Os isolados Streptomyces sp. R18(6) e 6(4) foram avaliados quanto à sua capacidade de controlar a mancha marrom e podridão comum de raiz, causados por Bipolaris sorokiniana em plantas de trigo. A atividade antifúngica desses isolados foi testada usando os ensaios de dupla camada e pareamento de cultura à 28°C. A atividade fisiológica e enzimática foi avaliada através de ensaios de sideróforo, ácido indol-3-acético, fixação de nitrogênio e solubilização de fosfato. O controle biológico da doença e a eficiência de crescimento das plantas de trigo foram avaliados utilizando ensaios in vivo em casa de vegetação. Nos ensaios de pareamento de cultura, ambos os isolados inibiram o crescimento micelial de B. sorokiniana, enquanto na dupla camada apenas o isolado R18(6) inibiu. Streptomyces sp. 6(4) produziu auxina, sideróforos, fixou nitrogênio e solubilizou fosfato, enquanto R18(6) não produziu sideróforos. Nos ensaios em casa de vegetação, o isolado R18(6) mostrou diferenças estatísticas na massa seca da parte aérea e na massa seca de raiz em comparação com a do isolado 6(4) na presença do fitopatógeno (P≤0,05). Estes resultados foram mais evidentes quando a temperatura foi maior. Na ausência do fitopatógeno, o isolado 6(4) aumentou a massa seca de raiz em comparação com a do controle durante o mesmo período. Portanto, esses isolados apresentaram potencial em controlar a podridão das raízes e mancha marrom e podem promover o crescimento das plantas de trigo. / Streptomyces sp. R18(6) and 6(4) strains were evaluated for their ability to control brown spot and common root rot caused by Bipolaris sorokiniana in wheat crops. The antifungal activity of these isolates was tested using a doublelayer assay and culture pairing at 28 °C. Physiological and enzymatic activity were evaluated through siderophore, indole-3-acetic acid, nitrogen fixation and phosphate solubilization assays. The biocontrol of the disease and growthpromoting efficiency of wheat seedlings were assessed using in vivo assays in greenhouse. In the culture pairing assays, both strains inhibited B. sorokiniana mycelial growth, while in the double-layer only R18(6). Streptomyces sp. 6(4) produced auxin, siderophores, fixed nitrogen and solubilized phosphate, whereas R18(6) did not produce siderophores. In the greenhouse assays, strain R18 (6) showed statistical differences in shoot dry mass and root dry mass compared with those of strain 6(4) in the presence of the phytopathogen (P ≤ 0.05). These results were more evident when the temperature was higher. In the absence of the phytopathogen, strain 6(4) increased the root dry mass compared with that of the control during the same period. Therefore, these isolates can potentially control root rot and brown spotting and may promote the growth of wheat plants.

Os campos de arroz irrigado são ambientes propícios para a geração de uma alta biodiversidade já que estão circundados por habitats aquáticos e terrestres. Os insetos praga ocorrem em áreas de produção do arroz em todo o mundo, principalmente nos sistemas de plantio irrigado e de planícies pluviais, que apresentam temperatura e umidade favorável à proliferação dos mesmos. Dentre os inimigos naturais que atuam sobre populações de insetos praga no arroz, destacam-se os parasitoides. Visando compreender a dinâmica espaço-temporal destes insetos, os objetivos desse trabalho foram descrever e comparar assembleias de parasitoides em áreas de cultivo de arroz irrigado, mantidas no sistema orgânico de produção, sob dois manejos da vegetação das taipas e relacioná-los com os estádios fenológicos da cultura (plântula, vegetativo e reprodutivo) e na pós-colheita. As amostragens foram realizadas em cultivo localizado no Assentamento “Filhos de Sepé”, no distrito de Águas Claras, município de Viamão, RS. A área total de 18 ha foi subdividida em duas. Numa subárea, denominada não roçada (NR) a vegetação espontânea das taipas foi mantida, na outra, roçada (R), foram feitas roçadas mensais das taipas, desde o início do preparo da área para o plantio, até a colheita. Em cada subárea foram escolhidos dois quadros onde foram instaladas as armadilhas do tipo Malaise, quatro armadilhas por subárea. As coletas quinzenais ocorreram a partir do plantio do arroz, no final do mês de outubro de 2012, até a colheita, março de 2013. As armadilhas permaneciam montadas no campo, a cada ocasião de amostragem, por 24 horas. Foram coletados 3.184 himenópteros parasitoides, 2.038 indivíduos na subárea NR e 1.146 na R. Foram identificadas 458 morfoespécies, distribuídas em 24 famílias. Mymaridae se mostrou a família mais abundante e Eulophidae, a mais rica para ambas as subáreas. A curva de rarefação, plotando o número de morfoespécies registradas em relação ao número de indivíduos coletados, indica que a NR possui uma maior riqueza que a R. Das morfoespécies identificadas, 198 foram compartilhadas entre as subáreas, 203 exclusivas da NR e, 57 da R. As famílias com o maior número de espécies compartilhadas foram Platygastridae, Eulophidae e Mymaridae. A riqueza e a abundância de parasitoides variaram conforme os estádios fenológicos da cultura sendo o pico de abundância registrado no período vegetativo. O Índice de Morisita identificou três grupamentos indicando uma similaridade relacionada às fases da cultura, plântula, vegetativo e, na pós-colheita. Isso se deve à grande quantidade de morfoespécies compartilhadas entre as subáreas em cada fase. As maiores diferenças ocorrem no período reprodutivo, possivelmente devido a grande diferença entre a riqueza da subárea NR em relação à R. / Irrigated rice fields are ideal environments for generating high biodiversity, since they are surrounded by aquatic and terrestrial habitats. Pest insects occur in areas of rice production throughout the world, principally in irrigated plantation systems and in floodplains, which present temperature and humidity levels that favor their proliferation. Among the natural enemies that act upon populations of pest insects in rice fields, parasitoids are especially notable. To better understand the space-time dynamics of these insects, the objectives of this study were to describe and compare groups of parasitoids in irrigated rice field, with organic management using two different systems of leeves vegetation management, and relate them to the phenological stages of rice cultivation (seedling, vegetative, and reproductive) and in postharvest. The samples were taken in a plantation located on the “Filhos de Sepé” settlement in Águas Claras district, Viamão, RS. The total area of 18 ha was divided into two parts, a no-cut (NC) subarea and a cut (C) subarea. In the NC subarea, the spontaneous vegetation of the leeves was maintained, while in the C subarea, monthly cuts were made in the leeves vegetation, from the beginning of soil preparation until the harvest. In each subarea, four Malaise traps were installed. Collections occurred from the beginning of cultivation, at the end of October 2012, until harvest, in March 2013, twice a month. The traps remained assembled in the field for 24 hours at each sampling. A total of 3,184 Hymenoptera parasitoids were collected: 2,038 individuals in NC and 1,146 in C. We identified 488 morphospecies, distributed in 24 families. Mymaridae was the most abundant family and Eulophidae was the richest in both subareas. The rarefaction curve, plotting the number of morphospecies registered in relation to the number of individuals collected, indicates that NC possesses a greater richness than C. Of the identified morphospecies, 198 were overlaped between the subareas, while 203 were exclusive to NC and 57 to C. The families with the largest number of shared species were Platygastridae, Eulophidae e Mymaridae. The richness and abundance of parasitoids varied according to the phenological states of development, with the peak abundance registering in the vegetative period. The Morisita index identified three groupings, indicating a similarity relative to the three phases of rice growth and development: seedling, vegetative, and post-harvest. This is due to the large quantity of morphospecies overlaped between the subareas in each phase. The greatest differences occurred during the reproductive period, possibly due to the large difference between the richness of NC in relation to C.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-03-02T15:53:54Z No. of bitstreams: 1 2014_RogerioFragaTroian.pdf: 2051913 bytes, checksum: 688f2fa3ab11ec4a869120485225cb20 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-03-04T17:31:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RogerioFragaTroian.pdf: 2051913 bytes, checksum: 688f2fa3ab11ec4a869120485225cb20 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T17:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RogerioFragaTroian.pdf: 2051913 bytes, checksum: 688f2fa3ab11ec4a869120485225cb20 (MD5) / Trichoderma harzianum tem recebido considerável atenção como potencial agente de controle biológico, agindo como um micoparasita contra diversos fitopatógenos habitantes do solo, incluindo Sclerotinia sclerotiorum. O objetivo deste estudo foi vizualizar por microscopia eletrônica de varredura (MEV), a interação entre T. harzianum e S. sclerotiorum, assim como mapear e identificar as proteínas secretadas por T. harzianum quando cultivado na presença de parede celular, apotécio e escleródio de S. sclerotiorum. Nos testes de interação por MEV, T. harzianum provou ser um potente antagonista de S. sclerotiorum, mostrando que as hifas do antagonista penetraram nas estruturas do fitopatógeno. Posteriomente foram construídos os mapas bidimensionais permitindo a visualização das diferentes proteínas secretadas de T. harzianum quando cultivadas na presença de diferentes etapas da vida de S. sclerotiorum sendo que um total de 139 spots foram analisados, e destes foram identificados 63. Das proteínas identificadas no secretoma 5 são exclusivas quando cultivadas em meio contendo apotécio, 9 em meio contendo escleródio e 4 contendo parede celular sendo 11 proteínas expressas nas 3 condições. A expressão dos genes foi feita usando PCR em tempo real a partir de RNA total de T. harzianum quando cultivadas na presença das três fases do ciclo de vida S. sclerotiorum (micélio, escleródios e apotécio) confirmando as proteínas secretadas. Nossos resultados fornecem um passo para a compreensão do processo de micoparasitismo entre T. harzianum durante sua interação com S.sclerotiorum permitindo a identificação das diferentes proteínas secretadas quando cultivadas com as fases do ciclo de vida desse fitopatógeno. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trichoderma harzianum has received considerable attention as a potential biological control agent, acting as a mycoparasite against several soilborne plant pathogens including Sclerotinia sclerotiorum. The objective of this study was to visualize electron microscopy (SEM), the interaction between T. harzianum and S. sclerotiorum as well as map and identify the proteins secreted by T. harzianum when grown in the presence of cell wall, and sclerotia of apothecium S. sclerotiorum. In MEV interaction tests, T. harzianum proved to be a potent antagonist of S. sclerotiorum, showing that antagonist hyphae penetrated pathogen structures. After dimensional maps were constructed allowing the visualization of the different secreted proteins from T. harzianum when cultured in the presence of different stages of the life of S. sclerotiorum with a total of 139 spots were analyzed and identified 63. Of these proteins identified in secretome 5 are unique when grown in medium containing apothecium, 9 in medium containing sclerotia and 4 containing cell wall being 11 proteins expressed in the 3 conditions. Expression of the gene was done using real-time PCR from total RNA of T. harzianum when cultured in the presence of the three phases of the lifecycle S. sclerotiorum (mycelium and sclerotia apothecium) confirming secreted proteins. Our results provide a step towards understanding the mycoparasitism process between T. harzianum during their interaction with S.sclerotiorum allowing the identification of various secreted proteins when grown with the phases of the life of this pathogen cycle.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-04-27T18:35:44Z No. of bitstreams: 1 2015_CarlaFerreiraCaixeta.pdf: 1703488 bytes, checksum: 06b95239b227b538dedfd0b672d5f26e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-04T12:11:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CarlaFerreiraCaixeta.pdf: 1703488 bytes, checksum: 06b95239b227b538dedfd0b672d5f26e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-04T12:11:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_CarlaFerreiraCaixeta.pdf: 1703488 bytes, checksum: 06b95239b227b538dedfd0b672d5f26e (MD5) / Helicoverpa armigera (Hübner, 1808) (Lepidoptera: Noctuidae) é uma espécie extremamente polífaga, se alimenta das mais diferentes culturas de interesse econômico e tem grande adaptabilidade às várias condições climáticas consideradas uma praga de importância. Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria cosmopolita que expressa diversas proteínas durante seus estágios de crescimento que possuem atividade entomopatogênica, podendo atuar como importante agente de controle biológico, além de ser capaz de colonizar o interior das plantas promovendo o seu crescimento. Com a necessidade de se conhecer cada vez mais e explorar as potencialidades deste microrganismo o estudo objetivou selecionar 100 estirpes de Bacillus thuringiensis com toxicidade para Helicoverpa armigera e potencial para promoção de crescimento vegetal. Das estirpes avaliadas 23 apresentaram 100% de mortalidade para H. armigera, sendo quinze pertencentes às subsp. kurstaki, aizawai, tolworthi, fokuokaensis, sotto, morrisoni, thuringiensis e oito não sorotipadas. As estirpes apresentam perfil proteíco de 130 e 65 kDa, sendo que algumas apresentaram apenas uma das proteínas e fragmentos de DNA de tamanho esperado para a detecção dos genes cry1 e cry2. Na detecção da capacidade de promoção de crescimento in vitro, nenhuma estirpe apresentou a capacidade de produção de sideróforos, solubilização de fosfatos e fixação biológica de nitrogênio. Na produção de AIA todas as estirpes foram positivas e a quantidade variou de 1,17 μg mL-1 (estirpe S93) a 7,44 μg mL-1 (estirpe S1983). Das 100 estirpes analisadas 45 apresentaram amplicons esperados para todos os genes avaliados, sendo que 71 estirpes apresentaram amplicons de tamanhos esperados para o gene fosfatase ácida, 57 foram positivos para os genes sideróforos. Os genes envolvidos nas rotas de biossíntese do hormônio AIA se mostraram mais frequentes em estirpes de Bt, sendo que das estirpes analisadas 91 foram positivos para a presença do gene ipdC, 97 para o genes iam1 e 93 para o gene iam2. B. thuringiensis pode ser utilizado no controle de H. armigera e possui potencial como inoculante para a promoção de crescimento vegetal, abrindo novas perspectivas para o uso agronômico. / Helicoverpa armigera (Hübner, 1808) (Lepidoptera: Noctuidae) is an extremely polyphagous species, feeding from different types of crops with economic importance and has great adaptability to various climatic conditions, considered an important pest. Bacillus thuringiensis is a cosmopolitan bacteria that express different proteins during their growth stages with entomopathogenic activity, and may act as an important biological control agent, besides being capable to colonize the interior of plants, promoting its growth. To know more and explore the potentials of this microorganism, the aimed of this work to select 100 strain of Bacillus thuringiensis wich toxicity to Helicoverpa armigera and potential for plant growth promotion. 23 strains showed 100% the mortality against H. armigera, of which fifteen belonged to subsp. kurstaki, aizawai, tolworthi, fokuokaensis, sotto, morrisoni, thuringiensis and eight without serotype. Some strains exhibited the profile of 130 and 65kDa, other showed just one of the proteins and the amplicons with the expected size of cry1 and cry2 gene. In vitro detection of growth promotion capability, showed that no strain had the siderophore production capability, phosphate solubiliation and biological fixation of nitrogen. All strains tested were capable of produce IAA, and the amount varied from 1,17 μg mL-1 (S93 strain) to 7,44 μg mL-1 (1983 strain). 45 of the 100 analyzed strains showed the expected amplicons for all the studied genes, 71 strains showed the expected amplicon size for the acid phosphatase gene, 57 were positive for siderophore gene. The genes involved in the biosynthesis of IAA hormone were more frequents in Bt strains, 91 strains were positive for the presence of ipdC gene, 97 were positive for iam1 gene, and 93 for iam2 gene. B thuringiensis can be used in biological control against H. armigera and has a great potencial to promote plant growth, creating new perspectives for agronomic use.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-04T23:59:50Z No. of bitstreams: 1 2012_CristinaLimadeMacedo.pdf: 1092613 bytes, checksum: d4d04d70cd2cf8f4d1fa3dec41b22ff7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-05T17:53:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CristinaLimadeMacedo.pdf: 1092613 bytes, checksum: d4d04d70cd2cf8f4d1fa3dec41b22ff7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-05T17:53:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CristinaLimadeMacedo.pdf: 1092613 bytes, checksum: d4d04d70cd2cf8f4d1fa3dec41b22ff7 (MD5) / Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794; Lepidoptera: Crambidae) é responsável por perdas econômicas nas lavouras afetando a cultura e o aproveitamento industrial da cana-de-açúcar. Seu hábito alimentar gera dificuldade no seu controle causando impactos à cultura canavieira. O desenvolvimento de novas estratégias para o seu controle de extrema importância. Uma alternativa para o controle desses insetos é a utilização de agentes de controle biológico, como Bacillus thuringiensis (Bt), pois esta bactéria sintetiza diferentes proteínas tóxicas a muitas pragas. Este estudo teve como objetivo, selecionar 106 estirpes da coleção de Bactérias de Invertebrados da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia tóxicas à broca-da-cana. As estirpes selecionadas foram caracterizadas por métodos bioquímicos, moleculares e a ligação das toxinas aos receptores presentes no intestino médio das larvas de D. saccharalis foi analisada. Foram selecionadas três estirpes de B. thuringiensis, denominadas S602, S1264 e S1301, que apresentaram atividade contra D. saccharalis. A caracterização do perfil protéico revelou a presença de proteínas de 130 e 65 kDa, que correspondem às toxinas Cry1 e Cry2, respectivamente. A caracterização molecular mostrou a existência dos genes cry1 e cry2, corroborando com os resultados mostrados no perfil protéico. As proteínas Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac e Cry2Aa expressas individualmente por estirpes de Bt foram purificadas, solubilizadas, ativadas com tripsina e biotiniladas para a realização de ensaios de ligação para a observação da ligação da proteína à microvilosidades do intestino do inseto. A CL50 das proteínas Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa variou entre 222 e 610 ng/cm2. As mesmas apresentaram resultados de toxicidade significativamente semelhantes. As estirpes tóxicas selecionadas neste trabalho e o padrão apresentaram CL50 entre 8 e 43 ng/cm2 bastante inferior e significativamente diferente do das toxinas puras, indicando haver sinergismo entre as toxinas. Os resultados dos ensaios de ligação aos receptores de membrana intestinais mostraram, pela primeira vez, as interações existentes entre as toxinas e os receptores, confirmando o potencial tóxico destas proteínas à D. saccharalis. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794; Lepidoptera: Crambidae) is responsible for great economic losses in crops affecting the culture and the industrial utilization of sugarcane. There eating habits make harder the control by conventional tools causing impacts to sugarcane crops. The development of new strategies for its control is extremely important. An alternative for the control of this insects is the use of biological control agents such as Bacillus thuringiensis (Bt), based on the action of many different proteins synthesized by the bacteria which are active against insects orders. This study aimed to selective strains from collection of Bt in Embrapa Genetic Resources and Biotechnology toxic to the sugarcane borer, D. saccharalis. The strains selected were characterized by biochemical and molecular methods, and the binding assays of the toxins to midgut cell receptors of D. saccharalis were analysed. We selected three strains of B. thuringiensis, named S602, S1264 and S1301, which showed activity against D. saccharalis. Characterization of protein profiles revealed the presence of proteins of 130 and 65 kDa, corresponding to toxins Cry1 and Cry2, respectively. The molecular characterization showed the presence of cry1 and cry2 genes, confirming the results shown in the protein profile. Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac and Cry2Aa proteins were expressed individually by strains of Bt. The proteins were purified, solubilized, biotinylated and activated with trypsin for performing binding assays for the observation of protein binding to the microvilli of the insect gut. The CL50 of the proteins Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac and Cry2Aa showed variation between 222 and 610 ng/cm2. They have presented in the dose bioassay (LC50) Cry toxins showed no significant differences toxic results. The toxic strains selected at this work and standard showed LC50 between 8 and 43 ng/cm2 values inferior and significant different to the pure toxins, showed existence of synergism between toxins. The results of binding assays done with BBMV’s (Brush-Border Membrane Vesicle) of D. saccharalis, showed for the first time, the interactions between receptors and toxins, confirming the potential toxic effects of these proteins to D. saccharalis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by Luana Patrícia de Oliveira Porto (luana_porto_23@hotmail.com) on 2009-12-17T13:14:43Z No. of bitstreams: 1 2006_Irene Martins.pdf: 1971471 bytes, checksum: e0742738003bdef938c8513d92b0e6b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2009-12-17T21:32:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Irene Martins.pdf: 1971471 bytes, checksum: e0742738003bdef938c8513d92b0e6b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-17T21:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Irene Martins.pdf: 1971471 bytes, checksum: e0742738003bdef938c8513d92b0e6b6 (MD5) Previous issue date: 2006-04 / Diante da importância da cultura do maracujazeiro, que confere ao Brasil a posição de principal produtor mundial, o presente trabalho teve como objetivos avaliar a reação de progênies de maracujazeiro-azedo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) ao fungo Colletotrichum gloeosporioides (Penzig) Saccardo e avaliar isolados de Trichoderma spp. como agentes de biocontrole da antracnose. Visando a facilitar a produção de inóculo em quantidade suficiente para a realização dos ensaios, foram conduzidos, ainda, experimentos utilizando método de fermentação líquida, com quatro isolados do fungo. O trabalho foi desenvolvido no Setor de Fitopatologia da Estação Biológica da Universidade de Brasília e no Laboratório de Fitopatologia do Núcleo Temático de Controle Biológico (NTCB) da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia - CENARGEN no ano de 2005. Três isolados de C. gloeosporioides utilizados neste estudo (CEN 419, CEN 421 e CEN 433) foram obtidos a partir de amostras de folhas e frutos coletadas em supermercados e pomares do Distrito Federal (DF), enquanto um (CEN 422) foi gentilmente cedido pela UFRPE. Os isolados de Trichoderma são pertencentes à Coleção de Fungos para Controle Biológico de Fitopatógenos do CENARGEN. Os isolados C. gloeosporioides foram previamente avaliados quanto a patogenicidade, utilizando as progênies suscetíveis Yellow Master FB-100 e MAR#20-13, selecionando-se o isolado CEN 419 para uso em todos os experimentos. No primeiro experimento foram avaliadas 72 progênies de maracujazeiro-azedo quanto à resistência à antracnose, em casa-de-vegetação. Utilizou-se o delineamento em blocos casualizados, com quatro repetições e seis plantas por parcelas subdivididas. O patógeno foi cultivado em meio líquido e, os esporos coletados por centrifugação, foram usados no preparo de uma suspensão aquosa à concentração de 5 x 106 esporos/mL, a qual foi aspergida sobre ferimentos pré-estabelecidos com auxílio de escovas de aço de cerdas finas. As plantas, após a inoculação, foram mantidas sob temperatura entre 10 - 30°C e umidade de 60 -100% e avaliadas quanto à severidade (nota) e incidência (%) da doença aos 20 dias e, posteriormente, a intervalos de sete dias. Houve diferenças significativas entre as progênies na incidência de C. gloeosporioides ao longo das sete avaliações realizadas. No segundo experimento, avaliou-se o potencial antagônico de 20 isolados de Trichoderma spp. sobre o fungo C. gloeosporioides in vitro, selecionando-se nove isolados para testes in vivo. Nos testes realizados in vitro, utilizaram-se os métodos de cultivo pareado e de produção de metabólitos difusíveis, todos os isolados inibiram o crescimento do patógeno. Em casa-de-vegetação, o experimento foi disposto em blocos casualizados, com quatro repetições, sendo a repetição constituída de quatro sacos de polietileno (1, 5kg) num total de oito plantas por parcela. Neste ensaio foram usados 10 isolados de Trichoderma, quatro períodos distintos de inoculação, três épocas de avaliações e mais três testemunhas traduzido em arranjo fatorial 10 x 4 x 3 + 3. A eficiência dos isolados de Trichoderma para o controle da antracnose, foi testada nos seguintes períodos de inoculação: P1 = Trichoderma inoculado 24 horas antes do patógeno; P2 = Trichoderma inoculado 24 horas depois; P3 = Trichoderma inoculado simultaneamente com o patógeno; P4 = Trichoderma inoculado sete dias depois do patógeno e como controle, P5 = apenas Trichoderma; P6 = apenas Colletotrichum e P7 = apenas água destilada. Realizaram-se três avaliações, a primeira aos 12 dias após a inoculação e as demais, a intervalos de 12 dias. Avaliou-se, ainda, a ação dos isolados de Trichoderma sobre a massa fresca e seca da parte aérea e das raízes. O Período de aplicação simultânea foi onde se obteve maior índice de controle da antracnose. O isolado CEN 143 quando aplicado 24 horas depois do Colletotrichum e simultaneamente e os isolados CEN 151, CEN 280 e CEN 279 quando aplicados simultaneamente ao patógeno, proporcionaram os menores valores de severidade da antracnose em mudas de maracujazeiro-azedo. Com relação às testemunhas, observou-se que nas parcelas tratadas com o isolado CEN 151, houve um incremento no peso fresco da parte aérea. No terceiro experimento, foram realizados dois ensaios para avaliar o crescimento micelial e a esporulação de isolados C. gloeosporioides em meios líquidos. No primeiro, observou-se o comportamento de quatro isolados do fungo C. gloeosporioides, quanto ao crescimento e esporulação em diferentes meios líquidos. Cada tratamento foi repetido quatro vezes, em delineamento inteiramente casualizado, sendo o primeiro em esquema fatorial 4x3 (4 isolados e 3 meios) e segundo em esquema simples. Houve interação entre os meios e isolados na produção, tanto de conídios quanto de biomassa seca. Os isolados com maior produção de conídios foram CEN 419 e CEN 422, em meio de batata-dextrose (BD). Quanto ao rendimento de biomassa seca, também houve diferenças significativas entre meios, dependendo de isolado. No segundo ensaio, o desenvolvimento do isolado CEN 419 foi avaliado mediante 10 concentrações diferentes de extrato de levedura incorporadas ao meio BD. Houve diferença significativa para produção de biomassa seca, quanto à produção de conídios houve diferença significativa apenas entre os tratamentos 1 (BD) e 5 (0,4% extrato de levedura). _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Given the importance of the passion fruit crop, where Brazil is the leading world producer, the present work had the objective to evaluate the reaction of lineages of Sour Passionfruit (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) to the fungus Colletotrichum gloeosporioides (Penzig) Saccardo, and to evaluate isolates of Trichoderma spp. as biocontrol agents of anthracnose. With the aim of producing inoculum in sufficient quantities for the assays, experiments were performed, using liquid fermentation, with four isolates of the fungus. The work was developed in the Phytopathology section of the Biological Station of the University of Brasilia and in the Phytopathology Laboratory of the Biological Control Department of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology Center - CENARGEN in 2005. Three isolates of C. gloeosporioides were used in this study (CEN 419, CEN 421 and CEN 433) which were originally obtained from leaves and fruits, collected in supermarkets and orchards in Federal District (DF), while one (CEN 422) was kindly donated by UFRPE. The isolates of Trichoderma were obtained from the Collection of Fungi for Biological Control of Phytopathogens at CENARGEN. The C. gloeosporioides isolates had been previously evaluated in their pathogenicity using the susceptible lineages Yellow Master FB- 100 and MAR#20-13, while the isolate CEN419, was selected for using in all experiments. In the first experiment, 72 lineages of sour passionfruit were evaluated for their resistance to anthracnose, in the greenhouse. A randomized-block design was used, with four replicates and six plants for each replicate. The pathogen was cultivated in liquid medium and the spores later collected by centrifugation. Aqueous suspensions were then prepared at 5 x 106 spores/ml which were applied to wounds previously established by abrasion with fine steel wire brushes. The inoculated plants were kept at 60 -100% humidity and evaluated as to the severity and incidence of disease 20 days and again, at intervals of 7 days. The lineages showed significant differences in their susceptibility to C. gloeosporioides in the seven evaluations. In a second experiment, the antagonistic potential of 20 Trichoderma spp. isolates against C. gloeosporioides was evaluated, in vitro and in vivo. In tests of diffusible metabolites and in plate confrontations, all the Trichoderma isolates inhibited the growth of the pathogen. The in vivo experiment was carried out in the greenhouse using a randomized block design, with 4 repetitions, whe re a repetition cons isted of 4 polyethylene bags (1.5kg) with 2 plants per bag, with a total of 8 plants per block. Four different periods of application of the isolates of Trichoderma for the control of anthracnose were tested: P1 = inoculated with Trichoderma 24 hours before the pathogen; P2 = inoculated with Trichoderma 24 hours after the pathogen; P3 = Trichoderma inoculated simultaneously with the pathogen; P4 = Trichoderma inoculated seven days after the pathogen and as control treatments; P5 = Trichoderma only; P6 = Colletotrichum only and P7 = distilled water only. Three evaluations were made, at intervals of 12 days. The action of the isolates of Trichoderma was expressed in terms of fresh and dry weights of the aerial plant parts and roots. P3 was found to be the period producing greatest of control of anthracnose. In comparison with controls, it was observed that in the plants treated with the Trichoderma isolate, CEN 151 had an increased growth of aerial parts. In the third experiment, two assays were carried out to evaluate the mycelial growth and sporulation of C. gloeosporioides isolates in liquid media. In the first test, the behavior of four isolates of C. gloeosporioides was observed for their growth and sporulation in different liquid media. Each treatment was repeated four times, in a randomized 4x3 block. There was a significant interaction between the particular isolates and different media in terms of quantity of conidia produced and dry biomass. The isolates with greatest production of conidia were CEN 419 and CEN 422, in potato-dextrose medium (BD). In the second assay, the development of isolate CEN 419 was evaluated in BD medium with the addition of ten different concentrations extract of yeast extract, again in relation to the production of conidia and dry biomass. A significant effect on production of dry biomass was observed. There was a significant difference in the production of conidia only between treatments 1 (BD) and 5 (0.4% yeast extract.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Texto parcialmente liberado pelo autor - sem capítulo 1, resultados e discussões. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-08T13:23:00Z No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-19T18:40:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-19T18:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) Previous issue date: 2009 / A traça-das-crucíferas (TDC) Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) é a principal praga da cultura das crucíferas e o controle químico é o método mais empregado para reduzir os danos desta praga. Uma alternativa para o controle da P.xylostella é a utilização de agentes de controle biológico, como Bacillus thuringiensis (Bt). Seu uso ainda é restrito, quando comparado aos inseticidas químicos, pois quando aplicado nas folhas, o complexo esporo-cristal fica exposto à radiação solar e é rapidamente desnaturado ou é lavado pela ação das chuvas. A alternativa é o uso endifítico do Bt, que tem a mesma função, sem os limites derivados da baixa ação residual. Este trabalho teve como objetivo determinar o efeito do Bt sobre P. xylostella a partir da aplicação sistêmica da bactéria na planta de couve. Foi utilizado o Bacillus thuringiensis kurstaki marcado com GFP (Btk- GFP), pertencente ao banco de Bacillus spp. da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. A estirpe foi crescida por 72 h em meio nutritivo e inoculada perto da raiz das plantas para avaliar a sua atividade tóxica para nas lagartas de P. xylostella. Após a inoculação foram realizados bioensaios para a determinação da mortalidade das lagartas no terceiro instar. Os resultados obtidos mostraram que, a planta absorveu o Btk-GFP do solo e que este se multiplicou em seu interior, protegendo-a contra os insetos. É possível que esses experimentos preliminares estejam abrindo a possibilidade de uma nova forma de utilização de B. thuringiensis no controle de insetos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The diamondback moth (DM) Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) is the major pest of crucifer culture and the chemical control is the method most used to reduce its damage. An alternative to control this pest is the use of biological control agents, such as Bacillus thuringiensis (Bt). Its use is still limited when compared to chemical insecticides, because when applied in complex leaves the spore-crystal is exposed to solar radiation and is rapidly denatured or are "washed" by the action of rain. The alternative is the use of endophitic Bt that has the same function, without the limitation derived from low residual action. This study aimed to determine the effect of Bt on Plutella xylostella from the systemic application of the bacteria in the plant of cabbage. We used the GFP Bacillus thuringiensis kurstaki (Btk-GFP), belonging to the bank of Bacillus spp. at Embrapa Genetic Resources and Biotechnology. The strain was grown for 72 h in nutrient medium and inoculated near the roots of plants to evaluate their toxic activity to the larvae of P. xylostella. After inoculation bioassays were conducted to determine the mortality of the larvae in the third instar. The results showed that the plant absorbs the Btk-GFP from the ground and proliferates in the interior, protecting it against insects. It is possible that these preliminary experiments are opening the possibility of a new way of using B. thuringiensis to control insects.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Ecologia, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-04-13T16:22:02Z No. of bitstreams: 1 2009_PedroHenriqueBrumTogni.pdf: 3570491 bytes, checksum: 0384bdcc97a6fd8478b97991da93546f (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-04-15T14:41:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_PedroHenriqueBrumTogni.pdf: 3570491 bytes, checksum: 0384bdcc97a6fd8478b97991da93546f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-15T14:41:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_PedroHenriqueBrumTogni.pdf: 3570491 bytes, checksum: 0384bdcc97a6fd8478b97991da93546f (MD5) Previous issue date: 2009-03 / A mosca-branca Bemisia tabaci biótipo B é considerada uma das principais pragas do tomateiro por causar perdas de produtividade devido a danos diretos e pela transmissão de diversas viroses (Geminiviridae). As aplicações de inseticidas para seu controle têm se mostrado cada vez mais incipientes. Isso evidencia a necessidade de novas técnicas de manejo baseado nas interações ecológicas entre a mosca-branca e outros componentes bióticos e abióticos do agroecossistema do tomateiro. Em estudos anteriores o consórcio do tomateiro com coentro reduziu os níveis populacionais de B. tabaci, principalmente em sistemas orgânicos de produção. Porém, os mecanismos pelos quais o coentro pode afetar as populações de mosca-branca ainda não são evidentes. O objetivo deste trabalho é gerar bases científicas para o manejo ecológico de B. tabaci em cultivos de tomate orgânico a partir do consórcio tomate+coentro e do manejo do tipo de irrigação (gotejamento e aspersão). No capítulo 1, foi realizado um experimento em olfatômetro de múltipla escolha do tipo X para avaliar se B. tabaci é atraída pelos voláteis do tomateiro e como o coentro pode afetar esses padrões. Machos e fêmeas da mosca-branca foram atraídos pelos voláteis constitutivos do tomateiro, indicando que os infoquímicos têm um papel importante na seleção da planta hospedeira por este herbívoro. Entretanto, ao contrário do esperado, os voláteis constitutivos do coentro não foram repelentes para o inseto. Quando apresentados em conjunto com os voláteis do tomateiro houve uma redução na preferência pela escolha dos voláteis do tomateiro por B. tabaci. No capítulo 2, foi comparado em campo a flutuação populacional de B. tabaci biótipo B e a ocorrência de predadores e parasitóides em monocultivo de tomate e tomate consorciado com coentro, submetidos a irrigação por gotejamento e por aspersão em diferentes fases fenológicas do tomateiro. Adultos e ninfas de B. tabaci foram menos abundantes nos tratamentos consorciados com coentro, principalmente após as cinco primeiras semanas de amostragem e nos tratamentos irrigados por aspersão. Quanto aos inimigos naturais, foi verificada maior abundância e diversidade de espécies nos tratamentos com coentro, principalmente após a floração e quando irrigado por aspersão. O tipo de irrigação e o consórcio com o coentro afetaram de forma distinta a abundância de diferentes grupos de inimigos naturais como joaninhas, moscas predadoras e parasitóides. No capítulo 3, objetivou-se descrever os padrões espaciais de adultos de mosca branca no início do ciclo da cultura do tomateiro irrigado por aspersão ou gotejamento e plantado em monocultura ou em consórcio com coentro. A população inicial que colonizou os tomateiros apresentou um padrão agregado nos dois sistemas de irrigação na primeira semana de amostragem. No gotejamento esse padrão agregado se manteve ao longo do período de amostragem, enquanto que na aspersão o efeito mecânico da água sobre os indivíduos alterou a distribuição da população que passou a aleatória. O consórcio com o coentro reduziu a colonização da plantas de tomate por B. tabaci. As populações permaneceram agregadas principalmente nas parcelas de monocultivo de tomate, sendo mais evidente no gotejamento onde não há ação mecânica da água sobre os indivíduos. A dispersão do Begomovirus acompanhou a dispersão do vetor na área sendo observado um padrão agregado no gotejamento e aleatório na aspersão. Portanto, o consórcio tomate+coentro e a irrigação por aspersão afetaram a distribuição espacial de adultos de mosca-branca e a incidência de viroses associadas. Esses resultados reforçam a importância do plantio do coentro antes do transplante do tomateiro para o campo. Contudo, ainda são necessários novos trabalhos para identificar os voláteis produzidos pelas plantas e verificar a interação química entre estes e B. tabaci. Apesar de ser recomendado o plantio de tomate em sistemas irrigados por gotejamento devido à incidência de doenças, este trabalho demonstra que para mosca-branca a irrigação por aspersão pode ser mais favorável para seu controle e favorece a abundância e diversidade de inimigos naturais. Dessa forma, essas duas práticas culturais (consórcio tomate+coentro e tipo de irrigação) podem ser estratégias eficientes como medida preventiva para colonização, estabelecimento, distribuição e incidência de B. tabaci e Begomovirus em cultivos de tomate orgânico durante o período de baixa precipitação pluviométrica. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The whitefly Bemisia tabaci biotype B stands out, among the diverse community of pest herbivores that colonize the tomato crop, due to the direct damages and transmission of several pathogenic viruses (Geminiviridae) causing productivity losses. The spraying of insecticides for its control selects resistant populations and promotes the dispersion of adults to other cropped areas. This shows the necessity of new techniques based on knowledge of several ecological interactions relating the tomato and the biotic and abiotic components of tomato agroecosystem. Previous field observations showed that the intercropping of coriander and tomato crops together can reduce the population levels of B. tabaci, mainly in organic crop system. Therefore, how coriander can affect the whiteflies populations is unknown. The objective of this work was to generate new scientific bases for the ecological management of B. tabaci in organic tomato crop systems through intercropping with coriander and managing irrigation systems (sprinklers and drip). Chapter 1: A multiple-choice test in an olfactometer (X type) was conducted to evaluate if B. tabaci is attracted by the tomato volatiles and how the coriander volatiles can affect this pattern. Male and female of whiteflies were attracted by constitutive volatiles of tomato plants showing that these infochemicals have an important role in plant selection by this herbivore. However, on the contrary of what was expected, the constitutive volatiles of coriander alone were not repellent to the insect. Nonetheless, when exposed in a combination with tomato volatiles, there was a reduction in the preference of B. tabaci for tomato plants. Chapter 2: The dynamics of B. tabaci populations and the occurrence of predators and parasitoids in tomato monocultures and tomato-coriander bicultures, submitted to drip and sprinklers irrigation, were compared during different phenological stages of tomato plants. Adults and nymphs of B. tabaci were less abundant in the tomato-coriander biculture treatments, mainly after the five first weeks of sampling, and in the plots irrigated by sprinklers. Higher abundance and species diversity of natural enemies was observed in the treatments with coriander, mainly after its flowering and in the treatments under sprinklers irrigation. The irrigation management and the consortium with coriander affected distinctly the abundance of different groups of natural enemies, such as ladybeetles, predaceous flies, and parasitoids. This knowledge will be helpful in the conservation biological control of different tomato pests, and in different periods of the year. Chapter 3: The spatial distribution pattern of whitefly adults during the colonization period in tomato monoculture and the tomato-coriander biculture and irrigated by drip or sprinkler was described. The initial population that colonized tomato plants in the first sampling week showed a clumped pattern in both drip and sprinklers irrigation systems. The clumped population pattern remained in all sampling periods in the drip system. On the other hand, the mechanical effect of the water from sprinklers on the individuals changed the aggregation pattern from a clumped distribution to a random distribution. The tomato-coriander biculture reduced the plant colonization by B. tabaci compared to the monoculture. The adult population remained clumped, mainly in the plots of single cropped tomato, remaining more evident in plots with drip irrigation where there is no mechanical action of water on the adults. The dispersion of Begomovirus followed the vector dispersion in the area, and it was observed a clumped pattern under the drip irrigation and a random distribution pattern under the sprinklers irrigation. This way, the tomato-coriander biculture and the irrigation by sprinklers affected the spatial distribution of whitefly adults and the incidence of viruses. These results reinforce the importance of planting coriander before the tomato plant in order to diminish the colonization rate of whitefly and reduce the losses caused by disease. Additional studies are needed to identify the volatiles produced by plants and understand the chemical interactions of these volatiles and B. tabaci. Natural enemies specific against these species of whitefly should also be evaluated for population control. Instead of recommendations for irrigating tomato crop by drip system to reduce disease attack, this study showed that for whitefly control the sprinklers system is more efficient. This way, these two cultural practices can be efficient strategies as measures to prevent colonizing and establishing of B. tabaci and Begomovirus in organic tomato crops during the period of low incidence of rains.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-07-08T19:29:27Z No. of bitstreams: 1 2010_AlineWelzelGramkowParcial.pdf: 2841617 bytes, checksum: 6d3e8691cd26e3d57ff5f9003c7d61c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-07-13T21:46:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AlineWelzelGramkowParcial.pdf: 2841617 bytes, checksum: 6d3e8691cd26e3d57ff5f9003c7d61c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-13T21:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AlineWelzelGramkowParcial.pdf: 2841617 bytes, checksum: 6d3e8691cd26e3d57ff5f9003c7d61c3 (MD5) / Os baculovírus compreendem o maior grupo de vírus de insetos estudados no mundo, principalmente pela eficiência em matar pragas da agricultura. Neste trabalho, três baculovírus recombinantes contendo os genes ScathL (Catepsina L) de Sarcophaga peregrina (vSynScathL), Kerat (Queratinase) do fungo Aspergillus fumigatus (vSynKerat) e Quit (Quitinase) do fungo Metarhizium anisopliae (vSynQuit) foram construídos e suas propriedades bioinseticidas analisadas em larvas de Spodoptera frugiperda. Bioensaios em larvas neonatas e de 3º ínstar de S. frugiperda infectadas com os baculovírus vSynScathL, vSynKerat e vSynQuit mostraram uma diminuição no tempo necessário para matar os insetos infectados quando comparado ao vírus selvagem. O vSynScathL apresentou uma TL50 e TD de 47 horas e 2,62 dias, respectivamente, enquanto o AcMNPV, uma TL50 de 136 horas e TD de 5,37 dias, respectivamente para larvas de S. frugiperda de 3º ínstar. Isso representa uma diminuição significativa de 65,5% para TL50 e 50,09% para TD, no tempo necessário para o vírus matar os insetos infectados quando comparado ao vírus selvagem. A TL50 e TD para o vírus vSynKerat foi de 91 horas e 3,70 dias, respectivamente, com uma redução de 32,8% para TL50 e 30,21% para TD, no tempo necessário para o vírus matar os insetos infectados quando comparado ao vírus AcMNPV. Já, o vírus recombinante vSynQuit apresentou uma TL50 de 110,67 horas, o que foi 23,6% menor do que o vírus selvagem (TL50 de 144,97). Já em larvas neonatas de S. frugiperda o vSynScathL mostrou uma TL50 de 77 horas comparado ao AcMNPV de 104 horas quando inoculado com 102 corpos de oclusão/nL, já o TD foi de 3,46 dias para o vírus recombinante e 4,16 dias para o AcMNPV. Isso representa uma redução de 26% na TL50 e 16,82% para TD no tempo necessário para matar os insetos infectados quando comparado ao vírus selvagem AcMNPV. A TL50 do vírus vSynKerat foi de 54 horas, com uma redução de xx 48% comparado ao vírus AcMNPV e o TD de 3,87 dias, reduzindo 6,97% no tempo necessário para matar os insetos; já a TL50 do vírus vSynQuit foi de 86 horas, com uma redução de 45,2% comparado ao vírus selvagem e o TD de 3,75 dias comparado com o vírus selvagem de 4,43 dias, representando uma redução de 15,34% no tempo necessário para matar os insetos. Também mostramos que os vírus vSynScathL e vSynKerat foram capazes de aumentar a atividade de fenoloxidase na hemolinfa de larvas de S. frugiperda em relação ao vírus selvagem e à larva não infectada. A expressão de proteases em larvas infectadas resulta na destruição dos tecidos internos em estágios tardios da infecção, podendo ser uma das razões para o aumento da velocidade para matar as larvas de S. frugiperda, como observado na microscopia eletrônica de varredura para os vírus vSynScathL e vSynKerat em relação ao vírus selvagem e à larva não infectada. O ensaio enzimático com quitina regenerada mostrou também uma diferença quitinolítica significativa em relação aos corpos de oclusão do vírus vSynQuit em comparação ao vírus selvagem. A transcrição de genes celulares em hemócitos derivados de larvas de Anticarsia gemmatalis infectados (12 h p.i.) pelos baculovírus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) e/ou Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) também foram analisados neste trabalho pela técnica análise de diferença representacional (RDA). Os trancritos mais abundantes encontrados foram para proteases celulares, que estão provavelmente envolvidas na resposta do inseto à infecção viral. Outros genes, como por exemplo, hsp70 e hsc70, proteínas ribossomais, aminopeptidase, beta 1,3 glicanase, proteína induzida pelo hormônio juvenil, lipase também foram detectados. Todos esses transcritos podem de alguma maneira ter um papel na defesa celular e/ou estabelecimento da infecção viral. Para confirmação dos dados obtidos pela RDA, a transcrição do gene hsc70 foi analisada por PCR em tempo real e confirmou sua expressão diferencial. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculovirus comprise the largest group of insect viruses most studied worldwide, mainly because they efficiently kill agricutural insect pests. In this study, tree recombinant baculoviruses containing the ScathL gene (Cathepsin L) from Sarcophaga peregrina (vSynScathL), the Kerat gene (Keratinase) from the fungus Aspergillus fumigatus (vSynKerat) and Quit gene (Chitinase) from the fungus Metarhizium anisopliae (vSynQuit) were constructed and their insecticidal properties analysed against Spodoptera frugiperda larvae. Bioassays of third-instar and neonate S. frugiperda larvae with vSynScathL,vSynKerat and vSynQuit showed a decrease in the time needed to kill the infected insects when compared to the wild type virus. The vSynScathL showed LT50 and TD of 47 hours and 2.62 days respectively, while AcMNPV, a LT50 of 136 hours and TD of 5.37 days, respectively for third-instar S. frugiperda.larvae. This represents a significant decrease (from 65.5% for LT50 and 50.09% for TD) in the time required to kill the virus infected insects compared to wild virus. The LT50 and TD for vSynKerat was 91 hours and 3.70 days, respectively, showing also a reduction (32.8% for LT50 and 30.21% for TD), in the time required to kill the virus infected insects compared to AcMNPV. Also, the vSynQuit in another bioassay, showed a LT50 of 110.67 hours, which was 23.6% lower than the wild type virus (LT50 of 144.97 hours). Using neonate larvae of S.frugiperda, the vSynScathL showed a LT50 77 hours compared to 104 hours of AcMNPV when inoculated with 102 occlusion bodies/nL, since the TD was 3.46 days for the recombinant virus and 4.16 days for AcMNPV. This represents a 26% reduction in LT50 and 16.82% for TD compared to wild type virus AcMNPV. The LT50 of the virus vSynKerat was 54 hours with a 48% reduction compared to AcMNPV and in the TD of 3.87 days, 6.97%; with vSynQuit the LT50 was 86 hours, with a reduction of 45.2% compared to the wild virus and TD of 3.75 days compared with 4.43 days for wild type virus, a reduction of 15.34%. We have also shown that vSynScathL and vSynKerat were able to increase phenoloxidase activity in the hemolymph of S. frugiperda larvae compared with the wild type virus and with larvae not infected. The expression of proteases in infected larvae resulted in destruction of internal tissues late in infection, which could be the reason for the increased viral speed of kill, as observed in scanning electron microscopy for viruses vSynScathL and vSynKerat compared to the wild type virus and uninfected larvae. The enzyme assay with regenerated chitin also showed a significant chitinolytic difference with occlusion bodies of the vSynQuit compared to wild type virus . The transcription of cellular genes in hemocytes derived from infected larvae of Anticarsia gemmatalis (12 h p.i.) by Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) and/or Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) were also analyzed in this work by the representational difference analysis (RDA). Transcrits more abundants were cellular proteases, which are probably involved in insect response to viral infection. Other genes, such as hsc70 and hsp70, ribosomal proteins, aminopeptidase, beta 1.3 glucanase, protein induced by juvenile hormone, lipase were also detected. All of these transcripts can somehow play a role in cellular defense and/or establishment of viral infection. To confirm the data obtained by RDA, the hsc70 gene transcription was analyzed by real time PCR and confirmed their differential expression.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-09-25T14:21:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-10-03T13:11:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T13:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Trichoderma constitui um gênero de microfungos mundialmente distribuído na natureza. Nos solos, estão presentes como microorganismos de vida livre ou colonizando raízes de plantas. Podem também colonizar endofiticamente os tecidos vegetais, como simbiontes. Por apresentarem ação antagonista contra fitopatógenos, linhagens de diversas espécies desse gênero vem sendo estudadas como agentes de biocontrole de doenças de plantas, dentre as quais, o mofo branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum, em diversas espécies vegetais. A caracterização molecular desse grupo de antagonistas tem grande importância, tanto em estudos de biodiversidade e distribuição das espécies, como na identificação de potenciais agentes de biocontrole, e de possíveis patógenos oportunistas a humanos, a exemplo de Trichoderma longibrachiatum. O objetivo desse trabalho foi identificar 148 isolados em nível de espécie, por sequenciamento das regiões ITS do DNA ribossomal e avaliar a biodiversidade desses isolados com referência à origem geográfica. Foi realizada seleção in vitro de isolados com potencial de biocontrole, os quais foram avaliados, em casa de vegetação, quanto à capacidade de supressão do mofo branco e como promotores de crescimento do feijoeiro. Os 29 isolados selecionados foram também submetidos à técnica de MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry), para confirmação das espécies, correlacionando esta técnica de identificação com a técnica molecular empregada. Filtrados de culturas do isolado CEN201, com potencial de inibição do crescimento micelial do patógeno supracitado, foram submetidos a técnicas de extração e purificação de metabólitos secundários. A capacidade de inibição do crescimento micelial de S. Sclerotiorum, por esses compostos, foi confirmada. No capítulo 1 são relatados resultados desses estudos, mostrando que 17,4% dos isolados apresentaram alto nível de antagonismos em pareamento de culturas e dois grupos apresentaram 83,3 a 88,9% de inibição micelial do patógeno por metabolitos não voláteis. Outro ponto ressaltado nesta pesquisa foi o índice de biodiversidade relativa aos 144 isolados de Trichoderma procedentes de sete estados brasileiros, que alcançou 0,076 com 11 espécies. Já o capítulo 2 relata a supressão do mofo branco com 19 dos 29 isolados selecionados in vitro no capítulo 1. Observou-se, também, promoção de crescimento de plantas de feijão com 7 isolados estudados. Foram ainda mostrados os resultados obtidos na identificação dos isolados por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS). Esses resultados, confrontados com os dados obtidos na identificação molecular verificada no capítulo anterior, indicaram a convergência das duas técnicas, confirmando o potencial de MALDI-TOF MS como método rápido para identificação de espécies de Trichoderma. O capítulo 3 está focado nos estudos com metabólitos não voláteis produzidos pelo isolado CEN201 (T.asperellum). As técnicas utilizadas, Cromatografia líquida e MALDI-TOF MS possibilitaram, por homologia de massa/carga, inferir a presença de dois compostos com ação antibiótica, Asperelina B e Trichocompactina, no filtrado de culturas estudado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trichoderma composes a genus of microfungi distributed worldwide. In soil, these fungi may be present as free life or colonizing plant roots. Can also to colonize plant tissues endophytically like symbionts. Some species have been studied as biocontrol agents of plant diseases, among which, white mold caused by Sclerotinia sclerotiorum in several plant species. Their mechanisms of action include the production of secondary metabolites with antibiotic effect, mycoparasitism and competition for space and nutrients. The molecular characterization of this group of antagonists is very important, both in studies of biodiversity and species distribution and for identification of potential biocontrol agents, and possible opportunistic pathogens to humans like Trichoderma longibrachiatum. The aim of this study was to identify 148 the isolates of Trichoderma on species level by sequencing the ITS region of Ribossomal and to evaluate their biodiversity with reference to geographical originan. Was performed, in vitro, selection of isolates with potencial biocontrol, which were evaluated in greenhouse as the ability of white mold supression and as beans growth promoters. The 29 selected isolates were also subjected to the technique of MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption / ionization-time of flight mass spectrometry) to confirm the species, correlating this technique in identification with molecular technique employed. Culture filtrates of isolate CEN 201, with potential to inhibit the mycelial growth of the pathogen above, were subjected to techniques of extraction and purification of secondary metabolites. The capacity of mycelial growth inhibition of S. Sclerotiorum by these compounds was confirmed. In chapter 1, are reported results of these studies showing that 17,4% of the isolates showed a high level of antagonism in pairing cultures and two groups showed 83,3 to 88,9% of inhibition of the pathogen by volatile metabolites. Another point emphasized in this study was the index of biodiversity on 144 Trichoderma isolates from seven Brazilian states, which reached 0,076 with 11 species. Already Chapter 2 reports the suppression of white mold with 19 of the 29 isolates selected in vitro in Chapter 1. It was observed, also, promote growth of bean plants with 7 isolates tested. Also shown are the results obtained by identification of the isolated mass spectrometry (MALDI-TOF MS). These results, compared with the data obtained in the molecular identification verified in the previous chapter showed the convergence of the two techniques, confirming the potential of MALDI-TOF MS as a rapid method for identification of Trichoderma species. The Chapter 3 is focused on studies of non-volatile metabolites produced by isolated CEN201 (T.asperellum). The techniques used, liquid chromatography and MALDI-TOF MS was enable, by homology mass/charge, to infer the presence of two compounds with antibiotic activity, Trichocompactin and Asperelin B in culture filtrates studied.