Orientadores: Sophie Françoise Mauricette Derchain, Luiz Carlos Zeferino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torres_JoseCarlosCampos_D.pdf: 2435784 bytes, checksum: 57d4b3f48b5d1b95c38559b857c45c5f (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-15T13:55:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Lianne versão final.pdf: 1813010 bytes, checksum: 7347cf54c764e95be94ff262dc30ccb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T13:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Lianne versão final.pdf: 1813010 bytes, checksum: 7347cf54c764e95be94ff262dc30ccb5 (MD5) Previous issue date: 2015-08-11 / CAPEs / O câncer do colo uterino é o quarto tipo de câncer mais comum entre as mulheres mundialmente, e o sétimo no geral. No Brasil, esta neoplasia é a terceira mais frequente no gênero feminino, com mais de 15 mil casos novos a cada ano. A infecção persistente pelo papilomavírus humano dos tipos de alto risco oncogênico está associada ao câncer cervical, porém uma pequena percentagem de mulheres infectadas por estes vírus desenvolve lesões pré-malignas que podem evoluir à invasão. Portanto, outros cofatores são necessários para a persistência viral que, após 2 anos sem intervenção, leva à expressão desregulada e concomitante das oncoproteínas transformantes E6 e E7. As enzimas degradadoras de matriz extracelular conhecidas como metaloproteinases da matriz tem sido extensamente estudadas devido ao seu papel na invasão, metástase, angiogênese e recidiva tumoral. Nas lesões cervicais, um aumento na expressão das metaloproteinases foi identificado, porém, seu papel na progressão das lesões pré-invasivas e sua interação com a infecção pelo papilomavírus ainda não está bem esclarecida. Neste intuito, o presente estudo visou avaliar, através de técnica imuno-histoquímica, a associação dos níveis de expressão das metaloproteinases da matriz 2 e 9 com os graus de lesões cervicais. Para isso, foram utilizadas amostras de biopsias parafinadas, diagnosticadas e arquivadas entre 2011 e 2015 no Laboratório de Anatomia Patológica do Hospital das Clínicas de Recife, Pernambuco, Brasil, incluindo 115 biopsias de lesões cervicais, obtidas por conização, bem como 14 casos de tecidos cervicais sem lesão. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram um aumento da expressão das metaloproteinases 2 e 9 nos casos de invasão em relação a condições pré-malignas, tanto no citoplasma quanto no núcleo de células epiteliais escamosas, sendo a intensidade da expressão nuclear das metaloproteinases estudadas mais significativa nas células cancerosas. Também foi observada diminuição da expressão das metaloproteinases 2 e 9 no citoplasma das células glandulares adjacentes na presença do carcinoma escamoso invasor, quando comparadas ao controle. Mais estudos precisam ser realizados para avaliar o valor prognóstico das metaloproteinases 2 e 9 nas condições pré-malignas e malignas do colo uterino. / The cervical cancer is the fourth most common cancer among women worldwide, and seventh overall. In Brazil, this cancer is the third most common in women, with more than 15,000 new cases each year. Persistent infection with human papillomavirus types of high oncogenic risk is associated with cervical cancer, but a small percentage of women infected by these viruses develop precancerous lesions that may progress to invasion. Therefore, other cofactors are required for viral persistence which, after 2 years without intervention, leads to unregulated and concomitant expression of transformants E6 and E7 oncoproteins. The extracellular matrix degrading enzymes known as matrix metalloproteinases has been extensively studied because of its role in invasion, metastasis, angiogenesis and tumor recurrence. In cervical lesions, an increase in the expression of metalloproteinases was identified, however, its role in the progression of pre-invasive lesions and their interaction with the papillomavirus infection is not well understood. To this end, the present study evaluated, through immunohistochemical technique, the association of the expression levels of matrix metalloproteinases 2 and 9 with grades of cervical lesions. For this, we used paraffined biopsy samples, diagnosed and filed between 2011 and 2015 at the Pathology Laboratory of the Hospital das Clínicas of Recife, Pernambuco, Brazil, including 115 biopsies of cervical lesions, obtained by conization, and 14 cases of tissues without cervical injury. The results of this study demonstrated an increased expression of metalloproteinases 2 and 9 in invasion compared to pre-malignant conditions, in both cytoplasm and nucleus of squamous epithelial cells, and a more significant intensity of the nuclear expression of metalloproteinases studied in cancer cells. It was also observed decreased expression of metalloproteinases 2 and 9 in the cytoplasm of adjacent glandular cells in the presence of invasive squamous cell carcinoma, when compared to control. More studies are needed to assess the prognostic value of metalloproteinases 2 and 9 in premalignant and malignant conditions of the cervix.

Cervical cancer is one of the leading causes of cancer death in the world. In Brazil, it is the 3rd cause of neoplasia in women. The situation in Sergipe is even worse, been responsible for the 2nd cause of death by malignant tumors in women. Since 1997 the cervical cancer prevention program, through the application of Papanicolaou test, is one of the priorities in the primary care policies in Brazil. Logistic and technical difficulties, especially in remote areas, impose important limitations for the universalization of the program. These difficulties are more clearly observed in North and Northeast regions, maintaining cervical cancer occurrence and mortality rates above national average even after 15 years of the beginning of the screening program. Studies evaluating the evolution of the cervical cancer prevention program through epidemiological markers are rare in Brazil and Sergipe. There is a worldwide tendency of using indicators from hospital activities for avoidable conditions as a way of evaluating the effectivity of primary care. The current study evaluated cervical cancer hospitalizations in Sergipe, in the time period between 2008 and 2015, from data available in DATASUS. Costs, sociodemographic characteristics and temporal modifications after the introduction of Papanicolaou test as a priority in primary care are evaluated. In the period of the study there were 873 hospitalizations. The median age was 46 years and the patients were hospitalized for a medium period of six days. The median hospitalization cost was R$1,766.00 and the cost for surgical hospitalization was three times greater than the one clinical hospitalizations. After the population adjust, there was a predominance of patients from cities other than the capital of Sergipe. In the temporal analysis there was a reduction of hospitalizations by approximately 10% per year, both for the population living in the capital and the population living in the other cities of the state. There was a statistically significant reduction in the number of clinical hospitalizations and a tendency to reduction for surgical hospitalizations. Therefore, it can be concluded that there was a significant decrease in the number of cervical cancer hospitalizations, and this decrease can be correlated to improvements in health care and the consolidation of the screening program in the study period. / O câncer de colo uterino é um dos líderes de causa de morte por neoplasia no mundo. No Brasil, é a 3ª causa de neoplasia maligna em mulheres. Para Sergipe, a condição é ainda mais agravante, sendo responsável pela 2ª causa de morte por câncer em mulheres. Desde 1997 o programa de prevenção do câncer de colo uterino, através da realização periódica do exame de Papanicolaou, é uma das prioridades das políticas de saúde na atenção primária no Brasil. Dificuldades logísticas e técnicas, principalmente nas áreas de acesso mais difícil, são limitantes importantes para incorporação global do programa. Essas dificuldades podem ser claramente observadas nas regiões Norte e Nordeste, que mesmo após mais de 15 anos do início do programa nacional de rastreamento, mantêm taxas de incidência e de mortalidade por câncer de colo uterino acima da média nacional. Estudos que avaliem a evolução dos resultados do programa de prevenção do colo uterino através dos marcadores epidemiológicos são escassos no Brasil e em Sergipe. Há uma tendência mundial de se utilizar indicadores das atividades hospitalares por doenças evitáveis como forma de avaliar a efetividade das atividades da atenção primária à saúde. O presente estudo avaliou as internações hospitalares por câncer de colo uterino em Sergipe, no período de 2008 a 2015, a partir de dados do DATASUS. Foram analisados os custos, características sociodemográficas e modificações temporais após a introdução do Papanicolaou como uma das prioridades na atenção primária. No período do estudo houve 873 internações. A idade mediana foi de 46 anos e as pacientes permaneceram internadas em média por seis dias. O gasto mediano por internação foi de R$ 1766,00 e o custo das internações cirúrgicas foi três vezes maior em relação às internações clínicas. Após o ajuste populacional, observou-se um predomínio proporcional de pacientes provenientes de cidades do interior de Sergipe. Na análise temporal, houve redução das internações hospitalares de aproximadamente 10% ao ano, tanto para a população residente na capital, quanto do interior. Observou-se uma redução estatisticamente significativa no número de internações hospitalares clínicas e uma tendência a redução das internações cirúrgicas. Conclui-se, portanto, que ocorreu um decréscimo significativo no número das internações hospitalares por câncer de colo uterino, podendo ser correlacionado às melhorias assistenciais e a consolidação do programa de rastreamento no período estudado. / Aracaju, SE

O carcinoma do colo uterino é um dos tumores mais freqüentes entre as mulheres e o principal fator de risco para o desenvolvimento desta neoplasia é a infecção persistente por tipos de papilomavírus humano (HPV) de alto risco oncogênico. Dentre estes, o HPV-16 é o mais comumente encontrado em lesões de alto grau e carcinoma. HPV cujas seqüências nucleotídicas diferem em até 2% são classificados como variantes de um mesmo tipo, e algumas destas variações genômicas levam a mudanças de aminoácidos em proteínas virais, em regiões potencialmente antigênicas. Além de variações antigênicas, o polimorfismo das moléculas HLA de classe II, responsáveis pela apresentação de antígenos às células T, também pode influenciar a resposta imune. Alguns estudos já descreveram associações entre alelos HLA e risco de câncer do colo do útero e infecção pelo HPV. Este projeto visa avaliar se existem diferenças na distribuição de alelos HLA entre pacientes com carcinoma do colo uterino portadoras de diferentes variantes de HPV-16 e mulheres sem câncer. Foram utilizados 112 casos de carcinoma do colo do útero positivos para presença de DNA de HPV-16 e 257 controles. Em todas as amostras do estudo foram realizadas as tipagens dos genes HLA-DRB1 e DQB1. A caracterização dos genes E6 e L1 de variantes de HPV-16 foi realizada nos 112 casos através de PCR-SSO e permitiu a identificação de infecções por uma única variante de HPV-16 em 89 amostras. Dentre elas foram encontradas variantes européias, asiático-americanas e africanas. A magnitude da associação entre os grupos HLA e as variantes de HPV-16 foi estimada através do cálculo de Odds Ratio e respectivo intervalo de confiança de 95%. Uma associação negativa entre DQB1*05 e câncer do colo do útero portadores de HPV-16 foi descrita anteriormente nesta amostra. Nosso estudo mostrou que esta associação pode ser atribuída as portadoras de variantes não-européias. A associação positiva de DRB1*15 mostrou ser maior entre portadoras de variantes européias que nãoeuropéias. Apesar do pequeno número de casos portadores de variantes africanas, foram encontradas associações positivas com DRB1*0701 e DQB1*0201. O polimorfismo da posição 350 do gene E6, descrito anteriormente como associado a risco de persistência de HPV, também foi avaliado: entre portadores de 350T, que codifica o aminoácido leucina, encontrou-se um efeito protetor dos alelos DRB1*04 e DQB1*0302. Uma maior freqüência de DRB1*15 foi observada entre portadores de variantes 350T quando comparada à freqüência nos controles. Nossos resultados sugerem que a associação entre alelos HLA de classe II e risco de câncer do colo do útero é influenciada pela distribuição de variantes de HPV-16 numa população determinada. / Cervical cancer is one of the most frequent tumor among women and the major risk factor for the development of this neoplasia is persistent infection with high risk oncogenic types of human papillomavirus (HPV). Among these, HPV-16 is the commonest type found in high grade lesions and carcinoma. HPV with less than 2% of divergence in nucleotide sequence are classified as variants of a given type, and these genomic variations can lead to changes in potentially antigenic regions. Besides these antigenic variations, polymorphism of HLA class li molecules, responsible for antigen presentation to T cells, can also influence the immune response. Several studies showed associations between HLA class II polymorphism and risk of cervical cancer and HPV infection. The aim of this study is to investigate if there are differences in the HLA class II alleles distribution between women with invasive cervical cancer (ICC) that harbor different HPV-16 variant and women without cancer. We analyzed 112 HPV-16 positive cases of cervical carcinoma and 257 controls. AII the samples had their HLA-DRB1 and DQB1 genes previously typed. HPV-16 variants in 112 ICC samples were characterized for E6 and L1 genes by PCR-SSO and allowed the identification of infections by single variants in 89 samples. European, Asian-American and African variants were found. The magnitude of association between HLA markers and HPV-16 variants was measured by Odds Ratios (OR) and respective 95% confidence intervals (CI). A negative association between DQB1*05 and HPV-16 positive ICC was previously described in this sample. Our study showed that it may be attributed to non-European variants carriers. The positive association of DRB1*15 was higher for women harboring European than non-European variants. In spite of the small number of women carrying African variants, positive association was found with DRB1*0701-DQB1*0201. The E6 gene polymorphism at residue 350, previously described as associated with risk of HPV persistence, was also investigated: among ICC carrying 350T, that code for leucine, we found a protective effect of DRB1*04-DQB1 *0302 haplotype. A higher frequency of DRB1*15 was found among carriers of 350T variants as compared to controls. Our results suggest that the association between HLA class II polymorphism and risk of invasive cervical cancer is influenced by the distribution of HPV-16 variants in a given population.

Orientador: Luiz Carlos Zeferino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T08:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_SabasCarlos_D.pdf: 1418388 bytes, checksum: 1d70cc451697cfbd93e48319a0284d4e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Objetivos: Avaliar a detecção do linfonodo sentinela em pacientes com câncer do colo do útero utilizando a combinação de azul patente com tecnécio99m e complicações associadas ao uso do azul patente. Sujeitos e métodos: Este foi um estudo de uma série de casos, para o qual foram selecionadas 56 mulheres com diagnóstico de câncer do colo do útero estádios Ia2,Ib1,Ib2 e IIa da FIGO, que se submeteram ao procedimento de identificação do linfonodo sentinela. O período de realização do estudo foi de maio de 2006 a dezembro de 2007. O estudo é apresentado em dois artigos: o primeiro consiste na detecção do linfonodo sentinela no câncer do colo do útero pela combinação do azul patente com tecnécio 99m e avalia a concordância entre a linfocintigrafia pré-operatória e o mapeamento linfático intra-operatório com o gama probe; o segundo consiste na avaliação das alterações da oximetria de pulso das pacientes submetidas à cirurgia após a injeção do azul patente. Resultados: No primeiro artigo identificou-se pelo menos um linfonodo sentinela em 83,13% das pacientes e a localização mais freqüente destes linfonodos foi na cadeia ilíaca externa. A sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo foram, respectivamente, 80%, 100%, 100% e 97,67% no histopatológico de congelação. Além disso, observou-se que linfocintigrafia pré operatória detecta um número consideravelmente menor de linfonodos sentinelas quando comparado ao mapeamento linfático intra-operatório com o gama probe. No segundo estudo observou-se que somente uma paciente apresentou reação anafilática. Treze pacientes apresentaram queda de oximetria de pulso (menor que 96% de saturação) após a injeção do azul patente no colo do útero, que durou em média cinco minutos e sem repercussões clínicas; essa queda se associou de forma limítrofe com tumores maiores e localizados ao redor do orifício externo do canal cervical. Conclusões: Concluiu-se que a combinação do azul patente com o tecnécio99m demonstrou excelentes resultados na detecção do linfonodo sentinela; a linfocintigrafia pré-operatória não oferece qualquer vantagem em relação ao mapeamento linfático intra-operatório com azul patente e tecnécio99m. Não houve repercussões clínicas devido à queda da oximetria de pulso e essas alterações se correlacionaram, embora com significância limítrofe, com tumores maiores e localizados ao redor do orifício cervical externo. / Abstract: Objectives: To evaluate sentinel lymph node detection in cervical cancer patients using a combination of patent blue dye and technetium99m and assess complications associated with the use of patent blue dye. Subjects and methods: This study investigated a case series that selected 56 women diagnosed with FIGO stage Ia2, Ib1, Ib2 and IIa cervical cancer who underwent a procedure for sentinel lymph node identification. The study was conducted from May 2006 to December 2007 and was described in two articles. The first article was about a study of sentinel lymph node detection in cervical cancer using a combination of patent blue dye and technetium99m. It assessed the agreement between preoperative lymphoscintigraphy and intraoperative lymphatic mapping with a gamma probe. The second article focused on the evaluation of changes in pulse oximetry readings in patients undergoing surgery after patent blue injection. Results: In the first article, at least one sentinel lymph node was identified in 83.13% of the patients and the most frequent site for finding sentinel lymph nodes was the external iliac chain. The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value were 80%, 100%, 100% and 97.67% respectively on histopathology examination of frozen biopsy. In addition, it was observed that preoperative lymphoscintigraphy detected a substantially lower number of sentinel lymph nodes when compared to intraoperative lymphatic mapping with a gamma probe. In the second study, only one patient presented with an anaphylactic reaction. Thirteen patients showed a decrease in pulse oximetry readings (less than 96% saturation) after patent blue injection into the cervix, which lasted an average of five minutes and had no clinical repercussions. There was a borderline association between this decline in oxygen saturation values and tumors that were larger and located around the external cervical os. Conclusions: It was concluded that a combination of patent blue dye and technetium99m demonstrated excellent results in the detection of sentinel lymph nodes. Preoperative lymphoscintigraphy offers no advantage in relation to intraoperative lymphatic mapping with patent blue dye and technetium99m. There were no clinical repercussions due to lower oxygen saturation values. These changes correlated with tumors that were larger and located around the external cervical os, although the significance of this correlation was borderline. / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

O câncer cervical é o segundo câncer mais comum entre as mulheres em todo o mundo. A infecção por Papilomavirus (HPV) do tipo oncogênico é causa necessária. Estudos internacionais sugerem importante papel de carotenóides e tocoferóis séricos e dietéticos na redução do risco para lesões precursoras, mas os resultados dos estudos prévios são inconsistentes. Indivíduos e métodos: O presente estudo de casos e controles de base hospitalar conduzido na cidade de São Paulo analisou a associação entre concentrações séricas de carotenóides (licopeno, β-caroteno), tocoferóis (α- e γ-), consumo alimentar e casos incidentes, com confirmação histopatológica, de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) graus 1,2,3 e câncer cervical. O estudo incluiu 453 mulheres do grupo controle (sem lesões de colo uterino) e 4 grupos de casos (NIC1, n=140; NIC2, n=126; NIC3, n=231; câncer cervical, n=108) recrutadas em dois hospitais públicos de referência entre 2003 e 2005. Resultados. A concentração sérica de licopeno foi inversamente associada à NIC1, NIC3 e câncer cervical com os seguintes Odds Ratio (OR) (intervalo de confiança de 95%), respectivamente: 0,53 (0,27-1,00; p de tendência=0,05); 0,48 (0,22-1,04; p de tendência=0,05) e 0,18 (0,06-0,52; p de tendência=0,002) quando comparado o maior com o menor tercil após ajuste por variáveis de confusão e grupos de HPV. O maior tercil de β-caroteno sérico foi inversamente associado ao câncer quando comparado ao menor: OR ajustado = 0,36 (0,13-1,03: p de tendência=0,04). Maiores concentrações de α- e γ-tocoferóis foram inversamente associadas a NIC3 com redução do risco em 50%, após ajuste por covariáveis e HPV. Maior tercil de consumo do grupo de folhas verde-escuras, legumes e frutas de cor alaranjada ou amarela escura foi inversamente associado ao risco para NIC3: OR ajustado comparado ao menor foi 0,52 (0,27-1,00; p de tendência=0,05). Conclusão: Os resultados do presente estudo sugerem que maiores concentrações séricas de antioxidantes e o consumo de alimentos ricos em carotenóides podem reduzir o risco para NIC3 e câncer cervical em mulheres brasileiras. / Cervical cancer is the second most common cancer in women worldwide. Human papillomavirus (HPV) infection has been recognized to be a necessary cause for cervical cancer. Serum concentrations and dietary carotenoids and tocopherols have been associated with the risk for cervical dysplasia, but results from previous studies were not consistent. Subjects and methods: In this hospital-based case-control study conducted in São Paulo city, Brazil, we evaluated the association of serum carotenoids (β-carotene, lycopene), tocopherols (α- and γ-), and dietary intakes with the risk of incident histologically confirmed cervical intraepithelial neoplasia (CIN) grades 1, 2, 3, and cervical cancer. The sample included 453 controls and four groups of cases (CIN1, n= 140; CIN2, n= 126; CIN3, n= 231; invasive cancer, n=108) recruited from two major public hospital-based clinics between 2003 and 2005. Results. Concentrations of serum lycopene were negatively associated with CIN1, CIN3 and cancer, with odds ratio (OR) (95% confidence interval) for the highest compared with the lowest tertile of 0.53 (0.27-1.00, p trend=0.05) for CIN1, 0.48 (0.22-1.04, p trend=0.05) for CIN2 and 0.18 (0.06-0.52, p trend= 0.002) for cervical cancer adjusted for confounding variables and HPV status. The adjusted OR for cancer of the highest versus the lowest tertile of serum β-carotene was 0.36 (0.13-1.03, p trend= 0.04). Increasing concentrations of serum α- and γ-tocopherols were associated with 50% decreasing risk of CIN3, for the women in the highest compared with the lowest quartile after adjusting for confounding variables and HPV. Increased dietary intakes of dark green and deep yellow vegetables and fruits were inversely associated with CIN3 among women in the highest compared to the lowest tertile (adjusted OR= 0.52, 95%CI = 0.27-1.00; p trend=0.05). Conclusion: These results support the evidence that high serum levels of antioxidants as well as dietary intakes may reduce the risk for CIN3 and invasive cancer in Brazilian women.

O carcinoma cervical invasivo é o terceiro tipo de câncer que mais acomete as mulheres no mundo, sendo responsável por 270 mil óbitos por ano. Estudos multicêntricos puderam identificar a presença do DNA do HPV em quase 100% dos carcinomas cervicais, estando já bem esclarecido que o papilomavírus humano (HPV) é causa para o câncer cervical, sendo fator necessário, mas não suficiente para o desenvolvimento da doença. A melhor forma de evitar o câncer de colo do útero é a prevenção. Considera-se como prevenção primária a vacina anti-HPV e, como prevenção secundária, o rastreio de lesões precursoras do câncer, seja pela citologia oncótica ou o rastreio molecular. Este último, por identificar a presença de DNA de HPV de alto risco oncogênico, tem se mostrado a maneira mais eficaz. Existem dúvidas sobre o melhor teste a ser usado para este tipo de rastreio, uma vez que existem ensaios distintos que identificam diferentes genes alvo, considerando-se que, durante o processo de integração do genoma do HPV ao genoma do hospedeiro, pode ocorrer a perda de qualquer um dos genes virais. Este pode ser um dos motivos de alguns tumores cervicais apresentarem resultados falsos negativos para HPV. Neste trabalho foram utilizadas 57 amostras de câncer cervical confirmadas no exame anatomopatológico, negativas para HPV na plataforma BD Onclarity HPV Assay(TM), cujo gene alvo é E6/E7 e positivas para beta-globina humana, provenientes de um estudo anterior. Usando o restante do DNA já extraído, essas amostras foram genotipadas no sistema INNO-LiPA HPV Genotyping Extra II(TM), que tem como alvo o gene L1. Como controle, foram testadas mais 27 amostras cujo resultado foi positivo para algum tipo de HPV de alto risco naquela plataforma. Para tanto, selecionamos a amostra seguinte a cada uma das amostras negativas, cujo resultado fosse positivo. Nosso principal achado foi a constatação de que a concordância entre os dois métodos testados é boa (Kappa 70). Das 84 amostras genotipadas nas duas plataformas, 64 (76,2%) tiveram os mesmos resultados, sendo 26 negativas, 15 inadequadas e 23 positivas. No entanto, 20 amostras (23,8%) tiveram resultados discordantes. Para tentar esclarecer estes casos, foi realizado o ensaio de PCR em tempo real para HPV 16 com alvo em E7 em 4 amostras positivas para HPV nos dois métodos e 2 amostras com resultado de HPV 16 apenas em um dos ensaios. Nenhum dos testes deste estudo pôde chegar a 100% de positividade nestes tumores cervicais, apesar da histologia realizada pelo setor de anatomia patológica do ICESP ter confirmado serem todos tumores primários do colo do útero. Assim sendo, sugerimos que esses resultados falsos negativos podem ser devidos a problemas na coleta do material, na preservação ou dificuldade dos métodos detectarem HPV em amostras fixadas em formol e embebidas em parafina, hipótese reforçada pela concordância obtida nos casos considerados inadequados para análise pelos dois métodos. / Invasive cervical carcinoma is the third most common form of cancer in the world, accounting for 270,000 deaths per year. Multicenter studies have identified the presence of HPV DNA in almost 100% of cervical carcinomas, and it is well established that human papillomavirus (HPV) is cause of cervical cancer, being necessary, but not sufficient to the development of the disease. The best way to avoid cervical cancer is prevention. Primary prevention is the anti-HPV vaccine, and secondary prevention the screening of cancer precursor lesions, by either oncotic cytology or molecular screening, to identify the presence of high-risk oncogenic HPV. There are questions as to which test should be used for this type of screening, since they use different target genes, knowing that during the integration of the HPV genome into the host genome, any of the viral genes can be deleted . This may be one reason some cervical tumors have false negative results for HPV. In this work, we evaluated 57 samples of cervical cancer, confirmed by anatomic pathological examination, negative for HPV on the BD Onclarity HPV Assay(TM) platform, whose target is the E6 / E7 gene and positive for beta-globin, from a previous study using the remaining extracted DNA. These samples were genotyped by the INNO-LiPA HPV Genotyping Extra system, with target in L1 gene. As controls, we tested another 27 samples that were positive for some type of high-risk HPV on that platform. To do so, we selected the following sample to each of the negative samples, whose result was positive. Our main finding was that the results of the two methods were in good concordance (Kappa 70). Of the 84 genotyped samples in both platforms, 64 (76.2%) had the same results, 26 were negative, 15 inadequate and 23 were positive. Twenty samples (23.8%), however, presented different results. In the attempt to clarify the discordant cases, we performed real-time PCR for HPV 16 with E7 target, in four HPV positive samples in both methods, and two positive in only one of the assays. None of the tests in this study could reach 100% positivity in these cervical tumors, although the histology performed by ICESP\'s pathology department has confirmed that they were all primary tumors of the cervix. Therefore, these false negative results may be due to problems in the sample collection, preservation or difficulty of the methods to detect HPV DNA in formalin-fixed and paraffin-embedded samples, a hypothesis reinforced by the agreement obtained in cases considered unsuitable for analysis by the two methods.

A prevenção do câncer do colo do útero (PCCU), ainda hoje, representa um sério problema de Saúde Pública. As razões para explicar este problema são as mais variadas, entre elas a própria organização da saúde pública, a organização dos serviços de saúde e a qualidade da assistência. Foi pensando nesta realidade que decidi analisar a percepção/ótica das mulheres atendidas nos Núcleos de Saúde da Família (NSF), da Área Básica da Distrital-Oeste/Sumarezinho do Município de Ribeirão Preto-SP, sobre as práticas de PCCU desenvolvidas nestes serviços. Foi utilizado como Referencial Teórico, as linhas filosóficas da Atenção Primária à Saúde (APS). Trata-se de uma pesquisa de abordagem qualitativa, do tipo exploratória e descritiva. Foram entrevistadas 14 mulheres. Utilizarei como instrumento de coleta de dados a entrevista semi-estruturada, procedendo à análise dos dados, orientados pela análise temática. A análise dos dados foi estruturada em três temas: Tema 1 - O Olhar da Mulher sobre o Processo Saúde-Doença (O Conceito do Processo Saúde e Doença, A Condição Atual de Saúde e A Resolução dos Problemas Pessoais/Família); Tema 2 - A Mulher e a Prevenção do Câncer do Colo do Útero (O Conceito da Prevenção de Doenças e da Prevenção do Câncer do Colo do Útero); Tema 3 - As Práticas de Prevenção do Câncer do Colo do Útero nos Núcleos de Saúde da Família (A Primeira Experiência de Realização do Exame Papanicolaou e as Dificuldades Permanentes Apresentadas pelas Mulheres Durante sua Realização, A Entrada da Mulher nos Núcleos de Saúde da Família, Caracterizando a Formação ou não do Vínculo e o Motivo da Realização da Prevenção do Câncer do Colo do Útero nos Núcleos de Saúde da Família, Os sentimentos/ A Orientação/ Os Resultados e a Assistência Profissional apresentada como Facilidades para as Mulheres no Momento da Realização do Exame Papanicolaou nos Núcleos de Saúde da Família, Dicas das Mulheres Entrevistadas sobre a Realização do Exame Papanicolaou para as Mulheres que nunca Realizaram). Percebi que a lógica da assistência da APS promovida pelos NSF apresentou potencialidades para a qualificação das práticas da PCCU. Meu primeiro pressuposto foi confirmado através das falas da maioria das mulheres. Também foi constatado que a maioria das mulheres envolvidas neste estudo apresentam um conceito holístico de saúde, tendo inclusive um conhecimento popular bastante elaborado do conceito de prevenção. Ao final do estudo percebi que as práticas de educação em saúde precisam ser reforçadas a partir da inclusão de toda equipe. Os NSF têm potencialidades para qualificar e controlar a prática da PCCU e promover maior integralidade das ações em saúde, utilizando o conhecimento da APS na motivação das mulheres quanto a promoção da sua saúde, de suas famílias, como também da comunidade na qual convivem, pois considero que a promoção da saúde se dá pelo autocuidado, pela ajuda mútua e pelas condições dos meios sociais, econômicos e culturais. / Until today, the prevention of Uterine Cervix Cancer represents a serious Public Health problem. There are several reasons for this, among which the organization of public health itself, the organization of health services and assistance quality can be mentioned. Considering this reality, my aimed at analyzing the perception/view of women assisted at the Family Health Centers of the Basic Area Distrital-Oeste/Sumarezinho in Ribeirão Preto, São Paulo concerning the prevention procedures of Uterine Cervix Cancer developed at these services. The philosophical lines of Primary Health Attention (PHA) were used as a Theoretical Framework. This research adopts a qualitative approach of the exploratory and descriptive kind. 14 women were interviewed. Semi-structured interview was used for data collection, proceeding to the data analysis in accordance with thematic analysis. Data analysis was structured in three themes: Theme 1 - Women's view on the Health/Illness Process (Meaning of the health and disease process, current health condition, and solution of personal/family problems) Theme 2 - Women and the Prevention of Uterine Cervix Cancer (Meaning of the Prevention of Diseases and the Prevention of Uterine Cervix Cancer), Theme 3 - Prevention Procedures of Uterine Cervix Cancer in the Family Health Strategy (First experience of doing the Pap smear and permanent difficulties presented by women while doing it, women's entry in the Family Health Centers (FHC) characterizing the creation of a commitment and the reason for realizing the prevention of the Uterine Cervix Cancer in the Family Health Strategy, Feelings/Orientation/Results and the professional care offered as facilities for women on doing the Pap smear at the FHC of the Basic Area Distrital- Oeste/Sumarezinho, Tips from women who were interviewed about doing the Pap smear for women who have never done it). I have observed that the PHA logic promoted by the FHC offered potential for the qualification of Uterine Cervix Cancer prevention procedures. My first premise was confirmed by most of the women's discourse. It was also verified that most of the women involved in this study present a holistic health concept, including a rather elaborate popular knowledge about the meaning of prevention. They also demonstrated to be acquainted with the promotion of their own health, that of their families and the community they live in, displaying autonomy, since the "FHC" possess strong instruments for motivating them, although the health education issues in these services need to be reinforced, starting from the inclusion of every family health team in Uterine Cervix Cancer prevention practices, improving care quality and greater integrality of health actions.

O HPV (Papilomavírus Humano) causa verrugas anogenitais e alguns tipos de câncer, como o câncer de colo do útero. Seu capsídeo é composto pelas proteínas L1 e L2. A L1 se autoestrutura em VLPs, utilizadas nas atuais vacinas comerciais. Para a geração de vacinas com maior espectro de proteção, a L2 é promissora, pois gera proteção cruzada. Para caracterizar VLPs de L1L2 do HPV16, células HEK293T cotransfectadas tiveram a expressão proteica analisada por citometria de fluxo, Western blotting, microscopia confocal a laser e eletrônica de transmissão. As proteínas L1 (60kDa) e L2 (100kDa) estavam presentes no núcleo e no citoplasma celular, formando VLPs de L1L2 de conformação heterogênea, cuja máxima expressão ocorre 12h após a transfecção. As VLPs extraídas estavam em diferentes estágios de estruturação. Foi possível estabelecer um sistema eficaz de produção heteróloga das proteínas de VLPs de L1L2, que poderão ser utilizadas em testes pré-clínicos, na pesquisa básica e contribuir no desenvolvimento de uma vacina profilática de amplo espectro de ação contra o HPV. / HPV (Human Papillomavirus) is the causative agent of anogenital warts and several types of cancer, as cervical cancer. The HPV capsid is composed of L1 and L2 proteins. L1 can self-assemble into VLPs (virus-like particles), the basis for HPV commercially available vaccines. To generate broad-spectrum vaccines L2 shows the greatest promise, due to cross-protection. To characterize VLPs composed of HPV16 L1 and L2 proteins, cotransfected HEK293T cells were analyzed by flow cytometry, confocal laser scanning microscopy, transmission electron microscopy and Western blotting. Proteins L1 (60kDa) and L2 (100kDa) were present in cell nucleus and cytoplasm, forming heterologous L1L2 VLPs with highest expression at 12h post-transfection. Extracted VLPs were at different maturation stages. It was possible to establish an efficient system of heterologous L1, L2 and L1L2 VLPs production. After some adjustments in protocols, these particles could be used in preclinical tests, HPV basic research and also in the development of an HPV broad-spectrum vaccine.

A infecção por tipos de HPV de alto risco oncogênico é o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma do colo uterino, uma das neoplasias mais frequentes em mulheres de todo o mundo. Este grupo de vírus também está associados a uma proporção importante de outros cânceres anogenitais e de tumores de cabeça e pescoço. Os HPVs de alto risco expressam duas oncoproteínas, E6 e E7, que agem sobre fatores celulares específicos alterando diferentes vias de vinalização. A oncoproteína E6 é capaz de unir-se à proteína supressora de tumor p53, alterar a sua capacidade funcional e promover sua degradação pela via de proteólise dependente de ubiquitina. Mais ainda, a interação da proteína E6 com várias proteínas celulares por exemplo, E6AP, TNFR1, Bak e caspase 8 confere resistência a apoptose; hADA3, p300, CARM1 e SET7 a remodulação da cromatina; NFX1-91 a ativação da telomerase; STAT-1 e TLR-9 a evasão imune, ATR, BCRA1, MCM7, MGMT. XRCC1 a estabilidade genômica; DLG1, MAGI1-3, SCRIBBLE, paxilina e fibulina a perda de polaridade celular e indução de hiperplasia. No entanto, as consequências de muitas dessas interações não têm sido bem estudadas em queratinócitos primários humanos, a célula alvo natural do HPV. No presente estudo analizamos o efeito da proteína E6 de HPV16 (alto risco) e HPV11 (baixo risco) na expressão e na atividade de fatores envolvidos na regulação/execução de apoptose induzida pelas citocinas TNF e TRAIL e pelo quimioterápico Rapamicina. Através de ensaios de proliferação/viabilidade observamos que as células que expressam E6 de ambos os tipos virais apresentam resistência às citocinas e à rapamicina, quando comparadas a culturas controle. Além disso, observamos que as células que expressam E6 apresentam diferenças no padrão de expressão de proteínas envolvidas na regulação das vias extrínseca e intrínseca da apoptose. / The infection with oncogenic HPV types is the main risk factor for the development of cervical cancer, one of the most common malignancies in women worldwide. This group of viruses is also associated with a significant proportion of other anogenital cancer and head and neck tumor. High-risk HPV express two oncoproteins, E6 and E7, which act on specific cellular factors altering difefferent signaling pathways. For instance E6 oncoprotein is able to bind the p53 tumor suppressor protein and promote its degradation by the ubiquitin dependent proteolysis pathway. Furthermore, the interaction of E6 with various cellular proteins for example, E6AP, TNFR1, caspase 8 Bak and confers resistance to apoptosis; hADA3, p300, and CARM1 SET7 the reshaping of chromatin; NFX1-91 telomerase activation; STAT-1 and TLR-9 immune evasion, ATR, BCRA1, MCM7, MGMT. XRCC1 genomic stability; Dlg1, MAGI1-3, scribble, paxillin and fibulin loss of cell polarity and hyperplasia of induction. In the present study we analyzed the effect of the E6 protein of HPV (highrisk) and HPV11 (low-risk) on the expression and activity of factors involved in the regulation/execution of apoptosis induced by the cytokines TNF and TRAIL and the chemotherapeutic agent Ramaycin. Using proliferation/viability assays we observed that cells expressing E6 from either viral cytokines and Rapamycin when compared with control cells. Besides, we observed that cells expressing E6 exhibit differences in the expression pattern of protein involved in the regulation of apoptosis extrinsic and intrinsic pathways.