Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T15:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A [SF63], obtida das cascas da [Croton Celtidifolius] administrada por via intraperitoneal, provocou antinocicepção quando avaliada nos modelos de contorção abdominal induzida pelo [Ácido acético], no teste da nocicepção induzida pela [Formalina], no teste da [Capsaicina], no teste [Glutamato], no teste da [Retirada da cauda] e no modelo da [Placa quente], em doses que não promoveram reações inespecíficas, como sedação e relaxamento muscular, avaliadas pelo teste do [Rota-rod]. Também foi observado que a [SF63] administrada por via oral apresenta atividade antinociceptiva, quando avaliada no teste da nocicepção induzida pela formalina. Os resultados sugerem que a [SF63]

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T00:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 277533.pdf: 860745 bytes, checksum: 177b308bf42fcd4a4d0cd73f9c75b6f5 (MD5) / No presente estudo investigamos as possíveis propriedades psicofarmacológicas e neuroprotetoras da fração rica em proantocianidinas (FRP) obtida das cascas da Croton celtidifolius Baill (Euphorbiaceae) em ratos. Para tal finalidade, foram utilizados testes comportamentais classicamente empregados na triagem inicial de drogas com atividade sobre o sistema nervoso central e um modelo experimental da doença de Parkinson (DP). A administração intraperitoneal (i.p.) aguda da FRP (10 ou 30 mg/kg) diminuiu significativamente a atividade locomotora espontânea dos animais no campo aberto e na caixa de atividade, e prolongou a duração da hipnose induzida pelo éter etílico, sugerindo um efeito do tipo hipnosedativo. No labirinto em cruz elevado, a FRP (0,3 ou 3 mg/kg) aumentou significativamente a freqüência de entradas nos braços abertos do aparato, indicando um putativo efeito ansiolítico. Além destes efeitos, a FRP (10 ou 30 mg/kg) também aumentou a latência para a primeira convulsão induzida pelo pentilenotetrazol (60 mg/kg; i.p.), induziu ptose palpebral, hipotermia e atenuou o comportamento estereotipado induzido pela apomorfina (0,5 mg/kg; s.c.) na dose de 30 mg/kg. Estes achados sugerem que a FRP possui um amplo espectro de propriedades psicofarmacológicas como hipnosedativa, anticonvulsivante, neuroléptica e ansiolítica. No presente estudo, também foram avaliados os efeitos neuroprotetores do pré-tratamento com a FRP (10 mg/kg; i.p.), durante cinco dias, nas alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pela administração intranasal (i.n.) de MPTP (1 mg/narina) em ratos. A FRP foi capaz de prevenir os prejuízos cognitivos, emocionais e motores induzidos pela administração i.n. do MPTP, como também impediu a inibição da atividade do complexo-I mitocondrial e a degeneração dos neurônios dopaminérgicos do bulbo olfatório e substância negra causados pelo MPTP. Nossos resultados corroboram com outros estudos prévios acerca das propriedades neuroprotetoras dos polifenóis, sugerindo a possibilidade destes compostos serem ferramentas úteis em estratégias de neuroproteção.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-24T05:57:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 258293.pdf: 2567446 bytes, checksum: bd9193aa408c9f4bc98aadd3e5e048a7 (MD5) / Uma fração rica em proantocianidinas (FRP) obtida das cascas da C. celtidifolius foi avaliada quanto ao seu potencial vasorrelaxante em preparações vasculares isoladas. Em leito arterial mesentérico, artéria mesentérica e aorta torácica isolados de ratos a FRP induz relaxamento dependente da concentração. Em vasos de pequeno calibre, este efeito foi significativamente reduzido pelo L-NOARG ou por Krebs despolarizante, e completamente abolido quando ambos são combinados. O efeito também foi reduzido na presença de ODQ e pela caribdotoxina. Em vasos de grande calibre, o L-NOARG e o ODQ também reduziram o relaxamento da fração, bem como a ausência de cálcio no e a presença de um bloqueador de influxo de cálcio (lantânio) na solução de Krebs-Henseleit. N-metilmaleimida e a neomicina também foram capazes de reduzir significativamente a vasodilatação induzida pela FRP. Em outro grupo de experimentos, a vasodilatação induzida pela FRP foi significativamente reduzida pelo Wortmannina. A FRP também foi testada quanto ao seu potencial antiaterogênico em camundongos C57/BL6 LDLr KO. Nestes experimentos, a fração não foi capaz de reduzir as concentrações de lipídios séricos (colesterol total, HDL ou VLDL mais LDL), assim como não reverteu os danos vasculares morfofuncionais provocados pela dieta, quando avaliados nos experimentos de reatividade vascular e na determinação da área de lesão aterosclerótica. Os resultados indicam que a FRP apresenta efeito vasorrelaxante dependente de endotélio em artérias de pequeno e grande calibre, que este efeito envolve a ativação da via NO/GMPc e que o mecanismo de ativação da via envolve o influxo de cálcio do meio extracelular pela ativação de proteínas sensíveis ao NEM e via ativação da PLC e por promover hiperpolarização do músculo liso vascular induzido por abertura de canais KCa2+ em vasos de pequeno calibre. A fração também promove a fosforilação da enzima eNOS, pela via PI3K/Akt, mas não apresenta atividade antiaterogênica quando avaliada no modelo de aterogênese induzida pela dieta em camundongos C57/BL6 LDLr KO.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-26T12:04:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302042.pdf: 693987 bytes, checksum: 823b44b5d3f07e3feb6ab9f9b1c8df9d (MD5) / Glutamato, o principal neurotransmissor central excitatório, induz excitotoxicidade neuronal pela ativação de receptores NMDA e AMPA, promovendo o influxo de cálcio nos neurônios. Estudos recentes do nosso grupo demonstram que as frações e sub-frações isoladas da Croton celtidifolius possuem propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e antinociceptivas. Assim, utilizando um modelo in vitro de excitotoxicidade induzida por glutamato (Glu) e in vivo de neurotoxicidade decorrente da lesão da medula espinhal de ratos Wistar adultos, avaliou-se o possível efeito neuroprotetor da fração rica (FRP) em proantocianidinas isolada da Croton celtidifolius. Glu induziu morte de células do gânglio da raiz dorsal (GRD), de forma dependente da concentração e do tempo de exposição. O pós-tratamento com a FRP (1 - 100 µg/ml) inibiu em até 37% a morte celular induzida por Glu (1 mM). Já o co-tratamento, foi capaz de reduzir a morte celular em 27%. A exposição das células ao Glu (0,01, 0,1 e 1 mM) aumentou os níveis da enzima lactato desidrogenase de 6,5 % (células controle) para 37, 49 e 63 %, respectivamente, indicativo de alteração na permeabilidade da membrana celular. Esta alteração foi atenuada pelo tratamento das células com a FRP (100 µg/mL). Ademais, o insulto glutamatérgico induziu a geração de espécies reativas de oxigênio, a qual foi inibida pelo tratamento das células do GRD com FRP (100 µg/ml). Além disso, o efeito neuroprotetor desencadeado pela FRP parece ser mediado em parte pela inibição de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA, mas não os metabotrópicos uma vez que a perda da viabilidade celular decorrentes da exposição das células ao agonista NMDA, mas não ao agonista metabotrópico, foi revertida pela FRP. Nos estudos in vivo, animais submetidos a lesão medular e tratados com a FRP na dose de 10 mg/kg por via intraperitoneal, durante 5 dias consecutivos, apresentaram uma melhora significante na performance locomotora e na força de preensão, quando comparado aos animais lesados tratados com veículo. Em conjunto, estes resultados fornecem a primeira evidência de que a FRP atenua a morte celular por necrose e por apoptose, bem como a produção de EROs induzida por Glu, inibe a morte celular induzida por peróxido de hidrogênio e pelo agonista NMDA. A FRP também foi capaz de promover uma melhora na atividade locomotora e na força de preensão de animais submetidos à lesão traumática da medula espinhal, reforçando a hipótese de que polifenóis podem ser ferramentas terapêuticas promissoras como agentes neuroprotetores. / Glutamate, the major central excitatory neurotransmitter, induces neuronal excitotoxicity by activation of NMDA and AMPA receptors and stimulating the influx of calcium into neurons. Recently, our group showed that fractions and subfractions isolated from Croton celtidifolius have antiinflammatory, antioxidant and antinociceptive properties. Thus, using an in vitro model of excitotoxicity induced by glutamate (Glu) and in vivo neurotoxicity caused by spinal cord injury (SCI) in adult Wistar Rats, we evaluated the possible neuroprotective effect of a proanthocyanidin-rich fraction (PRF) isolated from the bark of Croton celtidifolius. Glu induced cell death of dorsal root ganglion (DRG) in a manner concentration-dependent and the exposure time. The post-treatment with FRP (from 1 to 100 ìg / mL) inhibited the cell death induced by Glu (1 mM) in 37%. Since co-treatment, was able to reduce cell death in 27%. The exposure of cells to glu (0.001, 0.1 and 1 mM) increased the levels of the enzyme lactate deydrogenase from 6.5% (control cells) to 37, 49 and 63% respectively, indicating changes in cell membrane permeability. This change was attenuated by treatment of cells with the PRF (100 ìg / mL). Moreover, the glutamatergic insult induced generation of reactive oxygen species, which was inhibited by treatment of cells with FRP (100 ìg / mL). Moreover, the neuroprotective effect triggered by FRP seems to be mediated in part by inhibition of NMDA-type glutamate receptors, but not metabotropic receptors, since the loss of cell viability after exposure of cells to NMDA agonist, but not a metabotropic agonist was reversed by FRP. The in vivo studies, animals subjected to SCI and treated with PRF at a dose of 10 mg / kg by i.p. route for 5 consecutive days showed a significant improvement in locomotor performance and grip force when compared to injured animals treated with vehicle. Taken together, these results provide the first evidence that PRF attenuated the cell death by apoptosis and the production of ROS induced by Glu, also inhibits cell death induced by hydrogen peroxide and the NMDA agonist receptors. The FRP was able to promote an improvement in locomotor activity and grip strength of animals subjected to traumatic spinal cord injury (SCI), reinforcing the hypothesis that polyphenols are promising therapeutic tools such as neuroprotective agents.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T15:47:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289034.pdf: 1049548 bytes, checksum: 5e8bb08ab5eb868e74d88ac9eb828c34 (MD5) / Apesar de todos os recursos existentes na atualidade para o tratamento do câncer uma diversidade de problemas é observada tanto em relação à eficácia dos medicamentos e/ou sua resistência quanto à gama de efeitos colaterais que podem ser induzidos pelos mesmos. Na tentativa de aprimorar a terapia antitumoral novos agentes antineoplásicos de origem natural têm sido buscados visto que a maior parte dos medicamentos existentes é proveniente de plantas medicinais. Croton celtidifolius pertencente à família Euphorbiaceae, composta por diversas plantas que possuem atividade antitumoral, é uma planta promissora uma vez que é utilizada popularmente com esta finalidade. O presente estudo propôs avaliar a atividade citotóxica, nucleásica e pró-apoptótica, in vitro, e a atividade antitumoral e antiangiogênica, in vivo, do látex de C. celtidifolius. As análises espectrofotométricas do látex bruto permitiram a identificação de um alto conteúdo de fenóis totais (18,54 g/L), enquanto que as análises cromatográficas (CLAE) permitiram a detecção de compostos fenólicos como flavonóis (miricetina, quercetina e campferol) e flavan-3-óis (catequina, epicatequina, galocatequina e epigalocatequina). No ensaio do MTT, para a avaliação da citotoxicidade, a CI50 encontrada para as células de Ehrlich e MCF-7 foram 169 ± 1,8 e 187 ± 2,2 µg/mL, respectivamente. Além disso, foi possível observar uma redução dose-dependente significativa na viabilidade celular. A coloração diferencial com brometo de etídio (BE) / laranja de acridina (LA) demonstrou o predomínio da indução de morte celular por apoptose que pode possivelmente ser explicada através dos resultados obtidos no ensaio de atividade nucleásica onde o látex foi capaz de causar quebras simples e dupla no DNA plasmidial submetido ao tratamento. Adicionalmente os experimentos realizados com os animais portadores do tumor ascítico de Ehrlich (TAE) demonstraram que o látex de C. celtidifolius foi capaz de inibir o crescimento tumoral ao reduzir o peso dos animais, o volume de tumor, a quantidade de células compactadas e a proporção de células/volume de tumor. A inibição tumoral observada para o látex (La1: 0,78; La2: 1,56 e La3: 3,25 mg/kg) foi 26; 32 e 54%. O dado mais relevante neste ensaio foi o aumento dose-dependente no tempo médio de sobrevida (TMS) (CN: 13; La1: 15,5; La2: 16 e La3: 17,5 dias) e no percentual de aumento de longevidade (PAL) (CN: 0,00; La1: 19,23; La2: 23,08 e La3: 34,61%). Além disso, também foi relatado o efeito antiangiogênico do látex (0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg/disco) uma vez que este foi capaz de provocar redução na porcentagem de vasos sanguíneos (41; 56; 66 e 75%) observados no ensaio da membrana corioalantóica (CAM). O látex não provocou toxicidade ao embrião uma vez que não foi capaz de alterar a sua morfogênese. Assim, conclui-se que C. celtidifolius apresenta efeitos citotóxico, nucleásico e pró-apoptótico inter-relacionados; e ainda, potencial efeito antitumoral e antiangiogênico. / Despite all the resources at this time for cancer treatment is a diversity of problems observed regarding the efficacy of drugs and/or its resistance as well as the side effects that can be induced by them. In an attempt to improve antitumor therapy new antineoplastic agents from natural sources has been sought since the majority of existing drugs is derived from medicinal plants. Croton celtidifolius belonging to the family Euphorbiaceae, comprising several plants that have antitumor activity, is a primising plant since it is popularly use for this pourpose. The present study was to evaluate the citotoxic, nucleasic and pro-apoptotic activities in vitro, and antitumor and antiangiogenic activities in vivo from the latex of C. celtidifolius. The spectrofotometric analysis of crude latex allowed the identification of a hight content of total phenols (18.54 g/L), while chromatography (HPLC) allowed the detection of phenolic compounds such as flavonols (myricitin, quercetin and kaempferol) and flavan-3-ols (catechin, epicatechin, gallocatechin and epigallocatechin). In the MTT assay, for the evaluation of citotoxicity, the IC50 observed for the Ehrlich and MCF-7 cells were 169 ± 1.8 e 187 ± 2.2 µg/mL, respectively. Furthermore we observed a significant dose-dependent reduction in cell viability. The differential staining with ethidium bromide (BE) / acridin orange (LA) showed the predominance of the induction of apoptotic cell death that can possibly be explained from the tests results of nucleasic activity where latex was able to induced simple and double breaks on treated plasmidal DNA. In addition the experiments with animals carrying the Ehrlich ascitic tumor (TAE) showed that the latex of C. celtidifolius was able to inhibit tumor growth by reducing the weigth of the animals, tumor volum, the amount of packed cells and the proportion of cells / tumor volum. The tumor inhibition observed for the latex (La1: 0.78; La2: 1.56 and La3: 3.25 mg/kg) was 26; 32 and 54%. The most relevant data from this trial was a dose-dependent increase in mean survival time (TMS) (CN: 13; La1: 15.5; La2: 16 e La3: 17.5 dias) and the increase in the percentage of longevity (PAL) (CN: 0.00; La1: 19.23; La2: 23.08 and La3: 34.61%). Furthermore, was showed the antiangiogenic effect of the latex (0.5; 1.0; 1.5 e 2.0 mg/disc) since it was capable of causing reduction in the percentage of blood vessels (41; 56; 66 and 75%) observed in the chorioallantoic membrane assay (CAM). The latex caused no toxicity to the embryo as it was unable to alter its morphogenesis. Thus, it appears that C. celtidifolius latex presents citotoxic, nucleasic and pro-apoptotic effects interrelated and also potential antiangiogenic and antitumor effects.