como objetivos: determinar a diluição inibitória máxima (DIMax) de antissépticos bucais (Listerine®, Colgate Plax® Tea Fresh, Periogard®) e o óleo de melaleuca sobre as cepas de Candida albicans e Candida glabrata, clínicas e padrão; quantificar as unidades formadoras de colônias por tubo traqueal (UFC/TT) das leveduras em TTs revestidos com os respectivos produtos e, analisar a formação de biofilme em fragmentos de tubos revestidos ou não com antissépticos e óleo de melaleuca por C. glabrata. Trata-se de um estudo de natureza laboratorial, in vitro, realizado com cepas clinicas e padrão e subsidiado em métodos clássicos da microbiologia para o processamento das avaliações propostas. Para determinar a DIMax, realizou-se a diluição dupla seriada (1/4 a 1/4096) dos antissépticos e óleo de melaleuca respectivamente, sendo as placas incubadas a 37°C por 24 horas. Considerou-se DIMax a maior diluição capaz de inibir o crescimento de todas as cepas avaliadas. Na formação de biofilme foram empregadas duas técnicas: determinação das UFC/TT e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Na aleatorização das cepas C. glabrata utilizou-se a análise estatística pelo modelo de regressão logístico multinomial. A partir da análise dos resultados observou-se que o Listerine® apresentou a menor ação inibitória na DIMax de 1/4, óleo de melaleuca (1/16), Colgate Plax® Tea Fresh (1/64) e o Periogard® (1/128). Em termos de formação de biofilme, o tubo revestido com Colgate Plax® Tea Fresh apresentou diferença no teste de comparações múltiplas (p=0,0031), com atividade antibiofilme em todas as cepas de C. glabrata, com exceção de um isolado clínico. As fotomicrografias revelaram reprodução por brotamento presente no TT revestido com óleo de melaleuca, lise celular na ação do Periogard® e, os TTs revestidos com Colgate Plax® Tea Fresh não apresentaram biofilme, exceto na cepa 33. A formação de biofilme por células leveduriformes foi significativa apresentando-se de forma diversificada nos diferentes tubos revestidos. Estudos adicionais sobre Candida spp. em tubos traqueais são recomendáveis em pacientes, com e sem pneumonia, submetidos à ventilação mecânica / Introduction: The use of oral antiseptics is increasingly common, as a complement to the regular oral hygiene by reducing the oral microbiota, biofilm formation and thereby promoting oral health. Facing of several oral antiseptics and natural products, it is necessary microbiological analysis of the effectiveness of these antiseptics and in its implications in the control of biofilm. Objective: The aims of the study were to determine the maximum inhibitory dilution (MID) oral antiseptics (Listerine®, Colgate® Plax, Fresh Tea and Periogard®) and tea tree oil of clinical and standard strains of Candida spp. and Candida glabrata; colony forming units assay (CFU/TT) of yeast in tracheostomy tubes (TT) coated with some products; and analyze the biofilm formed in fragments of tubes coated or not with oral antiseptics and tea tree oil for Candida glabrata. Methods: This is a laboratory investigation, in vitro study performed with clinical and standard strains and subsidized of classical microbiology methods for processing the proposals reviews. To determine the MID, serial dilution was carried out (1/4 a 1/2048) of oral antiseptics and tea tree oil respectively, and the plates were incubated at 37°C for 24h. The MID was considered the highest dilution capable of inhibiting the growth of all strains tested. In biofilm formation two techniques were employed: determination of colony forming units (CFU/TT) and scanning electron microscopy (SEM). The statistical analysis by multinomial logistic regression model was used to randomization strains of C. glabrata. Results: Listerine® showed the worst performance, MID (1/4), tea tree oil (1/16), Colgate Plax® Fresh Tea (1/64) and Periogard® (1/128). In terms of biofilm formation, the multiple comparisons test presented differences (p=0.0031) for tube coated Colgate Plax® Tea Fresh with antibiofilm activity in all strains of C. glabrata, except for one clinical isolate. The photomicrographs revealed reproduction by budding in the TT coated with tea tree oil, cell lysis in action of Periogard®, and the Colgate Plax® Fresh Tea coated tube produced no visible colony, except with strain 33. Conclusion: Biofilm formation by yeast was significant presenting diverse in different coated tubes. Additional studies of Candida spp. in tracheostomy tubes are recommended in patients with and without pneumonia, undergoing mechanical ventilation

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Tendo em vista que algumas propriedades terapÃuticas da curcumina jà sÃo bem descritas, dessa forma o presente estudo aponta para um efeito antifÃngico da curcumina frente a cepas de leveduras patogÃnicas resistentes ao fluconazol, cepas de Candida spp. e Cryptococcus neoformans. Todas as cepas estudadas foram inibidas pela curcumina, com diferentes graus de inibiÃÃo entre as espÃcies com CIMs variando entre 8-64 &#956;g/mL. ApÃs a exposiÃÃo das cepas de C. albicans a curcumina, foi observado uma diminuiÃÃo no nÃmero de cÃlulas viÃveis, indicando assim danos Ãs membranas celulares, com possÃvel comprometimento de suas funÃÃes. Os nossos resultados revelaram que apÃs o tratamento com a curcumina, constatamos uma intensificaÃÃo na marcaÃÃo com PI (Iodeto de propÃdio), indicando alteraÃÃes nas membranas celulares. No presente trabalho, a funÃÃo mitocondrial das cÃlulas de C. albicans parece ter sido afetada apÃs exposiÃÃo à curcumina. O colapso no &#916;&#968;m (Potencial Transmembrana Mitocondrial) pode conduzir a aberturas de poros transientes nas membranas mitocondriais. Em relaÃÃo aos diversos mecanismos de aÃÃo descritos para a curcumina, existem evidÃncias de que o DNA à um dos alvos celulares desta molÃcula. Nossos dados sugerem que apÃs a exposiÃÃo à curcumina, as cÃlulas de C. albicans, apresentaram quebras totais nas cadeias de DNA. Em conclusÃo, o composto curcumina apresenta atividade antifÃngica in vitro contra cepas de Candida spp. e Cryptococcus neo-formans resistentes ao fluconazol. AlÃm de promover danos ao DNA e externalizaÃÃo da fosfatidilserina, o respectivo composto parecem atuar em sÃtios especÃficos prÃximos a mitocÃndria das cÃlulas de C. albicans, levando à morte por apoptose. / Considering that some therapeutic properties of curcumin are well described, so the present study points to an antifungal effect of curcumin against strains of pathogenic yeasts resistant to fluconazole, strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans. All strains studied were inhibited by curcumin with different degrees of inhibition among species with MICs ranging from 8-64 mg / ml. After exposure strains of C. albicans, curcumin a decrease in the number of viable cells was observed, thus indicating damage to cell membranes, with possible compromise of their functions. Our results showed that after treatment with curcumin, found in more intense staining with PI (Propidium iodide), indicating changes in cell membranes. In this study, the mitochondrial function of C. albicans cells appears to have been affected after exposure to curcumin. The collapse in &#916;&#968;m (Mitochondrial Transmembrane Potential) can lead to openings of transient pores in the mitochondrial membranes. In relation to the different mechanisms of action described for curcumin, there is evidence that DNA is one of the celular targets of this molecule. Our data suggest that after exposure to curcumin, cells of C. albicans showed total breaks in DNA strands. In conclusion, the compound curcumin has antifungal activity in vitro against strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans resistant to fluconazole. In addition to promoting DNA damage and externalization of phosphatidylserine, the respective compound seem to act at specific sites near mitochondria of C. albicans cells, leading to death by apoptosis.