Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Co-orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Rafael Silva Cipriano / Banca: Vera Lúcia Lorenzetti Magalhaes Curci / Banca: Carlos Noriyki Kaneto / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo:A infecção pelo herpesvírus Bovino tipo 5 (BoHV-5) resulta em meningoencefalite não supurativa que é responsável por perdas econômicas significativas na América do Sul. Células tronco mesenquimais (CTM) são encontradas em diferentes tecidos fetais, como no cordão umbilical que possuí diversos fatores favoráveis para obtenção destas células. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar o isolamento e a viabilidade das CTM bovinas e sua capacidade de diferenciação em outros tecidos de origem mesenquimal, como as "neuron-like cells" - células semelhantes a neurônios - (CSN), e avaliar a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção experimental com BoHV-5. As CTM foram isoladas da geleia de Wharton e diferenciadas em tecido adiposo, cartilagem, ósseo e CSN. As linhagens celulares foram caracterizadas pela expressão genica e imunofenotipicamente, utilizando a técnica de PCR, imunocitoquímica e citometria de fluxo, respectivamente. O conjunto de primers e painel de anticorpos primários, empregados na experimentação, permitiu caracterizar as células tronco e sua diferenciação em células neuronais. Após a adaptação e diferenciação, ambas as células foram infectadas pelo BoHV-5, exibindo efeito citopático e taxa de replicação viral aumentada 72 h pós infecção. A técnica de hibridização in situ identificou as partículas virais no interior das CSN e no meio extracelular. Os resultados demonstram a capacidade de diferenciação das CTM em outros tipos celulares e a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção in vitro de células neuronais pelo BoHV-5. Estes resultados corroboram o uso de MSC como fonte de NLC para uso no estudo da patogênese da infecção experimental pelo BoHV-5 / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) infection results in non- suppurative meningoencephalitis which underlies significant economic losses in South America. Mesenchymal stem cells (MSCs) are found in fetal tissues, such as the umbilical cord. The goal of this research was to characterize the isolation and viability of bovine umbilical cord MSCs for in vitro differentiation into "neuron-like cells" (NLC) to be used as a model for experimental infection with BoHV-5. MSCs were isolated from Wharton's jelly and differentiated in vitro into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic cells as well as NLC. The cells lines were characterized molecularly and immunophenotypically, using PCR, immunocytochemistry, and flow cytometry. The set of primers and panel of primary antibody used in the experiments confirmed the isolation of mesenchymal stem cells and their differentiation into neuronal-like cells. After adaptation and differentiation, the cells were infected with BoHV-5, exhibiting typical cytopathic effect and increased viral replication rate 72 h post-infection. Viral particles were identified in the NLC and in the extracellular environment. by in situ hybridization These results corroborate the use of MSCs as a source of NLC which can be used to study the pathogenesis of the experimental in vitro infection wtih BoHV-5 / Doutor

Made available in DSpace on 2017-03-14T14:10:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-11. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-14T14:42:48Z : No. of bitstreams: 1 000874656.pdf: 3822657 bytes, checksum: 2b9fdefdb2600b9a80b8499695bfbd0d (MD5) / Estudos têm sido conduzidos com o intuito de prevenir a formação do biofilme em biomateriais ou buscar terapias alternativas para o tratamento de doenças decorrentes da instalação do biofilme. Como terapia alternativa, este estudo avaliou (1) a citotoxicidade da terapia fotodinâmica (PDT), através da utilização de queratinócitos humanos co-cultivados com Candida albicans. Em relação à prevenção da formação do biofilme, (2) foi avaliada a citotoxicidade de nanopartículas (NP) de tungstato de prata (Ag2WO4) e de molibdato de prata (Ag2MoO4), em solução e como revestimento de biomateriais. No estudo 1, a co-cultura foi realizada utilizando uma membrana Transwell, em que células e micro-organismos cresceram separadamente durante 24h, e ficaram em contato por mais 24h. Após este período, a PDT foi realizada utilizando-se a curcumina como fotossensibilizador. As seguintes condições foram testadas: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. Além disso, como controle negativo, três membranas de cada placa foram destinadas apenas ao crescimento de microorganismos e outros três poços para o crescimento de células separadamente, com seus respectivos meios. A proliferação celular, foi avaliada através dos testes Alamar Blue, MTT, XTT e UFC. Para o estudo 2, as NP foram sintetizadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura e Difração de Raios X. A partir da confecção das NP, foram feitas as soluções e o revestimento de titânio (Ti), zircônia (Zi), resina acrílica (RA) e silicone (Si). Para a realização do teste de citotoxicidade, 100 µL da suspensão composta por 1,5 x 104 células/ml (HaCat) foram colocados em cada compartimento de uma placa com 96 orifícios, incubada em estufa com 5% de CO2, a 37ºC por 24 horas. Após tal período de incubação, o meio de cultura foi desprezado, permanecendo as células aderidas no fundo da placa...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Studies have been conducted in order to prevent biofilm formation on biomaterials or seek alternative therapies for the treatment of diseases caused by biofilm installation. As an alternative therapy, this study evaluated (1) the cytotoxicity of photodynamic therapy (PDT) by the use of co-cultured human keratinocytes with Candida albicans (Ca). In relation to prevention of biofilm formation, (2) the cytotoxicity was evaluated nanoparticles (NP) silver tungstate (Ag2WO4) and silver molybdate (Ag2MoO4), in solution and as a biomaterial coating. In study 1, the co-culture was performed using a Transwell membrane, and cells in which micro-organisms grown separately for 24 h, and were in contact for a further 24h.After this period, PDT was performed using curcumin as a photosensitizer. The following conditions were tested: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. In addition, as a negative control, three membranes of each plate were assigned only to the growth of microorganisms and another three wells for cell growth separately with respective means. Cell proliferation was evaluated by testing the Alamar Blue, MTT, XTT, and CFU. For the study 2, the NP were synthesized and characterized by scanning electronic microscopy and X-ray diffraction. Since the making of the NP, they were made solutions and the titanium coating (Ti), zirconium (Zi), acrylic resin (RA) and silicon (Si). To perform the cytotoxicity assay, 100 µL of suspension composed of 1.5 x 104 cells / mL (HaCaT) were placed in each compartment of a plate with 96 wells, incubated in an incubator with 5% CO2 at 37 ° C for 24 hours. After this incubation period, the culture medium was discarded, remaining adhered cells at the bottom of the wells. 100 µL of culture medium containing the nanoparticles in solution and the extracts were placed on each plate hole. The plate was incubated for another 24 hours. Cell proliferation was assessed using the Alamar ... (Complete abstract electronic access below)

Orientador: Maria Aparecida Neves Jardini / Banca: Carlos Alberto Alves Cairo / Banca: Caio Gorgulho Zanet / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Fernando Vagner Raldi / Resumo: Alterações nas propriedades físicas e químicas na superfície do titânio (Ti) buscam acelerar e melhorar a osseointegração. Além disso, a criação de substratos porosos, além de beneficiar fenômenos celulares, propiciaria uma maior resistência mecânica na interface osseointegrada devido ao crescimento de tecido ósseo para o interior dos poros. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da porosidade de amostras de Ti na osteogênese in vitro em amostras de titânio. Foram confeccionadas por metalurgia do pó, discos de titânio puro grau 2 com 12 mm de diâmetro e 3 mm de altura, que foram divididos em três grupos: a) G1: controle - titânio denso; b) G2: 30% de porosidade e poros com 300 μm; c) G3: 40% de porosidade e poros com 300 μm. Inicialmente, a superfície de 03 espécimes de cada grupo foi caracterizada por meio de analise metalográfica, visando confirmar a quantidade, área, morfologia e interligação dos poros. Para a realização da pesquisa, células osteogênicas obtidas da calvária de ratos recém-nascidos foram cultivadas sobre as amostras de cada grupo e avaliadas quanto à adesão celular, após 24 horas, proliferação e viabilidade celular, após 7, 10 e 14 dias. A diferenciação celular foi avaliada através da mensuração do conteúdo de proteína total, atividade da fosfatase alcalina e formação de matriz nodular mineralizada nos períodos de 7, 10 e 14 dias. Os resultados obtidos com os testes ANOVA e Tukey (5%) indicaram que houve adesão celular em todas as superfícies e que esta não interferiu nos resultados. As superfícies porosas (G2 e G3) favoreceram a proliferação celular quando comparadas as superfícies densas. O conteúdo de proteína total e a formação de matriz mineralizada foram significantemente maiores nas amostras de G3. Entretanto, não houve diferença estatística nos valores da atividade da fosfatase alcalina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Changes in physical and chemical properties on the surface of titanium seek to accelerate and improve osseointegration. Furthermore, the creation of porous substrates, provide greater strength in the osseointegrated interface due to the bone ingrowth. The aim of this study was to evaluate the influence of porosity on osteogenesis in vitro in samples of titanium. Were made by the powder metallurgy, discs of pure titanium grade 2 with 12 mm diameter and 3 mm in height, which were divided into three groups: a) G1: control - titanium machined b) G2: 30% porosity and pore with 300 μm c) G3: 40% of porosity and pore size of 300 μm. Initially, the area of 03 specimens of each group was characterized by metallography analysis, to confirm the quantity, area, shape and interconnection of pores. To conduct the study, osteogenic cells derived from calvaria of newborn rats were cultured on the samples of each group and evaluated for adhesion, after 24 hours, proliferation and cell viability after 3, 7 and 10 days. The cell differentiation was assessed by measuring the total protein content, alkaline phosphatase activity and bone-like nodule formation at 7, 10 and 14 days. The results obtained with ANOVA and Tukey tests (5%) indicated that there was cell adhesion on all surfaces and it does not interfere in the results. The porous surfaces (G2 and G3) provide better results in cell proliferation when compared to smooth surfaces. The content of total protein and the formation of bonelike nodules were significantly higher in samples from G3. However, there was no statistical difference in the values of alkaline phosphatase activity between the experimental groups. These results suggest a correlation between the surface topography of the samples and the phenomena of adherence, proliferation and cell differentiation. / Doutor

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca: Roberto Gameiro de Carvalho / Banca: Camila da Silva Frade / Resumo: Pertencente a família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, o Herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), é o agente causal da meningoencefalite bovina não supurativa, que atinge majoritariamente bovinos jovens. No Brasil, os casos de encefalite por BoHV-5 são a segunda maior causa de óbitos no rebanho. A infecção viral geralmente resulta em alteração no processo de morte celular programada, pela via mitocondrial, estimulando ou inibindo genes relacionados à apoptose, favorecendo a replicação e disseminação viral. O presente estudo teve como objetivo a análise da expressão de genes relacionados à apoptose (Apaf-1, α, FasL e citocromo c) em células MDBK infectadas ou não com o BoHV-5. Foi possível observar um aumento (p<0,05) na expressão dos genes estudados para o grupo infectado comparado ao controle, em diferentes momentos pós-infecção experimental. No caso da família Herpesviridae, a modulação da apoptose parecer ser uma etapa chave para sua patogênese, apesar da associação das atividades anti e pró-apoptóticas com o BoHV-5 ser completamente desconhecida. Este estudo demonstra a capacidade do BoHV-5 em modular, seja ativando ou inibindo, a via extrínseca da apoptose / Abstract: Belonging to the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, bovine Herpesvirus type 5 ( BoHV-5) is the causative agent of bovine non-suppurative meningoencephalitis, which predominantly affects young cattle. In Brazil, cases of encephalitis caused by BoHV-5 are the second leading cause of deaths in the herd. Viral infection usually results in a change in the programmed cell death via mitochondrial, stimulating or inhibiting apoptosis related genes, promoting viral replication and dissemination process. The present study aimed to analyze the expression of apoptosis related genes (Apaf-1, TNFα-R1, FasL and cytochrome c) in infected or uninfected MDBK cells with BoHV-5. We observed an increase ( p < 0.05 ) in expression of the genes studied for the infected group compared with controls, in different times post-infection experimental. In the case of the Herpesviridae family, modulation of apoptosis appears to be a key step in its pathogenesis, despite the association of anti and pro-apoptotic activities with BoHV-5 is completely unknown. This study demonstrates the ability of BoHV-5 in modulating either activating or inhibiting the extrinsic pathway of apoptosis / Mestre

Orientador: Márcia Carneiro Valera / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Resumo: A proposta deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio liberado por agentes clareadores, utilizados para clareamento de dentes tratados endodonticamente, sobre cultura de fibroblastos provenientes do tecido gengival humano (FMM1). As células foram cultivadas em DMEM e quando apresentaram-se em quantidade suficiente e entre a quinta e décima passagens foram plaqueadas em placas de 96 poços onde receberam os meios de cultura condicionados de acordo com os grupos experimentais (n=12): G1- Perborato de Sódio + água; G2- Perborato de sódio + Peróxido de Carbamida 20%; G3- Peróxido de Carbamida 20%; G4- Perborato de Sódio + Peróxido de Hidrogênio 35%; G5- Peróxido de Hidrogênio 35%. O grupo controle (n=12) correspondeu à curva de crescimento e viabilidade celular, onde as células não receberam tratamento. O ensaio com MTT foi realizado nos períodos de 24 e 48 horas para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, mediu-se em espectrofotômetro a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado nas condições experimentais. Os dados foram analisados através dos testes de ANOVA e Tukey. Todos os grupos experimentais apresentaram diferença significativa em relação ao controle. O tempo de avaliação mostrou diferença estatística, exceto para o G1 (PS + H2O). Concluiu-se que: todos os agentes clareadores testados foram citotóxicos, diminuindo significantemente o metabolismo e viabilidade celular; a associação do perborato de sódio com água destilada foi o agente clareador mais tóxico e o peróxido de carbamida 20% o menos tóxico. / Abstract: The propose of this study was to evaluate the cytotoxicity from five bleaching agents, used for the technique of intracanal bleaching, on human gingival fibroblasts (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and when they were presented in enough amount and between the fifth and tenth passages they were placed in plates of 96 wells; where they received the conditional culture according to the experimental groups (n=12): G1- SP + H2O; G2- SP + CP20%; G3- CP20%; G4- SP + HP35%; G5- HP35%. The control group (n=12) corresponded to the curve of cell growth and viability, where the cells didn't receive any treatment. The MTT assay was carried through in the periods of 24 and 48 hours to evaluate the cellular viability. The amount of set free hydrogen peroxide in the experimental conditions was also measured in a spectrophotometer. The data were submitted to statistical analysis of variance and Turkey's test. All the experimental groups presented significant difference in comparison to the control. The evaluation time showed statistical difference, except for the G1 (SP + H2O). Conclusion: all the bleaching agents had showed cytotoxicity effects, reducing significantly the cell metabolism and viability; the association of sodium perborate with distilled water was the most toxic bleaching agent and carbamide peroxide 20% the least. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-09. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:51Z : No. of bitstreams: 1 000850064.pdf: 4306282 bytes, checksum: 43716ecb90f85e6190ef2c7b4fcce07b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A neoplasia mamária canina representa uma das maiores casuísticas na oncologia veterinária e o emprego de seus respectivos cultivos celulares são importantes, principalmente, na área terapêutica. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar e estabelecer cultivos celulares de tumores mamários caninos para testes in vitro com doxorrubicina e, correlacionar imunomarcações com vimentina, citoqueratina, p53 e HER-2 no tumor original e nas células do seu cultivo. Tumor misto benigno e os carcinomas complexo, simples e espinocelular foram cultivados a partir de explantes com posterior exposição das células à doxorrubicina (controle-0,25-0,50-0,75-1,0-2,0μM). A viabilidade celular foi mensurada pelo azul de Tripan e os testes com imunomarcadores para cada espécie tumoral foram por imuno-histoquímica e, no cultivo, pela imunofluorescência. Do total de 39 amostras, 40% foram cultivadas até a quinta ou mais passagens. As imunomarcações não foram expressas de forma similar entre as técnicas, com diferença significativa na frequência de vimentina, p53 e HER-2, de forma aumentada nos cultivos. A doxorrubicina apresentou alta eficácia nas células tumorais, mas sem diferença entre os tipos histológicos, porém cada cultivo comportou-se distintamente quando analisado em isolado. Conclui-se que é possível cultivar primariamente diferentes tumores mamários caninos utilizando-se meio de cultivo básico; os testes de expressão gênicas são mais indicados para análises comparativas entre tumor e seu respectivo cultivo e, quanto maior a concentração do quimioterápico, menor a viabilidade celular / Canine mammary tumors represent a high casuistry in veterinary oncology and few studies with cell culture are being employed, mainly with drug application. The purpose was to establish and standardize the cell culture of canine mammary tumors for in vitro efficacy of doxorubicin and to correlate the immunostaining of vimentin, cytokeratin, p53 and HER-2, in paraffin sections of original tumor and the cell cultures derivated. Benign mixed tumor, complex carcinoma, simple carcinoma and espinocelular carcinoma were cultivated from explants and the cells originated were incubated with doxorubicin in different concentrations (control-0.25-0.50-0.75-1.0-2.0μM). The percentual of viable cells were determined by the Trypan blue dye exclusion test and for immunoexpression, the immunohistochemistry was performed for the primary tumor and immunofluorescence, for the cells. A total of 39 tumor samples were collected and, 40% were cultivated up to fifth passages. A different imunnoexpression was observed between methodologies with higher expression at vimentin, p53 and HER-2 groups. It was observed that doxorubicin presented an elevated efficacy in canine mammary cell culture but without difference among the histological groups and each sample presented an individual responsiveness for the same treatment. So, it can be concluded that it was possible to realize a primary cell culture with a simple culture medium formulation; gene expression profiles in tumor tissue and cell culture derived from those tumors are better designated than immunoexpression tests and higher the concentration of doxorubicin, lower the cell viability

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:27Z : No. of bitstreams: 1 000850082.pdf: 818616 bytes, checksum: 3fd2568d0eccab7527d2da8ab5c61b6f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Em medicina veterinária, os tumores mamários de cadelas possuem alta casuística e o seu prognóstico, em muitos casos, já desfavorável. Dessa forma, é imperioso desenvolver formas eficientes para estudar o comportamento dessa neoplasia, utilizando cultivos celulares para aplicação de testes quimioterápicos associados à expressão de indutores da apoptose. Assim o objetivo desse estudo foi realizar o cultivo, em 3D, de tumores mamários, mimetizando o ambiente tumoral in vivo, em substituição aos testes experimentais com animais e cobaias de laboratório. Adicionalmente, pretendeuse analisar a expressão das proteínas caspase 2, 3, 8, 9, Bcl-2 e Bax em células após o tratamento com carboplatina (dose 1,25μM), e a p53 em cultivo monocamada em células de baixa e alta passagem (20 até 58, respectivamente). O cultivo em 3D demonstrou ser uma boa ferramenta para o estudo in vitro. Os esferoides formados diminuíram de tamanho após tratamento com carboplatina. A expressão de Bcl-2, em duas amostras, indicou resistência à carboplatina em dois tipos histológicos (carcinoma solido e carcinoma espinocelular). As caspases 2 e 3 não foram expressas em amostras tratadas, indicando que a carboplatina não causa morte celular pela apoptose. A p53 foi marcada no núcleo e no citoplasma, indicando anormalidade nessa proteína, que pode estar associada à progressão maligna em neoplasias. Todos os ensaios desenvolvidos no cultivo 3D mostraram que é possível, com essa técnica, aprofundar os estudos sobre as neoplasias mamárias em cães, podendo contribuir para novas descobertas referente ao prognóstico e novos tratamentos / In Veterinary Medicine canine mammary tumors have high casuistry and in many cases bad prognosis the prognosis is bad. Thus it is imperative to develop efficient ways to study the behavior of this tumor using tissue culture tests for applying chemotherapeutic associated with expression inducers of apoptosis. The aim of this study was to grow cells of breast tumors in 3D culture where can mimic the environment in vivo. Additionally, analyze the expression of the caspase protein 2, 3, 8, 9, Bcl-2 and Bax and cells after treatment with carboplatin (dose 1.25 mM). Thus, analyse of p53 cells in monolayer culture in high-pass (up to 58 passages) and low-pass (up to 20 passages). The spheroids formed decreased in size after treatment with carboplatin. The expression of Bcl- 2 in both samples showed resistance to carboplatin in two histological types (solid carcinoma and squamous cell carcinoma). The caspase 2 and 3 not expressed in treated samples indicating that carboplatin does not cause cell death by apoptosis. P53 showed cytoplasmic and in the nucleus, indicating that abnormal protein may be associated with malignant progression in cancer. All assays developed in 3D culture showed that it is possible with this technique, further studies on mammary tumors in dogs that can contribute on new discoveries regarding the prognosis and treatments / FAPESP: 2011/613-7

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:33:16Z : No. of bitstreams: 1 cardin_lt_me_sjrp_parcial.pdf: 176602 bytes, checksum: ff28363703d8dd3bbc92fef1981922c5 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-01T12:51:15Z: cardin_lt_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-01T12:51:49Z : No. of bitstreams: 1 000714251.pdf: 1224592 bytes, checksum: b3e0c7d1422ace17fba65af406dd3879 (MD5) / INTRODUÇÃO: A inflamação é caracterizada pelo acúmulo de leucócitos nos tecidos oculares, podendo afetar qualquer parte do olho, sendo um processo doloroso, associado à fotofobia e podendo resultar em complicações secundárias. Em geral, no tratamento dessas inflamações intra-oculares, os glicocorticóides são os medicamentos freqüentemente administrados. Porém, devido aos efeitos adversos, existe uma demanda óbvia para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Entre elas, a proteína anexina A1 (ANXA1) tem mostrado a sua participação ativa nos processos inflamatórios. OBJETIVO: Em função desses dados, foi realizado o presente trabalho que teve como objetivo geral avaliar a influência desse tratamento anti-inflamatório nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19), sobre a morfologia, proliferação, migração e na expressão gênica e proteica. MATERIAL E MÉTODOS: As células ARPE-19 foram cultivadas em meio completo e estimuladas pelo Lipopolissacarideo bacteriano (LPS), e em outro experimento foi acrescentado o tratamento com o peptídeo ANXA1 Ac2-26 , para avaliar o possível efeito anti-inflamatório dessa proteína, nos tempos de 1, 2, 4, 24, 48 e 72 horas sobre a morfologia, proliferação e migração celular. Após análises estatísticas, que evidenciaram o tempo de 72 horas, foi realizado um novo cultivo celular para a extração do RNA e conduzida a técnica de Hibridização Subtrativa Rápida (RaSH). A validação de cinco genes encontrados como diferencialmente expressos foi realizada por RT-qPCR. Além dessas técnicas, também foi analisada a expressão das citocinas anti e pró-inflamatórias pelo ensaio Multiplex. RESULTADOS: O ANXA1Ac2-26 não modificou a morfologia das células ARPE-19, entretanto diminui a proliferação e aumenta a migração celular. Pela tecnologia de... / INTRODUCTION: The inflammation is characterized by the accumulation of leukocytes in ocular tissues, and it can affect any part of the eye, been a painful process, associated with photophobia and may result in secondary complications. In general, for the treatment of these intraocular inflammations, the glucocorticoids are the drugs frequently administered. However, due to its side effects, there is an obvious demand for developing new therapeutic strategies. Among them, the protein annexin A1 (ANXA1) has shown its active participation in inflammatory processes. AIM: In the present study we investigated the influence of anti-inflammatory treatment in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19), on the morphology, proliferation, migration and gene and protein expression. MATERIALS AND METHODS: The ARPE-19 cells were cultured in complete medium and stimulated by bacterial lipopolysaccharide (LPS), and in another experiment was added treatment with ANXA1Ac2-26 peptide, to evaluate the possible anti- inflammatory effects of this protein, in 1, 2, 4, 24, 48 and 72 hours on the morphology, cell proliferation and migration. After statistical analyzes, which demonstrated that the time 72 hours is the best, was performed a new culture bottles for RNA extraction technique and conducted the Rapid Subtractive Hybridization (RaSH). The validation of five genes founded differentially expressed was done by RT-qPCR. In addition to these techniques was also analyzed the expression of anti and pro-inflammatory cytokines by Multiplex assay. RESULTS: The ANXA1Ac2-26 did not alter the morphology of the ARPE- 19 cells, however decreased proliferation and increased cell migration. After statistical analysis, it was evident that the time of 72 hours was the best to proceed with the methodology. By RaSH technology... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:22:21Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_pe_dr_sjc.pdf: 421203 bytes, checksum: 78d99972a840d87b24c7feb43f8fd9db (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A proposta deste estudo foi avaliar a citotoxicidade dos peróxidos de hidrogênio (PH) e carbamida (PC), para uso caseiro e profissional, sobre cultura de fibroblastos de mucosa de tecido gengival humano (FMM1). As células utilizadas foram cultivadas em DMEM e após 24 horas foi colocado meio de cultivo condicionado com os agentes clareadores: G1- PC 35% sem fotoativação (SF); G2- PC 35% ativado por luz halógena; G3- PC 35% ativado por diodo emissor de luz (LED); G4- PC 37% SF; G5- PC 37% ativado por luz halógena; G6- PC 37% ativado por LED; G7- PH 3% SF; G8- PH 7,5% SF; G9- PH 9,5% SF; G10- PC 10% SF; G11- PC 15% SF e G12- PC 20% SF. Uma curva padrão de viabilidade celular foi obtida a partir de células que não receberam tratamento (controle). O ensaio com MTT foi realizado após 24 e 48 horas, para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, foi medido colorimetricamente a quantidade de PH liberado nas condições experimentais. Os dados da viabilidade celular obtidos foram analisados estatisticamente através dos testes ANOVA e Tukey, (p<0,05). Todos os grupos apresentaram diferença significativa em relação ao controle. Dentre os agentes clareadores para uso profissional o PC 37% apresentou maior citotoxicidade e quantidade de peróxido de hidrogênio liberada que o PC 35%. A ativação por luz halógena ocasinou maior citotoxicidade e maior quantidade de PH liberado. Dentre os agentes clareadores para uso caseiro a base de peróxido de hidrogênio houve uma maior taxa de sobrevivência celular na concentração mais baixa de peróxido de hidrogênio (PH 3%); nos clareadores a base de peróxido de carbamida houve uma maior taxa de sobrevivência celular na concentração mais baixa de peróxido de carbamida (PC 10%). A taxa de sobrevivência celular foi significantemente menor após 48 horas. Concluiu-se que a citotoxicidade foi proporcional à concentração... / The purpose of this study was to evaluate the citotoxicity of hydrogen peroxide (HP) and carbamide peroxide (CP) on fibroblasts from mucosa of human gingival tissue (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and was placed in contact with conditioned medium with bleaching agents: G1- 35% CP without curing, G2-35% CP activated by halogen light; G3- 35% CP activated by light emission diode (LED); G4- 37% CP without curing; G5- 37% CP activated by halogen lamp; G6- 37% CP activated by LED; G7- 3% HP without curing; G8- 7.5% HP without curing; G9 - 9.5% HP without curing; G10- 10% CP without curing, G11-15% CP without curing, and G12- 20% CP without curing. A standard curve of cell growth and viability was obtained from cells that received no treatment (control). The MTT test was performed after 24 and 48 hours to assess the viability and cell growth. In parallel, was measured the amount of PH released under the experimental conditions. The data of cell viability were statistically analyzed by ANOVA and Tukey’s tests (p <0.05). All groups showed significant differences in relation to the control group. Among the bleaching agents for office application, the 37% CP showed higher cytotoxicity and the 35% CP released the higher quantity of hydrogen peroxide. The activation by halogen light promoted the higher cytotoxicity and higher HP released. Among the home bleaching agents based on hydrogen peroxide there was a higher rate of cell survival in low concentration of hydrogen peroxide (3% HP); the bleaching based on carbamide peroxide had a higher cell survival rate in low concentration of carbamide peroxide (CP 10%). The cell viability was significantly lower after 48 hours. It was concluded that the cytotoxicity was related to the concentration of bleaching agent and the curing with halogen light increased the hydrogen peroxide release.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-27Bitstream added on 2014-06-13T20:05:14Z : No. of bitstreams: 1 nascimento_rd_dr_sjc.pdf: 665145 bytes, checksum: eb26b18d83008dbc3f700ae579c575a4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Alterações nas propriedades físicas e químicas na superfície do titânio (Ti) buscam acelerar e melhorar a osseointegração. Além disso, a criação de substratos porosos, além de beneficiar fenômenos celulares, propiciaria uma maior resistência mecânica na interface osseointegrada devido ao crescimento de tecido ósseo para o interior dos poros. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da porosidade de amostras de Ti na osteogênese in vitro em amostras de titânio. Foram confeccionadas por metalurgia do pó, discos de titânio puro grau 2 com 12 mm de diâmetro e 3 mm de altura, que foram divididos em três grupos: a) G1: controle - titânio denso; b) G2: 30% de porosidade e poros com 300 μm; c) G3: 40% de porosidade e poros com 300 μm. Inicialmente, a superfície de 03 espécimes de cada grupo foi caracterizada por meio de analise metalográfica, visando confirmar a quantidade, área, morfologia e interligação dos poros. Para a realização da pesquisa, células osteogênicas obtidas da calvária de ratos recém-nascidos foram cultivadas sobre as amostras de cada grupo e avaliadas quanto à adesão celular, após 24 horas, proliferação e viabilidade celular, após 7, 10 e 14 dias. A diferenciação celular foi avaliada através da mensuração do conteúdo de proteína total, atividade da fosfatase alcalina e formação de matriz nodular mineralizada nos períodos de 7, 10 e 14 dias. Os resultados obtidos com os testes ANOVA e Tukey (5%) indicaram que houve adesão celular em todas as superfícies e que esta não interferiu nos resultados. As superfícies porosas (G2 e G3) favoreceram a proliferação celular quando comparadas as superfícies densas. O conteúdo de proteína total e a formação de matriz mineralizada foram significantemente maiores nas amostras de G3. Entretanto, não houve diferença estatística nos valores da atividade da fosfatase alcalina... / Changes in physical and chemical properties on the surface of titanium seek to accelerate and improve osseointegration. Furthermore, the creation of porous substrates, provide greater strength in the osseointegrated interface due to the bone ingrowth. The aim of this study was to evaluate the influence of porosity on osteogenesis in vitro in samples of titanium. Were made by the powder metallurgy, discs of pure titanium grade 2 with 12 mm diameter and 3 mm in height, which were divided into three groups: a) G1: control - titanium machined b) G2: 30% porosity and pore with 300 μm c) G3: 40% of porosity and pore size of 300 μm. Initially, the area of 03 specimens of each group was characterized by metallography analysis, to confirm the quantity, area, shape and interconnection of pores. To conduct the study, osteogenic cells derived from calvaria of newborn rats were cultured on the samples of each group and evaluated for adhesion, after 24 hours, proliferation and cell viability after 3, 7 and 10 days. The cell differentiation was assessed by measuring the total protein content, alkaline phosphatase activity and bone-like nodule formation at 7, 10 and 14 days. The results obtained with ANOVA and Tukey tests (5%) indicated that there was cell adhesion on all surfaces and it does not interfere in the results. The porous surfaces (G2 and G3) provide better results in cell proliferation when compared to smooth surfaces. The content of total protein and the formation of bonelike nodules were significantly higher in samples from G3. However, there was no statistical difference in the values of alkaline phosphatase activity between the experimental groups. These results suggest a correlation between the surface topography of the samples and the phenomena of adherence, proliferation and cell differentiation.