Resumo: O objetivo deste estudo foi padronizar a reação de Imunofluorescência direta (IFD) para detecção de oocistos de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros. Os anticorpos policlonais anti-C. parvum foram produzidos em dois coelhos adultos da raça Nova Zelândia, e titulados por meio do ensaio imuno-enzimático indireto (ELISA). A fração de imunoglobulina G (IgG) foi purificada a partir do soro do coelho imunizado, utilizando-se diálise em sulfato de amônio seguida de cromatografia em coluna de DEAE celulose e conjugação com isotiocianato de fluoresceína. Por meio da IFD padronizada, foi testada a reatividade cruzada do conjugado produzido contra outras espécies de Cryptosporidium (C. andersoni e C. serpentis) e com outros agentes etiológicos presentes em fezes de bovinos (Escherichia coli, Eimeria sp. e Candida sp.). A IFD foi comparada à microscopia com contraste de fase em solução de Sheather (MCF), avaliando a capacidade de detecção de oocistos de Cryptosporidium sp. em alíquotas de fezes de bezerro inoculadas com oocistos de C. parvum, e em amostras fecais de bezerros naturalmente infectados provenientes de 37 propriedades leiteiras da região de Araçatuba, SP. Nas amostras comprovadas como positivas, foi ainda feita uma análise semi-quantitativa de oocistos de Cryptosporidium sp., visualizados por campo de microscopia em ambas as técnicas. O conjugado anti-C. parvum apresentou reatividade com C. andersoni e C. serpentis. A IFD foi utilizada com sucesso para detecção de oocistos de C. parvum em fezes de bezerros, apresentando sensibilidade para detecção de até 104 oocistos em 3 g de fezes. Entre as 300 amostras fecais de bezerros naturalmente infectados, 19,67% (59/300) foram positivas para a presença de oocistos de Cryptosporidium sp. pela IFD, apresentando diferença estatisticamente significante (p<0.05) em relação às amostras positivas pela MCF / Abstract: The objective of this experiment was to standardize the direct immunofluorescence assay (DIF) for detection of Cryptosporidium parvum oocysts in fecal samples of calves. The anti-C. parvum polyclonal antibodies were produced in two adult rabbits of New Zealand breed, and titrated by an indirect enzyme-linked immunosorbent (ELISA). The immunoglobulin G (IgG) was purified from the serum of immunized rabbits by dialysis in ammonium sulfate followed by column chromatography on DEAE cellulose, and conjugated with fluorescein isothiocyanate. Using DIF the anti-C. parvum conjugate was tested for the presence of cross-reactivity against other species of Cryptosporidium (C. andersoni and C. serpentis), and other infectious agents present in cattle fecal samples (Escherichia coli, Eimeria sp. and Candida sp.). A comparison between the DIF and phase contrast microscopy in Sheather solution (MCF) was accomplished for evaluation of the efficiency of both techniques for detection of Cryptosporidium sp. oocysts in fecal samples of calves seeded with C. parvum oocysts, and in fecal samples from naturally infected calves from 37 dairy farms in the region of Araçatuba, SP. A semi-quantitative analysis of Cryptosporidium sp. oocysts per microscopic field was accomplished for both techniques. The anti-C. parvum conjugate showed cross-reactivity with C. andersoni and C. serpentis oocysts. The DIF has been used successfully in the detection of C. parvum oocysts in fecal samples of calves, with sensitivity for detecting 104 oocysts in 3 g of fecal samples. Among the 300 fecal samples from naturally infected calves, 19.67% (59/300) were positive for Cryptosporidium oocysts by DIF, with significant statistical difference (p <0.05) when compared to the number of positive samples by MCF / Orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Coorientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Banca: Luzia Helena Queiroz / Mestre

Orientador: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Co-orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo: om o objetivo de determinar a ocorrência e caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil, foram colhidas 222 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. As amostras foram avaliadas pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada e por meio da reação em cadeia da polimerase tipo nested (nPCR) para amplificação de fragmentos de DNA da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico e sequenciamento dos fragmentos amplificados. Pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada, foi detectada positividade de 8,1% (18/222), e pela nPCR, foi observada amplificação em 48,2% (107/222) das amostras, das quais 63 foram sequenciadas. A análise das sequências obtidas mostrou que a espécie mais frequente nesses animais foi Cryptosporidium ryanae, em bezerros bubalinos a partir de cinco dias de idade. A espécie zoonótica Cryptosporidium parvum foi detectada em apenas um animal e um genótipo incomum, similar a Cryptosporidium sp. W20486, foi encontrado, pela primeira vez em búfalos / Abstract: With the aim of determining the occurrence and molecularly characterizing infection by Cryptosporidium spp. in buffalo calves from São Paulo State, Brazil, 222 fecal samples were collected from Murrah animals aged up to six months. The samples were assessed by means of modified Ziehl-Neelsen technique and nested polymerase chain reaction (nPCR) for amplification of DNA fragments from subunit 18S of the gene of ribosomal RNA and sequencing of the amplified fragments. The modified Ziehl-Neelsen technique indicated 8.1% positivity (18/222), while nPCR revealed amplification for 48.2% (107/222) samples, of which 63 were sequenced. The analysis of the obtained sequences showed that the most frequent species in these animals was Cryptosporidium ryanae, present in buffalo calves from five days of age. The zoonotic specie Cryptosporidium parvum was detected in only one animal, and an uncommon genotype, similar to that of Cryptosporidium sp. W20486, was found for the first time in buffaloes / Mestre

Resumo:A eimeriose é a enfermidade parasitária importante em coelhos, que são hospedeiros de 11 espécies de Eimeria. A criptosporidiose é uma zoonose que pode ser transmitida por meio de alimentos e água contaminados com oocistos eliminados por animais e pessoas infectadas. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência de Eimeria spp. e de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de coelhos, realizar a classificação molecular e relacionar a presença dos parasitos às diferentes categorias, em criações brasileiras. Amostras fecais (n = 514) foram colhidas de 21 granjas. Os oocistos foram purificados e visualizados por microscopia. Cinquenta e cinco amostras positivas para Eimeria spp., pela microscopia, foram submetidas à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para amplificação de fragmento parcial da região ITS1 do gene do rRNA de Eimeria spp. e dos genes da subunidade 18S do rRNA e da glicloproteína GP60 de Cryptosporidium spp.. A microscopia revelou positividade de 19,45% (100/514) para Eimeria spp. e de 1,56% (8/514) para Cryptosporidium spp.. A PCR identificou E. exigua (14,5%), E. flavescens (61,8%), E. intestinalis (16,36%), E. irresidua (16,4%), E. magna (50,9%), E. media (3,6%), E. perforans (36,4%), E. piriformis (20,0%), E. stiedai (7,3%) e E. vejdovskyi (7,3%). Maior positividade foi observada em mini coelhos 33,17% (69/208), coelhos jovens 46,67% (35/75) e em fêmeas lactantes 24,47% (23/94). Sete amostras foram positivas pela PCR (12,73%; 7/55) para Cryptosporidium spp.. Pela análise molecular foi possível identificar Cryptosporidium cuniculus (18S rRNA) e C. cuniculus subtipo VbA21 (gp60) em coelhos jovens e matrizes. / Abstract:The eimeriosis is an important parasitic disease in rabbits, that can host 11 species of Eimeria. Cryptosporidiosis is a zoonotic disease that can be transmitted through food, drinking water and by contact with infected animals and people. The objective of this study was to verify the occurrence of Eimeria spp. and Cryptosporidium spp. in fecal samples of rabbits, perform their molecular classification and relate the presence of the parasites to the different categories in the Brazilian farms. Fecal samples (n = 514) were collected from 21 farms. The oocysts were purified and visualized by microscopy. Fifty five samples positive for Eimeria spp. using microscopy were subjected to polymerase chain reaction (PCR) for amplification of a partial fragment of the ITS1 region of the rRNA gene of Eimeria spp. and the 18S rRNA and the gp60 glycoprotein genes of Cryptosporidium spp.. The microscopy revealed positivity of 19.45% (100/514) for Eimeria spp. and 1.56% (8/514) for Cryptosporidium spp.. The PCR identified E. exigua (14.5%), E. flavescens (61.8%), E. intestinalis (16.36%), E. irresidua (16.4%), E. magna (50.9 %), E. media (3.6%), E. perforans (36.4%), E. piriformis (20.0%), E. stiedai (7.3%) and E. vejdovskyi (7.3 %). Higher positivity was observed in mini rabbits 33.17% (69/208), young rabbits 46.67% (35/75) and in lactating females 24.47% (23/94). Seven samples were positive by PCR (12.73%; 7/55) for Cryptosporidium spp.. Molecular analysis revealed Cryptosporidium cuniculus (18S rRNA) and C. cuniculus subtype VbA21 (gp60) in young rabbits and in does / Orientador:Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca:Weslen Fabricio Pires Teixeira / Banca:Paola Moretti Rueda / Banca:Giane Serafim da Silva / Banca:Katia Denise Saraiva Bresciani / Doutor

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Luiz Eduardo Corrêa Fonseca / Banca: Alex Akira Nakamura / Banca: Luiz da Silveira Neto / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Resumo: Este estudo foi elaborado com o objetivo de investigar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em quirópteros da região sul do Brasil. Cento e quarenta e sete amostras fecais de morcegos foram colhidas na cidade de Maringá (PR) e submetidas aos processos de purificação para a microscopia e extração de DNA genômico. A microscopia óptica de luz convencional foi utilizada com o uso da coloração negativa de verde malaquita para pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. e a PCR foi utilizada para a amplificação de fragmentos do gene da subunidade 18S do rRNA na detecção de Cryptosporidium spp. A presença de Cryptosporidium spp. não foi constatada nas amostras fecais dos morcegos. Esse resultado pode ser considerado bom no aspecto que os morcegos são possíveis reservatórios e consequentemente, dispersores deste patógeno, sendo estes parques visitados diariamente por um grande número de pessoas. Esta é a primeira investigação do referido protozoário em morcegos nesta região. / Abstract: This study was elaborated with the objective to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. in chiroptera of southern Brazil. One hundred and forty-seven fecal samples of bats were collected in the city of Maringá (PR) and submitted to purification processes for microscopy and extraction of genomic DNA. Optical microscopy of conventional light with negative malachite green staining was performed to investigate oocysts of Cryptosporidium spp. and PCR for the amplification of fragments of the 18S rRNA subunit gene in the detection of Cryptosporidium spp. This coccidium was not found in faecal samples of bats. This result can be considered good in the aspect that bats are possible reservoirs and consequently dispersers of this pathogen, being these parks visited daily by a large number of people. It is the first investigation of this protozoan into bats in this region / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-27Bitstream added on 2014-06-13T20:16:24Z : No. of bitstreams: 1 bonello_fl_me_araca.pdf: 611158 bytes, checksum: 64289841b4b9ab09da7b919f8edbd113 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A manutenção de animais silvestres em cativeiro domiciliar como animais de estimação é bastante comum no Brasil e os papagaios tem sido preferidos por serem considerados curiosos, inteligentes e divertidos, além de serem excelentes imitadores e faladores. Entretanto, os papagaios-verdadeiros (Amazona aestiva) podem ser fontes de infecção de algumas zoonoses. Neste trabalho foram estudados 50 papagaios-verdadeiros mantidos em cativeiro domiciliar no município de Araçatuba, São Paulo. As condições sócio-econômicas e os manejos sanitário e nutricional das aves, bem como o contato com os residentes foram avaliados por meio de visitas às casas. Os resultados revelaram manejos sanitário e nutricional inadequados na maioria dos casos, estreito contato com os papagaios e falta de conhecimento sobre enfermidades dos mesmos. Não foi isolada Salmonella sp. nas amostras de fezes, enquanto Escherichia coli estava presente em três animais e estruturas leveduriformes foram encontradas na maioria deles. Cryptosporidium sp. foi encontrado em uma das amostras. Pode-se concluir que o estreito contato dos residentes com as aves e as condições sanitárias inadequadas podem favorecer a ocorrência de zoonoses nas residências avaliadas. A presença de Cryptosporidium sp., caso se trate de uma espécie zoonótica, indica a possibilidade da transmissão de criptosporidiose de papagaios para o homem em condições de cativeiro domiciliar. / The maintenance of wild animals in domiciliary captivity as pets has been common in Brazil and parrots are preferred because they are considered curious, intelligents, amusing, excellent talkative and mimics. However, the blue- fronted amazon parrot (Amazona aestiva) can be source of some zoonosis infections. In the present study the sanitary and nutritional management of 50 blue-fronted amazon parrots kept in domiciliary captivity in Araçatuba city, SP, as well as the occurrence of zoonosis agents in stools samples, social-economic conditions and residents-birds contact were evaluated. Results showed inadequate sanitary and nutritional management in the majority of the cases, strait contact with the parrots and lack of knowledge about parrots diseases. Salmonella was not found in stool samples while Escherichia coli was present in three samples and levedures-like structures were found in the majority them. Cryptosporidium was found in one sample. We can conclude that the close contact with the birds and the uncorrect management can favour occurrence of zoonosis in evaluated residences. The presence of Cryptosporidium sp. Indicates transmition possibility of cryptosporidiosis, in case of zoonotic specie, from parrots to humans in domiciliary captivity conditions.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-05-15T15:25:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Sergio_Vargas_Junior.pdf: 2395722 bytes, checksum: ea675296329c1671251fe645132fea16 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-16T16:45:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Sergio_Vargas_Junior.pdf: 2395722 bytes, checksum: ea675296329c1671251fe645132fea16 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T16:45:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Sergio_Vargas_Junior.pdf: 2395722 bytes, checksum: ea675296329c1671251fe645132fea16 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-05-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Esta dissertação trata-se de um estudo dos distúrbios entéricos em bezerros diagnosticados na região sul do Rio Grande do Sul em um período de 36 anos. É apresentado um trabalho com a descrição das principais causas de diarreia em bezerros, sendo as causas parasitárias e as bacterianas as mais prevalentes. Foram diagnosticados 94 casos de bezerros com diarreia, destes, 44,7% foram de causas parasitárias e 34,0% de causas bacterianas. A diarreia de causa parasitária foi a mais importante na região sul do Rio Grande do Sul e afetou bezerros de três a 12 meses de idade. É apresentado, também, um estudo que descreve os aspectos epidemiológicos, sinais clínicos e a patologia de um surto de criptosporidiose ocorrido em bezerros na mesma região. De um lote de 400 animais de 30-45 dias de idade, 35 adoeceram e 16 morreram. Os bezerros nasciam fracos e logo após o nascimento apresentavam diarreia amarela, emagrecimento progressivo, desidratação, depressão e morte entre 10 e 15 dias após o início dos sinais clínicos. Na necropsia havia congestão dos vasos sanguíneos intestinais e mesentéricos. Havia distensão intestinal por gás e dilatação de vasos linfáticos. Microscopicamente havia achatamento das vilosidades intestinais, com necrose e atrofia. Aderidas à superfície das células epiteliais das vilosidades, havia estruturas puntiformes basofílicas de 2-5μm de diâmetro compatíveis com Cryptosporidium spp. A microscopia eletrônica revelou a presença de diferentes estágios do agente aderidos às microvilosidades de enterócitos. A criptosporidiose é uma importante causa de diarreia em bezerros não só como um agente oportunista, mas também como um agente primário de diarreia em bezerros. / This dissertation is a study of enteric disorders in calves diagnosed in southern Brazil in 36 years. It is presented a study with the description of the main causes of diarrhea in calves. Parasitic and the bacterial causes are the most prevalent. Ninetyfour cases of calves with diarrhea were diagnosed, of these, 44.7% were of parasitic causes and 34.0% of bacterial causes. Diarrhea of parasitic cause was the most important in southern Brazil and affected calves from three to 12 months of age. Another study is also presented, describing the epidemiological, clinical signs and pathology of an outbreak of cryptosporidiosis in calves in southern Brazil. Thirty-five out of 400 calves with 30-45 days of age were affected and 16 died. The calves were born weak and just after birth, they had yellow diarrhea, weight loss, dehydration, depression, and death between 10 and 15 days after onset of clinical signs. Congestion of the bowel and mesenteric blood vessels were observed at necropsy. Intestinal distension by gas and dilation of lymphatic vessels were also observed. Microscopically, the intestine showed flattening of the villi with necrosis and atrophy. Adhered to the surface of the villus epithelial cells there were round basophilic structures of 2- to 5-μm diameter compatible with Cryptosporidium spp. The electron microscopy revealed the presence of different stages of the agent adhered to the microvilli of enterocytes. Cryptosporidiosis is an important cause of diarrhea in calves not only as an opportunistic agent, but also as a primary agent of diarrhea in calves.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-01T16:39:12Z No. of bitstreams: 1 Antonio Tembue.pdf: 785696 bytes, checksum: 3f9e9ef8e3f1459afeea01eeed2f71fa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T16:39:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Tembue.pdf: 785696 bytes, checksum: 3f9e9ef8e3f1459afeea01eeed2f71fa (MD5) Previous issue date: 2007-05-18 / Small ruminants production is an important activity specially as a protein source, meat, leather, milk and by-products processing throughout the Brazil. However with the lack of technical support in sheep and goat production systems some parasitic disease has been related including coccidiosis. The goal of this study is describe the epidemiology of some coccidia agents in goats and sheep from Ibimirim County, Pernambuco State, Brazil. A total of 400 animals, being 319 goats and 81 sheep from different farms were studied. First a total of 400 faecal samples were evaluated to identify the eimerian species. Coccidian unsporulated the sporulate oocysts were detected in 95.3% (381/400) and 97.5% (390/400) by using the McMaster technique and aqueous solution of dichromatic (K2Cr2O7) respectively. Eight species of Eimeria were identified: Eimeria arloingi E. ninakohlyakimovae, E. pallida, E. parva, E. intricata, E. ahsata, E. crandallis, E. faurei in goats and E. ahsata, E.crandallis, E. faurei, E. intricata, E. granulosa, E. parva and E. punctata in sheep. The other intestinal coccidia,Cryptosporidium sp oocyst was also identified in 3.7% (3/81), of sheep faeces samples by using Kinyon methodology. On the other hand a serological survey for antibodies to IgG antibodies anti- Toxoplasma gondii and Neospora caninum by Imunofluorescent antibody test were carried out. The results of serology showed the prevalence of 57% (228/400) positive samples to T. gondii, being 58.9% (188/319) and 49.4% (40/81) in goats and sheep respectively. The antibody frequencies according to the age showed that the prevalence was influenced by the age (≤4 years old) of animals in both goats and sheep. The results of imunofluorescent antibody test to Neospora caninum showed 34.3% (137/400) of positive animals, being 26.6% (85/319) in goats and 64.2% (52/81) in sheep. Serologic reactivity was associated with age only in goats (p<0, 01). In conclusion, these results indicate theexposure of small ruminants living in the study area to coccidia of genus Eimeria, Cryptosporidium, Toxoplasma and Neospora. However the frequency of infection of oocysts of Eimeria particularly Eimeria arloingi, E. ninakohlyakimovae em caprinos e Eimeria ahsata e E. crandallis age, and management practices might be consider in order decreasing the effect of these coccidia. In the other hand hygienic management practices should be adopted in these farms in order to prevent the infection of Toxoplasma gondii by the consumption of unpasteurized milk. / A caprinovinocultura é uma importante pecuária atividade, particularmente como fonte de carne, pele, leite e produtos derivados em todo o Brasil. Contudo, com a perda de assistência técnica ao sistema de produção, algumas doenças parasitárias têm sido relatadas, incluindo as coccidioses. Objetivou-se com o presente estudo contribuir no conhecimento da epidemiologia das coccidioses em pequenos ruminantes no Estado de Pernambuco. Um total de 400 animais, sendo 319 caprinos e 81 ovinos,procedentes de diferentes propriedades foram estudados. Inicialmente 400 amostras fecais foram avaliadas pelo método Gordon Whitlock através da técnica de Mc-Master para contagens de oocistos. Foi realizada a esporulação com solução de dicromato de potássio K2Cr2O7 para a identificação das de espécies de gênero Eimeria. Oocistos de coccídios não esporulados e esporulados foram detectados em 95,3% (381/400) e 97, 5% (390/400) pela técnica de McMaster e Solução aquosa de K2Cr2O7. Foram identificadas oito espécies do gênero Eimeria na espécie caprina com as seguintes freqüências relativas por ordem decrescente, Eimeria arloingi; E. ninakohlyakimovae, E. pallida, E. parva, E. intricata, E. ahsata, E. crandallis, E. faurei, enquanto nos ovinos foram encontradas a E. ahsata E.crandallis, E.faurei, E. intricata, E. granulosa, E. parva, e E. punctata. Outro coccídio intestinal, Cryptosporidium spp. oocistos também foi identificado em 3.7% (3/81) das fezes provenientes dos ovinos pelo método de Kinyon. Por outro lado foi realizado um levantamento sorológico de anticorpos IgG anti- Toxoplasma gondii e Neospora caninum através da reação de Imunofluorescencia Indireta. Os resultados revelaram a prevalência de 57% (228/400) de amostras positivas para Toxoplasma gondii, sendo 58,9% (188/319) em caprinos e 49,4% (40/81) em ovinos. A freqüência de anticorpos anti- Toxoplasma gondii foi influenciada com a idade dos animais (≤4 anos) em ambas as espécies animais. O resultado do teste de Imunofluorescencia Indireta para Neospora caninum evidenciou 34,3% (137/400) dos animais foram soropositivoss, sendo 26,6% (85/319) em caprinos e 64,2% (52/81) em ovinos. Com relação à idade, foi observada uma diferença significante somente em caprinos (p<0, 01). De acordo com os resultados obtidos, pode se concluir que os pequenos ruminantes estão expostos à infecção por coccídios de gênero Eimeria, Cryptosporidium, Toxoplasma e Neospora na área estudada. Contudo em função da freqüência de oocistos de gênero Eimeria, observada no presente estudo, particularmente Eimeria arloingi, E. ninakohlyakimovae em caprinos e Eimeria ahsata e E. crandallis em ovinos, medidas higiênico-sanitários devem ser realizadas para minimizar os efeitos produzidos porestes coccídios Não obstante, práticas higiênico-sanitárias devem ser adotadas nas criações para prevenir a infecção de Toxoplasma gondii através do consumo de leite de cabra não pasteurizado.