Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-10-05T18:21:34Z No. of bitstreams: 1 Nanci Derevtsoff Munford Alterações... 2016.pdf: 3140719 bytes, checksum: 5a6dfaa344823e60c8a3fa04f9a40b45 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-10-05T18:28:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Nanci Derevtsoff Munford Alterações... 2016.pdf: 3140719 bytes, checksum: 5a6dfaa344823e60c8a3fa04f9a40b45 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T18:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nanci Derevtsoff Munford Alterações... 2016.pdf: 3140719 bytes, checksum: 5a6dfaa344823e60c8a3fa04f9a40b45 (MD5) Previous issue date: 2016-06-20 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: Leishmaniose visceral é uma zoonose grave que acomete uma gama de animais. O cão é considerado o principal reservatório urbano da Leishmania infantum e pode ser clinicamente assintomático ou sintomático na infecção. Poucos estudos abordam os aspectos clínicos e histopatológicos na leishmaniose visceral, sobretudo estudos sistemáticos, que fazem descrição detalhada dos achados de histopatologia e façam a correlação desses aspectos na doença. A hipótese da pesquisa é que cães naturalmente infectados com L. infantum apresentam alterações histopatológicas distintas que se relacionam com as manifestações clínicas, tendo significados diagnóstico e prognóstico. OBJETIVO: O objetivo do trabalho foi a descrição sistemática das alterações histopatológicas encontradas nos diversos órgãos de cães com leishmaniose visceral naturalmente infectados, correlacionando com diferentes manifestações clínicas. MÉTODOS: Para este estudo foram coletados amostras e dados provenientes de 58 cães do município de Jequié-Ba, área endêmica para leishmaniose. Os cães foram submetidos a exame clínico, eutanásia e coleta de material para PCR, ELISA e cultura, além de fragmentos de fígado, baço, linfonodo, pele, intestino, rins e pulmões. Os animais foram classificados em assintomáticos, quando apresentaram até dois sinais, e sintomáticos, quando exibiram mais de dois sinais. Cães com positividade simultânea nos testes de cultura esplênica, ELISA e PCR tiveram cortes dos tecidos submetidos a procedimento imunoistoquímico para avaliação da carga parasitária em linfonodo, baço e fígado. Lâminas dos fragmentos obtidos foram avaliadas sob microscopia óptica para análise das alterações. RESULTADOS: Ao todo, nove animais foram classificados como assintomáticos e 49 sintomáticos. Os 58 cães da pesquisa foram positivos em pelo menos um dos testes realizados para diagnóstico da infecção: PCR (n=91,38%), ELISA (n= 84,48%) ou cultura esplênica (n= 34,48%). No fígado, a linfocitose intrassinusoidal moderada se mostrou mais frequente no grupo dos sintomáticos (p=0,008). Nos demais parâmetros hepáticos, os grupos não obtiveram diferenças estatisticamente significantes. No baço, linfonodo, intestino, pele, rins e pulmões, as alterações se comportaram de forma semelhante entre as manifestações clínicas. A maior carga parasitária foi encontrada no baço. CONCLUSÃO: As alterações histopatológicas não mostraram diferenças entre as manifestações clínicas. / INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a serious zoonosis that affects a range of animals. The dog is considered the main urban reservoir of Leishmania infantum and may be clinically asymptomatic or symptomatic in infection. Few studies address the clinical and histopathological aspects in visceral leishmaniasis, especially systematic studies, which are detailed description of histopathology findings and making the correlation of these aspects of the disease. The hypothesis of the research is that dogs naturally infected with L. infantum have distinct histopathologic changes that relate to the clinical manifestations, diagnosis and prognosis. OBJECTIVE: The objective was the systematic description of histopathology found in the various organs of dogs with visceral leishmaniasis naturally infected, correlated with different clinical manifestations. METHODS: For this study were collected samples and data from 58 dogs in the city of Jequié-Ba, endemic area for leishmaniasis. The dogs underwent clinical examination, euthanasia and collection of material for PCR, ELISA and culture, as well as fragments of liver, spleen, lymph nodes, skin, intestine, kidneys and lungs. The animals were classified as asymptomatic when presented two signs, and symptomatic when exhibited more than two signals. Dogs with positive symptomatology for splenic culture, ELISA and PCR were subjected to cuts tissue immunohistochemical procedure for evaluating the parasite load in the lymph node, spleen and liver. Blades fragments obtained were evaluated by optical microscopy for analysis of changes. RESULTS: In all, nine animals were classified as asymptomatic and 49 symptomatic. The 58 dogs of the survey were positive in one of the tests for the diagnosis of infection: PCR (n = 91.38%), ELISA (n = 84.48%) or splenic culture (n = 34.48%). In the liver, moderate sinusoidal intra lymphocytosis was more frequent in the symptomatic group (p = 0.008). In other hepatic parameters, the groups no revealed statistically significant differences. In spleen, lymph nodes, intestines, skin, kidneys and lungs, the changes are similarly between the clinical manifestations. The largest parasitic load was found in the spleen. CONCLUSION: The histopathological changes showed no differences between the clinical manifestations

A demodicidose é uma das principais dermatopatias parasitárias dos cães, contudo muitos aspectos da doença ainda são pouco compreendidos. A doença no cão adulto é menos frequente do que a forma juvenil e parece ocorrer devido à presença de condição imunodepressora/imunossupressora que leve à perda da capacidade de controle, pelo sistema imune, da população de ácaros Demodex spp. na pele do animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar se hiperadrenocorticismo (HAC) espontâneo, neoplasia e quimioterapia, classicamente aceitos como “gatilhos” para esta doença parasitária, seriam fatores de risco para o aumento na presença de ácaros Demodex spp. na pele de cães adultos. Foram selecionados cães sem histórico de demodicidose juvenil e estes, distribuídos em cinco grupos. O grupo um (G1) foi formado por 33 cães clinicamente saudáveis; o grupo dois (G2), por 27 cães com afecções crônicas; o grupo três (G3), por 14 cães diagnosticados com HAC espontâneo; o grupo quatro (G4), por 30 cães com neoplasia e o grupo cinco (G5), por 27 cães submetidos a protocolos quimioterápicos antineoplásicos. O exame parasitológico de pele (EPP) foi realizado, pontualmente, por meio de tricograma, impressão por fita adesiva e raspado cutâneo profundo em cinco pontos anatômicos pré-determinados. Regiões com lesões cutâneas também foram coletadas e hemogramas, realizados no intervalo de um mês prévio ou posterior à inclusão no estudo, foram avaliados. Em 16 cães foi possível demonstrar a presença de ácaros Demodex spp. Seis cães apresentaram lesões de pele e em apenas dois foi observada a presença do parasita, sendo que não houve diferença significativa na presença do ácaro entre cães com e sem alterações no hemograma. Os grupos de risco G3, G4 e G5 apresentaram maior frequência de EPP positivo, porém diferença estatisticamente significativa foi mostrada apenas entre os cães com HAC espontâneo e os com afecções crônicas, com odds ratio de 10,4. Concluiu-se que HAC espontâneo, neoplasia e quimioterapia parecem influenciar no aumento da população dos ácaros Demodex spp. na pele de cães adultos. Além disso, não há relação entre a presença de leucopenia, neutropenia e/ou linfopenia e o aumento na presença dos ácaros na pele desses animais. Por fim, as lesões cutâneas em cães com HAC espontâneo, neoplasia ou em quimioterapia são pouco frequentes e apresentam causas distintas, não sendo a proliferação excessiva de ácaros Demodex spp. a principal etiologia identificada. / Demodicosis is one of the most common parasitic skin diseases of dogs, but many aspects of canine demodicosis are still poorly understood. Adult onset demodicosis is less frequent and seems to occur due to the presence of an immunosuppressive condition leading to immune system loss of ability to control the Demodex mite population in the skin. The aim of this study was to evaluate if spontaneous hyperadrenocorticism (HAC), cancer and chemotherapy, classically accepted as "triggers" for this parasitic disease, would be risk factors for the increased presence of Demodex mites in the skin of adult dogs. Dogs without a history of juvenile demodicosis were selected and then divided into five groups. Group 1 (G1) was formed by 33 clinically healthy dogs; group two (G2), by 27 dogs with chronic conditions; group three (G3), by 14 dogs diagnosed with spontaneous HAC; group four (G4), by 30 dogs with cancer and group five (G5), by 27 dogs submitted to antineoplastic chemotherapy protocols. Trichogram, acetate tape impression and deep skin scrapes were performed, just once, in five predetermined anatomical points. Skin lesions are also evaluated by these techniques and complete blood count, performed within one month prior or after the inclusion in the study, were evaluated. In 16 dogs it was possible to demonstrate the presence of Demodex mites. Six dogs had skin lesions and only in two of them it was possible to observe the presence of the parasite; there was no significant difference in the presence of the parasite between dogs with and without changes in complete blood count. Risk groups G3, G4 and G5 had a higher frequency of positive samples, but significant difference was shown only between dogs with spontaneous HAC and those with chronic diseases (odds ratio 10.4). It was concluded that spontaneous HAC, cancer and chemotherapy seem to influence the increase of the parasite population in the skin. Furthermore, there is no relationship between the presence of leukopenia, neutropenia and/or lymphopenia and the increased presence of mites in the skin of adult dogs. Finally, skin lesions in dogs with spontaneous HAC, cancer or chemotherapy are uncommon and present different causes, not being excessive proliferation of Demodex mites the main identified etiology.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La brucelosis canina constituye un problema para la salud animal y humana, que cobra especial relevancia en los criaderos caninos, debido a sus mecanismos de transmisión, alto potencial de diseminación en estos y a los efectos perjudiciales que causa en la fertilidad de los animales afectados. El diagnóstico definitivo es el diagnóstico directo mediante cultivo, pero por inconvenientes prácticos y costos asociados es poco factible de aplicar en criaderos que busquen diagnosticar a todos sus animales. Surge entonces la serología como alternativa de diagnóstico indirecto. Dentro de estas técnicas, la denominada prueba de aglutinación rápida en placa con 2-mercaptoetanol (2ME-RSAT), se consideró como una atractiva alternativa de “screening” para el diagnóstico de Brucella canis en Chile. Esto dada su rapidez en la obtención de resultados, facilidad de implementación y bajo costo La presente memoria de título implementó la prueba de 2ME-RSAT, ya utilizada en otros países, en el laboratorio de bacteriología de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile (LaBFAVET). Estableciéndose que presentó una sensibilidad de 100% y una especificidad de 74,3%, utilizando la prueba de contrainmunoelectroforesis (CIEF) como técnica de referencia. Se trabajó con 23 sueros controles positivos de perras experimentalmente infectadas y 39 sueros controles negativos provenientes de perros negativos por CIEF y sin sospecha clínica de Brucella canis. El antígeno utilizado fue una suspensión de células inactivadas de B. canis. Se calcularon además las concordancias del 2ME-RSAT con las pruebas de CIEF y ELISA indirecto, actualmente realizadas en la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias (FAVET) de la Universidad de Chile. La sensibilidad y especificidad obtenidas permiten suponer la utilidad del 2ME-RSAT como “screening” diagnóstico. Pero la concordancia moderada con CIEF (k = 0.489) y baja con ELISA (k = 0.143), ponen en duda dicha utilidad / Canine brucellosis is a disease that signifies a problem for animal and human health, but has especial significance for breeding kennels, where its transmission mechanisms and high potential for dissemination are important factors, as well as the negative consequences it causes in affected animals. Direct diagnostic through bacteriological culture is the gold standard but due to practical problems and associated costs, it is not a feasible alternative for breeding kennels that seek to test all their animals. Indirect diagnostics through serology is therefore a plausible option. Due to its potential for obtaining results in a short time frame, its simple implementation and low cost, the rapid slide agglutination test with 2-Mercaptoethanol (2ME-RSAT) was considered an attractive alternative for the screening diagnostic of Brucella canis. This thesis implemented the 2ME-RSAT test, already used in other countries, in the Laboratory of Bacteriology at de Faculty of Veterinary Sciences of the University of Chile. Determining a sensitivity of 100% and specificity of 74,3%, with counter-immuno-electrophoresis (CIEP) as the referential technique. The materials employed were: 23 positive control serums obtained from experimentally infected bitches, 39 negative control serums from dogs negative by CIEP and without clinical signs of canine brucellosis. The antigen used was a suspension of inactivated B. canis cells. The agreement with CIEP and indirect ELISA techniques, both performed at the University of Chile Veterinary Diagnostics Laboratories, was also calculated. The sensitivity and specificity levels obtained suggest the plausibility of employing 2ME-RSAT as a diagnostic screening test. However the agreement results, moderate for CIEP (k = 0.489) and low for ELISA (k = 0.143), cast doubts on its usefulness. Various factors could explain this contradiction and are detailed in the discussion

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-02Bitstream added on 2014-06-13T20:41:31Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_cr_dr_jabo.pdf: 1589337 bytes, checksum: 74d447ad5bc966034c604bbeb672d97b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma antropozoonose de distribuição cosmopolita. No Brasil, é causada pela Leishmania (Leishmania) chagasi, que tem flebotomíneos da espécie Lutzomyia longipalpis como vetores e grande variedade de mamíferos, inclusive pessoas, como hospedeiros. As infecções mais comuns ocorrem em mamíferos silvestres; em áreas urbanas e periurbanas, o cão é o hospedeiro de maior importância epidemiológica. Assim, o objetivo do estudo foi verificar aspectos clínicos e epidemiológicos, e avaliar a bioquímica sérica, inclusive proteínas de fase aguda, em proteinograma em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), de 120 cães de região periurbana com foco de transmissão no Distrito Federal. Sessenta cães eram sororreagentes e sessenta animais não eram reagentes à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para LVC. A soroprevalência observada foi de 24,5%, sendo animais assintomáticos a maioria entre os cães sororreagentes ou não-reagentes à RIFI para LVC. Nos animais sororreagentes oligossintomáticos, os sinais clínicos mais evidentes foram lesões cutâneas (primárias e secundárias), inclusive alopecia de nariz e/ou orelhas. As médias das concentrações séricas de uréia, creatinina, colesterol, cálcio, fósforo, magnésio e das atividades de AST, ALT, ALP e GGT situaram-se na faixa de normalidade para a espécie canina. Os teores séricos de colesterol e de HDL foram inferiores e as concentrações séricas de proteínas totais e imunoglobulinas foram mais elevadas em cães sororreagentes à RIFI. Notou-se uma proteína de peso molecular 33 kDa em cães sororreagentes à RIFI, não constatada em cães soronegativos. Ainda, em animais sororreagentes, evidenciaram-se teores séricos superiores embora não significativos, mas com provável importância biológica das proteínas de fase aguda ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina e glicoproteína ácida. / Canine visceral leishmaniasis (CVL) is an anthropozoonotic infection of cosmopolitan distribution. In Brazil, it is caused by Leishmania (Leishmania) chagasi and transmitted by vector Lutzomyia longipalpis (sandfly), having a great variety of hosts (including humans). The most common infections take place in wild mammals; in urban and periurban areas, dogs are the most important epidemiological host. The aim of this study was to verify clinical and epidemiological aspects of 120 dogs from the periurban area of transmission at Distrito Federal. Serum biochemical evaluation (including acute phase proteins) was performed using SDS-PAGE method. Sixty dogs were seroreagents and sixty were not reactive to the indirect immunofluorescence assay (IFA) for CLV. Seroprevalence rate was of 24.5%; asymptomatic dogs were the majority of seroreagent or non-reagent to IFA for CLV. In the seroreagent oligosymptomatic animals the most evident clinical signs were skin lesions (primary and secondary) including alopecy of nose and/or ears. Mean concentration of urea, creatinine, cholesterol, calcium, phosphorus, magnesium and the activities of AST, ALT, ALP and GGT were within normal limits for canine specie. Serum cholesterol and HDL were inferior and total serum protein concentration and immunoglobulins were more elevated in dogs seroreagent to IFA. In the dogs seroreagent to IFA, it was noticed a protein with molecular weight of 33 kDa, not noticed in seronegative animals. In the seroreagent animals, it was noticed increased serum levels of acute phase proteins (ceruloplasmine, transferrin, haptoglobin and acid glycoprotein), although not significative but with a probable biological importance.

A cinomose canina é uma doença viral e afeta principalmente os sistemas respiratório, gastrintestinal e nervoso. O presente trabalho analisou 54 cães com cinomose de um total de 760 cães necropsiados no período de julho de 2006 a outubro de 2007. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por secreção ocular e nasal mucopurulentas, hiperqueratose dos coxins digitais, pulmões de coloração avermelhada e não colabados, atrofia do timo, conteúdo intestinal diarréico e evidenciação das placas de Peyer. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por pneumonia intersticial, rarefação linfóide, desmielinização da substância branca, manguitos perivasculares e corpúsculos de inclusão viral na mucosa do estômago, epitélios da bexiga, brônquios e bronquíolos, pelve renal, coxins digitais, pálpebra e orelha, no sistema nervoso central (principalmente em astrócitos) e em células mononucleares dos linfonodos, baço e tonsilas. O teste de imunoistoquímica foi positivo em 94,4% dos casos analisados. Os tecidos foram marcados pela técnica imunoistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal anti-cinomose canina (VMRD) na diluição de 1:400. O coxim digital se apresentou como o órgão com o maior número de casos marcados positivamente (67,4%), seguido pelo estômago com 62,7%. A utilização da imunoistoquímica auxiliou na identificação do antígeno viral em diferentes tecidos e foi importante como diagnóstico complementar da cinomose canina. / Canine distemper is a viral disease that affects mainly, respiratory, gastrointestinal and nervous system. The present study analyzed 54 dogs with canine distemper from total of 760 necropsies done in dogs between July 2006 to October 2007. The macroscopic lesion were characterized by mucopurulent oculonasal discharge, hyperkeratosis of footpads, red and not collapsed lungs, thymic atrophy, watery intestinal, hyperemia and Peyer’s patches enlarged. The microscopic findings were characterized by interstitial pneumonia, lymphoid depletion, white matter demylization, perivascular cuffs and viral inclusion bodies located in stomach mucosa, bladder, bronchial, renal pelvis, footpads, eyelid, skin of the ear epithelium, central nervosus system (mainly in astrocytes) and mononuclear infiltrates in lymph nodes, spleen, and tonsils. The immunohistochemistry test was positive in 94,4% of analyzed cases. Tissues were strained by an immunohistochemical procedure with mouse monoclonal anti-cinomose (VMRD) diluted 1:400. The footpads was the best tissue with majority of positive marked cases (67,4%), followed by stomach with 62,7%. This observation suggests that the immunohistochemistry technique aided to identify distemper virus antigens in different tissue making it an important test for complementary diagnostic of canine distemper.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-22T19:18:29Z No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-10-23T13:57:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T13:57:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5) / As leishmanioses representam um complexo de doenças com uma importante diversidade clínica e epidemiológica. A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose endêmica no Brasil, anteriormente restrita a áreas rurais, mas, recentemente tem ocorrido expansão no processo de urbanização da Leishmaniose Visceral. A imunidade inata participa dos mecanismos de defesa contra a leishmânia e ainda está pouco compreendida na leishmaniose canina. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imunitária inata dos fagócitos de cães naturalmente infectados por Leishmania spp. em comparação com cães normais, pela avaliação da fagocitose e capacidade de produzir moléculas microbicidas. Foram utilizados 30 cães, sem raça definida, maiores que um ano de idade, sendo 22 cães machos e 8 fêmeas, que foram distribuídos em dois grupos: 15 cães não infectados utilizados como controle normal e 15 cães naturalmente infectados pela Leishmania spp. Foram feitos o exame clínico, o hemograma e os testes bioquímicos. Foram avaliadas a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae pelos neutrófilos e monócitos do sangue periférico, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos e pelos receptores para opsoninas. A produção de ânions superóxido foi avaliada pelo teste do NBT, a produção de peróxido de hidrogênio pela oxidação do vermelho neutro na presença de peroxidase e a produção de óxido nítrico foi quantificada pela presença de nitrito no sobrenadante das culturas utilizando reagente de Griess, estimuladas ou não com LPS. Os cães com leishmaniose apresentaram os seguintes sinais clínicos característicos da doença: alopecia (33%), descamação (46%), úlcera na pele (20%), onicogrifose (26%), caquexia (46%), linfoadenomegalia (40%), ceratoconjuntivite (53%). Os cães com leishmaniose apresentaram anemia normocrômica e normocítica, plaquetopenia e leucopenia, com neutrofilia relativa e desvio à esquerda. Os cães com leishmaniose apresentaram diminuição da atividade sérica da alanina aminotransferase (ALT) em relação a cães normais. Não foram observadas diferenças na concentração sérica da creatinina. As proteínas totais (PT) mostraram-se aumentadas em cães com leishmaniose as custas do aumento das globulinas, sendo que não houve diferença na concentração sérica de albumina entre cães com leishmaniose e cães normais. Cães com leishmaniose apresentaram menor capacidade fagocitária pelos neutrófilos do que cães normais quando avaliados pelos r eceptores para padrões moleculares de patógenos. A fagocitose facilitada por opsoninas mostrou que o número de leveduras ingeridas por neutrófilo foi maior em cães com leishmaniose em relação aos controles normais. Não houve diferença entre a capacidade fagocitária pelos monócitos de cães com leishmaniose e cães controle normal quando avaliados pelos receptores para padrões moleculares de patógenos, nas proporções de 5 ou 20 leveduras não sensibilizadas por monócito. Monócitos de cães com leishmaniose apresentaram maior capacidade fagocitária em comparação aos de cães normais, quando avaliados pelos receptores para opsoninas, tanto na proporção de 5 quanto na proporção de 20 leveduras sensibilizadas por monócito. A porcentagem de redução do NBT basal pelos fagócitos de cães com leishmaniose foi menor do que a dos cães controle. Quando utilizamos a concentração de 5 μg/mL de LPS, observamos que cães controles normais apresentaram um aumento da produção de óxido nítrico em relação aos cães controles normais. Entretanto, nos cães com leishmaniose houve diminuição na produção de óxido nítrico quando estimulados com 5 μg/mL de LPS em relação a sua produção basal. Observamos maior produção basal de peróxido de hidrogênio pelos cães com leishmaniose. Nossos resultados mostraram que há uma deficiência dos neutrófilos de cães com leishmaniose tanto na fagocitose quanto na produção de moléculas microbicidas, como os ânions superóxido. Entretanto, os monócitos desses cães embora apresentem uma maior capacidade fagocitária do que os cães normais, mostram uma menor capacidade de produzir óxido nítrico, que é uma das principais moléculas microbicidas para as leishmânias. Estas alterações do sistema imunitário inato podem favorecer o escape do parasito do sistema imunitário do hospedeiro, assim perpetuando sua sobrevivência. Ademais, o aumento da produção de peróxido de hidrogênio pelos monócitos, pode estar contribuindo para restringir em parte a multiplicação do parasito, mas o seu excesso pode também estar contribuindo nos mecanismos de imunopatogenia. Nossos dados contribuem para uma maior compreensão dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunopatogenia da leishmaniose em cães e podem contribuir para a busca de novos alvos para drogas imunomoduladoras que possam auxiliar no tratamento contra a leishmaniose. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis represent a complex disease with a significant clinical and epidemiological diversity. The Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a zoonosis endemic in Brazil, previously restricted to rural areas, but recently there has been expansion in the urbanization process of Visceral Leishmaniasis. Innate immunity participates in the defense mechanisms against Leishmania and is still poorly understood in canine leishmaniasis. The objective of this study was to evaluate the innate immune response of phagocytes of naturally infected dogs to Leishmania spp. compared to healthy dogs, and to evaluate phagocytosis and microbicide molecule production by phagocytes. Thirty dogs, mixed breed, higher than one year old, 22 males and 8 females, were separated into two groups: 15 uninfected dogs used as healthy control, 15 dogs naturally infected by Leishmania spp. The clinical examination, the blood cell count and biochemical tests were assessed. Phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae by neutrophils and monocytes were assessed through pathogen-associated molecular pattern and opsonin receptors. The production of superoxide anions was assessed by the NBT test. Hydrogen peroxide production was evaluated by neutral red oxidation and nitric oxide production by the Griess reagent, with or without LPS. Leishmania infected-dogs showed the following clinical characteristics: alopecia (33%), peeling (46%), skin ulcers (20%), onychogryphosis (26%), cachexia (46%), lymphadenopathy (40%), keratoconjunctivitis (53%). Leishmania infected-dogs showed normochromic and normocytic anemia, thrombocytopenia and leukopenia with neutrophil relative increment and a left shift. Leishmania infected- dogs showed decreased serum activities of alanine aminotransferase (ALT) compared to healthy control. No differences were observed in serum creatinine. The total protein (TP) was increased in Leishmania infected-dogs due to an increase in globulins, and there was no difference in serum albumin concentration between dogs with leishmaniasis and healthy controls. Leishmania infected-dogs showed lower phagocytic capacity by neutrophils than healthy dogs when evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors. Phagocytosis facilitated by opsonins showed that the number of ingested yeast per neutrophil was higher in Leishmania infected-dogs when compared to healthy controls. There was no difference between the phagocytic capacity of monocytes by Leishmania infected-dogs and healthy control when evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors. Monocytes from leishmaniasis animals showed higher phagocytic capacity when compared with healthy dogs, as assessed by the opsonin receptors. NBT percent reduction was lower in leishmaniasis than control dogs. When the concentration of 5 mg / mL of LPS was use, it was observed that healthy control dogs showed an increase in nitric oxide production when compared to control dogs. However, in dogs with leishmaniasis decreased nitric oxide production was observed when monocytes were stimulated with 5 / ml LPS. Higher baseline production of hydrogen peroxide by dogs with leishmaniasis was observed. Our results showed that there is a deficiency in neutrophils of Leishmania infected-dogs, both to phagocytosis as production of microbicidal molecules, such as superoxide anions. However, monocytes from leishmaniasis animals showed a higher phagocytic capacity than healthy dogs, showed a decreased capability to produce nitric oxide, which is a major microbicides molecule to Leishmania. These changes in innate immune system may favor the parasite scape from host immune system, thus maintaining their survival. In addition, the increased production of hydrogen peroxide by monocytes may contribute to impair the growth of parasites, but its excessive production may contribute to the immunopathogenesis of the disease. Our data contribute to enhance the understanding of the defense mechanisms of innate immunity and the immunopathogenesis of the disease in dogs. This knowledge may contribute as new targets for immunomodulatory drugs improving treatment against leishmaniasis.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La brucelosis canina es una enfermedad zoonótica causada por Brucella canis, la cual produce signos reproductivos como abortos en hembras e infertilidad en machos, siendo transmitida al hombre a través de contacto con perras que hayan parido o abortado recientemente o por exposición a la bacteria en laboratorios. La enfermedad actualmente presenta tres puntos críticos y que afectan directamente su control y prevención: i) no existen vacunas comerciales, ii) no hay tratamientos antimicrobianos exitosos y iii) existen problemas en el diagnóstico por cultivo tradicional debido a su lento crecimiento e intermitencia en la bacteremia, y problemas en la sensibilidad y especificidad de las técnicas serológicas en el diagnóstico indirecto. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) surge entonces como una opción de diagnóstico por ser altamente sensible y específica, otorgando además una pesquisa rápida. En el presente estudio se estableció la sensibilidad analítica de un protocolo de PCR convencional con partidores diseñados en el país en cultivo puro, muestras de sangre y orina para el diagnóstico de B. canis. La sensibilidad analítica en cultivo puro fue de 22,24 fg/μL de DNA y en muestras de sangre y orina experimentalmente contaminadas de 4,4x100 UFC/mL. La elevada sensibilidad analítica determinada sugiere que este protocolo puede ser utilizado como una alternativa de alto valor para el diagnóstico de B. canis en las muestras mencionadas, siendo importante continuar con esta línea de investigación, orientando estos hacia un estudio más detallado de especificidad y estudios de sensibilidad analítica en otras matrices. / Canine brucellosis is a zoonotic disease caused by Brucella canis, which produces reproductive signs such as abortion in bitches and infertility in dogs. These being transmitted to humans by contact with bitches that have recently given birth or aborted or by exposure to the bacteria in laboratories. Currently, the disease has three critical points that, to date, have not been resolved and that directly affect the control and prevention of this: i) there are no commercial vaccines, ii) no successful antimicrobial treatments and iii) problems in diagnosis; existing both difficulties to isolate the agent because of its slow growth and intermittent bacteremia in bacterial culture, and sensitivity and specificity problems in the numerous serological techniques. The PCR, thus, emerges as a diagnostic option due to its highly sensitive and specific nature, providing a fast diagnosis as a result. In the present study, the analytical sensitivity of conventional PCR protocol with primers designed in the country in pure culture, blood and urine samples for diagnosis of B. canis was established. The analytical sensitivity in pure culture was 22,24 fg/μL of DNA, and in experimentally contaminated blood and urine samples 4,4x100 UFC/mL. Given the high analytical sensitivity suggests that this protocol can be used as a highly valuable alternative for the diagnosis of this disease in the samples mentioned, understanding - consequently -, the major importance to continue this line of research, orienting these to a more detailed study of specificity, and analytical sensitivity studies in other matrices.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-27Bitstream added on 2014-06-13T20:55:59Z : No. of bitstreams: 1 salgado_vr_me_botfmvz.pdf: 342250 bytes, checksum: b60d6784559654ba5442f18a243ca0e7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A brucelose canina causada pela Brucella canis (B. canis) é uma das principais causas infecciosas de desordens reprodutivas em cães. O presente trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de Cultivo Microbiológico e Soroaglutinação Rápida em Cartão (SAR) com e sem o emprego de 2-Mercaptoetanol (2-ME) no diagnóstico da brucelose canina. Adicionalmente foram avaliados sangue, urina, swab vaginal, prepucial e sêmen como materiais a serem processados no diagnóstico microbiológico. Foram avaliados 236 cães quanto à infecção por B. canis, muitos com histórico de problemas reprodutivos, dos quais 24,2% resultaram positivos na SAR, 10,2% na SAR-2ME, 28% na hemocultura, 9,2% na urocultura, 2,1% na cultura de swab vaginal, 13,6% na cultura dos swabs prepuciais e 28,6% no cultivo de sêmen. Dos 71 animais positivos no cultivo microbiológico, 92,9% apresentaram-se positivos na hemocultura. Nos demais materiais foram obtidos percentuais menores. A sensibilidade relativa da SAR resultou em 66,2% e a especificidade relativa 93,9%. A SAR-2ME apresentou sensibilidade relativa de 29,5% com ligeiro aumento na especificidade relativa 98,2%. Quando associados SAR e hemocultura foram observados 97,6% e 93,9% de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Os resultados sugerem a utilização associada da SAR à hemocultura sem realização em paralelo com 2-ME. / Canine brucellosis caused by Brucella canis (B. canis) is one of the major infectious causes of reproductive disorders in dogs. The present study aimed to compare the performance of bacteriological methods and Rapid Slide Agglutination Test (RSAT) with or without 2-Mercaptoethanol (2-ME) in canine brucellosis diagnosis. Additionally, blood, urine, vaginal and prepucial swabs and semen were evaluated regarding their use in bacteriological diagnostic. Two hundred thirty six dogs, many of them showing reproductive problems, were submitted to investigation for diagnosis of B. canis infection. Among them, 24.2% were positive in RSAT, 10.2% 2ME-RSAT, 28% blood culture, 9.2% urine culture, 2.1% vaginal swab culture, 13.6% prepucial swab culture and 28.6% semen culture. Among the 71 positive dogs in bacteriological culture, 92.9% were positive in blood culture. The percentage of positivity was variable in others samples. The relative sensitivity of RSAT was 66.2% and the relative specificity was 93.9%. The 2ME-RSAT presented lower sensitivity 29.5% and greater specificity 98.2%. The use of blood culture and RSAT associated presented 97.6% e 93.9% of sensibility and specificity, respectively. These results suggest that RSAT should be used with blood cultures independently of the use of 2ME-RSAT.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-14Bitstream added on 2014-06-13T19:36:23Z : No. of bitstreams: 1 sousa_kcm_me_jabo.pdf: 1190164 bytes, checksum: 4d98963d90176b0331075c9dd139f5bd (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Dentre as doenças emergentes causadas por artrópodes em cães destacam-se as infecções por agentes das espécies Leishmania chagasi, transmitida por flebotomíneos, Ehrlichia canis e Babesia canis transmitidas por carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus. O presente estudo teve como objetivo realizar o diagnóstico sorológico e molecular de parasitos das espécies Leishmania chagasi, Ehrlichia canis e Babesia canis em amostras de soro e de baço, respectivamente. Foram utilizados 60 cães naturalmente infectados, eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses do Município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul. Pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), 60 (100%), 39 (65%) e 49 (81%) dos 60 animais amostrados foram sororeagentes frente aos antígenos de L.chagasi, E.canis e B.canis respectivamente. Também foi realizado o ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA-teste) para detecção de anticorpos da classe IgG anti-L. chagasi, onde sessenta cães (100%) mostraram-se soropositividade. Cinquenta e quatro cães (90%) mostraram-se positivos na reação em cadeia pela polimerase (PCR) para o gênero Leishmania sp e destes cinquenta e três animais, 53 (88%) foram positivos para o complexo L.Donovani. Vinte e sete animais (45%) foram positivos para Ehrlichia e destes animais todos foram positivos para E.canis pelo nested PCR e 2 (3,33%) cães foram PCR positivos para Babesia sp. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e os DNAs mostraram 99% de similaridade genética para L.chagasi, E.canis e B.canis. Este estudo mostrou que os cães residentes em Campo Grande/MS, podem albergar mais de um hemoparasita, As co-infecções por agentes patogênicos intracelulares de células do sistema monocítico fagocitário, como é o caso da Ehrlichia e Leishmania, associadas ou não a Babesia... / Among emerging diseases caused by arthropods in dogs stand out infections by agents of the species Leishmania chagasi, transmitted by sandflies, Ehrlichia canis and Babesia canis transmitted by ticks of the species Rhipicephalus sanguineus. The present study aims to perform serological and molecular diagnosis of parasites of the species Leishmania chagasi, Ehrlichia canis and Babesia canis in samples of sera and spleen, respectively. A total of 60 naturally infected dogs were euthanized at the Zoonosis Control Center of the city of Campo Grande, Mato Grosso do Sul Through Immunofluorescence Assay (IFA), sixty (100%), 39 (65%) and 49 (81%) of the 60 animals sampled were reactive serum against the antigens L.chagasi, E.canis and B. canis, respectively. We also performed indirect immunosorbent assay (ELISA test) for detection of IgG antibodies anti-L. chagasi, where sixty dogs (100%) were seropositive. Fifty-four dogs (90%) were positive by PCR for the genus Leishmania, and of these fifty and three animals, 53 (88%) were positive for the complex L.Donovani. Twenty-seven dogs (45%) were positive for Ehrlichia sp and these animals were all positive for E.canis by nested PCR and two dogs (3%) were PCR positive for Babesia sp. The amplicons were confirmed by DNA sequencing and showed 99% genetic similarity to L.chagasi, E.canis and B. canis. This study showed that dogs living in Campo Grande / MS, can accommodate more than one haemoparasite. The co-infections by intracellular pathogens monocytic phagocyte system cells, as is the case with Ehrlichia and Leishmania, associated or not with Babesia (which multiplies in red blood cells), causing serious damage to the health of animals. The decline in physical condition and immune co-infections resulting from increases parasitemia, which in the case of agents transmitted by... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoseFlavioVC.pdf: 1066045 bytes, checksum: 95695454c994be62f483dac7ee237cd8 (MD5) Previous issue date: 2005-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Canine Visceral Leishmania (CVL) is an important zoonotic disease that has a world wide distribution and has a large impact on public health on the American Continent, especially in Brazil, where the nature of endemic diseases in humans affects a large part of the nation. The influence of the prevalence of CVL in the increased rate of human cases in endemic areas and in the unleashing of epidemic outbreaks shows the need for a more profound understanding, that would generate significant advances in the current measures used to control the reservoirs of sickness that are practiced by the Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. The present work describes and compares the clinical-laboratorial and histopathological findings of twenty-three dogs that were naturally infected by Leishmania chagasi, from endemic areas in metropolitan Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. These animals, that were selected and given physical and serological exams (IFI and ELISA rK-39), were classified according to the degree of clinical severity and had blood samples drawn (whole blood and serum) for a complete hemogram and a coagulogram to be done as well as biochemical tests for kidney and liver function. The confirmation of infection by L. chagasi was done after the euthanasia of the animals, through the direct demonstration of the parasite in the impression of the spleen and liver crowned with GIEMSA and through a cultivation by means of NNN/Schneider. According to the clinical evaluation, the animals were classified as asymptomatic (7), oligosymptomatic (7) and polysymptomatic (9). Among the animals that were chosen to be autopsied, there were 2 asymptomatic, 3 oligosymptomatic and 3 polysymptomatic, for the purpose of studying their histopathology, having collected fragments of the spleen, liver, kidneys and skin and were fixed in 10% tamponed formol. The comparison between the average parameters of the clinical-laboratory tested animals in the groups was done through the Student t test (a<0.05). The main clinical signals observed were lymphadenomegaly, alopecy, dermatitis, exfoliation, cutaneous ulcers, onicogriphosis and emaciation. The main clinical-laboratorial alterations established, mainly in the polysymptomatic group, were anemia, hyperproteinemia, hyperglobulinemia, alterations in the albumin/globulin ratio and increased ALT activity. Renal alterations were not verified (urea and creatinine levels were normal). Thrombocytopenia was observed in three clinical groups. However, the other indicators of coagulation function (TAP and TTPA) did not have abnormal variations. There were inflammatory infiltrations and leishmania amastigotes in the skin of polysymptomatic dogs, however, they were not found in the skin of asymptomatic animals. Hypertrophy and hyperplasia of the phagocyte mononuclear system, leishmania amastigote parasites were found in the macrophages, extramedullary hematopoiesis and degenerative alterations were detected in the spleen and liver of 8 of the animals submitted to histopathological exams. In accord with these results, it was demonstrated that the expected alterations in the hematological and biochemical parameters in function of their viscerotropic nature of CVL are mainly observed in the more advanced stages of the disease. The absence of inflammatory infiltration and parasite load in the skin suggest that infected animals without symptoms may have an importance irrelevant to the infectiousness of the vector / A leishmaniose visceral canina (LVC) ? uma importante zoonose de distribui??o mundial com grande impacto em sa?de p?blica no Continente Americano, especialmente no Brasil, onde a natureza end?mica da doen?a humana afeta boa parte do territ?rio nacional. A influ?ncia da preval?ncia da LVC na amplia??o da taxa de casos humanos em ?reas end?micas e no desencadeamento de surtos epid?micos ainda carece de um entendimento mais profundo, o que geraria avan?os significativos nas atuais medidas destinadas ao controle de reservat?rios da doen?a preconizadas pelo Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. O presente trabalho descreveu e comparou os achados cl?nico-laboratoriais e histopatol?gicos de vinte e tr?s c?es infectados naturalmente pela Leishmania chagasi, provenientes de localidades end?micas da ?rea metropolitana de Natal-RN. Estes animais, escolhidos a partir de exame f?sico e sorologia (IFI e ELISA rK-39), foram classificados de acordo com o grau de comprometimento cl?nico e submetidos a coleta de sangue (sangue total e soro) para realiza??o de hemograma completo, provas bioqu?micas de fun??o renal e hep?tica, e coagulograma. A confirma??o da infec??o por L. chagasi foi realizada ap?s a eutan?sia dos animais, pela demonstra??o direta do parasita em impress?o de ba?o e f?gado corado com GIEMSA e atrav?s de cultivo em meio NNN/Schneider. De acordo com a avalia??o cl?nica, os animais foram classificados em assintom?ticos (7), oligossintom?ticos (7) e polissintom?ticos (9). Dentre os animais necropsiados, foram selecionados 2 c?es assintom?ticos, 3 oligossintom?ticos e 3 polissintom?ticos para o estudo histopatol?gico, sendo colhidos fragmentos de ba?o, f?gado rins e pele e fixados em formol a 10% tamponado. A compara??o entre as m?dias dos par?metros cl?nico-laboratoriais testados nos grupos foi realizada atrav?s do teste t de Student (&#945;<0,05). Os principais sinais cl?nicos observados foram linfadenomegalia, alopecia, dermatite esfoliativa, ?lceras cut?neas, onicogrifose e emacia??o. As principais altera??es cl?nico-laboratoriais estabelecidas, principalmente no grupo polissintom?tico, foram anemia, hiperproteinemia, hipoalbuminemia, hiperglobulinemia, altera??es no ?ndice albumina/globulina e aumento da atividade da ALT. Altera??es renais n?o foram verificadas (ur?ia e creatinina normais). Trombocitopenia foi observada no tr?s grupos cl?nicos, contudo, os outros indicadores da fun??o de coagula??o (TAP e TTPA) n?o apresentaram varia??es anormais. Foi observado Infiltrado inflamat?rio e amastigotas de leishmania na pele de c?es polissintom?ticos, por?m n?o na pele de animais assintom?ticos. Hipertrofia e hiperplasia do sistema fagocit?rio mononuclear, macr?fagos parasitados por amastigotas de leishmania, hematopoiese extramedular e altera??es degenerativas foram detectadas no ba?o e f?gado dos 8 animais submetidos a exame histopatol?gicos. De acordo com esses resultados, foi demonstrada que as altera??es esperadas nos par?metros hematol?gicos e bioqu?micos em fun??o da natureza viscerotr?pica da LVC s?o observadas principalmente em est?gios mais avan?ados da doen?a. A aus?ncia de infiltrado inflamat?rio e carga parasit?ria na pele sugerem que animais infectados sem sintomatologia talvez tenham import?ncia irrelevante na infectividade para o vetor