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Caracterização morfológica, citogenética e molecular de uma população de tangerineiras híbridas de 'Clementina fina' (Citrus clementina Hort. ex Tan.) e 'Montenegrina' (Citrus deliciosa Ten.) / Morphological, cytogenetic and molecular characterization of a population of hybrid tangerines of ' Clementina Fina' (Citrus clementina Hort. ex Tan) and 'Montenegrina' (Citrus deliciosa Ten.)

Weiler, Roberto Luis January 2006 (has links)
A produção citrícola se encontra dispersa por todos os continentes e no Brasil, os citros são a produção frutícola de maior volume de produção. A produção de citros de mesa, como as tangerinas, possibilita ao produtor obter maior valor pelo seu produto. O mercado consumidor é ávido por novas variedades e para tanto, um programa de melhoramento deve estar sempre em busca de genótipos que atendam ao mercado consumidor, bem como a cadeia produtiva. Na Estação Experimental Agronômica da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, está localizada uma população de tangerineiras híbridas oriundas do cruzamento da tangerineira ‘Clementina Fina’ (Citrus clementina Hort. ex Tan.) e ‘Montenegrina’ (Citrus deliciosa Ten.) a qual foi caracterizada neste estudo, avaliando-se características morfológicas de acordo com os descritores propostos pelo International Board for Plant Genetic Resources, além da identificação da época de maturação, viabilidade de pólen, número cromossômico e caracterização molecular, utilizando marcadores do tipo microssatélites. Através da análise morfológica foi possível distinguir todas as 96 plantas avaliadas, porém não foi possível agrupar a F1 em grupos distintos de cada um dos genitores. A época de maturação de frutos das plantas se concentra entre a primeira quinzena de abril até a primeira quinzena de agosto. Todas as plantas analisadas apresentaram um alto grau de viabilidade de pólen, variando entre 79,04 e 98,08 %. Todas as plantas avaliadas são diplóides com um número cromossômico de 2n=18. Utilizando 12 pares de primers de microssatélites foi possível diferenciar 90 acessos do estudo, e agrupar a F1 em indivíduos mais próximos do genitor feminino e do genitor masculino. O PIC (Conteúdo de Informação de Polimorfismo) dos primers variou de 0,27 a 0,65. Não foi possível estabelecer uma relação entre a caracterização utilizando marcadores morfológicos e a caracterização utilizando marcadores moleculares. / Citrus production is widespread all over the world and in Brazil it represents the major volume of fruit production. Production of fresch fruit, as tangerines, allow the farmer to obtain a better value for the product. The consuming market is keen for new varieties and a breeding program should be always searching for genotypes that satisfy the market as well as the productive chain. At the Agronomic Experimental Station of Federal University of Rio Grande do Sul there is a population of hybrid tangerines, as result of crosses between ‘Clementina Fina’ (Citrus clementina Hort. ex Tan.) and ‘Montenegrina’ (Citrus deliciosa Ten.). In this study, this population was characterized using the morphological descriptors proposed by the International Board for Plant Genetic, besides other characteristics such as ripening period, pollen viability, chromosome number and a molecular characterization with SSR markers. It was possible to distinguish all the 96 evaluated plants by the morphological descriptors, but it was not possible to separate the F1 in groups distinct from the parents. Ripening occurred between mid April and mid August. All the analyzed plants had a high pollen viability, ranging from 79.04% to 98.08%. All plants are diploid, with 2n = 18. By using 12 pairs of primers it was possible to differentiate 90 of the analyzed accessions and group F1 individuals closer to the female and male parents. The PIC (polymorphism information content) ranged from 0.27 and 0.65. It was not possible to establish a relation between the morphological and the molecular characterizations. 1Master of Science dissertation in Agronomy, Faculdade de Agronomia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil. (67p.) March, 2006.
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Taxonomia e filogenia de algumas espécies de Mazama (Mammalia; Cervidae) da Colômbia /

Sarria Perea, Javier Adolfo. January 2012 (has links)
Orientador: Jose Mauricio Barbanti Duarte / Banca: Jeffrey Frederico Lui / Banca: Maurício Bacci Júnior / Banca: Vera Cristina Silva / Banca: Pedro Manoel Galetti Junior / Resumo: Foi feita uma revisão da taxonomia e filogenia de algumas espécies de Mazama da Colômbia. 15 animais provenientes da região caribe e da região andina colombiana foram analisados por técnicas morfométricas, citogenéticas e moleculares. Para definir morfotipos foram feitas a descrição detalhada dos padrões cromatogênicos do rosto e corpo e análises de componentes principais das medidas morfométricas. Para as analises cromossômicas, foi feita biometria cromossômica e cariotipagem de metáfases obtidas a partir de cultivos de fibroblastos. Para as análises moleculares foram construídas árvores filogenéticas pelos métodos de máxima verossimilhança e inferência bayesiana, a partir de um fragmento de 979 nucleotídeos do marcador mitocondrial citocromo b (Cytb). Os resultados mostraram que Mazama bricenii pertence a uma linhagem que divergiu precoce na evolução do grupo, confirmaram a validade taxonômica da subespécie M. cita sanctaemartae na região Caribe e de M. zetta na região entre as cordilheiras Central e Oriental, e revelaram a existência de duas espécies de Mazama novas para ciência, uma filogeneticamente relacionada a M. gouazoubira, ao norte da região andina central e outra filogeneticamente próxima de M. zetta, no maciço colombiano. Os resultados confirmam a enorme diversidade da fauna colombiana, e a necessidade de estudos visando à conservação destas espécies / Abstract: A review of the taxonomy and phylogeny of some species of Mazama from Colombia was made. 15 animals from the Caribbean region and the Colombian Andean region were analyzed by morphometric, cytogenetic and molecular techniques. Morphotypes were defined by the detailed description of facial and body chromatogenic patterns and by principal components analysis of morphometric measurements. Chromosome analyses were made by biometrics and karyotyping of metaphases from cultures of fibroblasts. For molecular analyzes, phylogenetic trees were constructed by maximum likelihood methods and Bayesian inference, from a fragment of 979 nucleotides of the mitochondrial marker cytochrome b (Cytb). The results revealed that Mazama bricenii belongs to a lineage that early diverged in evolution of the group, confirmed the taxonomic validity of M. cita sanctaemartae in the Caribbean region and M. zetta the region between the Central and Eastern cordilleras, and revealed the presence of two Mazama species new to science, the first one from the north of the central Andean region phylogenetically related to M. gouazoubira, and second from the Colombian Massif phylogenetically close to M. zetta. The results confirm the enormous diversity of the Colombian fauna and the need of studies focusing the conservation of the aforementioned species / Doutor
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Organização estrutural da cromatina em células epiteliais da conjuntiva palpebral de cães com ceratoconjuntivite seca, antes e após tratamento local com ciclosporina A / Chromatin structure organization in palpebral conjunctival epithelial cells from dogs with sicca keratoconjunctivitis, before and after local treatment with cyclosporine A

Santos, Daniela Moura 28 February 2018 (has links)
Submitted by DANIELA MOURA DOS SANTOS (danielamouravet@yahoo.com.br) on 2018-06-19T19:03:42Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇAO MESTRADO DANIELA SANTOS.pdf: 2591566 bytes, checksum: a364ce81cfb4254048a30be1ce071232 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-06-20T16:33:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_dm_me_jabo.pdf: 2591566 bytes, checksum: a364ce81cfb4254048a30be1ce071232 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-20T16:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_dm_me_jabo.pdf: 2591566 bytes, checksum: a364ce81cfb4254048a30be1ce071232 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Alterações na organização estrutural da cromatina estão sendo associadas ao desenvolvimento e à fisiopatologia de diversas afecções oftálmicas. Com o advento da epigenética, emergiu o conceito de que parte dessas alterações pode ser revertida por fármacos. Visando-se avaliar a organização estrutural da cromatina em células da conjuntiva palpebral de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS), antes e após tratamento com pomada de ciclosporina A (CsA) 0,2%, a presente pesquisa foi dividida em duas fases. Na fase I estudaram-se núcleos de células epiteliais e de linfócitos colhidos da conjuntiva palpebral de cães com e sem CCS. Foram incluídos na pesquisa 64 olhos de 32 cães domésticos, distribuídos em dois grupos: grupo controle, composto por 16 cães saudáveis (32 olhos, valores de Schirmer ≥ 15 mm/min); grupo CCS, abrangendo 16 cães (32 olhos, valores de Schirmer ≤ 10 mm/min) com CCS bilateral nunca antes tratados com imunomoduladores, sem oftalmopatias concorrentes e livres de alterações sistêmicas. As células foram colhidas por citologia esfoliativa e coradas pela reação de Feulgen. Os seguintes parâmetros foram estudados por vídeo-análise de imagens: área nuclear, perímetro nuclear, fator de circularidade relativa do núcleo (RNRF), densidade óptica integrada (IOD = conteúdo de DNA), densidade óptica (OD = compactação de cromatina); e desvio padrão de valores densitométricos (SDtd = textura de cromatina). Os resultados mostraram que a CCS enseja alterações nos parâmetros nucleares das células epiteliais e dos linfócitos da conjuntiva palpebral. Comparativamente aos controles, as células epiteliais foram mais afetadas pela CCS (alterações em área, perímetro, RNRF, IOD, e OD) do que os linfócitos (alterações em OD, apenas). Tanto as células epiteliais quanto os linfócitos do grupo CCS apresentaram cromatina mais descompactada do que as células do grupo controle. Padrões aberrantes de cromatina, como a "snake-like-chromatin", comumente vistos em pacientes humanos, não foram detectados. Na fase II estudou-se se as alterações nucleares detectadas na fase I regrediriam após tratamento local com pomada de CsA 0,2% a intervalos regulares de 12 horas e lacrimomimético a base de ácido poliacrílico 0,2%, instilado localmente a cada 4 horas. O mesmo grupo controle composto por cães hígidos foi adotado e as células também foram colhidas por citologia esfoliativa aos 30 e 60 dias de tratamento. As preparações citológicas foram coradas pela reação de Feulgen ou submetidas ao bandamento AgNOR. Estudaram-se parâmetros de video-análise de imagens relacionados com a funcionalidade da cromatina, notadamente a fração de área nuclear coberta pela cromatina mais condensada (Sc%), a taxa média de absorbância (AAR), e a entropia. Após bandamento AgNOR, estudaram-se os tamanhos das regiões organizadores de nucléolo e as frações de áreas nucleares ocupadas por elas. Os resultados mostraram que o tratamento com CsA e lacrimomimético (30/60 dias) enseja remodelação cromatínica e desfaz parcialmente as alterações associadas à CCS. / Changes in the structural organization of chromatin are being associated with the development and pathophysiology of various ophthalmic conditions. With the advent of epigenetics, the concept emerged that part of these alterations can be reversed by drugs. To evaluate the structural organization of chromatin in palpebral conjunctival cells of dogs with keratoconjunctivitis sicca (KCS), before and after treatment with 0.2% cyclosporine A (CsA) ophthalmic ointment, the present research was divided into two phases. In stage I, epithelial cells and lymphocyte from the palpebral conjunctiva of dogs with and without KCS were studied. The study included 64 eyes of 32 domestic dogs, distributed into two groups: control group, composed of 16 healthy dogs (32 eyes, Schirmer values ≥ 15 mm / min); KCS group, formed of 16 dogs (32 eyes, Schirmer values ≤ 10 mm / min) with bilateral CCS never previously treated with immunomodulatory drugs, and without concurrent ophthalmic or systemic disorders. Cells were collected by brush cytology and stained by the Feulgen reaction. The following parameters were studied by video image analysis: nuclear area, nuclear perimeter, relative nuclear roundness factor (RNRF), integrated optical density (IOD = DNA content), optical density (OD = chromatin compaction). The results showed that KCS causes alterations in the nuclear parameters of the epithelial cells and the lymphocytes from the palpebral conjunctiva. Compared with the control, the epithelial cells were more affected by the disease (alterations in area, perimeter, RNRF, IOD, and OD) than lymphocytes (changes in OD only.) Both epithelial cells and lymphocytes from the KCS group showed more decompressed chromatin than cells from the control group. "Snakelike-chromatin" commonly seen in human patients was not detected. In phase II it was studied whether the nuclear detected in stage I, regress after treatment with 0.2% CsA at regular intervals of 12 h and 0.2% polyacrylic acid-based artificial tears at regular intervals of 4h. The same control group composed of healthy dogs was adopted and cells were collected by brush cytology after 30 and 60 days of treatment. Cytological preparations were stained by the Feulgen reaction or submitted to the AgNOR banding. We studied video image analysis parameters related to the functionality of chromatin, notably the fraction of nuclear area covered by more condensed chromatin (Sc %), the average absorption ratio (AAR), and entropy. After AgNOR banding, the samples were studied for the sizes of the nucleolar organizer regions and the fractions of nuclear areas occupied by them. Results show that treatment with CsA and lacrimomimetic (30/60 days) leads to chromatin remodeling and partially reverses the chromatin changes elicited by KCS.
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Diversidade de espécies, variação cariotípica e distribuição dos roedores da Chapada Diamantina, BA

Souza, Ana Lazar Gomes e 02 1900 (has links)
Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2017-10-18T22:47:32Z No. of bitstreams: 1 633897.pdf: 13502617 bytes, checksum: 3ed829ad8ef2133cdafe46cf1bf47d48 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T22:47:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 633897.pdf: 13502617 bytes, checksum: 3ed829ad8ef2133cdafe46cf1bf47d48 (MD5) Previous issue date: 2005-02 / CAPES / A Chapada Diamantina é um vasto platô montanhoso localizada no interior do estado da Bahia, com altitudes variando de 400 a 2000m. Nenhum trabalho sistemático sobre a fauna de mamíferos englobando todo o gradiente latitudinal e longitudinal da Chapada Diamantina foi realizado até o momento. Seis coletas foram realizadas em 18 localidades diferentes entre Dezembro/2002 e Fevereiro/2004. Os espécimes foram capturados em armadilhas Sherman e pitfall, cariotipados, preparados e foram depositados no Museu Nacional, Rio de Janeiro. Também foram analisados espécimes anteriormente depositados na Coleção de Mamíferos do Museu Nacional. Um total de 19 espécies foram registradas, sendo que destas, 12 são novos registros para a região. Todas as espécies foram caracterizadas morfologicamente no nível craniano e da morfologia externa. As análises cariotípicas foram realizadas em 14 espécies, sendo que o número diplóide e fundamental foram dados para 18 espécies. As 19 espécies registradas podem ser separadas em três principais grupos em relação ao ambiente. O primeiro, mais amplo, encontrado em habitats de caatinga e agreste, o segundo, composto por espécies que frequentam ambientes mais florestados e o terceiro, característico de altitudes extremas como campos rupestres e formações rochosas. Um padrão de diversidade no gradiente latitudinal também foi observado. Cinco das 19 espécies registradas ocorrem somente em altitudes acima de 1000m. Considerando os roedores coletados neste estudo, a Serra do Sincorá (região central) e Morro do Chapéu (região norte) apresentaram a fauna de roedores mais diversa. Somando com as espécies anteriormente depositadas no Museu Nacional, a Serra do Sincorá passa a ser a mais diversa. Três áreas foram consideradas como potenciais para a preservação, sendo elas localizadas nos municípios de Mucugê e Palmeiras, na Serra do Sincorá e a região de Morro do Chapéu. / The Chapada Diamantina is a vast mountainous plateau in the interior of Bahia state, with altitudes varying from 400 to 2000m. No systematic mammal survey encompassing the total latitudinal and altitudinal ranges of the Chapada Diamantina was attempted so far. Six expeditions were performed in to a total of 18 different sampling localities, between December/2002 and February/2004. Specimens were captured in Sherman and pit-fall traps, karyotyped and prepared as vouchers deposited in the Museu Nacional, Rio de Janeiro. In addition, specimens previously deposited in mammal's collection in Museu Nacional were also analyzed. A total of 19 species of rodents was registered and 12 of them are new registers for the area. All species were characterized on the basis of cranial morphology and pelage coloration. Karyological studies were performed to 14 species but the diploid and fundamental numbers were given to 18 species recorded. The 19 species can be separated in three main groups. a more widespread one, proper of caatinga and agreste habitats, a second one, composed mainly by forms from more densely forested landscapes, and the third group, which usually occurs in altitudinal fields in the rocky outcrops of higher limits of the Chapada Diamantina. A pattern of latitudinal diversity was also observed. Five of the 19 species registered occurs only above 1000m. The Serra do Sincorá (central region) and Morro do Chapéu (north region) presented the most diverse rodents fauna, considering the specimens collected in our surveys. In addition with the species previously deposited in Museu Nacional, the Serra do Sincorá region is the most diverse. Therefore, three areas were considered as potentially areas for preservation in Chapada Diamantina: Mucugê and Palmeiras located in Serra do Sincorá and Morro do Chapéu.
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Estudos citogenéticos e citométricos em mamoeiro (Carica papaya L.) / Cytogenetic and cytometric studies in papaya (Carica papaya L.)

Araújo, Fernanda Santos 26 February 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 492128 bytes, checksum: 4591b57e36d0c8c37588137394b8de46 (MD5) Previous issue date: 2008-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Carica papaya is one of the most economically important species of the Caricaceae family, with many industrial applications. Despite its importance, there is little information covering the cytogenetic and cytometric characterization of this species. Hence, this study is justified by the need to increase the knowledge related to papaya karyotype, nuclear DNA content and base composition. The specific objectives of this study were to: characterize papaya chromosomes, using image analysis resources; apply the acridine orange staining to mitotic chromosomes of C. papaya to identify nucleolar organizers regions (NORs); estimate the nuclear DNA content and determine the base composition of male, female and hermaphrodite plants of C. papaya, by the use of flow cytometry and verify if the cytometric data can differentiate the three sex types with regard to their DNA content and base pair frequencies. Root tips from hermaphrodite plants were pre-treated with amiprophosmethyl (APM) 3 µM for 15h, at 4ºC and fixed. Slides were prepared by cellular dissociation and air drying, and submitted to Giemsa and acridine orange staining. The association of cellular dissociation and air drying techniques to Giemsa conventional staining resulted in metaphasic and prometaphasic cells with individual and well spread chromosomes, without overlaps, with well defined primary and secondary constrictions. These characteristics enabled the homologues pairing and morphological classification of the chromosomes, with karyograms assembly of a hermaphrodite plant, which had 18 chromosomes, being 7 pairs metacentrics (1, 2, 3, 4, 5, 7 and 8) and 2 submetacentrics (6 and 9). The acridine orange staining allowed the identification of yellowish green bands in two chromosomes (1 and 2). The strong bands corresponded to NOR flanking regions, as sustained by the localization of chromosome 1 associated to the nucleolus. Considering the obtained results by the cytogenetic techniques, there were no morphological differences that could evidence a possible heteromorphic pair of chromosomes in the hermaphrodite plant of C. papaya. For the application of flow cytometry, leaves from the three sexual forms of papaya were submitted to the chopping procedure in an isolation buffer, followed by a staining buffer. The obtained suspension was passed through a filter and analyzed in a flow cytometer, to determine the total nuclear DNA content and base composition. The cytometric analyses evidenced histograms with peaks of G0/G1 nuclei with coefficients of variation (CVs) lower than 5%. The analysis of male, female and hermaphrodite plants nuclei, stained with propidium iodide (PI), allowed the calculation of the mean 2C DNA values, which were 0.67, 0.65 and 0.65 pg, respectively, and statistically equal, by the F test, for the three sex forms. The analysis of nuclei stained with 4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and chromomicin A3 (CMA3) enabled the calculation of AT/GC base pair frequencies of the three sex types, also statically equal, by the F test. Therefore, there was no significant difference between the three sex forms of papaya in relation to their total nuclear DNA content and base pair composition. In relation to the obtained mean values of nuclear DNA content and considering the morphological similarity of papaya chromosomes, each one of the 18 chromosomes would have, on average, 0.036 to 0.037 pg of DNA. Hence, in order to identify a probable pair of heteromorphic chromosomes, a tiny portion of the chromosome would have to be distinguished, corresponding to an amount of DNA under the limits of resolution of the cytogenetic and cytometric techniques employed in this study. / O mamoeiro, Carica papaya, é a espécie da família Caricaceae considerada mais importante economicamente, possuindo diversas aplicações industriais. Apesar de sua importância, são poucos os dados envolvendo a caracterização citogenética e citométrica dessa espécie. Portanto, o presente estudo visa ampliar o conhecimento com relação ao cariótipo, ao tamanho do genoma e à relação de bases do mamoeiro. Os objetivos específicos foram: caracterizar morfologicamente os cromossomos de C. papaya, utilizando recursos de análise de imagem; aplicar a coloração de laranja de acridina aos cromossomos mitóticos de C. papaya, para a identificação de regiões organizadoras do nucléolo (RONs); estimar o conteúdo de DNA nuclear e determinar a composição de bases de plantas masculinas, femininas e hermafroditas de C. papaya, por meio da técnica de citometria de fluxo e verificar se os dados citométricos possibilitam diferenciar os três tipos sexuais quanto ao tamanho genômico e à relação de bases AT/GC. Para isso, raízes de plantas hermafroditas foram pré-tratadas com amiprofos-metil (APM), 3 μM, por 15h, a 4ºC e fixadas. Lâminas foram preparadas por dissociação celular e secagem ao ar e submetidas à coloração com Giemsa e com laranja de acridina. A associação das técnicas de dissociação celular e secagem ao ar, com a coloração convencional com Giemsa resultou na obtenção de células metafásicas e prometafásicas com cromossomos individualizados, bem espalhados na lâmina e sem sobreposições, com constrições primárias e secundárias bem definidas. Essas características possibilitaram o pareamento dos homólogos e a classificação morfológica dos cromossomos, com a montagem de cariogramas de uma planta hermafrodita de C. papaya, que apresentou número cromossômico de 2n = 18, sendo sete pares metacêntricos (1, 2, 3, 4, 5, 7 e 8) e dois submetacêntricos (6 e 9). A coloração com laranja de acridina possibilitou a identificação de bandas verde-amareladas em dois cromossomos (1 e 2). As bandas que emitiram maior intensidade de fluorescência corresponderam às regiões flanqueadoras das RONs, como salientado pela localização do cromossomo 1 associado ao nucléolo. Considerando os resultados obtidos por meio das técnicas citogenéticas, não houve diferenças morfológicas que evidenciassem um possível par de cromossomos heteromórficos na planta hermafrodita. Para a aplicação da citometria de fluxo, folhas de plantas dos três tipos sexuais de mamão foram submetidas ao procedimento de cortes seqüenciais em tampão de extração, seguidos do tampão de coloração. A suspensão obtida foi filtrada e analisada em citômetro de fluxo, para a determinação do conteúdo de DNA nuclear total e da composição de bases AT e GC. As análises citométricas realizadas possibilitaram a geração de histogramas com picos de núcleos G0/G1 com coeficientes de variação (CVs) menores do que 5%. A análise dos núcleos de plantas masculinas, femininas e hermafroditas de C. papaya, corados com iodeto de propídio (IP), permitiu calcular os valores médios 2C de DNA, que foram 0,67, 0,65 e 0,65 pg, respectivamente, sendo estatisticamente iguais, pelo teste F, para os três sexos. A análise dos núcleos corados com 4 ,6- diamidino-2-fenilindol (DAPI) e cromomicina A3 (CMA3) possibilitou o cálculo das freqüências de pares de bases AT e GC para os três tipos sexuais, também estatisticamente iguais, de acordo com o teste F. Portanto, não houve diferença significativa quanto ao tamanho genômico ou quanto à relação de pares de bases entre os três sexos do mamoeiro. Com relação aos valores médios de conteúdos absolutos de DNA nuclear observados, e considerando a semelhança morfológica dos cromossomos de C. papaya, cada um dos 18 cromossomos teria, em média, 0,036 a 0,037 pg de DNA. Conseqüentemente, para a identificação de um provável par de cromossomos heteromórficos, ter-se-ia de se distinguir uma porção muito pequena do cromossomo, com uma quantidade de DNA que estaria abaixo do limite de resolução das técnicas citogenéticas e citométricas utilizadas.
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Variação citogenética em Hoplias malabaricus (Bloch, 1794) no limite das bacias do Alto Paraguai e da Amazônica / Cytogenetic variation in Hoplias malabaricus (BLOCH, 1794) in the boundaries of the Upper Paraguai and amazon basins

Lima, Claudineia Barbosa de 25 April 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 58779 bytes, checksum: 7e18e0eb2bba381c313d94bc594e82aa (MD5) Previous issue date: 2008-04-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The order Characiformes is one of the dominant teleost taxa in the neotropical region, where it is widely distributed. The systematics of one characiform, the trahira Hoplias malabaricus, is still unresolved. This species is characterized by high levels of karyotypical variation within and among basins, including differences in chromosome morphology and number, and in some cases, involving systems of multiple sex chromosomes. We compared cytogenetic data of populations H. malabaricus from the Upper Paraguay and amazon basins that have been isolated for at least 10 million years. Samples were collected and subject to standard cytogenetic techniques (Giemsa staining, C and NOR banding and CMA3). In the Amazon Basin samples from three tributaries of the Juruena River (Sangue, Papaguaio and Arinos rivers). In the Sangue river they were 2n=40, chromosomal formula 18 m + 16 sm + 6 st and fundamental number (NF) = 80; in the Papagaio river trahiras had 2n=42, chromosomal formula 18 m + 24 sm e NF= 84 and in the Arinos river they were 2n=42, chromosome formula 20 m + 22 sm and NF= 84. In the Paraguai basin, samples were collected in the Paraguai, Sepotuba rivers and in the Joaquim do Boche spring. All were 2n=40, with 20m + 20sm and NF=80. Morphology of the Sangue rivers cytotypes were considered as new proposal in this work. All populations were characterized by mostly centromeric heterochromatic regions, whereas some chromosomes showed telomeric blocks of heterochromatin associated to nucleolar organizer regions. Pattern of NOR variation was highly variable, but all populations showed multiple NORs associated to GC-rich regions. The shared presence of 2n=40 and 2n=42 cytotypes in the Upper Paraguay and Juruena basins suggested that karyotypic diversification within H. malabaricus largely preceded the 10 million years vicariance. The occurrence of unique cytotypes in the three Juruena tributaries indicated that processes of chromosomal differentiation were more intense in the Amazon basin than in the southern Brazilian basins. / A ordem Characiformes representa um dos grupos dominantes de teleósteos na região Neotropical, com ampla distribuição geográfica. Um desses caraciformes, a traíra Hoplias malabaricus, apresenta aspectos sistemáticos não resolvidos. Esta espécie apresenta grande diversidade de padrões cariotípicos dentro e entre bacias hidrográficas, com variações na morfologia e número cromossômico, em alguns casos envolvendo sistemas de cromossomos sexuais múltiplos. Foram comparadas populações de H. malabaricus das bacias do Alto Paraguai e amazônica, consideradas isoladas por aproximadamente 10 milhões de anos. Os espécimes foram coletados e submetidos a técnicas padrões de citogenética (coloração convencional, bandas C, NOR e CMA3). Na drenagem amazônica foram analisadas amostras de três afluentes do rio Juruena (rios Sangue, Papagaio e Arinos). No Sangue as traíras apresentaram 2n=40, fórmula cromossômica 18 m +16 sm + 6 st e número fundamental (NF) igual a 80; no Papagaio foram 2n=42, fórmula cromossômica 18 m + 24 sm e NF= 84 e no Arinos apresentaram 2n=42, fórmula cromossômica 20 m + 22 sm e NF= 84. Na bacia do Paraguai, foram amostradas populações dos rios Paraguai, Sepotuba e córrego Joaquim do Boche, todas apresentaram 2n=40, 20m + 20sm e NF=80. A morfologia do citótipo do rio Sangue foi considerada como nova no presente trabalho. Todas as populações apresentaram regiões heterocromáticas predominantemente centroméricas e alguns cromossomos com blocos heterocromáticos em regiões teloméricas associados com regiões organizadoras de nucléolos. O padrão de NORs se mostrou variável, mas todas a populações apresentaram NORs multiplas, demonstrando serem ricas em GC. A presença de citótipos semelhantes nas bacias do Paraguai e do Juruena sugere que a diversificação cariotípica precedeu a última vicariância entre estas drenagens, há 10 milhões de anos. Por outro lado, os citótipos em cada afluente do Juruena indicam que na bacia amazônica os processos de diferenciação cromossômica podem ter ocorrido de maneira mais intensa do que é observado nas bacias do sul brasileiro.
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Citogenética de espécies de Attini (Formicidae: Myrmicinae) / Cytogenetic of Attini species (Formicidae: Myrmicinae)

Barros, Luísa Antônia Campos 19 July 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4676037 bytes, checksum: 95dde20b76c33bfd09f530eb8a65e6e5 (MD5) Previous issue date: 2010-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The tribe Attini consists of a monophyletic group that includes about 230 species in 14 genera. Different biological substrate are utilized by these ants for cultivation of the symbiotic fungus on which they feed and are necessarily dependent. This tribe includes the leaf-cutting ants (Atta Fabricius and Acromyrmex Mayr) that are known as important agricultural pests. The usage of cytogenetics in the family Formicidae has made significant contributions in the study of more than 750 ant species. Only 10% of Attini’s species have some sort of cytogenetic data available. This work aimed at cytogenetically studying six Acromyrmex species and seven species of the tribe Attini divided into four genera: Apterostigma Mayr, Mycocepurus Forel, Sericomyrmex Mayr and Trachymyrmex Forel. Some of the species were also submitted to banding techniques. The karyotypes observed were: Apterostigma madidiense Weber (n=23, 7m + 10sm + 5st + 1a), Apterostigma steigeri Santschi (2n=22, 20m + 2sm), Mycocepurus goeldii (2n=8, 4m + 4sm), Sericomyrmex sp. (2n=50, 44m + 6 sm; n=25, 22m + 3 sm), Trachymyrmex fuscus Emery (2n=18, 16m + 2sm; n=9, 8m + 1sm), Trachymyrmex relictus Borgmeier (2n=20m, n=10m) and Trachymyrmex sp. (2n=22, 18m + 4sm). A size polymorphism on a short arm of a submetacentric pair from Trachymyrmex fuscus was also pointed out. The possible causes of chromosomal segment duplication were discussed. All studied species of the genus Acromyrmex presented 2n=38. Each species showed a different karyotype in relation to morphology (A. balzani: 12m + 10sm + 14st + 2a; A. coronatus: 12m + 12sm + 12st + 2a; A. disciger: 10m + 12sm + 14st + 2a; A. niger: 12m + 18sm + 6st + 2a; A. rugosus: 16m + 12sm + 8st + 2a; A. echinatior: 8m + 6sm + 14st + 10a), in the distribution of heterocromatin (C banding) and GC rich regions (CMA3). For three species (A. coronatus, A. disciger, A. niger) the first subtelocentric pair was the bearer of ribosomal genes. Acromyrmex species presented stability in the number of chromosome with differences in the karyotype. The results suggest that many chromosomal rearrangements such as translocations, growth of heterochromatin and inversion may have occurred during their differentiation, contributing to the karyotype variability found. / A tribo Attini é um grupo monofilético que inclui mais de 230 espécies agrupadas em 14 gêneros. Nesta tribo estão incluídas as formigas cortadeiras (Atta e Acromyrmex), consideradas importantes pragas agrícolas. A utilização da citogenética na família Formicidae tem mostrado importante contribuição nas mais de 750 espécies de formigas estudadas. Os dados citogenéticos são reportados para 10% das espécies da tribo Attini. O presente trabalho teve como objetivo o estudo citogenético de seis espécies do gênero Acromyrmex e de sete espécies de Attini distribuídas em quatro gêneros: Apterostigma, Mycocepurus, Sericomyrmex e Trachymyrmex. Parte das espécies foi submetida a técnicas de bandamentos cromossômicos. Os cariótipos observados foram: Apterostigma madidiense Weber (n=23, 7m + 10sm + 5st + 1a), A. steigeri Santschi (2n=22, 20m + 2sm), Mycocepurus goeldii (Forel) (2n=8, 4m + 4sm), Sericomyrmex sp. (2n=50, 44m + 6sm; n=25, 22m + 3sm), Trachymyrmex fuscus Emery (2n=18, 16m + 2sm; n=9, 8m + 1sm), T. relictus Borgmeier (2n=20m, n=10m) e Trachymyrmex sp. (2n=22, 18m + 4sm). Trachymyrmex fuscus apresentou polimorfismo de tamanho no braço curto do par submetacêntrico. As possíveis causas da duplicação do segmento cromossômico são discutidas. As seis espécies do gênero Acromyrmex apresentaram 2n=38 cromossomos. Cada espécie mostrou um cariótipo diferente em relação à morfologia (A. balzani: 12m + 10sm + 14st + 2a; A. coronatus: 12m + 12sm + 12st + 2a; A. disciger: 10m + 12sm + 14st + 2a; A. niger: 12m + 18sm + 6st + 2a; A. rugosus: 16m + 12sm + 8st + 2a; A. echinatior: 8m + 6sm + 14st + 10a) e variações na distribuição de heterocromatina (banda C) e regiões ricas em GC (CMA3). Em três espécies (A. coronatus, A. disciger, A. niger) o par subtelocêntrico de maior tamanho foi o portador de genes ribossomais. As espécies do gênero Acromyrmex apresentaram estabilidade no número cromossômico com diferenças no cariótipo. Isto sugere que rearranjos do tipo translocações, crescimento de heterocromatina e inversão devem ter ocorrido durante a evolução das espécies deste gênero, levando a modificações nos cariótipos das diferentes espécies.
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Citotaxonomia e evolução cromossômica na subfamília Triatominae / Cytotaxonomy and chromosomal evolution in Triatominae subfamily

Alevi, Kaio Cesar Chaboli [UNESP] 23 October 2017 (has links)
Submitted by Kaio Cesar Chaboli Alevi null (kaiochaboli@hotmail.com) on 2017-10-25T20:00:43Z No. of bitstreams: 1 Tese - Kaio Cesar Chaboli Alevi.pdf: 6336538 bytes, checksum: 5a9d88497fb58e1707e975f604c42855 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-31T17:15:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alevi_kcc_dr_sjrp.pdf: 6336538 bytes, checksum: 5a9d88497fb58e1707e975f604c42855 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-31T17:15:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alevi_kcc_dr_sjrp.pdf: 6336538 bytes, checksum: 5a9d88497fb58e1707e975f604c42855 (MD5) Previous issue date: 2017-10-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A taxonomia e a sistemática dos triatomíneos baseiam-se, principalmente, em caracteres morfológicos. No entanto, existem espécies muito semelhantes ou até mesmo idênticas (espécies crípticas) do ponto de vista morfológico. Dessa forma, novas abordagens são necessárias para caracterizar um táxon e análises citogenéticas têm se mostrado como importantes ferramentas para a caracterização taxonômica e o conhecimento evolução desses vetores. Assim, o presente trabalho teve como objetivos principais: caracterizar os subcomplexos Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata e Rubrofasciata; auxiliar na revalidação de Triatoma bahiensis; avaliar o status específico de Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp. (afim de R. neglectus), T. pintodiasi, T. lenti e T. sherlocki; analisar a relação evolutiva da tribo Rhodniini; caracterizar o fenômeno de persistência nucleolar na subfamília Triatominae e analisar a variabilidade genética intraespecífica de T. sordida proveniente do Brasil. Os resultados obtidos permitiram caracterizar citogeneticamente as espécies do subcomplexo Brasiliensis; revalidar T. bahiensis e corroborar que essa espécie, bem como T. lenti e T. petrocchiae são membros do subcomplexo Brasiliensis; corroborar o status específico de T. lenti, T. sherlocki e T. bahiensis pela presença de barreira de isolamento reprodutivo pós-zigótica (desmoronamento do híbrido); sugerir que durante a muda imaginal, os triatomíneos cessam a meiose e estimulam a espermiogênese para diminuir os gastos energéticos e garantir a chance de paternidade; caracterizar citogeneticamente os subcomplexos Matogrossensis e Rubrovaria e distingui-los dos outros subcomplexos da América do Sul; reagrupar as espécies dos subcomplexos Matogrossensis, Sordida, Maculata e Rubrovaria, com base na disposição do DNAr 45S; propor a criação de um novo subcomplexo (subcomplexo T. vitticeps), com base em dados fenotípicos e genotípicos; caracterizar citogeneticamente o subcomplexo Maculata e diferenciar T. wygodzinskyi e T. arthurneivai; diferenciar T. rubrofasciata de todas as outras espécies de triatomíneos pela citotaxonomia e cariossistemática; corroborar, por meio da análise cariotípica e das espermátides, que a tribo Rhodniini é um grupo monofilético; caracterizar a evolução cromossômica no grupo pallescens e relacionar a perda de heterocromatina com a ocupação de diferentes ambientes; corroborar o status específico de R. montenegrensis (com base na posição do DNAr 45S) e de T. pintodiasi (com base no comportamento meiótico e na distância genética para o gene mitocondrial 16S); demonstrar que R. neglectus não apresenta variação cromossômica intraespecífica e descrever uma nova espécies do gênero Rhodnius, a saber, R. taquarussuensis sp. n.; discorrer sobre a evolução cariotípica nas tribos Rhodniini, Triatomini e Cavernicolini; confirmar o fenômeno de persistência nucleolar como uma sinapomorfia de Triatominae e, por fim, demonstrar que T. sordida do Brasil não apresenta variação cromossômica intraespecífica e corroborar o status desses vetores como T. sordida sensu strito. Esses resultados mostraram-se de extrema importância para elucidar várias questões sobre a biologia, taxonomia e evolução dos triatomíneos. / The taxonomy and systematics of triatomines are mainly based on morphological characters. However, there are very similar or even identical species (cryptic species) from the morphological point of view. Thus, new approaches are necessary to characterize a taxon and cytogenetic analyzes have been shown as important tools for the taxonomic characterization and the evolutionary knowledge of these vectors. Thus, the main objectives of this study were: characterize the Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata and Rubrofasciata subcomplexes; assist in the revalidation of Triatoma bahiensis; evaluate the specific status of Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp., T. pintodiasi, T. lenti and T. sherlocki; analyze the evolutionary relationship of the Rhodniini tribe; characterize the nucleolar persistence phenomenon in the Triatominae subfamily and analyze the intraspecific genetic variability of T. sordida from Brazil. The results obtained allowed characterize cytogenetically the species of the Brasiliensis subcomplex; revalidate T. bahiensis and corroborate that this species, as well as T. lenti and T. petrocchiae are members of the Brasiliensis subcomplex; corroborate the specific status of T. lenti, T. sherlocki and T. bahiensis by the presence of a post-zygotic reproductive isolation barrier (collapse of the hybrid); suggest that during the imaginal molt, cell division is disrupted (reduce energy costs) and the differentiation into sperm is stimulated (ensure the paternity of the adult male); characterize cytogenetically the Matogrossensis and Rubrovaria subcomplexes and distinguish them from other subcomplexes of South American; regroup the species of the Matogrossensis, Sordida, Maculata and Rubrovaria subcomplexes, based on the arrangement of the 45S rDNA; propose the creation of a new subcomplex (T. vitticeps subcomplex), based on phenotypic and genotypic data; characterized cytogenetically the Maculata subcomplex and differentiate the T. arthurneivai and T. wygodzinskyi; differentiate T. rubrofasciata from all other triatomine species by cytotaxonomy and karyosystematics; corroborate, by means of karyotypic and spermatids analysis, the monophyly of the Rhodniini tribe; characterize the chromosomal evolution in the pallescens group and relate the loss of heterochromatin with the occupation of different environments; corroborate the specific status of R. montenegrensis (based on the position of the 45 rDNA) and T. pintodiasi (based on meiotic behavior and genetic distance for the 16S mitochondrial gene); demonstrate that R. neglectus does not present intraspecific chromosomal variation and describe a new species of the genus Rhodnius, namely, R. taquarussuensis sp. n.; discuss karyotype evolution in the Rhodniini, Triatomini and Cavernicolini tribes; confirming the nucleolar persistence phenomenon as a Triatominae synapomorphy, and, finally, demonstrate that T. sordida from Brazil does not present intraspecific chromosome variation and corroborate the status of these vectors as T. sordida sensu strito. These results were extremely important to elucidate several questions about the biology, taxonomy and evolution of triatomines. / FAPESP: 2013/19764-0
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Identificação e caracterização de elementos retrotransponíveis da família Rex do genoma de espécies do genêro Leporinus SPIX, 1829 (Teleostei: Anostomidae) /

Borba, Rafael Splendore de. January 2013 (has links)
Orientador: Patrícia Pasquali Parise-Maltempi / Banca: Edson Lourenço da Silva / Banca: Karen Ventura / Resumo: A família Anostomidae é um interessante modelo para estudos de elementos repetitivos, principalmente devido à presença de elevado número de segmentos heterocromáticos relacionados a um sistema peculiar de heterogametia feminina, que é restrita a algumas espécies pertencentes ao gênero Leporinus. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo realizar um mapeamento cromossômico dos elementos retrotransponíveis Rex1, Rex3 e Rex6 nos cromossomos de seis espécies do gênero Leporinus: L. elongatus, L. macrocephalus e L. obtusidens, as quais possuem sistema de cromossomos sexuais, e L. friderici, L. lacustris e L. striatus, a fim de aumentar o conhecimento a respeito da organização do genoma do gênero, observar a relação desses elementos com regiões heterocromáticas importantes e se a distribuição é compatível com a hipótese de uma macroestrutura cariotípica estável para o gênero. A amplificação e o sequenciamento dos elementos Rex1 e Rex3, mostraram diferentes composições referentes ao número de pares de bases destes elementos para as diferentes espécies analisadas, já o elemento Rex6 não foi identificado no genoma das espécies estudadas. A técnica de FISH utilizando o elemento Rex1 como sonda resultou em diferentes padrões de distribuição: Leporinus elongatus, L. macrocephalus e L. obtusidens apresentaram clusters isolados na região terminal e as outras espécies apresentaram sinais dispersos em todos os cromossomos e pequenos sinais na posição terminal de alguns cromossomos. O elemento Rex3 se apresentou acumulado principalmente na posição terminal, em todos os cromossomos de todas as espécies. O cromossomo W de L. elongatus, L. macrocephalus e L. obtusidens, apresenta um sinal positivo de Rex1 e Rex3 na posição intersticial do braço longo. Algumas variações de sinais de hibridação foram observadas entre as diferentes espécies. Estes resultados sugerem a ocorrência de diferentes graus de... / Abstract: The Anostomidae family is an interesting model for repetitive elements studies, mainly due the presence of high number of heterochromatic segments related to a peculiar system of female heterogamety, which is restricted to a few species belonging to the Leporinus genus. In this way we performed a cytogenetic mapping of retrotransposable elements Rex1, Rex3 and Rex6 in chromosomes of Leporinus: L. elongatus, L. macrocephalus and L. obtusidens, which have sex chromosomes system, and L. friderici, L. lacustris and L. striatus, in order to increase the knowledge of the genomic organization of the genus, observe if these elements are related to heterochromatic regions and whether its distribution is compatible with the hypothesis of a stable macrostructure kept in the karyotype of the genus. Amplification and sequencing of the elements Rex1 and Rex3 showed different compositions regarding the number of base pairs of these elements for these species, but the Rex6 element has not been identified in genome of the species studied. The FISH technique using Rex1 element as probe resulted different distribution pattern: Leporinus elongatus, L. macrocephalus and L. obtusidens presented clusters isolated in the terminal region and the others species present signals disperse in all chromosomes and some signals on terminal position. The Rex3 signals are accumulated mainly in terminal position in all chromosomes for all species. The W chromosome of L. elongatus, L. macrocephalus and L. obtusidens, presents Rex3 signal on interstitial position. Some variations were observed regarding the hybridization signals among species. These results suggest the occurrence of different levels of activity of these elements during the evolutive process of the species analyzed. Despite the quite conserved karyotypic macrostructure of Leporinus species, through our results was possible to observe some variation on hybridization signals pattern, specially among the group... / Mestre
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Alterações morfofisiológicas em células dos túbulos de Malpighi durante o desenvolvimento de Myrmeleon sp (Neuroptera, Myrmeleontidae) /

Penha, Cláudia Aparecida Pacheco de Vasconcelos. January 2011 (has links)
Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo-Oliveira / Banca: Patrícia Pasquale Parise Maltempi / Banca: Grasiela Dias de Campos Aguiar / Banca: Alba Regina de Abreu Lima Catelani / Banca: Lílian Madi Ravazzi / Resumo: O sistema de excreção em artrópodes terrestres é formado de estruturas denominadas túbulos de Malpighi. São órgãos extremamente importantes nos insetos, pois mantêm a osmorregulação. Encontram-se localizados na cavidade corporal, podendo apresentar-se livres ou inseridos na parede do reto, formando um arranjo conhecido como sistema criptonefridial. Os túbulos de Malpighi podem se apresentar com regiões morfologicamente diferentes, cada uma dessas regiões apresentando um determinado tipo celular. Em numerosas espécies pode ocorrer a existência de segmentos, cada qual com um tipo celular diferente. Especializações secundárias são observadas em túbulos de Malpighi, onde uma região do túbulo pode estar envolvida na produção de determinada substância, enquanto outra região é responsável pela produção de outro produto. Isto é o que ocorre com algumas espécies de insetos da ordem Neuroptera, cujos túbulos produzem o fio de seda do casulo durante a última fase larval. As células dos túbulos de Malpighi de Myrmeleon sp sofrem endorreplicação, durante o desenvolvimento larval, tornando-se altamente poliplóides no último estádio. Contudo, essa ploidia aumentada não se estabelece em todo o segmento do túbulo, mas apenas em determinadas regiões, fazendo com que se acredite que apenas determinados locais no túbulo sofram essas modificações para a produção da seda, sendo que as regiões restantes do túbulo permanecem com a função básica de osmorregulação. No presente estudo foram utilizadas técnicas citoquímicas (Azul de Toluidina, Xylidine Ponceau, Impregnação por Íons Prata) e de citogenética molecular (Hibridação in situ fluorescente - FISH). Estas técnicas permitiram a observação de alterações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The land arthropod secretory system is formed by structures called Malpighian tubules. These tubules are extremely important in insects because they maintain osmoregulation. They are located in the body cavity. They are either free or inserted in the rectum wall, forming an arrangement known as the cryptonephridial system. The Malpighian tubules may have morphologically different regions, with each one formed by a specific cell type. Secondary specializations are found in Malpighian tubules, in which a region of the tube may be involved in the production of some substances, while other regions are responsible for other products. This is what occurs in cases of certain species of the order Neuroptera, which utilize tubules to produce cocoon silk thread during the last larva stage. The cells of Malpighian tubules of Myrmeleon sp undergo endoreduplication during the species' larval development, and they become highly polyplodic in the last larvae stage. However, this increased ploidy does not establish itself in all parts of the tubule, but only in select regions, which suggests that only some parts of the tubule undergo these modifications for silk production while the other regions of the tubule are still used for basic functions of osmoregulation. In this study, the following cytochemical techniques were used: Toluidine Blue, Xylidine Ponceau, Impregnation by AgNOR and the molecular cytogenetic technique called Fluorescence In Situ Hybridization (FISH). These techniques allowed us to see alterations on both the cellular and cytoplasmic levels. These alterations were evidence of an increase in synthesis of the substances secreted by specific cell types during the course of larval development. Ultrastructural analyses were also performed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

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