Orientador : Prof. Dr. Felipe F. Bondan Tuon / Coorientador : Profª. Drª. Flávio Queiroz-Telles / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 02/12/2016 / Inclui referências : f. 37-42 / Resumo: Introdução: A candidemia é a principal doença fúngica invasiva em pacientes hospitalizados. Diversos casos de candidemia de escape (CE) têm sido relatados, porém poucos estudos avaliaram a epidemiologia, fatores de risco e desfecho destes pacientes, especialmente em países em desenvolvimento, assim como em pacientes recebendo equinocandinas. Objetivos: Avaliar e comparar a epidemiologia, fatores de risco, perfil microbiológico e desfecho de pacientes com candidemia de escape (casos) e candidemia não escape (controles). Métodos: Estudo transversal, com coleta retrospectiva dos dados, em dois centros diferentes, para avaliar a epidemiologia, fatores de risco, perfil microbiológico e desfecho clínico em pacientes com CE. As características clínicas de cada grupo foram comparadas através de análise univariada, e os fatores de risco foram comparados usando análise univariada e multivariada. Os isolados de Candida dos casos de escape também foram submetidos a testes de suscetibilidade antifúngica. Resultados: Cento e quarenta e oito episódios de candidemia foram revisados, com vinte e sete casos de escape (18%). Entre os casos, 12 (44%) estavam recebendo micafungina, 7 (26%) fluconazol, 6 (22%) voriconazol, 1 (4%) anfotericina B, e 1 (4%) estava recebendo terapia combinada com micafungina e voriconazol. Neutropenia e mucosite foram identificados como fatores de risco independentes para CE. Candida não albicans foi mais frequente nos casos de escape (p<0,001), sem diferenças significativas entre as espécies; C. albicans foi a espécie mais sensível, com baixas concentrações inibitórias mínimas para todos os antifúngicos testados. Conclusão: Infecções de escape ocorreram principalmente em pacientes mais jovens, gravemente imunossuprimidos, com neutropenia e mucosite. Espécies de Candida não albicans foram mais frequentemente recuperadas nos casos de escape, incluindo isolados resistentes à terapia antifúngica vigente. A mortalidade hospitalar e em trinta dias não diferiu significativamente entre os grupos. Palavras-chave: Candidemia; candidemia de escape; fatores de risco / Abstract: Introduction: Candidemia is the main invasive fungal disease among hospitalized patients. Several breakthrough candidemia (BrC) cases have been reported, but few studies evaluate the epidemiology, risk factors and outcome of those patients, especially in developing countries, and in patients receiving echinocandins. Objectives: Evaluate and compare the epidemiology, risk factors, microbiological profile and outcome of patients with breakthrough candidemia (cases) and non breakthrough candidemia (controls). Methods: Transversal study, with retrospective data collection in two centers, to evaluate the epidemiology, risk factors, microbiological profile and clinical outcome in patients with BrC. Clinical characteristics of each group were compared using univariate analysis, and risk factors were compared using univariate and multivariate analysis. Candida isolates from BrC were also submitted to antifungal susceptibility testing. Results: One hundred and forty-eight candidemia episodes were reviewed, with twenty-seven breakthrough infections (18%). Among the BrC patients, 12 (44%) received micafungin, 7 (26%) fluconazole, 6 (22%) voriconazole, 1 (4%) amphotericin B, and 1 (4%) received combined therapy with micafungin and voriconazole. Neutropenia and mucositis were identified as independent risk factors for BrC. Candida non-albicans were more frequent in the BrC group (p<0.001), without significant differences between individual species; C. albicans was the most susceptible, with low MIC for all antifungal agents tested. Conclusion: Breakthrough infections occurred mainly in younger patients, severely immunosuppressed, with neutropenia and mucositis. Candida non-albicans species were more commonly recovered from breakthrough cases, including species resistant to the current antifungal under use. Thirty day and inpatient mortality did not differed significantly between the groups. Key words: Candidemia, Breakthrough Candidemia, Risk Factors.

Orientador: Ricardo de Souza Cavalcante / Resumo: Introdução. A candidemia tem-se tornado cada vez mais frequente nos hospitais e apresentado elevada mortalidade. Conhecer a epidemiologia e os fatores prognósticos permite melhor manejo clínico desta infecção. Diante disto, este estudo teve por objetivo avaliar a incidência da candidemia em um hospital de ensino durante os últimos anos, a mortalidade, a prevalência das espécies causadoras da infecção, bem como os fatores prognósticos. Métodos. Este foi um estudo de coorte não concorrente, com pacientes atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (HCFMB), que apresentaram diagnóstico de candidemia durante sua internação, entre os anos de 2012 e 2019. Os dados clínicos foram obtidos a partir do prontuário médico. Para a avaliação dos fatores associados ao prognóstico, em análise univariada e múltipla, foi utilizado o modelo de Regressão Proporcional de Cox. Foram consideradas significativas as variáveis com valores de p inferiores a 0,05. Resultados. Ocorreram 314 episódios de candidemia em 288 pacientes. A taxa de incidência foi de 1,66/1000 admissões. A espécie mais prevalente foi Candida albicans (38,8%), seguida de complexo C. parapsilosis (20,4%), C. tropicalis (15,3%), C. glabrata (10,8%) e C. krusei (2,5%). Na população pediátrica houve predomínio de complexo C. parapsilosis (p<0,0001) e C. glabrata nos adultos (p=0,002). A taxa de mortalidade em 30 dias foi de 43,4%, sendo maior em adultos do que pacientes pediátricos (19,3% vs 54,0%; p<0,01)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction. Candidemia has become increasingly frequent in hospitals and has shown high mortality. Knowing the epidemiology and prognostic factors allows better clinical management of this infection. In view of this, this study aimed to evaluate the incidence of candidemia in a teaching hospital during the past few years, mortality, the prevalence of species causing the infection, as well as prognostic factors. Methods. Non-concurrent cohort study was carried out, with inpatients at the Hospital das Clínicas, Faculdade de Medicina de Botucatu (HCFMB), who presented a diagnosis of candidemia during their hospitalization, between the years 2012 and 2019. The clinical data were obtained from the medical records. For the assessment of factors associated with prognosis, in univariate and multiple analysis, the Cox Proportional Regression model was used. Variables with p values below 0.05 were considered significant. Results. There were 314 episodes of candidemia in 288 patients. The incidence rate was 1.66 / 1000 admissions. The most prevalent species was Candida albicans (38.8%), followed by C. parapsilosis complex (20.4%), C. tropicalis (15.3%), C. glabrata (10.8%) and C. krusei (2.5%). In the pediatric population, there was a predominance of the C. parapsilosis complex (p <0.0001) and C. glabrata in adults (p=0.002). The 30-day mortality rate was 43.4%, being higher in adults than pediatric patients (19.3% vs 54.0%; p<0.01). Independent factors of mortality were liver cirrhos... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Candida spp. constitui o grupo mais importante de fungos patogênicos oportunistas, que está associado a elevadas taxas de mortalidade. As principais espécies causadoras de infecções sanguíneas são: C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis e C. tropicalis. Conhecer a distribuição das espécies e padrões de suscetibilidade aos antifúngicos é fundamental para o estabelecimento de medidas de controle da candidemia. A patogenicidade dessas leveduras depende de alguns fatores de virulência como a capacidade de escapar dos mecanismos de defesa do hospedeiro e a capacidade de formação de biofilme. Biofilmes são comunidades microbianas organizadas aderidas a uma superfície sólida, biótica ou abiótica, e envolvidas por uma matriz polissacarídica extracelular. Eles podem apresentar resistência a antimicrobianos e ser fontes de infecções crônicas e persistentes, e a sua relação fungo-hospedeiro é pouco conhecida. O objetivo desse estudo foi avaliar o impacto da formação de biofilme sobre o perfil de suscetibilidade a antifúngicos, de espécies de Candida isoladas em episódios de candidemia no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. Foram isoladas 70 amostras de Candida spp. através de hemoculturas, e características dos pacientes foram avaliadas, através da análise dos prontuários médicos. A espécie mais prevalente foi C. albicans, seguida por C. parapsilosis (sensu latu), C. glabrata e C. tropicalis a menos frequente. A Concentração Inibitória Mínima dos antifúngicos anfotericina B (AMB), caspofungina (CAS), fluconazol (FLC) e voriconazol (VOR) foi determinada em células planctônicas dos 70 isolados de Candida spp., de acordo com as diretrizes do CLSI. Dentre os isolados, um de C. albicans foi resistente ao FLC e VOR; todos os isolados de C. glabrata e um isolado de C. parapsilosis foram suscetíveis dose dependente ao FLC, dois isolados de C. glabrata foram suscetíveis dose dependente à CAS e um isolado de C. tropicalis foi suscetível dose dependente ao VOR. A capacidade de formação de biofilme pelos isolados foi analisada, e de acordo com a atividade metabólica, todos os isolados de C. albicans, C. glabrata e C. tropicalis foram capazes de formar biofilme em placas de poliestireno, em 24 horas, e 50% dos isolados de C. parapsilosis não foram capazes de formar biofilme. Biofilmes de cada espécie foram visualizados por microscopia eletrônica de varredura, e demonstraram diferenças estruturais de acordo com cada espécie. A Concentração Erradicatória Mínima dos antifúngicos aos biofilmes de todos os isolados foi determinada. AMB e CAS mostraram atividade contra biofilmes de Candida spp., contudo, biofilmes de certos isolados requereram concentrações maiores que as necessárias para inibir o crescimento de células planctônicas; FLC e VOR, no geral, não possuem ação eficaz contra biofilmes de Candida spp.. Quando isolados de C. albicans, com diferentes perfis de formação de biofilme, foram avaliados quanto a sua virulência in vivo no hospedeiro invertebrado Galleria mellonella, foi obervada uma tendência de maior virulência no grupo de isolados previamente classificados com alta formação de biofilme. Os resultados obtidos refletem a influência da formação de biofilme na suscetibilidade dos isolados clínicos aos antifúngicos comumente utilizados na prática médica / Candida spp. is part of the most important group of opportunistic pathogenic fungi, which is associated with high mortality rates. The main species causing bloodstream infections are: C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis and C. tropicalis. The knowledge about these species´ distribution and their antifungal susceptibility profiles is essential to establish measures to control candidemia. The pathogenesis of these yeasts depends on some virulence factors, such as their ability to escape host defense and their capacity of forming biofilm. Biofilms are organized microbial communities adhered to a biotic or abiotic solid surface and surrounded by an extracellular matrix; they can be resistant to antimicrobial agents and the source of chronic and persistent infections, and its fungal-host relationship is still little known. The aim of this study was to evaluate the impact of biofilm formation on antifungal susceptibility profile of Candida species isolated from candidemia episodes at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. A total of 70 Candida spp. samples were isolated through blood culture, and the patients\' characteristics were evaluated through the analysis of their medical records. The most isolated species was C. albicans, followed by C. parapsilosis (sensu latu), C. glabrata, and C. tropicalis the least frequent. The Minimal Inhibitory Concentration for the antifungal agents amphotericin B (AMB), caspofungin (CAS), fluconazole (FLC) and voriconazole (VOR) were determined in planktonic cells for the 70 Candida spp. isolates, following CLSI guidelines. Among the isolates, one C. albicans isolate was resistant to FLC and VOR; all the C. glabrata and one C. parapsilosis isolates were susceptible dose dependent to FLC; two C. glabrata isolates were susceptible dose dependent to CAS, and one C. tropicalis isolate was susceptible dose dependent to VOR . The isolates´ ability to form biofilm was analyzed and according to the metabolic activity, all the C. albicans, C. glabrata and C. tropicalis isolates were able to form biofilm in polystyrene plates, in 24 hours, and 50% of the C. parapsilosis isolates were not able to form biofilm. Biofilms of each species were visualized through scanning electron microscopy and structural differences were seen according to each species. The Minimal Eradication Concentrations of the antifungal to the biofilms were determined. AMB and CAS showed activity against Candida spp. biofilms, however, some isolates needed concentrations much higher than the used to inhibit planktonic growth; FLC and VOR in general were not efficient against Candida spp. biofilms. When C. albicans isolates, which showed different biofilm formation profiles, were tested about their in vivo virulence using the invertebrate host Galleria mellonella, it was possible to observe a propensity of the high biofilm formers isolates to be more virulent. The results reflect the effect of biofilms on clinical isolates susceptibility to antifungal drugs commonly used during medical practice.

Investigamos a ocorrência de espécies de leveduras isoladas em um hospital infantil. Pesquisamos a presença de C. dubliniensis; investigamos as espécies do complexo Candida parapsilosis e estudamos as espécies deste complexo quanto a produção de biofilme. Pesquisamos os fatores relacionados a virulência e o perfil de sensibilidade pelo método Etest®. Dentre os anos em estudo C. albicans foi a levedura mais isolada com 36.45% seguida de C. tropicalis 23.36%, C. parapsilosis sensu stricto 21.49%, Pichia anômala 5.61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%; C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis não foi isolada nesta pesquisa. No estudo do complexo Candida parapsilosis, C. parapsilosis sensu estricto foi a espécie mais prevalente. Produziram biofilme apenas oito amostras de C. parapsilosis sensu estricto e uma amostra de C. orthopsilosis. As espécies não-albicans produziram mais proteinase e hialuronidase do que C. albicans. No estudo da fosfolipase e hemolisina, C. albicans foi a espécie mais produtora. Todas as amostras foram sensíveis para anfotericina B e para fluconazol quatro amostras foram resistentes. Duas amostras foram resistentes para caspofungina. / We investigated the occurrence of yeast species isolated in a public hospital. We researched the presence of C. dubliniensis and investigated the species within the complex Candida parapsilosis and studied this complex in relation to biofilm´s production. We also investigated the factors related to virulence and studied the sensibility profile by the \"Etest ®\" method. During the years of study, C. albicans was the most isolated yeast with 36.45% followed by C. tropicalis 23,36%, C. parapsilosis sensu stricto 21,49%, Pichia anomala 5,61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%, C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis was not isolated in this study. In the study of Candida parapsilosis complex, C. parapsilosis sensu stricto was the most prevalent species. Only eight strains of C. parapsilosis sensu stricto and one strain of C. orthopsilosis produce biofilm. The non-albicans species showed greater activity of the proteinase and hyaluronidase than C. albicans. In the study of hemolysin and phospholipase, C. albicans was the most producer. All strains were susceptible to amphotericin B and to fluconazole four were resistant. For caspofungin, two strains were resistant.

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Resumo: A candidemia constitui um grande problema em hospitais terciários, por sua elevada incidência – 3,9 casos por 1.000 admissões e letalidade – 50 a 72%. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de infecções da corrente sanguínea por Candida spp., em um período de sete anos, determinar o perfil de sensibilidade dos isolados a antifúngicos, caracterizar as espécies do complexo Candida glabrata e avaliar aspectos epidemiológicos, clínicos e terapêuticos dos pacientes-fonte. Methodology. O perfil de sensibilidade antifúngica foi realizado no equipamento Vitek2. A análise molecular de C. glabrata foi realizada por PCR utilizando-se primer senso CGL1 e antisenso CGL2 e de C. nivariensis e C. bracarensis por PCR multiplex com o primer senso NIV-f e BRA-f e antisenso universal UNI-5.8S. Aspectos epidemiológicos, clínicos e terapêuticos foram coletados de prontuário eletrônico e registrados em ficha padronizada para este estudo. Results. Foram avaliados 84 isolados de hemocultura e os dados clínicos de 59 pacientes. A taxa de incidência de candidemia (por 1.000 admissões) foi maior em mulheres que em homens (0,76 vs 0,54; p<0,0001), não se alterou ao longo dos anos e variou em função da unidade de internação, predominando na Clínica Cirúgica, Clínica Médica, Oncologia e Unidade de terapia Intensiva. C. albicans foi a espécie predominante e, dentre as não-C. albicans, a C. glabrata foi a mais frequente. Todos os isolados do complexo C. glabrata foram identificadas como C. glabra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background. Candidemia is the major problem in hospitals because of its high incidence - 3.9 cases per 1,000 admissions and lethality - 50 to 72%. Therefore, the objective of this study was to evalue the rate of the bloodstream infecction by Candida spp, to determine the sensitivity profile of the antifungal isolated, characterize the Candida glabrata complex species and to evaluate the epidemiological aspects, clinical and therapeutic patients sources. Methodology. The antifungal sensitivity profile was performed into Vitek2 device. Molecular analysis of C. glabrata was performed by PCR using primers ford CGL1 and reverse CGL2 and C. nivariensis and C. bracarensis by multiplex PCR with primers ford NIV-f and BRA-f universal reverse UNI-5.8S. Epidemiological, clinical and therapeutic aspects were collected from an electronic medical record and registered in a standard form for this study. Results. Were evaluated 84 patients with hemoculture and clinical data from 59 patients. The incidence rate of candidemia (per 1,000 admissions) was higher in women than men (0.76 vs 0.54, p <0.0001), not very different through out the years and varied according to the hospitalization unit, predominating in the Clínica Surgical, Clinical Medicine, Oncology and Intensive Care Unit. C. albicans was a predominant genus and, among non-C. albicans, C. glabrata was more frequent. All compounds of the C. glabrata complex were as C. glabrata stricto sensu. Predisposing factors - gastric surgery, use... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A metodologia do “Multilocus Sequence Typing (MLST)” tornou-se uma ferramenta importante para tipagem molecular para C. albicans porque esta metodologia pode caracterizar grande número de isolados rapidamente e está isenta da interpretação subjetiva de padrões de bandas em géis de eletroforese. Este método é muito útil no entendimento da filogenia e epidemiologia de cepas de C. albicans recuperadas de infecções fúngicas invasivas. Objetivos: 1) aplicar as metodologias de MLST e Tipagem ABC para isolados de C. albicans recuperados de infecções de corrente sanguínea em hospitais terciários no Brasil e 2) determinar se cepas indistinguíveis ou diferentes foram responsáveis pelos episódios de candidemia persistente ou candidemia recorrente em isolados sequenciais de mesmo paciente. Material e Métodos: Nós aplicamos a metodologia do MLST e Tipagem ABC em isolados de C. albicans de 61 pacientes com candidemia coletados durante um estudo multicêntrico realizado em 11 hospitais públicos terciários de 9 cidades brasileiras. Também foram avaliados os isolados sequenciais de 8 pacientes com candemia persistente ou recorrente. Candidemia persistente foi definido como um episódio de fungemia com duas ou mais culturas positivas para C. albicans, em 2 ou mais dias diferentes, a despeito da contínua terapia antifúngica adotada. Candidemia recorrente foi definida como um episódio de candidemia ocorrendo ao menos 1 mês após o episódio incidente e a negativação de duas hemoculturas sequenciais após introdução da terapia antifúngica, envolvendo a mesma espécie de Candida. Resultados: Um total de 48 únicos “diploid sequence types (DSTs)” foram observados, incluindo 10 novos genótipos e 32 novos DSTs. DST 69 foi o mais comum entre os nossos isolados. Isolados clado 1 responderam a 56% da nossa coleção. O clado 3 e clado 8 foram os clados com maior número de isolados depois de clado 1, ambos respondendo por 10% das amostras. O clado 9 e clado 17 foram responsáveis por 6,5% dos isolados cada um. Isolados clado 12 responderam por 5%. Foi isolada uma única cepa (1,5%) do clado 2, clado 4, clado 16 e um isolado categorizado como “solitário”. Para Tipagem ABC, 82% dos isolados foram classificados como tipo A, seguido por tipo B com 16,5% e tipo C com 1,5%. Quanto aos pacientes com candidemia persistente ou recorrente, para todos os pacientes exceto um, verificou-se a permanência dos mesmos DSTs encontrados entre a primeira e última amostra coletada. Um único paciente com coletas sequenciais pelo período de 10 dias apresentou 3 cepas distintas discriminadas pelo MLST. Uma destas 3 cepas foi a única representante do clado 2 em nosso estudo. Conclusão: Mais de 50% dos isolados deste estudo apresentaram novos DSTs, predominando o clado 1 em 56% das amostras. Para a Tipagem ABC, 82% dos isolados foram do tipo A. Este é o primeiro estudo de nosso conhecimento a descrever infecção de corrente sanguínea por 3 cepas distintas de C. albicans documentadas no período de 10 dias. / The DNA sequence-based genotyping technique multilocus sequence typing (MLST) has emerged as an alternative typing tool for C. albicans because can characterize large numbers of isolates rapidly, and does not require the subjective interpretation of banding patterns. This methodology is a very useful tool in understanding the phylogenetics and epidemiology of C. albicans strains from invasive candidiasis. Objective: Our goal was 1) to apply MLST and ABC typing to C. albicans strains recovered from bloodstream infection from public tertiary care hospitals in Brazil and 2) determine whether indistinguishable or different strains were responsible for persistent or recurrent fungemia by performing MLST and ABC typing on sequential C. albicans isolates from the same patient. Methods: We applied MLST and ABC typing, which is based on the presence or absence of an intron in the 25S rDNA region, to C. albicans strains from 61 patients with candidemia collected during a multicenter surveillance study in 11 public tertiary care hospitals, representative of the public health system of 9 of the largest cities in Brazil. We also analyzed C. albicans strains from 8 patients with persistent or recurrent candidemia. Persistent candidemia was defined as two or more blood cultures positive for C. albicans on 2 or more separate days. Recurrent candidemia was defined as an episode of candidemia occurring at least 1 month after the apparent complete resolution of an infectious episode caused by the same Candida species. Results: A total of 48 unique profiles or diploid sequence types (DST) were observed, with 10 new sequence types (STs) and 32 new DSTs. DST 69 was the most common DST isolated. C. albicans clade 1 accounted for 56% of the collection, clade 3 and clade 8 for 10% each, clades 9 and 17 for 6.5% each, and clade 12 for 5%. Clade 2, clade 4, clade 16 and a singleton strain had 1 isolate each (1.5%). For ABC typing, 82% of the isolates were classified as type A, followed for 16.5% type B and 1.5% type C. All the patients’ strains related to persistent or recurrent candidemia but one showed the same MLST diploid sequence type (DST), ABC type and susceptibility profile to antifungals in the first and second samples. One patient with 7 samples collected sequentially over 10 days showed 3 distinct strains, well discriminated by MLST. One of the 3 strains recovered from this patient showed a single C. albicans isolate found in our total collection classified as clade 2, although clade 2 is commonly found worldwide. Conclusion: More than 50% of isolates from this study form a unique set of DSTs and clade 1 was responsible for 56% of the isolates. For ABC typing, 82% of the isolates were type A. To the best of our knowledge, this is the first study describing a blood stream infection with 3 distinct C. albicans strains in the same patient within a short period of time. / CNPq: GM/GD 142025-2005-4 / CNPq: SWE 200669/2007-9 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

In the last two decades it has been seen a large increase in blood stream infections by Candida spp. The candidemias are associated with high morbidity and mortality, as well as the increase in hospital costs. The phenomenon of resistance highlights the importance of performing tests for susceptibility to antifungal agents. Such tests are improving constantly in an attempt to standardize their interpretations. This study evaluated the susceptibility of Candida spp. isolated from candidemias during a period of 15 years divided into three periods of five years in Santa Maria, RS, Brazil, interpreting minimum inhibitory concentrations according to the proposal of the CLSI and the new breakpoints recently proposed by Pfaller et al. Among the 525 isolates during the three periods, C. parapsilosis was the predominant species (49.14%), followed by C. albicans (34.47%), C. tropicalis (8.19%), C. glabrata (3.61%), C. lusitaniae (1.90%), C. guilliermondii (1.71%) and C.krusei (0.95%). During the study period and considering the two criteria, 136 non-susceptible isolates were found. According to CLSI, we identified 40 (7.61%) non-susceptible isolates, from wich 19 (3.61%) were resistant. According to Pfaller et al., 96 (18.28%) isolates presented themselves as nonsusceptible, being 11 (2.09%) resistant. All isolates were susceptible to amphotericin B and 3 presented themselves dose-dependent or intermediate suscpetible to flucytosine and caspofungin. Resistance was detected only among the azole antifungals: itraconazole (2.09%), fluconazole (1.14%) and voriconazole (0.38%). The isolation of species resistant to the antifungal agents used was not a prominent feature in this study. Detecting a higher number of non-susceptible species highlighted the relevance of evaluating of susceptibility tests by new breakpoints in order to find a more efficient therapy. / Nas últimas duas décadas observou-se um grande aumento nas infecções de corrente sanguínea por Candida spp. As candidemias estão associadas a altas taxas de morbidade e mortalidade, bem como ao incremento nos custos hospitalares. O fenômeno da resistência evidencia a importância da realização de testes de suscetibilidade aos agentes antifúngicos. Tais testes estão aprimorando-se constantemente na tentativa de uniformizar suas respectivas interpretações. O presente estudo avaliou a suscetibilidade de Candida spp. isoladas de candidemias por um período de 15 anos divididos em três períodos de cinco anos, em Santa Maria, RS, Brasil, interpretando as concentrações inibitórias mínimas de acordo com a proposta do CLSI e os novos breakpoints recentemente propostos por Pfaller et al. Entre os 525 isolados nos três períodos avaliados, C. parapsilosis foi a espécie predominante (49,14%), seguida por C. albicans (34,47%), C. tropicalis (8,19%), C. glabrata (3,61%), C. lusitaniae (1,90%), C. guilliermondii (1,71%), e C. krusei (0,95%). Durante o período estudado e considerando-se os dois critérios, foram detectados 136 isolados não sensíveis. Segundo o CLSI, foram identificados 40 (7,61%) isolados não sensíveis, sendo 19 (3,61%) resistentes. De acordo com Pfaller et al., 96 (18,28%) isolados apresentaram-se como não sensíveis, sendo 11 (2,09%) resistentes. Todos os isolados foram sensíveis a anfotericina B e 5 e 3 isolados apresentaram-se intermediários a flucitosina e caspofungina, respectivamente. Resistência foi detectada somente entre os antifúngicos azólicos: itraconazol (2,09%), fluconazol (1,14%), e voriconazol (0,38%). O isolamento de espécies resistentes aos agentes antifúngicos utilizados não foi uma característica marcante no presente estudo. Este estudo permitiu uma melhor visão da epidemiologia local. A detecção de um maior número de espécies não sensíveis ressaltou a relevância da avaliação dos testes suscetibilidade através dos novos breakpoints a fim de ser direcionada a uma terapia mais eficiente.

Investigamos a ocorrência de espécies de leveduras isoladas em um hospital infantil. Pesquisamos a presença de C. dubliniensis; investigamos as espécies do complexo Candida parapsilosis e estudamos as espécies deste complexo quanto a produção de biofilme. Pesquisamos os fatores relacionados a virulência e o perfil de sensibilidade pelo método Etest®. Dentre os anos em estudo C. albicans foi a levedura mais isolada com 36.45% seguida de C. tropicalis 23.36%, C. parapsilosis sensu stricto 21.49%, Pichia anômala 5.61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%; C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis não foi isolada nesta pesquisa. No estudo do complexo Candida parapsilosis, C. parapsilosis sensu estricto foi a espécie mais prevalente. Produziram biofilme apenas oito amostras de C. parapsilosis sensu estricto e uma amostra de C. orthopsilosis. As espécies não-albicans produziram mais proteinase e hialuronidase do que C. albicans. No estudo da fosfolipase e hemolisina, C. albicans foi a espécie mais produtora. Todas as amostras foram sensíveis para anfotericina B e para fluconazol quatro amostras foram resistentes. Duas amostras foram resistentes para caspofungina. / We investigated the occurrence of yeast species isolated in a public hospital. We researched the presence of C. dubliniensis and investigated the species within the complex Candida parapsilosis and studied this complex in relation to biofilm´s production. We also investigated the factors related to virulence and studied the sensibility profile by the \"Etest ®\" method. During the years of study, C. albicans was the most isolated yeast with 36.45% followed by C. tropicalis 23,36%, C. parapsilosis sensu stricto 21,49%, Pichia anomala 5,61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%, C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis was not isolated in this study. In the study of Candida parapsilosis complex, C. parapsilosis sensu stricto was the most prevalent species. Only eight strains of C. parapsilosis sensu stricto and one strain of C. orthopsilosis produce biofilm. The non-albicans species showed greater activity of the proteinase and hyaluronidase than C. albicans. In the study of hemolysin and phospholipase, C. albicans was the most producer. All strains were susceptible to amphotericin B and to fluconazole four were resistant. For caspofungin, two strains were resistant.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-20T13:02:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Candidemia em neonatos....pdf: 1628589 bytes, checksum: 5b0ac1e6a9d71e1864e058583212fc7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T13:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Candidemia em neonatos....pdf: 1628589 bytes, checksum: 5b0ac1e6a9d71e1864e058583212fc7a (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / CAPEs / Infecções fúngicas hematológicas em neonatos ocorrem comumente associadas a diversos fatores. Dentre estas infecções destaca-se candidemia, a qual tem se tornado cada vez mais frequente. Os fatores relacionados incluem prematuridade e uso de dispositivos terapêuticos invasivos, determinando altos indíces de morbi-mortalidade. Neste contexto, medidas preventivas às infecções fúngicas e instituição do tratamento adequado podem melhorar o cenário atual. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi diagnosticar infecções fúngicas em neonatos, definir o perfil epidemiológico e caracterizar os agentes etiológicos quanto a virulência e susceptibilidade antifúngica. Assim, amostras de sangue foram coletadas e processadas para exame direto e cultura. A virulência das leveduras foi avaliada através da capacidade de adesão dos agentes às células HeLA e produção de biofilme. Os testes de susceptibilidade antifúngica foram procedidos de acordo com o Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI) utilizando anfotericina B, voriconazol, fluconazol e as equinocandinas. Também foram incluídas nos testes cepas controle (ATCC) de Candida tropicalis e C. parapsilosis. No diagnóstico, foram verificadas estruturas fúngicas em parasitismo compatíveis com leveduras, sendo isoladas C. parapsilosis, C. albicans, C. haemulonii, C. guilliermondii, C. famata e C. glabrata. A espécie mais isolada foi C. parapsilosis superando a ocorrência de C. albicans. Os dados epidemiológicos indicam como fatores associados aos casos de candidemia a prematuridade, baixo peso ao nascer, uso de dispositivos médico-invasivos e maior acometimento do sexo masculino. Com relação à virulência, isolados de C. albicans e C. glabrata foram os que apresentam maior capacidade de adesão às células HeLa e cepas de C. albicans e C. parapsilosis produziram biofilmes fortes. Também foi possível detectar raros casos de resistência aos antifúngicos testados. Os resultados obtidos ressaltam a importância do acompanhamento micológico em neonatos para minimizar o índice de morbi-mortalidades por infecções fúngicas, particularmente, candidemia. / Hematologic fungal infections in newborns occur commonly associated with many factors. Among these infections stands out candidemia, which has become increasingly common. Related factors including prematurity and use of invasive therapeutic devices, determining high levels of morbidity and mortality. In this context, preventive measures to fungal infections and institution of appropriate treatment can improve the current situation. Thus, the objective of this study was to diagnose fungal infections in neonates, set the epidemiological profile and characterize the etiologic agents in virulence and antifungal susceptibility. Blood samples were collected and processed for direct examination and culture. The virulence of yeast was assessed by the ability of agents adhere to HeLa cells and biofilm production. The antifungal susceptibility testing was proceeded according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) using amphotericin B, voriconazole, fluconazole and echinocandins. Also were included in the test control strains (ATCC) of Candida tropicalis and C. parapsilosis. At diagnosis, fungal structures were observed in parasitism compatible with yeast, being isolated C. parapsilosis, C. albicans, C. haemulonii, C. guilliermondii, C. famata and C. glabrata. The most frequent species was C. parapsilosis surpassing the occurrence of C. albicans. Epidemiological data indicate some factors associated with cases of candidemia as prematurity, low birth weight, use of invasive medical devices and greater prevalence of males. Regarding the virulence isolates of C. albicans and C. glabrata were those with greater ability to adhere to HeLa cells and strains of C. albicans and C. parapsilosis produced strong biofilms. It was possible to detect rare cases of antifungal resistance. The results highlight the importance of mycological monitoring in neonates to minimize the morbidity and mortality rate due to fungal infections, particularly candidemia.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T14:36:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO FINAL PDF DIGITAL.pdf: 1241777 bytes, checksum: 0031dd125d40fe083cb1ec9da8552635 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T14:36:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO FINAL PDF DIGITAL.pdf: 1241777 bytes, checksum: 0031dd125d40fe083cb1ec9da8552635 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / Pacientes acometidos por neoplasias hematológicas realizam tratamento quimioterápico intenso e têm alto risco de desenvolver infecções invasivas por espécies de Candida spp. devido à baixa resposta imune, neutropenia e outros fatores de risco, contribuindo para uma elevada morbimortalidade. Entretanto, devido a peculiaridades da imunossupressão a que são submetidos, a distinção entre os processos infecciosos ainda não é uma tarefa fácil podendo levar o paciente a óbito. O presente estudo teve como objetivo diagnosticar candidemias e avaliar o perfil epidemiológico e sensibilidade antifúngica em pacientes acometidos por neoplasias hematológicas. O diagnóstico micológico foi realizado através da taxonomia clássica e automatizada e confirmado pela técnica molecular (PCR-Reação em Cadeia da Polimerase) e identificação proteômica (MALDI-TOF MS). O teste de sensibilidade antifúngica seguiu as recomendações M27-A3 do Clinical & Laboratory Standards Institute (2008). A análise estatística descritiva foi realizada no programa GraphPad Prism6 através do teste exato de Fisher e cálculo do Odds ratio (intervalo de confiança de 95% para p < 0,05). Foram analisadas 105 amostras sanguíneas de 62 pacientes internados no serviço de Onco-hematologia do Hospital de Câncer de Pernambuco (HCP) no período de janeiro de 2015 a setembro de 2015. Dentre estas, foram isoladas nove (8,57%) leveduras do gênero Candida, sendo seis (66,66%) C. tropicalis e três (33,34%) C. albicans. O óbito ocorreu em 66,6% dos casos de candidemia demonstrando haver associação estatística significativa (p = 0,03, Odds Ratio = 5,53). O internamento em UTI, como fator de risco, foi associado à candidemia (p = 0,0008 Odds ratio = 24,8) e o choque séptico ao óbito (p= 0,0476 Odds ratio= 25,67). Ao teste de sensibilidade antifúngica, os isolados mostraram sensibilidade aos antimicóticos anfotericina B, caspofungina, micafungina, anidulafungina e fluconazol. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que candidemia é uma infecção invasiva frequente causada por espécies de Candida não-albicans, em pacientes com neoplasias hematológicas, como a espécie C. tropicalis. / Patients affected by neoplasia hematological which require intense chemotherapy treatment have high risk of developing invasive infections by Candida spp species due to low immune response, neutropenia and other risk factors contributing to high morbimortality. However, due to peculiarities of the immunosuppression that are submitted, the distinction between the infectious processes is still not an easy task and may progress rapidly and take the patient to death. The study aimed to identify the candidemia and epidemiological profile in patients with hematologic neoplasia. The mycological diagnosis was performed by classical taxonomy and automated and confirmed to molecular technique (PCR-polymerase chain reaction) and proteomics (MALDI-TOF MS). The antifungal susceptibility testing followed the M27 -A3 & recommendations of the Clinical Laboratory Standards Institute (2008). The descriptive statistical analysis was performed using GraphPad Prism6 program through the Fisher exact test and calculation of Odds ratio (95% confidence interval for p < 0.05) .Blood samples (105) were analysed of 62 patients admitted in the oncohematology service of the Hospital of Pernambuco (HCP) from January 2015 to September 2015. Among samples studied, nine (8,57%) were found positive for yeasts of the genus Candida in which identified six (66,66%) species C. tropicalis and three (33,34%) C. albicans. The death occurred in 66.6 % of cases of candidemia demonstrated significant statistical association (p = 0,03, Odds ratio = 5,53). The admission to the ICU, as a risk factor was associated with candidemia (p = 0.0008 Odds ratio = 24.8) and septic shock with death (p = 0.0476 Odds ratio = 25.67). The antifungal susceptibility testing, isolates were presented, in its entirety, sensitive to antifungal agents amphotericin B, caspofungin, micafungin, anidulafungin and fluconazole. Among the patients with candidemia 66,6% evolved to death. Based on these results, one can conclude that candidemia is a common invasive infection caused by Candida non-albicans species in patients with hematological malignancies, such as C. tropicalis species.