Orientador: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Eloi Dezan Junior / Banca: Gustavo Sivieri de Araújo / Banca: Carla Renata Sipert / Banca: Frederico Canato Martinho / Resumo: O objetivo deste trabalho foi colaborar com o entendimento dos mecanismos que envolvem a relação entre as infeções de origem endodôntica e o estado de homeostasia corpórea. Para isso investigamos o perfil inflamatório local da periodontite apical induzida e relacionamos com alterações no perfil sistêmico em ratos portadores de uma ou múltiplas infecções de origem endodôntica. Foram utilizados 30 ratos da linhagem Wistar distribuídos em 3 grupos de 10 animais: ratos saudáveis; 1AP - ratos com infecção endodôntica em um elemento dentário; 4AP ratos com infecções endodônticas em 4 elementos dentários. Após 30 dias, foi coletado sangue por punção cardíaca para a realização do hemograma (hemácias, volume globular, hemoglobina, VCM, CHCM, leucócitos, neutrófilos, linfócito, monócito, eosinófilo, basófilo e plaquetas); da quantificação sérica das citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17, IL-23) por ELISA e da quantificação de óxido nítrico (NO). Após coleta sanguínea, os animais foram sacrificados, as maxilas e mandíbulas foram processadas para análise em microscopia de luz em coloração de H.E. e para marcação imunoistoquímica dos mediadores inflamatórios supracitados. Os resultados das diferentes análises e a relação entre os achados locais e sistêmicos foram analisados por testes estatísticos específicos para cada caso (p<0,05). Nas análises histológicas, foi confirmada a presença de periodontites apicais no 1AP e 4AP, com infiltrado inflamatório moderado. Além disso, foi observado aumento de todos os mediadores supracitados nas lesões quando comparado aos tecidos saudáveis (p<0.05). Nas análises séricas, foi observado aumento linfócitos, leucócitos, TNF-α, IL-6, IL-17 e IL-23 no 4AP quando comparado aos ratos... / Abstract: The aim of this work will contribute to understanding of the mechanisms that involve the relationship between infections of endodontic origin and state of bodily homeostasis. Thus, we propose to investigate the profile of local inflammatory induced apical periodontitis and correlate with changes in the profile systemic model with a onlyl or multiple endodontic infections. It were used 30 Wistar rats divided into three groups of 10 animals each: healthy rats; 1AP - rats with only endodontic infection; 4AP rats with multiple endodontic infections. After 30 days, blood was collected by cardiac puncture for complete blood count (RBCs, packed cell volume, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin concentration, leukocytes, neutrophil, lymphocyte, monocyte, eosinophil, basophil and platelets), serum quantification of proinflammatory cytokines (IL-17, IL-23, IL-6, TNF-α, IFN-γ) by ELISA and nitric oxide. After blood collection, the animals were killed, the jaws were processed for light microscopy in HE staining and immunohistochemical staining of inflammatory mediators above. The results of the different analyzes and the correlation between the local and systemic findings were analyzed by statistical tests specific to each case (p<0,05). Histological analysis confirmed the presence of apical periodontitis in 1AP and 4AP, with moderate inflammatory infiltrate. Furthermore, it was observed increase of all above mediators in lesions when compared to healthy tissue (p <0.05). In serum analysis, 4AP showed lymphocytes, leukocytes, TNF-α, IL-6, IL-17 and IL-23 increase when compared to healthy rats (p <0.05). Furthermore, there was a decrease of NO in 4AP and 1AP when compared to healthy rats (p <0.05). IFN-γ level was not different between the groups (p>0.05). It is concluded that the presence of apical periodontitis... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-19Bitstream added on 2014-06-13T19:40:39Z : No. of bitstreams: 1 kanegae_mpp_dr_arafcf.pdf: 355186 bytes, checksum: d30a57da9f59ce845b56a723cbd4b539 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A apocinina, um métoxi-catecol (MC) extraído das raízes da planta Picrorhiza kurroa, é um eficiente inibidor do complexo NADPH oxidase (NOX) e seu mecanismo de ação está relacionado à inibição da agregação dos componentes enzimáticos e à oxidação catalisada por peroxidases. Estudamos a relação estrutura-atividade da apocinina e de metóxi-catecóis correlatos, na inibição da NOX. Com a função de alterar o potencial de redução das moléculas estudadas, escolhemos MC com grupos adicionais aceptores (MC-A) ou doadores de elétrons (MC-D) na posição para, em relação à hidroxila da molécula de apocinina. Os MC-D inibiram mais fracamente a ativação da NOX em neutrófilos ativados quando comparados aos MC-A. Acreditamos que isso se deva à fraca reatividade destes compostos com grupamentos sulfidrila de proteínas, assim, os MC-D são incapazes de oxidar grupos essenciais aos componentes citosólicos da enzima e desta forma, inibir sua ativação. A diapocinina, metabólito gerado após a oxidação da apocinina por peroxidases, foi sintetizada e avaliamos seus efeitos em neutrófilos e leucócitos mononucleares ativados quanto à inibição da ativação da NOX e em leucócitos mononucleares, em relação à liberação de citocinas e expressão do RNAm do componente de membrana gp91phox. Encontramos que a apocinina e a diapocinina inibiram os três fenômenos estudados, embora a diapocinina o tenha feito de modo mais eficiente. Acreditamos que isto possa estar relacionado ao efeito supressor da apocinina e diapocinina sobre a ativação da NADPH oxidase / Apocynin, a methoxy catechol (MC) extracted from the roots of Picrorhiza kurroa has been used as an efficient inhibitor of the NADPH oxidase (NOX) complex and its mechanism of action involves the impairment of the assemble process of the enzyme. Here, we studied the structure-activity relationship for apocynin and analogous ortho-methoxy-substituted catechols as inhibitors of the NADPH oxidase. Aiming to alter the reduction potential, the ortho-methoxy-catechol moiety was kept constant and the substituents at para position related to the hydroxyl group were varied. Two series of compounds were employed: methoxy-catechols bearing electron-withdrawing groups (MC-W) and methoxy-catechol bearing electron-donating groups (MC-D). We found that MC-D were weaker inhibitors of the NOX complex in stimulated neutrophils compared to MD-W. We suggest that there is a close relationship between the weak reactivity of MC-D compounds with sulfhydryl residues of proteins and there incapacity in inhibiting NOX activation. Diapocynin is a product generated by peroxidase oxidation of apocynin. Here we synthesized diapocynin and compared its efficacy as NOX inhibitor in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and neutrophils in relation to apocynin. Both drugs were also studied in cytokine release and its influence on gp91phox mRNA expression. We found that diapocynin was a more efficient inhibitor of NOX activation, gp91phox mRNA expression and cytokine release than apocynin. We suggest that these findings could be related to NOX inhibition process

Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Silvio Luis de Oliveira / Banca: José Maurício Sforcin / Banca: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Carlos Artério Sorgi / Banca: Wafa Hanna Koury Cabrera / Resumo: O Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose a micose sistêmica de maior prevalência na América Latina. Dentre os vários mecanismos da resposta inata contra esse fungo, os envolvendo as células fagocitárias desempenham papel central na contenção do processo infeccioso, com destaque para a participação na atividade fungicida e modulação da resposta inflamatória. As funções das células fagocitárias contra os diversos microrganismos, incluindo os fungos, são iniciadas a partir de mecanismos de ativação dessas células, gerados após o reconhecimento dos mesmos por receptores de reconhecimento de estruturas moleculares padrões (PRRs) que reconhecem estruturas moleculares compartilhadas por determinados grupos de microrganismos, os chamados padrões moleculares associados à patógenos (PAMPS). Nosso estudo objetivou estudar a participação dos receptores TLR2, TLR4, receptor de manose (MR) e dectina-1, na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias e dos eicosanóides PGE2 e LTB4, por monócitos e neutrófilos humanos em resposta a cepas de P. brasiliensis de alta (Pb18) e baixa virulência (Pb265). Verificamos que as duas cepas do fungo, mas principalmente a Pb265 são capazes de induzir a produção de TNF- por monócitos. TLR2 e TLR4 foram os receptores que se mostraram mais envolvidos nesse processo. Adicionalmente, mostramos a capacidade de essas células liberarem IL-12 em resposta ao fungo, sendo os maiores níveis detectados para a cepa Pb265 e ocorrendo um importante papel do TLR4 e MR. Altos níveis de IL-10 também foram detectados, principalmente em resposta à cepa Pb18 para a qual houve um envolvimento do TLR2 e do MR. Para a cepa 265, o receptor de maior envolvimento foi o TLR2. As duas cepas, de forma semelhante, foram capazes de induzir uma maior produção de PGE2 e LTB4 pelos monócitos. No entanto, nenhum dos PRRs mostrou-se envolvido na produção dos ... / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidiodomycosis, the most prevalent deep mycosis in Latin America. During the innate immune response of the host against this fungus, phagocytic cells play an essential role, highlighting their participation in fungicidal activity and modulation of the inflammatory response. The functions of phagocytic cells against various microorganisms, including fungi, are initiated by the recognition of patterns molecular structures, shared by a group of microorganisms, called pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), by pattern recognizing receptors (PRRs) expressed by these cells. In this study, we assessed the involvement of the PRRs : TLR2, TLR4, mannose receptor (MR) and dectin-1, in the production of pró and anti-inflammatory cytokines and the eicosanoid PGE2 and LTB4, by human monocytes and neutrophils in response to high- (Pb18) and a low- (Pb265) virulence strain of P. brasiliensis. We showed that monocytes produce TNF-alpha and IL-12 in response to both strains, but with higher levels to Pb 265. TLR2 and TLR4 were the main receptors involved in TNF-alpha production, while for IL-12, the participation of TLR4 and MR was detected. High levels of IL-10 were also observed, mainly in response to Pb18, with involvement of TLR2 and MR. For Pb265, the receptor responsible was TLR2. Boths strains were able to induce PGE2 and LTB4 by monocytes. However, none of the studied receptors was shown to be involved in this production. Neutrophils did not produce TNF-alpha in response to both strains. On the other hand, these cells produce IL-12, mainly in response to Pb265, with participation of TLR2, dectin-1 and TLR4. These cells also produce L-10, whose levels were higher for Pb18 with involvement of TLR2 and MR and only TLR2 for Pb265. The production of PGE2 and LTB4 was also detected for these cells, similarly for the two strains. For PGE2, it ... / Doutor

Orientador: Lenice do Rosário de Souza / Resumo: Introdução: aproximadamente 39.000.000 de pessoas vivem com HIV/aids no mundo, sendo 757.042 no Brasil, notificados desde 1980 até junho de 2014, e estima-se 12.000 casos de mulheres gestantes infectadas por ano. Na infecção pelo HIV, além da depleção intensa de linfócitos T CD4+ no intestino, ocorre comprometimento de vários mecanismos protetores epiteliais, fatores que causam danos na barreira intestinal e resultam na translocação microbiana, induzindo aumento da ativação imune sistêmica e inflamação crônica. No entanto, a translocação microbiana na infecção pelo HIV tem sido pouco investigada durante a gestação, período em que a mulher é suscetível a infecções bacterianas. Objetivo: estudar marcadores de translocação microbiana e inflamação em gravidas infectadas pelo HIV. Casuística e métodos: foram estudadas 30 voluntárias, sendo 12 gestantes infectadas pelo HIV (G1), 10 gestantes não infectadas (G2) e, oito mulheres infectadas pelo HIV não grávidas (G3), mas dentro da faixa etária reprodutiva. Foram coletados dados referentes à idade, idade gestacional (IG), carga viral plasmática do HIV (CV), contagem de linfócitos T CD4+ e nadir de T CD4+. A translocação microbiana foi avaliada por dosagem plasmática de CD14 solúvel (sCD14) pelo método imunoenzimático (ELISA) e, o estado inflamatório, pela análise de IL- 17, IL-10, IL-8, IL-1β, IL-6, IL-12p70 e TNF-α por citometria de fluxo (CBA). Para a análise estatística paramétrica foi utilizado o teste ANOVA, seguido de Tukey-Kra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Approximately 39.000.000 million people are living with HIV/AIDS worldwide and 757.042 in Brazil, reported from 1980 to June 2014, and it is estimated 12.000 cases of HIV-infected pregnant women annually. In HIV infection, besides the intense basal CD4+ T lymphocytes depletion, occurs impairment of various epithelial protective mechanisms, factors that contribute to intestinal barrier damages and result in microbial translocation, leading to increased systemic immune activation and chronic inflammation. However, microbial translocation in HIV infection has been poorly investigated during pregnancy, period which women are susceptible to bacterial infections. Objective: to study microbial translocation markers and the inflammatory status in HIV-infected pregnant women. Patients and Methods: We studied 30 volunteers, 12 HIV-infected pregnant women (G1), 10 HIV-uninfected pregnant women (G2) and 8 HIV-infected nonpregnant women (G3) in the same reproductive age than the other groups. Data were collected regarding age, gestational age (GA), plasma HIV viral load (VL), lymphocyte CD4+ T count and nadir. The microbial translocation was evaluated by measurement of plasmatic soluble CD14 (sCD14), performing the immunoenzymatic method (ELISA) and of inflammatory cytokines (IL-17, IL-10, IL-8, IL-1β, IL-6, IL -12p70 and TNF-α) by flow cytometry (CBA). The parametric statistical analysis was performed using ANOVA followed by Tukey-Kramer post-hoc test, and for non-parametri... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

PINTO, Ana Carolina Matias Dinelly. Efeito anti-inflamatório sistêmico e imunomodulador de um extrato de Coccidioides posadasii em artrite experimental. 2012. 82 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-17T16:15:03Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_acmdpinto.pdf: 7965307 bytes, checksum: 2fe25da357b4f2641963b21664d5f84b (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-20T12:59:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_acmdpinto.pdf: 7965307 bytes, checksum: 2fe25da357b4f2641963b21664d5f84b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-20T12:59:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_acmdpinto.pdf: 7965307 bytes, checksum: 2fe25da357b4f2641963b21664d5f84b (MD5) Previous issue date: 201 / Bioactive Natural Peptides are substances found in diverse species and may alter the immune response against pathogens, being either protective or harmful to the host. There is a growing interest in using natural products for the modulation of inflammatory processes, some of them derived from non-pathogenic fungi. However, pathogenic fungi also have immunomodulatory components. Previous studies showed that extracts of nematodes modulate the immune response in experimental model. Following the same line of research, it was investigated the effect of a protein-rich extract from Coccidioides posadasii in model of zymosan-induced arthritis (ZYA). Rats and mice received 1 mg and 0.1 mg zymosan intra-articularly (i.a.), respectively. Test groups received C. posadasii extract either per os or intraperitoneally (i.p.) 30 min prior to zymosan i.a. Controls received saline. Hypernociception was measured using the articular incapacitation test and the von Frey electronic test. Cell influx, nitrite, and cytokines levels were assessed in joint exudates. The synovia was used for histopathology. Cartilage damage was assessed through determining glycosaminoglycan (GAG) content. Pretreatment with the C. posadasii extract, either i.p. or per os, significantly and dose-dependently inhibited both acute and chronic cell influx as well as hypernociception, with a mild reduction of GAG loss and significant amelioration of the chronic synovitis. Reduction and alkylation of the extract abrogated protector effects seen previously. Administration of the C. posadasii extract did not alter i.a. levels of NO, IL-1β, and TNF-α in rats subjected to ZYA, whereas intra-articularly levels of IL-10 were significantly reduced. Data reveal that a C. posadasii extract reduces iNOS expression that is associated to inhibition of synovial apoptosis and decrease of IL-10 levels released into zymosan-inflamed joints.These data show a systemic anti-inflammatory and immunomodulatory role for the C. posadasii extract in ZYA. A preliminary approach, using electrophoresis, to characterize active components excluded the presence of carbohydrates while pointing to a protein or polypeptide present in extract as responsible for the biological activity. The protective effect of the C. posadasii extract is species-independent. Further characterization of the active components in this extract may unravel mechanistic effects relevant to understand the host response against fungal components. In addition, the anti-inflammatory effect of the extract illustrates the relevance of pursuing studies, since the oral activity may also be of relevance to the treatment of inflammatory diseases. / Peptídeos bioativos naturais são substâncias encontradas em diversas espécies que podem alterar a resposta imune contra patógenos, seja de forma prejudicial ou proteção para o hospedeiro. Há um crescente interesse na utilização de produtos naturais para a modulação de processos inflamatórios, alguns deles derivados de fungos não patogênicos. Fungos patogênicos, no entanto, também apresentam componentes imunomoduladores. Estudos prévios mostraram que extratos obtidos de nematódeos modularam a resposta imune em modelo experimental. Seguindo a mesma linha de pesquisa, foi investigado o efeito de um extrato obtido do fungo Coccidioides posadasii em modelo de artrite induzida por zymosan (AZy). Ratos e camundongos receberam 1 mg e 0,1 mg de zymosan intra-articular (i.a.), respectivamente. Grupos receberam o extrato de C. posadasii por via oral (v.o.) ou intraperitoneal (i.p.) 30 min antes do zymosan i.a. Grupos-controle receberam apenas solução salina. A hipernocicepção foi medida utilizando o teste de incapacitação articular e o von Frey eletrônico. O influxo celular agudo e crônico, bem como os níveis de nitrito e citocinas, foram avaliados no exudato sinovial. A sinóvia foi utilizada para exame histopatológico. O dano na cartilagem foi avaliado mediante determinação de conteúdo de glicosaminoglicanos (GAG). O pré-tratamento com o extrato de C. posadasii, seja i.p. ou v.o., inibiu significativamente e de forma dose-dependente, o influxo de células tanto na fase aguda como na fase crônica, bem como a hipernocicepção, acompanhada por uma ligeira redução na perda de GAG e uma melhora significativa da sinovite crônica. Redução e alquilação do extrato reverteram os efeitos protetores observados anteriormente. A administração do extrato de C. posadasii não alterou os níveis i.a. de NO, IL-1β, TNF-α, IFN-γ e IL-17 em ratos e camundongos submetidos à AZy, enquanto níveis de IL-10 foram significativamente reduzidos. Os dados revelam que um extrato de C. posadasii reduz a expressão de iNOS, que está associado com a inibição da apoptose sinovial e diminuição dos níveis de IL-10 liberados. Esses dados mostram um papel anti-inflamatório sistêmico e imunomodulador para o extrato de C. posadasii em AZy. Uma abordagem preliminar, utilizando técnicas eletroforéticas, para caracterizar componentes ativos excluiu carboidratos carregados enquanto aponta para frações proteicas ou polipeptídeo como responsáveis pela atividade biológica. O efeito do extrato de C. posadasii é espécie-independente. Caracterização adicional dos componentes ativos no extrato pode revelar mecanismos relevantes para compreender a resposta do hospedeiro contra os componentes fúngicos. Além disso, o efeito anti-inflamatório do extrato ilustra a importância da realização de estudos, uma vez que a atividade oral pode também ser relevante para o tratamento de doenças inflamatórias.

COSTA, Marcelo Leite Vieira. Desenvolvimento de um modelo experimental de esteatohepatite induzida pelo antineoplástico irinotecano. 2012. 112 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-08-12T11:23:59Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_mlvcosta.pdf: 4662463 bytes, checksum: 8cd9d7d42f78457af3a4dbb1a57e721c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-08-12T12:32:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_mlvcosta.pdf: 4662463 bytes, checksum: 8cd9d7d42f78457af3a4dbb1a57e721c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-12T12:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_mlvcosta.pdf: 4662463 bytes, checksum: 8cd9d7d42f78457af3a4dbb1a57e721c (MD5) Previous issue date: 2012 / The nonalcoholic steatohepatitis (NASH) is a relevant adverse effect of the chemotherapy with irinotecan, since it has been associated with increased surgical mortality after hepatic resections. So far there are no reports in the literature of a well established experimental irinotecan-induced NASH model. Aim: Develop an experimental model of irinotecan-induced NASH in mice that simulate the full histological alterations found in the clinical practice. Study the possible mechanisms and mediators involved into its pathophysiology including inflammatory cytokines, oxidative stress and the participation of intestinal bacterial translocation. Methods: Male swiss mice weighting between 35 and 30g were divided into experimental groups (n=8-10) and were injected with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan in the following dosages: 25, 50, 75 or 100 mg/kg, i.p, three times a week every other day. Mice were weighted and killed at the end of the weeks 1, 3, 5, 7 and 9. Measurements of ALT and AST, leukocytes, total proteins were performed in blood samples as well as cultures of portal vein and ocular plexus blood. In the hepatic tissue samples, total lipids, myeloperoxidase, malonaldehyde and nonproteic sulfidryl groups (NPSH) levels were analyzed, followed by histological evaluation, after slide preparation through HE and Masson methods. Duodenal samples were examined histologically for mucositis grading. Immunohistochemistry analysis for IL-1, IL-18, NOSi, TNFα e TLR-4 were performed in both hepatic and duodenal tissue samples. Statistical analysis was carried out through Student’s t test or Mann-Whitney test, as indicated. Results: The dose of 50mg/kg of irinotecan three times a week i.p. (IRI 50) associated to weight loss, low white cell count, hepatomegaly, decreased total plasma proteins and elevated hepatic enzymes (AST and ALT). IRI 50 altered oxidative stress parameters, elevating elevating malonaldehyde and decreasing NSPG levels at hepatic tissue starting at week 1. IRI 50 also was associated to the full histological changes found in NASH (steatosis, neutrophilic infiltration and hepatocyte balloning) when analyzed at the seventh week and compared to saline group. The duodenal samples showed severe mucositis changes starting at week three. It was also demonstrated elevated immunostaining for IL-1, iNOS and TLR-4 in both liver and duodenal samples at week seven. The cultures were positive for gram negative intestinal bacteria in portal and orbital blood since the first experimental week. Conclusion: The administration of the irinotecan 50mg/kg i.p. three times a week for seven consecutive weeks is an experimental model that reproduces all the histological changes found in the irinotecan-associated NASH found in clinical practice. Concomitant participation of inflammatory cytokines and oxidative stress were found to play a role in NASH pathogenesis in this model. Intestinal gram-negative bacterial translocation leading to portal bacteremia may represent the very first hepatic insult and the connection between the pathogenic factors. / A esteatohepatite não alcoólica (NASH) é um evento adverso do quimioterápico irinotecano extremamente relevante, pois associa-se a uma maior mortalidade após ressecções hepáticas. Até o momento não há na literatura um modelo experimental bem estabelecido de NASH induzido por irinotecano. Objetivo: Estabelecer um modelo experimental de NASH induzida pelo irinotecano em camundongos que simule os aspectos histopatológicos encontrados na clínica. Estudar os mecanismos e mediadores envolvidos na sua fisiopatologia incluindo citocinas inflamatórias, estresse oxidativo e participação da translocação bacteriana intestinal. Métodos: Camundongos machos do tipo Swiss, pesando entre 25 a 30g,foram divididos em grupos experimentais (n=8-10) e foram injetados com solução salina (5 mL/kg, i.p.) ou Irinotecano nas doses 25, 50, 75 or 100 mg/kg, i.p, três vezes por semana em dias alternados. Os animais foram então pesados e sacrificados ao fim das semanas 1, 3, 5, 7 e 9. No sangue foram dosados os níveis de ALT e AST, leucograma, proteínas totais e realizada hemocultura da veia porta e do plexo ocular. Nas amostras do tecido hepático, avaliaram-se os níveis de lipídeos totais, mieloperoxidase, malonaldeído e glutationa (GSNP) seguida da análise histopatológica realizada após preparação da lâmina pelos métodos HE e Masson para avaliar e graduar os critérios histológicos da NASH. As amostras de duodeno foram examinadas histologicamente (HE) para graduar a mucosite. Imunohistoquímica para IL-1, IL-18, NOSi, TNFα e TLR-4 foi realizada tanto nas amostras hepáticas como duodenais. A análise estatística foi realizada empregando o teste t de Student para variáveis não pareadas ou o teste Mann-Whitney quando indicado. Resultados: A dose de 50mg/kg de irinotecano três vezes por semana i.p. (IRI 50) se associou com perda de peso, leucopenia, hepatomegalia, diminuição das proteínas plasmáticas e aumento das enzimas hepáticas (ALT e AST). IRI 50 alterou os parâmetros de estresse oxidativo, elevando a expressão de malonaldeído e diminuindo GSNP com início na primeira semana do experimento. IRI 50 também se associou a todas as alterações histológicas da NASH (esteatose, infiltração neutrofílica e tumefação celular e fibrose) analisadas na sétima semana quando comparado com controle salina. Nas amostras duodenais, observamos alterações histológicas de mucosite severa a partir da terceira semana. Houve também em IRI 50 aumento da imunoexpressão de IL-1, NOSi e TLR-4 tanto nas amostras do fígado como nas do duodeno na semana 7. Nas hemoculturas de sangue portal e orbitário identificou-se o crescimento de enterobactérias gram-negativas desda a primeira semana do experimento. Conclusão: A administração de irinotecano 50mg/kg i.p. três vezes por semana por sete semanas consecutivas é um modelo experimental que reproduz todas as alterações histopatológicas da NASH induzida por irinotecano observadas na clínica. Existem evidências da participação concomitante das citocinas inflamatórias e do estresse oxidativo na patogênese da NASH em nosso modelo. A translocação bacteriana intestinal com bacteremia portal por gram-negativos pode ser o insulto primeiro e o elo de conexão comum entre os diversos fatores fisiopatológicos.

CAVALCANTE, Janio Emanuel Andrade. Influência dos polimorfismos nos genes das citocinas TNFα, IFNγ, TGFβ, IL-6 E IL-10 no perfil clínico-laboratorial de pacientes com anemia falciforme. 2013. 74 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T11:19:22Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jeacavalcante.pdf: 1826669 bytes, checksum: ecc466f1ce56dcf712ba30f94f85b778 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T11:19:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jeacavalcante.pdf: 1826669 bytes, checksum: ecc466f1ce56dcf712ba30f94f85b778 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-20T11:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jeacavalcante.pdf: 1826669 bytes, checksum: ecc466f1ce56dcf712ba30f94f85b778 (MD5) Previous issue date: 2013 / Sickle cell anemia (SCA) is caused by a point mutation leading the substitution of glutamic acid for valine at the sixth position of the beta globin chain. Associations between single nucleotide polymorphisms (SNPs) and several clinical events have been described in sickle cell patients. The aim of this study was to determine the polymorphisms frequency in the cytokine genes TNFα, IFNγ, TGFβ, IL-6 e IL-10 in sickle cell patients and healthy controls, and to investigate the cytokines genotypes influence in clinical and laboratory profile in sickle cell patients. The sickle cell patients group was composed by 41 adults’ patients with molecular diagnosis, of both sexes, in outpatients care at the Hematology Center of Ceará (HEMOCE), from march 2011 to july 2012. The study included 90 healthy blood donors matched for age and sex. We collected 5 mL of venous blood for DNA extraction kit using the GFX Genomic Blood DNA Purification (GE Healthcare) and typing of cytokine genes polymorphisms by kit from One-Lambda (Canoga Park, CA, USA). The polymorphisms frequencies analysis and associations between polymorphisms and clinical events were performed using the two-tailed Fisher exact test. To check the genotypes influence in laboratory parameters were used parametric test ANOVA and non-parametric Kruscal Wallis test. The clinical and laboratory data were obtained by active search in the medical records. Sickle cell patients typified for TGFβ genotypes showed a tendency to appear a lower frequency of TGFβ T/T G/G genotype than control group. Sickle cell patients typified for CC GC/ CC CC /TT CC/TC CC TGFβ genotypes (low producer) obtained a leukocytes median number greater than patients typified for TT GG/TC GG TGFβ group (high producer). A significant difference on IL-6 genotypes frequency was observed between patient group and control group. Regarding IL-6, patients typified for CC genotype exhibited an average/median MCHC higher than patients typified for GC or GG genotypes. Patients typified for CC genotype showed evident tendency to lower fetal hemoglobin levels and higher reticulocytes percentages. We find an association between ACC ATA + ATA ATA + ACC ACC IL-10 group, lower IL-10 producer, and acute chest syndrome (ACS). It is concluded that genotypes associated with low IL-10 production may play a role in the predisposition to ACS in sickle cell patients. / A anemia falciforme (AF) é causada por uma mutação pontual que leva a substituição do ácido glutâmico pela valina na sexta posição da cadeia de beta globina. A associação entre polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) e diversos eventos clínicos tem sido descrita em pacientes com AF. O objetivo do presente estudo foi verificar a frequência dos polimorfismos nos genes das citocinas TNFα, IFNγ, TGFβ, IL-6, e IL-10 nos pacientes com AF e controles saudáveis, e investigar o impacto dos genótipos dessas citocinas no perfil clínico-laboratorial dos pacientes. 41 Indivíduos adultos com diagnóstico molecular de AF, de ambos os sexos, em acompanhamento ambulatorial no Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará (HEMOCE) participaram do estudo, no período de março de 2011 a julho de 2012. Um grupo controle foi constituído por 90 indivíduos saudáveis pareados quanto à idade e o sexo. Foram coletados 5 mL de sangue venoso para extração do DNA através do kit GFX Genomic Blood DNA Purification (GE Healthcare) e para tipificação dos polimorfismos dos genes das citocinas através do “kit” da “One-Lambda” (Canoga Park, CA, EUA). A análise das frequências dos polimorfismos e as associações com os eventos clínicos foram realizadas pelo teste exato de Fisher bicaudal. Para verificar a influência dos genótipos nos parâmetros laboratoriais foram utilizados o teste paramétrico ANOVA e o não paramétrico de Kruscal Wallis. Os dados clínicos e laboratoriais foram obtidos por busca ativa nos prontuários médicos. Pacientes com AF tipificados para os genótipos de TGFβ CC GC/ CC CC /TT CC/TC CC (baixo produtor) obtiveram um número mediano de leucócitos maior do que os pacientes do grupo TT GG/TC GG (alto produtor). Houve diferença significativa na frequência dos genótipos de IL-6 entre o grupo de pacientes e o grupo controle. Ainda em relação a IL-6, os pacientes tipificados para o genótipo CC apresentaram valores médios/medianos de CHCM maiores que os pacientes portadores dos genótipos GC ou GG. Foi evidenciada tendência dos pacientes tipificados para o genótipo C/C apresentarem menores níveis de hemoglobina fetal (HbF) e maiores porcentagens de reticulócitos. Houve uma associação entre o grupo de genótipos de IL-10 ACC ATA + ATA ATA + ACC ACC, grupo baixo produtor de IL-10, e a síndrome torácica aguda (STA). Conclui-se que genótipos associados com a baixa produção de IL-10 possam desempenhar um papel importante na predisposição à STA em adultos com AF.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000002.pdf: 934978 bytes, checksum: 6130fb3c5d45076149e34df39e1d2d14 (MD5) Previous issue date: 2006 / (...) nos propomos analisar a relação entre a resposta imune celular de pacientes chagásicos, após estímulo in vitro de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) com os antígenos recombinantes CRA (Cytoplasmatic Repetitive Antigen) ou FRA (Flagellar Repetitive Antigen) de Trypanosoma cruzi, e as formas clínicas crônicas da doença de Chagas. O grupo de pacientes chagásicos consistiu de 36 indivíduos (...). Um grupo de 19 indivíduos não chagásicos (NC) foi incluído como um grupo controle. PBMC foram isoladas por centrifugação através de um gradiente de densidade de Ficoll-Paque. As células foram estimuladas com Fitohemaglutinina, Concanavalina, CRA, FRA ou com antígeno solúvel de Epimastigota (Ag-Epi) por 24h, 72h ou 6 dias. Culturas sem estímulo foram utilizadas como controles negativos. A proliferação celular foi avaliada após estímulo por 6 dias de cultivo através da quantificação de 3 H-timidina incorporada. As citocinas foram detectadas em sobrenandantes de cultura obtidos após 24h (TNF-a e IL-4), 72h (IL-10) e 6 dias (IFN-g) através de ELISA de captura. Os resultados mostraram que apesar de apresentarem índices de estimulação baixos, as células dos pacientes chagásicos estimuladas com os antígenos recombinantes apresentaram maiores respostas proliferativas quando comparados com as dos indivíduos NC. Porém, não foi possível estabelecer um padrão de resposta linfoproliferativa entre os pacientes portadores das formas clínicas FC e FI da doença. Com relação às citocinas secretadas no sobrenadante de cultura após estímulo com antígenos de T. cruzi, os resultados mostraram que CRA, bem como Ag-Epi, foram capazes de estimular a produção de TNF-a e IFN-g em pacientes chagásicos quando comparado aos indivíduos NC. Porém, os níveis dessas citocinas mostraram-se similares entre os pacientes chagásicos portadores das formas clínicas FC e FI. Apesar de não apresentarem a capacidade de diferenciar as formas clínicas da doença de Chagas através do ensaio de linfoproliferação e da detecção de citocinas de sobrenadante de cultura por ELISA, os antígenos poderiam ser utilizados em estudos sobre a imunopatogênese da doença, investigando papéis imunorregulatórios antígeno-específicos. Além disso, esses antígenos poderiam dar continuidade ao desenvolvimento de marcadores de evolução de prognóstico das formas clínicas severas da doença de Chagas através da avaliação de citocinas intracitoplasmáticas por citometria de fluxo.

Made available in DSpace on 2015-06-08T13:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 34.pdf: 2083197 bytes, checksum: c8bc232619444a6c584242fffa408aa0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A doença de Chagas é largamente distribuída pelo continente americano, onde afeta milhões de indivíduos. Clinicamente, apresenta uma diversidade de manifestações. Na fase crônica, os indivíduos infectados pelo Trypanosoma cruzi podem ser assintomáticos ou apresentar complicações cardíacas e/ou digestivas. Alguns estudos têm demonstrado o envolvimento da resposta imune no desenvolvimento e manutenção das formas clínicas crônicas da infecção chagásica. A produção e a expressão diferencial de algumas citocinas entre os portadores da doença de Chagas crônica tornaram estas moléculas alvos de estudos de polimorfismos genéticos. O presente estudo teve o objetivo de avaliar polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) em portadores da doença de Chagas crônica. Foram avaliados os SNPs-1082G/A do gene IL-10 e -308G/A do gene TNF-alfa em uma população de portadores da doença de Chagas crônica selecionada no Ambulatório de Doença de Chagas e Insuficiência Cardíaca do Pronto Socorro Cardiológico de Pernambuco. Participaram desse estudo, 256 indivíduos, sendo 66 assintomáticos e 190 com cardiopatia chagásica crônica. A população estudada foi composta em sua maioria por mulheres idosas. Dentre as comorbidades presentes, a hipertensão arterial sistêmica foi a mais prevalente. A genotipagem dos SNPs foi realizada através de reação em cadeia da polimerase em tempo real com sondas TaqMan a partir de DNA genômico obtido de amostras de sangue periférico de cada indivíduo. Não foram observadas diferenças na distribuição das freqüências genotípicas e alélicas dos SNPs estudados entre as formas clínicas da doença de Chagas crônica. Também não foram observadas diferenças na distribuição das freqüências genotípicas e alélicas do SNP -1082G/A do gene IL-10 entre portadores de cardiopatia chagásica crônica. No entanto, observou-se um maior percentual, estatisticamente significante, do genótipo GA e do alelo A do SNP -308G/A do gene TNF-alfa nos portadores de cardiopatia chagásica leve, o que sugere que esse SNP pode atuar como um fator de proteção no desfecho da cardiopatia chagásica crônica

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 victor_solorzano_ioc_mest_2014.pdf: 3199066 bytes, checksum: 5a50f9918959a0ee0f9a1c603688f5d5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue se tornou a arbovirose mais difundida no mundo, atingindo mais de 100 países. O sorotipo DENV-4 foi reintroduzido no Brasil em 2010, se espalhou para as diferentes regiões brasileiras sendo responsável por uma das maiores epidemias de dengue relatadas no país em 2013. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil clínico-laboratorial, citocinas/quimiocinas inflamatórias e mediadores da coagulação em pacientes infectados pelo DENV durante esta epidemia. Para isto, foram avaliados 265 casos confirmados de dengue atendidos nos centros de saúde dos estados do RJ e MS no ano de 2013. Os pacientes foram classificados de acordo com a nova classificação da OMS, 2009 nos grupos: 158 (70,2%) dengue sem sinais de alarme (DSSA), 65 (28,9%) dengue com sinais de alarme (DCSA) e 2 (0,9%) dengue grave. Os sinais de alarme mais frequentes foram dor abdominal persistente (61,5%) e sangramento de mucosas (32,3%). O DENV-4 foi o sorotipo de maior incidência e 85,2% dos pacientes apresentaram infecção secundária. Pacientes DCSA/DG apresentaram baixa contagem de leucócitos totais, de plaquetas e altos níveis séricos de AST/TGO e ALT/TGP quando comparados aos pacientes DSSA e aqueles ODF (outras doenças febris). A quantificação dos mediadores inflamatórios por ensaios imunoenzimáticos indicou: (i) níveis aumentados de citocinas (TNF-\03B1, IL- 6 e IL-10) e quimiocinas (IL-8/CXCL8, IP-10/CXCL10 e MCP-1/CCL2) nos pacientes DSSA e DCSA/DG quando comparados com o grupo controle; (ii) níveis aumentados de IL-10 e IL-6 nos pacientes DCSA/DG enquanto que IL-8/CXCL8 foi maior nos pacientes DSSA Em relação aos parâmetros de coagulação: (iii) Os pacientes DSSA e DCSA/DG apresentaram menores níveis do fator tecidual (TF) e maiores níveis do inibidor fisiológico da via do TF (TFPI) quando comparados com o grupo controle; (iv) Baixos níveis de fibrinogênio foram encontrados nos pacientes DCSA/DG e níveis elevados de trombomodulina foram encontrados nos pacientes entre 4-7 dias de doença. As análises de correlação demonstraram correlação inversa entre os níveis circulantes de IP-10/CXCL10 e IL-10 com a contagem de plaquetas e leucócitos totais e correlação positiva com níveis séricos de AST/TGO. Além disso, IL-10 foi associada diretamente com relação albumina/globulina. As análises de correlação demonstraram que os níveis de TF estavam diretamente correlacionados com os níveis do TFPI, que por sua vez foi associado inversamente com a contagem de plaquetas. Estes resultados sugerem mecanismos de regulação da cascata da coagulação durante a infecção pelo DENV. Apesar dos altos níveis circulantes de IL-10 encontrados nos pacientes DCSA/DG, a análise da curva sob a área ROC não encontrou bom valor preditivo na discriminação entre DSSA e DCSA/DG e, portanto a IL-10 não se mostrou adequada para o uso como um biomarcador nesta população / Dengue has become the most widespread arbovirus in the world, reaching more th an 100 countries. The DENV - 4 serotype was reintroduced in Brazil in 2010, and spread to the different Brazilian regions being responsible for one of the largest epidemics of dengue reported in the country in 2013 . The objective of this study was to evaluat e the clinical and laboratory profile, and inflammatory cytokines /chemokines and coagulation mediators in patients infected with DENV during this epidemic. For this, were evaluated 265 confirmed cases of dengue attended at health centers in the states of R J and MS in the year 2013. P atients were classified according to the new WHO classification, 2009 in groups: 158 (70.2%) de ngue without warning signs (DwoWS ), 65 (28.9%) dengu e with warning signs (DwWS ) and 2 (0.9%) severe dengue (SD) . The most frequent w a rning signals were persistent abdominal pain (61.5%) and mucosa l bleeding (32.3%). The DENV - 4 was the most prevalent serotype and 85,2% of dengue patients showed secondary infection . DwWS/SD patients showed low er white blood cell and platele t count s , and h igher AST and ALT serum levels compared to DwoWS and other febrile illnesses patients. Quantification of inflammatory mediators by immunoassays indicated : (i) i ncreased levels of cytokines ( TNF - α , IL - 6 and IL - 10 ) and chemokines ( IL - 8/CXCL8, IP - 10/CXCL10 an d MCP - 1/CCL2 ) in DwoWS and DwWS patients compared with healthy individuals ; ( ii) increased levels of IL - 10 and IL - 6 in DwWS/SD patients while IL - 8/CXCL8 was increased in DSSA patients; In respect to coagulation parameters: (iii ) DwoWS and DwWS/SD patients showed lower levels of sTF and higher of TFPI compared with the control group; ( i v) Low er levels of fibrinogen were found in DwWS/SD patients and high er levels of thrombomodulin in patie nts between 4 - 7 days of illness; Correlation analysis showed an invers e correlation between circulating levels of IP - 10/CXCL10 and IL - 10 with the total amount of platelets and leukocytes and positive correlat ion with serum levels of AST . Furthermore, IL - 10 was directly a ssociated with albumin/ globulin ratio. Corre lation anal ysis showed that TF levels were directly correlated with TFPI l evels, which in turn was inversely related with platelets counts . These results suggest mechanisms involving regulation of the coagulation cascade during DENV infection. Despite high er circulat ing levels of IL - 10 found in DwWS/SD patients, analysis of the area under the ROC curve, did not showed a good predictive value in discriminating those who were likely to develop DwWS/SD and therefore IL - 10 was not suitable for use as a biomarker in this p opulation.