A cinomose canina, causada pelo vírus Canine Distemper (CDV), é uma doença de grande importância não só no Brasil como no mundo. Isto se deve principalmente à sua vasta ocorrência, facilitada pelo tipo de transmissão que pode ser por contato com secreções respiratórias, oculares, por fezes e urina. Detectar rapidamente o vírus em animais contaminados é de extrema importância para que o controle aconteça de forma rápida e adequada, evitando o agravamento da doença, a disseminação e o aumento da mortalidade. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver uma plataforma diagnóstica imunocromatográfica que possibilite a detecção rápida de biomoléculas relacionadas com esta doença. Os testes imunocromatográficos são por natureza plataformas de baixo custo e que fornecem resultados rápidos sem a necessidade de equipamentos para a interpretação. Essas plataformas são compostas por regiões diferentes de papéis ou membranas, constituídos de fibra de vidro (sample pad e conjugate pad), material celulósico (sample pad e absorbent pad) e nitrocelulose (região de detecção). Nesse trabalho, com o intuído de diminuir ainda mais o custo da plataforma, foi avaliada a possibilidade de substituição das diferentes regiões somente pelo do papel de filtro Whatman nº 1. Para isso, foi necessário a otimização de diversos reagentes e tratamentos que fossem capazes de modificar a estrutura do papel, deixando-o mais reativo frente às proteínas imobilizadas na região de detecção, como o periodato de sódio, divinilsulfona e tampão carbonato; e menos reativos, quando utilizado em outras regiões. Antes de iniciar os ensaios com o papel, os anticorpos foram avaliados por immunoblotting para verificar o funcionamento dos mesmos, em relação à sensibilidade e especificidade. Após a avaliação, os anticorpos foram imobilizados com sucesso no papel de filtro através do uso de tampão carbonado como reagente sensibilizador da celulose, levando à construção das regiões teste e controle. No conjugate pad o tratamento mais eficiente foi com a utilização de 5% de sacarose, 1% de BSA e 0,5% de Tween-20 em PBS, que garantiu a liberação satisfatória dos conjugados para a região de detecção. / Canine distemper, caused by the Canine Distemper virus (CDV), is a disease of great importance not only in Brazil, but also in the world. This is due mainly to its vast occurrence, facilitated by the transmission pathways, which may occur through contact with respiratory and/or ocular secretions, feces and urine. Rapid detection of the virus in contaminated animals is extremely important so that control takes place quickly and properly, avoiding disease worsening, its dissemination and mortality increase. The present work aimed in developing an immunochromatographic diagnostic platform that allows rapid detection of biomolecules related to this disease. Immunochromatographic tests are naturally low-cost platforms that provide fast results without need for equipment for interpretation. These platforms are composed by different regions of paper or glass fiber membranes (sample pad and conjugate pad), cellulosic material (sample pad and absorbent pad), and nitrocellulose (detection region). In this work, with the intention of further platform\'s cost reduction, the possibility of replacing the different regions was evaluated by using only the Whatman nº 1 filter paper. For this, it was necessary to optimize several reagents and treatments that were capable of modifying the paper structure, making it more reactive to the proteins immobilized in the detection region, such as sodium periodate, divinylsulfone, and carbonate buffer; and less reactive paper when used in other regions. Before initiating the paper assays, the antibodies were evaluated by immunoblotting for verifying their function, regarding sensitivity and specificity. With the results obtained within this test, new strategies had and have been drawn and will be followed in future experiments. After the evaluation, the antibodies were successfully immobilized on the filter paper with the use of carbonate buffer as the cellulose sensitizer reagent, leading to the construction of the test and control regions. In the conjugate pad the most efficient treatment was the use of 5% sucrose, 1% BSA and 0.5% Tween-20 in PBS, which ensured the satisfactory release of the conjugates to the detection region.

A cinomose canina, causada pelo vírus Canine Distemper (CDV), é uma doença de grande importância não só no Brasil como no mundo. Isto se deve principalmente à sua vasta ocorrência, facilitada pelo tipo de transmissão que pode ser por contato com secreções respiratórias, oculares, por fezes e urina. Detectar rapidamente o vírus em animais contaminados é de extrema importância para que o controle aconteça de forma rápida e adequada, evitando o agravamento da doença, a disseminação e o aumento da mortalidade. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver uma plataforma diagnóstica imunocromatográfica que possibilite a detecção rápida de biomoléculas relacionadas com esta doença. Os testes imunocromatográficos são por natureza plataformas de baixo custo e que fornecem resultados rápidos sem a necessidade de equipamentos para a interpretação. Essas plataformas são compostas por regiões diferentes de papéis ou membranas, constituídos de fibra de vidro (sample pad e conjugate pad), material celulósico (sample pad e absorbent pad) e nitrocelulose (região de detecção). Nesse trabalho, com o intuído de diminuir ainda mais o custo da plataforma, foi avaliada a possibilidade de substituição das diferentes regiões somente pelo do papel de filtro Whatman nº 1. Para isso, foi necessário a otimização de diversos reagentes e tratamentos que fossem capazes de modificar a estrutura do papel, deixando-o mais reativo frente às proteínas imobilizadas na região de detecção, como o periodato de sódio, divinilsulfona e tampão carbonato; e menos reativos, quando utilizado em outras regiões. Antes de iniciar os ensaios com o papel, os anticorpos foram avaliados por immunoblotting para verificar o funcionamento dos mesmos, em relação à sensibilidade e especificidade. Após a avaliação, os anticorpos foram imobilizados com sucesso no papel de filtro através do uso de tampão carbonado como reagente sensibilizador da celulose, levando à construção das regiões teste e controle. No conjugate pad o tratamento mais eficiente foi com a utilização de 5% de sacarose, 1% de BSA e 0,5% de Tween-20 em PBS, que garantiu a liberação satisfatória dos conjugados para a região de detecção. / Canine distemper, caused by the Canine Distemper virus (CDV), is a disease of great importance not only in Brazil, but also in the world. This is due mainly to its vast occurrence, facilitated by the transmission pathways, which may occur through contact with respiratory and/or ocular secretions, feces and urine. Rapid detection of the virus in contaminated animals is extremely important so that control takes place quickly and properly, avoiding disease worsening, its dissemination and mortality increase. The present work aimed in developing an immunochromatographic diagnostic platform that allows rapid detection of biomolecules related to this disease. Immunochromatographic tests are naturally low-cost platforms that provide fast results without need for equipment for interpretation. These platforms are composed by different regions of paper or glass fiber membranes (sample pad and conjugate pad), cellulosic material (sample pad and absorbent pad), and nitrocellulose (detection region). In this work, with the intention of further platform\'s cost reduction, the possibility of replacing the different regions was evaluated by using only the Whatman nº 1 filter paper. For this, it was necessary to optimize several reagents and treatments that were capable of modifying the paper structure, making it more reactive to the proteins immobilized in the detection region, such as sodium periodate, divinylsulfone, and carbonate buffer; and less reactive paper when used in other regions. Before initiating the paper assays, the antibodies were evaluated by immunoblotting for verifying their function, regarding sensitivity and specificity. With the results obtained within this test, new strategies had and have been drawn and will be followed in future experiments. After the evaluation, the antibodies were successfully immobilized on the filter paper with the use of carbonate buffer as the cellulose sensitizer reagent, leading to the construction of the test and control regions. In the conjugate pad the most efficient treatment was the use of 5% sucrose, 1% BSA and 0.5% Tween-20 in PBS, which ensured the satisfactory release of the conjugates to the detection region.

Diversos trabajos sobre la leishmaniosis canina han demostrado que el perfil clínico de esta infección es variable, yendo desde formas asintomáticas hasta patologías graves polisintomáticas y desde una evolución con cura espontánea a una resolución fatal, en función de la respuesta inmune que desarrolle el animal a lo largo de la infección.Se ha observado que existe un gran número de perros seropositivos asintomáticos, algunos de los cuales se encuentran en la fase prepatente de la infección, otros en la regresiva y un tercer grupo de animales que presentan formas crípticas, sin manifestar síntomas durante varios años y con una respuesta de anticuerpos baja situada alrededor del umbral de positividad. Ésta es una zona considerada gris en la que coinciden las reacciones cruzadas y las inespecificidades de la técnica. En estos casos, las técnicas serológicas convencionales no distinguen si se trata de animales infectados o no, ni diferencian las fases de la enfermedad en la que se encuentran. Con el objetivo de determinar la utilidad de diferentes técnicas parasitológicas, inmunológicas y moleculares para detectar estas leishmaniosis caninas crípticas se han aplicado varias pruebas diagnósticas a un grupo de perros de zonas endémicas para esta zoonosis. Se ha observado que las técnicas inmunológicas convencionales no discriminan claramente entre animales infectados y no infectados, sino que son los métodos parasitológicos y la PCR los que ofrecen resultados más fiables.También se ha determinado la expresión de IgG, IgG1, IgG2 e IgE específicas anti-Leishmania durante distintas fases de la infección para determinar su relación con la evolución de la infección, la respuesta al tratamiento y su valor pronóstico, viendo que las IgG1 y las IgE son marcadoras de leishmaniosis canina activa y que el nivel de IgG2 está directamente relacionado con la presencia de desórdenes patofisiológicos en los animales.Se ha analizado la expresión idiotípica de IgG1 e IgG2, frente a las diferentes fracciones del antígeno de Leishmania con el objetivo de usarlas como marcadoras de estadio y de evolución en la leishmaniosis canina. Se ha observado que las fracciones polipeptídicas de bajo peso molecular 14, 16 y 18 kDa para IgG1 y 14 y 16 kDa para IgG2 se expresan precozmente en perros infectados por L. infantum, lo que permite detectar diagnósticos falsos negativos mediante pruebas parasitológicas y moleculares en las fases tempranas de la infección, fundamentalmente por parte de las IgG1.Se ha determinado el significado clínico y diagnóstico de la excreción mediante la orina de anticuerpos frente a Leishmania por parte de perros infectados y se ha observado que la presencia de anticuerpos en la orina es debida mayoritariamente a un fallo del filtrado glomerular y, en menor medida, a una producción local de anticuerpos.A pesar de que el perro es el principal reservorio peridoméstico en la zona mediterránea, estudios de epidemiología molecular indican que existe una variabilidad genética de cepas de Leishmania superior a la que se encuentra al analizar las cepas presentes en el perro, por lo que se sospecha que otras especies animales pueden actuar como reservorio. Por ello, se planteó un estudio seroepidemiológico de la leishmaniosis felina para determinar la extensión de esta infección en nuestro entorno. La alta seropositividad encontrada, junto con el patrón de fracciones proteicas revelado por el western blot indican que el gato actúa como verdadero reservorio de la leishmaniosis y no como un hospedador accidental, tal como se venía considerando hasta ahora. / Studies about canine leishmaniosis show that clinic profile of this disease is variable, going from asymptomatic forms to sever pathology, and from spontaneously cure to fatal resolution. Seroepidemiological studies have revealed a large number of asymptomatic seropositive animals. Follow-up of these animals shows that some of them are in the prepatent infection period, others have regressive forms of the disease and others maintain low levels of antibodies without developing the disease for years. The low humoral immunoresponse characteristic of asymptomatic animals frequently places their antibody levels at the borderline of detectability where serological techniques don't discriminate between infected and noninfected animals. To determine the utility of different parasitology, immunology and molecular techniques to detect canine leishmaniosis, we applied various diagnostic methods for dogs from endemic areas and observed that antibody detection are not suitable tools to discriminate infected and noninfected animals, and parasitological methods and PCR offer more accurate results.The study of the level of specific IgG, IgG1, IgG2, and IgE in different phases of infection reveled that IgG1 and IgE are considered markers of the active disease and IgG2 expression is related to pathophysiological disorders.The idiotype expression of IgG1 and IgG2 was analyzed to detect markers related to infection, and to early phases of disease. The early Leishmania infantum infection is characterized by the recognition of polypeptide fractions of low molecular weight, mainly fractions of 14, 16 and 18 kDa by IgG1 and 14 and 16 kDa by IgG2.We have investigate the presence of anti-Leishmania antibodies in the urine of dogs with leishmaniosis and have determined that the presence of these antibodies is mainly caused by the passage into the urinary tract of blood-derived immunoglobulins and, to a lesser extent, by the local production.Dog is the main peridomestic reservoir for leishmaniosis caused by L. infantum, but some studies of molecular epidemiology show a great genetic variability. The study of feline leishmaniosis in Northwestern Mediterranean shows that specific antibodies are prevalent in cats from these ecoregions. So, it could be hypothesized that cats are a secondary reservoir host rather than simply incidental one.

Tesis para optar al grado de Magíster en Administración / Judith Fraguela [Parte I], Vanessa Londoño Alzate [Parte II] / Este plan de negocios, presenta una opción para satisfacer la necesidad de los clientes dueños de mascotas (perros) de poder ser atendidos en la comodidad de su hogar, procurando antetodo un servicio de calidad, con la seguridad, profesionalismo y amabilidad que merecen los animales, que sabemos ocupan un lugar muy importante en las vidas de las personas. En Panamá, la sensibilidad con respecto a los derechos de los animales, se hace sentir cada vez más y lo vemos reflejado en las actuaciones de los amantes de los animales, quienes, están cada vez más atentos y exigentes en cuanto a la atención que se les da en las veterinarias, y pet shops, y no es de extrañar que se apoyen muchísimo en las redes sociales, para comentar y denunciar los casos de maltrato o mala atención. Por otro lado, tener mascotas es una gran responsabilidad, la vida en Panamá es cada vez más agitada, y hay poco tiempo libre para poder hacer todas las diligencias de trasladarse de un lugar al otro en medio del tranque de la ciudad, inlcuso fines de semana. Para satisfacer esta necesidad desarrollamos el proyecto Health & Spa Mobile Dog: Un vehículo acondicionado en un centro de peluquería canina con el objetivo de brindar un servicio exclusivo y personalizado a domicilio de baño y corte de pelo, servicio de vacunación, desparasitación, venta de alimentos y accesorios todo esto en el lugar de residencia de la mascota. Para el proyecto se requiere una inversión inicial de US$84,474 dólares. Inversión que será recuperada al tercer año. Los flujos de caja proyectados a un horizonte de 10 años demuestran un VAN positivo de US$209,411 dólares y una TIR de 47%. Se espera un margen de rentabilidad de 1% para el primer año de operación el cual irá aumentando hasta alcanzar un 23% para el año 10. / Health & Spa Mobil Dog es un vehículo acondicionado en un centro de peluquería canina en el área metropolitana de la Ciudad de Panamá que brinda a domicilio el servicio de baño y corte de pelo, vacunación, desparasitación, venta de alimentos y accesorios en el lugar de residencia de la mascota. Health & Spa Mobil Dog estará compuesto por un equipo altamente capacitado en el cuidado y bienestar de perros, cada vehículo contará con un estilista canino y un auxiliar de veterinaria. La ventaja competitiva frente a la competencia se centra en un servicio exclusivo y personalizado, sin tiempos de espera, cero desplazamientos, participación del cliente durante del servicio y personal altamente calificado. Los clientes potenciales serán todas las personas que tienen un perro como mascota y lo consideran como un miembro más de la familia, les gusta consentirlo pero no cuentan con el tiempo suficiente para trasladarlo a un centro de peluquería y además quieren evitar el tiempo perdido en el tranque y el estrés que pasan las mascotas mientras son acicaladas. Para la puesta en marcha de este proyecto se requiere una inversión inicial de US$84,474 dólares y se espera sea recuperado para el cuarto año de operación. En el mes 6 se llegará al umbral de rentabilidad, con un total de 1,546 servicios y una facturación de 16,570.00 dólares mensuales. Como se puede apreciar en la información detallada del Plan de Negocios, es un proyecto rentable. Los flujos de caja proyectados a un horizonte de 10 años demuestran un VAN positivo de US$209,411 dólares y una TIR de 47%. Se espera un margen de rentabilidad de 1% para el primer año de operación el cual irá aumentando hasta alcanzar un 23% para el año 10.

Submitted by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2017-03-14T03:02:45Z No. of bitstreams: 1 DISS ANA YDELPLYNYA AMARO. MP 2016.pdf: 2640649 bytes, checksum: e248d3eb476f64e65c374fd0d1d14559 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2017-03-14T03:05:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS ANA YDELPLYNYA AMARO. MP 2016.pdf: 2640649 bytes, checksum: e248d3eb476f64e65c374fd0d1d14559 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T03:05:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS ANA YDELPLYNYA AMARO. MP 2016.pdf: 2640649 bytes, checksum: e248d3eb476f64e65c374fd0d1d14559 (MD5) / A leishmaniose Visceral (LV) é um sério problema de saúde pública, por apresentar ampla dispersão geográfica, com aumento na casuística, incidência e casos de co-infecção com HIV. Além disso, figura entre as doenças negligenciadas, porque atingem cerca de 80% da população de baixa renda e não constituem prioridade nos investimentos em pesquisas para tratamento e controle. O estudo objetivou avaliar a situação epidemiológica da LV humana (LVH) na zona urbana do município de Araguaína/ Tocantins entre os anos de 2007 a 2014 e verificar a associação entre a incidência humana e a prevalência de infecção canina pela Leishmania infantum. Trata-se de estudo ecológico de agregado espacial e temporal, sendo os bairros urbanos as unidades de análise espacial, e o ano calendário a unidade de análise temporal. Dados de LVH registrados na área urbana e de infecção canina (IC) foram fornecidos pela Secretaria Municipal de Saúde de Araguaína, de 2007 a 2014, e informações sóciodemográficas do município fornecidas pelo IBGE. Foram confirmados 1.278 casos de LVH, sendo os ano(s) de maior pico 2007 com 258 casos e 2008 com 287. A maioria dos acometidos foram crianças 33,9% (423/1.278), sobretudo na faixa-etária de 5 a 9 e indivíduos do sexo masculino. A incidência variou de 34,2 em 2008 a 23,2 em 2014 por 100.000 habitantes com tendência de redução de p=0,017, sendo o maior risco de adoecer entre indivíduos menores de 15 anos, especialmente os de 05 a 09 anos. Quanto a infecção canina, 19.716 animais foram diagnosticados como soropositivos durante os inquéritos sorológicos realizados e observou-se a ocorrência do maior número de cães infectados em 2009 com 2.644, e da prevalência de infecção canina de 54,5 % em 2011, com tendência de redução de p=0,232. Constata-se que a enfermidade encontra-se difundida em toda a área urbana de Araguaína, principalmente nas áreas de periferia e de ocupação recente e desordenada, composta por aglomerado de pessoas de baixo poder econômico, com presença de bolsões de pobreza e com infraestrutura pública deficiente ou ausente Associando este quadro a criação de animais domésticos e a invasão do habitat natural do vetor, tornando o indivíduo e estas áreas mais susceptíveis para a cadeia de transmissão. Apesar da tendência de diminuição dos casos de LVH e da prevalência de infecção canina, que podem ser resultado da intensificação das ações da vigilância, entretanto permanece o constante processo de expansão da cidade, a rápida substituição do cão infectado, alguns hábitos culturais, a vulnerabilidade de alguns indivíduos que colaboram para a manutenção do ciclo de transmissão da doença no homem e no cão.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Saúde Pública / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:26:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 221411.pdf: 1526459 bytes, checksum: 2fdfe73f3121833e2faa9cee767d9bb3 (MD5) / Dirofilariose é uma zoonose reconhecida pela OMS desde 1945. É uma parasitose de cães causada pelo helminto Dirofilaria immits (Leidy, 1856) e transmitida por mosquitos. O homem é um hospedeiro errático e as filárias localizam-se principalmente no pulmão, onde formam um nódulo que pode ser diagnosticado como câncer. Florianópolis possui características geográficas de endemicidade da doença: litoral, encostas de morros arborizadas, abundância de cursos de água, rios e lagoas, terrenos de areia. Possui também as espécies de mosquitos mais envolvidas na transmissão das microfilárias que são Ochlerotatus scapularis (Rondani, 1848), Ae. taeniorhynchus Wiedemann, 1821 e Culex quinquefasciatus Say, 1823. Foi coletado sangue de 138 animais domiciliados amostrados em método aleatório, e realizado teste de Knott modificado. Em 35 amostras aleatórias foi realizado teste de PCR. Nenhum animal apresentou positividade para D. immitis. 41,66% dos proprietários

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-28T11:31:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 787388 bytes, checksum: e4427091e3439191bcebe29096b6b773 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-28T11:31:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 787388 bytes, checksum: e4427091e3439191bcebe29096b6b773 (MD5) Previous issue date: 2001-12-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses representam, na atualidade, uma das mais importantes zoonoses do mundo. O estudo epidemiológico destas doenças torna-se importante, pois nosso país apresenta quadros graves de epidemias e endemias. Adicionalmente, em algumas áreas, estas doenças apresentam caráter emergente. O presente trabalho pretendeu avaliar a existência de condições propícias para a manutenção e transmissão da leishmaniose tegumentar na área urbana do município de Viçosa-MG, assim como, realizar a identificação e a descrição do perfil de ocorrência da doença no município. Foi realizada análise de banco de dados, constituído a partir do inquérito sorológico canino e da aplicação de questionário individualizado, contendo informações demográficas e sobre hábitos do animal, permitindo assim, caracterizar a distribuição da infecção canina no município. Foi encontrada taxa de prevalência da infecção canina de 9,9%, a qual variou segundo os distritos e bairros analisados. Não foram encontradas associações entre infecção canina e as variáveis sexo, idade, raça e tipo de pelagem do animal. Entretanto, cães com o hábito de “irem à rua sozinho” apresentaram maior chance de infecção, o que pode significar fator de risco para dispersão da doença pelo município e regiões circunvizinhas. Foi encontrado um alto percentual de cães assintomáticos reforçando a importância de animais aparentemente sadios, porém infectados, que servem como fonte de infecção para vetores e destes para o ser humano. Adicionalmente, foram analisadas as fichas de notificação de leishmaniose tegumentar humana existentes na Secretaria Municipal de Saúde de Viçosa, tendo sido observada a existência de casos autóctones humanos nas áreas urbana e rural. Estes achados associados à descrição prévia dos vetores Lutzomia whitmani e L. intermedia corroboram a hipótese de transmissão da leishmaniose tegumentar humana e canina no município de Viçosa. O fato de terem sido identificados casos autóctones humanos e caninos na área urbana sugere a existência de um processo de urbanização da leishmaniose tegumentar nesta área. Os dados obtidos denotam a importância desta zoonose no município de Viçosa, indicando que medidas de prevenção e controle da infecção canina devem ser implementadas, para que os níveis de prevalência humana e animal não aumentem. / Leishmaniasis represents, in the present time, one of the most important zoonose of the world. The epidemiological study of these illnesses becomes important because Brazil presents serious pictures of epidemics and endemic diseases. Additionally, in some areas, these illnesses present emergent character. The present work intended to evaluate the existence of propitious conditions for the maintenance and transmission of cutaneous leishmaniose in the urban area of Viçosa city, Minas Gerais state, as well as, to carry through the identification and the description of the ilness occurrence profile in the city. A data base was constituted from a canine serological inquiry and the application of a questionnaire contend demographic information and on habits of the animal. The prevalence of the canine infection was 9.9%. Associations between canine infection and the variables sex, age, race and type of coat of the animal had not been found. However, dogs with the habit “go to street alone” had presented greater infection probability, what it can mean a risk factor for ilness dispersion in the city and surrounding regions. A high percentage of dogs without signs of the disease was found, strengthening the importance of aparently healthy animals that can be source of infection for vectors and from these to human being. Additionally, the cases of human cutaneous leishmaniasis notificated to the Municipal Secretariat of Health of Viçosa had been analyzed, having been observed the existence of human autochthonous cases in the urban and rural areas. These findings, associates to the previous description of the vectors Lutzomia intermedia and L. whitmani, corroborate the hypothesis of human and canine cutaneous leishmaniasis transmission in Viçosa city. The human and canine autochthonous cases, in the urban area, suggest a urbanization process of the disease in this area. These datas denote the importance of this zoonose in the Viçosa city and actions to prevent and control the disease must be implemented, so that the human and animal prevalence levels do not magnify.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-09-29T20:14:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) tem grande impacto na saúde pública e cães são considerados os principais reservatórios domésticos do parasito. Estudos longitudinais em área endêmica tem demonstrado que a história natural da LV canina (LVC), pode manifestar-se num amplo espectro clínico, desde infecção assintomática até a forma sintomática. Nos últimos anos tem sido observado que cães assintomáticos e soronegativos podem apresentar-se PCR positivo e, estes animais são classificados como CA-I. Interessantemente estes cães apresentam um perfil de resposta imune diferenciado em comparação aos assintomáticos soropositivos (CA-II). Neste contexto, a busca de biomarcadores de progressão clínica é essencial para uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos associados a um perfil de resistência e/ou suscetibilidade na LVC. Neste trabalho, 159 cães de área endêmica, naturalmente infectados por L. infantum, foram distribuídos em quatro grupos de acordo com a forma clínica e os resultados do diagnóstico sorológico e molecular: (i) cães assintomáticos soronegativos/PCR+ para L. infantum (CA-I); (ii) cães assintomáticos soropositivos (CA-II); (iii) cães sintomáticos soropositivos (CS) e (iv) grupo controle (CN) cães sem sinais clínicos com resultados sorológicos e moleculares negativos. Além dos parâmetros hematológicos, uma análise detalhada da resposta celular, através da citometria de fluxo, no contexto ex vivo, foi realizada. Linfócitos T (CD5+, CD4+ e CD8+), células B (CD21+) e monócitos (CD14+) circulantes foram os fenótipos celulares investigados. Adicionalmente, foram realizados estudos in vitro empregando-se biomarcadores de resistência e suscetibilidade para a LVC, relacionados à produção intracitoplasmática de IFN- e IL-4+ por neutrófilos, eosinófilos e linfócitos T (CD4+ e CD8+). Nossos resultados confirmam que a progressão da doença induz anemia, caracterizada pela redução de hemácias, hemoglobina e hematócrito. Já na série branca, foi observado aumento na população de neutrófilos bastonetes e redução de eosinófilos, monócitos e linfócitos. A investigação da resposta imune, baseada no perfil imunofenotípico de células mononucleares do sangue periférico (CMSP), mostrou uma redução no número absoluto de linfócitos T CD5+, e suas subpopulações (CD4+ e CD8+), bem como uma queda no número dos linfócitos B CD21+ e monócitos CD14+ nos animais soropositivos (CA-II e CS). Neutrófilos quando estimulados com antígeno solúvel de L. infantum (ASLi), aumentaram a síntese de IFN-γ+ nos grupos CA-II e CS e diminuíram a produção de IL-4+ no grupo CA-I. Já nos grupos CA-II e CS, as subpopulações de linfócitos T (CD4+ e CD8+), tanto na cultura controle quanto na estimulada com ASLi, também apresentaram uma maior síntese de IFN-γ+ e IL-4+. Estes resultados sugerem que os animais dos grupos CA-II e CS apresentam um perfil imunológico misto (Tipo 1 e 2). Por outro lado, os animais do grupo CA-I não diferem dos animais do grupo CN conferindo a este grupo um perfil de resistência, uma vez que não ocorre queda em nenhuma das populações avaliadas, bem como não há ativação do Tipo 2 com produção de IL-4+. Já os animais do grupo CA-II e principalmente do grupo CS apresentam uma imunossupressão, que acomete tanto o compartimento T como B, além de queda de monócitos circulantes, concomitante a presença de IFN-γ+ e IL-4+ produzidas por neutrófilos e linfócitos T tornando-os incapazes de controlar a replicação parasitária. ____________________________________________________________________ / ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) has great impact on public health and dogs are considered the main domestic reservoir of the parasite. Longitudinal studies in endemic areas have shown that the natural history of canine VL (CVL) can manifest itself in a wide clinical spectrum, from asymptomatic to symptomatic form. In recent years it has been observed that asymptomatic and seronegative dogs can present positive PCR, and these animals are classified as AD-I. Interestingly these dogs have a profile of differential immune response compared to asymptomatic seropositive dogs (AD-II). In this context the search for biomarkers of clinical progression is essential for better understanding of the immunological mechanisms associated with a profile of resistance and/or susceptibility in CVL. In this study, 159 animals from an endemic area naturally infected by L. infantum, were divided into four groups according to their clinical forms and the results of serological and molecular diagnosis: (i) asymptomatic dogs seronegative/PCR+ for L. infantum (AD-I), (ii) asymptomatic dogs seropositive (AD-II), (iii) symptomatic dogs seropositive (SD) and (iv) control group (CD) dogs without clinical results with serologic and molecular negative. In addition to the haematological parameters, a detailed analysis of the cellular response by flow cytometry, ex vivo context was performed. T cells (CD5+, CD4+ and CD8+), B cells (CD21+) and monocytes (CD14+) circulating cell phenotypes were investigated. Additionally, in vitro studies were conducted employing biomarkers of resistance and susceptibility to CVL, intracytoplasmic related to production of IFN-γ and IL-4 by neutrophils, eosinophils and T lymphocytes (CD4+ and CD8+). Our results confirm that the progression of the disease induces anemia, characterized by the reduction of red blood cells, hemoglobin and hematocrit. In the white blood cells, we observed an increase in the population of rod neutrophils and reduction of eosinophils, monocytes and lymphocytes. The investigation of immune response, based on the immunophenotypic profile of mononuclear cells from peripheral blood (PBMC) showed a reduction in the absolute number of T lymphocytes CD5+, and their subsets (CD4+ and CD8+) and one drop of B lymphocytes CD21+ and CD14+ monocytes in positive animals (AD-II and SD). Neutrophils when stimulated with soluble antigen of L. infantum (SLA), increased synthesis of IFN-γ in AD-II and SD groups, and presents a decreased production of IL-4 in the AD-I group. In the AD-II and SD groups, subpopulations of T lymphocytes (CD4+ and CD8+) in control and culture stimulated in the with SLA also exhibited greater synthesis of IFN-γ+ and IL-4+. These results suggest that the animals of AD-II and SD groups exhibit a mixed immune profile (Type 1 and 2). In contrast, animals of AD-I group do not differ from the animals of CN group conferring this group a resistance profile, since no resistance fall occurs in any of the populations, and there is no activation of the Type 2 producing IL-4+ cells. The animals of AD-II and SD group mainly exhibit a immunosuppression, which affects both the compartment T and B, besides the decrease of circulating monocytes with the concomitant presence of IFN-γ+ and IL-4+ produced by neutrophils and lymphocytes T making them unable to control parasite replication.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-10T15:51:27Z No. of bitstreams: 1 2017_GiseleLorrannaSilvaSantos.pdf: 4328936 bytes, checksum: 89b09ef90bf026a6818550242065f97b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-29T20:25:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_GiseleLorrannaSilvaSantos.pdf: 4328936 bytes, checksum: 89b09ef90bf026a6818550242065f97b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-29T20:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_GiseleLorrannaSilvaSantos.pdf: 4328936 bytes, checksum: 89b09ef90bf026a6818550242065f97b (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / A leishmaniose visceral é uma doença negligenciada, endêmica na Ásia, África, Américas e na região do Mediterrâneo. Cerca de 1,5 a 2 milhões de novos casos ocorrem a cada ano no mundo, sendo que aproximadamente 350 milhões estão sob risco de adquirir a doença e esta é responsável por 70 mil mortes anuais. A evolução clínica depende principalmente da resposta imune do hospedeiro. O cão é considerado o principal reservatório urbano do agente Leismania infantum que é transmitido pelo flebotomíneo Lutzomya longipalpis. Várias proteínas de secreção clássica e de superficie da Leishmania foram testadas como potenciais antígenos. Por outro lado, algumas proteínas intracelulares são capazes de modular a resposta imune do hospedeiro por serem mais imunogênicas e terem sofrido menos pressão seletiva evolutivamente. Durante a infecção, estas moléculas são liberadas após a destruição de amastigotas intracelulares por macrófagos ativados, mas, também podem ser excretadas por caminhos de secreção não-clássicos. Vários antígenos intracelulares, tais como proteínas de choque térmico,as proteínas ribossômicas e as histonas foram investigadas como possíveis vacinas contra diferentes espécies de Leishmania e como marcadores diagnósticos. As proteínas Rab1-GTPase e ADF/Cofilina foram surpreendentemente classificadas como potenciais fatores de virulência e moduladores da resposta imunológica, assim como as proteínas intracelulares mencionadas anteriormente. Desta forma, estudos adicionais que venham permitir melhorias nos metodos diagnósticos e que poderão favorecer a prevenção e o controle desta doença, representam uma perspectiva de melhoria da qualidade de vida da população, principalmente em áreas endêmicas. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o potencial imunogênico das proteínas Rab1-GTPase e ADF/Cofilina, expressar e purificar as duas proteinas recombinantes e submetê-las a uma avaliação diagnóstica sorológica pelo metódo ELISA. A proteína Rab1-GTPase apresentou mais sitios possíves para epitopos de células B em relação a ADF/Cofilina. No entanto, a ADF/Cofilina possui poucas regiões conservadas, quando avaliadas pelo alinhamento múltiplo. O teste ELISA permitiu testá-las quanto à capacidade de serem reconhecidas por soro de cães infectados com LVC. Todavia, faz-se necessário aumentar o número de amostras e realizar novos testes que possibilitem determinar a sua sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e a acurácia como alvos diagnósticos da LVC em testes sorológicos. / Visceral leishmaniasis is a neglected disease, endemic in Asia, Africa, the Americas and the Mediterranean region. Approximately 1.5 to 2 million new cases occur every year around the world, with approximately 350 million being at risk of acquiring the disease and accounting for 70,000 annual deaths. The clinical course depends mainly on the immune response of the host. The dog is considered the main urban reservoir of the agent Leismania infantum which is transmitted by the sandfly Lutzomya longipalpis. Several classical and surface secretory proteins of Leishmania were tested as potential antigens. On the other hand, some intracellular proteins are able to modulate the immune response of the host because they are more immunogenic and have suffered less selective pressure evolutionarily. During infection, these molecules are released after the destruction of intracellular amastigotes by activated macrophages, but they may also be excreted by non-classical secretory pathways. Several intracellular antigens, such as heat shock proteins, ribosomal proteins and histones were investigated as possible vaccines against different Leishmania species and as diagnostic markers. Rab1GTPase and ADF/Cofilin proteins were surprisingly classified as potential virulence factors and modulators of the immune response, as well as the intracellular proteins mentioned above. In this way, additional studies that allow improvements in the diagnostic methods and that may favor the prevention and control of this disease represent a perspective of improving the quality of life of the population, especially in endemic areas. Thus, the objective of this study was to evaluate the immunogenic potential of the Rab1-GTPase and ADF/Cofilin proteins, to express and purify the two recombinant proteins and to submit them to a serological diagnostic evaluation by the ELISA method. The Rab1-GTPase protein showed more possible sites for B cell epitopes compared to ADF/Cofilin. However, ADF/Cofilin has few conserved regions when evaluated by multiple alignment. The ELISA test allowed them to be tested for serum recognition of LVC-infected dogs. However, it is necessary to increase the number of samples and perform new tests to determine their sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy as LVC diagnostic targets in serological tests

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-05-31T20:46:06Z No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-06-01T20:53:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T20:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Introdu??o: Os c?es s?o considerados os principais reservat?rios dom?sticos de Leishmania infantum no Brasil e apresentam um amplo espectro de manifesta??es cl?nicas, variando de perda de peso, anemia grave, hepatoesplenomegalia e les?es d?rmicas disseminadas. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de express?o g?nica em c?lulas do ba?o e do sangue perif?rico de c?es naturalmente infectados por L. infantum e investigar as altera??es histopatol?gicas no ba?o, f?gado, intestino e pele, visando identificar poss?veis vias imunorreguladoras envolvidas na patog?nese da LVC. Metodologia: Vinte e um c?es oriundos do Centro de Controle de Zoonoses de Natal-RN foram estudados e um subgrupo destes animais (n=8) foi utilizado para estudos de express?o g?nica global. A carga de Leishmania nos diversos tecidos, foi estimada por qPCR e cultura para Leishmania foi realizada. O RNA total do ba?o e do sangue perif?rico foi extra?do e as bibliotecas de cDNA foram obtidas e sequenciadas em plataforma Illumina. As sequ?ncias obtidas foram filtradas e alinhadas contra o genoma de Canis familiaris pelo software Bowtie. A express?o g?nica diferencial foi analisada usando o protocolo do Cufflinks, a anota??o funcional e as caracter?sticas moleculares dos genes foram obtidas no banco de dados Gene Ontology e KEGG atrav?s do pacote STRINGdb. Fragmentos de f?gado, duodeno, pele e ba?o foram coletados, processados e corados com hematoxilina/eosina e imunofluoresc?ncia para an?lises histopatol?gicas. Resultados: As cargas parasit?rias estimadas para ba?o e f?gado apresentam correla??o, por?m n?o h? correla??o entre a carga parasit?ria destes tecidos com aquela presente no sangue. Aproximadamente 756 genes se mostraram super expressos no ba?o de animais sintom?ticos, como CTLA4, CCL2 e IL27; al?m destes, cerca de 1.190 genes apresentaram express?o reprimida neste mesmo grupo, como BMP6, C1QB e C1QC. As vias de ativa??o de c?lulas NK, receptores dos tipos Toll-like e NOD-like expressas no ba?o de animais sintom?ticos estavam com express?o elevada, enquanto as vias de s?ntese de ?ncoras de GPI e ativa??o do imunoproteossoma estavam reprimidas. A progress?o da LVC resulta em desorganiza??o da citoarquitetura do ba?o, com perda parcial da delimita??o entre polpa branca e vermelha. ? observado infiltrado inflamat?rio no f?gado, duodeno e pele. Validando o achado do transcriptoma, foi observada por imunofluoresc?ncia a presen?a de CTLA4, CCR7 e NLRP3 no ba?o de animais sintom?ticos. Conclus?es: A desregula??o de mecanismos tipicamente associados ? imunidade inata pode estar diretamente envolvida na patogenia da LVC. Al?m disso, uma alta efici?ncia no processamento e apresenta??o de ant?genos parecem ser respons?veis, pela resist?ncia ao desenvolvimento dos sinais cl?nicos e integridade tissular durante a infec??o por L. infantum em c?es. / Background: Dog is the main domestic reservoir of Leishmania infantum in Brazil. Those animals present a wide spectrum of clinical manifestations, varying from weight loss, anemia to hepatosplenomegaly and skin lesions. The goal of this study was to evaluate the gene expression profile in the spleen and peripheral blood cells from naturally Leishmania-infected dogs and to study the histology of the spleen, liver, gut and skin, in order to determine possible molecular pathways and histopathological process underlying the mechanisms related to disease progression and resistance. Methodology: 21 dogs was studied and a sub group (n=8) was selected for transcriptomic studies. In addition, spleen, liver, gut and blood parasitism were estimated by qPCR and parasite was isolated from the spleen by culture. Total RNA was extracted and cDNA libraries were constructed and sequenced in an Illumina platform. The reads obtained were filtered and aligned against Canis familiaris genome using Bowtie. Differential gene expression was analyzed using the Cufflinks workflow, functional annotation and molecular features for each gene was obtained from Gene Ontology and KEGG database using STRINGdb. A fragment of liver, gut, skin and another spleen fragment were collected, processed and stained by HE and immunofluorescence for histopathological analysis. Results: Parasite load estimated in the spleen and liver were strongly associated, however no correlation was observed between them and circulating parasite estimation. Approximately, 756 genes were upregulated in the spleens of symptomatic dogs, as CTLA4, CCL2 and IL27, furthermore, about 1,190 genes were downregulated in the same group of animals, as BMP6, C1QB and C1QC. We found that NK cells activation, toll-like and NOD-like receptors pathways are highly expressed in the spleen of symptomatic dogs, while GPI-anchors synthesis and immunoproteasome activation related genes are downregulated in these animals. Additionally, we observed that in symptomatic animals, the cytoarchitecture of spleen is altered, with partial loss of the delimitation between white and red pulp. Furthermore, an intense inflammatory infiltrate in the liver, gut and skin of these animals. Confirming the RNA-Seq findings, we observed by immunofluorescence CTLA4, CCR7 and NLRP3 are overexpressed the spleen of symptomatic dogs. Conclusions: These findings suggest that misregulation of innate immunity is involved in CVL and an efficient antigen presentation maybe decisive for resistance to clinical signs development and tissue integrity during L. infantum infection in dogs.