Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-10-15T16:32:13Z No. of bitstreams: 1 2006_Cléver Gomes Cardoso.pdf: 3825807 bytes, checksum: fa425243c1f9587505e90174fef1191a (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-12-03T13:02:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Cléver Gomes Cardoso.pdf: 3825807 bytes, checksum: fa425243c1f9587505e90174fef1191a (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-03T13:02:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Cléver Gomes Cardoso.pdf: 3825807 bytes, checksum: fa425243c1f9587505e90174fef1191a (MD5) Previous issue date: 2006 / Acredita-se que a origem e evolução dos seres vivos foram antecedidas por uma complexa rede de interações entre moléculas, microrganismos e células em metazoários. Nesse processo, inúmeros eventos de rearranjo e transferência gênica teriam concorrido para o aumento da complexidade do genoma dos seres hoje existentes. O acúmulo de moléculas de DNA no núcleo das células eucariontes aumentou progressivamente a complexidade da herança genética, configurando um ponto chave na evolução dos organismos. Neste contexto, as evidências trazidas pela pesquisa relatada aqui mostram que os genomas continuam a receber um fluxo de DNA mediante a transferência gênica horizontal (TGH), seguida da herança das novas moléculas pela progênie. Acumulam-se as evidências mostrando que vários genes nos organismos eucariontes são oriundos de procariontes. Até recentemente a TGH era considerada evento raro que teria acontecido apenas em épocas remotas, visto que só era conhecida pela presença de ortólogos em genomas de procariontes e eucariontes. Entretanto, a pesquisa desenvolvida no nosso laboratório mostra que TGH é um evento esperado toda vez que o T. cruzi infecta uma célula eucarionte. O nosso modelo sugere que a barreira refletia apenas a dificuldade de flagrar tal evento entre seres vivos filogeneticamente distantes. Portanto, a noção que TGH seja um processo já extinto ou, na melhor hipótese, de muito baixa freqüência, não foi confirmada. A evidência em favor desta conclusão se encontra nos nossos achados prévios de TGH em coelhos, humanos e aves, onde a transferência de DNA de eucarionte para eucarionte foi documentada. O trabalho apresentado aqui documenta a integração de minicírculos de kDNA de T. cruzi no genoma de aves (TGH) e a sua transmissão vertical (TGV) para a progênie. As galinhas são susceptíveis ao T.cruzi somente nos primeiros dias de desenvolvimento embrionário. Após o oitavo dia de incubação a infecção intra-ovo é eliminada pela imunidade inata do embrião. Verificamos que no período crucial da infecção e do desenvolvimento do embrião ocorre a infecção da célula tronco pelo T. cruzi – ambos em acelerado processo de multiplicação – quando, então, ocorre a TGH. A demonstração de TGH (seqüências de minicírculos de kDNA do T. cruzi) para o genoma da galinha refratária à infecção representa, portanto, um modelo biológico limpo para o estudo da integração de kDNA que gera alterações genotípicas e patologia semelhante àquela da doença de Chagas humana. Indo além, foi documentada TGV pelo cruzamento de aves kDNA-positivas, permitindo a produção de progênie também kDNA-positivas, nas gerações F1, F2 e F3. A comprovação da TGV foi feita pela documentação da integração do kDNA no genoma de espermatozóides e de óvulos das aves kDNA-positivas. As aves kDNA-positivas (F0, F1, F2 e F3) desenvolveram sinais típicos da doença de Chagas: lesões nos músculos estriados cardíaco e esquelético, músculos lisos e gânglios parassimpáticos foram documentadas. Nas galinhas com kDNA integrado em seu genoma (portanto, sem a infecção) observou-se unidades mínimas de rejeição, caracterizadas por infiltrados mononucleares e lise da célula alvo. A confluência de unidades mínimas de rejeição reproduz a miocardite difusa típica da doença letal em hospedeiros mamíferos. Os achados deste estudo sugerem que a alteração genômica causada pela inserção de kDNA possa desencadear reação auto-imune no organismo hospedeiro. De fato, as lesões severas da doença de Chagas em aves com kDNA do parasito em seus genomas são sugestivas de que o T. cruzi é vetor de doença genética. A continuação do estudo que mostra integração de DNA do T. cruzi no hospedeiro, livre do parasito e alterações patológicas oriundas dessa mutação, pode contribuir para a elucidação dos mecanismos patogênicos que associam auto-imunidade com as lesões típicas da doença de Chagas. / It has been said that origin and evolution of live organisms were anticipated by network interactions among molecules, microorganisms and cells into complex metazoa. It appears, in this process took place countless events of horizontal transfer of DNA (HGT) amongst species far distant in the phylogenetic tree, thus promoting increasing complexity of the existing organism genomes. The accumulation of DNA molecules in the eukaryote cell nucleus led to sustainable genetic inheritance, thus portraying a main pathway for the evolution of species. Within this framework, the research reported herein is consistent with the idea that genomes from eukaryotes can receive continuous flow of DNA by HGT. Furthermore, it has also been shown that HGT molecules can be inherited vertically (VGT) by the progeny. These observations are in keeping with previous evidence showing prokaryote orthologues that would have been inherited by eukaryotes. Although until recently HGT had been considered a rare event that took place in early epochs, as suggested by the evidence recently found in the vertebrate’s genome sequencing databank, the research carried out in our Laboratory shows that HGT is indeed a mostly expected event, which could be consistently demonstrated in vitro and in vivo. This demonstration does not confirm a previous concept describing HGT as a rare event, which would occur at a rather low frequency. The data reported here shows that HGT can be detected in each host cell undergoing T. cruzi infections and, therefore HGT was shown in a high ratio of chicks born from T. cruzi–infected eggs. In conjunction, our previous studies have shown a gamut of HGT in different in vitro and in vivo models depicting DNA transfer from eukaryote to eukaryote. The work presented here shows sequences of kDNA minicircles from T. cruzi integrated (HGT) within the chicken genome. Furthermore, crossings of kDNA-positive birds resulted in the transfer of the kDNA integrations (VGT) to progeny. The chickens are refractory to the T. cruzi infections, although the infections could get established in early stages of the embryos; after ten days of incubation the T. cruzi infection could be eliminated by the embryo innate immune response. We verified that in the crucial early period of the infection and embryo development the chick stem cells can be T. cruzi-infected. Thereafter host cell and parasite undergoing accelerated multiplication created the grounds for HGT. The demonstration of HGT of sequences of minicircles of kDNA to the chicken genome represents a clean biological system, since birds are refractory to T. cruzi. Accordingly, the chicken model allowed the study of the kDNA-integration that generate genotype alterations and pathology similar to those described in human Chagas disease. Besides, we have demonstrated VGT by the crossings of kDNA-positive birds, which yielded kDNA-integrated progeny. The kDNA-positive F1, F2 e F3 birds were obtained and proved to carry VGT through the kDNA integrations in male and female gametes. The kDNA-integrated birds (F0, F1, F2 e F3) developed clinical signals typical of Chagas disease: destructive lesions were documented in the striated skeletal and heart muscles, in the smooth muscles and in the parasympathetic ganglia. In the kDNA-integrated but parasite-free birds there were minimal rejection units characterized by the immune system mononuclear cell infiltrates and lyses of the host’s self target cells. The confluence of a gamut of minimal rejection units did reproduce a typical diffuse myocarditis hallmark of Chagas disease affecting mammal hosts. These results show that genomic alterations stemming form kDNA insertion-mutation can provoke auto-immune rejection of host tissues. In fact, the documentation of severe Chagas lesions in kDNA-integrated birds is consistent with our hypothesis that the T. cruzi is vector of a genetic disease. Further studies are required to unravel the practical consequences resulting from the T. cruzi kDNA integration in the parasite-free host organism. Such demonstrate could ultimately show much such kDNA integrations contribute to the development of pathological lesions typical of Chagas disease. Moreover, these studies could elucidate the molecular mechanisms of pathogenesis calling forth auto-immunity in Chagas disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-10-31T13:05:26Z No. of bitstreams: 1 2006_André Afonso Machado Coelho.pdf: 735895 bytes, checksum: e9623d72f275b167f2bdba955365017c (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-06T19:54:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_André Afonso Machado Coelho.pdf: 735895 bytes, checksum: e9623d72f275b167f2bdba955365017c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-06T19:54:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_André Afonso Machado Coelho.pdf: 735895 bytes, checksum: e9623d72f275b167f2bdba955365017c (MD5) Previous issue date: 2006 / Apresenta dissertação que tem como objetivo de verificar a ação inseticida de plantas nativas do Cerrado contra os vetores Rhodnius milesi, Dipetalogaster maxima e Aedes aegypti, foram testados diversos extratos brutos de folha, caule, raiz, fruto e flor em ninfas de quarto estádio de R. milesi (ver Schmeda-Hirschmann & Rojas de Arias, 1992), primeiro estádio de D. maxima (ver Leite et al., 1987) e em larvas do 3° estágio de A. aegypti (ver Rodrigues, 2004). Como a principal forma de controle dessas duas doenças é o controle vetorial, busca-se, neste estudo, uma investigação da ação inseticida sobre imaturos desses vetores, visto que impedindo o desenvolvimento dos adultos, impede-se conseqüentemente a reprodução dos mesmos, diminuindo, assim, a densidade populacional e, portanto, reduzindo a prevalência da doença.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T13:10:04Z No. of bitstreams: 1 2008_LiliamOliveiraFariaMacaneiro.pdf: 5316928 bytes, checksum: 8b6b4bf2363826478be7e3e2b86f38e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-03-02T00:08:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LiliamOliveiraFariaMacaneiro.pdf: 5316928 bytes, checksum: 8b6b4bf2363826478be7e3e2b86f38e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-02T00:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LiliamOliveiraFariaMacaneiro.pdf: 5316928 bytes, checksum: 8b6b4bf2363826478be7e3e2b86f38e9 (MD5) Previous issue date: 2008-09-12 / Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas, pode persistir por muitos anos no hospedeiro mamífero, sugerindo que este parasita escapa do sistema imunológico através da regulação negativa nas vias de processamento de antígenos. Dentro da via de apresentação de antígenos intracelulares MHC classe I, a grande maioria de peptídeos antigênicos é gerada pelo proteassoma, um complexo multicatalítico responsável pela degradação intracelular de proteínas. Em vertebrados, três subunidades catalíticas b1i, b2i e b5i, cuja expressão é induzida pela citocina interferon-g (IFN-g), substituem três subunidades catalíticas constitutivas b1, b2 e b5 na partícula 20S do proteassoma, formando o imunoproteassoma. Neste trabalho, nós analisamos se a composição ou a expressão de proteassomas 20S e imunoproteassomas foi alterada em células HeLa e L6 infectadas pelo T. cruzi. Experimentos de RT-PCR e de eletroforese bidimensional comparando células controle e infectadas, com e sem tratamento com IFN-g não apresentaram diferença na composição do imunoproteassoma ou na expressão de suas subunidades em ambos os tipos celulares. No entanto, as atividades símile tripsina e símile quimotripsina do proteassoma foram 2,5 e 3,6 vezes maiores nas células infectadas com T. cruzi, do que nas células não infectadas. Entretanto, o nível de expressão protéica das subunidades b1i e b2i do imunoproteassoma foi reduzido quase pela metade em células HeLa infectadas com T. cruzi e tratadas posteriormente com IFN-g por 24 h. Este resultado sugere que a formação do imunoproteassoma é inibida em células infectadas pelo T. cruzi com posterior tratamento com IFN-g, por um mecanismo de regulação traducional das subnidades induzidas. / Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas’ disease, may persist for many years in its mammalian host, suggesting that this parasite escape from the immune surveillance by down regulating antigen processing pathway. In the MHC class I pathway, the vast majority of antigenic peptides are generated by the proteasome, a multicatalytic complex responsible for the degradation of intracellular proteins. In vertebrates, three catalytic subunits b1i, b2i and b5i, whose expression is induced by the cytokine gamma interferon (IFN-g), replace the three constitutive catalytic subunits b1, b2 and b5 in the core 20S proteasome, generating the immunoproteasome. Here, we analysed whether proteasome subunit composition or expression of the proteasome 20S and immunoproteasome were altered upon infection of HeLa and L6 cells by T. cruzi. RT-PCR and two-dimensional gel electrophoresis experiments comparing non-infected or infected cells, untreated or treated cells with IFN-g did not show differences between the immunoproteasome and expression of its mRNA subunits. However, the proteasome’s trypsin-like and chymotrypsin-like activities were 2.5 and 3.6 times higher in infected cells than in non-infected cells. On the other hand, in infected HeLa cells followed by treatment with IFN-g for 24 h, expression of the immunoproteasome b1i and b2i subunits was reduced. This result indicates that the generation of immunoproteasomes is inhibited in T. cruzi-infected cells followed treating with IFN-g by a posttranslational mechanism of the inducible subunits.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-03-09T20:55:25Z No. of bitstreams: 1 Tese_Versao Final.pdf: 2558640 bytes, checksum: 5ffc716ac59120309c02bc4e5d8a643c (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-04-06T19:30:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Versao Final.pdf: 2558640 bytes, checksum: 5ffc716ac59120309c02bc4e5d8a643c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-06T19:30:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Versao Final.pdf: 2558640 bytes, checksum: 5ffc716ac59120309c02bc4e5d8a643c (MD5) Previous issue date: 2008 / Neste estudo, nós confirmamos e estendemos o conhecimento sobre a transferência de minicírculos de kDNA de Trypanosoma cruzi para o genoma humano. Foram analisadas cinco famílias cujos parentais (G0) eram portadores da doença de Chagas. Foi possível observar a integração de kDNA de T. cruzi no genoma de todos os chagásicos estudados. Concomitantemente, investigamos a transferência gênica vertical (TGV) das seqüências integradas de kDNA para as progênies G1 e G2. A TGV foi identificada em 45% dos descendentes de chagásicos. As análises das regiões do genoma humano que flanqueavam as seqüências de kDNA mostraram a integração de minicírculos de kDNA preferencialmente em retrotransposons LINE (71% dos clones). As integrações foram identificadas também em retroelementos não-autonônomos (12%), em ilha CpG (1%) e em alguns genes (4%). Nos demais clones (12%), não foi possível determinar os loci de integração do kDNA no genoma. A análise da estrutura do kDNA integrado revelou duas seqüências consensos de minicírculos que são inseridas mais freqüentemente que as outras, sugerindo que suas características estruturais possam favorecer o processo de integração. Acreditamos que micro-homologias ricas em AC, presentes nos minicírculos do T. cruzi e no genoma humano, podem mediar a integração do kDNA por recombinação homóloga. Os nossos achados sugerem remodelagem do genoma hospedeiro na região de justaposição das seqüências de minicírculos de kDNA no genoma humano. As análises in silico sugerem que o fenômeno descrito aqui pode resultar no surgimento de novas proteínas ou na alteração de expressão de genes pré-existentes. O real significado de tais mutações não fica restrito à Doença de Chagas, mas, sim, estende-se ao longo do processo da evolução, onde a fixação dessas mutações ajudaria a impulsionar um fluxo genético introdutor de complexidade crescente às espécies. / In this study we showed the transference of Trypanosoma cruzi kDNA minicircle sequences into the human genome. All founders (G0) of five families having the chronic T. cruzi infections had the kDNA integrated into retrotransposable elements. Additionally, we demonstrated the vertical gene transfer (VGT) of those kDNA mutations to their G1 e G2 progenies. Indeed, VGT was demonstrated in 45% of Chagas patients’ descendents. The analyses of the juxtaposition regions of the kDNA to the human genome revealed that the minicircle sequences integrate preferentially into retrotransposable LINE in 71% of those mutations. These mutations were also present in non-authonomous retroelements (12%), CpG island (1%) and putatively in some genes (4%). The remaining mutations (12%) were present in undetermined loci in some chromosomes. The structure of the kDNA integrated into the host genome revealed main consensus types I and II sequences, which were found in the integration sites in high ratio then other minicircles integrated in defined loci. It appears that some particular feature in those consensus sequences favor their insertion in those loci. We believe that AC-rich micro-homologies present in the T. cruzi kDNA minicircles and in the human genome could mediate the parasite DNA integration by homologous recombination mechanism. Our findings suggest that host DNA shuffling and recombination may occur at the integration site. It appears that the phenomenon of kDNA integration may alter pre-existing genes expression or they may generate chimera proteins. The true meanings of those mutations appear not to be limited to Chagas disease. We understand that the observed genetic drift of 55% of the kDNA mutation in the progeny may help to propel a robust genetic flux possibly associated with genome growth and increasing complexity of species. We propose that the fixation of those mutations appear to influence the evolution process.

Tese (doutorado)-Universidade de Brasília, Centro de Desenvolvimento Sustentável, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-03-09T19:48:13Z No. of bitstreams: 1 2010_AnnamariadeFatimaVenancio.pdf: 10398426 bytes, checksum: e644c8e307abed10600658fdabde9b7f (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-04-02T00:00:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AnnamariadeFatimaVenancio.pdf: 10398426 bytes, checksum: e644c8e307abed10600658fdabde9b7f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-02T00:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AnnamariadeFatimaVenancio.pdf: 10398426 bytes, checksum: e644c8e307abed10600658fdabde9b7f (MD5) / A doença negligenciada tripanossomíase americana ou doença de Chagas é uma antropozoonose de origem parasitária transmitida por insetos vetores - os triatomíneos - que necessitam de nichos ecológicos estáveis para sua dinâmica de populações. O sistema epidemiológico "natural" desta doença frente a perturbações ambientais de origem socioeconômica, cultural e política, coloca as populações locais em situação de risco para a saúde humana. Uma abordagem sistêmica e integrada é, então, necessária para subsidiar o processo de gestão integrada do risco. No caso deste estudo, buscou-se em primeiro lugar identificar e espacializar os elementos que compõem o sistema epidemiológico da antropozoonose por meio de seu elemento principal, o triatomíneo, sua presença na natureza e no meio domiciliar, além de descrever como se organizam a estrutura e o funcionamento dos ciclos sinantrópicos e naturais no contexto de duas localidades do semiárido baiano. Foram também caracterizadas as localidades de estudo a partir de um ponto de vista socioambiental e econômico e identificados os principais programas, políticas públicas e atividades humanas susceptíveis de ter um impacto sobre o sistema epidemiológico, a exemplo do Programa Nacional de Fortalecimento da Agricultura Familiar (PRONAF B). A partir dos resultados obtidos, definiu-se o conceito de ‗antropossistema‘ para a doença de Chagas como uma unidade interativa, dinâmica e complexa, fortemente ligada ao meio ambiente e constituída por um sociossistema em interação contínua com os ecossistemas locais. Este antropossistema se inscreve em uma dinâmica espaço-temporal que pode, em qualquer momento, passar de uma situação de risco a uma emergência da doença, dependendo a gestão do risco de uma prática de discussões inter e intrassetoriais. Além disto, estratégias de estímulo à participação dos habitantes locais nas ações de controle entomológico, também são necessárias para otimizar os resultados obtidos pelos Postos de Informação de Triatomíneos (PITs), criados em 1985 pelo Programa de Controle da Doença de Chagas. A implementação de um observatório em torno das interações meio ambiente – saúde a fim de melhorar, no estado da Bahia, a governança das regiões em vias de degradação ambiental apresenta-se como o ponto fundamental de monitoramento da evolução dos processos de transformações socioambientais sob a ótica de prevenção de doenças infecciosas e parasitárias. / American trypanosomiasis (TA) or Chagas Disease is an anthropozoonose caused by a parasite transmitted through insect vectors - triatomines - that require stable ecological niches to sustain their population dynamics. The "natural" epidemiological system of this disease within the context of the environmental disturbances arising from socioeconomic, cultural and political sources puts local human populations in risk situations for this disease. A systematic and integrated approach will therefore be necessary to subsidize the processes of integrated risk management. The present study first sought to identify and spatially define the elements that make-up the epidemiological system of this anthropozoonose by focusing on its principal element, the triatomine, and its presence in nature and in human habitations. The study also describes how the structure and functioning of the sinantropic and natural cycles of triatomines are organized within the context of two localities in the semiarid region of Bahia State, Brazil. The characteristics of the study localities were also described from a socio-environmental and economic point of view together with the principal programs, public policies, and human activities likely to have an impact on the epidemiological systems identified, such as the National Program for Strengthening Family Agriculture (PRONAF B). From these results, an anthroposystem for Chagas disease was defined as an interactive, dynamic and complex structure strongly linked to the environment and composed of social systems that maintain continuous interactions with local ecosystems. This anthroposystem has its own spatial-temporal dynamics that can, at any time, evolve from a risk situation to the emergence of Chagas disease and, depending on risk management, to the establishment of inter and intra-sectorial communication. Additionally, strategies that stimulate local inhabitants to participate in entomological control efforts are needed to optimize the results of the Triatomine Information Centers (PITs) established by the Chagas Disease Control Program in 1985. The implementation of policies that can monitor interactions between the environment and human health to improve governance of regions of environmental degradation in Bahia State appears to be a fundamental point for monitoring the evolution of socio-environmental transformations to help prevent infectious and parasitic diseases. / La maladie négligée trypanosomiase américaine ou maladie de Chagas est une anthropozoonose parasitaire transmise par des insectes vecteurs - les triatominae – qui ont besoin des niches écologiques stables pour sa dynamique des populations. Le système épidémiologique «naturel» de la maladie devant les perturbations environnementales d‗origine socio-économique, culturel et politique, met la population locale à des risques pour la santé humaine. Une approche systémique et intégrée est alors nécessaire pour soutenir le processus de gestion intégrée du risque. Dans la présente étude, nous avons cherché d'abord d'identifier et de spatialiser les composants du système épidémiologique de cette anthropozoonose par l‗intermédiaire de sa composante principale, les triatomes, leur présence dans la nature et dans les unités domiciliaires; de comprendre la structure et le fonctionnement des cycles naturels et synanthropiques dans le cadre de deux localités dans le semi-aride de Bahia. Ont également été caractérisés les villes étudiées à partir d'un point de vue socio-environnemental et économique et identifiés les principaux programmes, les politiques publiques et les activités humaines qui peuvent avoir un impact sur le système épidémiologique, comme le Programme National pour renforcer l'Agriculture Familiale (PRONAF B). A partir des résultats obtenus, la notion de «anthroposystème » pour la maladie de Chagas a été définie comme une unité interactive, dynamique et complexe, fortement liée à l'environnement et composée d'un sociosystème en interaction avec les écosystèmes locaux. Cet anthroposystème s‗inscrit dans une dynamique spatio-temporelle, pouvant à tout moment, passer d'une situation de risque à une situation d'émergence de la maladie. Cette antropossistema tombe dans un espace-temps dynamique qui peut à tout moment, passer d'une situation de risque pour une maladie d'urgence, selon une gestion du risque qui dépend d‗une pratique des discussions intra-sectoriels. En outre, des stratégies visant à encourager la participation des populations locales dans les actions de contrôle entomologique sont également nécessaires pour optimiser les résultats des Postes d‗Informations de Triatominae (PITs), créé en 1985 par le Programme de Contrôle de la Maladie de Chagas. La mise en oeuvre d'un suivi des interactions autour de l'environnement – santé publique pour améliorer la gouvernance des régions dans le processus de dégradation de l'environnement dans l'État de Bahia est le point fondamental de surveillance pour suivre l'évolution des processus de transformations sociales e environnementales dans le point de vue de la prévention des maladies infectieuses et parasitaires.

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T22:53:32Z No. of bitstreams: 1 2009_RafaelAugustoPontesGuercio.pdf: 10289520 bytes, checksum: 3de1a51d5e96afab44a98e4da95f7438 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T22:55:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RafaelAugustoPontesGuercio.pdf: 10289520 bytes, checksum: 3de1a51d5e96afab44a98e4da95f7438 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-16T22:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RafaelAugustoPontesGuercio.pdf: 10289520 bytes, checksum: 3de1a51d5e96afab44a98e4da95f7438 (MD5) / O agente etiológico da Doença de Chagas é o parasito flagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi), o qual possui um ciclo de vida alternado entre vetores triatomíneos e hospedeiros mamíferos. A regulação da expressão gênica em T. cruzi dá-se ao nível pós-transcricional o que impossibilita a correlação direta entre os níveis de mRNA e proteínas e ao mesmo tempo torna atrativa a abordagem proteômica. O presente trabalho pretendeu contribuir com os estudos proteômicos do parasito seguindo duas vertentes, sendo a primeira a proteômica comparativa dos diferentes estágios de vida do T. cruzi com Ênfase nas proteínas Ácidas e a segunda a caracterização subproteômica de T. cruzi de uma fração enriquecida em organelas de alta densidade. Assim, foram padronizados perfis eletroforéticos bidimensionais em géis de poliacrilamida (2-DE) usando gradientes estreitos de pH nas faixas de pH 3-5,6NL; 5,3-6,5 para extratos totais das formas epimastigota, tripomastigota e amastigota. Os perfis bidimensionais das formas tripomastigota e amastigota mostraram-se bastante complexos com mais de 1.000 spots/gel e foram analisados computacionalmente a fim de detectarem-se spots proteicos estágio-específicos e diferencialmente expressos. Proteínas dos géis foram identificadas por técnicas de espectrometria de massa (MS). No que diz respeito ao subproteoma organelar, foi isolada da forma epimastigota uma fração de organelas de alta densidade. Análises por microscopia eletrônica de transmissão, e por imunotransferência, mostraram claramente um forte enriquecimento de núcleo. Os spots dos géis bidimensionais, em faixa ampla de pH 3-10 e nas faixas de pH 4-7 e pH 6-11, foram identificados por MS sendo encontradas proteínas nucleares, mitocondriais, flagelares e glicosomais e diversas proteínas hipotéticas. / The flagellate parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi), the etiological agent of Chagas disease, possesses an alternate life cycle between triatomine vectors and mammalian hosts. The fact that T. cruzi gene expression regulation is posttranscriptional prevents the direct correlation between mRNA and protein levels and makes the proteomic approach very attractive. The present work aimed at contributing to the parasite proteomic studies following two different approaches, the comparative proteomics of T. cruzi life stages emphasizing the acidic proteins and the subproteome characterization of a T. cruzi fraction enriched in high density organelles. Thus, narrow pH range (pH 3-5.3 and pH 5.3-6.5) were optimized for protein extracts of epimastigote, tripomastigote and amastigote cells. The resulting tripomastigote and amastigote 2-DE profiles, that were rather complex, displaying more than 1,000 spots/gel, were computationally analyzed in order to determine stage-specific an differentially expressed spots.The 2-DE spots of interest were identified by mass spectrometry (MS) methods. Concerning the T. cruzi subproteome we isolated a fraction from epimastigote cells that was enriched in high density organelles including nuclei as confirmed by transmission electron microscopy, and immunoblotting. The spots of the 2-DE gels in the pH ranges 3- 10, 4-7 and 6-11 were identified by MS displaying nuclear, mitochondrial, flagellar, glycosomal as well as hypothetical proteins.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Química, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-03-23T17:22:20Z No. of bitstreams: 1 2011_AdaoLinconBezerraMontel_Parcial.pdf: 4175941 bytes, checksum: 3bc1665778074d61b6ebf4d287bd739b (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-03-26T14:48:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_AdaoLinconBezerraMontel_Parcial.pdf: 4175941 bytes, checksum: 3bc1665778074d61b6ebf4d287bd739b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-26T14:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_AdaoLinconBezerraMontel_Parcial.pdf: 4175941 bytes, checksum: 3bc1665778074d61b6ebf4d287bd739b (MD5) / A Doença de Chagas afeta cerca de 18 milhões de pessoas no mundo e é endêmica da América Latina. Devido ao desenvolvimento de resistência aos medicamentos pelo agente etiológico da doença, o protozoário Trypanosoma cruzi, a busca por novos medicamentos é de fundamental importância. As enzimas histonas deacetilase se mostraram um alvo farmacológico bastante interessante devido ao seu amplo espectro de ação bem como a baixa toxicidade dos inibidores desta enzima ao hospedeiro. Os inibidores da enzima histona deacetilase revelaram atividade importante no combate a diversas moléstias. A descoberta da alta atividade destes compostos contra infecções causadas por protozoários estimulou a busca por moléculas capazes de combater a infecção de células por protozoários. Neste trabalho fizemos uma investigação in silico do mecanismo de ação destes inibidores e investigamos a atividade in vitro de alguns deles, especialmente análogos borônicos de ácidos graxos de cadeia curta contra a infecção pelo Trypanosoma cruzi. Em paralelo a esta pesquisa, investigamos também o potencial de uso de medicamentos híbridos, isto é, compostos por dois princípios ativos em uma mesma molécula (anti-inflamatórios não esteroidais e inibidores de histona deacetilase) bem como a atividade do inibidor de transcriptase reversa nevirapina no tratamento da infecção pelo T. cruzi. O conjunto da pesquisa revelou um potencial sítio alostérico no mecanismo de ação da histona deacetilase por ácidos graxos de cadeia curta. Os análogos borônicos revelaram baixa atividade com exceção de um dos ésteres testados. O único éster a apresentar atividade, entretanto, apresentou uma toxicidade demasiada inviabilizando um uso farmacológico. A atividade dos medicamentos híbridos também se mostrou baixa. A nevirapina foi ativa contra a forma amastigota intracelular do T. cruzi. Este resultado sugere que este medicamento pode ser uma nova droga em potencial para o tratamento da cardiomiopatia da doença de Chagas. / Chagas disease affects about 18 million people worldwide and is endemic in Latin America. Due to the development of drug resistance by the causative agent of disease, the protozoan Trypanosoma cruzi, the search for new drugs is very important. The histone deacetylase enzymes proved to be a very interesting pharmacological target due to its broad spectrum of activity and low toxicity of inhibitors of this enzyme to the host. The histone deacetylase inhibitors have shown important activity in combating various diseases. The discovery of high activity of these compounds against infections caused by protozoa stimulated the search for molecules capable of fighting the infection of cells by protozoa. In this work we have done an in silico investigation of the mechanism of action of these inhibitors and investigated the in vitro activity of some, especially Boronic analogues of short-chain fatty acids against T. cruzi infection. In parallel with this research also investigated the potential use of hybrid drugs, i.e. comprising two active ingredients in the same molecule (non-steroidal anti-inflammatory drugs and inhibitors of histone deacetylase) as well as the activity of reverse transcriptase inhibitor nevirapine in the treatment of infection by T. cruzi. The survey revealed a number of potential allosteric site on the mechanism of action of histone deacetylase by short-chain fatty acids. Boronic analogs showed low activity with the exception of one of the esters tested. The only activity to produce ester however, showed an excessive toxicity invalidating a pharmacological use. The activity of hybrid drugs was also low. Nevirapine was active against the intracellular amastigote form of T. cruzi. This result suggests that this drug may be a potential new drug for tratamentto cardiomyopathy of Chagas disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, Laboratório de Bioquímica e Química de Proteínas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-09T16:36:15Z No. of bitstreams: 1 2013_MaraOlimpiaMachado.pdf: 1881289 bytes, checksum: d18ed6a8947e91ea0320ab3f94f39319 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-09-10T12:41:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MaraOlimpiaMachado.pdf: 1881289 bytes, checksum: d18ed6a8947e91ea0320ab3f94f39319 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-10T12:41:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MaraOlimpiaMachado.pdf: 1881289 bytes, checksum: d18ed6a8947e91ea0320ab3f94f39319 (MD5) / A doença de chagas, também conhecida como tripanossomíase americana, encontra-se entre as Doenças Tropicais Negligenciadas com maiores taxas de prevalência no Brasil. A transmissão se da, principalmente, por duas vias: pelas fezes do vetor triatomíneo e por transfusão sanguínea. Seu agente etiológico é o Trypanosoma cruzi, um protozoário flagelado. Nos vertebrados, os tripomastigotas, forma infectante do T. cruzi, podem aderir e penetrar em quase qualquer célula hospedeira. Nesses processos estão interligadas as proteínas da superfície celular e as secretadas. Para caracterização das proteínas secretadas/excretadas pelo tripomastigota, utilizou-se a abordagem proteômica por nanoLC-MS/MS. Identificou-se as proteínas totais secretadas e realizou-se estudos preliminares de proteínas glicosiladas e fosforiladas. Os dados foram analisados por bioinformática. Encontrou-se um total de 535 proteínas distintas, destas 24 eram proteínas glicosiladas e 40 fosforiladas. Em sua grande maioria, baseado em algoritmos de predição por análise de sequencias, apresentam-se como secretadas, principalmente pela via não clássica (65%) e não pela via clássica (15%). As demais proteínas (20%) não foram preditas como secretadas, porém entre estas incluem-se proteínas já descritas anteriormente como liberadas no meio extracelular. Isso reflete provavelmente a limitação dos softwares bioinformáticos disponíveis e da peculiaridade do modo de liberar proteínas pelo parasito no meio externo. Este estudo apresenta uma abordagem adequada para identificar uma grande diversidade de proteínas secretadas no sobrenadante da cultura de T. cruzi e oferece novas perspectivas para o estudo de moléculas potencialmente envolvidas nas fases iniciais da infecção, já que tais proteínas são mediadores-chave da interação parasito-hospedeiro. / Chagas disease, also known as American trypanosomiasis, is found to be one of the Tropical Neglected Diseases with highest prevalence in Brazil. The transmission occurs, mainly, for two ways: the vector triatomine faecal matter and blood transfusions. Its etiological agent is Trypanosoma cruzi, a flagellate protozoan. On vertebrate, the trypomastigote, infected form of T. cruzi, can adhere and penetrate in almost any host cell. On these processes both the secreted and the cellular surface protein are nterlocking. To character both secreted/ excreted proteins by trypomastigote, was used a proteomics approach by nanoLC-MS/MS. It was identify the total secreted proteins and preliminary studies of glucose and phosphorylation was held. The data were analyzed by bioinformatics. It was found a total of 535 distinct proteins, among 24 were glycosylated and 40 were phosphorylated. The great part, based on sequential analysis of prediction algorithms, was presented as secreted, mainly by a non-classical way (65%), and not by a classic way (15%). The remaining proteins (20%) were not predicted as secreted, however among them there are proteins described previously released into the extracellular environment. This, probably, reveals the limitation of bioinformatic software available and the peculiarity of the mode of release proteins by the parasite in his medium. This study presents an adequate approach to identify a great diversity of proteins secreted in the T. cruzi culture supernatant and it also offers new perspective to the study of molecules potentially involved on the initial phases of the infection, since such proteins are key mediators of the interaction parasite-host.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-12-10T11:52:52Z No. of bitstreams: 1 2013_AdrianoRiosdaSilva.pdf: 2698684 bytes, checksum: a4ee07376019a8db08cbc39e71515b1f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-12-11T15:35:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AdrianoRiosdaSilva.pdf: 2698684 bytes, checksum: a4ee07376019a8db08cbc39e71515b1f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-11T15:35:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AdrianoRiosdaSilva.pdf: 2698684 bytes, checksum: a4ee07376019a8db08cbc39e71515b1f (MD5) / A doença de Chagas é uma patologia que acomete milhares de pessoas no mundo inteiro, principalmente no continente Americano. O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, é transmitido principalmente pelo inseto triatomíneo durante o repasto sanguíneo. Além da transmissão vetorial, a doença de Chagas pode ser adquirida por via transfusional, congenital ou pelo consumo de alimentos contaminados. A possibilidade da transmissão sexual da doença de Chagas foi sugerida por Carlos Chagas em 1909, entretanto, poucos trabalhos foram publicados sobre o tema desde então. O presente trabalho teve como objetivo investigar a transmissão sexual do Trypanossoma cruzi no modelo experimental murino. Para isso, foram feitos testes parasitológicos, sorológicos e moleculares em 20 camundongos infectados e em seus parceiros sexuais, inicialmente sadios. Os resultados mostraram que após o acasalamento com animais infectados, os parceiros sexuais apresentaram testes sorológicos positivos em 60% dos casos, enquanto que o DNA nuclear do parasito foi identificado no sangue dos animais analisados. Além disso, duas fêmeas inicialmente sadias apresentaram testes de hemocultura positivos após acasalarem com machos infectados, confirmando assim a trasmissão sexual do T. cruzi. Os resultados dos testes sorológicos e moleculares dos filhotes mostraram uma discrepância entre a sorologia e os resultados de PCR, sendo que o teste molecular apresentou uma maior sensibilidade. A taxa de infecção congênita obtida pelos métodos sorológicos revelaram que 14% dos filhotes provenientes dos Grupos A e B adquiriram a infecção, enquanto que o teste de PCR demonstrou uma positividade de 58%. A análise histopatológica não foi capaz de mostrar a presença de ninhos de amastigotas no coração dos animais infectados, tanto pela via intraperitonial, como pela via sexual. No entanto, pôde-se observar a presença de extenso infiltrado inflamatório destruindo as fibras cardíacas em todos os animais infectados. A análise de imunohistoquímica realizada em cortes histológicos de testículos de camundongos infectados revelou uma grande quantidade de formas amastigotas no túbulo seminífero e epidídimo. A capacidade de infecção do sêmem proveniente de indivíduo infectado pelo T. cruzi foi verificada. As análises histopatológicas mostraram a presença de ninhos de amastigotas no coração de fêmeas infectadas a partir da inoculação intra-vaginal de sêmen humano. Dessa forma, nossos resultados mostram que ocorreu transmissão sexual do Trypanosoma cruzi em camundongos. / Chagas disease is a condition that affects thousands of people worldwide, mainly in the Americas. Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease, is transmitted primarily by triatomine insect during blood feeding. Besides vetorial transmission, Chagas disease can be acquired by blood transfusion, congenital or by consumption of contaminated food. The possibility of sexual transmission of Chagas disease has been suggested by Carlos Chagas in 1909, however, few studies have been published on the subject since then. The present study aimed investigate sexual transmission of Trypanosoma cruzi in experimental murine model. For this, parasitological, serological and molecular infected mice and their sexual partners, initially healthy. The results showed that after mating with animals infected sexual partners serological tests showed positive in 60% of cases, while the nuclear DNA of the parasite was identified in blood from all animals analyzed. In addition, two healthy females initially showed positive blood culture tests after mating with infected males, thus confirming the sexually transmitted T. cruzi. The results of serological and molecular tests of pups showed a discrepancy between serology and PCR results, and the molecular test showed a higher sensitivity. Congenital infection rate obtained by serological methods showed that 14% of the from Groups A and B acquired infection, whereas the PCR test showed an 58% positivity. Histopathological analysis was not able to show the presence of nests of amastigotes in the hearts of infected animals, either by intraperitoneal as through sex. However, it was observed the presence of extensive inflammatory infiltrate destroying cardiac fibers in all infected animals. Immunohistochemical analysis performed in histological testis infected mice revealed a large amount of amastigotes in seminiferous tubule and epididymis. The ability of infection semen from individual infected with T. cruzi was verified. The histopathological analysis showed the presence of nests of amastigotes in the heart of infected females from intravaginal inoculation of human semen. Thus, our results show that there was sexual transmission of Trypanosoma cruzi in mice.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Programa de Pós-Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-02-18T14:09:58Z No. of bitstreams: 1 2013_MauricioFarnese.pdf: 1726214 bytes, checksum: 8eb23c08dcf2d229143b6daaa0152746 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-19T12:35:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MauricioFarnese.pdf: 1726214 bytes, checksum: 8eb23c08dcf2d229143b6daaa0152746 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-19T12:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MauricioFarnese.pdf: 1726214 bytes, checksum: 8eb23c08dcf2d229143b6daaa0152746 (MD5) / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi atinge milhões de pessoas em todo mundo, especialmente na América Latina, onde é endêmica. Em seu ciclo de vida, o parasito passa por diversos processos de diferenciação para adaptar-se a diferentes condições dentro do hospedeiro mamífero e do inseto triatomíneo. Componentes localizados na superfície do parasito e da célula hospedeira desempenham papéis importantes na invasão, entretanto os mecanismos envolvidos são muito discutidos. Sabe-se que a sinalização mediada por Ca2+ é um aspecto importante na invasão celular e na diferenciação do parasito. A calmodulina (CaM) é uma proteína citoplasmática Ca2+-dependente em eucariotos que regula várias proteínas. A ligação da CaM ao Ca2+ induz uma mudança conformacional que promove a interação desta com diversas proteínas com importantes funções biológicas. A CaM de T.cruzi (TcCaM) tem sido associada à várias funções diferentes como regulação do crescimento, estimulação enzimática, transdução de sinais, além de modular os efeitos do Ca2+. Desta forma, a fim de melhor entender o envolvimento das proteínas ligantes de CaM (CaM-BPs) nos processos de invasão e diferenciação de T. cruzi, foram adotadas nesse trabalho duas abordagens de identificação de proteínas ligantes de Ca2+ e/ou CaM. Primeiramente pela análise bioinformática de proteínas diferencialmente expressas durante a amastigogênese e proteínas presentes na superfície do parasito. Foram preditas 17 proteínas ligantes de Ca2+ dentre as identificadas com expressão regulada durante a amastigogênese e 36 proteínas na superfície de tripomastigota e amastigota. Estas possuem funções enzimática, de armazenamento, transporte dentre outras. A segunda foi uma abordagem experimental onde identificamos 6 proteínas, as quais desempenham funções estruturais, motilidade, adesão ou enzimática. Esta segunda vertente foi realizada experimentalmente por uma abordagem proteômica. As CaM-BPs extraídas da forma epimastigota foram enriquecidas por cromatografia de afinidade e separadas em géis eletroforéticos (1D-PAGE e 2D-PAGE). A identificação por espectrometria de massas foi iniciada e já foram identificados componentes da estrutura celular como α- e β-tubulinas, proteína paraflagellar rod putativa e uma proteína de transdução de sinal intracellular, a HSP70. Esses dados auxiliam no entendimento sobre como o Ca2+, a TcCaM e seus ligantes participam em processos celulares como invasão e diferenciação do T. cruzi. / Chagas' disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, afflicts millions worldwide especially in Latin America where it is endemic. During its life-cycle, the parasite undergoes several differentiation events in order to adapt to a variety of conditions inside both mammalian host and triatomine vector. Components from both parasite and host-cell surfaces play major roles in invasion, however the mechanisms involved are still much discussed. It is known that Ca2+ mediated signaling is an important aspect of host-cell invasion and parasite differentiation. Calmodulin (CaM) is a citoplasmic Ca2+-dependent protein that regulates several proteins in eukaryotes and the binding of Ca2+ to CaM induces conformational changes, which promotes the interaction to a variety of other proteins with important biological functions. T. cruzi CaM (TcCaM) has been linked to several functions such as growth regulation, enzyme stimulation, and signal transduction, besides modulating the effects of Ca2+ concentration. Thus, in order to better understand the involvement of CaM binding proteins (CaM-BPs) in the invasion process and T. cruzi differentiation, was adopted here two approaches to identify Ca2+- and/or CaM- binding proteins. First though bioinformatic prediction of such proteins among those identified as differentially expressed during amastigogenesis and those presented in the parasite cell surface. It was predicted 18 Ca2+-binding proteins with regulated expression level during differentiation and 36 in the surface of trypomastigotes and/or amastigotes. These have enzymatic, storage, transportation and others functions. The second was an experimental approach where we identified 6 proteins, which play structural, motility, adhesion or enzymatic functions. This second part was an experimental proteomic approach, where CaM-BPs from epimastigotes were enriched by affinity chromatography and separated by gel electrophoresis (1D-PAGE and 2D-PAGE). Mass spectrometric identifications were initiated and it already has been identified cell structure components such as α-and β-tubulins, putative paraflagellar rod proteins and a signal transduction protein, the HSP70. This data contribute to the understanding of the involvement of Ca2+, TcCaM and their ligands in the invasion and differentiation processes.