Made available in DSpace on 2014-10-09T12:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 08283.pdf: 7331635 bytes, checksum: 1c104b9cb00b73030780daec5c1d0c70 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:26:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:10:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A análise de tintas e papéis é de grande interesse para a ciência e a interação tinta-papel é importante em vários níveis. A análise da tinta de um documento é extremamente importante para o estudo de diferentes aspectos, como adulterações e determinação da recentidade. Esses aspectos podem ser estudados analisando a tinta e o papel tanto fisicamente quanto quimicamente. Portanto, o desenvolvimento de uma técnica para a análise de tintas de caneta esferográfica e a determinação da recentidade de um documento é interessante para a Ciência Forense. No Brasil, cientistas forenses enfrentam todos os dias diversos casos que requerem a análise de tintas de caneta esferográfica, e não se tem nenhuma técnica onde a determinação da idade de uma tinta é possível. Os casos mais comuns onde há a necessidade da recentidade de um documento são fraudes em recibos de pagamento e de quitação de dívidas, preenchimento e assinatura de contratos, adulteração em documentos e em cheques. Neste trabalho, é discutida uma nova metodologia para a análise de tintas de canetas esferográficas e a sua utilização na determinação da recentidade de uma amostra de tinta de caneta esferográfica. Foram analisadas periodicamente amostras provenientes de diferentes países, como Estados Unidos, Canadá, Peru, Japão, Espanha e Grécia. Com os resultados obtidos, foram construídas curvas de degradação do solvente em função do tempo de preparo. Com as curvas, obtiveram-se as equações logarítmicas relativas. As equações propostas mostraram ser capazes de distinguir a idade relativa de uma tinta, com 20% de variação em relação ao valor teórico. Portanto, a principal conclusão deste trabalho é a metodologia proposta pode ser utilizada para determinar a idade relativa de uma tinta de caneta esferográfica. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP / FAPESP:05/58301-0

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-12T21:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_MariaCristianeMartinsde_M.pdf: 4631873 bytes, checksum: 3ea11569f1a6cd0e7b608b162b33068a (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: As imunoglobulinas (em particular, Imunoglobulina G (IgG)) têm uma aplicação ampla, sendo essenciais em testes de diagnóstico in vitro, em terapia, análises e investigação em diversas áreas. Muitos estudos têm sido realizados visando à purificação de IgG, destacando-se as técnicas de adsorção seletiva, como as cromatografias de troca iônica, negativa e de afinidade. Neste contexto, aplicou-se a cromatografia negativa com diaminas imobilizadas para purificação de IgG a partir do soro e plasma humano em uma única etapa, visando à obtenção de um alto grau de pureza. Os experimentos cromatográficos envolveram cinco etapas: condicionamento, alimentação, lavagem, eluição e regeneração da coluna cromatográfica. Para determinação do melhor ligante para adsorção de impurezas, realizaram-se ensaios com os adsorventes w-aminopropil-agarose, w-aminohexilagarose, w-aminohexil-bisoxirano-agarose, w-aminooctil-agarose, w-aminodecilbisoxirano- agarose, w-aminododecil-bisoxirano-agarose e DEAE-agarose na presença de diferentes sistemas tamponantes. De acordo com eletroforeses SDSPAGE e análises nefelométricas das frações dos picos de proteínas obtidos, a melhor condição utilizada para a purificação de IgG a partir de soro e plasma humano diluído em HEPES 25 mM a pH 6,8 e MOPS pH 7,9, respectivamente, em ?-aminohexil-bisoxirano-agarose, atingindo fator de purificação de 6,8 vezes e pureza superior a 95%. As isotermas de adsorção de albumina, principal impureza do soro e do plasma humano, ajustadas pelo modelo de Langmuir, indicaram alta capacidade de adsorção de albumina dos géis ?-aminohexil-bisoxirano-agarose e ?-aminodecil-bisoxirano-agarose, de 206,6 e 78,6 mg/mL de adsorvente, respectivamente. Os adsorventes ?-aminohexil-bisoxirano-agarose e ?- aminodecil-bisoxirano-agarose mostraram-se mais eficientes para purificação de IgG em termos de rendimento (76,8 e 74,7%, respectivamente) e capacidade dinâmica (4,23 e 4,51 mg de IgG/mL de adsorvente, respectivamente), do que o gel controle DEAE-agarose (51,9% de rendimento e 3,19 mg de IgG/mL de adsorvente). / Abstract: Immunoglobulins, in particular immunoglobulin G (IgG), have a broad application range and are essential to in vitro diagnostic tests, in therapies and researches in several fields. Many studies have been done aiming IgG purification, mainly using techniques of selective adsorption, such as ion exchange chromatography and negative affinity. In this context, the concept of negative chromatography with immobilized diamines was used for IgG purification from human serum and plasma in a single step, aiming to obtain high pure IgG. Chromatographic experiments involved five steps: conditioning, feeding, washing, elution and regeneration of the column. In order to determine the best condition for adsorption of impurities, trial experiments were performed with ?-aminopropylagarose, ?-aminohexyl-agarose, ?-aminooctyl-agarose, ?-aminodecyl-agarose, ?-aminododecyl-agarose and DEAE-agarose using different buffer systems. According to SDS-PAGE and nephelometry analysis, the most selective adsorbent was ?-aminohexyl-bisoxyrane-agarose using HEPES 25 mM pH 6.8 and MOPS pH 7.9 buffers for IgG purification from human serum and plasma, respectively, reaching purification factor of 6.8 times and purity of over 95%. Adsorption isotherms of albumin, main impurity of the human serum and plasma, adjusted by the Langmuir model, showed a high capacity of absorption of albumin by the gels w-aminohexyl-bisoxyrane-agarose and w-aminodecyl-bisoxyrane-agarose, of 206,6 and 78,6 mg/mL of adsorbent, respectively. The absorbents w-aminohexylbisoxyrane- agarose and w-aminodecyl-bisoxyrane-agarose showed more efficient for the purification of IgG regarding the yielding (76,8 and 74,7%, respectively) and dynamic capacity (4,23 and 4,51 mg of IgG/mL of absorbent, respectively), than the control gel DEAE-agarose (51,9% of yield and 3,19 mg of IgG/mL of adsorbent). / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T12:05:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goes_LidianaCristinade_M.pdf: 4033239 bytes, checksum: 07d68044592d217e51b3096b35496c87 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Este trabalho visou investigar o efeito dos quelatos IDA-Ni(II), CM-Asp-Ni(II), TED-Ni(II) e TREN-Ni(II) na purificação de pró-insulina humana recombinante com cauda de poli(histidina) (PIS) a partir de solução clarificada, obtida após solubilização dos corpos de inclusão e sulfitólise, proveniente do processo de produção de insulina (BIOMM, MG). Dentre os adsorventes estudados, Sepharose-TREN-Ni (II) apresentou a maior capacidade de adsorção em termos de PIS, cerca de 50% da proteína alimentada. Os demais adsorventes apresentaram a seguinte ordem de capacidade de adsorção IDA > HisTrap > CM-Asp > TED. Em termos de seletividade, os adsorventes com CM-Asp-Ni (II) e TEDNi (II) imobilizados apresentaram maior seletividade. Os dados de adsorção de PIS no equilíbrio a 25°C foram bem representados pelo modelo de Langmuir-Freundlich., fornecendo valores de capacidade máxima de adsorção entre 43,14 mg e 154,56 mg de PIS/g de adsorvente e valores de constante aparente de dissociação entre 10-5 a 10-7 M. O estudo termodinâmico para adsorção de PIS nos adsorventes estudados na faixa de 4 a 25°C (exceto para TED-Ni(II), faixa de temperatura de 25 a 45°C) mostrou diminuição dos valores de Kd com o aumento da temperatura, fornecendo valores de ?H° positivos para todos os casos, indicando que a adsorção de PIS nos quelatos estudados é um processo endotérmico. Os valores de ?Gº foram negativos para todos os sistemas, indicando que a adsorção é espontânea. Os valores de ?Sº encontrados foram positivos e pouco alterados com o aumento de temperatura em todos os casos, favorecendo a complexação proteína-íon metálico. / Abstract: This work sought to investigate the effect of the chelating groups IDA-Ni(II), CMAsp- Ni(II), TED-Ni(II) and TREN-Ni(II) in the purification of a recombinant human proinsulin poly-histidine tagged (PIS) starting from clarified solution, obtained from the dissolution of inclusion bodies and oxidative sulfitolysis, originating from the process of insulin production (BIOMM, MG). Among of the studied adsorbents, Sepharose-TREN-Ni (II) it presented the largest adsorption capacity in terms of PIS, about 50 % of the fed protein. The other adsorbents presented the following order in adsorption capacity IDA > HisTrap > CM-Asp > TED. In selectivity terms, the adsorbents with the chelating groups CM-Asp-Ni (II) and TED-Ni (II) immobilized presented a larger selectivity. The data of adsorption of PIS in the equilibrium to 25°C were well represented by the model of Langmuir-Freundlich, supplying values of maximum adsorption capacity between 43, 14 mg and 154, 56 mg of PIS / g adsorbent and values of apparent constant of dissociation among 10-5 to 10-7 M. The thermodynamic study for adsorption of PIS in the adsorbents considering the range from 4 to 25°C (except for TED-Ni (II), temperature range from 25 to 45°C) showed decrease of the values of Kd with the increase of temperature, providing positive values of ?H° for all of the cases, indicating that the adsorption of PIS in the studied chelating groups is a endothermic process. The values of ?Gº were negative for all of the systems, indicating that the adsorption is spontaneous. The values of ?Sº founded were positive and had little alteration due to temperature increase in all of the cases, favoring the formation of complex protein-metallic ion. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Sonia Maria Alves Bueno, Everson Alves Miranda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-14T01:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bresolin_IaraRochaAntunesPereira_M.pdf: 5778906 bytes, checksum: fdc379e439c53f0a541cc811f65e2be1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Nos últimos tempos têm-se estudado plantas como biorreatores para a produção de proteínas recombinantes de interesse industrial e farmacêutico. Quando comparadas a outros sistemas de expressão, as plantas apresentam algumas vantagens, como a realização de modificações pós traducionais, baixo custo de produção, baixos riscos de contaminação por patógenos humanos, possibilidade das proteínas serem acumuladas em órgãos específicos que podem gerar maior estabilidade das mesmas. Visando a obtenção de conhecimento de base para posterior aplicação na purificação de proteínas recombinantes produzidas em plantas transgênicas, realizaram-se estudos de purificação por cromatografia negativa em Sepharose-TREN de proteínas contendo ampla faixa de pI (IgG humana), pI ácidos (HSA e BSA) e pI alcalinos (aprotinina e lisozima), adicionadas artificialmente ("spiking") a extrato de soja. Na cromatografia negativa, a proteína alvo é recuperada na fração não retida, enquanto as proteínas do extrato de soja permanecem adsorvidas na matriz. Visando maximizar a adsorção de proteínas do extrato de soja, avaliaram-se diferentes sistemas tamponantes, sendo que 2,8% das proteínas alimentadas foram detectadas na etapa de lavagem, quando se utilizou MES 25 mmol/L pH 6,5. Adicionandose IgG humana na forma de "spiking" ao extrato de soja na concentração de 1,0 mg/mL, recuperou-se 38% na lavagem com pureza de 86% e fator de purificação de 4,6. Por meio de experimentos de curva de ruptura, determinou-se a capacidade dinâmica de Sepharose- TREN como sendo 25,4 mg/mL de gel a uma vazão de 0,5 mL/min. Para proteínas de valores de pI ácidos, houve adsorção total das proteínas alimentadas enquanto que proteínas de pI alcalinos foram parcialmente adsorvidas, indicando que as interações que predominam entre o adsorvente Sepharose-TREN e proteínas são de natureza eletrostática. Para efeitos de comparação foram realizados experimentos de IMAC com íons Ni(II) e Cu(II) imobilizados em Sepharose-TREN alimentando-se extrato de soja com "spiking" de IgG humana. Resultados mostraram que a IgG apresentou pureza similar, porém com menor recuperação que em cromatografia negativa em Sepharose-TREN. Experimentos em Sepharose-DEAE foram realizados alimentando-se extrato de soja com "spiking" de IgG humana, possibilitando a adsorção de proteínas do extrato de soja e a purificação de IgG, porém com menor recuperação de IgG na lavagem quando comparado a Sepharose-TREN. / Abstract: In recent years, plants have been studied as bioreactors for the production of recombinant proteins with industrial and pharmaceutical interest. When compared to other expression systems, plants have several advantages, such as the possibility of posttranlationals modification, low production cost, low risk of contamination by human pathogens, and the accumulation of proteins in specific organs that can generate greater protein stability. Bioseparation is a key step in the bioprocessing of plant material used as biorreactors and chromatography a key unit operation in the bioseparation train. Negative chromatography - a chromatography in which the target protein is recovered in the nonretained fractions while impurities remain adsorbed in the matrix - allows product recovery in one step. Aiming to obtain the basic knowledge for further application in the purification of recombinant proteins produced in transgenic plants, in this work we evaluated the use of negative chromatography on Sepharose-TREN with spiking of proteins of wide pI range (human IgG), high pI (HSA and BSA) and low pI (aprotinin and lysozyme) added in soybean extract. Experiments using MES 25 mmol/L pH 6.5 as adsorption buffer, 2.8% of the total protein fed was found in flowthrough fractions. Adding 1.0 mg/mL of human IgG in soybean extracts, 38% of total protein was recovered in the washing step with 86% purity and purification factor of 4.6. Breakthrough curves showed that Sepharose-TREN presented a dynamic capacity of 25.4 mg of total protein per milliliter of gel at a flow rate of 0.5 mL/min. Total protein adsorption was achieved when proteins of low pI were used while proteins of high pI were partially adsorbed, showing that the interactions between the adsorbent and TREN-Sepharose proteins are electrostatic. Sepharose-TREN was used as chelating ligand in IMAC with immobilized Ni(II) and Cu(II). Experiments with soybean extract spiked with IgG as feedstream solution resulted in similar purity but a lower IgG recovery than those with Sepharose-TREN in negative chromatography. Classic ion exchanger Sepharose-DEAE adsorbed the native soybean proteins while IgG was recovered in nonretained fractions with similar purity but lower recovery than when using Sepharose-TREN. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-15T20:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BoguszJunior_Stanislau_D.pdf: 3727338 bytes, checksum: 9a31fb487f5c969747c0dc90cbde0d73 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Nos últimos anos, no Brasil, o volume das exportações de pimentas Capsicum aumentou significativamente, fato que fez com que este produto agrícola se posicionasse como a segunda principal hortaliça exportada pelo país. Acredita-se que o crescimento nas exportações de pimentas esteja relacionado à avidez do mercado por este condimento que é amplamente empregado em formulações alimentícias industrializadas ou caseiras em diversos países. Além disso, a indústria de alimentos as emprega largamente como agente colorante e flavorizante em molhos, sopas, carnes processadas, lanches, doces e bebidas alcoólicas. Dada esta ampla utilização, pode-se considerar os caracteres sensoriais, proporcionados pelas pimentas, como um fator importante na qualidade sensorial dos alimentos que as empregam em suas formulações. Neste trabalho, o objetivo foi analisar a fração volátil e a fixa de três variedades de pimentas Capsicum brasileiras: malagueta (Capsicum frutescens), dedo-de-moça (Capsicum baccatum var. pendulum) e murupi (Capsicum chinense) em dois estádios de maturação (tecnológica e comercial). Para a fração volátil foi empregada microextração em fase sólida do espaço de cabeça (HS-SPME, ¿Headspace-Solid Phase Microextraction¿). Foram testadas as fibras: carboxen/polidimetilsiloxano (CAR/PDMS-75µm), polidimetilsiloxano (PDMS-100µm), divinilbenzeno/polidimetilsiloxano (DVB/PDMS-65µm), carbowax/divinilbenzeno (CW/DVB-70µm), e divinilbenzeno/carboxen/polidimetilsiloxano (DVB/CAR/PDMS-50/30µm), sendo que, esta última foi a que apresentou melhor eficiência na captura dos voláteis. Para esta fibra foram otimizadas as condições de extração utilizando delineamento composto central rotacional (DCCR). Empregando-se as condições ótimas de extração por HS-SPME e cromatografia gasosa (GC, ¿Gas Chromatography¿) hifenada a detector de ionização em chama (FID, ¿Flame Ionization detector¿) e espectrometria de massas (MS, ¿Mass Spectrometry¿), um total de 83 voláteis foram identificados na pimenta malagueta, em sua maioria ésteres e alcoóis; enquanto que na pimenta dedo-de-moça foram identificados 50 voláteis, em sua maioria monoterpenos e sesquiterpenos e na pimenta murupi foram identificados 79 voláteis, em sua maioria ésteres e sesquiterpenos. Também foi verificada uma diminuição das áreas dos picos dos voláteis nas três amostras, com o processo de maturação, principalmente nas amostras de pimenta dedo-de-moça, na qual a maioria dos voláteis desapareceu com o amadurecimento. Para a análise das frações voláteis das pimentas, também foram desenvolvidas e otimizadas metodologias de cromatografia gasosa bidimensional abrangente (GCxGC, ¿Comprehensive Two-Dimensional Gás Chromatography¿) hifenada aos detectores FID e espectrometria de massas por tempo de voo (TOF/MS, ¿Time of Flight Mass Spectrometry¿). Através destas técnicas multidimensionais um total de 220 compostos voláteis foi identificado (125 em pimenta malagueta, 123 em murupi e 75 em dedo-de-moça), destes compostos, 24 apresentaram potencial para discriminação das amostras e foram utilizados na análise de componentes principais (PCA). Os resultados do PCA permitiram discriminar as amostras entre si e também segundo seus estádios de maturação. As amostras de pimenta malagueta foram discriminadas principalmente por compostos pertencentes ao grupo dos ésteres ramificados; a pimenta murupi, por sesquiterpenos e a pimenta dedo-de-moça pela presença de aldeídos e metoxipirazina. Além disso, foi avaliado o potencial antioxidante das frações fixas das três pimentas, também em diferentes estádios de maturação e em diferentes épocas do ano. Nas análises foram empregados os ensaios de compostos fenólicos totais (CFT) por Folin-Ciocalteau, e atividade antioxidante pelos métodos de redução do ferro (FRAP- ¿Ferric Reducing Antioxidant Power¿) e de seqüestro do radical livre DPPH. (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). Os maiores valores de CFT foram observados para as amostras imaturas do primeiro ano sendo que os valores médios de fenólicos totais aumentaram com o amadurecimento de todas as pimentas investigadas. Verificou-se também a existência de correlações positivas entre os resultados de CFT e os métodos de ação antioxidantes, sendo que, esta correlação foi maior para o método de FRAP do que para o de DPPH, provavelmente em função das particularidades de estereoquímica destes ensaios antioxidantes / Abstract: In the last years, in Brazil, the exportations of chili peppers has increased significantly, therefore, this agricultural product became the second largest vegetable exported by the country. It is believed, that growth in exports of chili peppers is related to the greed of the market for this spice that is widely used in food formulations in many different countries. Moreover, the food industry employs the chili peppers as coloring and flavoring agent in sauces, soups, processed meats, snacks, sweets and beverages. Given this widespread use can be considered the characters provided by the sensory chili peppers as an important factor in the sensory quality of food. The aim of this study was to evaluate the volatile and fixed fractions of three varieties of Brazilian chili peppers: ¿malagueta¿ (Capsicum frutescens), ¿dedo-de-moça¿ (Capsicum baccatum var. Pendulum) and ¿murupi¿ (Capsicum chinense) in two stages of maturation (technological and commercial). For the volatile fraction was used headspace-solid phase microextraction (HS-SPME). For the extraction phase, five fibers were tested: carboxen/polydimethylsiloxane (CAR/PDMS-75µm), polydimethiylsiloxane (PDMS-100µm) divinylbenzene/polydimethylsiloxane (DVB/PDMS-65µm), carbowax/divinylbenzene (CW/DVB-70µm), and divinylbenzene/carboxen/polydimethylsiloxane (DVB/CAR/PDMS-50/30µm) that showed be the more efficient fiber in trapping the volatiles compounds. The optimization of the extraction conditions was carried out using multivariate strategies such as factorial design and response surface methodology. Using the optimal extraction by HS-SPME and gas chromatography (GC) detector coupled with flame ionization (FID) and mass spectrometry (MS), a total of 83 compounds were identified in malagueta, mostly esters and alcohols, while in dedo-de-moça 50 compounds were identified, mostly monoterpenes and sesquiterpenes and in murupi 79 compounds were identified, mostly esters and sesquiterpenes. Moreover, a decrease of peak areas with the maturation process of compounds was observed in the three samples, especially in samples of dedo-de-moça, in which most of the compounds disappeared during ripening. In the present work, methods for comprehensive two-dimensional gas chromatography (GC × GC) coupled to FID detectors and mass spectrometry time of flight (TOF/MS) were developed and optimized for the analysis of volatile fractions of chili peppers. Through these multidimensional techniques a total of 220 volatile compounds were identified, these compounds, 24 showed potential to discriminate the samples and were used in principal component analysis (PCA). The results of PCA show variability among samples and also according to their maturation stages. Samples of malagueta were discriminated mainly by compounds belonging to the group of branched esters, the murupi, by sesquiterpenes and the dedo-de-moça by the presence of aldehydes and methoxypyrazine. Also, in this study the antioxidant potential of fixed fractions of three peppers was evaluated, also in different stages of maturation and in different seasons. For analysis, the tests of total phenolic compounds (CFT) by Folin-Ciocalteau and antioxidant activity by the methods of reduction of iron (FRAP, "Ferric Reducing Antioxidant Potential¿) and DPPH radical scavenging assay. (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) were used. The highest values of CFT were observed for the immature samples of the first year and the medium values of total fenólicos increased with the ripening of all of the investigated peppers. The existence of positive correlations between the results of CFT and the antioxidant action methods was also verified, and, this correlation went larger for the method of FRAP than for the one of DPPH, probably in function of the particularities of stereochemistryof these antioxidant assays / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-19T14:33:02Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Scaliante de Moura - 2011.pdf: 3031382 bytes, checksum: 68459ae83ddcf979fb6e6346a7cf6690 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-20T14:31:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Scaliante de Moura - 2011.pdf: 3031382 bytes, checksum: 68459ae83ddcf979fb6e6346a7cf6690 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-20T14:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Scaliante de Moura - 2011.pdf: 3031382 bytes, checksum: 68459ae83ddcf979fb6e6346a7cf6690 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-03-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / (não consta) / (não consta)

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Foram desenvolvidos e validados trÃs mÃtodos robustos para a determinaÃÃo de amoxicilina, norfloxacino, oxcarbazepina (OXC) e 10,11-dihidro-10-hidroxicarbamazepina (MHD) em plasma, utilizando cromatografia lÃquida de alta eficiÃncia em fase reversa (RP-HPLC) com detecÃÃo ultravioleta, fluorescÃncia e espectrometria de massa, respectivamente. Os mÃtodos envolveram extraÃÃo lÃquido-lÃquido, com diclorometano (amoxicilina), acetonitrila (amoxicilina e norfloxacino), Ãter etÃlico-diclorometano (60:40 v/v, oxcarbazepina), utilizando cefadroxil, ciprofloxacino e d10-carbamazepina como padrÃes interno (PI). SeparaÃÃes cromatogrÃficas foram realizadas utilizando colunas Gemini C18 5 Âm (150 X 4,6 mm), Synergi RP-MAX 4 Âm (150 X 4,6 mm) e Luna C18 Âm (150 X 4,6 mm), com sistemas de eluiÃÃo constituÃdos por mistura de tampÃo fosfato de 0,01 M (pH 3,5)/acetonitrila (95:5 v/v), acetonitrila-tampÃo fosfato (85:15, v/v) e acetonitrila-Ãgua (50:50 v/v) + 20 mM Ãcido acÃtico, respectivamente. As curvas de calibraÃÃo foram lineares, nas faixas de 0,5 a 40 Âg/mL, 30 a 3500 ng/mL, 20 a 5250 ng/ml e 40 a 10500 ng/ml. As recuperaÃÃes nas concentraÃÃes de 1,5, 15 e 30 Âg/ml foram de 59,4%, 60,5% e 67,1% para amoxicilina; 90, 1400 e 2800 ng/mL foram de 103,5%, 100,2% e 100,2% para norfloxacino, 60, 2000 e 4000 ng/ml foram de 105,4, 89,2 e 92,8% para OXC e 120, 4000 e 8000 ng/ml foram de 88,4, 88,7 e 90,6% para MHD, respectivamente. Os mÃtodos validados incluÃram avaliaÃÃo de precisÃo e exatidÃo intra e interlote, assegurando que estes estavam dentro de limites admissÃveis. Os mÃtodos foram entÃo aplicados com sucesso em estudos de bioequivalÃncia, administrando 500 mg ou 400 mg das formulaÃÃes referÃncia/teste de amoxicilina e norfloxacino, e em estudos farmacocinÃticos com formulaÃÃo de oxcarbazepina suspensÃo (6%), em voluntÃrios sadios. / A robust method for the determination of amoxicillin, norfloxacin, oxcarbazepine (OXC) and its active metabolite, 10,11-dihydro-10-hydroxycarbamazepine (MHD) in human plasma, using reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) with ultraviolet, fluorescence and mass spectrometry detection, respectively, have been developed and valited. The methods involve precipitation of plasma protein with dichloromethane (amoxicillin), acetonitrile (amoxicillin and norfloxacin) and diethyl etherâdiclhoromethane (60:40 v/v, oxcarbazepine), using cefadroxil, ciprofloxacin and deuterade carbamazepine (d10-carbamazepine) as internal standard (IS). Chromatographic separations were performed on a column Gemini C18 5 Âm (150 X 4.6 mm), Synergi MAX-RP 4 Âm (150 X 4.6 mm) and Luna C18 5 Âm (150mm X 4.6 mm) with an elution system consisting of a mixture of 0.01 M buffer phosphate (pH 3.5)/acetonitrile (95:05 v/v), phosphate bufferâacetonitrile (85:15, v/v) and acetonitrile/water (50:50 v/v) + 20mM acetic acid, respectively. The calibration curve was linear, in the range of 0.5 to 40 Âg/mL, 30 to 3500 ng/mL, 20 to 5250 ng/mL and 40 to 10,500 ng/mL. The recoveries at concentrations of 1.5, 15 and 30 Âg/mL were foram 59.4%, 60.5% and 67.1% for amoxicillin; 90, 1400 and 2800 ng/mL were 103.5%, 100.2% and 100.2% for norfloxacin, 60, 2000 and 4000 ng/mL were 105.4, 89.2 and 92.8% for OXC and 120, 4000 and 8000 ng/mL were 88.4, 88.7 and 90.6% for MHD, respectively. The statistical evaluation of the developed method was conducted by examining within-batch and between-batch precision data, which were within the required limits. The methods were successfully applied in bioequivalence studies given 500 or 400-mg of the reference formulation / test amoxicillin and norfloxacin, and pharmacokinetic studies with formulation of oxcarbazepine suspension (6%) in healthy volunteers.

O presente trabalho realizou uma investigação da composição total dos nutrientes e alguns contaminantes presentes em amostras de soja, transgênicas e convencionais, provenientes de diferentes regiões do Brasil. Observou-se com esse estudo que, levando em conta somente o teor total dos elementos, nada pode ser afirmado em relação à modificação genética. Porém, com estes resultados, pôde ser feita uma separação das amostras por região, indicando a utilidade do método no rastreamento e certificação de origem das amostras. Na segunda etapa, extrações da fase protéica foram realizadas, utilizando-se tampão TRIS-HNO3 (pH 7,5), para estabilização dos complexos organo-metálicos. As espécies presentes nos extratos foram separadas e seu conteúdo mineral analisado, utilizando um sistema de acoplamento HPLC - ICP OES, valendo-se de dois tipos de fase estacionária (Fractogel® EMD BioSEC, Merck, e Superdex 200, Amershan Bisosciences), a fim de se verificar como tais elementos e espécies se comportam nos dois tipos de coluna e nos dois tipos de soja, convencional e transgênica. Pode-se observar diferença na distribuição dos elementos em relação à faixa de tamanho das proteínas, permitindo um reconhecimento entre a soja convencional e a geneticamente modificada. Contudo, testes de biodisponibilidade realizados in vitro mostraram que a modificação não altera a disponibilidade dos elementos, e nem o teor de ácido fítico, que é um dos principais antinutrientes presentes na soja. / The total composition of the nutrients and some contaminants present in transgenic and conventional soybean samples from different regions of Brazil was evaluated. Considering the total content of the elements, this study showed that nothing can be affirmed in relation to the genetic modification. However, these results indicate that the tracking and geographical origin of the samples can be verified. The extractions of the protein phase have been carried through, using TRIS-HNO3 buffer (pH 7,5), for stabilization of the organo-metallic complexes. The species present in extracts have been separated and its mineral content has been analyzed, using HPLC - ICP OES coupled system. Two kinds of stationary phases (Fractogel® EMD BioSEC, Merck, and Superdex 200, Amershan Biosciences) were used, in order to verify the elements and species behavior in the conventional and genetically modified soybean samples. Difference in the distribution of the elements in relation to the molecular size of proteins could be observed, allowing a recognition pattern between conventional and genetically modified soy. However, in vitro bioavailability experiments have shown that the modification does not affect the availability of the elements neither the phytic acid content, which is one of the main antinutrients presents in soybean.

Visando aumentar produtividade das lavouras de cana-de-açúcar, devido á interesses econômicos está havendo uma utilização cada vez maior de pesticidas. A água utilizada neste estudo foi proveniente do Ribeirão do Feijão, responsável pelo abastecimento da cidade de São Carlos SP. A principal cultura no entorno da bacia do Ribeirão do Feijão é a da cana-de-açúcar, por este motivo os pesticidas ametrina, atrazina, diuron e fipronil foram selecionados para este estudo, pois segundo pesquisa, estes compostos são muito utilizados nesta cultura. Os pontos de amostragem foram três, na nascente, ao longo do rio próximo a uma cultura de cana-de-açúcar e próximo à estação de tratamento de água. Por este motivo, esta pesquisa teve como objetivo a aplicação da extração em fase sólida (SPE) e otimização da técnica de cromatografia liquida utilizando um detector de diodos (HPLC DAD) para a determinação de multiresíduos de pesticidas em amostras de água. As técnicas utilizadas apresentaram bons resultados. A validação do método foi feita para o equipamento (HPLC DAD) e para o método (SPE HPLC- DAD). Os limites de detecção e quantificação do equipamento variaram de 0,02 a 0,05 mgL-1 e 0,07 a 0,17 mgL-1 respectivamente. A linearidade foi de 0,99 e a precisão foi em torno de 0,41 a 2,56%. Calculou-se a recuperação do método de extração que variou entre 90 e 95%, a linearidade foi de 0,99 e exatidão que foi próximo a 100%.Todos os resultados de validação do método estão de acordo com a Legislação brasileira e internacional. / Seeking to increase productivity of the sugarcane farmings, due to an economical interests, it has been used pesticides each more. The water used in this study is from Ribeirão do Feijão, responsible for the provisioning of the city of São Carlos, in their state of São Paulo. The main culture around Ribeirão do Feijão is sugarcane, and for this reason the pesticides ametrine, atrazine, diuron and fipronil were selected for this study, because according to researches, these compounds are very used in this culture. The sample points were three: in the source, along the river, near to a sugarcane culture and near to the station of treatment of water. For aim this, research had an objective the application of the solid phase extraction (SPE) and optimization of the liquid chromatography technique using a detector of diodearrary (HPLC. DAD) for the determination of multiresiduos of pesticides in samples of water. The validation of the method was made for the equipment (HPLC. DAD) and for the method (SPE. HPLC - DAD). The detection limits and quantification of the equipment varied from 0.02 to 0.05 mgL-1 and 0.07 to 0.17 mgL-1 respectively. The linearity was of 0.99 and the precision was around 0.41 to 2.56%. It was calculated the recovery of the extraction method that varied between 90 and 95%, the linearity was of 0.99and the accuracy was close to 100%. All the results of validation of the method are in agreement with the Brazilian and international Legislation.