Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2015-05-15T17:39:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Mestrado Márcio da Silveira Gomes (1).pdf: 1129248 bytes, checksum: 6314c532c7740c0f3e5013f7b7474b66 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T17:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Mestrado Márcio da Silveira Gomes (1).pdf: 1129248 bytes, checksum: 6314c532c7740c0f3e5013f7b7474b66 (MD5) Previous issue date: 2013-11-25 / CNPq / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica de caráter granulomatosa, que afeta pele e nervos periféricos, causada pelo Mycobacterium leprae ou bacilo de Hansen. Os receptores denominados Toll-like (TLR), encontrados nas células do sistema imune, são primordiais no reconhecimento das estruturas dos bacilos. Os heterodímeros TLR 2-TLR 1 e os homodímeros TLR 2 e TLR 4 são fundamentais no desenvolvimento da resposta imune inata frente às agressões provocadas por micobactérias. Vários estudos corroboram o fato de que polimorfismos nos TLRs podem influenciar a susceptibilidade a uma variedade de infecções, incluindo a hanseníase. As citocinas do padrão Th2, especialmente IL-4 e IL-10, são responsáveis pela supressão da resposta dos macrófagos a infecção pelo agente etiológico da hanseníase. O presente estudo tem como objetivos determinar os genótipos de pacientes hansênicos e controles sadios em relação ao receptor TLR 2 e a frequência de apresentação destes nas formas multibacilar e paucibacilar da hanseníase e o perfil de produção das citocinas IL-4 e IL-10 em pacientes hansênicos. As amostras foram analisadas no Laboratório de Imunopatologia Keizo-Asami (LIKA), UFPE. Dos casos analisados 79,5% foram classificados como multibacilares e 20,5% como paucibacilares O genótipo Ins/Del foi mais comumente encontrado nos pacientes hansênicos. O genótipo Del/Del foi associado com o efeito de proteção no desenvolvimento da hanseníase (OR=0,58, IC95% 0,07-7,48, p= 0,44). Quando analisados ambos os genótipos em relação a forma paucibacilar Ins/Del (OR= 0,68; IC95% : 0,14-3,85; p: 0,42); Del/Del (OR= 0,31, IC95% : 0,01-0,38; p: 0,38), ambos apresentaram efeito de proteção em relação a forma paucibacilar e ambos os genótipos Ins/Del (OR= 1,45; IC95%; 0,25-6,95; p: 0,38) e Del/Del (OR= 3,2; IC95%; 0,04-57,91) apresentaram o risco de desenvolver a forma multibacilar. Observou-se maior produção de IL-4 e IL-10 em pacientes multibacilares e uma redução na produção de IL-4 e IL-10 após a primeira dose de tratamento poliquimioterápico, que é indicativo de uma modulação imunológica do individuo hansênico.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T17:15:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese edleneribeiro.pdf: 1980907 bytes, checksum: 2427c8e8ae36bd96b7ecdb2acc42e917 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T17:15:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese edleneribeiro.pdf: 1980907 bytes, checksum: 2427c8e8ae36bd96b7ecdb2acc42e917 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / FACEPE / A dietilcarbamazina (DEC) é um fármaco filaricida mais amplamente utilizado no tratamento e controle da filariose, e tem mostrado um potencial para tratamanto de doenças inflamatórias como resultado de sua interferência no metabolismo do ácido araquidônico, assim como inibindo fatores de transcrição e induzindo células inflamatórias à apoptose em doenças pulmonares. As doenças pulmonares principalmente as crônicas afetam milhares de pessoas em todo o mundo, representando um sério problema de saúde pública. Dentre as mais comuns podemos citar a asma, doença obstrutiva crônica, apneia obstrutiva do sono, doenças pulmonares ocupacionais, fibrose pulmonar e hipertensão pulmonar (HP), doenças graves e progressivas, que podem levar à incapacidade e à morte. Estima-se que a incidência anual de hipertensão pulmonar esteja em torno de um a dois casos por milhão de habitante, sendo uma doença grave e incapacitante e com sobrevivência histórica média de três a cinco anos após diagnóstico. Estudos demonstram que a HP apresenta cunho inflamatório, com presença no tecido pulmonar de infiltrados inflamatórios perivascular de macrófagos e linfócitos. O uso de modelo animais para avaliar o progresso da HP é extremamente importante, devido a sua complexidade, uma vez que se torna inviável o uso de material humano para tais análises, visto que, na maioria dos casos a doença é diagnosticada quando se encontra em estado avançado. Outro fato importante é a procura de novos potenciais fármacos, na busca de uma melhor qualidade de vida e quem sabe a cura da HP. Inicialmente investigamos o desenvolvimento da HP via inflamação em camundongos C57BL/6J com uma injeção intraperitoneal de monocrotalina (600 mg/kg) uma vez por semana durante 4 semanas (total de quatro doses) estabelecendo os grupos MCT7, MCT14, MCT21, MCT28 com o objetivo de compreender os padrões de reações teciduais e moleculares. A análise dos resultados mostraram que a monocrotalina promoveu alterações teciduais, aumento de citocinas inflamatórias de fatores de crescimento e do estresse oxidativo desempenhando um papel importante no desenvolvimento da HP em camundongos. Outro aspecto que avaliamos foi a ação da DEC sobre as alterações teciduais, deposição de colágenos e apoptose em modelo experimental de HP, estabelecendo os grupos MCT28 e MCT28/DEC. Observamos que a DEC reduziu as alterações teciduais, deposição de colágeno e aumentou os fatores relacionados a apoptose demonstrando resultados bastante satisfatórios. / The diethylcarbamazine (DEC) is a filaricide drug most widely used in the treatment and control of filariasis, and it has shown potential for treatment inflammatory diseases as a result of their interference with arachidonic acid metabolism, as well as inhibiting transcription factors and inducing inflammatory cells to apoptosis in lung diseases. Pulmonary diseases, especially chronics, affect thousands of people around the world, representing a serious public health problem. Among the most common pulmonary diseases there are asthma, chronic obstructive lung disease, obstructive sleep apnea, occupational lung disease, lung fibrosis and pulmonary hypertension (PH). They are severe and progressive disease, and can lead to disability and death. It is estimated that the annual incidence of pulmonary hypertension is around one to two cases per million inhabitants, and this is a serious disease, debilitating, and the historical median survival is of three to five years after diagnosis. Studies show that PH has inflammatory nature, and inflammatory perivascular infiltrates of lymphocytes and macrophages are present in the lung tissue. These injuries of the HP include medial hypertrophy of the arteries and pulmonary arterioles due to excessive proliferation of smooth muscle cells and fibrosis. The use of animal models to evaluate the PH progress is extremely important due to its complexity, since it is not feasible using human material for such analysis since, in most cases, the disease is diagnosed when it in advanced state. Another important fact is the search for new potential drugs to afford a better quality of life and perhaps the cure of PH. Initially we investigated the PH through developing inflammation in C57BL/6J mice with an intraperitoneal injection of monocrotaline (600 mg/kg) once a week for 4 weeks (total of four doses) setting the MCT7, MCT14, MCT21, MCT28 groups with order to understand the patterns of tissue and molecular reactions. The analysis of the results showed that the monocrotaline promoted tissue changes, increased inflammatory cytokine growth factors and oxidative stress plays, an important role in the development of PH in mice. Another aspect that we evaluated was the action of DEC on the tissue changes, collagen deposition and apoptosis in PH experimental model, establishing the MCT28 group and MCT28/DEC group. We noted that DEC reduced tissue changes, collagen deposition and increased factors related apoptosis demonstrating satisfactory results. Based on these results an aspect that we will also assess the DEC's action in chronic inflammation, noting that cytokines, transcription factors may be involved in the development and resolution of chronic lung disease.

Orientadores: Helena Zerlotti Wolf Grotto, Carmen Silvia Passos Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:20:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jacober_MicheleLealVieira_M.pdf: 5411345 bytes, checksum: 3d65908f63a20305387ec02808acdd0e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os pacientes com câncer podem apresentar diversas anormalidades hematológicas, sendo a anemia a alteração mais comum. A etiologia da anemia é multifatorial, envolvendo mecanismos que podem estar relacionados ou não à doença (perda de sangue, hemólise, infiltração medular), ao tipo e estágio do tumor e também à terapêutica utilizada (radioterapia e quimioterapia). A redução nas taxas de hemoglobina pode estar relacionada a alterações na produção e na resposta dos precursores eritróides à Eritropoetina, à liberação de citocinas nas diversas fases da doença e também ao déficit nutricional muitas vezes encontrado nesses indivíduos. O objetivo desse estudo foi avaliar aspectos relacionados à atividade inflamatória sobre o metabolismo do ferro e a eritropoiese em pacientes com tumores sólidos. Foram coletadas amostras de sangue de 402 pacientes adultos com diversos tipos de câncer. Os pacientes com anemia foram sub-classificados como tendo anemia ferropriva (AF) (hipoferremia e hipoferritinemia), Anemia de Doença Crônica (ADC) (hipoferremia e ferritina sérica normal ou aumentada) e Anemia Relacionada ao Câncer (ARC) (sem anormalidades no metabolismo do ferro). Para a avaliação da eritropoiese foram realizados hemograma completo e dosagem de eritropoetina; para a avaliação do metabolismo do ferro: determinações do ferro sérico, capacidade de ligação do ferro à transferrina, ferritina e receptores solúveis da transferrina (sTfR) e Índice sTfR/ log ferritina; para a avaliação da resposta inflamatória: dosagens de Proteína C Reativa (PCR), Interleucinas 1? e 6, Fator de Necrose Tumoral alfa, neopterina e pro-hepcidina séricas e determinação da Velocidade de Hemossedimentação das hemáceas(VHS). Dentre os pacientes com câncer 34,8 % apresentaram anemia. O tipo de anemia mais freqüente foi a ARC (37%) seguido pela ADC (20,7%) e finalmente pela AF (17%). Os níveis de PCR, IL-6, VHS e IL-1? foram significativamente superiores em pacientes com ADC quando comparados com AF, ARC ou em pacientes sem anemia. Os níveis de Pró-Hepcidina, TNF-? e neopterina não foram diferentes entre os grupos de pacientes com câncer, mas foram superiores quando comparados a um grupo de indivíduos normais. O efeito negativo de fatores inflamatórios sobre a eritropoiese foi observado no grupo de pacientes com ADC, onde houve correlação inversa entre hemoglobina e ferritina sérica, PCR e IL-6. Não houve correlação entre os níveis de pro-hepcidina com o grau de anemia ou com parâmetros relacionados ao metabolismo de ferro. De acordo com nossos resultados, embora não tenha sido possível demonstrar uma relação direta entre inflamação e alterações no metabolismo do ferro, a atividade inflamatória presente em todos os grupos de pacientes, aparentemente está especialmente relacionada à patogênese da ADC. A hepcidina é reconhecida como importante reguladora e como principal mediadora das alterações do metabolismo do ferro na ADC. No presente trabalho, usando um ensaio imunoenzimático comercial, não foi possível demonstrar o significado fisiológico da pro-hepcidina na anemia em pacientes com câncer / Abstract: Patients with cancer present several hematological alterations, and anemia is the most common of them. Anemia ethiology is multifactorial and can be related or not to the disease (bleeding, hemolysis, bone marrow infiltration), to the type and stage of the tumor and also to the therapy. Hemoglobin reduction can be consequent to alteration in production and response of erythroid precursor to erythopoietin, releasing of cytokines and nutritional deficiency. The objective of this study was to evaluate some aspects related to inflammatory activity on iron metabolism and erythropoiesis in patients with solid tumors. Blood samples from 402 patients were analyzed and those patients with anemia were subdivided into: iron deficient anemia (IDA) (hypoferremia and hypoferretinemia), chronic disease anemia (CDA) (hypoferremia and serum ferritin normal or elevated) and anemia related to cancer (ARC) (no iron abnormalities). Erythropoiesis was assessed by complete blood cell count and erythropoietin determinations; iron metabolism by serum iron, total iron binding capacity, serum ferritin, soluble transferrin receptors (sTfR) and sTfR/log ferritin indices; inflammatory response by C-Reactive protein (CRP), interleukins 1β e 6, tumor necrosis factor α (TNF- α), neopterin, pro-hepcidin and erythrocyte sedimentation rate (ESR). Anemia was observed in 34.8% of cancer patients. The majority of patients presented ARC (37%), followed by CDA (20.7%) and IDA (17%). CRP, IL-6, ESR and IL-1β levels were significantly higher in patients with CDA than in IDA, ARC and cancer without anemia. Pro-hepcidin, TNF-α and neopterin values were not different among anemic patients groups, although higher levels of neopterin had been observed in patients with cancer when compared to normal individuals. The negative effect of inflammatory factors on erythropoiesis represented by inverse correlations between hemoglobin and serum ferritin, CRP and IL-6 were observed in ADC group. There was correlation neither between pro-hepcidin levels and anemia degree nor between pro-hepcidin and iron metabolism parameters. According to our results, although it was not possible to demonstrate a direct correlation between inflammation and iron metabolism alterations, the inflammatory activity apparently is related to ADC pathogenesis. Hepcidin is an important regulator of iron metabolism and has been recognized as the main mediator of iron metabolism alterations in CDA. In our study, by using ELISA test, it was not possible to show the participation of pro-hepcidin in anemia in cancer patients / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Heitor Moreno Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T03:27:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbaro_NataliaRuggeri_M.pdf: 2773445 bytes, checksum: e0d750017009a49d1fe96a9e75554e89 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A inflamação tem sido associada à hipertensão arterial e lesões de órgãos-alvo, sendo que elevados níveis de biomarcadores inflamatórios como a interleucina 6 (IL-6), 10 (IL-10), 1? (IL-1?), fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) e a proteína C reativa ultra sensível (PCR-US) têm sido relacionados à doenças cardiovasculares. Estes biomarcadores inflamatórios estão envolvidos na rigidez arterial, um importante fator de risco cardiovascular. De fato, a hipertensão arterial resistente (HAR) possui um prognóstico desfavorável atribuído ao não controle pressórico e a outros fatores de risco associados. Entretanto, ainda não foi estabelecido o perfil dessas citocinas na HAR, também não se conhece o potencial impacto desses biomarcadores inflamatórios na rigidez arterial. Este estudo transversal em 32 pacientes com HAR, 20 com hipertensão de grau leve a moderado (HAS) e 20 normotensos (NT) teve como objetivo avaliar a relação de marcadores inflamatórios com a rigidez arterial em pacientes hipertensos resistentes. Foram avaliadas as medidas de pressão arterial de consultório e rigidez arterial, através da velocidade de onda de pulso (VOP). As concentrações plasmáticas de IL-10, IL-6, IL-1? e TNF-? foram determinadas por ELISA e PCR-US por nefelometria. O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para comparar os níveis de IL-6, TNF- ? e PCR-US, assim como os valores de VOP, enquanto o teste Qui-quadrado foi utilizado para avaliação das variáveis IL-10 (<1,0 and >1,0pg/mL) e IL-1? (<0,012 and >0,012 pg/mL). Análise de regressão linear múltipla foi conduzida para testar se havia associação independente dos marcadores inflamatórios (IL-6, TNF-?, IL-1? e PCR-US) com a VOP. Os grupos não apresentaram diferenças de idade, gênero e IMC. A VOP foi maior nos pacientes HAR (10.5 ± 2.2m/s), seguidos por pacientes HAS (8.7±2.1m/s) e indivíduos NT (7.2± 1.0m/s) (p<0.05). Os níveis de TNF-? (média; (95% CI)) foram significativamente maiores nos grupos HAR: 3,3 (2,19 -4,42pg/mL) e HAS: 3,09 (2,61-3,56) comparados aos NT 1,94 (1,48 - 2,39) (p<0.05), mas não houve diferença entre níveis de IL-6. O grupo de HAR teve maior proporção de sujeitos com níveis elevados de IL-10 (78.1% de IL-10 >1.0 pg/mL) comparados aos HAS (50%) e NT (20%). Além disso, a proporção de pacientes HAR com IL-1? aumentada também foi maior (100%) comparada aos HAS (45%) e NT (25%). Finalmente, apenas a IL-1? foi independentemente associada a VOP (p<0,001; R2= 0,49; ?=0,079). Pacientes HAR apresentaram níveis aumentados de citocinas inflamatórias (TNF-?, IL-1? and IL-10), assim como rigidez arterial. Em adição, a concentração de IL-1? é um fator de risco independente para rigidez arterial / Abstract: Inflammation has been associated with hypertension and target organ damage and increased levels of inflammatory biomarkers such as interleukin-6 (IL-6), 10 (IL-10), 1? (IL-1?), tumor necrosis factor-? (TNF-?) and high sensitive C protein (hs-CRP) have been described in cardiovascular diseases. These inflammatory biomarkers are implicated in arterial stiffness, an important cardiovascular risk factor. Indeed, resistant hypertension (RHTN) leads to unfavorable prognosis attributed to poor blood pressure (BP) control and other cardiovascular risk factors. However, the potential impact of these inflammatory biomarkers on arterial stiffness in RHTN subjects has not been demonstrated. A cross-sectional study was performed in 32 RHTN, 20 mild to moderate hypertensive patients (HTN) and 20 normotensive (NT) subjects. Office BP and arterial stiffness, assessed by pulse wave velocity (PWV) were evaluated. Indeed, IL-10, IL-6, IL-1? and TNF-? were determined by ELISA and hs-CRP by nephelometry. Kruskal-Wallis was used to compare levels of IL-6, TNF- ? and hs-CRP as well as values of PWV, whereas Chi-square was used to evaluated IL-10 (<1.0 and >1.0pg/mL) and IL-1? (<0.012 and >0.012 pg/mL). Multiple linear regression analysis tested the association of inflammatory biomarkers (IL-10, TNF-?, IL-1? and hs-CRP) with PWV. No differences were observed between the 3 groups with respect to age, gender and BMI. PWV was increased in RHTN (10.5 ± 2.2m/s) followed by HTN patients (8.7±2.1m/s) compared to NT individuals (7.2± 1.0m/s) (p<0.05). TNF-? levels (mean; (95% CI)) were significantly higher in RHTN 3.3 (2.19 - 4.42pg/mL) and HTN: 3.09 (2.61-3.56) than NT subjects 1.94 (1.48 - 2.39) (p<0.05) but no differences were observed regarding IL-6 levels. RHTN group had higher frequency of subjects with increased levels of IL-10 (78.1% of IL-10 >1.0 pg/mL) compared with HTN (50%) and NT (20%). Moreover, RHTN had higher frequency of subjects with increased levels of IL-1?(100%) compared to HTN (45% ) and NT (25%). Finally, IL-1? was independently associated to PWV (p<0.001; R2= 0.49; ?=0.079). Taken together, RHTN subjects presented increased levels of inflammatory cytokines (TNF-?, IL-1? and IL-10) as well as of arterial stiffness. In addition, we found that IL-1? levels are an independent risk factor for arterial stiffness / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mirandola_SandraRegina_M.pdf: 1061759 bytes, checksum: d52c38e4e099c08571e33b8ec3278a05 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O desenvolvimento da tolerância imunológica a antígenos próprios, é resultado de mecanismos que conduzem à supressão de clones de linfócitos específicos aos componentes da mielina, podendo ser um dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento da tolerância aos neuro-antígenos. Entre os mecanismos mais estudados estão: deleção, anergia dos clones auto-reativos e os mecanismos regulatórios exercidos pelas citocinas. Evidências clínicas e experimentais sugerem que, anormalidades dos linfócitos T e das citocinas, produzidas pelas células TH1, estão envolvidos no desenvolvimento de doenças auto-imunes órgão-específicas como a Esclerose Múltipla. A Esclerose Múltipla (EM) é a mais importante doença desmielinizante que afeta o homem. Patologicamente é caracterizada pela inflamação e desmielinização de múltiplas áreas da substância branca do SNC, com posterior lesão do oligodendrócito, resultando clinicamente em disfunção neurológica. Embora seja uma doença órgão-específica, com resposta imunológica voltada ao SNC, estudos mostram alterações imunológicas nas células do sangue periférico. As células T auto-reativas, dos pacientes com EM, reconhecem componentes da mielina, como a proteína básica de mielina (MBP), contribuindo à patogenicidade da doença. Uma das abordagens terapêuticas não específica, utilizada no tratamento da Esclerose Múltipla é o Interferon Beta (IFNb). Nestas duas últimas décadas, alguns estudos foram concluídos, mostrando, de uma forma geral, que a administração do IFNb (tanto 1a como 1b) tem efeito benéfico no tratamento da EM na forma surto-remissão e mais recentemente os autores vem utilizando essa abordagem terapêutica também para as formas progressivas da doença (GOODKIN, 2000; NEUHAUS et al., 2003). O efeito terapêutico do interferon tipo I, o IFN beta em particular, mostrou exercer efeito benéfico aos pacientes tratados, diminuindo o número de exacerbações durante o primeiro ano de tratamento (FILLIPPINI et al., 2003), e em alguns casos tais efeitos benéficos duraram acima de 5 anos (MS group, 1995). O efeito terapêutico foi confirmado pela diminuição das lesões verificadas por MRI (PATY et al., 1993). Como a imunoterapia, com IFNb, tem mostrado efeitos benéficos aos pacientes portadores de Esclerose Múltipla (EM) na forma surto-remissão, resolvemos acompanhar o efeito da terapia com IFNb na produção de citocinas dos pacientes em tratamento ou não, assim como em indivíduos normais. Os resultados obtidos, mostraram um aumento significativo na produção das citocinas pro-inflamatórias, tais como TNFa e IFNg no plasma e cultura de leucócitos dos pacientes com EM não tratados. A administração do IFNb reduz, significativamente, os níveis das citocinas pró-inflamatórias, com simultâneo aumento na produção de IL10 e, mais discretamente, na produção de TGFb. Sugere-se então, que a polarização da produção das citocinas pró-inflamatórias participa da cascata de eventos, que leva à desmielinização e que, a administração in vivo de citocinas, como IFNb, pode mudar o curso da resposta inflamatória / Abstract: Multiple Sclerosis (MS) is the most important demyelinating disease that affects man. Pathologically, it is characterized by the inflamation and demyelination of various areas of the brain, resulting in a clinically - diagnosed neurological dysfunction. Although it is organ-specific, with an immune response aimed at components of the central nervous system, studies have shown immunological alterations in peripheral blood cells. Autoreactive T cells to recognize myelin components such as myelin basic protein (MBP) and thus contribute to the pathogenesis of the disease. Immunotherapy with IFNb shows remarkable beneficial effects in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis (MS), although the mechanisms by which it exerts these beneficial effects remain poorly understood. Investigation was made of the effects of IFNb on proinflammatory and anti-inflammatory cytokine production in peripheral blood cells in MS patients, both untreated and those undergoing immunotherapy, as well as healthy controls. The development of tolerance to the body's own antigens is the result of mechanisms which lead to the supression of lymphocyte clones specific for myelin components. Among the best known of these mechanisms are the elimination of self-reacting clones. The suppression of the immune response may be one of the mechanisms involved in the development of tolerance to the neuro-antigens. Among the mechanisms which are most commonly studied are the elimination of the self reactive clones, clonal anergy and the immunoregulatory mechanisms exercised by the cytokines. Clinical and experimental evidence suggest that abnormalities of the T lymphocytes and of the cytokines produced by the TH1 cells are involved in the development of organ-specific auto-immune diseases such as Multiple Sclerosis. Results show a significant increase in the production of proinflammatory cytokine such as TNFa and IFNg in the plasma and in the supernatant of a leukocyte culture from MS patients with the untreated disease, whereas IFNb administration significantly reduces these levels, this was accompanied by a significant increase in the production of IL10 and a slight increase in that of TGFb. This reduction in proinflammatory cytokine production in the treated MS patient group accompanied by a simultaneous increase in the production of anti-inflammatory cytokines, suggests that the beneficial effects of IFNb immunotherapy results, at least in part from the modulation of cytokine patterns / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Considerando os efeitos da radiação gama sobre proteínas e a capacidade do sistema imune de reconhecer macromoléculas modificadas, decidimos pesquisar as principais citocinas envolvidas no padrão de resposta de células Th1 ou Th2 em camundongos (B10.PL, BALB/c ou Knockout-IFN-/-) imunizados com a Bothropstoxina-1 (BTHX-1), uma miotoxina do veneno de Bothrops jararacussu, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Para avaliar prováveis modificações estruturais na molécula da proteína após o processo de irradiação (radiação de 60Co), foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida 15% para a BTHX-1, na forma nativa e irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Os resultados mostraram que a radiação foi capaz de promover alterações na molécula da BTHX-1. Na presença dos scavengers, mesmo após a irradiação da toxina, houve a preservação da banda principal (14 kDa). Com relação aos aspectos imunológicos, foram realizados ensaios de produção e identificação de anticorpos, nos quais, os animais foram imunizados com a BTHX-1, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não dos scavengers. Observou-se que a proteína nativa induziu, preferencialmente, uma resposta do tipo Th2, enquanto que a proteína irradiada induziu uma resposta do tipo Th1. A toxina irradiada na presença do tbutanol induziu menor produção de IgG2b, quando comparada a toxina irradiada sem scavengers. Para a quantificação da expressão de citocinas em células esplênicas obtidas dos camundongos, foi realizado o Real-time PCR para a detecção das citocinas IFN-, IL-2, IL- 4 e IL-10. As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 nativa e estimuladas in vitro com a toxina irradiada, apresentaram maior expressão de IFN- e IL-2 (padrão de resposta Th1). As células dos Knockout-IFN-/- imunizados com a BTHX-1 nativa apresentaram maior expressão de IL-4 (padrão de resposta Th2). As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 + t-butanol apresentaram maior expressão de IL-4 e IL-10, respectivamente. Estes fatos reforçam a participação do OH na modulação da resposta imune contra a toxina irradiada. / Considering the effects of gamma radiation on proteins and the ability of immune system to recognize modified macromolecules, we have identified the major cytokines involved in immune response of B10.PL, BALB/c and Knockout- IFN-/- mice exposed to native or irradiated bothropstoxin-1 (BTHX-1), in the presence and absence of scavengers substances. In order to evaluate possible molecule structural modifications after being irradiated (60Co gamma rays), bothropstoxin-1 was submitted to SDS-PAGE analyses. Our results indicated that irradiation process has promoted modifications in the BTHX-1 molecule, however, in the presence of scavengers and even after irradiation process, the main band of toxin was preserved (14 kDa). Sera of animals immunized with the native or irradiated toxin, in the presence or not of scavengers, were analyzed in order to quantify specific isotypes. While the native BTHX-1 induced a predominant Th2 response, the irradiated toxin apparently promoted a switch towards a Th1 pattern. The toxin, when irradiated in the presence of t-butanol, induced to a lower production of IgG2b (Th1 response) if compared with the irradiated toxin without scavengers. We also performed a Real-time PCR to quantify the expression of cytokines IFN-, IL-2, IL-4 and IL-10 in spleen cells from mice. The cells of B10.PL and BALB/c mice immunized with native BTHX-1 and in vitro stimulated with irradiated toxin, showed higher expression of IFN- and IL-2 (Th1 response) than the control sample. The cells of Knockout-IFN-/- mice immunized with native BTHX-1 showed higher expression of IL-4 (Th2 response). The cells obtained of B10.PL and BALB/c mice immunized with BTHX-1 + t-butanol, showed higher expression of IL-4 and IL-10, respectively. These facts reinforce the involvement of OH in the modulation of immune response against the irradiated toxin.

Considerando os efeitos da radiação gama sobre proteínas e a capacidade do sistema imune de reconhecer macromoléculas modificadas, decidimos pesquisar as principais citocinas envolvidas no padrão de resposta de células Th1 ou Th2 em camundongos (B10.PL, BALB/c ou Knockout-IFN-/-) imunizados com a Bothropstoxina-1 (BTHX-1), uma miotoxina do veneno de Bothrops jararacussu, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Para avaliar prováveis modificações estruturais na molécula da proteína após o processo de irradiação (radiação de 60Co), foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida 15% para a BTHX-1, na forma nativa e irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Os resultados mostraram que a radiação foi capaz de promover alterações na molécula da BTHX-1. Na presença dos scavengers, mesmo após a irradiação da toxina, houve a preservação da banda principal (14 kDa). Com relação aos aspectos imunológicos, foram realizados ensaios de produção e identificação de anticorpos, nos quais, os animais foram imunizados com a BTHX-1, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não dos scavengers. Observou-se que a proteína nativa induziu, preferencialmente, uma resposta do tipo Th2, enquanto que a proteína irradiada induziu uma resposta do tipo Th1. A toxina irradiada na presença do tbutanol induziu menor produção de IgG2b, quando comparada a toxina irradiada sem scavengers. Para a quantificação da expressão de citocinas em células esplênicas obtidas dos camundongos, foi realizado o Real-time PCR para a detecção das citocinas IFN-, IL-2, IL- 4 e IL-10. As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 nativa e estimuladas in vitro com a toxina irradiada, apresentaram maior expressão de IFN- e IL-2 (padrão de resposta Th1). As células dos Knockout-IFN-/- imunizados com a BTHX-1 nativa apresentaram maior expressão de IL-4 (padrão de resposta Th2). As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 + t-butanol apresentaram maior expressão de IL-4 e IL-10, respectivamente. Estes fatos reforçam a participação do OH na modulação da resposta imune contra a toxina irradiada. / Considering the effects of gamma radiation on proteins and the ability of immune system to recognize modified macromolecules, we have identified the major cytokines involved in immune response of B10.PL, BALB/c and Knockout- IFN-/- mice exposed to native or irradiated bothropstoxin-1 (BTHX-1), in the presence and absence of scavengers substances. In order to evaluate possible molecule structural modifications after being irradiated (60Co gamma rays), bothropstoxin-1 was submitted to SDS-PAGE analyses. Our results indicated that irradiation process has promoted modifications in the BTHX-1 molecule, however, in the presence of scavengers and even after irradiation process, the main band of toxin was preserved (14 kDa). Sera of animals immunized with the native or irradiated toxin, in the presence or not of scavengers, were analyzed in order to quantify specific isotypes. While the native BTHX-1 induced a predominant Th2 response, the irradiated toxin apparently promoted a switch towards a Th1 pattern. The toxin, when irradiated in the presence of t-butanol, induced to a lower production of IgG2b (Th1 response) if compared with the irradiated toxin without scavengers. We also performed a Real-time PCR to quantify the expression of cytokines IFN-, IL-2, IL-4 and IL-10 in spleen cells from mice. The cells of B10.PL and BALB/c mice immunized with native BTHX-1 and in vitro stimulated with irradiated toxin, showed higher expression of IFN- and IL-2 (Th1 response) than the control sample. The cells of Knockout-IFN-/- mice immunized with native BTHX-1 showed higher expression of IL-4 (Th2 response). The cells obtained of B10.PL and BALB/c mice immunized with BTHX-1 + t-butanol, showed higher expression of IL-4 and IL-10, respectively. These facts reinforce the involvement of OH in the modulation of immune response against the irradiated toxin.

Orientador: José Mauricio Sforcin / Coorientador: Ana Paula Bordon Graciani / Banca: Rodrigo Tavanelli Hernandes / Banca: Wander Rogério Pavanelli / Banca: Karen Brajão de Oliveira / Banca: Maria Teresa Teixiera Cruz Rosete / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo bacilo 288 Mycobacterium tuberculosis, a qual ocupa a segunda posição mundial entre 289 causas de mortes por um único agente infeccioso. O desenvolvimento da 290 imunidade protetora e o controle da infecção por M. tuberculosis são amplamente 291 atribuídos a função desempenhada por citocinas pró e anti-inflamatórias. No 292 entanto, 90-95% dos indivíduos infectados com o bacilo conseguem conter ou 293 eliminar a infecção enquanto o restante desenvolve a TB ativa. As razões pelas 294 quais 5-10% dos indivíduos com competência imunológica completa são 295 suscetíveis `a TB ainda permanecem desconhecidas. Porém, nas últimas 296 décadas, estudos epidemiológicos têm trazido fortes evidências de que 297 componentes genéticos humanos contribuem significativamente para essa 298 interindividual variabilidade na suscetibilidade `a TB. Assim, o objetivo deste 299 trabalho foi avaliar a influência dos polimorfismos IL2 -330 T>G (rs2069762); IL4 -300 590 C>T (rs2243250); IL6 -174 G>C (rs1800795); IL10 -592 A>C (rs1800872); 301 IL10 -1082 G>G (rs1800896); IL17A -692 C>T (rs8193036); IL17A -197 G>A 302 (rs2275913); TNF -238 G>A (rs361525); TNF -308 G>A (rs1800629) e IFNG +874 303 T>A (rs2430561) localizados em genes de citocinas na suscetibilidade ao 304 desenvolvimento da tuberculose pulmonar (TBP) em uma população de adultos 305 do sul do Brasil.Os resultados obtidos sugerem fortemente um papel protetor para 306 os polimorfismo IL17A -197G>A (rs2275913) e IL6-174 G>C (rs1800795) no 307 desenvolvimento da TBP nessa população. O efeito protetor foi atribuído ao alelo 308 IL17A-197A (OR=0.29; p=0.04), genótipo AA (OR=0.12; p=0.04) e portadores do 309 alelo A (AG/AA) (OR=0.29; p=0.004). Da mesma forma, o polimorfismo IL6-310 174G>C mostrou ter um efeito protetor no desenvolvimento da TBP em 311 portadores do alelo C (CC/CG) (OR= 0.46; p=0.04). Ambos os polimorfismos 312 mantiveram a significância estatística após a correção usando o teste FDR. Os 313 demais polimorfismos avaliados não mostraram evidências que suportem 314 associação ao desenvolvimento da TBP em adultos nesta população. Os 315 polimorfismos IL17A -692 C>T (rs8193036) e IFNG +874 T>A (rs2430561) foram excluídos das análises porque não estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Em 317 conclusão, este trabalho identificou pela primeira vez na população do sul do 318 Brasil um efeito protetor dos polimorfismo IL17A -197 G>A e IL6 -174 G>C no 319 desenvolvimento da TBP em adultos. Esses resultados indicam o papel 320 importante para as citocinas pro-inflamatórias IL17A e IL6 na imunofisiologia da 321 TB. / Tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium 340 tuberculosis bacillus, which ranks second worldwide position among causes of 341 deaths from a single infectious agent. The development of protective immunity and 342 control of infection by M. tuberculosis are largely attributed to the role of pro and 343 anti-inflammatory cytokines. However, 90-95% of individuals infected with bacillus 344 can contain or eliminate the infection while the remainders develop active TB. The 345 reasons why 5-10% of individuals with full immune competence are susceptible to 346 TB remain unknown. However, in recent decades, epidemiological studies have 347 brought strong evidence that human genetic components contribute significantly to 348 this interindividual variability in susceptibility to TB.Thus the aim of this work was 349 to evaluate the influence of polymorphisms IL2 -330 T>G (rs2069762); IL4 -590 350 C>T (rs2243250); IL6 -174 G>C (rs1800795); IL10 -592 A>C (rs1800872); IL10 -351 1082 A>G (rs1800896); IL17A -692 C>T (rs8193036); IL17A -197 G>A 352 (rs2275913); TNF -238 G>A (rs361525); TNF -308 G>A (rs1800629) and IFNG 353 +874 T>A (rs2430561) located in cytokine candidates genes in the susceptibility to 354 development of pulmonary tuberculosis in south Brazil population.The results 355 strongly suggest a protective role for the IL17A -197G > A (rs2275913) and IL6-356 174 G>C polymorphism (rs1800795) in the development of pulmonary 357 tuberculosis in this population. The protective effect was attributed to IL17A -197 358 allele A (OR = 0.29; p = 0:04), AA genotype (OR = 0:12; p = 0:04) and carriers of 359 the A allele (AG / AA) (OR = 0.29; p = 0.004 ). Likewise, the IL6 -174G>C shows 360 an association for C carriers (CC/CG) (OR= 0.46; p=0.04). Both polymorphisms 361 maintained the statistical significance after correction using FDR test. However, no 362 evidence of association was identified for any other polymorphism studied in this 363 population.IL17A polymorphisms -692 C>T (rs8193036) and IFNG +874 T>A 364 (rs2430561) polymorphisms were excluded from the analysis because they were 365 not in Hardy-Weinberg equilibrium. In conclusion, our results identified for the first 366 time in Southern Brazil population a protective role for IL17A -197 G>A and IL6 -367 174 G>C polymorphisms in adult pulmonary tuberculosis development. These results indicate an important role for IL-17A and IL-6 pro-inflammatory cytokines in 369 immunophysiology of tuberculosis.

Resumo não disponível