LEAL, Renato Mazon Lima Verde. Avaliação do efeito inibitório da n-acetilcisteína no modelo de esteatohepatite induzida por irinotecano em camundongos. 2014. 95 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-02-24T14:11:04Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_rmlvleal.pdf: 2208785 bytes, checksum: e5812e0b6aa6977ba46c4c9311908d9e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-02-24T14:15:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_rmlvleal.pdf: 2208785 bytes, checksum: e5812e0b6aa6977ba46c4c9311908d9e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-24T14:15:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_rmlvleal.pdf: 2208785 bytes, checksum: e5812e0b6aa6977ba46c4c9311908d9e (MD5) Previous issue date: 2014 / Background: Colorectal cancer (CRC) is currently one of the most common cancers worldwide. The liver is the main site of metastasis in advanced CRC. Regimens based on irinotecan (IRI) have been used for the treatment of metastatic CRC, usually resulting in the conversion of unresectable liver metastases into resectable metastases. However, these regimens are associated with the occurrence of non-alcoholic steatohepatitis (NASH), which often limits the treatment. The pathogenesis of NASH caused by IRI remains unclear. Recently, our group developed a novel IRI-induced mouse NASH model. N-acetylcysteine (NAC) is an acetylated derivative of L-cysteine that carries a thiol (-SH) group that reacts and neutralizes free radicals, as well as restores cellular antioxidants such as glutathione. NAC is used in clinical practice for the treatment of liver damage induced by paracetamol. Objectives: To assess the protective effect of NAC on IRI-induced ASH. Methods: Male Swiss mice (25 g, n = 8) received saline (5 mL/kg, i.p), NAC (1,000 mg/kg, s.c), IRI (50 mg/kg, i.p), or NAC (10, 100, or 1000 mg/kg) + IRI 3 ×/week for 7 weeks. Weight variation and survival were assessed. At the end of the treatment, blood was collected for the determination of serum levels of ALT and AST (U/L), and the animals were sacrificed for liver collection and weighing (mg/30 g of animal). Histopathological analysis was performed according to Kleiner’s criteria for NASH (lobular inflammation [0–3], steatosis [0–3], and vacuolization [0–3]), as well as measurement of IL-1β production (pg/mL) and immunohistochemical analysis (IHC) of IL-1β, iNOS and nitrotyrosine. For statistical analysis, ANOVA/student’s Newman Keul test or the Kruskal Wallis/Dunn test was used. The level of significance was set at P < 0.05. (CEPA 1/12). Results: IRI induced a significant (P < 0.05) reduction in survival (44%), a marked increase in the serum concentrations of ALT (48.99 ± 13.4), AST (90.55 ± 19.7), cytokine IL1-β (288.5 ± 35.86), liver weight (1,814 ± 159.3), and an increase in Kleiner scores [5.5 (4–7)] vs. the saline group (survival: 100%; ALT: 17.31 ± 5.2; AST: 44.58 ± 5.4; cytokine IL1-β (104 ± 36.9); liver weight: 1,425 ± 39.5; Kleiner: 0 (0–0). These changes were prevented (P < 0.05) by treatment with NAC. NAC increased the survival of animals injected with IRI (10 mg/kg: 90%; 100 mg/kg: 80%). NAC 10 mg/kg prevented the increase of the enzymes ALT: 26.95 ± 7 and AST: 56.42 ± 4.8; NAC (10 mg/kg and 1,000 mg/kg) inhibited the increase in the levels of cytokine IL-1 (152 ± 23.92 and 149 ± 17.21, respectively); NAC (10 mg/kg and 100 9 mg/kg) reversed the increase in liver weight (1,375 ± 68.2 and 1,467 ± 28.6, respectively), and NAC 10 mg/kg reversed the increase in Kleiner scores: 2 [1–4]) vs. the IRI group. The IHC of the IRI group showed a significant increase in immunostaining for IL-1 (3[1–3]), iNOS (3[3–3]) compared to the saline group (IL-1: 0[0–1]; iNOS: 1[1–2]); and NAC at a dose of 10 mg/kg prevented the increase in immunostaining (IL-1: 1[1–1]; iNOS: 2[1–2]) vs. the IRI group. Conclusion: NAC at a dose of 10 mg/kg prevented changes in the clinical, histopathological, biochemical, and inflammatory parameters of the IRI-induced NASH model. Current studies are focused on identifying the mechanisms involved in this protective effect. / Introdução: O câncer colorretal (CCR) é um dos mais comuns tumores malignos atualmente. Na evolução natural da doença, o fígado é o principal sítio de metástases. Regimes à base de irinotecano (IRI) têm sido utilizados no tratamento do CCR metastático, permitindo muitas vezes a conversão de metástases hepáticas irressecáveis em ressecáveis. Contudo, tais regimes estão associados ao surgimento de esteatohepatite não alcoólica (NASH), muitas vezes limitante do tratamento. A patogênese da NASH por IRI ainda é desconhecida. Recentemente, nosso grupo desenvolveu um modelo inédito de NASH induzida por IRI. N-acetilcisteína (NAC) é um derivado acetilado da L-cisteína que apresenta na sua estrutura química o grupo sulfidrila(-SH), o qual pode reagir e neutralizar radicais livres, além de restabelecer os protetores celulares do estresse oxidativo, como a glutationa. NAC é utilizada na prática clínica para o tratamento da lesão hepática induzida por acetaminofen. Objetivos: Avaliar o efeito protetor da NAC sobre a NASH induzida por IRI. Métodos: Camundongos Swiss machos (25g, n=8) receberam salina (5 mL/Kg, i.p), NAC (1000 mg/Kg, s.c), IRI (50 mg/Kg, i.p) ou NAC (10, 100 ou 1000mg/Kg)+IRI 3x/semana/7semanas. Avaliou-se a variação ponderal e a sobrevida. Ao final do tratamento, o sangue foi coletado para dosagem sérica de ALT e AST (U/L) e realizou-se o sacrifício dos animais para coleta do fígado e pesagem (mg/30g de animal), análise histopatológica de acordo com os Critérios de Kleiner para NASH (inflamação lobular[0-3],esteatose[0-3] e vacuolização[0-3]), mensuração da atividade da citocina Interleucina-1 (IL-1β, pg/mL), e ensaio imunoistoquímico (IMQ) para IL-1β, Óxido Nítrico Sintase induzida (iNOS) e nitrotirosina. Na análise estatística utilizou-se ANOVA/Student Newman Keul ou Kruskal Wallis/Dunn. Um nível de significância menor que 5% foi aceito (p<0,05). (CEPA 21/12). Resultados: O IRI induziu uma significativa (p<0,05) redução de sobrevida (44%), um marcante aumento das concentrações séricas de ALT (48,99±13,4), AST (90,55±19,7), da citocina IL1-β (288,5±35,86), do peso do fígado (1814±159,3) e aumento dos escores de Kleiner [5,5 (4 - 7)] vs o grupo salina (sobrevida: 100%; ALT: 17,31±5,2; AST: 44,58±5,4; citocina IL1-β (104±36,9); peso hepático: 1425±39,5; Kleiner: 0(0-0). Tais alterações, foram prevenidas (p<0,05) pelo tratamento com NAC. NAC aumentou a sobrevida de animais injetados com IRI (10 mg/kg: 90%; 100 mg/kg: 80%). NAC 10 mg/Kg preveniu a elevação das enzimas 7 ALT: 26,95±7 e AST: 56,42±4,8; NAC (10mg/Kg e 1000mg/Kg) inibiram o aumento da IL-1 em (152±23,92 e 149±17,21, respectivamente); NAC (10mg/Kg e 100mg/Kg) reverteram o aumento do peso hepático (1375±68,2 e 1467±28,6, respectivamente) e NAC 1000mg/Kg reverteu o aumento dos escores de inflamação lobular (1[1-3]) vs o grupo IRI. Na IMQ do grupo IRI, observou-se um significativo aumento da imunomarcação para IL-1(3[2-3]), iNOS(3[3-3]) vs o grupo salina (IL-1: 2[0-2]; iNOS: 1[1-3]); NAC na dose de 10mg/Kg previne o aumento da imunomarcação (IL-1: 1,5[0-3]; iNOS: 2[1-3]) vs o grupo IRI. Conclusão: NAC na dose de 10mg/kg previne as alterações dos parâmetros clínicos, histopatológicos e bioquímicos no modelo de NASH induzida por IRI. Estudos adicionais estão sendo realizados para identificar os mecanismos envolvidos nessa proteção.

MELO, Maria Luisa Pereira de. Papel de citocinas, óxido nítrico sintase e ciclooxigenase-2 na mucosite intestinal induzida pelo cloridrato de irinotecano (cpt-11) efeito da pentoxifilina, talidomida e celecoxibe. 2007. 166 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-14T16:44:00Z No. of bitstreams: 1 2007_tese_mlpmelo.pdf: 2728934 bytes, checksum: b232b637d5bbb64e4356be6565f9e412 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-03T14:12:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tese_mlpmelo.pdf: 2728934 bytes, checksum: b232b637d5bbb64e4356be6565f9e412 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-03T14:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tese_mlpmelo.pdf: 2728934 bytes, checksum: b232b637d5bbb64e4356be6565f9e412 (MD5) Previous issue date: 2007 / Irinotecan (CPT-11) is an inhibitor of DNA topoisomerase I and clinically effective against several cancers. A major toxic effect of CPT-11 is delayed diarrhea; however, the exact mechanism by which the drug induces diarrhea has not been established. Purpose: The aim of the present study was to elucidate the involvement of cytokines (TNF-α, IL-1β and KC), nitric oxide (NO) and prostaglandins (PGs) in the pathogenesis of CPT-11-induced mucositis and the effects of the cytokine production inhibitors, pentoxifylline (PTX) and thalidomide (TLD), as well as the effects of the selective cyclooxygenase (COX-2) inhibitor, celecoxib (CLX), in the CPT-11 induced intestinal mucositis, in mice. Materials and methods: the animals were treated with CPT-11 (50, 75 or 100 mg/kg, i.p.) or vehicle (0,5 ml, i.p.) daily for four days, in order to investigate the best dose able to induce intestinal mucositis without important mortality. In another set of experiments, the animals received PTX (1.7, 5, 15 mg/kg, s.c.), TLD (15, 30, 60 mg/kg, s.c.), CLX (3, 10, 30 mg/kg, oral gavage) or vehicle (0,5 ml, s.c. or oral gavage) one day before the 1st administration of CPT-11 (75 mg/kg; i.p.) and daily until the sacrifice, on the 5th or 7th day. The systemic parameters evaluated were: diarrhea, body mass variation, survival curve and leucogram. In addition, it was also performed histological analysis, myeloperoxidase (MPO) activity assay, duodenum levels of TNF-α, IL-1β and KC by ELISA and immunohistochemistry for TNF-α, IL-1β, iNOS and COX-2 in the duodenal segments. Results: CPT-11 induced an important diarrhea, weight loss, leucopenia and mortality increase. It was also observed histopathological changes, such as shortened villi, loss of the crypt architecture and inflammatory cells infiltration, observed in the lamina propria, as well as, an increase in MPO activity, TNF-α, IL-1β and KC tissue levels and a marked immuno-staining for TNF-α, IL-1β, iNOS and COX-2. The treatment with PTX inhibited the delayed diarrhea and reduced the following parameters: histopathological alterations, MPO activity, tissue levels of TNF-α, IL-1β and KC, and the immuno-staining for TNF-α, IL-1β and iNOS, however, did not prevent leucopenia, weight loss and mortality. TLD significantly reduced all the inflammatory parameters evaluated, but was not able to prevent diarrhea, leucopenia, weight loss and mortality. On the other hand, CLX did not inhibit the inflammatory nor the systemic alterations induced by CPT-11. Conclusion: These results suggest an important role of TNF-α, IL-1β, KC, NO and PGs in the pathogenesis of intestinal mucositis induced by CPT-11. PTX and TLD showed a protector effect in intestinal structures, however, only PTX reduced the severity of CPT-11-induced diarrhea. / O cloridrato de irinotecano (CPT-11) é um inibidor da topoisomerase I, clinicamente efetivo no tratamento de vários tipos de câncer. Apesar da mucosite intestinal (MI) acompanhada de severa diarréia ser o efeito colateral mais limitante do uso terapêutico do CPT-11, os exatos mecanismos que levam a estes efeitos não são estabelecidos. Objetivo: avaliar o envolvimento de mediadores inflamatórios (citocinas, óxido nítrico – NO e prostaglandinas – PGs) na patogênese dos eventos que acompanham a MI induzida pelo CPT-11; e estudar o efeito de inibidores da síntese e liberação de citocinas, como pentoxifilina (PTX) e talidomida (TLD), e de um inibidor seletivo da ciclooxigenase-2 (COX-2), o celecoxibe (CLX), na lesão intestinal induzida pelo CPT-11. Material e Métodos: camundongos Swiss, machos, foram tratados durante quatro dias consecutivos com CPT-11 (50, 75 e 100 mg/kg, i.p.) ou veículo (0,5 mL, i.p.), a fim de se obter a melhor dose capaz de induzir injúrias consistentes com o mínimo de letalidade. Os animais foram tratados com PTX (1,7, 5 e 15 mg/kg, s.c.), TLD (15, 30, 60 mg/kg, s.c), CLX (3, 10, 30 mg/kg, gavagem) ou veículo (0,5 mL, s.c. ou gavagem), um dia antes da primeira administração do CPT-11 (75 mg/kg), e diariamente, até o sacrifício, no quinto ou sétimo dia. Os seguintes parâmetros foram avaliados: diarréia, variação de massa corpórea, leucograma, sobrevida, análise histopatológica, atividade de mieloperoxidase (MPO), dosagem de citocinas (TNF-α, IL-1β e KC) por ELISA e imunohistoquímica para TNF-α, IL-1β, iNOS e COX-2 nas mucosas duodenais. Resultados: CPT-11 induziu diarréia significante, acompanhada de perda acentuada de massa corpórea, leucopenia e redução da sobrevida. As alterações histopatológicas intestinais induzidas pelo CPT-11 caracterizaram-se pela presença de infiltrado inflamatório nas células da lâmina própria, perda da arquitetura das criptas e achatamento dos vilos. Observou-se ainda, aumento intestinal na atividade de MPO e dos níveis de TNF-α, IL-1β e KC, além do aumento significativo na marcação imunohistoquímica para TNF-α, IL-1β, iNOS e COX-2. O tratamento com PTX inibiu a diarréia tardia, reduziu as alterações histopatológicas, a atividade de MPO, e os níveis de TNF-α, IL-1β e KC, assim como a marcação imunohistoquímica para TNF-α, IL-1β e iNOS na mucosa duodenal, entretanto, não preveniu significativamente a perda de massa corpórea, a leucopenia e tampouco a mortalidade dos animais. O tratamento com TLD reduziu as lesões histopatológicas induzidas pelo CPT-11 na mucosa intestinal, os níveis intestinais de MPO e TNF-α, bem como a marcação imunohistoquímica de TNF-α, mas não foi capaz de prevenir a diarréia, a perda de massa corpórea, a leucopenia e a sobrevida. O tratamento com CLX não foi capaz de reduzir os parâmetros inflamatórios e sistêmicos observados nos animais tratados com CPT-11. Conclusão: Estes resultados sugerem o envolvimento de TNF-α, IL-1β, KC, NO e PGs na patogênese da MI induzida pelo CPT-11. PTX e TLD preveniram significativamente as alterações histológicas e inflamatórias induzidas pelo CPT-11, entretanto, somente PTX foi capaz de inibir o curso da diarréia.

A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo bacilo 288 Mycobacterium tuberculosis, a qual ocupa a segunda posição mundial entre 289 causas de mortes por um único agente infeccioso. O desenvolvimento da 290 imunidade protetora e o controle da infecção por M. tuberculosis são amplamente 291 atribuídos a função desempenhada por citocinas pró e anti-inflamatórias. No 292 entanto, 90-95% dos indivíduos infectados com o bacilo conseguem conter ou 293 eliminar a infecção enquanto o restante desenvolve a TB ativa. As razões pelas 294 quais 5-10% dos indivíduos com competência imunológica completa são 295 suscetíveis `a TB ainda permanecem desconhecidas. Porém, nas últimas 296 décadas, estudos epidemiológicos têm trazido fortes evidências de que 297 componentes genéticos humanos contribuem significativamente para essa 298 interindividual variabilidade na suscetibilidade `a TB. Assim, o objetivo deste 299 trabalho foi avaliar a influência dos polimorfismos IL2 -330 T>G (rs2069762); IL4 -300 590 C>T (rs2243250); IL6 -174 G>C (rs1800795); IL10 -592 A>C (rs1800872); 301 IL10 -1082 G>G (rs1800896); IL17A -692 C>T (rs8193036); IL17A -197 G>A 302 (rs2275913); TNF -238 G>A (rs361525); TNF -308 G>A (rs1800629) e IFNG +874 303 T>A (rs2430561) localizados em genes de citocinas na suscetibilidade ao 304 desenvolvimento da tuberculose pulmonar (TBP) em uma população de adultos 305 do sul do Brasil.Os resultados obtidos sugerem fortemente um papel protetor para 306 os polimorfismo IL17A -197G>A (rs2275913) e IL6-174 G>C (rs1800795) no 307 desenvolvimento da TBP nessa população. O efeito protetor foi atribuído ao alelo 308 IL17A-197A (OR=0.29; p=0.04), genótipo AA (OR=0.12; p=0.04) e portadores do 309 alelo A (AG/AA) (OR=0.29; p=0.004). Da mesma forma, o polimorfismo IL6-310 174G>C mostrou ter um efeito protetor no desenvolvimento da TBP em 311 portadores do alelo C (CC/CG) (OR= 0.46; p=0.04). Ambos os polimorfismos 312 mantiveram a significância estatística após a correção usando o teste FDR. Os 313 demais polimorfismos avaliados não mostraram evidências que suportem 314 associação ao desenvolvimento da TBP em adultos nesta população. Os 315 polimorfismos IL17A -692 C>T (rs8193036) e IFNG +874 T>A (rs2430561) foram excluídos das análises porque não estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Em 317 conclusão, este trabalho identificou pela primeira vez na população do sul do 318 Brasil um efeito protetor dos polimorfismo IL17A -197 G>A e IL6 -174 G>C no 319 desenvolvimento da TBP em adultos. Esses resultados indicam o papel 320 importante para as citocinas pro-inflamatórias IL17A e IL6 na imunofisiologia da 321 TB. / Tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium 340 tuberculosis bacillus, which ranks second worldwide position among causes of 341 deaths from a single infectious agent. The development of protective immunity and 342 control of infection by M. tuberculosis are largely attributed to the role of pro and 343 anti-inflammatory cytokines. However, 90-95% of individuals infected with bacillus 344 can contain or eliminate the infection while the remainders develop active TB. The 345 reasons why 5-10% of individuals with full immune competence are susceptible to 346 TB remain unknown. However, in recent decades, epidemiological studies have 347 brought strong evidence that human genetic components contribute significantly to 348 this interindividual variability in susceptibility to TB.Thus the aim of this work was 349 to evaluate the influence of polymorphisms IL2 -330 T>G (rs2069762); IL4 -590 350 C>T (rs2243250); IL6 -174 G>C (rs1800795); IL10 -592 A>C (rs1800872); IL10 -351 1082 A>G (rs1800896); IL17A -692 C>T (rs8193036); IL17A -197 G>A 352 (rs2275913); TNF -238 G>A (rs361525); TNF -308 G>A (rs1800629) and IFNG 353 +874 T>A (rs2430561) located in cytokine candidates genes in the susceptibility to 354 development of pulmonary tuberculosis in south Brazil population.The results 355 strongly suggest a protective role for the IL17A -197G > A (rs2275913) and IL6-356 174 G>C polymorphism (rs1800795) in the development of pulmonary 357 tuberculosis in this population. The protective effect was attributed to IL17A -197 358 allele A (OR = 0.29; p = 0:04), AA genotype (OR = 0:12; p = 0:04) and carriers of 359 the A allele (AG / AA) (OR = 0.29; p = 0.004 ). Likewise, the IL6 -174G>C shows 360 an association for C carriers (CC/CG) (OR= 0.46; p=0.04). Both polymorphisms 361 maintained the statistical significance after correction using FDR test. However, no 362 evidence of association was identified for any other polymorphism studied in this 363 population.IL17A polymorphisms -692 C>T (rs8193036) and IFNG +874 T>A 364 (rs2430561) polymorphisms were excluded from the analysis because they were 365 not in Hardy-Weinberg equilibrium. In conclusion, our results identified for the first 366 time in Southern Brazil population a protective role for IL17A -197 G>A and IL6 -367 174 G>C polymorphisms in adult pulmonary tuberculosis development. These results indicate an important role for IL-17A and IL-6 pro-inflammatory cytokines in 369 immunophysiology of tuberculosis.

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5884_.pdf: 4378934 bytes, checksum: e55f89d472f97ebc5973011002da350a (MD5) Previous issue date: 2012-08-27 / A (re)ativação do Mycobcaterium tuberculosis (Mtb) e, por conseguinte o desenvolvimento da doença ainda é um mistério. Sabe-se que a resposta contra o Mtb é mediada pelo desenvolvimento de linfócitos T do tipo Th1, que tem como característica principal a produção de IFN-&#947;. O IFN-&#947; atua na ativação dos macrófagos que por meio da fagocitose eliminam os bacilos nos locais da infecção. A resistência do bacilo frente às respostas do organismo pode ser realizada de diversas formas, principalmente pela evasão do sistema fagocitário. Sabemos que indivíduos pré-expostos e sensibilizados desenvolvem um tipo de tuberculose latente que pode ser reativada ao longo de sua vida. Neste trabalho, demonstramos que indivíduos reativos ao teste intradérmico com Purified Protein Derivative (PPD) e pacientes com TB apresentavam atividade microbicida menor que indivíduos não reativos ao teste com PPD (PPD-). Esta atividade microbicida foi avaliada tanto em amostras de sangue total, quanto de PBMC. Para isso foram arrolados 13 indivíduos PPD+, 13 indivíduos PPD- e 11 pacientes com TB pulmonar virgens de tratamento. Para a realização da infecção, foram utilizados dois isolados clínicos sensíveis (2220-S1 e 0885-S5) e outros dois, multidroga-resistente (0530-R3 e 0669-R6); e como padrão foi utilizado à cepa H37-Rv. A frequência das células T reguladoras esteve aumentada nos indivíduos PPD+ e pacientes com TB, o que poderia estar envolvido na latência/desenvolvimento da doença no individuo. Comparando o aumento da frequência das células T reguladoras com a atividade microbicida, fica evidente que a presença destas células atua de forma negativa a resposta microbicida tanto nas culturas de sangue total quanto nas culturas de PBMC. Ensaios de fagócitos e de produção de óxido nítrico também foram realizados, porém não foi encontrada nenhuma resposta que se destacasse. A produção de citocinas em culturas de sangue total nos mostrou uma alta atividade microbicida realizada por indivíduos PPD-, caracterizada pela produção de IFN-g enquanto indivíduos com tuberculose latente desenvolveram grande produção de IL-10 e TGF-&#946;. Fato marcante foi à produção de IFN-&#947; e de IL-23 por pacientes com TB, dados que nos sugerem o desenvolvimento de uma resposta Th17. Frente a estes resultados, foram realizadas culturas com PBMC em que as células T reguladoras haviam sido depletadas. Após a depleção destas células ocorreu o aumento da atividade microbicida nas culturas dos três grupos. Nossos resultados acabam por sugerir que a pré-exposição seguida de sensibilização para o patógeno, pode desencadear uma maior propensão para o desenvolvimento da latência/doença. PALAVRAS CHAVES: Mycobacterium tuberculosis, Tuberculose, Purified Protein Derivative, PPD, células T reguladoras, Citocinas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:16:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 220970.pdf: 714951 bytes, checksum: 813a461ea17fae0fa556d412f7c28938 (MD5) / O objetivo geral deste estudo foi avaliar o efeito de anticorpos anti-citocinas pró e antiinflamatórias na nocicepção e edema articulares e na migração de células para o fluido sinovial, no modelo de artrite induzida por LPS em ratos, e compará-las a alguns fármacos antiartríticos, potencialmente moduladores da atividade de citocinas. Ratos Wistar machos, pesando entre 250 e 300g, receberam LPS (0,03; 1,0 ou 30 ng; i.art.) 3 dias após uma sensibilização com carragenina (300 µg; i.art.). A incapacitação foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP; s) durante marcha de 1 min; o edema, pela variação do diâmetro articular (DA; cm) e, a migração celular, pela contagem total (CT; cel/mm3) e diferencial de leucócitos (mononucleares e polimorfonucleares, MON; PMN; cel/mm3) do fluido sinovial coletado 6 h após. A indometacina (0,5 ou 2,5 mg/kg) e o diclofenaco (0,5; 2,5 ou 5,0 mg/kg) inibiram significativamente a incapacitação e o edema articular tanto no pré quanto no pós-tratamento. O diclofenaco inibiu a migração de MON. Nenhuma das duas drogas inibiu a migração de PMN. A dexametasona (0,4 ou 4,0 mg/kg) inibiu a incapacitação, o edema articular e a migração de MON, mas não inibiu a migração de PMN. A sulfasalazina (30 ou 100 mg/kg) inibiu somente o edema articular sem alterar a incapacitação e a migração celular. O leflunomide (20, 40 ou 80 mg/kg) inibiu de maneira dose-dependente o edema articular, mas somente a maior dose inibiu a incapacitação articular. O leflunomide também inibiu a migração de MON. A diacereína (50 ou 200 mg/kg) inibiu significativamente apenas o edema articular. A pentoxifilina (20 ou 40 mg/kg) inibiu o edema e a migração de PMN, mas não alterou a incapacitação articular e a migração de MON. Anticorpos anti-TNFa e anti-IL-1ß inibiram significativamente o edema articular e a migração de MON. Anticorpos anti-TNFa inibiram a incapacitação e a migração de PMN. Houve uma tendência de inibição da migração de PMN pelos anticorpos anti-IL-1ß. Anticorpos anti-CINC-1 reduziram a incapacitação, o edema articular e a migração de MON e PMN. Anticorpos anti-IL-10, anti-IL-13 a anti-IL-4 aumentaram a incapacitação e o edema articular induzido por uma dose relativamente baixa de LPS (0,03 ng). No entanto, anticorpos anti-IL-10 e anti-IL-13 aumentaram a incapacitação mas reduziram o edema articular induzido por uma dose alta de LPS (1,0 ng). Além disso, a injeção intraarticular da citocina IL-13, antes do LPS (0,03 ng), inibiu a incapacitação, embora tenha aumentado o edema articular sem alterar a migração celular. Este estudo nos permite concluir que: (a) no modelo de artrite induzida pelo LPS, as citocina pró-inflamatórias TNFa, IL-1ß e CINC-1 estão envolvidas no desenvolvimento da nocicepção, edema articular e migração celular; (b) IL-10, IL-13 e IL-4 também são produzidas localmente e apresentam efeito inibitório. Contudo, IL-10 e IL-13 também apresentam efeito pró-edematogênico neste modelo; (c) os resultados obtidos com antiinflamatórios não esteroidais e com dexametasona sugerem que o modelo de artrite induzida pelo LPS é confiável para avaliar a ação de outras drogas sobre a nocicepção, edema articular e migração celular; (d) as drogas modificadoras de doença (DMARDs), que podem modular a síntese e liberação de citocinas pró-inflamatórias, TNFa e IL-1ß, não apresentaram efeito tão potente quanto os respectivos anticorpos anti-citocinas sugerindo que, pelo menos neste modelo in vivo, esse mecanismo de ação pode não ser atingido. Leflunomide, foi o único DMARD testado que apresentou efetividade similar aos anticorpos anti-TNFa e anti-IL-1ß em todos os parâmetros avaliados (nocicepção, edema articular e migração celular de MON).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:41:50Z : No. of bitstreams: 1 000741932.pdf: 2507197 bytes, checksum: f30c63e246b50ee2a82790109f418fe8 (MD5) / O Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose a micose sistêmica de maior prevalência na América Latina. Dentre os vários mecanismos da resposta inata contra esse fungo, os envolvendo as células fagocitárias desempenham papel central na contenção do processo infeccioso, com destaque para a participação na atividade fungicida e modulação da resposta inflamatória. As funções das células fagocitárias contra os diversos microrganismos, incluindo os fungos, são iniciadas a partir de mecanismos de ativação dessas células, gerados após o reconhecimento dos mesmos por receptores de reconhecimento de estruturas moleculares padrões (PRRs) que reconhecem estruturas moleculares compartilhadas por determinados grupos de microrganismos, os chamados padrões moleculares associados à patógenos (PAMPS). Nosso estudo objetivou estudar a participação dos receptores TLR2, TLR4, receptor de manose (MR) e dectina-1, na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias e dos eicosanóides PGE2 e LTB4, por monócitos e neutrófilos humanos em resposta a cepas de P. brasiliensis de alta (Pb18) e baixa virulência (Pb265). Verificamos que as duas cepas do fungo, mas principalmente a Pb265 são capazes de induzir a produção de TNF- por monócitos. TLR2 e TLR4 foram os receptores que se mostraram mais envolvidos nesse processo. Adicionalmente, mostramos a capacidade de essas células liberarem IL-12 em resposta ao fungo, sendo os maiores níveis detectados para a cepa Pb265 e ocorrendo um importante papel do TLR4 e MR. Altos níveis de IL-10 também foram detectados, principalmente em resposta à cepa Pb18 para a qual houve um envolvimento do TLR2 e do MR. Para a cepa 265, o receptor de maior envolvimento foi o TLR2. As duas cepas, de forma semelhante, foram capazes de induzir uma maior produção de PGE2 e LTB4 pelos monócitos. No entanto, nenhum dos PRRs mostrou-se envolvido na produção dos... / Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidiodomycosis, the most prevalent deep mycosis in Latin America. During the innate immune response of the host against this fungus, phagocytic cells play an essential role, highlighting their participation in fungicidal activity and modulation of the inflammatory response. The functions of phagocytic cells against various microorganisms, including fungi, are initiated by the recognition of patterns molecular structures, shared by a group of microorganisms, called pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), by pattern recognizing receptors (PRRs) expressed by these cells. In this study, we assessed the involvement of the PRRs : TLR2, TLR4, mannose receptor (MR) and dectin-1, in the production of pró and anti-inflammatory cytokines and the eicosanoid PGE2 and LTB4, by human monocytes and neutrophils in response to high- (Pb18) and a low- (Pb265) virulence strain of P. brasiliensis. We showed that monocytes produce TNF-alpha and IL-12 in response to both strains, but with higher levels to Pb 265. TLR2 and TLR4 were the main receptors involved in TNF-alpha production, while for IL-12, the participation of TLR4 and MR was detected. High levels of IL-10 were also observed, mainly in response to Pb18, with involvement of TLR2 and MR. For Pb265, the receptor responsible was TLR2. Boths strains were able to induce PGE2 and LTB4 by monocytes. However, none of the studied receptors was shown to be involved in this production. Neutrophils did not produce TNF-alpha in response to both strains. On the other hand, these cells produce IL-12, mainly in response to Pb265, with participation of TLR2, dectin-1 and TLR4. These cells also produce L-10, whose levels were higher for Pb18 with involvement of TLR2 and MR and only TLR2 for Pb265. The production of PGE2 and LTB4 was also detected for these cells, similarly for the two strains. For PGE2, it ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:07:30Z : No. of bitstreams: 1 bufalo_mc_dr_botfm.pdf: 797176 bytes, checksum: 6380deab986370719e0282aec104706a (MD5) / Not available

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-21T18:27:39Z No. of bitstreams: 1 2016_JulianaOliveiradeToledoNóbrega.pdf: 2573059 bytes, checksum: 6910a36f8420ecb7db795151e7bbe6ef (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-19T13:22:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JulianaOliveiradeToledoNóbrega.pdf: 2573059 bytes, checksum: 6910a36f8420ecb7db795151e7bbe6ef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-19T13:22:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JulianaOliveiradeToledoNóbrega.pdf: 2573059 bytes, checksum: 6910a36f8420ecb7db795151e7bbe6ef (MD5) / A angiotensina II, o princípio ativo do sistema renina-angiotensina (SRA), além de desempenhar um papel na regulação da pressão arterial (PA), mostra efeitos pró-inflamatórios importantes após estimulação do seu receptor de tipo 1 (AT1R). Além disso, a excitação do sistema simpático e seus produtos de catecolaminas também apresentam efeitos pró-inflamatórios atribuíveis às vias desencadeadas por receptores β1-adrenérgicos (β1-AR). Assim, aumentado atividades simpática e do SRA, muitas vezes presente em hipertensão e diabetes, sendo determinantes importantes da disfunção endotelial e complicações relativas a contribuição de mediadores imunes. O objetivo deste estudo consistiu em testar a hipótese de que a farmacoterapia anti-hipertensiva produz efeitos anti - inflamatórios na prática clínica, este estudo investigou os níveis séricos de mediadores pró-inflamatórios, especificamente IL-6 , TNF - α e IFN - γ, em resposta ao uso de antihipertensivos para o controle da pressão arterial (PA ). O estudo prospectivo envolveu 110 mulheres de 60 anos ou mais, hipertensas, residentes na comunidade do Distrito Federal e entorno, com distúrbios metabólicos diferentes, entre 2005 a 2009. A terapia medicamentosa de redução da pressão arterial de curto prazo foi realizada de acordo com as diretrizes brasileiras atuais sobre a hipertensão e os níveis de citocinas basais foram medidos antes e depois da intervenção. Os resultados encontrados e intervenções realizadas representam as práticas de gestão de hipertensão atuais no Brasil e que correspondeu a uma redução significativa nos níveis da PA sistólica e diastólica em uma análise de grupo inteiro, mesmo quando usuárias e não usuárias das classes medicamentosas mais comuns foram consideradas separadamente. Considerando todos os pacientes, a IL-6 e TNF- α mostrou uma diminuição significativa na concentração sérica (p < 0,01) no final do estudo, enquanto que o nível médio de IFN - γ não foi significativamente diferente dos valores da linha de base. Em análises separadas, apenas os usuários de antagonistas do sistema renina - angiotensina (SRA) e os usuários de diuréticos exibiram o mesmo tratamento significativo induzido por redução de IL – 6 e TNF - α sérica, observada em todo o grupo . Os resultados demonstraram que um tratamento anti-hipertensivo clinicamente guiado é eficaz em reverter o baixo grau de um estado pró-inflamatório de citocinas séricas encontrada em mulheres pós-menopausa e sugere benefícios extra cardíacos de diuréticos e antagonistas do SRA. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tailored antihypertensive drug therapy prescribed to older women attenuates circulating levels of IL-6 and TNF-alpha. 2015. Angiotensin II, the active principle of the renin–angiotensin system (RAS), in addition to playing a role in the regulation of blood pressure (BP), shows key proinflammatory effects upon stimulation of its type 1 receptor (AT1R).1,2 Furthermore, sympathoexcitation and its catecholamine products also exhibit proinflammatory effects attributable to β1-adrenoceptor (β1-AR)-triggered pathways.3 Thus, enhanced sympathetic and RAS activities, often present in hypertension and diabetes, are important determinants of endothelial dysfunction and complications concerning the contribution of immune mediators. Objective: To test the hypothesis that antihypertensive drug therapy produces anti-inflammatory effects in clinical practice, this study investigated circulating levels of selected proinflammatory mediators (IL-6, TNF-α and IFN- γ) in response to multivariate drug directions for blood pressure (BP) control. Methods: Prospective study involving 110 hypertensive, community-dwelling older women with different metabolic disorders. A short-term BP-lowering drug therapy was conducted according to current Brazilian guidelines on hypertension, and basal cytokine levels were measured before and after intervention. Results: Interventions were found to represent current hypertension management practices in Brazil and corresponded to a significant reduction in systolic and diastolic BP levels in a whole-group analysis, as well as when users and non-users of the most common therapeutic classes were considered separately. Considering all patients, mean IL-6 and TNF-α levels showed a significant decrease in circulating concentration (p < 0.01) at endpoint, whereas mean IFN- γ level was not significantly different from baseline values. In separate analyses, only users of antagonists of the renin-angiotensin system (RAS) and users of diuretics exhibited the same significant treatment-induced reduction in serum IL-6 and TNF-α observed in the whole group. Conclusion: Our data demonstrates that a clinically guided antihypertensive treatment is effective in reversing the low-grade proinflammatory state of serum cytokines found in postmenopausal women and support extracardiac benefits from diuretics and RAS antagonists.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-06T14:40:26Z No. of bitstreams: 1 2015_WilcellyMachadodaSilva.pdf: 771674 bytes, checksum: 6dbcc9aea854f755b41f0160ddad0a49 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-01-24T14:33:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_WilcellyMachadodaSilva.pdf: 771674 bytes, checksum: 6dbcc9aea854f755b41f0160ddad0a49 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-24T14:33:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_WilcellyMachadodaSilva.pdf: 771674 bytes, checksum: 6dbcc9aea854f755b41f0160ddad0a49 (MD5) / Introdução: Aterosclerose é um processo inflamatório crônico iniciado no interior da parede arterial em resposta a lipoproteínas oxidadas. O aumento da espessura médio-intimal carotídea (EMIc) contribui como fator de risco para doença cerebrovasculares. Objetivo: Investigar a relação de parâmetros clínicos, bioquímicos e inflamatórios com medidas de EMIc, controlando as associações para fatores de risco clássicos. Métodos: Levantamento transversal de pacientes com 60 anos de idade ou mais quanto ao uso de medicamentos para doenças crônicas, perfil bioquímico e antropométrico, eventos circulatórios anteriores, histórico familiar de doenças do aparelho circulatório e principais aspectos do estilo de vida. Realizadas medições da parede da artéria carótida direita e esquerda. Foram mensuradas concentrações de mediadores inflamatórios por citometria de fluxo. Resultados: Análise de correlação revelou associação dos níveis logaritmicamente transformados das citocinas IL1β, IL6, IL8, IL10 e TNFα com as medidas absolutas de EMI da carótida esquerda. Outros mediadores inflamatórios avaliados (IFNγ, IL2, IL4, IL12p70 e IL17a) não mostraram associação com quaisquer das medidas de EMIc. Comparação dos níveis circulatórios logaritmicamente transformados das citocinas entre os indivíduos agrupados conforme tercis de espessura médio-intimal da carótida esquerda confirmou correlação positiva com os níveis de TNFα e IL1β, com ajustamento necessário para HDL-c. Em regressão logística multivariada, log10TNFα foi a variável mais preditiva para explicar a variação encontrara nos valores de EMIc (R2 = 0.209), que acrescida dos log10IL1β e log10IL6, nesta ordem, responderam por 29,5% da variância nas medidas do EMIc. Conclusão: Nossos resultados sugerem que níveis circulantes de IL1β, IL6, IL8, IL10 e TNF apresentam correlação com a EMI da carótida esquerda em indivíduos idosos. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Background: Atherosclerosis is a chronic inflammatory process within the arterial wall initiated in response to endogenously modified structures, particularly oxidized lipoproteins that stimulate both innate and adaptive immune responses. The increasing of carotid intima-media thickness (cIMT) has been a strong predictor of future vascular events. Objective: to investigate the relationship of a profile of bloodcarried inflammatory mediators with measures of cIMT in elderly subjects, taking traditional risk factors into account. Methods: Clinical inspection for present and past chronic conditions and events as well as biochemical and anthropometric measurements were performed for patients aged 60 years or older in ambulatory care. Scores of cIMT were obtained bilaterally in the distal common carotid artery wall. Serum concentrations of ten different cytokines were assessed by bead-based, multiplexed flow cytometry immunoassays. Results: Correlation analysis demonstrated a significant level of association between log-transformed levels of the cytokines IL1β, IL6, IL8, IL10 and TNFα (P < 0.05) with raw IMT scores of the left carotid. The other immune mediators investigated (IFNγ, IL2, IL4, IL12p70 and IL17a) showed not to associate with either cIMT scores. Accordingly, comparison of the log-transformed circulating levels of the cytokines across the individuals grouped in increasing tertiles of intima-media thickness of the left carotid artery confirmed a positive correlation with levels of TNFα and IL1β, with adjustment necessary to HDLc. Stepwise multivariate regression showed that log10TNFα was the first most predictive variable in the model (R2 = 0.209), which added to log10IL1β and log10IL6 in this order accounted for 29.5% of the variance in scores of intima-media thickness. Conclusion: Our results suggest that the logarithmically transformed levels of IL1β, IL6, IL8, IL10 and TNF independently correlated with the score of the left cIMT.