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Avaliação da permeação cutânea de nanoemulsão contendo óleo de copaíba incorporada em hidrogéis / Skin permeation evaluation of nanoemulsion-loaded copaiba oil incorporated into hydrogelsLucca, Letícia Grolli January 2013 (has links)
O óleo de copaíba é largamente utilizado na medicina popular da região amazônica, principalmente para tratar enfermidades relacionadas a inflamações. Estudos prévios demonstraram que o óleo extraído da espécie Copaifera multijuga Hayne tem uma promissora atividade anti-inflamatória, assim como seu componente majoritário, o β-cariofileno. Entretanto, o caráter untuoso deste óleo torna pouco aceitável sua aplicação direta na pele. Nosso grupo de pesquisa propôs a formulação de nanoemulsões contendo o óleo, uma vez que estes sistemas, além de hidrofílicos, possuem pequeno tamanho de gotícula e alta área de superfície, o que pode melhorar a penetração de substâncias através da pele. O único inconveniente destes é a sua baixa viscosidade, que pode ser contornado por sua incorporação em um hidrogel. No presente estudo, foi desenvolvida uma formulação de hidrogel contendo a nanoemulsão de óleo de copaíba (Copaifera multijuga Hayne) e avaliado seu perfil de permeação/retenção cutânea no modelo de pele de orelha suína. A viabilidade de incorporação da nanoemulsão em dois agentes geleificantes (Carbopol 980® e quitosana) foi testada. No período de sete dias, a formulação de quitosana, ao contrário da formulação de Carbopol 980® (CARB-NE) que permaneceu estável por 60 dias, apresentou visível instabilidade e aumento dos valores de tamanho de gotícula e índice de polidispersão. Devido a isto, a formulação CARB-NE foi escolhida para dar continuidade aos estudos de perfil reológico e de permeação/retenção cutânea. O perfil reológico de CARB-NE foi caracterizado como pseudoplástico, assim como o do hidrogel controle, o que indica que a nanoemulsão não interferiu na matriz polimérica do hidrogel. A formulação CARB-NE aumentou significativamente a penetração do componente β-cariofileno na derme comparada com a nanoemulsão não incorporada em hidrogel. Não houve um aumento da penetração na epiderme, e os valores não foram significativamente diferentes para as duas formulações. Portanto, o hidrogel de Carbopol 980® demonstrou ser o melhor agente geleificante para a nanoemulsão de copaíba, já que permaneceu estável durante o tempo testado e aumentou a penetração de β-cariofileno na pele, especialmente na derme, camada de interesse no tratamento da inflamação pela via tópica. / Copaiba oil is a natural product widely used in folk medicine of the Amazon region mostly to treat diseases related to inflammation. Previous studies have shown that the oil extracted from Copaifera multijuga Hayne has a promising anti-inflammatory activity, as well as its major component, β-caryophyllene. However, the unctuous nature of this oil makes it slightly acceptable to apply directly to the skin. Our research group has proposed the formulation of nanoemulsions containing copaiba oil, since these systems are hydrophilic, have a small droplet size and high surface area, which can improve the penetration of substances through the skin. The only disadvantage of these systems is their low viscosity that can be modified by incorporating it into a hydrogel. In the present study, we developed a hydrogel formulation containing the nanoemulsion of copaiba oil (Copaifera multijuga Hayne) and evaluated its skin permeation/retention profile in porcine ear skin model. The feasibility of incorporating the nanoemulsion into two gelling agents (Carbopol® 980 and chitosan) was assessed. Within seven days, chitosan formulation had increased values for droplet size and polydispersity index, in opposite to Carbopol® 980 formulation (CARB-NE), which continued stable for 60 days. Due to this, the formulation CARB-NE was chosen to continue studies of the rheological profile and skin permeation/retention profile. The rheological profile of CARB-NE was characterized as pseudoplastic, the same was observed for the control hydrogel, which indicates that the nanoemulsion had no effect on the hydrogel polymer matrix. The CARB-NE formulation significantly increased the penetration of β-caryophyllene in the dermis compared to the nanoemulsion not incorporated. There was no increase in the epidermis permeation, nor the values were significantly different for the two formulations. Therefore, the hydrogel Carbopol® 980 proved to be the best gelling agent for copaiba nanoemulsion since it remained stable over the tested time and increased β-caryophyllene penetration in the skin, especially in the dermis, the layer of interest in the treatment of topical inflammation.
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Atividade antimicrobiana e citotoxicidade de emulsões de quitosana/gelatina/óleo de copaíba / Antimicrobial and cytotoxic activity of chitosan/gelatin/copaíba oil emulsionCrisiane Aparecida Marangon 11 September 2015 (has links)
A resistência bacteriana aos antibióticos tem se disseminado mais rapidamente do que a introdução de novos compostos, portanto, a investigação e desenvolvimento de novas moléculas para o controle microbiano é necessário. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de diferentes óleos de copaíba OC(S), OC(C) e OC(E), do gel de quitosana/gelatina (QG) e de emulsões de quitosana/gelatina/óleo de copaíba (QGOC) frente às linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27873. A quitosana foi obtida a partir de gládios de lula por desmineralização, desproteinização e desacetilação e uma solução a 2% foi preparada em ácido acético 1%. O gel de gelatina 2% foi obtido por dissolução de gelatina comercial (Sigma) em água, sendo gelatinizada a 60ºC por 30 min. O gel QG e as emulsões QGOC(S), QGOC(C) e QGOC(E) foram preparadas pela mistura dos géis de quitosana e gelatina na proporção 2:1 sob agitação constante. A concentração das emulsões QGOC foi ajustada de acordo com a concentração inibitória mínima (CIM) encontrada para o gel QG e para os óleos individualmente. Os ensaios de atividade antimicrobiana foram realizados utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo para a determinação da CIM e da concentração bactericida mínima (CBM). O efeito citotóxico dos compostos também foi investigado sobre células VERO. Os valores de CIM e CBM para o gel QG sobre S. aureus, E. coli e P. aeruginosa foram de 31, 2; 62,5 e 31, 2 μg/mL, respectivamente, no entanto para P. aeruginosa observou-se que o gel mostrou atividade bacteriostática. Os óleos de copaíba apresentaram atividade apenas para S. aureus, com CIM e CBM de 2000 μg/mL para OC(S), 500 μg/mL para OC(C) e 62,5 μg/mL para OC(E), com caráter bactericida. A interação entre os antimicrobianos na forma da emulsão QGOC(E) sugere efeito sinérgico para S. aureus. As demais emulsões não apresentaram efeito sinérgico, entretanto, a atividade antimicrobiana e o efeito bactericida foram mantidos com a adição dos óleos no gel QG, com exceção da bactéria P. aeruginosa em que a adição dos óleos reduziu a eficácia do gel QG. Os óleos de copaíba apresentaram efeito citotóxico sobre as células VERO, enquanto o gel QG e a combinação na forma de emulsões não mostraram citotoxicidade. Os resultados desse estudo evidenciam que a combinação QGOC pode ser uma fonte em potencial para o desenvolvimento de um novo agente antimicrobiano seletivo no controle de infecções bacterianas. / Antibiotic resistance increases faster than the introduction of new compounds thus, the research and development of new drugs and antimicrobial systems is required. This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of different copaiba oils CO(S), CO(C) and CO(E), chitosan/gelatin gel (CG) and chitosan/gelatin/copaiba oil (CGCO) emulsions against the strains of Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27873. Chitosan was obtained from squid pens by desmineralization, desproteinization and deacetylation and a 2% solution was prepared in 1% acetic acid. A 2% gelatin gel was obtained by dissolution of commercial gelatin (Sigma) in water and gelatinized at 60ºC for 30 min. CQ gel and CQCO emulsions were prepared by mixing chitosan and gelatin gels at 2:1 (w/w) ratio under constant stirring. The concentration of CGCO emulsions were adjusted according to the minimum inhibitory concentration (MIC) for CG gel and oils separately. MIC and minimum bactericidal concentrations (MBC) with oils, CG gel and CGCO emulsions were determined using the micro-broth dilution technique. The cytotoxicity effect of compounds on VERO cell line was also evaluated using the MTT assay. CG gel inhibited S. aureus, E. coli and P. aeruginosa growth showing a MIC and a MBC of 31.2; 62.5 and 31.2 μg/mL, respectively except for P. aeruginosa, that showed bacteriostatic effect. Copaiba oils inhibited only S. aureus with MIC and MBC of 2,000 μg/mL to CO(S), 500 μg/mL to CO(C) and 62.5 μg/mL to CO(E). The combined emulsion CGCO(E) suggesting synergistic effect to S. aureus. However, the other emulsions showed not synergistic effect, but showed the same MIC and MBC values as those obtained for the isolated compounds, except for P. aeruginosa where the addition of oils reduced the effectiveness of CQ gel. The copaiba oils showed toxicity to VERO cells, while the CG gel and the CGCO were not cytotoxic. The results of this study demonstrated that the combination of CGCO may be a potential source for the development of a new selective agent to control these important bacterial pathogens.
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Avaliação da permeação cutânea de nanoemulsão contendo óleo de copaíba incorporada em hidrogéis / Skin permeation evaluation of nanoemulsion-loaded copaiba oil incorporated into hydrogelsLucca, Letícia Grolli January 2013 (has links)
O óleo de copaíba é largamente utilizado na medicina popular da região amazônica, principalmente para tratar enfermidades relacionadas a inflamações. Estudos prévios demonstraram que o óleo extraído da espécie Copaifera multijuga Hayne tem uma promissora atividade anti-inflamatória, assim como seu componente majoritário, o β-cariofileno. Entretanto, o caráter untuoso deste óleo torna pouco aceitável sua aplicação direta na pele. Nosso grupo de pesquisa propôs a formulação de nanoemulsões contendo o óleo, uma vez que estes sistemas, além de hidrofílicos, possuem pequeno tamanho de gotícula e alta área de superfície, o que pode melhorar a penetração de substâncias através da pele. O único inconveniente destes é a sua baixa viscosidade, que pode ser contornado por sua incorporação em um hidrogel. No presente estudo, foi desenvolvida uma formulação de hidrogel contendo a nanoemulsão de óleo de copaíba (Copaifera multijuga Hayne) e avaliado seu perfil de permeação/retenção cutânea no modelo de pele de orelha suína. A viabilidade de incorporação da nanoemulsão em dois agentes geleificantes (Carbopol 980® e quitosana) foi testada. No período de sete dias, a formulação de quitosana, ao contrário da formulação de Carbopol 980® (CARB-NE) que permaneceu estável por 60 dias, apresentou visível instabilidade e aumento dos valores de tamanho de gotícula e índice de polidispersão. Devido a isto, a formulação CARB-NE foi escolhida para dar continuidade aos estudos de perfil reológico e de permeação/retenção cutânea. O perfil reológico de CARB-NE foi caracterizado como pseudoplástico, assim como o do hidrogel controle, o que indica que a nanoemulsão não interferiu na matriz polimérica do hidrogel. A formulação CARB-NE aumentou significativamente a penetração do componente β-cariofileno na derme comparada com a nanoemulsão não incorporada em hidrogel. Não houve um aumento da penetração na epiderme, e os valores não foram significativamente diferentes para as duas formulações. Portanto, o hidrogel de Carbopol 980® demonstrou ser o melhor agente geleificante para a nanoemulsão de copaíba, já que permaneceu estável durante o tempo testado e aumentou a penetração de β-cariofileno na pele, especialmente na derme, camada de interesse no tratamento da inflamação pela via tópica. / Copaiba oil is a natural product widely used in folk medicine of the Amazon region mostly to treat diseases related to inflammation. Previous studies have shown that the oil extracted from Copaifera multijuga Hayne has a promising anti-inflammatory activity, as well as its major component, β-caryophyllene. However, the unctuous nature of this oil makes it slightly acceptable to apply directly to the skin. Our research group has proposed the formulation of nanoemulsions containing copaiba oil, since these systems are hydrophilic, have a small droplet size and high surface area, which can improve the penetration of substances through the skin. The only disadvantage of these systems is their low viscosity that can be modified by incorporating it into a hydrogel. In the present study, we developed a hydrogel formulation containing the nanoemulsion of copaiba oil (Copaifera multijuga Hayne) and evaluated its skin permeation/retention profile in porcine ear skin model. The feasibility of incorporating the nanoemulsion into two gelling agents (Carbopol® 980 and chitosan) was assessed. Within seven days, chitosan formulation had increased values for droplet size and polydispersity index, in opposite to Carbopol® 980 formulation (CARB-NE), which continued stable for 60 days. Due to this, the formulation CARB-NE was chosen to continue studies of the rheological profile and skin permeation/retention profile. The rheological profile of CARB-NE was characterized as pseudoplastic, the same was observed for the control hydrogel, which indicates that the nanoemulsion had no effect on the hydrogel polymer matrix. The CARB-NE formulation significantly increased the penetration of β-caryophyllene in the dermis compared to the nanoemulsion not incorporated. There was no increase in the epidermis permeation, nor the values were significantly different for the two formulations. Therefore, the hydrogel Carbopol® 980 proved to be the best gelling agent for copaiba nanoemulsion since it remained stable over the tested time and increased β-caryophyllene penetration in the skin, especially in the dermis, the layer of interest in the treatment of topical inflammation.
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Avaliação da permeação cutânea do fármaco Ibuprofeno utilizando o óleo de copaíba como promotor de absorção em modelos experimentais "in vitro" e "in vivo"Nogueira, Rodrigo José Lupatini 22 August 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-08-22 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A administração de medicamentos na pele através da via transcutânea é uma prática que tem sido utilizada pela humanidade ao longo de milênios. Os anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) apresentam-se como uma classe de fármacos de interesse para o desenvolvimento de formulações transcutâneas já que apresentam efeitos gastrointestinais graves ao serem utilizados para o tratamento crônico de doenças, como por exemplo artrite reumatóide. Entre os fármacos desta classe, o ibuprofeno (IBU) representa um bom candidato para a permeação cutânea, já que apresenta baixo peso molecular (206,28), coeficiente de partição (log P) inferior a 4 e curta meia vida plasmática. Uma estratégia efetiva para facilitar a passagem de fármacos pela pele é o emprego de promotores de permeação na pele. Recentemente, alguns trabalhos vem relacionando o uso de terpenos e óleos naturais ricos em terpenos na promoção de permeação cutânea de fármacos. O óleo de copaíba, devido ao seu rico conteúdo em terpenos, apresenta-se como uma ótima escolha de promotor de permeação de fármacos administrados na pele. Neste trabalho foram desenvolvidas duas formulações em creme contendo IBU 5% com duas concentrações diferentes de óleo de copaíba: IBOC5, contendo 5% de óleo de copaíba e IBOC10, com 10% do mesmo óleo. Os ensaios de permeação e penetração in vitro do IBU foram realizados utilizando-se pele de orelha suína como membrana biológica no aparelho de células de difusão vertical do tipo Franz. Já a avaliação da permeação in vivo foi realizada através do teste de atividade anti-inflamatória induzida pelo óleo de cróton em orelhas de camundongos. O fluxo de permeação (J) do IBU nas amostras IBOC5 (35,72 ± 6,35) e IBOC10 (29,78 ±2,41) foram superiores (p < 0,01 e p < 0,05, respectivamente) ao creme controle, sem óleo de copaíba (10,32 ± 1,52) e produto comercial (14,44 ± 2,39). Na análise de penetração, a quantidade de IBU nas amostras IBOC5 e IBOC10 foi maior (p < 0,01 e p < 0,05, respectivamente) na derme quando comparada à epiderme. No ensaio in vivo, as amostras IBOC5 e IBOC10 reduziram (p < 0,05 e p < 0,001, respectivamente) o processo inflamatório quando comparadas ao controle negativo, entretanto, não foram diferentes (p > 0,05) do controle positivo. Face aos resultados, pode-se concluir que a adição do óleo de copaíba apresentou capacidade de promoção de permeação e penetração cutânea do ibuprofeno nas amostras em creme para o teste de células de difusão in vitro. Já o modelo in vivo de edema de orelha em camundongos, sugere-se que este não foi o teste mais adequado para avaliação da permeação do ibuprofeno nas amostras analisadas. / The administration of medications on the skin through transcutaneous routeis a practice that has been used by mankind for millennia. The non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) have been shown to be a class of drugs of interest for transcutaneous formulation development, since they present severe gastro-intestinal effects when used for treatment of chronic diseases such as rheumatoid arthritis. Among drugs of this class, Ibuprofen (IBU) is considered a good candidate for skin permeation, since it has a low molecular weight (206.28), partition coefficient (log P) lower than 4 and short plasma half-life. Therefore, an effective strategy to facilitate the drug diffusion through the skin is the use of permeation enhancers. Recently, some studies have been reporting the use of terpenes and natural oils rich in terpenes and their roles in promoting cutaneous drug penetration. Copaiba oil, due to its rich content of terpenes, presents itself as a great choice of penetration enhancer for drugs administered on the skin. In this study, two cream formulations containing 5% of IBU were developed: IBOC5 with 5% of Copaiba oil and IBOC10 with 10% of the same oil. In vitro cutaneous penetration/permeation studies of IBU were performed using pig ear skin as biological membrane in the Franz-type diffusion cells. In vivo permeation tests were also performed through anti-inflammatory activity evaluation using Croton oil-induced mouse ear edema test. The permeation flux (J) of IBU samples, IBOC5 (35.72 + 6.35) and IBOC10 (29.78 + 2.41) were significantly higher (p < 0.01 and p < 0.05, respectively) when compared to control cream, without Copaiba oil (10.32 + 1.52) and to commercial product (14.44 + 2.39). In the penetration analysis, the amount of IBU found in the samples IBOC5 and IBOC10 was higher (p < 0.01 and p < 0.05, respectively) in dermis than epidermis. In vivo tests showed that samples IBOC5 and IBOC10 decreased (p < 0.05 e p < 0,001, respectively) inflammatory process when it was compared to the negative control, however they weren’t considered statistically different (p > 0.05) of positive control. Concluding, Copaiba oil showed a significant capability to promote skin penetration and permeation of ibuprofen when it was added into the cream samples, according to the in vitro diffusion cells test results. On the other hand, the results obtained from the in vivo method weren’t enough satisfactory considering the analyzed samples.
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Desenvolvimento de nanocápsulas contendo óleo de Copaifera reticulata DuckePacheco, Carolina Carvalho 07 August 2014 (has links)
Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-12-09T18:10:55Z
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Previous issue date: 2014-08-07 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Polymeric nanoparticles such as nanocapsules are carriers for drugs systems which have
a diameter of less than 1 µm, composed of a lipophilic core surrounded by a polymeric
wall and stabilized by surfactant. They have been important in pharmaceutical field due
to their therapeutic potential, such as improved drug bioavailability and reduced adverse
drug effects. Copaifera reticulata Ducke is a species of the genus Copaifera which is
extracted an oleoresin called copaiba oil, widely used in different regions of the country,
especially in the Amazon region. This oil has been used popularly as anti-inflammatory,
healing, antiseptic, anti-tumor, among other activities. However, the diversity of
chemical substances present in the oil, combined with the high temperatures of the
Amazon region, favoring reaction processes decreasing the therapeutic and chemical
stability of the product, and difficult to obtain derived products with quality. Thus, the
study aimed to obtain nanocapsules containing oil of C. reticulata using solvent
displacement or interfacial deposition method. Initially, were obtained and characterized
different Copaiba oil (C. multijuga Hayne and C. reticulata) through physical-chemical
analysis: density, refractive index, viscosity and chromatographic analysis. For the
development of nanocapsules was used a factorial design type 22, replicated, which
assessed the influence of two types of polymers (poly-ε-caprolactone and poly lactic
acid-co-glycolic acid) and two different concentrations of oil-resin C. reticulata (2.5%
and 5.0%) on the average particle diameter, zeta potential and pH of the nanocapsules
obtained. Furthermore, they were characterized by the distribution of the average
particle diameter, polydispersity index, rheology, encapsulation rate, and conducting a
preliminary stability study for a period of 120 days. The physico-chemical
characterization study of the oils of C. reticulata and C. multijuga showed that there is a
significant difference between some parameters studied intra and interspecies variations.
The major constituent for oil from C. reticulata was the β-bisabolene and for different
oils C. multijuga studied the main constituent was β-caryophyllene. The preparation and
characterization of nanocapsules showed adequate parameters for them, even showing a
preliminary stability. Nanocapsules containing 2.5% oleoresin of copaiba and formed
by poly-ε-caprolactone showed, in general, the best physico-chemical parameters. Thus,
it was possible to obtain nanocapsules containing C. reticulata Ducke within acceptable
parameters, which still need to be optimized to provide the future development of a final
pharmaceutical form. / Nanopartículas poliméricas, como as nanocápsulas, são sistemas carreadores de
fármacos que apresentam diâmetro inferior a 1 µm, compostas por um núcleo lipofílico
envolvido por uma parede polimérica e estabilizadas por meio de tensoativo. Elas têm
recebido importância na área farmacêutica devido às suas potencialidades terapêuticas e
cosméticas, tais como, melhora na biodisponibilidade e redução dos efeitos adversos de
fármacos e ou ativos biológicos. Copaifera reticulata Ducke é uma das espécies do
gênero Copaifera da qual é extraído um óleo-resina chamado óleo de copaíba,
amplamente utilizado em diferentes regiões do país, especialmente na Região
Amazônica. Este óleo tem sido utilizado popularmente como anti-inflamatório,
cicatrizante, anti-séptico, antitumoral, dentre outras atividades. Porém, a diversidade
química de substâncias presentes no óleo, aliada as altas temperaturas da região
amazônica, favorecem processos reacionais diminuindo a estabilidade química e
terapêutica desse produto, além de dificultar a obtenção de produtos derivados com
qualidade. Sendo assim, o trabalho teve como principal objetivo desenvolver
nanocápsulas contendo óleo de C. reticulata utilizando o método de deposição
interfacial de um polímero pré-formado. Inicialmente, foram obtidos e caracterizados
diferentes óleos-resinas de copaíba (C. multijuga Hayne e C. reticulata) através das
análises físico-quimicas: densidade, índice de refração, viscosidade e análise
cromatográfica. Para o desenvolvimento das nanocápsulas foi utilizado um
planejamento fatorial do tipo 22, replicado, onde foi avaliado a influência de dois tipos
de polímeros (Poli-ε-caprolactona e Poli-ácido láctico co-glicólico) e duas diferentes
concentrações do óleo-resina de C. reticulata (2,5% e 5,0%), sobre o diâmetro médio de
partícula, o potencial zeta e o pH das nanocápsulas obtidas. Além disso, as mesmas
foram caracterizadas através da distribuição do diâmetro médio das partículas, índice de
polidispersão, comportamento reológico, taxa de encapsulação e, realização de um
estudo preliminar de estabilidade por um período de 120 dias. O estudo de
caracterização físico-química dos óleos de C. multijuga e C. reticulata mostrou que há
uma diferença significativa entre alguns parâmetros estudados com variações intra e
entre espécies. O constituinte majoritário para o óleo de C. reticulata foi o β-bisaboleno
e para os diferentes óleos de C. multijuga estudados o constituinte principal foi o βcariofileno.
A preparação e a caracterização das nanocápsulas apresentaram parâmetros
adequados para as mesmas, mostrando, inclusive, uma estabilidade preliminar. As
nanocápsulas contendo 2,5% do óleo-resina de copaíba e formadas pelo polímero poliε-caprolactona
apresentaram, de modo geral, os melhores parâmetros físico-químicos.
Assim, foi possível obter nanocápsulas contendo C. reticulata Ducke dentro de
parâmetros aceitáveis, os quais precisam ainda ser otimizados a fim de proporcionar a
elaboração futura de uma forma farmacêutica final.
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Transcriptoma de Copaifera multijuga Hayne: montagem e anotaçãoSantos, Eliane Carvalho dos, 92992076273 05 February 2018 (has links)
Submitted by Taiwany Oliveira (taiwanyrodriguess@gmail.com) on 2018-10-22T14:08:28Z
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Previous issue date: 2018-02-05 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Copaifera multijuga Hayne is a large plant species, popularly known as copaiba,
native to Latin America and Africa. They are widely used in Amazonian folk
medicine, due to the properties of oleoresin extracted from the trunk of their
trees, mainly used as: diuretic, laxative, anti-tetanic, anti-inflammatory,
antitussive, healing and anti-tumor. Therefore, it is of great importance for
research aimed at identifying in plants substances with potential medical and
biotechnological purposes. Therefore, this work aimed to search for the
transcriptome of C. multijuga Hayne, which was sequenced using the Roche
454 platform, obtaining a total of 638,576 reads, assembled using the de novo
methodology using the MIRA and TRINITY platforms. Being generated, from
the assembly by TRINITY 53.319 contigs and 62.839 by assembly MIRA. The
transcriptome annotation was performed using BLASTx (NCBI) and the
functional annotation through the Gene Ontology (GO) bank. The results were
categorized according to GO, where the contigs were grouped in the categories:
"Cell Component" with 6.249 contigs involved in this category, "Molecular
Function" with a total of 17.208 contigs and "Biological Process" with 9,499
contigs. In the three categories the contigs evidenced are involved in the
primary plant metabolism. A total of 184 unigenes were detected in 22 clusters,
mainly involved in responses to plant oxidative stress, terpenes, important
metabolites involved in the formation of copaiba oleoresin, diterpenes (resinous
portion of oleoresin) and sesquiterpenes (volatile components of oil) and
unigenes related to vegetal pigmentation such as: flavonoids, carotenoids and
anthocyanins. In phylogenetic analysis, evolutionary comparisons of terpene
synthase enzymes, copaiba oil formation components, with enzymes from the
NCBI database were made. C. multijuga TPS4-2 unigene had similarity to other
Copaifera TPS4-2 terpene sequences available from the bank. Thus, in this
work the transcriptome of C. multijuga was carried out with new assembly and
annotation, which leads to the perspective of studies with the unigenes
encoding enzymes components of the oleoresin evidenced in this work, aiming
with this future research for biotechnological purposes. / Copaifera multijuga Hayne é uma espécie de planta de grande porte,
popularmente conhecida como copaíba, nativa da América Latina e da África.
São amplamente utilizadas na medicina popular amazônica, devido as
propriedades do óleo-resina extraído do tronco de suas árvores, utilizado
principalmente como: diurético, laxativo, antitetânico, anti-inflamatório,
antitussígeno, cicatrizante e anti-tumoral. Sendo, portanto, de grande
importância para pesquisas que visem identificar nas plantas substâncias com
potenciais finalidades médicas e biotecnológicas. Por isto, este trabalho visou
pesquisar o transcriptoma de C. multijuga Hayne, o qual foi sequênciado
utilizando a plataforma 454 Roche, sendo obtido um total de 638.576 reads,
montados através da metodologia de novo com auxílio das plataformas MIRA e
TRINITY. Sendo gerados, a partir da montagem por TRINITY 53.319 contigs e
62.839 pela montagem MIRA. A anotação do transcriptoma foi realizada
utilizando BLASTx (NCBI) e a anotação funcional através do banco Gene
Ontology (GO). Os resultados obtidos foram categorizados de acordo com GO,
onde os unigenes foram agrupados nas categorias: “Componente Celular” com
6.249 contigs envolvidos nesta categoria, “Função Molecular” com total 17.208
contigs e “Processo Biológico” com 9.499 contigs. Nas três categorias os
contigs evidenciados estão envolvidos no metabolismo primário vegetal. Já do
metabolismo secundário foram detectados 184 unigenes, sendo organizados
em 22 clusters, envolvidos principalmente em respostas ao estresse oxidativo
vegetal, compostos terpenos, importantes metabólitos envolvidos na formação
do óleo-resina de copaíba, diterpenos (porção resinosa do óleo-resina) e
sesquiterpenos (componentes voláteis do óleo) e unigenes relacionados com a
pigmentação vegetal tais como: flavonóides, carotenóides e antocianinas. Na
análise filogenética foram feitas comparações evolutivas de enzimas de
terpenos sintases, componentes de formação do óleo de copaíba, com
enzimas do banco de dados NCBI. O unigene de TPS4-2 de C. multijuga
mostrou-se mais próximo a outras sequências de terpenos TPS4-2 de
Copaifera disponíveis no banco. Com isto, neste trabalho realizou-se o
transcriptoma de C. multijuga com a montagem de novo e anotação o que leva
a perspectiva de estudos com os unigenes codificadores de enzimas
componentes do óleo-resina evidenciados neste trabalho, visando com isto
futuras pesquisas para fins biotecnológicos.
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Estudo dos metabólitos de Aspergillus fumigatus visando o isolamento de uma substância bioativa contraSilva, Emily Marcele Soares 10 July 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-07-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tuberculosis (TB) caused by Mycobacterium tuberculosisis one of the most lethal diseases in the world, causing millions of deaths every year. Due to the inadequate treatment and the emergence of multidrug-resistant strains, the search for new antimicrobial compounds have been often reported in the scientific literature. Drugs developed from natural products have been a frequent research target and promising results have been obtained with the discovery of antimicrobial compounds synthesized by endophytic microorganisms. Previous work demonstrated that an endophytic Aspergillus fumigatusspecies,isolated from Copaifera multijugaHayne (copaíba), produces antimicrobial compounds, which are released into the growth substrate. The direct use of this substrate (fermentation broth) in antibiosis assaysagainst M. tuberculosisin vitro allowed detectingantimicrobial activity against the pathogen when compared to the negative control. So, the objective of this work was the analysis and purification of these compounds by the fractionation of A. fumigatusmutant and non-mutantfermentation broth, aiming the selection of fractions with higher capacityfor inhibitM. tuberculosis. Mutants were obtained by the induction of the fungal culture to ultraviolet lightexposition. The wild and mutant derivatives isolateswere tested for antibiosis against the indicator organism, Staphylococcusaureusandthe antimicrobial activity has been evaluated by comparing in vitro antibiosis assaysand fungal extractson n-butanol by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). After, n-butanolextracts of wild isolates were subjected to fractionation by Medium PressureLiquid Chromatography (MPLC), and the fractions were evaluated against M. smegmatis. After this test, the fractions that showed antagonistic activity were selected for testing against M. tuberculosis, and analyzed in analyticalHPLC. Among 18 mutants selected, eight showed antagonismagainst S. aureus. A peak with less than a minute of retention was correlated with the antimicrobial activity. On the fractionation, 30 fractions were obtained and among these, only two (F4 and F13) showed activity against M. smegmatisandonly F4 showed antagonism against M. tuberculosiswith an MIC of 256µg/mL. The chromatograms of both F4 andF13 showedpeaks atthe beginning of the analysis. The F4chromatogram showedtwo peaks with retention times of 2.1 and 2.4 minutes. These data will be useful in future optimization and purification of compounds / A tuberculose (TB), causada por Mycobacterium tuberculosisé uma das enfermidades mais letais do mundo, causando milhões demortes todos os anos. Devido aos tratamentos inadequados e ao surgimento de cepas multirresistentes aos fármacos utilizados nos tratamentos, a busca por novos compostos antimicrobianos tem sido reportada com freqüência na literatura científica. Fármacos desenvolvidos a partir de produtos naturais têm sido um alvo frequente de pesquisa e dentre as perspectivas, resultados promissores têm sido obtidos com a descoberta de compostos antimicrobianos sintetizados por micro-organismos endofíticos. Trabalhos anteriores demonstraram que um fungo endofítico da espécie Aspergillus fumigatusisolado de Copaifera multijuga Hayne (copaíba), produz compostos antimicrobianos, os quais são secretadospara o substrato de crescimento. A utilização direta desse substrato (caldo de fermentação) em testes de antibiose in vitro contra M. tuberculosispermitiram detectar sua atividade antimicrobiana contra o patógeno, quando comparadaao controle negativo. Partindo desse resultado, foi objetivo do presentetrabalhoproceder à análise e purificação desses compostos, através do fracionamento do caldo de fermentação de A. fumigatusmutantes e não mutantes, visando à seleção de frações que apresentem maiorcapacidade de inibição contra M. tuberculosis.Induziu-sea mutação do isolado selvagempor meio da exposição da cultura fúngica à luz ultravioleta. O isolado selvagem e os mutantes derivados desse isolado foram testados quanto à antibiose contrao micro-organismoindicador,Staphylococccusaureus, tendo sido a atividade antimicrobianaavaliada por meio de comparações entre os testes de antibiose in vitroe os cromatogramas dos extratos fúngicos fracionados em n-butanolpor Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Após isso, extratos em n-butanolde isolados selvagens foram submetidos ao fracionamento químico por Cromatografia Líquida de Média Pressão (MPLC)e as frações obtidas foram avaliadas contra M. smegmatis. Após este ensaio, as frações que apresentaram antagonismo foram selecionadas para o ensaio contra M. tuberculosis, além de serem analisadasem CLAEAnalítica. Foram selecionadas 18 colônias mutantes e destas, oito apresentaram antagonismo contra S. aureus. A partir da análise dos cromatogramas dos isolados, correlacionou-se à atividade antimicrobiana um pico com menos de um minuto de retenção.No fracionamento químico, foram obtidas 30 frações e destas,apenas duas (F4 e F13)apresentaram atividade contra M. smegmatis.Das duas frações, apenas F4 apresentou antagonismo frente a M. tuberculosiscom CIM de 256µg/mL. Os cromatogramas, tanto de F4 quanto de F13, apresentampicos no início da análise. O cromatograma de F4 mostra dois picos, com tempos de retenção de 2,1 e 2,4 minutos. Esses dados iniciais auxiliarão na otimização e futurapurificação dos compostos.
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Desenvolvimento de nanopartículas lipídicas sólidas contendo óleo de copaíba (Copaifera spp.) e avaliação da atividade cicatrizante in vivoCardoso, Anne Caroline Andrade 17 March 2017 (has links)
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Cardoso, Anne Caroline Andrade [Dissertação, 2015].pdf: 2526847 bytes, checksum: cfd28220b17d8b2ff298484cd3255f92 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T17:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Cardoso, Anne Caroline Andrade [Dissertação, 2015].pdf: 2526847 bytes, checksum: cfd28220b17d8b2ff298484cd3255f92 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nanopartículas Lipídicas Sólidas (NLS) são sistemas de liberação de fármacos promissores e podem ser simplificadamente descritos como nanoemulsões em que a fase interna consiste em lipídeos no estado sólido. Esses nanossistemas podem facilmente encapsular produtos de origem natural como óleos essenciais e fixos. Tendo em vista as inúmeras propriedades farmacológicas do óleo de copaíba (Copaifera spp.), em destaque a utilização como cicatrizante de feridas, elaborou-se um planejamento experimental do tipo fatorial fracionado para o desenvolvimento de NLS contendo este óleo e avaliou-se a atividade cicatrizante in vivo. Sete formulações foram preparadas utilizando diferentes combinações das variáveis: tempo de ultrassom, amplitude da potência do ultrassom e razão entre ativo e lipídeo. A influência das mesmas para determinação da melhor formulação foi investigada frente os parâmetros de resposta: diâmetro hidrodinâmico médio de partícula (Z-ave) e conteúdo de óleo encapsulado (CO). A atividade cicatrizante foi avaliada apela aplicação da formulação (NC), por cinco dias, em lesões cutâneas na região dorsal de camundongos utilizando grupos comparativos em que foi administrada solução salina fisiológica (S), óleo mineral (OM), solução de óleo de copaíba (SCT) e NLS sem óleo (N). Somente a razão ativo/lipídeo parece ter influência sobre o CO, e embora nenhuma das variáveis estudadas tenha relação linear com o Z-ave, verificou-se que o tempo e a amplitude do ultrassom tem influência negativa e a quantidade de óleo empregado na formulação tem influência positiva sobre esse parâmetro. A melhor formulação consistiu na utilização dos maiores valores das variáveis estudadas: 50% da razão ativo/lipídeo, 10 min de tempo de ultrassom e 50% de amplitude do ultrassom, e apresentou Z-ave de 208,0 ± 2,10 nm, índice de polidispersidade (IP) de 0,315± 0,012, potencial zeta (PZ) de –14,1 ± 0,40 mV, CO de 143,31 ± 11,80 mg de óleo/g de NLS e eficiência de encapsulamento (EE) 62,10 ± 5,12%. Os espectros de infravermelho (IV), a análise térmica diferencial (ATD) e o perfil de liberação in vitro do óleo, sugerem que o mesmo foi eficazmente encapsulado sem indicar a presença de óleo adsorvido à superfície da NLS. Houve uma liberação lenta de 82,60% de óleo em 53,5 h, com a participação dos mecanismos de difusão e erosão. A formulação manteve as características físicas mencionadas após 6 meses de armazenamento à 4ºC em frasco de plástico transparente. As lesões apresentaram aumento de tamanho quando tratadas com óleo de copaíba, mas ao final do estudo, no décimo quarto dia, não houve diferença estatística entre os grupos. Dessa maneira foi possível obter uma formulação nanométrica otimizada e estável, com o menor gasto possível de recursos e tempo / Solid Lipid Nanoparticles (SLN) are promising drug release systems, and may be described in a simplified manner as nanoemulsions which the internal phase consists of lipid in a solid state. These nanosystems can easily encapsulate natural products as essential and fixed oils. Due to the numerous pharmacological properties of Copaiba oil (Copaifera spp.), with emphasis on the wound healing, a fractional factorial experimental design was elaborated for the development of SLN containing this oil, and the wound healing activity in vivo was evaluated. Seven formulations were prepared using different combinations of the variables: ultrasound time, ultrasound amplitude and oil/lipid ratio. The influence thereof were investigated in the response parameters, mean hydrodynamic particle diameter (Z-ave) and content of encapsulated oil (CO) in order to determine the best formulation. The wound healing activity was evaluated by applying the copaiba loaded SLN (NC) for five days in the dorsal cutaneous lesions in mice, using comparative groups in which were administered physiological saline solution (S), mineral oil (MO), copaiba oil solution (SCT) and unloaded SLN (N). Only the oil/lipid ratio seems to influence the CO, and although none of the studied variables showed linear relationship with the Z-ave, it was found that the time and amplitude of ultrasound has a negative influence and the amount of oil used in the formulation has positive influence on this parameter. The best formulation consisted on the highest values of the studied variables: 50% oil/lipid ratio, 10 min of ultrasound time, 50% of ultrasound amplitude and showed Z-ave of 208.0 ± 2.10 nm, polydispersity index (PI) of 0.315 ± 0.012, zeta potential (ZP) of -14.1 ± 0.40 mV, CO of 143.31 ± 11.80 mg of copaiba oil/g of SLN and entrapment efficiency (EE) of 62.10 ± 5.12% Infraredspectra (IR), differential thermal analysis (DTA) and the in vitro oil release profile, suggested that it was effectively encapsulated with no indication of adsorbed oil on the SLN surface. There was a slow release of 82.60% of oil in 53,5h, with the participation of diffusion and erosion mechanisms. The formulation maintained the physical characteristics described after 6 months of storage in a transparent plastic bottle. Lesions had size increased when treated with copaiba oil, nevertheless, at the end of the study, on the fourteenth day, there was no statistical difference between groups. Thereby, it was possible to obtain an optimized and stable nano-formulation, spending less time and resources as possible
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Avaliação de balanço oxidativo em cães com neoplasias mamárias e teste do óleo resina de copaíba como terapia adjuvante em ratos / Assessing the oxidative balance of dogs with mammary tummors, and the use of copaiba oil as an adjuvant thetrapy in the rat model of the diseaseFelix, Anelize de Oliveira Campello 28 February 2014 (has links)
Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-13T14:06:33Z
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Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O surgimento dos neoplasmas mamários bem como o estabelecimento das metástases está relacionado com uma série de fatores, dentre eles destaca-se a liberação de radicais livres. A paraoxanase é uma enzima produzida pelo fígado que é capaz de de remover os produtos da peroxidação lipídica. O uso de substâncias consideradas antioxidantes vem sendo uma alternativa para o combate ao estresse oxidativo. A copaíba é uma planta usada com várias finalidades e atualmente autores atribuem a ela potencial antioxidante. O objetivo deste trabalho foi estabelecer o perfil oxidativo de cães portadores de tumor de mama e avaliar o uso do óleo resina de copaíba como terapia adjuvante no tratamento de modelos biológicos portadores de tumores mamários induzidos quimicamente. Foram coletadas amostras sanguíneas de 50 cães com tumores mamários, onde foi verificado a atividade da enzima PON1 e a capacidade antioxidante total (CAT). O uso do óleo resina de copaíba foi estudado em ratos Wistar com e sem tumores induzidos, nos quais foi avaliado os níveis de enzimas hepáticas e também a atividade da PON1. Foram também realizados testes de citotoxicidade in vitro com diferentes concentrações do óleo resina de copaíba. Foi possível observar que cães com tumor de mama apresentam redução na atividade da enzima PON1 e também na CAT. O óleo resina de copaíba apresentou capacidade de inibir o crescimento de linhagens celulares de tumor de mama, entretanto, este estudo não pode definir sua atividade no controle destes tumores in vivo. / The occurrence of mammary tumors, as well as metastatic establishment, is associated with a series of factors, foremost among which are free radicals. Paraoxanase is an enzyme produced by the liver, capable of removing by products of lipid peroxidation. The use of antioxidant substances is becoming an alternative measure in combating oxidative stress. Copaiba oil is used for various medical reasons, and it is believed to have antioxidant potential. In this light, this study assesses the oxidative profile of dogs suffering from mammary tumors, and evaluates the viability of using copaiba oil as an adjuvant in treating this disease. Blood samples from 50 dogs with mammary tumors were obtained and PON1 activity and total antioxidant capacity (TAC) assessed. The use of copaiba oil was also assessed regarding its safety and action in a rat model for mammary tumors. PON1 activity and hepatic function was also assessed. Furthermore, copaiba oil was assessed in vitro regarding its toxicity in normal or cancerous cell lines. Dogs with mammary tumors had lower levels of PON1 activity than healthy peers, and the TAC was directly correlated. Copaiba oil did inhibit cancerous cell growth in vitro, but this study could not determine its effects in tumors in vivo.
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Desenvolvimento e avaliação de nanoemulsões com óleos de Carapa guianensis e Copaifera sp. e estudo da ação repelente frente a Aedes aegypti. / Development and evaluation of nanoemulsions with Carapa guianensis and Copaifera sp. oil, and evaluation of repellency against Aedes aegyptiOliveira, Bianca Rodrigues de 24 October 2008 (has links)
As doenças transmitidas por mosquitos representam uma das maiores causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, principalmente em países tropicais. O uso tópico de repelentes em determinadas situações torna-se a única alternativa para evitar o ataque por estes artrópodes. Os óleos de andiroba (Carapa guianensis) e copaíba (Copaifera sp.) possuem relatos de atividade repelente de insetos, podendo representar uma alternativa segura ao uso de repelentes sintéticos que apresentam riscos de toxidade em determinados casos. O objetivo desta pesquisa foi desenvolver nanoemulsões O/A, utilizando como fase oleosa os óleos de copaíba e andiroba, e testar in vivo a atividade repelente das mesmas frente ao mosquito Aedes aegypti, realizando um estudo comparativo com repelente comercial a base de DEET. Ensaios para avaliar os parâmetros físico-quimicos envolvidos no processo de obtenção das nanoemulsões, e estudos de sua estabilidade preliminar, também foram realizados. Os resultados apontam a viabilidade do método de emulsificação utilizando baixa energia na formação de nanoemulsões. A temperatura, velocidade de agitação, ordem de adição dos componentes e quantidade de tensoativo na formulação, demonstraram ser fatores críticos no processo. Foi possível obter três nanoemulsões estáveis com tamanho de glóbulos inferior a 300nm, sendo uma com 15% de óleo de andiroba; outra contendo 10% de óleo de copaíba e a terceira associando 10% de andiroba e 5% de copaíba. No ensaio repelente utilizando voluntários humanos, foi constatado que as nanoemulsões compostas de óleo de andiroba e óleo de andiroba adicionado de óleo de copaíba são capazes de repelir mosquitos Aedes aegypti por um período de 30 minutos, sendo estes resultados estatisticamente significativos em relação ao grupo controle. / Mosquito-borne diseases remain a major source of illness and death worldwide, particularly in tropical countries. Mosquito repellents may be one of the most effective tools for protecting humans from vector-borne diseases. In many circumstances, applying repellent to the skin may be the only feasible way to protect against insect bites. The oils from andiroba (Carapa guianensis seed oil) and copaíba (Copaifera oil) have been studied as possible mosquito repellents. These products can be represents a safe alternative in the use of synthetic repellent, that have toxic risks in some cases. The goals of this research were to development O/A nanoemulsion using andiroba seed oil and copaíba oil and test their repellent action in vivo against bites Aedes aegypti. This study compares the repel effectiveness of nanoemulsions developed in relation to the market product of DEET. Assays to evaluate the parameters involved physicist-chemistries in the process of attainment of the nanoemulsions, and studies of its preliminary stability, had been also carried through. The results showed viability of the emulsification method using low energy in the formation of nanoemulsions. The temperature, speed of agitation, order of addition of the components and amount of surfactant in the formulation, had demonstrated to be critical factors in the process. In this study, it was possible get three stable nanoemulsion with droplets size less than 300nm, using: 15% andiroba seed oil; 10% copaiba oil and mix of andiroba seed oil (10%) and copaíba oil (5%). The repellent test with human voluntaries proves that nanoemulsions with andiroba seed oil, and the mix of andiroba seed oil and copaiba oil, are able to repel Aedes aegypti for 30 minutes period, witch are statistic signification compared to the control group.
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