This study verified the effect of late clamping (from 1 to 3 minutes after it is born) of the umbilical cord on the levels of hemoglobin, hematocrite and ferritine in children at birth, at three months and at six months and, still, the levels of bilirubins at the end of the first week of life, in order to detect cases of hyperbilirrubinemia. One hundred and eleven babies born at the University Hospital of santa Maria, RS, not only by vaginal birth by also by caesarian surgery and clinically healthy were used (45 ones were subjected to the early clamping and 66 ones to the late clamping). The collect of venous blood of the babies on their first day was made in the maternity and, the other collects were taken in returns to the laboratories of clinical analysis. The mothers socio-economical variants and the babies nutritional habits were also studied. the program Statsoft Statistica v 7.0.61.0EN was used to analyze the data statistically and the results were expressed on their averages. The hemoglobine and the hematocrite from the babies subjected to the late clamping were significantly superior to the values presented by the babies subjected to the early clamping, on their first day of life. There was no significant difference in the dosage of total bilirubin and fractions of babies according to the time of clamping as well as there was no case of hyperbilirrubinemia and the levels of ferritine of the children subjected to the late clamping showed to be superior to the ones presented by those children subjected to the early clamping in the third and in the sixth months. Thus, it is noticed that the late clamping might be a strategy to prevent the anemia because of iron defficiency in infants. / Este estudo verificou o efeito do pinçamento tardio (de 1 a 3min após o nascimento) do cordão umbilical sobre os níveis de hemoglobina, hematócrito e ferritina em crianças no nascimento, aos três meses e aos seis meses e, ainda, os níveis das bilirrubinas ao final da primeira semana de vida, para detectar casos de hiperbilirrubinemia. Foram alocados 111 bebês a termo nascidos no Hospital Universitário de Santa Maria, RS, tanto de parto vaginal quanto cesárea e clinicamente saudáveis (45 foram submetidos ao pinçamento precoce e 66 ao pinçamento tardio). A coleta de sangue venoso dos bebês no primeiro dia de vida foi efetuada na maternidade e as coletas posteriores foram realizadas em retornos ao laboratório de análises clínicas do hospital. Variáveis socioeconômicas da mãe e de alimentação da criança também foram estudadas. Utilizou-se o programa Statsoft Statistica v 7.0.61.0EN para a análise estatística dos dados e os resultados foram expressos em média. A hemoglobina e o hematócrito dos bebês submetidos ao pinçamento tardio do cordão umbilical foram significativamente superiores aos valores apresentados pelos bebês submetidos ao pinçamento precoce, no primeiro dia de vida. Não houve diferença significativa na dosagem da bilirrubina total e frações dos bebês de acordo com o tempo de pinçamento, assim como, não houve nenhum caso de hiperbilirrubinemia e os níveis de ferritina das crianças submetidas ao pinçamento tardio mostraram-se superiores aos apresentados pelas crianças submetidas ao pinçamento precoce no terceiro e no sexto mês. Assim, constatou-se que o pinçamento tardio do cordão umbilical pode se constituir em uma estratégia para prevenir a anemia por deficiência de ferro em lactentes.

The umbilical cord, the most important connection between fetus and placenta, which is re-sponsible for the development and maintenance of the intrauterine life, consists of a spiral structure whose blood vessels carry nutrients from mother to fetus, and catabolites from fetus to mother. Studies on number of coiling on the umbilical cord have not been relevant in the current literature. In other words, this funicular parameter is undervalued by the specialist medical community. However, some studies show an association between umbilical cord coiling and adverse perinatal outcomes. This is an analytical cross-sectional study aimed to assess the umbilical cord coiling index (UCI) during the postpartum period, and relate the UCI with perinatal outcomes in pregnant women admitted to have their births at HUSM, from June to October, 2012. A coil was defined as a complete 360 degree spiral course of the umbilical vessels around the Wharton s jelly. The UCI was defined by being the relation between the number of spirals and the length of the cord, and the values found between the 10th and 90th percentile were considered as within the limits of normality. For values under P10, the umbilical cord was hypocoiled and over P90, hypercoiled. Two hundred fifty two placentas and their cords were evaluated, but 179 births were considered for the analysis of perinatal outcomes. The average UCI was 0.17 ± 0.86 coils/cm while the hypocoiling (UCI<0.05 coils/cm) and hypercoiling (UCI> 0.28 coils/cm) represented 8.4% (n = 21) and 8.8% (n = 22) respectively. There was a significant correla-tion between the UCI and the Apgar score at 1 and 5 minute (p <0.05). Among preterm newborns, 26.3% had abnormal coiling. Among small for gestational age (SGA) 26,6% had abnormal coiling too. Only one death occurred in utero and the umbilical cord was hypercoiled (UCI = 0.42 coils/cm). There was no correlation or association between the IEC and other perinatal outcomes, such as meco-nium staining amniotic fluid, fetal distress, intrauterine growth restriction (IUGR), neonatal intensive care unit (NICU) admission and neonatal death. The results allow to conclude that the UCI can relate to adverse perinatal outcomes, although few of them in this study had statistical significance, which may be attributed to the sample size, addressing the need for further study on the subject. / O cordão umbilical, conexão mais importante entre o feto e a placenta, a qual é responsável pelo desenvolvimento e manutenção da vida intrauterina, consiste numa estrutura espiralada cujos vasos sanguíneos transportam nutrientes da mãe para o feto e catabólitos do feto para a mãe. Estudos sobre o número de espirais do cordão umbilical não têm tido relevância na literatura atual, ou seja, este parâmetro funicular é pouco valorizado pela comunidade médica especializada. No entanto, alguns estudos evidenciam a associação entre o espiralamento e os desfechos adversos perinatais. O objetivo deste estudo, transversal e analítico, foi o de avaliar o Índice de Espiralamento do Cordão umbilical (IEC) após o parto e relacioná-lo com desfechos perinatais nas gestantes admitidas para parto no Hospital Universitário de Santa Maria entre junho e outubro de 2012. Uma espiral foi definida como uma volta completa do cordão em torno da geleia de Warton. O IEC foi definido como a relação entre o número de espirais e o comprimento do cordão umbilical, sendo que os valores encontrados entre os percentis 10 e 90 foram considerados dentro dos limites de normalidade. Para valores abaixo do P10, o cordão umbilical era hipoespiralado e acima do P90, hiperespiralado. Foram avaliadas 252 placentas e seus cordões, sendo que, para a análise dos desfechos perinatais, 179 nascimentos foram considerados. O IEC médio foi de 0,17±0,86 espirais/cm, enquanto o hipoespiralamento (IEC<0,05 espirais/cm) e o hiperespiralamento (IEC>0,28 espirais/cm) representaram 8,4% (n=21) e 8,8% (n=22) respectivamente. Houve correlação significante entre o IEC e o índice de Apgar de primeiro e de quinto minuto (p<0,05). Dos recém-nascidos pré-termo, 26,3% tinham um IEC anormal, assim como 26,6% dos pequenos para a idade gestacional. No único óbito ocorrido in útero, o cordão era hiperespiralado (IEC=0,42 espirais/cm). Não houve correlação ou associação entre o IEC e outros desfechos perinatais, tais como presença de mecônio no líquido amniótico, sofrimento fetal agudo, crescimento intrauterino restrito, internação em UTI neonatal e óbito neonatal. Os resultados permitem concluir que o IEC pode se relacionar a desfechos perinatais adversos, embora no presente estudo poucos deles tivessem significância estatística, fato que pode ser atribuído ao tamanho da amostra estudada, o que remete para a necessidade de novos estudos a respeito.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-10Bitstream added on 2015-01-26T13:30:37Z : No. of bitstreams: 1 000793044_20160731.pdf: 99971 bytes, checksum: 8ad7de8362aa1813828c219bcb43b617 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-01T11:29:57Z: 000793044_20160731.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-01T11:30:55Z : No. of bitstreams: 1 000793044.pdf: 846665 bytes, checksum: 7b1e08d3b9f1e489fd31f5d654c44a76 (MD5) / As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos, e por isso são atrativas para a terapia celular, pois possuem alto potencial de diferenciação e proliferação, sendo assim, utilizadas na reconstrução tecidual. O presente experimento objetivou obter maior conhecimento sobre CTMs derivadas da membrana amniótica e cordão umbilical de cães, antes e após criopreservação, visando a formação de um banco de células. Assim, oito amostras de membrana amniótica e oito amostras de gelatina de Wharton foram obtidas de cesarianas, as quais foram submetidas a digestão enzimática, e cultivadas em meio basal. Uma porção celular, de cada amostra, foi criopreservada em 1ª passagem, de forma lenta, e armazenada por 4 semanas. As células antes e após a criopreservação foram submetidas à caracterização, onde foi observado características de adesão, proliferação, diferenciação e expressão de marcadores de superfícies utilizando-se citometria de fluxo, e imunocitoquímica. A partir destas avaliações, foi possível demonstrar que as células antes e após a criopreservação exibiram comportamento semelhante, quanto à proliferação e crescimento. A viabilidade celular da membrana amniótica apresentou 97,0% das células viáveis antes da criopreservação e 94,6% após, já a gelatina de Wharton 98,8 antes e 93,5% após a criopreservação. O potencial de diferenciação nas linhagens osteogênica e adipogênica foi mantido, no entanto foi necessário um tempo maior (p<0,05) para que as células de gelatina de Wharton se diferenciassem após a criopreservação. E ainda mantiveram a expressão de CD44, em níveis satisfatórios para que fossem consideradas positivas, onde a membrana amniótica expressou 85,6% antes e 67,8% após a criopreservação e a gelatina de Wharton expressou 86,0% antes e 82,1% após a criopreservação e a ausência de expressão ... / Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of adult tissues, and are therefore attractive for cell therapy. Because of their high potential for differentiation and proliferation, they are being used in tissue reconstruction. This experiment aimed to enrich knowledge of canine MSCs derived from umbilical cord and amniotic membrane before and after cryopreservation regarding the formation of a cell bank. Thus, eight samples of amniotic membrane and eight samples of Wharton’s jelly were obtained from dogs at birth, which were subjected to enzymatic digestion and basal medium culture. Slow freezing of a sample from each culture was held at the first passage and stored for four weeks. Before and after freezing cells were subjected to characterization being observed adhesion, proliferation, differentiation and expression of surfaces markers using flow cytometry and immunocytochemistry. Based on these analyses it was demonstrated that the cells before and after cryopreservation exhibited similar behavior for proliferation and cell growth. Cell viability of amniotic membrane showed 97.0% of viable cells before freezing and 94.6% after, and the Wharton’s jelly 98.8% before and 93.5% after cryopreservation. The potential of the osteogenic and adipogênica differentiation as well as maintained, however it required a longer time (p <0.05) for the cells from Wharton's jelly to differentiate themselves after freezing. And still maintained the expression of CD44, at satisfactory levels to be considered positive, where the amniotic membrane expressed 85.6% before and 67.8% after freezing and Wharton’s Jelly expressed 86.0% before and 82.1% after cryopreservation and absence of expression of CD34 and MHC II. A peculiar feature observed was that before and after freezing spontaneous differentiation in both lineages (osteogenic and adipogenic) occurred in the controls that were not induced to differentiation. We conclude that ...

Submitted by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2016-08-25T12:48:55Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Renata Vilela Rodrigues.pdf: 3049901 bytes, checksum: a6dc6735c6b97aaeff0a135c3ee208c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2016-08-25T15:23:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Renata Vilela Rodrigues.pdf: 3049901 bytes, checksum: a6dc6735c6b97aaeff0a135c3ee208c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2016-08-25T15:34:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Renata Vilela Rodrigues.pdf: 3049901 bytes, checksum: a6dc6735c6b97aaeff0a135c3ee208c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T15:34:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Renata Vilela Rodrigues.pdf: 3049901 bytes, checksum: a6dc6735c6b97aaeff0a135c3ee208c8 (MD5) Previous issue date: 2016-08-25 / CAPES / As utilizações de biotecnologias direcionadas à manipulação das células-tronco do cordão umbilical parecem se constituir como novas promessas para a cura de algumas patologias existentes e outras que sequer foram identificadas. Tais biotecnologias acabam por viabilizar modos de subjetividades configuradas como precaucionárias, amedrontadas e empresariais, as quais reivindicam para si o cuidado de sua saúde e a otimização da vitalidade. Na biopolítica contemporânea, as células-tronco do sangue do cordão umbilical fazem parte de uma faceta da capitalização da vida, que consiste em valoração econômica e afetiva dessa parte do corpo. Apoiado nos aportes teórico-metodológicos focaultianos e da Teoria Ator-Rede (ou estudos de Ciência, Tecnologia e Sociedade), este trabalho tem como objetivo problematizar as estratégias biopolíticas, na contemporaneidade, as quais impulsionam uma capitalização da vida nos bancos públicos e privados de células-tronco do cordão umbilical, com foco no Brasil. Nesses bancos, partes do corpo tornam-se fonte de capital, as quais se ligam a uma rede heterogênea de aparatos biotecnológicos que mobilizam biossocialidades articuladas a políticas de afetividade. Ao depositarem o sangue nos bancos privados e públicos, os pais, na medida em que estão se precavendo contra possíveis doenças futurológicas, apostam e participam dos avanços biotecnológicos da biomedicina e enredam um espaço de troca de informações, de socialidades e de afetividades mediadas principalmente por estratégias de marketing, que, mais do que certezas quanto às utilizações das células umbilicais, fomentam a segregação e as desigualdades sociais, no Brasil. / The uses of biotechnologies directed to manipulation of the umbilical cord stem cells seem to be as new promises for the cure of certain existing conditions and others have even been identified. Such biotechnologies ultimately enable subjectivities modes configured as precaucionárias, frightened and business, which claim for themselves the care of your health and the optimization of vitality. In contemporary biopolitics, the umbilical cord blood stem cells are part of a facet of the capitalization of life, which consists of economic and affective valuation of that part of the body. Supported in focaultianos theoretical and methodological contributions and the Actor-Network Theory (or studies of Science, Technology and Society), this paper aims to discuss the biopolitics strategies, in contemporary times, which drive a market capitalization of life in public and private banks stem cells from umbilical cord, with focus on Brazil. In these banks, body parts become a source of capital, which bind to a heterogeneous network of biotechnical devices that mobilize biossocialidades articulated affectivity policies. To deposit the blood in private and public banks, the parentes are being precautious against possible futurological diseases, and participate in the biotechnological advances in biomedicine and entangle an information exchange space, socialities and affectivity mediated primarily by marketing strategies, which, more than certainties as to the uses of umbilical cells, promote segregation and social inequalities in Brazil.

Submitted by Jamila Cristina Baptistella null (34429876878) on 2016-09-04T21:07:38Z No. of bitstreams: 1 Capa doutorado Pdf pronto.pdf: 2482721 bytes, checksum: 505b73636d8fa1498b06642b2343ed60 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-06T19:50:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 baptistella_jc_dr_araca.pdf: 2482721 bytes, checksum: 505b73636d8fa1498b06642b2343ed60 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T19:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 baptistella_jc_dr_araca.pdf: 2482721 bytes, checksum: 505b73636d8fa1498b06642b2343ed60 (MD5) Previous issue date: 2016-08-01 / A possibilidade para o isolamento de células mesenquimais multipotentes de anexo fetal bovino é uma perspectiva interessante devido potencial para utilização destas células em aplicações biotecnológicas. No entanto, ainda há pouco conhecimento disponível sobre as características destas células progenitoras na espécie bovina. Proliferando a morfologia das células, a partir de três fases da gestação, tipicamente apareceu forma de fuso do tipo fibroblastos, apresentando o mesmo número e viabilidade. Além disso, a capacidade proliferativa das células T em resposta a um estímulo mitogénico foi suprimida quando as células da geléia de Wharton foram incluídas na cultura. Multilinhagens foram confirmadas pela sua capacidade adipogênica, condrogénica e diferenciação neurogênica. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais colhidas a partir da geléia de Wharton do cordão umbilical de bovino em todas as fases da gestação mostraram capacidade proliferativa, potencial privilegiado e imunológico. / The possibility for isolating bovine mesenchymal multipotent stromal cells from fetal adnexa is interesting prospect because of the potential for these cells to be used for biotechnological applications. However, little knowledge is available about the characteristics of these progenitor cells in the bovine species. Proliferating cell morphology, from three stages of pregnancy, typically appeared fibroblast-like spindle shape, presenting the same viability and number. Moreover, the proliferative capacity of T cells in response to a mitogen stimulus was suppressed when Wharton’s jelly mesenchymal stem cells were included in the culture. Multilineage properties were confirmed by their ability to undergo adipogenic, chondrogenic and neurogenic differentiation. The study demonstrated that Wharton’s jelly mesenchymal stem cells harvested from bovine umbilical all pregnancy stages showed proliferative capacity, privileged and stem ness potential.

Submitted by Midyan Daroz Guastali null (midyandaroz@yahoo.com.br) on 2017-01-03T01:56:59Z No. of bitstreams: 1 Tese Midyan Daroz Guastali.pdf: 2861555 bytes, checksum: c216487663d3f87a9c02daf9609ce263 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-05T17:01:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gustali_md_dr_bot.pdf: 2861555 bytes, checksum: c216487663d3f87a9c02daf9609ce263 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-05T17:01:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gustali_md_dr_bot.pdf: 2861555 bytes, checksum: c216487663d3f87a9c02daf9609ce263 (MD5) Previous issue date: 2016-12-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As pesquisas envolvendo a biologia das células-tronco abordam um amplo espectro de fenômenos, que vão desde o nível tecidual e celular, até o seu uso em terapias celulares. Esta crescente atenção sugere que é necessário estudar conceitos básicos da biologia das células-tronco para compreender completamente os processos de diferenciação funcional. Desta forma, o instrumento da reprogramação celular por meio da manipulação gênica fornece subsídios para melhor compreender os processos de renovação e diferenciação que constituem as características fundamentais das células-tronco. A obtenção dessas células em medicina veterinária visa validar diversos modelos experimentais domésticos, como o equino, na busca de novos fármacos e terapias alternativas para reabilitação. Uma série de estudos, porém, ainda são necessários para que tais aplicações sejam viáveis, uma vez que os mecanismos fundamentais das técnicas empregadas ainda não estão totalmente elucidados. Embora a reprogramação celular por meio de vetores virais tenha sido relatada com sucesso em diversas espécies animais, outras técnicas também podem ser empregadas, como o uso de transposons, sequências de DNAs capazes de se movimentar de uma região para outra no genoma de uma célula. Não se tem conhecimento de qual o melhor tipo celular a ser utilizado, e nem tão pouco qual a metodologia de reprogramação mais eficiente. Sabe-se que o cordão umbilical possui uma reserva rica em células-tronco mesenquimais, as quais por serem multipotentes podem melhorar a eficiência de obtenção de células de pluripotência induzida (iPS) em comparação ao uso de fibroblastos, pouco eficientes ao serem reprogramados. O objetivo deste trabalho foi obter iPS por meio de mecanismo viral e não-viral de fibroblastos adultos e células do cordão umbilical equino, visando observar qual o tipo de infecção e qual o tipo de célula é mais eficiente para reprogramação celular. Ambos os tipos celulares foram infectados com vetores virais e transposons contendo os genes OCT-4, SOX-2, c-MYC, KLF-4; as células transformadas foram avaliadas quanto a morfologia, imunocitoquímica e citometria de fluxo com os marcadores típicos de células-tronco pluripotentes e também quanto as alterações causadas no perfil de expressão gênica das células pelo método de PCR em tempo real; por fim as células reprogramadas foram induzidas a se diferenciarem em tecidos dos 3 folhetos germinativos. Os resultados demostraram que tanto os fibroblastos quanto as células do cordão umbilical submetidos à infecção viral apresentaram características de células pluripotentes como morfologia característica, marcação positiva para fatores de pluripotência e expressão gênica específica. Os corpos embrióides formados também apresentaram marcação imunocitoquimica para ectoderme, mesoderme e endoderme. Apesar do tempo para inicio da formação das colônias serem parecidos (7 dias para os fibroblastos e 6 dias para as células do cordão umbilical), a expansão das colônias dos fibroblastos reprogramados foi lenta, com a 1ª passagem realizada 30 dias após a infecção em comparação com as colônias de cordão umbilical, nas quais a 1ª passagem foi realizada após 15 dias. Não foi verificada reprogramação efetiva as infecções com transposons em nenhum dos dois tipos celulares. Conclui-se que o método de infecção por vetor viral em células do cordão umbilical é mais eficiente do que em fibroblastos e que em ambos os tipos celulares, o mecanismo de transposons não resultou em células reprogramadas. / Researches on the biology of stem cells cover a broad spectrum of phenomena, ranging from tissue and cellular level, to their use in cell therapy. This growing attention suggests that is necessary to study basic concepts of stem cells organization in order to fully understand the functional differentiation processes. Thus, the cell reprogramming through gene manipulation provides grants to better understand the processes of renewal and differentiation which are the essential characteristics of stem cells. Obtaining these cells in veterinary medicine aims to validate various household experimental models, such as horses, on the search for new drugs and alternative therapies for rehabilitation. However, a number of studies is still necessary for such applications to be feasible, since the fundamental mechanisms of techniques employed are not fully elucidated yet. Although cell reprogramming using viral plasmid has been reported with success in several animal species, other techniques may also be employed, such use transposons, this is, DNAs sequences capable of moving from one region to another in the cell genome. The unawereness of what the best cell type to be used, and nor what is the most efficient reprogramming methodology. It is known that the cord has rich reserves mesenchymal stem cells, which are multipotent and can improve the efficiency of obtaining the induced Pluripotent Stem Cells (iPS) compared to the use of fibroblast, inefficient to be reprogrammed. The aim of this study was to obtain iPS through viral transfection and non-viral adult fibroblasts and equine cord cells, aiming to observe which transfection and cell type is more efficient for cell reprogramming. Both cell types was infected with viral vectors and transposons containing the genes OCT-4, SOX-2, c-MYC, and KLF-4; transformed cells were evaluated for morphology, immunocytochemistry and flow cytometry with the typical pluripotent stem cells markers and also for the changes caused in the gene expression profile of the cells by the PCR real time method; finally reprogrammed cells were induced to reprogram to differentiate into three germ layers tissues. The results showed that fibroblasts and cord cells subjected to viral infection presented pluripotent cell characteristics such as morphology, positive staining for antibodies and specific gene expression, immunocytochemistry of the formed embryoid bodies also showed labeling for ectoderm, mesoderm and endoderm. Despite the time to start colonies formation is very similar (7 days for fibroblasts and 6 days for cord cells), the expansion of reprogrammed fibroblasts colonies was slow, with the 1st performed 30 days post-infection in comparison with umbilical cord colonies, in which the 1st pass on cord colonies after 15 days. No effective reprogramming of transposon infections was observed in either cell type. It is concluded that the method of viral vector infection in umbilical cord cells is more efficient than in fibroblasts and that in both cell types, the mechanism of transposons did not result in reprogrammed cells. / FAPESP: 2012/18735-4

Made available in DSpace on 2015-09-18T02:07:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000474864-Texto+Completo-0.pdf: 4783570 bytes, checksum: 1da454a8aaea971c62e4fff0a6d841a2 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction : The cellular and physiological changes that accompany the aging process has pronounced effects in neurodegenerative diseases. Factors that produce neurodegeneration do so through different processes that culminate in a common signaling pathway cascade. Stem cells communicate via cellular signaling mechanisms, which is part of a complex system which governs and coordinates activities and cell functions. Understanding the mechanisms and forms of intercellular communication and their relationship in the activation of signaling cascades from the surface receptor to the cell nucleus during neurogenesis, will answer some pertinent questions to the mechanisms of action of stem cells in repair central nervous system. Objective : This study aimed to determine which RTKs being activated during neurogenesis of adult stem cells from human umbilical cord tissue. Methods : Adult stem cells were obtained from human umbilical cord tissue (n = 3) and subjected to specific inducers in neurodifferentiation means. The kit Human Phospho-RTK Array was used for evaluating the phosphorylation of the RTK and the expression determined by realtime PCR. Results : The mesenchymal stem cells obtained from umbilical cord tissue were confirmed by differentiation induction in adipocytes and osteocytes cells. The neurodifferentiation was confirmed by expression of genes that are expressed during neurogenesis in cells and neural cells, as well as immunocytochemistry technique markings which showed nuclear (DAPI) and cell processes (Fluoropan). During the neuroinduction processes and neurodifferentiation the phosphorylation levels of RTKs were variable, with no clear pattern. The Ryk receptor showed no significant changes in their levels of phosphorylation of the three samples studied and the different stages of differentiation, ie, mesenchymal, neuroinductions and neurodifferentiates cells. Conclusions : The tyrosine kinases are actively being phosphorylated during neuroinduction and neurogenesis, with varying standards between the different stages and between different samples, reflecting the variability of human adult stem cells. / Introdução : As alterações celulares e fisiológicas que acompanham o processo de envelhecimento tem efeitos pronunciados nas doenças neurodegenerativas. Os fatores que produzem neurodegeneração o fazem através de diferentes processos, que culminam em uma via comum de cascata de sinalização. As células-tronco se comunicam por mecanismos de sinalização celular, que faz parte de um complexo sistema que governa e coordena as atividades e funções celulares. Compreender os mecanismos e as formas de comunicação intercelular e a sua relação na ativação das cascatas de sinalização, desde o receptor de superfície até o núcleo celular, durante a neurogênese, permitirá responder algumas questões pertinentes aos mecanismos de ação das células-tronco no reparo do sistema nervoso central. Objetivo : Este estudo teve como objetivo determinar quais os RTKs que estão sendo ativados durante a neurogênese de células-tronco adultas de tecido de cordão umbilical humano. Metodologia : Células-tronco adultas foram obtidas de tecido de cordão umbilical humano (n=3) e submetidas a neurodiferenciação em meios indutores específicos. O kit Human Phospho-RTK Array foi utilizado para avaliação da fosforilação dos RTKs e a expressão determinada por PCR em tempo real. Resultados : As células-tronco mesenquimais obtidas do tecido do cordão umbilical foram confirmadas através da indução de diferenciação em células adipócitas e osteócitas. A neurodiferenciação foi confirmada através da expressão de genes que são expressos nas células durante a neurogênese e em células neurais, como também a técnica de imunocitoquímica que mostrou marcações nucleares (DAPI) e prolongamentos celulares (Fluoropan). Durante os processos de neuroindução e neurodiferenciação os níveis de fosforilação dos RTKs foram variáveis, sem um padrão definido. O receptor Ryk não apresentou alterações significativas nos seus níveis de fosforilação entre as três amostras estudadas e nas diferentes etapas de diferenciação, isto é, células-tronco mesenquimais, células neuroinduzidas e células neurodiferenciadas. Conclusões : Os receptores tirosina quinases estão sendo ativamente fosforilados durante a neuroindução e neurogênese, com padrões variáveis entre as diferentes etapas e entre diferentes amostras, refletindo a variabilidade das células-tronco adultas humanas.

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca:Marcos Antonio Maioli / Banca:Roberto Gameiro de Carvalho / Banca:Marcos Roberto Bonuti / Banca:Luiz Eduardo Correa Fonseca / Resumo: A possibilidade para o isolamento de células mesenquimais multipotentes de anexo fetal bovino é uma perspectiva interessante devido potencial para utilização destas células em aplicações biotecnológicas. No entanto, ainda há pouco conhecimento disponível sobre as características destas células progenitoras na espécie bovina. Proliferando a morfologia das células, a partir de três fases da gestação, tipicamente apareceu forma de fuso do tipo fibroblastos, apresentando o mesmo número e viabilidade. Além disso, a capacidade proliferativa das células T em resposta a um estímulo mitogénico foi suprimida quando as células da geléia de Wharton foram incluídas na cultura. Multilinhagens foram confirmadas pela sua capacidade adipogênica, condrogénica e diferenciação neurogênica. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais colhidas a partir da geléia de Wharton do cordão umbilical de bovino em todas as fases da gestação mostraram capacidade proliferativa, potencial privilegiado e imunológico. / Abstract: The possibility for isolating bovine mesenchymal multipotent stromal cells from fetal adnexa is interesting prospect because of the potential for these cells to be used for biotechnological applications. However, little knowledge is available about the characteristics of these progenitor cells in the bovine species. Proliferating cell morphology, from three stages of pregnancy, typically appeared fibroblast-like spindle shape, presenting the same viability and number. Moreover, the proliferative capacity of T cells in response to a mitogen stimulus was suppressed when Wharton's jelly mesenchymal stem cells were included in the culture. Multilineage properties were confirmed by their ability to undergo adipogenic, chondrogenic and neurogenic differentiation. The study demonstrated that Wharton's jelly mesenchymal stem cells harvested from bovine umbilical all pregnancy stages showed proliferative capacity, privileged and stem ness potential. / Doutor

Orientador: Rogério Martins Amorim / Banca: Raquel Yvone Arantes Bacarin / Banca: Alexandre Secorun Borges / Resumo: Estudos com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão em crescente avanço, baseando-se em evidências das suas propriedades imunomodulatórias, anti-inflamatórias e de regeneração dos tecidos. Porém, ainda não há consenso sobre qual a melhor fonte de obtenção das CTMs de equinos. O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo, a caracterização imunofenotípica e o potencial de diferenciação de CTMs provenientes da medula óssea (CTM-MO), tecido adiposo (CTM-TA) e cordão umbilical (CTM-CU) de equinos, a fim de se definir qual é a melhor fonte para compor um banco de células visando a terapia alogênica. As CTM-MO, CTM-TA e CTM-CU foram cultivadas in vitro e avaliadas quanto aos marcadores CD105, CD44, CD34, CD90 e MHC-II através da citometria de fluxo, e o MHC-II também pelo método de imunocitoquímica, Adicionalmente, as CTMs foram avaliadas in vitro quanto ao potencial de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica. A coleta e cultivo das CTM-MO, CTM-TA e CTM-CU se mostraram viáveis, e foram capazes de se diferenciar em linhagem osteogênica, adipogênica e condrogênica. As CTMs revelaram elevada expressão dos marcadores CD105, CD44 e CD90 e baixa ou ausência de expressão dos marcadores MHC-II e CD34. O MHC-II não foi expressado pela técnica de imunocitoquímica em nenhuma das CTMs estudadas. A MO, TA e CU são fontes viáveis para obtenção de CTMs de equinos, sendo confirmada as características imunofenotípicas e de multipotencialidade. No entanto, as CTM-MO e CTM-TA apresentaram melhor caracterização imunofenotípica, in vitro, quando comparadas com as CTM-CU / Abstract: Studies with mesenchymal stem cells (MSCs) are increasing due to their immunomodulatory and anti-inflammatory properties, and tissue regeneration. However, there is still no agreement about the best source of equine MSCs. The aim of this study was to evaluate cell culture, immunophenotypic characterization and potential of differentiation of equine MSCs from bone marrow (BM-MSC), adipose tissue (AT-MSC) and umbilical cord (UC-MSC), in order to define which is the best source for a cell bank aiming allogeneic therapy. The BM-MSC, AT-MSC and UC-MSC were cultured in vitro and assessed for CD105, CD44, CD34, CD90 and MHC-II markers by flow cytometry, and MHC-II also by immunocytochemistry. Additionally, MSCs were evaluated in vitro for osteogenic, adipogenic and chondrogenic potential. The harvest procedure and cell culture of BM-MSC, AT-MSC and UC-MSC were feasible and the MSCs were able to differentiate into osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. MSCs showed high expression for CD105, CD44 and CD90 and low or negative expression for CD34 and MHC-II. The MHC-II was not expressed by immunocytochemistry technique in any of the MSCs studied. The BM, AT and UC are feasible sources for harvesting equine MSCs, and their immunophenotypic and multipotentiality characteristics were confirmed. However, BM-MSC and AT-MSC showed better in vitro immunophenotypic characterization when compared to UC-MSC / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Carlos Eduardo Ambrósio / Resumo: As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos, e por isso são atrativas para a terapia celular, pois possuem alto potencial de diferenciação e proliferação, sendo assim, utilizadas na reconstrução tecidual. O presente experimento objetivou obter maior conhecimento sobre CTMs derivadas da membrana amniótica e cordão umbilical de cães, antes e após criopreservação, visando a formação de um banco de células. Assim, oito amostras de membrana amniótica e oito amostras de gelatina de Wharton foram obtidas de cesarianas, as quais foram submetidas a digestão enzimática, e cultivadas em meio basal. Uma porção celular, de cada amostra, foi criopreservada em 1ª passagem, de forma lenta, e armazenada por 4 semanas. As células antes e após a criopreservação foram submetidas à caracterização, onde foi observado características de adesão, proliferação, diferenciação e expressão de marcadores de superfícies utilizando-se citometria de fluxo, e imunocitoquímica. A partir destas avaliações, foi possível demonstrar que as células antes e após a criopreservação exibiram comportamento semelhante, quanto à proliferação e crescimento. A viabilidade celular da membrana amniótica apresentou 97,0% das células viáveis antes da criopreservação e 94,6% após, já a gelatina de Wharton 98,8 antes e 93,5% após a criopreservação. O potencial de diferenciação nas linhagens osteogênica e adipogênica foi mantido, no entanto foi necessário um tempo maior (p<0,05) para que as células de gelatina de Wharton se diferenciassem após a criopreservação. E ainda mantiveram a expressão de CD44, em níveis satisfatórios para que fossem consideradas positivas, onde a membrana amniótica expressou 85,6% antes e 67,8% após a criopreservação e a gelatina de Wharton expressou 86,0% antes e 82,1% após a criopreservação e a ausência de expressão ... / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of adult tissues, and are therefore attractive for cell therapy. Because of their high potential for differentiation and proliferation, they are being used in tissue reconstruction. This experiment aimed to enrich knowledge of canine MSCs derived from umbilical cord and amniotic membrane before and after cryopreservation regarding the formation of a cell bank. Thus, eight samples of amniotic membrane and eight samples of Wharton's jelly were obtained from dogs at birth, which were subjected to enzymatic digestion and basal medium culture. Slow freezing of a sample from each culture was held at the first passage and stored for four weeks. Before and after freezing cells were subjected to characterization being observed adhesion, proliferation, differentiation and expression of surfaces markers using flow cytometry and immunocytochemistry. Based on these analyses it was demonstrated that the cells before and after cryopreservation exhibited similar behavior for proliferation and cell growth. Cell viability of amniotic membrane showed 97.0% of viable cells before freezing and 94.6% after, and the Wharton's jelly 98.8% before and 93.5% after cryopreservation. The potential of the osteogenic and adipogênica differentiation as well as maintained, however it required a longer time (p <0.05) for the cells from Wharton's jelly to differentiate themselves after freezing. And still maintained the expression of CD44, at satisfactory levels to be considered positive, where the amniotic membrane expressed 85.6% before and 67.8% after freezing and Wharton's Jelly expressed 86.0% before and 82.1% after cryopreservation and absence of expression of CD34 and MHC II. A peculiar feature observed was that before and after freezing spontaneous differentiation in both lineages (osteogenic and adipogenic) occurred in the controls that were not induced to differentiation. We conclude that ... / Mestre