Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A pesar de várias décadas de esforços em pesquisa, a etiologia e fisiopatologia da esquizofrenia continuam sendo um desafio e os tratamentos existentes apresentam limitações consideráveis no manejo dos casos de esquizofrenia. Portanto, este estudo teve por objetivo avaliar o efeito da administração da melatonina sobre parâmetros comportamentais e de metabolismo energético no modelo animal de esquizofrenia induzido pela administração de cetamina. Para tal, duas doses de MLT (1mg/kg e 10mg/kg) foram usadas em dois protocolos diferentes, sendo um de prevenção e outro de reversão. Assim, no protocolo de prevenção os animais receberam MLT nas doses de 1mg/kg ou 10mg/kg ou salina por gavagem, uma vez ao dia durante 14 dias, entre os dias 8 e 14 receberam cetamina (25mg/kg) ou salina via intraperitoneal (i.p). Enquanto que no protocolo de reversão, os animais receberam cetamina (25mg/kg) ou salina (i.p), uma vez por dia, durante 14 dias, entre os dias 8 e 14 receberam MLT (1mg/kg ou 10mg/kg), uma vez ao dia. No 14º dia, os animais foram submetidos a avaliação da distância percorrida, estereotipia, tempo de permanência no centro e nas bordas além da avaliação da inibição da IPP. O córtex pré-frontal, hipocampo e estriado foram dissecadas para posteriores análises da atividade dos complexos I, II, II-III e IV da cadeia respiratória mitocondrial e atividade da Creatina Cinase (CK). Esses resultados demonstram que a administração repetida de cetamina, resulta em hiperatividade e comprometimento da IPP. Os resultados revelam que nos dois protocolos avaliados a cetamina induziu o aumento da distância percorrida, movimentos estereotipados e tempo de permanência no centro e nas bordas. A MLT, não teve influência sobre os efeitos da cetamina; no protocolo de prevenção a MLT na dose de 10mg/kg apresentou aumento dos movimentos de estereotipia e induziu os animais à um aumento do tempo de permanência no centro e diminuição do tempo de permanência nas bordas. Em relação a inibição do reflexo de sobressalto, a MLT nas duas doses testadas apresentou um efeito preventivo e de reversão das três intensidades avaliadas. Os resultados deste estudo também mostram que a MLT sozinha ou associada a cetamina induziu a alterações dos complexos da cadeia transportadora de elétrons (CTE). No protocolo de prevenção, o grupo MLT10+cetamina induziu o aumento da atividade do complexo IV no hipocampo; enquanto que no protocolo de reversão a MLT nas duas doses testadas sozinha ou em associação com a cetamina alterou a atividade dos complexos I, II-II e IV do córtex, estriado e hipocampo respetivamente. Com relação a atividade da enzima CK, resultados deste estudo mostram que a cetamina alterou a sua atividade no córtex e hipocampo no protocolo de prevenção, enquanto que a MLT nas duas doses preveniu o efeito deletério da cetamina nestas estruturas cerebrais. Diante destes resultados, assume-se que o modelo de esquizofrenia induzido por cetamina representa uma ferramenta útil para o estudo da esquizofrenia e que a MLT possui algum potencial protetor sobre a IPP no modelo animal de esquizofrenia induzido por cetamina. Portanto mais estudos são necessários para um melhor entendimento desta hipótese.

A pré-medicação apesar de ser freqüentemente utilizada nos mamíferos, é raramente utilizada nas espécies aviárias. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da pré-medicação na indução e anestesia com sevofluorano em papagaios. Foram utilizados trinta e seis animais adultos oriundos do Parque ecológico do Tietê. Os animais foram randomicamente distribuídos em três grupos: grupo I (n = 12), tratado com NaCl 0,9% como placebo, grupo II (n = 12), com cetamina 10 mg.Kg-1 e grupo III (n = 12), com cetamina 10 mg.Kg-1 e diazepam 0,5 mg.Kg-1, por via intramuscular. Quinze minutos após a pré-medicação, a indução foi realizada por meio de máscara facial conectada a um circuito sem reinalação, usando 4,5% de sevofluorano em 100% de oxigênio, com um fluxo de 1,5L. Tanto os efeitos cardiovasculares e respiratórios, bem como, a qualidade da pré-medicação, indução e recuperação da anestesia foram avaliadas. A Dose anestésica mínima obtida neste estudo foi de 2.4 ± 0.37%, 1.7 ± 0.39%, e 1.3 ± 0.32% para os grupos I, II e III respectivamente. Foi concluído que a cetamina isolada ou cetamina/diazepam diminuem consideravelmente a dose anestésica mínima em papagaios. A cetamina isolada ou em associação, promoveu uma boa qualidade de sedação, permitindo uma melhor indução da anestesia quando comparada a indução com o agente inalatório. Tanto a cetamina isolada quanto a associação, mostraram-se seguras, não alterando as funções cardiovasculares, a oxigenação ou ventilação, podendo ser utilizados com sucesso nesta espécie. Além disto, a anestesia com o sevofluorano foi considerada segura para esta espécie em todos os protocolos estudados. / Although pre-medication is commonly used in mammals, it is rarely used in avian species. The aim of this study was to evaluate the effect of pre-medication in the induction and anesthesia with sevoflurane in parrots. Thirty-six adults animals were utilized from Tietê ecologic park. The animals were randomically distributed in three groups: group I (n = 12), was pre-medicated with NaCl0.9% as a placebo, group II (n = 12), with ketamine 10 mg.kg-1 and group III (n = 12), with ketamine 10mg.kg-1 and diazepam 0.5mg.kg-1, intramuscularly. Fifteen minutes after pre-medication, the induction was accomplished with a facial mask connected to a non rebreathing circuit using 4.5% of sevoflurane in 100% oxygen with a flow rate of 1.5L. The cardiovascular and respiratory effects were evaluated as well as the quality of pre-medication, induction and recovery of anesthesia. The minimal anesthetic concentration obtained at this study was 2.4 ± 0.37%, 1.7 ± 0.39%, and 1.3 ± 0.32% for group I, II and III respectively. It was concluded that ketamine alone or ketamine/diazepam consider decreased the DAM of sevofluorano in parrots. ketamine alone or in association, promoted a good quality of sedation allowing better induction of anesthesia when compared with the induction with inhalant agent. Even ketamine alone or the association were considered a safe procedure, not changing cardiovascular, oxygenation and ventilation and could be successfully used in this specie. Furthermore, the anesthesia with sevoflurane was considered safe to this specie in all protocols.

Originalmente da Bahia, a espécie Leontopithecus chrysomelas foi introduzida no estado do Rio de Janeiro provavelmente por meio do tráfico e atualmente é encontrado em uma das áreas remanescentes de ocupação natural do mico-leão-dourado (Leontopithecus rosalia) podendo comprometer a sobrevivência do último. Visando mitigar esse problema foi criado um plano de ação, onde se recomenda a captura dos animais introduzidos. Procedimentos de captura e contenção química produzem estresse e afetam diretamente a homeostase, podendo alterar diretamente a saúde e o bem estar dos animais somando-se o fato de os protocolos de capturas atuais gerarem um período de recuperação prolongado. O objetivo deste trabalho consistiu em determinar e comparar os efeitos cardiorrespiratórios da dexmedetomidina, quando associada à cetamina S(+) ou à cetamina racêmica, e do midazolam associado à cetamina S(+), por via intramuscular, na contenção química de mico-leão-da-cara-dourada. Foram utilizados 45 animais da espécie Leontopithecus chrysomelas, adultos, machos, pesando em média 532 gramas, oriundos do Centro de Primatologia do Rio de Janeiro, em parceria com a ONG PRI-MATAS. Os animais foram distribuídos em três grupos onde receberam aleatoriamente as associações: CSM - cetamina S(+) (15 mg/kg) e midazolam (0,5 mg/kg); CSD - cetamina S(+) (15 mg/kg) e dexmedetomidina (10 µg/kg); e CD - cetamina racêmica (15 mg/kg) e dexmedetomidina (10 µg/kg). Foram avaliados os períodos de latência, hábil e de recuperação. A frequência e ritmo cardíacos, frequência respiratória, saturação da oxihemoglobina periférica, pressão arterial sistólica, temperatura retal, qualidade de indução e de recuperação, sedação, antinocicepção e grau de relaxamento muscular foram monitorados a cada cinco minutos durante 50 minutos. Os dados paramétricos foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey. Os dados não paramétricos foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis seguido do teste de Dunn para identificar quais grupos apresentavam diferença estatística significativa. O grau de significância estabelecido para as análises foi de 5% (p<0,05). Os valores referentes aos parâmetros de frequência respiratória, saturação da oxihemoglobina periférica, temperatura, pressão arterial sistólica, início da perda de tônus muscular, latência e os períodos de recuperação parcial e total não apresentaram diferença entre os grupos. Já os valores de frequência cardíaca, relaxamento muscular, antinocicepção, grau de sedação e consumo de lidocaína apresentaram diferença significativa entre os mesmos momentos dos grupos CSM e CSD, e CSM e CD. Conclui-se que as associações de dexmedetomidina com cetamina racêmica e cetamina S(+) apresentaram os melhores índices de relaxamento muscular, sedação e antinocicepção e mostraram-se seguras para a realização de cirurgia de vasectomia em micos-leão-da-cara-dourada. Apesar dos grupos CSD e CD apresentarem bradicardia mais acentuada, os valores mantiveram-se dentro do limite esperado. / The Golden-headed lion tamarin, originally endemic to the southern Bahia region, was introduced in the state of Rio de Janeiro probably by illegal wildlife trade activity. The species is currently found in one of the remaining areas of natural occupation of the golden lion tamarin (Leontopithecus rosalia), which may compromise the survival of the latter. In order to mitigate this problem, an action plan was elaborated and the capture of golden-headed lion tamarins recommended. Both capture and chemical restraint procedures can cause stress and compromise homeostasis with a direct effect on the health and well-being of the animals. Besides that, current chemical immobilization protocols usually result in prolonged recovery times. This study aims to determine and compare the cardiovascular and respiratory effects of three different protocols for chemical immobilization of golden-headed lion tamarins. Thirty-five adult male specimens of Leontopithecus chrysomelas were studied. Animals were randomly separated into three groups: ketamine S(+) and midazolam (15 mg kg-1 and 0.5 mg kg--1-) (KSM group), ketamine S(+) and dexmedetomidine (15 mg kg--1- and 10 µg kg-1) (KSD group) and racemic ketamine and dexmedetomidine (15 mg kg-1 and 10 µg kg-1 ) (KD group). Periods of latency, immobilization and recovery were evaluated. Heart rate and rhythm, respiratory rate, peripheral oxyhemoglobin saturation, systolic blood pressure, rectal temperature, induction and recovery quality, sedation, antinociception, and degree of muscle relaxation were monitored every five minutes for 50 minutes. Parametric data were analyzed by using repeated measures analysis of variance (ANOVA) followed by a Tukey\'s test. Non-parametric data were analyzed by the Kruskal-Wallis test followed by Dunn\'s test. Values of P< 0.05 were considered statistically significant. No significant differences were found in respiratory rate, peripheral oxygen saturation, temperature, systolic blood pressure, onset of muscle tone loss, latency and partial and total recovery periods. Heart rate, sedation and muscle relaxation degrees, antinociception, and lidocaine consumption presented significant difference at the same moments between KSM and KSD and between KSM and KD. Marked bradycardia was presented on KSD and KD groups, with values remaining within the normal range. This study demonstrated that combinations of dexmedetomidine with racemic ketamine and S(+) ketamine presents the best outcomes for muscle relaxation, sedation and antinociception and were safe for vasectomy surgery in golden-headed lion tamarins.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A esquizofrenia à um transtorno mental crÃnico, grave e incapacitante que afeta cerca de 1% da populaÃÃo mundial, cujos sintomas podem ser induzidos pela Cetamina. Neste sentido, hà evidÃncias de que o estresse oxidativo tenha importante papel na patogÃnese desta doenÃa. Desta forma, o presente estudo avaliou os efeitos neurocomportamentais e neuroquÃmicos, atravÃs da determinaÃÃo de parÃmetros do estresse oxidativo, apÃs administraÃÃo aguda da Clorpromazina (Cp) ou Clozapina (Cz), no modelo de esquizofrenia induzido pela Cetamina (Ket) em camundongos. Este estudo examinou alteraÃÃes neurocomportamentais, apÃs administraÃÃo de Cp (1 ou 5mg/Kg, ip) ou Cz (5 ou 10mg/Kg, ip), sozinhos ou 30 minutos antes da Ket (10mg/kg, i.p) em camundongos, e no estresse oxidativo apÃs administraÃÃo de esquema anterior incluindo Vitamina E (Vit E) (400 mg/kg) sozinha ou 30 minutos antes da Ket. Os resultados mostraram que a Cetamina induziu a hiperlocomoÃÃo e aumentou o nÃmero de rearring e grooming no teste de campo aberto. No teste de suspensÃo de cauda, a Cetamina diminuiu o tempo de imobilidade. Sendo esses efeitos bloqueados pela Cp ou Cz nos testes neurocomportamentais. Em adiÃÃo as mudanÃas comportamentais, a cetamina induziu aumento na peroxidaÃÃo lipÃdica, atividade da catalase e concentraÃÃo de nitrito. A Cp ou Cz reverteram os efeitos da Cetamina sobre estresse oxidativo. Em conclusÃo, os resultados confirmam efeitos semelhantes à Esquizofrenia, atividade antidepressiva e pro-oxidativa pela cetamina e reversÃo destes efeitos pela Cp ou Cz. / Schizophrenia is a serious and debilitating chronic mental disease, affecting about 1% of the world population and whose symptoms can be induced by ketamine. In this sense, evidences show that oxidative stress has an important role in the pathogenesis of this condition. Thus, this study evaluated the neurobehavioral and neurochemical effects, through the dosage of oxidative stress, after acute administration of Chlorpromazine (Cp) or Clozapine (Cz), in a model of schizophrenia induced by ketamine (Ket) in mice. Neurobehavioral changes were examined after administration of Cp (1 or 5 mg/Kg, ip) or Cz (5 or 10 mg/Kg, ip), either alone or 30 minutes before Ket (10mg/kg, ip) in mice, and during oxidative stress after administration of the previous scheme including Vitamin E (Vit E) (400 mg/Kg) alone or 30 minutes before the Ket. Results showed that ketamine induced hyperlocomotion and increased the number of rearring and grooming events in the open field test and decreased the immobility time in the tail suspension test. Interestingly, these effects were blocked by Cp or Cz administration in the neurobehavioral tests. In addition to the behavioral changes, ketamine induced increase in lipid peroxidation, catalase activity and nitrite concentration. Again, either Cp or Cz reversed the effects of ketamine, this time on oxidative stress. In conclusion, these findings demonstrate effects similar to schizophrenia, antidepressant activity and pro-oxidative conditions induced by ketamine and reversal of these effects by Cp or Cz.

O anestésico cetamina, amplamente consumido por jovens frequentadores de clubs e raves, apresenta forte efeito dissociativo, sendo essa uma das razões para sua utilização. Apesar disso, pouco ainda se sabe sobre seus efeitos reforçadores assim como sobre o resultado da interrupção de seu consumo, após ingestão crônica. Ingerido continuamente, apresenta tolerância ao efeito sedativo. Com base em estudos pré-clínicos e clínicos anteriores que descrevem a capacidade da cetamina para induzir o relaxamento e euforia, apesar do seu efeito sedativo bem conhecido, que a hipótese de que a tolerância de cetamina, mesmo em doses mais elevadas, vai emergir, e será notado efeito de reforço da droga. Este estudo procurou determinar se os efeitos sedativos da cetamina podem ser condicionados à sugestão ambiental, como outras drogas de abuso. Avaliamos os efeitos de doses escalonadas de administração crônica de cetamina na reatividade motora e emocional de ratos. E investigamos a existência de tolerância condicionada induzida pelo contexto em ratos previamente tratados. A análise dos efeitos de cetamina sobre o comportamento motor e emocional foi realizada com o uso de um campo aberto (Monitor de atividade eletrônico). Os animais receberam por 14 dias uma única injeção diária de cetamina ou placebo em diferentes doses (10, 20, 40 e 80 mg / kg). Para o protocolo de preferência condicionada ao lugar, os animais foram submetidos a um baseline de três sessões seguidas com livre acesso a uma caixa de dois contextos, e foram condicionados no contexto que apresentou menor tempo de permanência por 4 dias por 1 hora, recebendo uma injeção diária de placebo ou cetamina (10, 20, 40 e 80 mg/kg), o teste foi realizado após o tratamento com ausência de droga para avaliação de reforço/aversão da droga emparelhada as pistas contextuais. Para o protocolo de tolerância condicionada os animais foram submetidos, durante 4 dias, a dose de cetamina ou placebo (10 mg/kg, 1x dia) e posteriormente testados, foram utilizadas duas câmaras visuais e tatilmente diferenciadas, sendo A câmara de condicionamento e B a câmara de teste. A análise sobre as alterações promovidas pela droga na reatividade comportamental dos animais foi realizada com a utilização de um campo aberto (monitor de atividade eletrônico) em diferentes contextos, após a administração de uma overdose (80 m/kg). Portanto os grupos experimentais se dividiram em A x A ou A x B. As alterações induzidas pela administração da dose de 10 mg/kg de cetamina nos sistemas serotoninérgico e dopaminérgico do córtex infra-límbico (IL) e núcleo accumbens shell (NAcSh), regiões encefálicas envolvidas nos aspectos motivacionais do uso e abuso de drogas, foram avaliadas com a utilização das técnicas de microdiálise in vivo e cromatografia de alta pressão. Todos os experimentos foram conduzidos com a anuência do CEUA (FFCLRPUSP, protocolo 16.5.736.59.1). Para análise dos dados foi utilizada a ANOVA de um ou dois fatores seguida, quando necessário, pelo teste de Tukey-HSD, com p estabelecido em <0,05. Os resultados indicam que semelhante a outras drogas de abuso, encontramos tolerância aumentada aos efeitos sedativos para cetamina induzidos por pistas contextuais. Além disso, o uso prolongado de cetamina aumenta o tempo gasto no centro do monitor de forma dependente da dose, uma medida bem conhecida de comportamento de baixa reatividade em roedores. Este aumento parece não ser devido aos efeitos sedativos da cetamina, uma vez que a imobilidade (tempo) diminuiu à medida que as doses aumentam nos grupos pré-tratados com cetamina. Além disso, a velocidade, a distância percorrida e a ambulação não diferem em relação ao grupo de placebo. Os resultados indicam também a existência de tolerância condicionada aos efeitos sedativos da cetamina sem prejuízo da resposta motora, assim como alterações significativas no tônus de dopamina e serotonina que se diferenciam se os animais são testados durante o efeito ou com 24 horas de abstinência. Em conclusão, nosso estudo aponta os efeitos antiaversivos de doses mais elevadas de cetamina. Este efeito parece ser acompanhado de tolerância farmacológica aos efeitos sedativos da cetamina que pode ajudar a explicar o uso de doses mais elevadas deste medicamento para propósitos recreativos em seres humanos. E dessa forma, a cetamina partilha algumas características comuns com outras drogas de abuso, como a instalação de tolerância condicionada ao contexto e alterações neuroquímicas associadas (depressão acentuada nos níveis de DA e 5-HT no NAcSh) durante a exposição a um contexto previamente pareado com os efeitos da droga. / The anesthetic ketamine, widely consumed by young club and rave people in, has a strong dissociative effect, which is one reason for its use. Despite this, little is known about its reinforcing effects as well as the result of discontinuation of its consumption after chronic ingestion. Ingested continuously shows tolerance to the sedative effect. Based on previous preclinical and clinical studies that describe the ability of ketamine to induce relaxation and euphoria, despite its well-known sedative effect, that the hypothesis that ketamine tolerance, even at higher doses, will emerge,and it will be noted strengthening effect of the drug. This study aimed to determine whether the sedative effects of ketamine can be conditioned to environmental cues such as other drugs of abuse. We evaluated the effects of staggered doses of chronic ketamine administration on the motor and emotional reactivity of rats. We also investigated the existence of context-induced conditioned tolerance in previously treated rats. The analysis of the effects of ketamine on motor and emotional behavior was performed with the use of an open field (e-activity monitor). The animals received a single daily injection of ketamine or placebo for 14 days at different doses (10, 20, 40 and 80 mg / kg). For the place-based preference protocol, the animals were submitted to a baseline of three consecutive sessions with free access to a box of two contexts, and were conditioned in the context that presented the shorter residence time for 4 days for 1 hour, receiving a Daily injection of placebo or ketamine (10, 20, 40, and 80 mg / kg), the test was performed after drug-free treatment for drug-boosted / aversion assessment paired with contextual clues. For the conditioned tolerance protocol the animals were submitted to a dose of ketamine or placebo (10 mg / kg, 1x day) for 4 days and then tested. Two visual and tactile differentiated chambers were used, the conditioning chamber and the test chamber. The analysis of the changes promoted by the drug in the behavioral reactivity of the animals was performed using an open field (electronic activity monitor) in different contexts, after the administration of an overdose (80 m / kg). Therefore the experimental groups were divided into A x A or A x B. The changes induced by administration of the 10 mg / kg ketamine dose in the infra-limbic (IL) and nucleus accumbens shell (NAcSh) serotonergic and dopaminergic systems, Encephalic regions involved in the motivational aspects of drug use and abuse were evaluated using in vivo microdialysis and high pressure chromatography techniques. All experiments were conducted with the consent of CEUA (FFCLRP-USP, protocol 16.5.736.59.1). For data analysis, one or two-factor ANOVA was used, followed when necessary by the Tukey-HSD test, with p established at <0.05. The results indicate that similar to other drugs of abuse, we found an increased tolerance to contextual clue-induced sedative effects for ketamine. In addition, prolonged use of ketamine increases the time spent in the center of the monitor in a dose-dependent manner, a well-known measure of low reactivity behavior in rodents. This increase does not appear to be due to the sedative effects of ketamine, since immobility (time) has decreased as doses increase in the ketamine pretreated groups. In addition, the speed, distance traveled and ambulation did not differ in relation to the placebo group. The results also indicate the existence of conditioned tolerance to the sedative effects of ketamine without impairment of the motor response, as well as significant alterations in the dopamine and serotonin tonus that differ if the animals are tested during the effect or with 24 hours of abstinence. In conclusion, our study points to the anti-aversive effects of higher doses of ketamine. This effect appears to be accompanied by pharmacological tolerance to the sedative effects of ketamine which may help explain the use of higher doses of this drug for recreational purposes in humans. In this way, ketamine shares some common characteristics with other drugs of abuse, such as the installation of context-dependent tolerance and associated neurochemical changes (marked depression in AD and 5-HT levels in NAcSh) during exposure to a previously paired context With the effects of the drug.

A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa que afeta grande parte da população e resulta em significativa morbidade e incapacidade. O presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos periféricos da S(+) cetamina na expressão da ciclo-oxigenase 2 (COX-2). Foram utilizados modelos experimentais de osteoartrite em ratos. Inicialmente setenta e dois ratos foram utilizados no estudo. Foram divididos em três grupos de 24 animais cada. Em dois grupos foi induzida a OA através de 2mg de MIA (monoiodo acetato de sódio) por via intra-articular (i.a), em um volume máximo de 50&#956;L e em um dos grupos não foi realizada a indução da OA. No sétimo dia após a indução, dois grupos, incluindo o sem OA, receberam injeção i.a de salina 0,9% em volume máximo de 50&#956;L e o terceiro grupo recebeu injeção de S(+) cetamina na dose de 0,5mg/kg. Nos dias 7, 14, 21 e 28 os animais foram anestesiados e sacrificados para coleta da membrana sinovial e análise imuno-histoquímica da ciclo-oxigenase-2. Durante o estudo ocorreram 29 perdas do material a ser analisado, totalizando um n = 43. O protocolo adotado para a interpretação imuno-histoquímica foi a imunomarcação citoplasmática da COX-2 em células da membrana sinovial, tecido conjuntivo e adiposo, conforme a intensidade da coloração. A análise dos resultados foi realizada através do teste do quiquadrado. A reatividade da COX-2 foi positiva em 53,8% dos animais do grupo sem OA, em 60% do grupo OA com salina e em 80% dos animais do grupo OA com cetamina, sem diferença estatisticamente significante entre os grupos (p = 0,3069). Esse estudo sugeriu que a S(+) cetamina por via intra-articular não inibiu a expressão da COX-2 em modelos de osteoartrite em ratos. / Osteoarthritis (OA) is a degenerative disease that effects a large population and results in significant morbidity and disability. The objective of the present study was to investigate the peripheral effects of S(+) ketamine on the COX-2 expression. Experimental models of OA in rats were used. At first, 72 rats were used in the study. The animals were divided into three groups of 24 each. In two groups, OA was induced through intra-articular (i.a.) injection of 2mg of monoiodine acetate (MIA), at a maximum volume of 50&#956;L, while one of the groups was not submitted to OA induction. On the seventh day following the induction, the animals of two groups, including those form the not-induced group, received an i.a. injection of saline at 0.9% at a maximum volume of 50&#956;L, while the third group received and injection of S(+) ketamine at 0.5mg/kg. On days 7, 14, 21 and 28 the animals were anesthetized and sacrificed, and the synovial membrane was extracted and submitted to immunohistochemistry analysis of the cyclooxygenase-2. Throughout the study, there were 29 losses of materials that were to be analyzed, totaling an n = 43. The protocol used for the immunohistochemical interpretation was cytoplasmic immunostaining of COX-2 in cells of the synovial membrane, conjunctive and adipose tissue, according to the intensity of the stain. Results were analyzed by the chi-square test. COX-2 reactivity was positive in 53.8% of animals in the group without OA, in 60% of those of the OA group with saline, and in 80% of group OA with ketamine, with no statistically significant difference between the groups (p = 0.3069). Thus, the study implies that intra-articular injections of S(+) ketamine did not inhibit the COX-2 expression in osteoarthritis models in rats.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-06Bitstream added on 2014-06-13T19:41:01Z : No. of bitstreams: 1 thiesen_r_dr_jabo.pdf: 1011423 bytes, checksum: 7c2cb13bbaaddd5c383010328e76cdeb (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Com este estudo, objetivou-se avaliar os efeitos da cetamina S(+) sobre parâmetros cardiorrespiratórios, hemogasométricos e índice biespectral (BIS), em cães induzidos à anestesia com sevofluorano por meio de máscara facial, intubados e mantidos anestesiados com o mesmo agente em concentração equivalente à 1 CAM, em circuito com reinalação parcial de gases, FiO2 = 0,6 e fluxo de 250mL + 30mL/kg em ventilação espontânea. Após 30 minutos da estabilização da anestesia e preparação dos animais, foram colhidos os valores basais. Subsequentemente os tratamentos foram realizados, sendo bolus de Ringer com Lactato para o grupo controle (GC) e cetamina S(+) (6mg/kg) para o grupo cetamina S(+) [GS(+)]. As variáveis foram registradas em intervalos de dez minutos após o tratamento durante a primeira hora e de 15 minutos na segunda hora. Os valores com distribuição normal foram submetidos à análise de variância (ANOVA) seguida pelo teste de Tukey. Os parâmetros que não passaram no teste de normalidade foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado para todos os testes foi de 5% (p<0,05). As variáveis hemogasométricas e cardiovasculares não sofreram alterações significativas durante todo o período anestésico. Observou-se diminuição nos valores de BIS imediatamente após o tratamento no GS(+). Neste grupo também ocorreu depressão respiratória após a aplicação do bolus, no entanto estes valores retornaram aos basais depois de 30 minutos. Concluiu-se que a associação de cetamina S(+) na dose de 6 mg/kg à anestesia com sevofluorano em cães, aprofundou o plano anestésico dos animais de maneira transitória, sem alterar significativamente seus parâmetros cardiovasculares e hemogasométricos / The effects of (S)-ketamine on cardiorespiratory parameters, blood gases and bispectral index was evaluated in sixteen dogs anesthetized with sevoflurane (SEV). Animals received SEV by facemask until they had the laringotracheal reflex abolished and were able to be intubated. Dogs were kept under general anesthesia with SEV 1 MAC in closed circuit system, FiO2 = 0,6 and 250mL + 30mL/kg flow rate, breathing spontaneously. Baseline values were measured after 30 minutes to allow for the anesthetic concentration to achieve a steady-state. Subsequently, animals received a loading dose of (S)-ketamine (Cetamina S+ group) or Lactate`s Ringer (Control group). Cardiorespiratory parameters, blood gases and bispectral index were measured in 10 minutes intervals during the first hour and each 15 minutes during the second hour of anesthesia. Between group and within group differences were evaluated using repeated measures ANOVA for parametric data. Tukey`s test was applied when results were significant. For non-parametric data Kruskall-Wallis test was used. A P value < 0.05 was considered significant for all tests. There were no significant differences among treatments in cardiovascular parameters and blood gas analysis. Respiratory depression and decreased BIS values after (S)-ketamine injection were evidenced, however, the values returned to baseline after 30 minutes. It was concluded that the injection of an anesthetic dose of (S)-ketamine increased the depth of anesthesia transitorily without significant changes in cardiovascular and blood gas parameters

O anestésico cetamina, amplamente consumido por jovens frequentadores de clubs e raves, apresenta forte efeito dissociativo, sendo essa uma das razões para sua utilização. Apesar disso, pouco ainda se sabe sobre seus efeitos reforçadores assim como sobre o resultado da interrupção de seu consumo, após ingestão crônica. Ingerido continuamente, apresenta tolerância ao efeito sedativo. Com base em estudos pré-clínicos e clínicos anteriores que descrevem a capacidade da cetamina para induzir o relaxamento e euforia, apesar do seu efeito sedativo bem conhecido, que a hipótese de que a tolerância de cetamina, mesmo em doses mais elevadas, vai emergir, e será notado efeito de reforço da droga. Este estudo procurou determinar se os efeitos sedativos da cetamina podem ser condicionados à sugestão ambiental, como outras drogas de abuso. Avaliamos os efeitos de doses escalonadas de administração crônica de cetamina na reatividade motora e emocional de ratos. E investigamos a existência de tolerância condicionada induzida pelo contexto em ratos previamente tratados. A análise dos efeitos de cetamina sobre o comportamento motor e emocional foi realizada com o uso de um campo aberto (Monitor de atividade eletrônico). Os animais receberam por 14 dias uma única injeção diária de cetamina ou placebo em diferentes doses (10, 20, 40 e 80 mg / kg). Para o protocolo de preferência condicionada ao lugar, os animais foram submetidos a um baseline de três sessões seguidas com livre acesso a uma caixa de dois contextos, e foram condicionados no contexto que apresentou menor tempo de permanência por 4 dias por 1 hora, recebendo uma injeção diária de placebo ou cetamina (10, 20, 40 e 80 mg/kg), o teste foi realizado após o tratamento com ausência de droga para avaliação de reforço/aversão da droga emparelhada as pistas contextuais. Para o protocolo de tolerância condicionada os animais foram submetidos, durante 4 dias, a dose de cetamina ou placebo (10 mg/kg, 1x dia) e posteriormente testados, foram utilizadas duas câmaras visuais e tatilmente diferenciadas, sendo A câmara de condicionamento e B a câmara de teste. A análise sobre as alterações promovidas pela droga na reatividade comportamental dos animais foi realizada com a utilização de um campo aberto (monitor de atividade eletrônico) em diferentes contextos, após a administração de uma overdose (80 m/kg). Portanto os grupos experimentais se dividiram em A x A ou A x B. As alterações induzidas pela administração da dose de 10 mg/kg de cetamina nos sistemas serotoninérgico e dopaminérgico do córtex infra-límbico (IL) e núcleo accumbens shell (NAcSh), regiões encefálicas envolvidas nos aspectos motivacionais do uso e abuso de drogas, foram avaliadas com a utilização das técnicas de microdiálise in vivo e cromatografia de alta pressão. Todos os experimentos foram conduzidos com a anuência do CEUA (FFCLRPUSP, protocolo 16.5.736.59.1). Para análise dos dados foi utilizada a ANOVA de um ou dois fatores seguida, quando necessário, pelo teste de Tukey-HSD, com p estabelecido em <0,05. Os resultados indicam que semelhante a outras drogas de abuso, encontramos tolerância aumentada aos efeitos sedativos para cetamina induzidos por pistas contextuais. Além disso, o uso prolongado de cetamina aumenta o tempo gasto no centro do monitor de forma dependente da dose, uma medida bem conhecida de comportamento de baixa reatividade em roedores. Este aumento parece não ser devido aos efeitos sedativos da cetamina, uma vez que a imobilidade (tempo) diminuiu à medida que as doses aumentam nos grupos pré-tratados com cetamina. Além disso, a velocidade, a distância percorrida e a ambulação não diferem em relação ao grupo de placebo. Os resultados indicam também a existência de tolerância condicionada aos efeitos sedativos da cetamina sem prejuízo da resposta motora, assim como alterações significativas no tônus de dopamina e serotonina que se diferenciam se os animais são testados durante o efeito ou com 24 horas de abstinência. Em conclusão, nosso estudo aponta os efeitos antiaversivos de doses mais elevadas de cetamina. Este efeito parece ser acompanhado de tolerância farmacológica aos efeitos sedativos da cetamina que pode ajudar a explicar o uso de doses mais elevadas deste medicamento para propósitos recreativos em seres humanos. E dessa forma, a cetamina partilha algumas características comuns com outras drogas de abuso, como a instalação de tolerância condicionada ao contexto e alterações neuroquímicas associadas (depressão acentuada nos níveis de DA e 5-HT no NAcSh) durante a exposição a um contexto previamente pareado com os efeitos da droga. / The anesthetic ketamine, widely consumed by young club and rave people in, has a strong dissociative effect, which is one reason for its use. Despite this, little is known about its reinforcing effects as well as the result of discontinuation of its consumption after chronic ingestion. Ingested continuously shows tolerance to the sedative effect. Based on previous preclinical and clinical studies that describe the ability of ketamine to induce relaxation and euphoria, despite its well-known sedative effect, that the hypothesis that ketamine tolerance, even at higher doses, will emerge,and it will be noted strengthening effect of the drug. This study aimed to determine whether the sedative effects of ketamine can be conditioned to environmental cues such as other drugs of abuse. We evaluated the effects of staggered doses of chronic ketamine administration on the motor and emotional reactivity of rats. We also investigated the existence of context-induced conditioned tolerance in previously treated rats. The analysis of the effects of ketamine on motor and emotional behavior was performed with the use of an open field (e-activity monitor). The animals received a single daily injection of ketamine or placebo for 14 days at different doses (10, 20, 40 and 80 mg / kg). For the place-based preference protocol, the animals were submitted to a baseline of three consecutive sessions with free access to a box of two contexts, and were conditioned in the context that presented the shorter residence time for 4 days for 1 hour, receiving a Daily injection of placebo or ketamine (10, 20, 40, and 80 mg / kg), the test was performed after drug-free treatment for drug-boosted / aversion assessment paired with contextual clues. For the conditioned tolerance protocol the animals were submitted to a dose of ketamine or placebo (10 mg / kg, 1x day) for 4 days and then tested. Two visual and tactile differentiated chambers were used, the conditioning chamber and the test chamber. The analysis of the changes promoted by the drug in the behavioral reactivity of the animals was performed using an open field (electronic activity monitor) in different contexts, after the administration of an overdose (80 m / kg). Therefore the experimental groups were divided into A x A or A x B. The changes induced by administration of the 10 mg / kg ketamine dose in the infra-limbic (IL) and nucleus accumbens shell (NAcSh) serotonergic and dopaminergic systems, Encephalic regions involved in the motivational aspects of drug use and abuse were evaluated using in vivo microdialysis and high pressure chromatography techniques. All experiments were conducted with the consent of CEUA (FFCLRP-USP, protocol 16.5.736.59.1). For data analysis, one or two-factor ANOVA was used, followed when necessary by the Tukey-HSD test, with p established at <0.05. The results indicate that similar to other drugs of abuse, we found an increased tolerance to contextual clue-induced sedative effects for ketamine. In addition, prolonged use of ketamine increases the time spent in the center of the monitor in a dose-dependent manner, a well-known measure of low reactivity behavior in rodents. This increase does not appear to be due to the sedative effects of ketamine, since immobility (time) has decreased as doses increase in the ketamine pretreated groups. In addition, the speed, distance traveled and ambulation did not differ in relation to the placebo group. The results also indicate the existence of conditioned tolerance to the sedative effects of ketamine without impairment of the motor response, as well as significant alterations in the dopamine and serotonin tonus that differ if the animals are tested during the effect or with 24 hours of abstinence. In conclusion, our study points to the anti-aversive effects of higher doses of ketamine. This effect appears to be accompanied by pharmacological tolerance to the sedative effects of ketamine which may help explain the use of higher doses of this drug for recreational purposes in humans. In this way, ketamine shares some common characteristics with other drugs of abuse, such as the installation of context-dependent tolerance and associated neurochemical changes (marked depression in AD and 5-HT levels in NAcSh) during exposure to a previously paired context With the effects of the drug.

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / Estudos recentes indicam que a via de sinalização da proteína alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) está relacionada com a fisiopatologia do transtorno depressivo maior (TDM). A cetamina, um antagonista do receptor N-metil-D-asparto (NMDA), foi identificada como uma nova terapia para o TDM, no entanto, o seu mecanismo de ação como antidepressivo não é ainda totalmente compreendido. Evidências indicam que a ativação da via mTOR no cortéx frontal (CF) é requerida para os efeitos antidepressivos da cetamina. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos comportamentais e neuroquímicos em diferentes regiões cerebrais após a administração de cetamina e a inibição da via de sinalização mTOR no CF de ratos. Para este fim, ratos Wistar machos adultos foram divididos em 4 grupos experimentais: 1) veículo + sal; 2) veículo + rapamicina; 3) veículo + cetamina 15 mg/kg; 4) rapamicina + cetamina 15 mg/kg. O inibidor farmacológico da via mTOR, a rapamicina na dose de 0,2 nmol ou veículo (grupo controle), foram administrados diretamente no CF 1 hora antes do teste do nado forçado (TNF) e 30 minutos antes da administração intraperitoneal de cetamina ou salina. Após o TNF as estruturas cerebrais: CF, amígdala, hipocampo e núcleo acumbens (NAc) e soro foram retirados para as análises bioquímicas (parâmetros de estresse oxidativo e nitrosativo, níveis de citocinas e níveis de proteínas relacionadas com a via mTOR e estresse de retículo (ER)). Os resultados mostraram que a rapamicina foi capaz de bloquear os efeitos antidepressivos da cetamina no tempo de imobilidade no TNF. A cetamina aumentou os níveis das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), carbonilação de proteínas, níveis de nitrito/nitrato e atividade da mieloperoxidase (MPO) e diminuiu a atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) em algumas áreas cerebrais analisadas. No entanto, a inibição da via de sinalização mTOR pela rapamicina no CF, foi capaz de proteger contra o estresse oxidativo através da diminuição do dano a proteínas e lipídeos e o aumento das enzimas antioxidantes. Os níveis do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) aumentaram no soro após a administração de cetamina. Os níveis da proteína mTOR foram reduzidos no grupo rapamicina tratado com salina e cetamina no CF. Houve uma redução nos níveis de p4EBP1 no grupo rapamicina tratado com cetamina no CF e NAc e ainda, os níveis da peEF2K foram aumentados no CF no grupo veículo tratado com cetamina e diminuídos no grupo rapamicina tratado com cetamina. Os níveis de PERK e IRE1- alfa foram diminuídos no CF no grupo rapamicina tratado com cetamina. Os achados do presente estudo sugerem que a inibição da via de sinalização mTOR pode estar envolvida, pelo menos em parte, com o mecanismo de ação da cetamina; e que o efeito antidepressivo da cetamina sobre os níveis das proteínas do ER podem ser mediados pela via de sinalização mTOR em áreas cerebrais envolvidas com a regulação do humor. Sugere-se também que a inibição da via mTOR pode proteger o cérebro contra o estresse oxidativo e nitrosativo induzidos pela cetamina.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde. / A infecção materna durante a gravidez resulta em alterações agudas ou duradouras no contexto do desenvolvimento, estrutura e função do sistema nervoso central (SNC) do feto. Em modelos experimentais a administração de lipopolissacarídeo (LPS) é bem caracterizado e amplamente aceito como uma infecção bacteriana, sendo esta uma proteína altamente imunogênica que provoca uma resposta inflamatória no hospedeiro. O objetivo do estudo foi investigar os efeitos da injeção de LPS no 15º dia gestacional em ratas Wistar, em seus fetos e também avaliar as alterações comportamentais na prole exposta a diferentes doses de cetamina (CET) na vida adulta. Foram utilizadas ratas Wistar prenhas no 15º dia gestacional e o LPS ou solução salina tamponada com fosfato (PBS) (grupo controle) foi administrado por via intraperitoneal. Seis, 12 e 24 h após a injeção, as ratas foram submetidas a cirurgia para retirada das estruturas avaliadas. Os níveis de IL-1β, IL-2, IL-5, IFN-γ, GM-CSF, IL-4, IL-6, IL-18, MIP-3a, TNF-α, IL-7, IL-10, MIP-1a e EPO foram aumentados no cérebro dos fetos. No líquido amniótico os níveis de TBARS aumentaram em 12 e 24 h, grupamentos carbonil aumentaram em 12 h, a atividade da CAT aumentou somente em 12 h e a SOD aumentou em todos os tempos avaliados. No cérebro dos fetos os níveis de TBARS e grupamentos carbonil aumentaram somente em 24 h, a atividade da SOD e CAT somente em 12 h. Houve um aumento na expressão de metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMPs 2 e 9) no líquido amniótico e cérebro dos fetos que foram expostos à injeção de LPS. No hipocampo e córtex cerebral das ratas houve disfunção na integridade da barreira hematoencefálica (BHE) em 6, 12 e 24 h. Na barreira placentária (BP) a disfunção ocorreu em 6 h e em 6 e 24 h no cérebro dos fetos. Neste trabalho a prole adulta também foi avaliada, foram injetadas com LPS e PBS e divididas nos seguintes grupos: controle/salina, controle/CET 5 mg/kg, controle/CET 15 mg/kg, controle/CET 25 mg/kg, LPS/salina, LPS/CET 5 mg/kg, LPS/CET 15 mg/kg e LPS/CET 25 mg/kg. A CET foi administrada 1 vez ao dia durante 7 dias (53º ao 59º dia de vida). No teste comportamental de habituação ao campo aberto e reconhecimento de objetos novos, os animais do grupo controle expostos a 15 e 25 mg/kg de CET apresentaram dano de memória de habituação e reconhecimento e todos os animais do grupo LPS expostos ou não a CET apresentaram comprometimento de memória. Na atividade locomotora tanto os animais do grupo controle quanto LPS que receberam tratamento com 25 mg/kg de CET apresentaram hiperlocomoção em comparação com o grupo controle/salina. No teste de inibição de pré-pulso (IPP) do reflexo de sobressalto os animais do grupo controle/CET 25 mg/kg apresentaram IPP em 70 e 75 dB. Os animais LPS/CET 25 mg/kg apresentaram IPP em todas as intensidades analisadas. Houve um aumento dos níveis de BDNF e NGF no hipocampo de animais expostos ao LPS e que receberam 15 e 25 mg/kg de CET. Assim, a ativação imune materna (AIM) provocou alterações imunoquímicas e a CET intensificou déficits comportamentais em animais expostos ao LPS no período pré-natal.