Orientadores: Guaracy Tadeu Rocha, Shirlei Maria Recco-Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T14:17:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_MarcioSiqueirade_M.pdf: 4518427 bytes, checksum: 31a745f37528b6f2506f2ce93c764a66 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A ausência de dimorfismo sexual na maioria das espécies da família Ramphastidae levou alguns autores (DUARTE e BARBOSA, 1990 e HOFLING, 1991) a realizar estudos correlacionando dados biométricos com o sexo de exemplares de algumas espécies. A partir destas investigações puderam concluir que existem determinadas características fenotípicas que se relacionavam com o sexo de machos ou fêmeas, porém estes estudos foram realizados em exemplares taxidermizados ou peças de coleções de museus onde o grau de confiança na informação do sexo nos registros desses materiais não é de 100%. Muitos criadores de aves silvestres acreditam haver diferenças sexuais relacionadas com algumas medidas de bico entre exemplares da espécie Ramphastos toco. Neste estudo foram sexados cito geneticamente 51 exemplares (25 machos e 26 fêmeas) de R. toco e analisados 11 caracteres biométricos. A análise estatística, feita a partir da Função Discriminante Linear (F.D.L.), permitiu verificar diferença significativa entre os sexos com relação às medidas de comprimento do cúlmem, comprimento do tômio, comprimento do bico inferior e abertura de cloaca (dada pela distância entre as extremidades do osso púbis). O conjunto das 11 variáveis indicou F(x) significante em nível de 5%. A equação discriminante obtida indicou os valores de F(x) para machos e fêmeas. A aplicação da equação na sexagem dos exemplares indicou uma taxa de erro de 4,5% para os machos e 13,8% para as fêmeas. A mesma análise foi feita a partir de 20 exemplares (nove machos e 11 fêmeas) de R. dicolorus, onde 10 variáveis foram analisadas. Destas, mostraram-se discriminantes de sexo as mesmas variáveis citadas para R. toco. Porém, considerando-se o conjunto das 10 variáveis analisadas, a F(x) obtida não indicou diferença significativa, com p > 0,05, provavelmente devido à baixa amostragem. A equação de F.D.L. indicou valores de F(x) para machos e fêmeas, permitindo a identificação do sexo. A aplicaçã9 da equação aos exemplares indicou uma taxa de erro de 0,0% para machos e de 8,3% para fêmeas. Portanto, provavelmente, a porcentagem de machos com medidas tão pequenas que os confundam com fêmeas, é menor que a porcentagem de fêmeas com medidas maiores que as confundam com machos. Até o presente havia sido descrito o cariótipo de apenas uma espécie da família Ramphastidae, R. toco. Os cariótipos de outras nove espécies da mesma família foram determinados e apresentaram, como características em comun, a presença de pelo menos 10 macrocromossomos autossômicos telocêntricos e muitos microcromossomos que variam em número entre as diferentes espécies. Em todas estas espécies o cromossomo sexual Z é subtelocêntrico e o W é um microcromossomo que se confunde com os demais. Com base na morfologia cromossômica dos macrocromossomos autossômicos, estas espécies foram divididas em três grupos: as espécies Ramphastos dicolorus, R. ariel, R. vitellinus e R. ucanus cuvieri, portadoras de dois pares de cromossomos metacêntricos autossômicos (10 e 70 pares); as espécies R. toco, Baillonius bailloni, Selenidera maculirostris, Pteroglossus castanotis e P. aracari, portadoras de apenas um par de cromossomos metacêntricos (10 par) e a espécie Andigena laminirostris na qual todos os cromossomos autossômicos são telocêntricos. Os dados cariológicos obtidos neste trabalho permitem supor que provavelmente R. toco bem como as espécies dos gêneros Baillonius, Pteroglossus e Selenidera tenham mantido um padrão cromossômico mais próximo do ancestral, o que está em desacordo com o dendograma proposto por HAFFER (1974). Nas espécies Ramphastos dicolorus, R. ariel, R. vitellinus e R. tucanus cuvieri pode ter ocorrido uma translocação do tipo fusão cêntrica que teria originado um cromossomo metacêntrico e translocações in tandem teriam reduzido o número diplóide dos cariótipos atuais. É possível que A. Laminirostris tenha se diferenciado das demais espécies da família pela presença de uma fissão cêntrica no 10 par cromossômico / Abstract: The abscent sexual dimorphism in the majority of the species of Ramphastidae had some authors (DUARTE & BARBOSA, 1990 and HOFLING, 1991) correlate biometric data with the sex of fe_ species following these investigations it was concluded for specific phenotypic characteristics that correlated with sex of male and female. Although these studies were done in taxidermized animaIs or pieces of museum collection where the confidence in the sex information on the registries doesn't reach 100% many silvan bird breeders believe in sexual differences related with the measurement of the bill among Ramphastos toco species. ln this study cytogenetics sexual matching of 51 specimens (25 males and 26 females) of R. toco were done and 11 biometric characteristics were analysed. Statistical analysis was done from Linear Discriminating Function, which alIowed verification of statistically significant differences in sex regarding the measurement of the culmen, tomio, lengh of low bilI and cloaca wedg_ (distance between the two extremities of pubis). The 11 variables indicated significance F(x) at 5%. The discriminanting equation indicated the F(x) values for males and females. Using the equation at the sexing of the species it was found an error of 4.5% for males and 13.8% for females. The same analysis was used for 20 animaIs (9 males and 11 females) of R. dicolorus, where 10 variables were analysed. Among these variables, the same that was mentioned for R. Toco wher see discriminatory. Meanwhile, considering alI 10 analysed variables, the F(x) given, didn't reach significant diference (p>0.05). Probably due to smalI sample. The L.D.F. showed F (x) values for males and females, alIowing sex identification. The equation for mal e sample indicated an error of 0.0% and 8.3% for females. Therefore, The percentage of males with toa smalI measurements that mix them up with females is probably less than the percentage of females with values that co_espond to males. Currently, there is a Karyotype discription of only one species of the amphastidae family, R. toco. The karyotype or the other 9 species ofthe same family were determined and presented, as similar characteristics, at least 10 autossomic telocentric macrocromossomes and many microcromossomes, which vary in their number. Among diferent species. AlI of these species present the sexual cromo some Z as subtelocentric and the W is a microcromosome that couldn'd be diferentiated. Based on the chromosome morphology of the autossomic macrocromosome, these species were separeted in three groups. The species Ramphastos dicolorus, R. ariel, R. vitellinus and R. tucanus cuvieri, witch present two pairs of metacentric autosomic cromo somes (1 sI e ih pairs); The species R. toco, Baillonius bailloni, Selenidera maculirostris, Pteroglossus castanotis e P. aracari, present only one pair of metacentric chromosome (1st pair) and the specie Andigena laminirostris where all autossomic cromo somes are telocentric. The karyologycal data in this study support, that probably R. toco as well as other species from the genus Baillonius, Pteroglossus e Selenidera have kept a chromosomic pattern doser to their ancestral, which disagree with the proposed dendogram of HAFFER (1974). In the Ramphastos dicolorus, R. ariel, R. vitellinus and R. tucanus cuvieri species a centric fusion type translocation may have happened which originated a metacentric chromosome and in tanden translocation might have decresed. The dyploid number of the current kariotypes. It is possible that A. laminirostris had differentiated from other species of the family by a centric fusion present at the first chromosomic pair / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T00:21:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amaral_MauricioJoseLopesVazdo_D.pdf: 14309121 bytes, checksum: 98e48ccc7cd6fa16721c0790278c104d (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O gênero Physalaemus, pertencente à família Leptodactylidae, apresenta um grande polimorfismo e notável abundância de espécies crípticas, o que levou ao reconhecimento de quatro grupos. Neste trabalho, investigamos alguns aspectos da citogenética e da espermiogênese de algumas espécies deste gênero, com especial ênfase à P. fuscomaculatus e P. biligonigerus. Essas espécies apresentam dificuldades de identificação, devido, principalmente, à sua grande semelhança morfológica. Além disso, o nome específico fuscomaculatus, vem sendo dado à diversas populações de biligonigerus. Os exemplares de P. fuscomaculatus, P. biligonigerus e P. aff. biligonigerus analisados citogeneticamente, apresentaram 2n=22 cromossomos. Com exceção do par 3 de P. fuscomaculatus, que é submetacêntrico, enquanto nas outras duas espécies é metacêntrico, todos os demais cromos somos apresentaram a mesma morfologia. O braço curto do cromossomo 3 apresentou um bloco de heterocromatina banda C positiva que é maior em P. biligonigerus e P. aff. biligonigerus do que em P. fuscomaculatus. A mudança da morfologia do cromossomo 3 pode ser explicada, portanto, por mecanismos de adição ou deleção de heterocromatina. As três espécies apresentaram também um grande bloco pericentromérico heterocromático no par 8, uma pequena banda C positiva intersticial presente no braço longo dos pares 5 e 7, bem como um único cístron ribossomal ativo, presente no braço longo do cromos somo 9, coincidente com a constrição secundária. Somente P. aff. biligonigerus apresentou um grande bloco heterocromático na região pericentromérica no braço curto do cromossomo 9 e outro na região telomérica no braço longo. As características citogenéticas analisadas indicam grande semelhança entre essas espécies. A análise da basofilia nuclear durante a espermiogênese de P. fuscomaculatus e P. biligonigerus (grupo biligonigerus), P. centralis, P. lisei, P. riograndensis, P. cuvieri e P. gracilis (grupo cuvieri) e P. petersi (grupo pustulosus), mostrou diferentes respostas quando corados com azul de toluidina (AT) pH 4,0 e fastgreen alcalino (AFG), seguido de desaminação. Os espermatozóides de P. fuscomaculatus e P. biligonigerus, assim como os de P. cuvieri e P. gracilis, exibiram coloração violeta quando corados com A T, enquanto que os espermatozóides das outras espécies exibiram diferentes padrões de coloração. Exceto os espermatozóides de P. gracilis, todos os demais se coram com AFG, seguido de desaminação. Estes resultados mostram que o DNA dos espermatozóides dessas espécies estão diferentemente complexados às proteínas. Esta é a primeira descrição de variabilidade intragenérica desta característica em Leptodactylidae. A análise ultraestrutural dos espermatozóides foi feita em P.fuscomaculatus, P. biligonigerus e P. gracilis, e também em Pseudopaludicola falcipes, cujo gênero é considerado grupoirmão de Physalaemus. As três espécies de Physalaemus apresentam a mesma morfologia ultraestrutural, mas diferem dos espermatozóides de Pseudopaludicola falcipes e de outros leptodactilídeos, por não apresentarem o bastão axial dista!. Os resultados obtidos no presente trabalho foram insuficientes para comprovar que P. fuscomaculatus e P. biligonigerus são categorias específicas distintas, já que as diferenças observadas são muito pequenas e poderiam estar ocorrendo como polimorfismos mesmo dentro das populações. Apesar de considerar-se que o gênero Pseudopaludicola tenha se originado a partir de Physalaemus, a ultraestrutura do espermatozóide de P. falcipes difere deste grupo e é semelhante à de outro leptodactilídeo, ontophrynus cultripes, que também apresenta o bastão axial dista!. A utilização de um conjunto maior de caracteres poderá auxiliar no esclarecimento das relações filogenéticas nos leptodactilídeos, que permanece ainda confusa / Abstract: The genus Physalaemus, belonging to the family Leptodactylidae, shows extensive polymorphism and an abundance of cryptic species. At least four species are currently recognized in this genus. In this work, we investigated some aspects of the cytogenetics and spermiogenesis of several species in this genus, with particular emphasis on P. fuscomaculatus and P. biligonigerus. These two species are difficult to distinguish, mainly because of their considerable morphological similarities. A further problem is that the specific name fuscomaculatus has been applied to several populations of biligonigerus. AlI the specimens of P. fuscomaculatus, P. biligonigerus and P. aff. biligonigerus analyzed had 2n=22 chromosomes. All of the chromosomes had the same morphology, with the exception of pair 3 of P. fuscomaculatus, which was submetacentric, but metacentric in the other two species,. The short arm of chromosome 3 contained a block of heterochromatin which was Cband positive and was slightly longer in P. biligonigerus and P. aff. biligonigerus than in P. fuscomaculatus. The divergenge in morphology of chromosome 3 can be explained by the addition or delection of heterochromatin. The three species also showed a large block of pericentromeric heterochromatin in the pair 8, a small interstitial C-band, on the long arm of pairs 5 and 7, as well as a uni que ribossomal cistron, on the long arm of chromosome 9, coincident with the secondary constriction. P. aff. biligonigerus was the only species to have a large block of pericentromeric heterochromatin in the short arm of chromosome 9 and another one in the telomeric band of the long arme The nuclear basophilia during spermiogenesis in P. fuscomaculatus and P. biligonigerus (biligonigerus group), P. riograndensis, P. centralis, P. lisei, P. gracilis and P. cuvieri (cuvieri group) and P. petersi (pustulosus group) showed different responses with toluidine blue (TB) pH 4.0 and alkaline fast-green (AFG) after deamination. The spermatozoa of P.fuscomaculatus, P. biligonigerus, P. cuvieri and P. gracilis stained violet, whereas those of the other species showed different responses to TB. Except in P. gracilis, the spermatozoa of all species were positive to AFG, even after deamination. These results show that the DNA in the spermatozoa ofthese species is differently associated with proteins. This is the first description of such intrageneric variability in the Leptodactylidae. An ultrastructural analysis of the spermatozoa of P. fuscomaculatus, P. biligonigerus, P. gracilis and Pseudopaludicola falcipes, a genus considered to be a sister-group of Physalaemus, showed that the three species of Physalaemus had the same ultrastructural morphology, but differed from the spermatozoa of the Pseudopaludicola and other leptodactylids in that they had no axial rodo The results obtained here were insufficient to prove that P scomaculatus and P. biligonigerus are the same species, since the differences observed were very small and could reflect polymorphisms within populations. Although the genus Pseudopaludicola originated within the genus Physalaemus, the ultrastructure of P. falcipes spermatozoa differed from the latter group and was more similar to that of another leptodactylid, Odontophrynus cultripes. The use of a wider set of characters would help in elucidating the still confusing phylogenetic relationships among leptodactylids / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T22:53:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Veiga-Menoncello_AnaCristinaPrado_M.pdf: 2640937 bytes, checksum: 5c49eed0c0852d64c399733762db8494 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O gênero Colostethus é composto por um grande número de espécies, que se caracterizam por exibir uma coloração parda e não apresentar toxinas na pele. Quando comparado aos outros gêneros da Família Dendrobatidae, Colostethus possui características menos especializadas e o maior número cromossômico conhecido para a família (2n= 24). Dados cariotípicos obtidos para os gêneros desta família indicam uma tendência à diminuição do número cromossômico, porém as relações intergenéricas e a origem desta família ainda é controversa. Os poucos estudos citogenéticos existentes para dendrobatídeos restringem-se apenas à determinação do número e morfologia cromossômica. Neste trabalho, foi realizada a análise cariotípica de 4 espécies de Colostethus da Amazônia brasileira, sendo três delas do grupo marchesianus, e descrevemos pela primeira vez os padrões de heterocromatina e região organizadora do nucléolos (NOR) para o gênero. Colostethus stepheni apresenta número diplóide 2n = 24 cromossomos, à semelhança de todos os outros Colostethus descritos na literatura. O cariótipo de Colostethus stepheni difere do de outras espécies do gênero, tanto na morfologia de alguns pares cromossômicos, quanto na localização da constrição secundária. A estrutura bimodal do cariótipo e a presença do par I metacêntrico grande são características comuns aos dendrobatídeos em geral. Esta espécie possui apenas um par de NOR localizado na região pericentromérica dos cromossomos 1, coincidente como uma constrição secundária e com um bloco de heterocromatina constitutiva. Heteromorfismo de tamanho de NOR foi detectado em alguns indivíduos e a heterocromatina constitutiva foi localizada nas regiões centroméricas de todos os cromossomos. As três espécies do grupo marchesianus, r Colostethus caeruleodactylus, C. sp. 1 (aff marchesianus) e C. sp. 2 (aff marchesianus), diferem de C. stepheni e das demais espécies de Colostethus cariotipadas por apresentarem 2n = 22 cromossomos, revelando, assim, um novo número cromossômico para o gênero. Na Família Dendrobatidae, variabilidade intragenérica no número de cromossomos foi descrita apenas em Dendrobates, sendo encontradas espécies com 2n = 18 ou 20 cromossomos. Os cariótipos das três espécies são semelhantes, com pequenas diferenças na morfologia de alguns pares cromossômicos. Porém, essas espécies podem ser facilmente distinguidas entre si, também pela localização da NOR e pelo padrão de distribuição de heterocromatina constitutiva. A NOR está localizada no braço longo de par 4 em C. caeruleodactylus e no braço curto do par 8 em C. sp. 1 (aff marchesianus) e do par 7 em C. sp. 2 (aff marchesianus). Heteromorfismos de tamanho de NOR foram observados nessas duas últimas espécies. Em C. caeruleodactylus, foi detectada uma NOR adicional na região intersticial do braço longo de um dos homólogos do par 1. Somente em C. sp. 2 (aff. marchesianus), a constrição secundária não foi indicadora da região organizadora do nucléolo, sendo caracterizada pela presença de uma heterocromatina constitutiva fortemente corada, localizada adjacente à NOR. A hibridação in situ (FISH) com sonda de rDNA confirmou a localização de todas as NORs, detectadas pela impregnação por prata, porém uma marcação adicional no braço longo do par 5 em um indivíduo de C. sp. 1 (aff. marchesianus), não detectada por AgNOR, também foi observada, indicando a presença de seqüências homólogas ao rDNA nesta região. Apesar das diferenças encontradas no padrão de distribuição de heterocromatina constitutiva, uma pequena banda no braço longo do par 7 foi detectada nas três espécies, podendo esta heterocromatina ser considerada marcadora para os Colostethus do grupo marchesianus. Considerando-se que Colostethus caeruleodactylus, C. sp. 1 (aff. marchesianus) e C. sp. 2 (aff marchesianus) apresentam o mesmo número cromossômico e similaridade cariotípica, mas diferenças no padrão de NOR e de banda C, é possível que rearranjos cromossômicos, como translocações e eventos como adição de blocos heterocromáticos, transformação de segmentos eucromáticos em heterocromáticos e a evolução em conjunto de múltiplos sítios heterocromáticos, possam estar envolvidos na diferenciação destas espécies. A redução do número cromossômico de 24 para 22 parece ser uma característica do grupo de Colostethus marchesianus e deve ter envolvido mais de um tipo de rearranjo cromossômico, já que não há evidências diretas de que fenômenos de fissão e fusão, por si só, sejam responsáveis pelo cariótipo atualmente encontrado nesse grupo / Abstract: The genus C%stethus is composed of a great number of species, which are characterized by a brownish color and the fact that they are not poisonous. When compared to the other genera ofthe Dendrobaidae family, C%stethus is not highly specialized and has the largest chromosome number known for the family (2n = 24). Karyotypical data of the family indicate a tendency to reduce the chromosome number, however the intrageneric relationships and the family origin are still disputed. The few cytogenetic studies of dendrobatids have been restricted to the number and chromosome morphology. In this work, a karyotypical analysis of 4 Brazilian Amazonian C%stethus species was made, 3 species being of the marchesianus group, in which we described for the first time, the heterochromatic pattems and nuc1eolus organizer regions (NOR) ofthis genus. Colostethus stepheni shows 2n = 24 chromosomes, like alI the other species of this genus that are described in the literature. The C%stethus stepheni karayotype differs ITom the other species of this genus in the morphology of some chromosome pairs and in the localization of the secondary constriction. The bimodal structure of the karyotype and the presence of a large first metacentric pair are common characteristics of the dendrobatids. These species have only one NOR pair, localized in the pericentromeric region of the chromosome, coincident with the secondary constriction and with a constitutive heterochromatin block. Heteromosphism ofthe NOR size was detected in some specimens and the constitutive heterochromatin were located in centromeric regions of alI the chromosomes. The three species of marchesianus group, C%stethus caeru/eodacty/us, C. sp. 1 (af marchesianus) and C. sp. 2 (aff marchesianus) differ ITom C%stethus stepheni and ITom the other C%stethus species karyotyped, because they show 2n = 22 chromosomes, revealing a new chromosome number for the genus. In the Dendrobatidae fami1y, intrageneric variability ofthe chromosome number was described on1y in Dendrobates, in which species with 2n = 18 or 20 chromosomes were found. The karyotypes of the three species are similar, with small differences in the morphology of some chromosome pairs. However, these species can easily be differentiated ftom each other, by NOR localization and by the constitutive heterochromatin distribution pattern. The NOR is localized on the long arm of pair 4 in C. caeruleodactylus, on the short arm of pair 8 in C. sp. 1 (aff marchesianus) and on the short arm of pair 7 in C. sp. 2 (aff marchesianus). Heteromorphisms in the sizes ofthe NORs were observed in these last species. In C. caeruleodactylus, an additional NOR site on the interstitial region of the long arm of one homologue ofpair 1, was detected. Exclusively in C. sp. 2 (aff marchesianus), the secondary constriction did not indicate the nucleolus organizer region, being characterized by the presence of a constitutive highly stained heterochromatin, located adjacent to the NOR. In situ hybridization with rDNA probe has confirmed the localization of all the NORs detected by silver impregnation. However, an additional marking on the long arm of pair 5 in one specimen of C. sp. 1 (aff marchesianus), undetected by AgNOR, was also observed, indicating the presence ofhomolgous sequences in rDNA on this region. Despite the differences found in the distribution pattern of the constitutive heterochromatin, a small band was detected on the long arm of pair 7 in the three species. This heterochromatin can be considered as indicative ofthe Colostethus ofmarchesianus group. Colotethus caeruleodactylus, C. sp. 1 (aff marchesianus) and C. sp. 2 (aff marchesianus) show the same chromosome number and karyotypical similarity, but differ in both their NOR and C-band patterns. It is possible that chromosome rearrangements, such as translocations and addition of heterochromatic blocks, transformation of euchromatic segments to heterochromatic ones and concerted evolutions of multiple heterochromatic sites may be involved in the differentiation ofthese species. The chromosome number reduction ftom 24 to 22, seems to be a characteristic of the marchesianus group Colostethus, and may have involved more than one type of chromosome rearrangement, because there are no direct evidences that fusion and fission are, themselves, responsible for the karyotype presently found in this grou / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Eliana Regina Forni-Martins / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T02:54:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lombello_RicardoAugusto_D.pdf: 7149411 bytes, checksum: 11edc245a7e3c844446e31e182a99dec (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A família Malpighiaceae é composta por aproxim_damente 71 gêneros e 1250 espécies, das quais 950 (pertencentes a 41 gêneros) estão distribuídas preferencialmente pelo Novo Mundo. As Malpighiaceae apresentam em geral hábito trepador (mais de 500 espécies), podendo ser encontradas também árvores e arbustos. Em virtude da extensa amplitude ecológica e geográfica, a família Malpighiaceae apresenta uma grande diversidade de hábitos, frutos e grãos de pólen, além de uma notável variedade de registros de número cromossômico. Segundo dados da literatura, a família apresenta uma grande diversidade de números cromossômicos, que envolve poliploidias e disploidias inter e intra-específicas. Além da contribuição para o conhecimento de números cromossômicos para mais espécies de Malpighiaceae, objetivamos comparar as IDformações obtidas através destes estudos citogenéticos com o posicionamento taxonômico, baseado em aspectos morfológicos e biogeográficos, das espécies estudadas. No presente trabalho foram realizados estudos citogenéticos em 23 espécies de 12 gêneros de Malpighiaceae, coletadas em áreas de cerrado, mata semidecídua, além de algumas cultivadas, sendo obtidos 14 números cromossômicos haplóides e 15 diplóides, sendo 17 destes números inéditos. Os números variam de 2n= 12 (Lophanthera lactescens Ducke) até 2n=80 (Banisteriopsis stellaris (Griseb.) Gates). Com exceção feita a Lophanthera lactescens e Galphimia brasiliensis (L.) A. Juss., todas as espécies estudadas apresentaram cromossomos relativamente pequenos (de 1,1 a 3,9J..UIl), predominantemente metacêntricos. Para 14 destas espécies estudadas foram observados os caracteres cariomorfológicos e confeccionados os ideogramas. Não foram observadas anormalidades no processo de divisão meiótica, sendo altos os índices de viabilidade de grãos de pólens aferidos. Foi realizada também hibridação in situ com uma sonda específica para regiões teloméricas em células em divisão mitótica de Lophanthera lactescens, visando averiguar a origem evolutiva de seus cromossomos grandes. Os resultados ratificam a posição primitiva da espécie dentro da família. Analisando os números cromossômicos aqui apresentados, somados aos obtidos em literatura, observamos que há uma relação direta entre a variação de número cromossômico e a derivação do hábito trepador, bem como dos frutos alados, aparentemente mais derivados. Estas derivações devem ter ocorrido interdependentemente / Abstract: The Malpigbiaceae family contrins about 71 genera and 1250 species, with 950 (that belongs to 41 genera) rather distributed in the New World. Most of Malpigbiaceae species presents climbing habit (more then 500 species), however we Can also find trees and shrubs. Based on its large geographic and ecologica1 magnitude, the Malpigbiaceae presents a great diversity of habits, fruits and pollen grains shape. Besides a considerable register of chromosome number variation in the literature is shown. Previous studies indicated that Malpigbiaceae has a great chromosome diversity, that evolves poliploidy and disploidy inter and intra-specific. Moreover the contribution to increase the chromosome numbers data of an important family as Malpigbiaceae, we intend to compare the cytogenetics information obtained here with taxonomic organization based on morphological and biogeographic studies. Cytogenetic studies were carried out in 23 species of 12 genera of Malpighiaceae, collected in cerrado and forest areas, besides some cultivated species, with 14 haploid chromosome numbers and 15 diploid accounts, with 16 of these accountings unpublished. The chromosome numbers vary from 2n=12 (Lophanthera lactescens Ducke) to 2n=80 (Banisteriopsis stellaris (Griseb.) Gates). Except Lophanthera lactescens and Galphimia brasiliensis (L.) A. Juss., al the studied species showed relatively small chromosomes (1,1 to 3,9J.11Il), predominantly metacentrics and with gradual increase in length. For 14 of these studied species karyomorphological characters were observed, its karyotype formula obtained and ideograms constructed. No abnormalities in the meiotic process of division were observed, with high leveI of viable pollen grains registered. In situ hibridization with telomeric sequence primer in mitotic cells of Lophanthera lactescens was carried out, in order to study the origin of its big chromosomes. The results confirm the primitive position of the species in the family. We intended to ana1yze in Malpigbiaceae the relationship between the evolution of the climbing habit, the variation of fruit type and alterations in the chromosome numbers. Based on chromosome number and fruit type data, we suppose that these derivations were interdependent / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T05:52:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Medeiros_LilianRicco_M.pdf: 2806210 bytes, checksum: 5fcc0121fdf8339334ff0b102682d87f (MD5) Previous issue date: 2000 / Mestrado

Orientador : Shirlei Maria Recco-Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_Cristina_M.pdf: 1905213 bytes, checksum: 73a500fb2ccda93c80afaa605b601931 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientadores: Andrea Trevas Maciel Guerra, Nilma Lucia Viguetti Campos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:09:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dovigo_JulianaRissettiDelbim_M.pdf: 13522160 bytes, checksum: acddfef1d5cce40bb294111c06578616 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Com a melhoria na atenção primária à saúde, tem havido um aumento relativo na freqüência das anomalias congênitas como causa de morbidade e mortalidade, entre elas as causadas por aberrações cromossômicas. São indicações para análise cromossômica as anomalias congênitas múltiplas, retardo mental, ambigüidade genital ou hipogonadismo, esterilidade, infertilidade, natimortalidade, síndromes de quebras cromossômicas e neoplasias. O Laboratório de Citogenética Humana (LCH) do Departamento de Genética Médica- FCM- UNICAMPé um dos poucos serviçospúblico de citogenéticada região de Campinas, responsável pelo diagnóstico de grande parte dos casos de aberração cromossômica dessa região. Este trabalho teve por objetivo avaliar a casuística do LCH, a fim de estimar a freqüência das diversas aberrações detectadas, analisar a origem das aberrações estruturais, comparar os resultados obtidos com os de outros laboratórios ligados a serviços de genética clínica, e comparar a distribuição das aberrações numéricas com aquela observada em amostras de recém-nascidos. Foram analisados 4244 exames de cariótiponão oncológicosrealizadosde 1970a 1999,referentesaos casos-Índicede cada família; os casos foram ainda subdivididos segundo a época em que os exames foram realizados (anos 70, 80 e 90). Cerca de 38% dos exames de cariótipo, em todas as épocas, detectaram uma aberração cromossômica. As aberrações numéricas predominaram sobre as estruturais, porém houve um aumento progressivo na freqüência e diversidade dessas últimas no periodo analisado. Manteve-se, porém, a proporção de cariótipos com resultado normal, e houve ainda uma queda na freqüência das aberrações numéricas. Entre essas, houve um predomínio acentuado da S. de Down e uma queda progressiva na freqüência das aneuploidias de cromossomos sexuais. As aberrações estruturais desequilibradas predominaram sobre a equilibradas; quando havia resultado do cariótipo dos genitores, a anomalia havia sido herdada em cerca de 31% dos casos, sendo 72% de herança materna. Em comparação com outras casuísticas, verificou-se neste trabalho um predomínio mais acentuado de casos de S. de Down e uma menor proporção de aberrações estruturais, e observou-se diferenças significativas na distribuição das aberrações numéricas em comparação com amostras de recém-nascidos. Os resultados deste trabalho refletem as diversas distorções de averiguação das aberrações cromossômicas em serviços de genética clínica, em particular no LCH do Departamento de Genética Médica da UNICAMP, e indicam a necessidade de ampliar a oferta de exames citogenéticos à população e de atuar junto aos profissionais de saúde que lidam com as diversas condições médicas que constituem indicações para análise cromossômÍca / Abstract: Recent improvement on primary health care led to a relative increase on the frequency of congenital anomalies due to chromosome aberrations as a cause of morbidity and mortality. Cytogenetic analysis is indicated in cases of multiple congenital anomalies, mental retardation, sex ambiguity or hypogonadism, sterility, infertility, stillbirth, syndromes of chromosome breakage and cancer. The Human Cytogenetics Laboratory (HCL) of the Department of Medical Genetics, Faculty of Medical Sciences, UNICAMP, is one of the few public cytogenetic laboratories on the region of Campinas, SP, and is responsible for the diagnosis of most of the cases of chromosome aberrations in this region. This work was carried out to analyse data from the HCL, in order to estimate the frequency of the various chromosome abnormalities, determine the origin of structural aberrations, compare the results with those from other cytogenetics laboratories linked to clinical genetics services, and compare the distribution of numerical chromosome aberrations with that observed among newboms. Laboratory records from 4,244 karyotypes (1970 through 1999) were reviewed (only index cases were included). The cases were also grouped according to the time when the karyotype was done (in the 70' s, 80's or 90's). About 38% ofthe karyotypes revealed a chromosome aberration. Numerical anomalies predominated over structural aberrations, but there was a progressive increase in the frequency and diversity of the latter. The frequency of normal karyotypes did not change with time, and there was a decrease in the frequency of numerical aberrations. , Among them, there was a striking predominance of Down syndrome and a progressive decrease on the frequency of sex chromosome aneuploidies. Unbalanced chromosome aberrations predominated over balanced rearrangements. Among cases of structural abnormalities in which the parents' karyotypes were known, inheritance was observed in 31% (72% of maternal origin). In comparison with other surveys, in this sample there was a higher predominance of Down syndrome and a lower proportion of structural abnormalities; there were also significant difterences in the distribution of numerical abnormalities when compared to a newbom scrrening study. Our results reflect the many ascertainrnent biases of chromosome aberrations in clinical genetics services. They also point out to the need to the extend the availability of cytogenetics services and to assist physicians by increasing the awareness of the frequencies of chromosome aberrations in certain diagnostic groups / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Silvia das Graças Pompolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T09:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_SoniaMariadaSilvaRocha_D.pdf: 3918889 bytes, checksum: 6f04545ad09274b3180ac5e58c80507b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Das 13 espécies de Trypoxylon com número cromossômico conhecido, somente T. albitarse possui cromossomos B, os quais são totalmente heterocromáticos e podem apresentar-se em dois tipos morfológicamente distintos, um metacêntrico e um acrocêntrico. Ao longo dos últimos cinco anos (1996 a 2000), 1003 espécimens de T. albitarse provenientes de 692 ninhos foram estudados citogeneticamente com relação à ocorrência, distribuição, frequência e evolução de seus cromossomos B e muitos destes indivíduos foram submetidos às técnicas de hibridação in situ fluorescente (FISH) ou impregnação por nitrato de prata para localização dos genes ribossômicos e estudo dos nucléolos, respectivamente. Todos os espécimens analisados foram obtidos em diferentes populações naturais na Zona da Mata Mineira, das quais 11 estão localizadas no município de Viçosa (Amoras, Campus, Centro, Marrecos, Palmital, Paraíso, Silvestre, Vila Cristal, Vila Chaves, Fundão e Barrinha), duas no município de Cajuri (Cajuri e Arraial Paraguai), uma no município de Coimbra (Coimbra), uma no município de Porto Firme (Nova Ilha) e uma no município de Piranga (piranga). Com exceção da populaçao de "Centro", as oito primeiras populações de Viçosa e a população de Porto Firme foram amostradas em dois intervalos de tempo diferentes (1996-1998 e 1998-2002), enquanto as populações dos municípios de Cajuri, Coimbra e Piranga, assim como as populações viçosences de Fundao e Barrinha, foram estudadas apenas na segundo amostragem. Os resultados obtidos na primeira etapa de coletas revelaram que, em maior ou menor freqüência, todas as populações analisadas possuem cromossomos B. Entre as populações de Viçosa, a grande maioria das fêmeas e machos analisados portaram um cromos somo B por genoma haplóide, ou seja, a mesma dosagem dos cromossomos do complemento A. Por outro lado, na única população analisada em Porto Firme, somente 14.3% dos indivíduos apresentaram cromossomos B. Considerando que uma das principais características dos cromossomos B é seu modo de transmissão não-mendeliano, a possibilidade de que, em Viçosa, os cromos somos B de T. albitarse estivessem regularizando seu comportamento meiótico e, conseqüentemente, alcançando sua estabilização como um membro normal do complemento cromossômico, foi postulada. Na tentativa de testar esta hipótese, o processo de estabilização dos cromossomos B foi estatisticamente quantificado em todas as populações analisadas. Em Porto Firme, o índice de estabilização (SI) dos B foi bastante baixo, indicando uma invasão recente. Não obstante, em Viçosa, o SI foi igual a 100% em três diferentes populações, onde todos os indivíduos portavam um B por genoma haplóide e indicou uma forte tendência à estabilização dos B nas demais populações. Um estudo comparativo desses dados com os obtidos no seguinte período de amostragem forneceram evidências diretas do processo invasivo dos B em Porto Firme, onde a frequência de Bs aumentou drasticamente. Entretanto em Viçosa, a despeito do aumento em frequência do tipo metacêntrico e da significativa reduçao do tipo acrocêntrico em várias populações, a frequência geral de cromossomos B permaneceu estável. As novas populações analisadas, mostraram uma frequência de Bs e parametros de estabilidade semelhantes aos observados em Viçosa, indicando que se encontram em um estágio evolutivo similar, com a maioria dos indivíduos portando um cromos somo B por genoma haplóide e altos valores de SI. A técnica de FISH com sonda de rDNA não revelou a presença de genes ribossômicos nos cromos somos B, não obstante, demonstrou que, em T. albitarse, os genes ribossômicos estão localizados em toda extensão do braço heterocromático do cromossomo 14. Embora a técnica de impregnação por prata não tenha sido efetiva na localização cromossômica da NOR ativa, foi aplicada com bastante exito na quantificação da atividade nucleolar nos núcleos interfásicos de machos e fêmeas de T. albitarse, mostrando que, a despeito da grande variabilidade no tamanho do 'braço ribossômico' em machos e fêmeas dessa espécie, a atividade nuc1eolar é proporcional ao nível de ploidia dos indivíduos / Abstract: Among the 13 cytogenetica1ly analysed species of Trypoxylon genus, only T. albitarse possess B chromosomes. Two types morphologically distinct of B chromosomes have been found in this wasp, one metacentric and other acrocentric, which are totally heterochromatic. Over the last five years (1996 the 2000), 1003 specimens of T. albitarse obtained from 692 nests, had been cytogenetically studied with respect to the occurrence, distribution, frequency and evolution of its B chromosomes. Many of these individuals had been subjected to techniques of fluorescent in situ hybridisation (FISH) or silver nitrate staining for location of ribosomal genes and nucleoli, respectively. All analysed individuals were collected in different natural populations in the Zona da Mata Mineira (Minas Gerais State, Brazil), of which 11 are located in the city of Viçosa (Amoras, Campus, Centro, Marrecos, Palmital, Paraíso, Silvestre, Vila. Cristal, Villa Chaves, Fundão and Barrinha), two in the city of Cajuri (Cajuri and Arraial Paraguai), one in the city of Coimbra (Coimbra), one in the city of Porto Firme (Nova Ilha) and one in the city of Piranga (piranga). Besides the Centro population, the eight first populations from Viçosa and the population of Porto Firme were sampled twice (1996-1998 and 1998-2002), while the populations located in Cajuri, Coimbra and Piranga, as well as Fundao and Barrinha (Viçosa), were studied only included in the second sampling. The results observed in the first stage of collections have revealed that, although in different frequency, all analysed populations possess B chromosomes. Among the Viçosa's populations, most bore females and males carried a B chromosome per haploid genome, the same dosage of standard (A) chromosomes. On the other hand, in Porto Firme, only 14.3% of individuals carried B chromosomes. Because one of the most conspicuous features of B chromosomes is their non-mendelian transmission mode, we hypothesized that at least in Viçosa, the B chromosomes of T. albitarse were regularizing their meiotic behaviour and, consequently, reaching their stabilization as a normal member of the normal chromosomal complement. To test this hypothesis, the stabilization process of B chromosomes was statistically quantified in all populations. In Porto Firme, the stabilization index (SI) of the B was sufficiently low, indicating a recent invasion. On the other hand populations from Viçosa carried a B per haploid genome, the SI value was equal to 100% while the other populations indicated a strong trend toward the stabilization of B chromosomes. A comparative analysis performed with both set of data (obtained in the first and second period of sampling) had supplied direct evidences of the invasive process of B in Porto Firme, where the B frequency has increased significantly. However in Viçosa, in spite of the increase in the metacentric B frequency and the significant reduction, in some populations, in the acrocentric B frequency, the general frequency of B chromosomes remained stable. The additional populations sampled showed B frequency and stability parameters similar to these observed in the Viçosa region, indicating that they are in a similar evolutionary stage, with most individuals carrying one B per haploid genome and high SI values. Fluorescent in situ hybridization (FISH) showed all ribosomal genes located in the heterochromatic arm of chromosome 14. The silver impregnation method was successfully applied in the nuc1eolar activity quantification of interfasic nuc1ei in males and females of T. albitarse. These results suggested that, despite the great variability in the size of ribosomal arm in this species, nuc1eolar activity is adjusted to the ploidy level / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Silvia das Graças Pompolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mampumbu_AndreRoberto_M.pdf: 3848727 bytes, checksum: 92d807078126aa1623a885ec4806d9d2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Friesella é um gênero monotípico da tribo Melipqnin_ com distribuição geográfica restrita ao sul-sudeste do Brasil. O objetivo deste trabalho foi análise citogenética do gênero Friesella para a compreensão da organização e evolução do genoma da tribo Meliponini, utilizando técnicas de coloração com Giemsa, banda C e fluorocromos para localizar e conhecer a natureza da heterocromatina; banda NOR e hibridação in situ, para a localização dos genes ribossômicos e para o estudo do número de nucléolos. Foram analisadas citogeneticamente 10 colônias provenientes dos Estados de Minas Gerais e Espírito Santo. Determinou-se o número cromossômico de 2n=34 (fêmeas) e de n=17 (machos). A fórmula cariotípica é 2K=18AM+ 16A. A heterocromatina localizou-se nos braços curtos dos cromossomos acrocêntricos (A) e nos braços médio e longo dos cromossomos pseudo-acrocêntricos (AM). Os tipos morfológicos observados (AM, A) teriam surgido de cromossomos metacêntricos que sofreram fissões cêntricas seguidas de crescimento "em tandem" da heterocromatina. Os padrões obtidos com os fluorocromos base-específicos (DAlDAPI/CMA3) demonstraram que a heterocromatina foi predominantemente rica em AT (DAPr), com exceção do quinto par (AM), que apresentou heterocromatina GC. Esta heterocromatina foi marcada pela CMA3 e hibridizou com a sonda de rDNA (18S, 5.8S e 28S), o que demonstrou correlação entre CMA3+ e FISH+. Foram encontradas três variantes cromossômicas, o que permitiu separar as colônias em dois grupos de acordo com as médias do comprimento do quinto par heteromórfico. Foi possível confirmar pela banda NOR, que estes cromossomos estavam envolvidos com a região organizadora de nucléolo. Observou-se uma variação de 1 a 4 nucléolos nos dois grupos analisados. A variação em número de nucléolos (1a 4) observados em fêmeas (diplóides), foi considerado resultado de células com níveis diferentes de ploidia. O tamanho do nucléolo não diferiu entre os dois grupos, o que sugere um grau de atividade nucleolar similar e, conseqüentemente, que haja um controle na quantidade de rRNA transcrito independente do número de "clusteres" de rDNA / Abstract: Frisella is a monotypic genus of the tribe Meliponini with geographical distribution restricted to southern and southeastern Brazil. The objective of this work was to analyze cytogenetc of gen_riesella to understand organization and evolutíon of genome of tribe Melíponíni using conventional staíning (Giemsa), C-banding and coloration with fluorochromes to characterize the localízation and the nature of heterochromatin. NOR banding and in situ hybridization were applied for ribosome genes localization and to determine the number of nucleoli. Ten colonies were analyzed cytogenetically from the states of Minas Gerais and Espírito Santo. Chromosomal numbers of 2n:::34 and n=17 were determined for females and males respectively. The karyotypic formula was 2K=18AM+16A. The heterochromatin was localized in short arm achrocentrics (A) and in the medium and long arms of pseudoacrocentrics (AM). The observed morphological types (A, AM) might be derived from metacentric chromosomes that suffered centric fission, followed by tandem growth of the heterochromatin. The patterns obtained wíth specificbase fluorochromes (CAlDAPI/CMA3) showed that the heterochromatin was predominantly AT (DAPn except for the fifth pair of (AM) which bore GC heterochromatin. This hetrochromatin was marked by CMA3 and hybridized with 18S, 5.8 and 28S rDNA probes, which showed correlation between CMA3+ and FISH+. Three chromosomes variants allowed to separate the colonies in two groups according to mean length of the fifth heteromorphic pairo NOR banding patterns of this same pair demonstrated that those chromosomes were also involved with the nucleolus organizer region. Both groups displayed a variation in nucleoli numbers from one to four, which was considered to be a result of different levels of ploidy in diploid females. Nucleolus size did not differ between the groups, suggesting similar nucleolar activity rate in both groups. We concluded there is a control in amount of transcribed rRNA that is independent of the number of rDNA clusters / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Fatima Aparecida Bottcher Luiz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T13:38:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bertoncin_AdaoCarlos_M.pdf: 4514319 bytes, checksum: 9c1c501a9cc8b150b47cdbb46ac8ef20 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Objetivos: Investigar a participação do Laboratório de Cito genética na avaliação do diagnóstico pré-natal em um Hospital Universitário em Campinas, São Paulo, Brasil. Casuística e métodos: Foi realizado um estudo retrospectivo com todos resultados de cariótipo do laboratório, referentes ao período de abril de 1993 a novembro de 2001. Resultados: 673 resultados foram obtidos. 146 foram designados como controle (baixo risco para anomalias cromossômicas) e 527 foram designados como grupo de estudo. 84% dos diagnósticos foram realizados em pacientes com idade gestacional superior a 20 semanas. 546 (81%) cariótipos foram obtidos de sangue fetal através de cordocentese, e 127 (19%) a partir de cultura de líquido amniótico. Do total de cariótipos anormais, 53% foram encontrados em pacientes acima de 35 anos de idade. Anomalias do sistema nervoso central (SNC) constituíram 41 % de todas as indicações para realização de cariótipo, especialmente hidrocefalia e defeitos de tubo neural. Outras indicações foram: idade materna acima de 40 anos e malformações múltiplas (9%), historia familiar de malformações congênitas (9%), defeitos de sistema urinário (8%), hidropsia fetal (7%) e outras múltiplas ocorrências (26%). Cariótipo alterado foi encontrado em mais de 20% dos casos de malformações do sistema nervoso central, cardiopatia estrutural, onfalocele, higroma cístico e restrição de crescimento fetal. Conclusões: Os altos níveis de anomalias cromossômicas em gestantes acima de 35 anos confirmam a necessidade de aconselhamento pré-natal adequado. A analise de cariótipo pela cordocentese constitui uma estratégia segura e rápida para a instituição, uma vez que as pacientes são encaminhadas para um centro de medicina terciária em idade gestacional avançada / Abstract: OBJECTIVES: To investigate the participation of a Cytogenetics Laboratory in the assessment of the prenatal diagnosis in a Woman's university Hospital in Campinas, São Paulo, Brazil. PATIENTS AND METHODS: A retrospective study was performed with all analyzed karyotype results in the laboratory, regarding material collected from april1992 to November 2001. RESULTS: 673 results were obtained. 146 were designated as controls (low risk for chromosomal anomalies) and 527 were designated as the study group. 84% of the patients were diagnosed with gestational age above 20 weeks. 542 (81%) karyotype were obtained from fetal blood by cordocentesis and 126 (19%) from amniotic fluid cell culture. Of all abnormal karyotypes, 53% were found in patients over 35 years of age. Central nervous system (CNS) abnormalities constituted 41% of al indications for karyotype examination, mainly hydrocephaly and neural tube defects. Other defects included: maternal age over 40 years old and multiple malformations (9%), familial history of congenital malformations (9%), urinary system defects (8%) and fetal hydrops (7%) and other multiple occurrences (26%). Altered karyotype were found in more than 20% cases of CNS malformations, structural cardiopathy, ompha1ocele, cystic higroma and fetal growth restriction. CONCLUSIONS: higher levels of chromosomal abnormalities in pregnant womem over 35 year confirm the need for an adequate prenatal counseling. Karyotype ana1ysis through cordocentesis constitutes a faster and cheaper strategy for the institution once patients tend to be referred to a fetal medicine tertiary center at latter gestational ages / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas