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Translocação bacteriana em camundongos infectados com Schistosoma mansoni submetidos à desnutrição neonatal

GALVÃO, Bruno Henrique Andrade 25 February 2014 (has links)
Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2015-05-28T16:38:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bruno Henrique Andrade Galvão.pdf: 2504824 bytes, checksum: 6daeadcfa43e3c8d892b11b71b3c2ada (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-28T16:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bruno Henrique Andrade Galvão.pdf: 2504824 bytes, checksum: 6daeadcfa43e3c8d892b11b71b3c2ada (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / CNPQ / Introdução: Desnutrição e esquistossomose são problemas de saúde pública que ocorrem simultaneamente em regiões endêmicas do mundo. Nessas zonas o Schistosoma mansoni, observa-se, frequentemente, uma sobreposição de desnutrição e infecção parasitária. As lesões intestinais causadas pela infecção parasitária e o efeito de uma nutrição deficiente na resposta imunológica intestinal, como ocorre na desnutrição, podem predispor ao desenvolvimento do processo de translocação bacteriana. Objetivo: Observar se em camundongos adultos na fase crônica da esquistossomose, submetidos à desnutrição no período do aleitamento, há diferença na ocorrência de translocação bacteriana em relação ao sexo. Métodos: Camundongos fêmeas Swiss webster (n=60) foram divididos, no período de aleitamento, em 2 grupos: Nutrido (N) e Desnutrido (D) – amamentados por mães alimentadas com dieta contendo 17% e 8% de proteína à base de caseína, respectivamente. Aos 35-45 dias de vida, 15 animais de cada grupo foram infectados com, em média, 30 cercárias de S. mansoni, constituindo os grupos: Nutrido Infectado (NI), Nutrido Não Infectado (NNI), Desnutrido Infectado (DI) e Desnutrido Não Infectado (DNI). O peso corporal (PC) dos animais foi mensurado diariamente no período de aleitamento e semanalmente a partir do 22º dia. 45 dias após a exposição cercariana, foi realizada a confirmação da infecção pelo método de Kato-katz. Aos 161 dias de vida, os animais foram eutanasiados para coleta de amostras biológicas para estudo da translocação bacteriana (TB), análises da microbiota e morfometria intestinal. Para estudo da TB, foram coletados sangue periférico e da veia porta, fragmentos de órgãos e linfonodos mesentéricos. Para a microbiota, as fezes foram coletadas da região média do intestino delgado. Segmentos desta região foram seccionados transversalmente e longitudinalmente para análise morfométrica. Resultados: Os animais do grupo D apresentaram um menor ganho de PC em relação ao grupo N a partir do 3º dia, diferença observada durante todo o período experimental. Verificou-se um maior índice de TB nos animais infectados, comparando-os aos não infectados. Entre os infectados, houve uma maior incidência de TB no grupo D comparado ao N, entretanto, a diferença não foi significativa quanto ao sexo. Observou-se um maior número de ovos e vermes recuperados no grupo N, entretanto não houve diferença na maturação de ovos na mucosa intestinal. Quanto a morfometria intestinal, houve diferença entre NI e NNI para altura e área da vilosidade, e apenas na altura para NI e DNI. Observamos uma maior diversidade de colônias nos grupos de animais desnutridos, controle e esquistossomóticos. Conclusões: A desnutrição modifica a resposta imune e pode favorecer translocação bacteriana em camundongos, em ambos os sexos e é mais intensa nos animais infectados por S. mansoni.
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Desenvolvimento de um modelo experimental de esteatohepatite induzida pelo antineoplásico irinotecano / Development of an experimental model of steatohepatits induced by the antineoplastic irinotecan

Costa, Marcelo Leite Vieira January 2012 (has links)
COSTA, Marcelo Leite Vieira. Desenvolvimento de um modelo experimental de esteatohepatite induzida pelo antineoplástico irinotecano. 2012. 112 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-08-12T11:23:59Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_mlvcosta.pdf: 4662463 bytes, checksum: 8cd9d7d42f78457af3a4dbb1a57e721c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-08-12T12:32:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_mlvcosta.pdf: 4662463 bytes, checksum: 8cd9d7d42f78457af3a4dbb1a57e721c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-12T12:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_mlvcosta.pdf: 4662463 bytes, checksum: 8cd9d7d42f78457af3a4dbb1a57e721c (MD5) Previous issue date: 2012 / The nonalcoholic steatohepatitis (NASH) is a relevant adverse effect of the chemotherapy with irinotecan, since it has been associated with increased surgical mortality after hepatic resections. So far there are no reports in the literature of a well established experimental irinotecan-induced NASH model. Aim: Develop an experimental model of irinotecan-induced NASH in mice that simulate the full histological alterations found in the clinical practice. Study the possible mechanisms and mediators involved into its pathophysiology including inflammatory cytokines, oxidative stress and the participation of intestinal bacterial translocation. Methods: Male swiss mice weighting between 35 and 30g were divided into experimental groups (n=8-10) and were injected with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan in the following dosages: 25, 50, 75 or 100 mg/kg, i.p, three times a week every other day. Mice were weighted and killed at the end of the weeks 1, 3, 5, 7 and 9. Measurements of ALT and AST, leukocytes, total proteins were performed in blood samples as well as cultures of portal vein and ocular plexus blood. In the hepatic tissue samples, total lipids, myeloperoxidase, malonaldehyde and nonproteic sulfidryl groups (NPSH) levels were analyzed, followed by histological evaluation, after slide preparation through HE and Masson methods. Duodenal samples were examined histologically for mucositis grading. Immunohistochemistry analysis for IL-1, IL-18, NOSi, TNFα e TLR-4 were performed in both hepatic and duodenal tissue samples. Statistical analysis was carried out through Student’s t test or Mann-Whitney test, as indicated. Results: The dose of 50mg/kg of irinotecan three times a week i.p. (IRI 50) associated to weight loss, low white cell count, hepatomegaly, decreased total plasma proteins and elevated hepatic enzymes (AST and ALT). IRI 50 altered oxidative stress parameters, elevating elevating malonaldehyde and decreasing NSPG levels at hepatic tissue starting at week 1. IRI 50 also was associated to the full histological changes found in NASH (steatosis, neutrophilic infiltration and hepatocyte balloning) when analyzed at the seventh week and compared to saline group. The duodenal samples showed severe mucositis changes starting at week three. It was also demonstrated elevated immunostaining for IL-1, iNOS and TLR-4 in both liver and duodenal samples at week seven. The cultures were positive for gram negative intestinal bacteria in portal and orbital blood since the first experimental week. Conclusion: The administration of the irinotecan 50mg/kg i.p. three times a week for seven consecutive weeks is an experimental model that reproduces all the histological changes found in the irinotecan-associated NASH found in clinical practice. Concomitant participation of inflammatory cytokines and oxidative stress were found to play a role in NASH pathogenesis in this model. Intestinal gram-negative bacterial translocation leading to portal bacteremia may represent the very first hepatic insult and the connection between the pathogenic factors. / A esteatohepatite não alcoólica (NASH) é um evento adverso do quimioterápico irinotecano extremamente relevante, pois associa-se a uma maior mortalidade após ressecções hepáticas. Até o momento não há na literatura um modelo experimental bem estabelecido de NASH induzido por irinotecano. Objetivo: Estabelecer um modelo experimental de NASH induzida pelo irinotecano em camundongos que simule os aspectos histopatológicos encontrados na clínica. Estudar os mecanismos e mediadores envolvidos na sua fisiopatologia incluindo citocinas inflamatórias, estresse oxidativo e participação da translocação bacteriana intestinal. Métodos: Camundongos machos do tipo Swiss, pesando entre 25 a 30g,foram divididos em grupos experimentais (n=8-10) e foram injetados com solução salina (5 mL/kg, i.p.) ou Irinotecano nas doses 25, 50, 75 or 100 mg/kg, i.p, três vezes por semana em dias alternados. Os animais foram então pesados e sacrificados ao fim das semanas 1, 3, 5, 7 e 9. No sangue foram dosados os níveis de ALT e AST, leucograma, proteínas totais e realizada hemocultura da veia porta e do plexo ocular. Nas amostras do tecido hepático, avaliaram-se os níveis de lipídeos totais, mieloperoxidase, malonaldeído e glutationa (GSNP) seguida da análise histopatológica realizada após preparação da lâmina pelos métodos HE e Masson para avaliar e graduar os critérios histológicos da NASH. As amostras de duodeno foram examinadas histologicamente (HE) para graduar a mucosite. Imunohistoquímica para IL-1, IL-18, NOSi, TNFα e TLR-4 foi realizada tanto nas amostras hepáticas como duodenais. A análise estatística foi realizada empregando o teste t de Student para variáveis não pareadas ou o teste Mann-Whitney quando indicado. Resultados: A dose de 50mg/kg de irinotecano três vezes por semana i.p. (IRI 50) se associou com perda de peso, leucopenia, hepatomegalia, diminuição das proteínas plasmáticas e aumento das enzimas hepáticas (ALT e AST). IRI 50 alterou os parâmetros de estresse oxidativo, elevando a expressão de malonaldeído e diminuindo GSNP com início na primeira semana do experimento. IRI 50 também se associou a todas as alterações histológicas da NASH (esteatose, infiltração neutrofílica e tumefação celular e fibrose) analisadas na sétima semana quando comparado com controle salina. Nas amostras duodenais, observamos alterações histológicas de mucosite severa a partir da terceira semana. Houve também em IRI 50 aumento da imunoexpressão de IL-1, NOSi e TLR-4 tanto nas amostras do fígado como nas do duodeno na semana 7. Nas hemoculturas de sangue portal e orbitário identificou-se o crescimento de enterobactérias gram-negativas desda a primeira semana do experimento. Conclusão: A administração de irinotecano 50mg/kg i.p. três vezes por semana por sete semanas consecutivas é um modelo experimental que reproduz todas as alterações histopatológicas da NASH induzida por irinotecano observadas na clínica. Existem evidências da participação concomitante das citocinas inflamatórias e do estresse oxidativo na patogênese da NASH em nosso modelo. A translocação bacteriana intestinal com bacteremia portal por gram-negativos pode ser o insulto primeiro e o elo de conexão comum entre os diversos fatores fisiopatológicos.
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Associação entre esquistossomose mansônica e translocação bacteriana: estudo dos aspectos imunológicos em camundongos submetidos à desnutrição neonatal

Oliveira, Danielly Cantarelli de 05 March 2013 (has links)
Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T13:57:56Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO DANIELLY CANTARELLI.pdf: 2222925 bytes, checksum: 6d35973456253a2c27e15b93187e36d7 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T13:57:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO DANIELLY CANTARELLI.pdf: 2222925 bytes, checksum: 6d35973456253a2c27e15b93187e36d7 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-03-05 / PROPESQ - UFPE CNPq / Introdução: É comum a associação de esquistossomose mansônica com desnutrição, uma vez que populações com baixo padrão socioeconômico habitam regiões endêmicas. Estudos sugerem que deficiências nutricionais podem estar relacionadas com a supressão da resposta imunológica em animais infectados por S. mansoni. Quando imposta no período crítico da lactação, a desnutrição é um agente estressor indutor de alterações tardias na resposta imunológica, implicada em diversas modificações fisiológicas e metabólicas, relacionadas à depressão do sistema imune. A desnutrição também tem sido considerada na patogênese da translocação bacteriana (TB), por promover aumento da permeabilidade e diminuição das enzimas intestinais. Estudos têm relatado uma maior ocorrência de TB em animais infectados por S. mansoni, quando comparados a animais sem infecção, contudo conhecimentos imunológicos acerca da relação são escassos. Objetivo: Investigou-se a associação entre os níveis de IFN- γ e IL-10 e a ocorrência de translocação bacteriana, em camundongos submetidos à desnutrição neonatal. Métodos: Camundongos fêmeas Swiss webster (n=32) foram divididos, no período de aleitamento, em 2 grupos: Nutrido (N) e Desnutrido (D) – amamentados por mães alimentadas com dieta contendo 17% e 8% de proteína à base de caseína, respectivamente. Aos 35-45 dias de vida, 8 animais de cada grupo foram infectados com, em média, 30 cercárias de S. mansoni, constituindo os grupos: Nutrido Infectado (NI), Nutrido Não Infectado (NNI), Desnutrido Infectado (DI) e Desnutrido Não Infectado (DNI). O peso corporal (PC) dos animais foi mensurado diariamente no período de aleitamento e semanalmente a partir do 22º dia. 45 dias após a exposição cercariana, foi realizada a confirmação da infecção pelo método de Kato-katz. Aos 161 dias de vida, os animais foram eutanasiados para coleta de amostras biológicas. Coletou-se sangue cardíaco para contagem total (CT) e diferencial de leucócitos. Para estudo da translocação bacteriana (TB), foram coletados sangue periférico, sangue portal, baço, fígado, linfonodos mesentéricos e fezes da região média do intestino delgado. Realizou-se cultura de células esplênicas para dosagem de IFN-γ e IL-10 no sobrenadante, através de ensaio imunoenzimático – ELISA. Resultados: Os animais do grupo D apresentaram um menor ganho de PC em relação ao grupo N a partir do 4º dia, diferença observada durante todo o período experimental. Verificou-se um maior índice de TB nos animais infectados, comparando-os aos não infectados. Entre os infectados, houve tendência a uma maior incidência de TB no grupo D comparado ao N, entretanto, a diferença não foi significativa. Os isolados bacterianos responsáveis pela TB em animais nutridos foram Bacillus sp., Citrobacter freundii, Enterococcus faecalis, Proteus rettgeri e Staphylococcus saprophyticus. Nos animais desnutridos, foram encontrados Bacillus sp., Corynebacterium sp., Enterococcus faecalis, Serratia liquefaciens, Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase negativa e Staphylococcus saprophyticus. Foi observada uma menor produção de IFN-γ no grupo DI, comparado ao NI. Os níveis de IL-10 foram mais elevados no grupo NI, em relação ao grupo DI. A CT de leucócitos mostrou-se elevada nos grupos infectados, quando comparados aos controles. Os números de neutrófilos e monócitos foram maiores nos grupos NI e DI, quando comparados aos grupos NNI e DNI, respectivamente. Os valores de linfócitos mostraram-se aumentados no grupo DI, comparado ao DNI. Conclusões: A desnutrição modifica a resposta imune e pode favorecer translocação bacteriana em camundongos infectados por S. mansoni.
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Translocação bacteriana no coto colônico distal desfuncionalizado – estudo em ratos

PINTO JÚNIOR, Francisco Edilson Leite 30 June 2005 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-19T18:11:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Edilson Pinto UFPE 08 03 2016.pdf: 842976 bytes, checksum: b2d115f7e6b7425b1d7e4630bcf253fb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T18:11:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Edilson Pinto UFPE 08 03 2016.pdf: 842976 bytes, checksum: b2d115f7e6b7425b1d7e4630bcf253fb (MD5) Previous issue date: 2005-06-30 / O objetivo do presente estudo foi investigar se as alterações do cólon desfuncionalizado, evidenciadas na colite de derivação fecal (CD), seriam capazes de permitir Translocação Bacteriana (TB). Foram utilizados 62 ratos Wistar, machos, pesando entre 220 e 320 gramas, divididos em dois grupos: A (Colostomia) e B (Controle), contendo cada um 31 animais. No grupo A, todos os animais foram submetidos à colostomia, terminal boca única, em cólon ascendente. A partir do 70º dia de observação os seguintes procedimentos foram adotados: em cinco ratos foi injetado por via retal – no segmento desfuncionalizado - 2ml de uma solução salina 0,9% nos animais (subgrupo A1); em oito animais inoculou-se, por via retal, uma solução de 2ml contendo Escherichia coli ATCC 25922 (American Type Culture Collection), na concentração de 108 Unidades Formadoras de Colônias por mililitros (UFC/ml) - Subgrupo A2; em dez animais inoculava-se a mesma solução de Escherichia coli, na concentração de 1011UFC/ml (Subgrupo A3); e em oito animais colhia-se o muco encontrado no segmento colônico distal desfuncionalizado, para dosagens de açúcares neutros e proteínas totais (subgrupo A4). Nos animais do grupo B (controle) não foi confeccionada a colostomia nos ratos, no entanto, todos os outros eventos realizados no grupo A foram repetidos. Nos animais dos subgrupos A1, A2, A3, B1, B2, e B3, após serem mortos, realizou-se punção cardíaca para coleta de 2ml de sangue e retiraram-se fragmentos de tecidos de linfonodo do mesocólon, fígado, baço, pulmão e rim, para análise microbiológica. Essa análise consistia em evidenciar, em placas de Petri, contendo meio de cultura ágar-Mac Conkey, a presença de UFC de Escherichia coli ATCC 25922. Os testes de Mann-Whitney e Anova foram aplicados como técnicas investigativas para associação das variáveis. A ocorrência de TB, só foi evidenciada nos animais em que a concentração inoculada de Escherichia coli ATCC 25922, atingia níveis de 1011UFC/ml, ou seja nos Subgrupos A3 e B3, no entanto, sendo significantemente superior (80%) nos animais sem colostomia (subgrupo B3) quando comparados com os ratos com colostomia (20%) do subgrupo A3 (P<0,05). Pulmão, fígado e linfonodo foram os tecidos com maior percentual de recuperação bacteriana, tanto no subgrupo A3, quanto no B3. A hemocultura foi considerada positiva em 60 % dos animais do subgrupo B3 e em 10% do subgrupo A3 (p<0,05). Houve maior concentração de açúcares neutros, no subgrupo A4 - média 27,3mg/ml -, do que no subgrupo B4 - média 8,4mg/ml – (P<0,05). Conclui-se que as modificações na arquitetura da mucosa intestinal na CD podem promover alterações na barreira intestinal, mas não necessariamente conduz a maior freqüência de TB. / The objective of this study was to investigate if the alterations of the diverted colon segment mucosa, evidenced in fecal colitis, would be able to alter Bacterial Translocation (BT). Sixty-two Wistar male rats ranging from 220 to 320 grams of weight, divided in two groups: A (Colostomy) and B (Controls), with 31 animals each one. In group A, all animals underwent end colostomy, one stoma, in ascending colon; and in the 70th POD was injected in five rats, by rectal route – diverted segment - 2ml of a 0.9% saline solution in animals (A1 subgroup); in eight animals was inoculated, by rectal route, 2ml of a solution containing Escherichia coli ATCC 25922 (American Type Culture Collection), in a concentration of 108 Colony Forming Unit for milliliters (CFU/ml) - A2 Subgroup; in ten animals the same solution of E. coli was inoculated, in a concentration of 1011 CFU/ml (A3 Subgroup); and in eight animals was collected part of the mucus found in the diverted distal colonic segment for neutral sugars and total proteins dosage (A4 subgroup). The animals from the group B underwent the same procedures of group A, but with differences in the colostomy confection. Animals from subgroups A1, A2, A3, B1, B2, and B3, had had 2ml of blood aspirated from the heart and had taken fragments from mesocolon lymphnodes, liver, spleen, lung and kidney, for microbiological analysis, after their death. That analysis consisted of evidencing, in Petri dishes, containing agar-Mac Conkey as culture medium, the presence of Escherichia coli ATCC 25922 CFU. Mann-Whitney and Anova Tests were applied as analytic techniques for association of variables. The occurrence of BT was evidenced only in those animals in which inoculated concentration of Escherichia coli ATCC 25922, reached levels of 1011CFU/ml, i.e. in Subgroups A3 and B3, although, being significantly greater (80%) in those animals without colostomy (subgroup B3) when compared to the ones with colostomy (20%) from the subgroup A3 (P <0.05). Lung, liver and limphnode were the tissues with larger percentile of bacterial recovery, so much in subgroup A3, as in B3. Blood culture was considered positive in 60% of the animals from subgroup B3 and in 10% of those from subgroup A3 (p <0.05). There was greater concentration of neutral sugars, in subgroup A4 - mean 27.3mg/ml -, than in subgroup B4 - mean 8.4mg/ml - (P <0.05). It can be concluded that modifications in the architecture of intestinal mucosa in the DC, can cause alterations in the intestinal barrier, but it does not necessarily lead to an increased frequency of BT.
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Análise do potencial de virulência de amostras de Escherichia coli do sorotipo O51:H40 / Analysis of potential virulence of strains of the Escherichia coli serotype O51: H40

Moreira, Fabiana Campiteli [UNIFESP] January 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) constitui um importante patotipo de E. coli envolvido com doença diarréica. EPEC é dividida em dois sub-grupos, EPEC típica (tEPEC), portadora do plasmídio EAF (EPEC adherence factor), e EPEC atípica (aEPEC), desprovida desse plasmídio. EPEC produz lesão attaching-effacing (A/E) em células intestinais, determinada por genes contidos no locus of enterocyte effacement (LEE). LEE codifica um sistema de secreção tipo 3 (SST3), a adesina de membrana externa Intimina e várias proteínas efetoras que incluem Tir (receptor translocado de intimina). Entre as amostras de aEPEC isoladas em nosso meio, aquelas pertencentes ao sorotipo O51:H40 têm sido as mais frequentes. Em estudo anterior, analisamos 11 amostras de E. coli do sorotipo O51:H40 que apresentavam a região LEE aparentemente completa, 70 por cento das quais foram capazes de produzir a lesão A/E, conforme indicado pela positividade em um teste in vitro, que avalia o acúmulo de actina decorrente da lesão A/E. Para ampliar o conhecimento do potencial enteropatogênico dessas amostras, neste estudo, foram investigadas diversas propriedades genotípicas e fenotípicas, bem como o comportamento in vivo de amostras selecionadas em coelho e em rato. Foram pesquisados genes recém descritos em E. coli (lpfA1, cifA, ldaG, espJ, toxB, espM e espT) e a ocorrência de fosforilação de resíduos de tirosina na molécula Tir, em cultivos de células HeLa e células intestinais diferenciadas T84. Os resultados obtidos confirmam que o sorotipo O51:H40 contém amostras com potencial enteropatogênico, uma vez que 75 por cento das amostras testadas produziram lesão A/E em alça ileal de coelhos in vivo. Além disto, a aEPEC 1711-4, como a tEPEC E2348/69, apresentou capacidade significativa de translocar a mucosa intestinal em ensaios de translocação bacteriana (TB) em ratos, sendo que a aEPEC 1711-4 provocou também danos à perfusão tecidual. A ausência de translocação observada com mutante defectivo na montagem do SST3 (1711-4:escN- ) sugeriu que proteínas efetoras secretadas são importantes para a ocorrência do fenômeno. Em conclusão, o sorotipo O51:H40 de E. coli compreende amostras potencialmente enteropatogênicas, a maioria das quais deve ser classificada como aEPEC; o sobrecrescimento de pelo menos uma amostra de aEPEC, em intestino de rato, pode levar à translocação e a danos à microcirculação sistêmica.. / Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is an important pathotype of E. coli involved in diarrheal disease. EPEC is divided into two groups, typical EPEC (tEPEC), carrier of plasmid EAF (EPEC adherence factor), and atypical EPEC (aEPEC), devoid of the plasmid. EPEC produces injury attachingeffacing (A/E) in intestinal cells, determined by genes in the locus of enterocyte effacement (LEE). LEE encodes a type 3 secretion system (SST3), the outer membrane adhesin of Intimin and several effector proteins including Tir (translocated receptor for intimin). Among aEPEC strains of isolated in our midst, those belonging to serotype O51: H40 have been the most frequent. In a previous study, we analyzed 11 strains of E. coli of serotype O51: H40 that had an apparently LEE region complete, 70% of which were of them was able to produce the lesion A/E, as indicated by a positive in vitro assay, which assesses the accumulation of actin due to the injury A/E. To increase the knowledge of the enteropathogenic potential of these strains in this study, we investigated several genotypic and phenotypic properties and the behavior of strains selected in vivo in rabbit and rat. We studied genes recently described in E. coli (lpfA1, cifA, ldaG, espJ, toxB, espM and espT) and the occurrence of residues of tyrosine phosphorylation in Tir molecule in cultures of HeLa cells and T84 intestinal cells differentiated. The results confirm that serotype O51: H40 includes strains with enteropathogenic potential, since 75% of the strains tested produced lesion A/E in the rabbit ileal loop in vivo. Moreover, the aEPEC 1711-4/89, as tEPEC E2348/69, showed significant ability translocation of the intestinal mucosa in bacterial translocation (BT) assays in rats, and the aEPEC 1711-4/89 also caused damage to tissue perfusion. The lack of translocation observed with mutant defect in the assembly of SST3 (1711-4: escN- ) suggested that secreted effector proteins are important for the occurrence of the phenomenon. In conclusion, serotype O51:H40 of E. coli includes potentially enteropathogenic strain, most of which should be classified as aEPEC; the overgrowth of at least one strain of aEPEC in intestine of rats, can lead to damage to the translocation and systemic microcirculation. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Translocação por via intestinal de amostras de Klebsiella pneumoniae: papel da adesina CF29K / Intestinal bacterial translocation by Klebsiella pneumoniae: role of the CF29K adhesin

Kuratomi, Talissa [UNIFESP] January 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O gênero Klebsiella faz parte da família Enterobacteriaceae e pode ser encontrado no meio ambiente e nas mucosas de seres humanos e animais. Atualmente, o gênero é composto de cinco espécies, das quais a K. pneumoniae, e mais raramente, a K. oxytoca, são causadoras de infecções. As infecções por K. pneumoniae acometem primordialmente indivíduos hospitalizados, geralmente fragilizados por outras condições, que acabam, na maioria das vezes, desenvolvendo infecções do trato urinário, lesões supurativas, bacteremias e septicemia. Além disso, a K. pneumoniae encontra-se entre as espécies mais comumente implicadas em infecções por microorganismos resistentes a antibióticos, sendo, depois de Escherichia coli, a causa mais comum de septicemia por Gramnegativos. O primeiro estágio da infecção hospitalar por K. pneumoniae consiste na colonização do trato gastrointestinal. A translocação bacteriana (TB), definida como a passagem de bactérias viáveis através da mucosa intestinal, é um processo endógeno que se coloca como hipótese para a ocorrência dessas infecções. A colonização intestinal demanda que as bactérias estejam firmemente estabelecidas na superfície da mucosa para resistir aos movimentos peristálticos do intestino. A proteína CF29K, descrita em uma amostra clínica de K. pneumoniae, é uma adesina não fimbrial que demonstrou mediar uma adesão do tipo difuso em células cultivadas de origem intestinal. Praticamente, não há relatos sobre o papel desta adesina no potencial patogênico de K. pneumoniae. Tampouco há demonstração da capacidade de K. pneumoniae translocar por via intestinal em modelo animal imunologicamente competente e que não apresente lesão da barreira mucosa. O objetivo geral deste trabalho foi estudar o envolvimento da adesina afimbrial CF29K no processo de translocação de K. pneumoniae por via intestinal. O ensaio de TB realizado em modelo in vivo, mostrou que a K. pneumoniae CF504, protótipo de CF29K, é capaz de translocar para linfonodos do mesentério, fígado e baço. Este achado reveste-se de grande consistência na medida em que o modelo de TB empregado não expõe o animal a fatores que levam ao dano da barreira intestinal. A supressão da expressão da adesina CF29K, obtida por mutagênese específica do gene cf29A, da amostra K. pneumoniae CF504, não interferiu na sua capacidade de aderir a células Caco-2, sugerindo que outra(s) adesina(s) também deva desempenhar este papel na amostra selvagem. Da mesma forma, a ausência de CF29K não resultou em menor eficiência de translocação por via intestinal. Além disso, o estudo de 27 amostras clínicas de K. pneumoniae não detectou o gene cf29A em nenhum dos isolados. No entanto, o teste de TB realizado com 15 dessas amostras resultou positivo. Concluise, portanto, que a translocação bacteriana por via intestinal é um processo que independe da adesina CF29K e que deve refletir um possível mecanismo de patogenicidade de K. pneumoniae envolvido, seja na instalação da infecção per se, seja no agravamento de quadros infecciosos sistêmicos já instalados. / Klebsiella is a member of the family Enterobacteriaceae and can be isolated from the environment and from the mucosal surfaces of human beings and animals. There are five known species of Klebsiella, being K. pneumoniae and K. oxytoca the most associated with infections. Mainly hospitalized patients are infected and can present urinary tract infections, supurative lesions, bacteremia, and septicemia. K. pneumoniae strains presenting high resistance to antibiotics are the most common Gram negatives causing septicemia after Escherichia coli. Colonization of the intestinal tract is the first stage in the nosocomial infections by K. pneumoniae. Being so, bacterial translocation (BT), defined as the passage of viable bacteria through the intestinal barrier, is an endogenous process that applies as a hypotheses for the occurrence of those infections. Intestinal colonization demands a firm interaction between the bacteria and the mucosal surface so they can resist to the intestinal peristalses. The CF29K protein discovered in a clinical isolate of K. pneumoniae, is an afimbrial adhesin responsible for diffuse adhesion to intestinal cells in vitro. There is no acknowledge on the role of this adhesin to the pathogenesis of K. pneumoniae, neither on the ability of these bacteria to translocate through the intact intestinal barrier of immunological competent animal models. The aim of this study was to evaluate the involvement of the adhesin CF29K in the BT process. It was shown that CF504, the prototype K. pneumoniae strain for CF29K, is able to translocate trough the intestinal barrier of rats, being recovered from mesenteric lymph nodes, liver, and spleen, after two hours of inoculation. This fact gains importance since the BT assay used causes no physical damage to the intestinal mucosa. The suppression of the CF29K protein expression obtained by site-direct mutagenesis of the cf29A gene of the prototype strain did not change its ability to adherer to Caco-2 cells, suggesting that there might be other (s) adhesin(s) also involved in this interaction. Nevertheless, the absence of CF29K did not abolish the BT capacity of the strain. Besides, the study of 27 clinical isolates of K. pneumoniae did not detect the presence of cf29A gene in any strain. Even so, the BT test carried out with 15 of those isolates resulted positive. We conclude that BT across the intestinal mucosa is a process not related to the adhesin CF29K. We propose that BT may reflect a possible mechanism of pathogenicity of K. pneumoniae involved either in the installation of the infection, or in the worsening of already installed systemic infection. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Efeitos da associação de aminoglicosídeo ao tratamento antimonial na translocação microbiana decorrente do envolvimento da mucosa intestinal na leishmaniose visceral experimental

Paulo, Elaine Marques January 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-22T17:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 68700.pdf: 2578722 bytes, checksum: 8c5310d6fb306ce43d34892517750ffc (MD5) 68700.pdf.txt: 211841 bytes, checksum: cb3a25da2d45d4cf6b421b83c876f820 (MD5) 68700.pdf.jpg: 1263 bytes, checksum: 09883dde54f8c4065ee9c8c3e8f0cb35 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) é causada no Brasil pela Leishmania (Leishmania) infantum. A fase ativa da LV é caracterizada por uma imunossupressão parasito-específica acompanhada de baixos níveis de células T CD4+. Apesar disso, uma intensa ativação celular e resposta pró-inflamatória são observadas. Em outras doenças deficientes de célula T, tais como o HIV-1/AIDS, o lipopolissacarídeo (LPS), provavelmente oriundos da translocação microbiana são um componente crucial na ativação imune. Resultados recentes do nosso grupo mostraram que o LPS, juntamente com os antígenos parasitários, estão envolvidos na ativação das células T e na produção de citocinas pró-inflamatórias nos pacientes com LV. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar os níveis plasmáticos de LPS na LV experimental, assim como a influência do tratamento específico anti-Leishmania e/ou o tratamento com antibiótico para bactérias Gram-negativas na evolução clínica desses animais e nos níveis do LPS plasmático. Além disso, avaliou-se a ocorrência da ativação celular e o desenvolvimento da resposta humoral ao longo do acompanhamento e dos diferentes tratamentos. Para isso, foram utilizados 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus), que foram divididos em oito grupos: sem infecção (G1), infectado com L. infantum (G2), infectado e tratado com o antimonial pentavalente e/ou com o antibiótico amicacina (G3, G4 e G5, respectivamente). Três grupos sem infecção tratados com os fármacos propostos também foram incluídos (G6, G7 e G8) Na avaliação clínica realizou-se a pesagem dos animais, bem como do fígado e do baço. Os aspectos físicos dos animais infectados e as alterações macroscópicas do intestino delgado também foram avaliados. A carga parasitária esplênica também foi quantificada pelo imprint. Os níveis plasmáticos do LPS foram avaliados através de um kit comercial. As dosagens do anticorpo IgG total anti- Leishmania foram realizada no soro dos animais pela técnica de ELISA. A avaliação do grau de comprometimento do sistema imune dos hamsters foi feita através da quantificação do percentual de células T CD4+ e o grau de ativação celular pela molécula CD25, através da citometria de fluxo. Os hamsters com LV apresentaram parâmetros laboratoriais e imunológicos similares aos da LV humana, exceto pela ausência de sinais clínicos visíveis característicos dessa infecção. Os animais apresentaram um aumento de peso progressivo ao longo dos 101 dias pós-infecção (dpi), mas este foi condizente com seu crescimento e idade. Os tratamentos propostos não influenciaram no peso dos animais avaliados. O fígado e o baço dos hamsters apresentaram também um aumento de peso condizente com seu crescimento, entretanto foram observadas alterações macroscópicas em momentos tardios da infecção pelo parasito, que coincidiram com o aumento da carga parasitária esplênica desses animais. O intestino delgado dos animais infectados mostraram-se mais friáveis à manipulação e observou-se uma diminuição significativa do número de placas de Peyer em toda sua superfície quando comparados ao grupo não-infectado Elevados níveis de LPS plasmático foram observados nos animais infectados a partir de 15 dpi, como já foi descrito na LV humana. Uma intensa ativação celular foi observada nos animais infectados, tanto através da molécula CD25 nos linfócitos T CD4+ quanto pelos níveis de anticorpos IgG total anti-Leishmania, ambos aumentaram com o tempo de infecção. Os níveis de LPS se correlacionaram positivamente com a ativação das células T quando todos os animais infectados tratados ou não foram avaliados, sugerindo que o LPS pode contribuir para a ativação já descrita na LV humana. De modo geral, verificou-se nesse trabalho que o tratamento concomitante com o antimonial pentavalente e o antibiótico amicacina foram benéficos em diversos aspectos, como na recuperação do aspecto acroscópico dos órgãos, na diminuição da carga parasitária esplênica e imunológica (redução dos níveis de ativação) nos hamsters com LV, inferindo um possível sinergismo terapêutico entre esses fármacos. Esses resultados permitem sugerir a elegibilidade dessa estratégia terapêutica para o tratamento da LV humana / Visceral leishmaniasis (VL) is caused in Brazil by Leishmania (Leishmania) infantum. The active phase of VL is characterized by parasite-specific immunosuppression along with low levels of CD4+T cells. Despite this, an intense cellular activation and pro-inflammatory cytokine response is observed. In other T-cell deficient diseases such as HIV-1/AIDS, the lipopolisaccharide (LPS) probably from gut microbial translocation has a crucial role on immune activation. Our recent results showed that LPS along with parasite antigens are implicated in T-cell activation and pro-inflammatory cytokines in VL patients. In this context, our aim was to evaluate whether plasma LPS levels were increased in experimental VL and the influence of the specific treatment anti-Leishmania and/or the treatment with gram-negative antimicrobial in the clinical evolution of this animals and in the LPS levels. Also, we investigated the occurrence of the cellular activation and the development the humoral response during the follow up and under the different treatments. For this, 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus) were divided into eight groups: without infection (G1), infected with L. infantum (G2), infected and treated with anti-leishmanial therapy (antimonial) and/or with antibiotic amikacin (G3, G4 and G5, respectively). Three groups without infection treated with the different drugs were also included (G6, G7 and G8). The clinical evaluation included animal weighting as well as spleen and the liver weight. The physical aspects of infected animals and the macroscopic alterations of the small intestine were also evaluated. Parasite load was quantified by the number of stained amastigotes in the spleen imprint. Plasma LPS levels were measured using a commercial kit. The quantification of serum anti-Leishmania IgG levels was performed by ELISA. The assessment of immune system impairment was done by quantifying the percentage of CD4 + T cells and the degree of cell activation by the CD25 molecule by flow cytometry. The infected hamsters presented laboratory and immunological parameters similar to those of a human VL, except for the absence of visible clinical signs characteristic of this infection. The animals also showed a progressive weight gain over the 101 days post-infection (dpi), but this was consistent with their growth and age. The proposed treatments did not affect the weight of the animals evaluated. The liver and spleen of hamsters also showed an increase in weight consistent with its growth, however anatomical changes were observed at late times of parasite infection, which coincided with the increased splenic parasite load in these animals. In addition, the small intestine of infected animals was more friable to handle and showed a significant decrease in the number of Peyer's patches across its surface compared to uninfected group. Elevated plasma levels of LPS were observed in infected animals from 15 dpi, as previously described in human VL. An intense cellular activation was observed in the infected hamsters using the CD25 molecule on CD4+ T lymphocytes and the total IgG anti-Leishmania levels, both of which increased with time of infection. LPS levels were positively correlated with the activation of T cells when all infected animals treated or not were evaluated, suggesting that LPS may contribute to the activation already described in VL patients. In general, this study showed that concomitant treatment with pentavalent antimony and the antibiotic amikacin were beneficial in many aspects, such as the recovery of macroscopic aspects of the organs, the decrease of splenic parasite load and reduced levels of immune activation in hamsters with VL, suggesting a possible therapeutic synergism between these drugs. These results suggest the eligibility of this therapeutic strategy for the treatment of human VL.
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Influência do grau de ativação celular de linfócitos T no prognóstico de pacientes com Leishmaniose visceral coinfectados pelo HIV-1 acompanhados prospectivamente

Freitas, Maria Luciana Silva de January 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-15T12:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 maria_freitas_ioc_mest_2015.pdf: 2682437 bytes, checksum: 7716b2371405ae3b8279f9da1f7ec256 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A ativação imune crônica e a depleção linfocitária são marcantes na infecção pelo HIV-1 e pela Leishmania infatum. Esta ativação tem sido associada à exaustão do sistema imune em pacientes infectados pelo HIV e pode contribuir para as frequentes recidivas de leishmaniose visceral (LV) em pacientes LV/HIV-1. Assim, é importante investigar se a manutenção do tratamento anti-Leishmania combinado à terapia antirretroviral (TARV) é capaz de diminuir os níveis de ativação e, consequentemente, reduzir o número de recidivas da LV. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi avaliar o grau de ativação celular e o seu impacto sobre o comprometimento imunológico, em pacientes LV/HIV-1, assim como determinar sua influência no prognóstico (recidiva ou remissão clínica) pós-tratamento anti-Leishmania dos pacientes coinfectados. Os pacientes foram divididos em: Não-recidivantes (NR;n=6) e Recidivantes (R;n=11). Ambos os grupos foram seguidos da fase ativa até 12 meses pós-tratamento (mpt), sendo mantidos sob TARV e em uso de profilaxia secundária com anfotericina B (50mg/quinzenal), desde o final do tto da LV. As contagens de TCD4+, grau de ativação (CD38+HLA-DR+), imunosenescência (CD57+CD27-), níveis de CD14 solúvel e anticorpos anti-Leishmania foram avaliados para os pacientes e voluntários sadios Durante a fase ativa da LV, ambos os grupos apresentaram níveis similares de todos os parâmetros avaliados. Entretanto, nos períodos de 6 e 12 mpt, o grupo NR mostrou um ganho significativo de células TCD4+, bem como uma diminuição dos percentuais de linfócitos TCD4 e TCD8 ativados, diferente do grupo R, que manteve uma baixa reconstituição imunológica, um alto grau de ativação em ambas as subpopulações de TCD8+ e CD4+ (p<0,0001 e p<0,01, respectivamente), além de níveis elevados de sCD14 (p<0,05), sugerindo um persistente grau de ativação imune entre pacientes R. As cargas viral e parasitária permaneceram baixas ou indetectáveis sem correlacão com a ativação. Entretanto, tal ativação se correlacionou negativamente com o dano na recuperação imunológica desses pacientes. Apesar dessas diferenças, os percentuais de linfócitos T senescentes foram similarmente elevados entre os grupos R e NR. A menor capacidade do grupo R em reduzir os níveis de ativação celular em comparação ao NR, pode estar relacionada ao comprometimento da resposta efetora, que decai a cada episodio de recidiva. Além disso, a profilaxia secundária parece modificar a história natural dos pacientes coinfectados que estão experenciando o primeiro episódio da doença, ao contrário daqueles que já apresentam várias recidivas / Chronic immune activation and lymphocytic depletion are striking features in HIV-1 and Leishmania infatum infection. Such activation has been associated with the exhaustion of the immune system in HIV+ patients and can contribute to frequent recurrences of visceral leishmaniasis (VL) in coinfected patients. Therefore, it is important to investigate whether maintenance of anti-Leishmania treatment combined with antiretroviral therapy (ART) is able to decrease the levels of cellular activation and hence reduce the number of VL relapses. In this ways, the aim of this study was to evaluate the cellular activation degree and its impact on the immune impairment in VL/HIV patients, as well as to determine their influence on prognosis (relapse or clinical remission) after anti-Leishmania treatment. The patients were divided into non-recurrent (NR; n=6) and recurrent (R; n=11). Both groups were followed by active phase up to 12 months post-treatment (mpt). They were on ART and use of secondary prophylaxis with amphotericin B (50mg/fortnightly) from the end of the VL treatment. CD4+ T cell counts, activation degree (CD38+/HLA-DR+), immunosenescence (CD57+/CD27-), soluble CD14 levels and anti-Leishmania antibodies were evaluated in the patients and healthy controls. During the active phase of VL, both groups had similar levels of all parameters However, at 6 and 12 mpt, the NR group showed a significant gain in CD4+T cells, as well as a decrease in the percentage of activated CD4 and CD8 T lymphocytes. Unlikely, R group kept a low immune reconstitution, a high degree of activation of both CD4 and CD8 subpopulations (p <0.0001 and p <0.01, respectively), and high levels of sCD14 (p <0.05), suggesting a persistent level of immune activation in R coinfected patients. Viral and parasite load remained low or undetectable with no correlation with activation. However, this activation degree was negatively correlated with impaired immune reconstitution of patients. Despite these differences, the percentages of senescent T lymphocytes were similarly high between R and NR groups. The smaller capacity of the R group in reducing cell activation levels compared to NR, may be related to some functional impairment of effector response that has been declining every recurrence episode. In addition, secondary prophylaxis seems to modify the natural history of co-infected patients who are presenting the first episode of the disease, as opposed to those who already have several recurrences
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Avaliação do uso de bactérias probióticas na pancreatite aguda induzida em ratos / Evaluation of the use of probiotic bacteria in acute pancreatitis induced in rats

Bianca D'Elia Matzke 03 September 2008 (has links)
Acute pancreatitis presents high rates of morbidity and mortality, mainly when it is associated with infection of pancreatic necrosis. The mechanism of this occurrence has not been fully elucidated, but may possibly be due to the bacterial translocation caused by disruption of the intestinal barrier. The objective of the present study was to determine the effect of dietary supplementation with probiotic bacteria (PB) on acute pancreatitis (AP) induced in rats by the inoculation of 5% sodium taurocholate into the biliopancreatic duct. Fifty Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: 1 sham-operated, with manipulation of intra-abdominal organs; 2 induction of AP, without supplementation with PB; 3 dietary supplementation with PB followed for induction of AP; 4 induction of AP followed by dietary supplementation with PB; and 5 dietary supplementation with PB before and after the induction of AP. 4 x 109 colony-forming units (CFU) of probiotic bacteria were directly administered into the stomach, divided into two stages per day. Blood samples were collected for the determination of serum levels of amylase, lipase, glucose, and calcium and for leukocyte counts immediately before (0 hour) and 24 and 48 hours after the surgical procedure. The animals were sacrificed and ileal lymph nodes and fragments of pancreas, spleen, and liver were obtained. Comparison of the five groups of animals revealed significant differences in leukocyte count at 24 hours and in amylasemia and lipasemia at 24 and 48 hours after AP induction. Considering only the groups with AP induction (groups 2, 3, 4, and 5), there was no difference in any of the parameters assessed or in bacterial colonization of the organs. When considering only the groups of animals that received PB (groups 3, 4, and 5), a greater occurrence of lymph node contamination and of pancreatic hemorrhage was observed compared to the other groups. The present results suggest that dietetary supplementation with this combination of PB in animals submitted to the induction of AP does not modify the profile of the biochemical markers evaluated or the leukocyte count, but increases the rate of bacterial translocation to lymph nodes and the occurrence of pancreatic hemorrhage. / A pancreatite aguda apresenta alta taxa de morbimortalidade, notadamente quando associada a infecção da necrose pancreática. O mecanismo exato para esta ocorrência ainda não foi totalmente elucidado, mas, possivelmente, é oriunda da translocação bacteriana decorrente da disfunção da barreira intestinal. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação dietética com bactérias probióticas (BP) na resposta a pancreatite aguda (PA) induzida em ratos pela inoculação de taurocolato de sódio a 5% no ducto biliopancreático. Cinqüenta ratos Sprague-Dawley foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos: 1 operação simulada, com manipulação de órgãos intra-abdominais; 2 indução de PA, sem suplementação de BP; 3 suplementação dietética com BP, seguida por indução de PA; 4 indução de PA, seguida por suplementação dietética com BP; e 5 suplementação dietética com BP, antes e após a indução de PA. A suplementação de BP se deu pela administração por via intragástrica de 4 x 109 unidades formadoras de colônias (UFC), divididas em duas etapas por dia. Foram coletadas amostras sangüíneas para análise das concentrações séricas de amilase, lipase, glicose e cálcio, além de contagem leucocitária, imediatamente antes do procedimento, e após 24 e 48 horas. Após a morte dos animais, seguiu-se nova laparotomia para retirada de amostras de líquido peritoneal, linfonodo ileal, pâncreas, baço e fígado, para análise microbiológica e histopatológica. Na comparação simultânea entre os cinco grupos, foram observadas diferenças significativas para contagem leucocitária, na hora 24, e para amilasemia e lipasemia, nas horas 24 e 48 após a indução da PA. Considerando-se somente os grupos de animais em que ocorreu a indução de PA (grupos 2, 3, 4 e 5), não se observou diferença para quaisquer dos parâmetros avaliados. No que concerne à colonização bacteriana dos órgãos, entre estes mesmos quatro grupos, também não se observou diferença. Quando considerados apenas os grupos de animais que receberam BP (grupos 3, 4 e 5), observou-se maior ocorrência de contaminação do linfonodo ileal e de hemorragia pancreática, em comparação aos demais grupos. Nossos resultados sugerem que a suplementação dietética com esta combinação de cepas de BP em animais submetidos a indução de PA não modifica o perfil dos marcadores bioquímicos avaliados e da contagem leucocitária, mas aumenta o índice de translocação bacteriana para o linfonodo ileal e a ocorrência de hemorragia pancreática.
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Avaliação do uso de bactérias probióticas na pancreatite aguda induzida em ratos / Evaluation of the use of probiotic bacteria in acute pancreatitis induced in rats

Bianca D'Elia Matzke 03 September 2008 (has links)
Acute pancreatitis presents high rates of morbidity and mortality, mainly when it is associated with infection of pancreatic necrosis. The mechanism of this occurrence has not been fully elucidated, but may possibly be due to the bacterial translocation caused by disruption of the intestinal barrier. The objective of the present study was to determine the effect of dietary supplementation with probiotic bacteria (PB) on acute pancreatitis (AP) induced in rats by the inoculation of 5% sodium taurocholate into the biliopancreatic duct. Fifty Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: 1 sham-operated, with manipulation of intra-abdominal organs; 2 induction of AP, without supplementation with PB; 3 dietary supplementation with PB followed for induction of AP; 4 induction of AP followed by dietary supplementation with PB; and 5 dietary supplementation with PB before and after the induction of AP. 4 x 109 colony-forming units (CFU) of probiotic bacteria were directly administered into the stomach, divided into two stages per day. Blood samples were collected for the determination of serum levels of amylase, lipase, glucose, and calcium and for leukocyte counts immediately before (0 hour) and 24 and 48 hours after the surgical procedure. The animals were sacrificed and ileal lymph nodes and fragments of pancreas, spleen, and liver were obtained. Comparison of the five groups of animals revealed significant differences in leukocyte count at 24 hours and in amylasemia and lipasemia at 24 and 48 hours after AP induction. Considering only the groups with AP induction (groups 2, 3, 4, and 5), there was no difference in any of the parameters assessed or in bacterial colonization of the organs. When considering only the groups of animals that received PB (groups 3, 4, and 5), a greater occurrence of lymph node contamination and of pancreatic hemorrhage was observed compared to the other groups. The present results suggest that dietetary supplementation with this combination of PB in animals submitted to the induction of AP does not modify the profile of the biochemical markers evaluated or the leukocyte count, but increases the rate of bacterial translocation to lymph nodes and the occurrence of pancreatic hemorrhage. / A pancreatite aguda apresenta alta taxa de morbimortalidade, notadamente quando associada a infecção da necrose pancreática. O mecanismo exato para esta ocorrência ainda não foi totalmente elucidado, mas, possivelmente, é oriunda da translocação bacteriana decorrente da disfunção da barreira intestinal. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação dietética com bactérias probióticas (BP) na resposta a pancreatite aguda (PA) induzida em ratos pela inoculação de taurocolato de sódio a 5% no ducto biliopancreático. Cinqüenta ratos Sprague-Dawley foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos: 1 operação simulada, com manipulação de órgãos intra-abdominais; 2 indução de PA, sem suplementação de BP; 3 suplementação dietética com BP, seguida por indução de PA; 4 indução de PA, seguida por suplementação dietética com BP; e 5 suplementação dietética com BP, antes e após a indução de PA. A suplementação de BP se deu pela administração por via intragástrica de 4 x 109 unidades formadoras de colônias (UFC), divididas em duas etapas por dia. Foram coletadas amostras sangüíneas para análise das concentrações séricas de amilase, lipase, glicose e cálcio, além de contagem leucocitária, imediatamente antes do procedimento, e após 24 e 48 horas. Após a morte dos animais, seguiu-se nova laparotomia para retirada de amostras de líquido peritoneal, linfonodo ileal, pâncreas, baço e fígado, para análise microbiológica e histopatológica. Na comparação simultânea entre os cinco grupos, foram observadas diferenças significativas para contagem leucocitária, na hora 24, e para amilasemia e lipasemia, nas horas 24 e 48 após a indução da PA. Considerando-se somente os grupos de animais em que ocorreu a indução de PA (grupos 2, 3, 4 e 5), não se observou diferença para quaisquer dos parâmetros avaliados. No que concerne à colonização bacteriana dos órgãos, entre estes mesmos quatro grupos, também não se observou diferença. Quando considerados apenas os grupos de animais que receberam BP (grupos 3, 4 e 5), observou-se maior ocorrência de contaminação do linfonodo ileal e de hemorragia pancreática, em comparação aos demais grupos. Nossos resultados sugerem que a suplementação dietética com esta combinação de cepas de BP em animais submetidos a indução de PA não modifica o perfil dos marcadores bioquímicos avaliados e da contagem leucocitária, mas aumenta o índice de translocação bacteriana para o linfonodo ileal e a ocorrência de hemorragia pancreática.

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