Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-26Bitstream added on 2014-06-13T20:56:06Z : No. of bitstreams: 1 000743666.pdf: 1070303 bytes, checksum: 6cc475d81bb258dbe7f48c85fac453ca (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Infection by some species or genotypes of Cryptosporidium represents a potential risk to public health, mainly because of the morbidity and mortality in children from zero to five years of age and in immunocompromised patients. Although there are some reports of Cryptosporidium infection in exotic animals, the participation of these animals in the epidemiology of human cryptosporidiosis is uncertain and studies on this topic is still rather scarce. The aim of this study was to determine the occurrence as well as to perform the molecular classification of Cryptosporidium spp. in faecal samples of exotic animals raised as pets in Brazil. A total of 386 faecal samples from six species of exotic animals was collected and stored in a solution 5% potassium dichromate at 4°C. The oocysts were purified by centrifugal sedimentation water-ether, followed by genomic DNA extraction and the performance of the nested-PCR to amplify partial gene fragment of 18S rRNA. Positivity for Cryptosporidium spp. was obtained in 11.40% (44/386) of samples. The sequencing of the amplified fragments allowed the identification of Cryptosporidium tyzzeri (Cryptosporidium mouse genotype I) on mice (Mus musculus), Cryptosporidium muris in mice, hamster (Mesocricetus auratus and Cricetulus griseus) and chinchilla (Chinchilla lanigera), Cryptosporidium parvum in chinchila and Cryptosporidium sp. in guinea pig (Cavia porcellus). The results of this study show that there are a variety of species of Cryptosporidium spp. present in exotic animals company in Brazil. The data suggest that these animals may have zoonotic potential and participate in the epidemiology of human cryptosporidiosis / FAPESP: 11/02730

Orientador: Alvimar José da Costa / Coorientador: Antônio Sérgio Ferraudo / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Claudio Alessandro Massamitsu Sakamoto / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Resumo: A criptosporidiose é uma enfermidade de veiculação hídrica, possui como agravante a dificuldade de prevenção da contaminação ambiental e ausência de medidas terapêuticas eficazes. Com acentuada importância na bovinocultura, ocasiona inflamação e atrofia das vilosidades intestinais resultando em perda da superfície de absorção. O presente estudo teve como objetivo caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros do Município de Formiga, região Centroeste de Minas Gerais. Um total de 300 amostras de fezes de bezerros holandeses, nelore e sem raça definida, foram avaliadas pela técnica de coloração contraste negativo de verde malaquita e por meio da reação de nested-PCR para amplificação de fragmentos de DNA da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico. Ocorrência de 5,33% (16/300) pelo verde malaquita e 4,66% (14/300) pela PCR foram observadas, sendo que por meio da caracterização molecular foram identificadas as espécies Cryptosporidium andersoni e Cryptosporidium ryanae. Os bezerros infectados apresentavam baixa eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. Não houve sendo que não houve relação da positividade com todas as variáveis estudadas. No sequenciamento foi encontrado as espécies de C. andersoni e C. ryanae, inclusive parasitando bezerros em faixas etárias, não relatadas na literatura. Estas duas espécies de Cryptosporidium, caracterizados molecularmente (Nested-PCR), no presente estudo, são descritas pela primeira vez parasitando bovinos do estado de Minas Gerais, Brasil / Abstract: Cryptosporidiosis is a waterborne disease, has as aggravating the difficulty of preventing environmental contamination and the absence of effective therapeutic measures. With pronounced importance to the cattle, causes villous atrophy and inflammation resulting in loss of intestinal absorption surface. The present study aimed to characterize molecularly infection by Cryptosporidium spp. calves in the City of Formiga, Midwest region of Minas Gerais. A total of 300 stool samples from Holstein calves, and Nelore breed were evaluated by negative contrast staining of malachite green and through the reaction of nested-PCR for amplification of DNA fragments of the 18S subunit of the RNA gene ribosomal. Occurrence of 5.33% (16/300) for malachite green and 4.66% (14/300) were observed by PCR, and by molecular characterization were identified species Cryptosporidium andersoni and Cryptosporidium ryanae. Calves infected had lower elimination of Cryptosporidium spp. There was no positive relationship with all the variables. Sequencing were found in the species C. andersoni and C. ryanae, including parasitizing calves in age, not reported in the literature. These two species of Cryptosporidium, molecularly characterized (nested PCR), the present study describes for the first time parasitizing cattle in the state of Minas Gerais, Brazil / Doutor

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Parasitic infections are among the commonest health problems that affect birds. The identification of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in wild birds is relevant, since these animals can act as disseminators of these parasites to humans through environmental contamination. The aim of this research was to determine the occurrence and to perform the molecular characterization of Cryptosporidium and Giardia species/genotypes in feces from free-living and captive wild birds treated in the Laboratory of Wild Animals Research from the Federal University of Uberlândia (LAPAS) and kept in the Zoo of the Municipal Park of Sabiá, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. The DNA extracted directly from feces was submitted to nested-PCR and semi-nested PCR analysis for amplification of fragments of the SSU rRNA and gdh genes of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., respectively. Results showed that out of 256 samples collected, 10 (3.9%) were positive for Cryptosporidium spp., and 8 (3.1%) for Giardia spp.. Out of 172 samples of captive birds, six (3.49%) were positive for Cryptosporidium spp., and four (2.32%) for Giardia spp.. Out of 84 samples of free-living birds, four (4.76%) for Cryptosporidium spp. and four (4.76%) for Giardia spp. were positive. The occurrence of parasites in waterfowl (n=39) was two (5.13%) for Cryptosporidium spp., and four (10.26%) for Giardia spp.; in non-aquatic birds (n=217), it was eight (3.7%) and four (1.84%), respectively. There was no significant difference in the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. among captive and free-living birds (p = 0.62 and 0.29, respectively). Although no statistical analysis was performed for the positivity of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. between waterfowl and non aquatic birds, the meeting of these parasites in waterfowl may have implications for the transmission of these protozoa to humans and other animals. RFLP and sequencing analysis have identified C. meleagridis in two birds of the Anatidae family, in two Aratinga leucophthalma (White-eyed parakeet), and in two Athene cunicularia (Burrowing Owl). They have also found C. baileyi in three Amazona aestiva (Blue-fronted Parrot) and in one Amazona amazonica (Orange-winged Parrot). Only three positive samples for Giardia spp. - classified as Giardia duodenalis assemblage B - were sequenced, two of them found in Rupornis magnirostris (Roadside Hawk), and one in Theristicus caudatus (Buff-necked Ibis). The essay concluded that Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are present in wild birds in the microregion of Uberlândia, MG. The existence of zoonotic C. meleagridis and G. duodenalis assemblage B in the animals of this study may have a negative impact on public health. / Infecções parasitárias estão entre os problemas sanitários comuns que acometem aves em todo mundo. A identificação de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em aves silvestres é relevante, visto que esses animais podem agir como veiculadoras dos parasitos para o ser humano, por meio da contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e caracterizar geneticamente as espécies/genótipos de Cryptosporidium e Giardia em aves silvestres de cativeiro e vida livre atendidas no Laboratório de Pesquisa em Animais Silvestres da Universidade Federal de Uberlândia (LAPAS-UFU) e procedentes do zoológico do Parque Municipal do Sabiá, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. O DNA, extraído diretamente das fezes coletadas, foi submetido a reações de nested-PCR e semi-nested PCR para amplificação de fragmentos dos genes SSU rRNA e gdh de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., respectivamente.Das 256 amostras coletadas, 10 (3,9%) foram positivas para Cryptosporidium spp. e 8 (3,1%) para Giardia spp. Das 172 amostras de aves de cativeiro, seis (3,49%) foram positivas para Cryptosporidium spp.. e quatro (2,32%) para Giardia spp.; das 84 amostras de aves de vida livre, quatro (4,76%) para Cryptosporidium spp. e quatro (4,76%) para Giardia spp. foram positivas. A ocorrência dos parasitos em aves aquáticas (n=39) foi dois (5,13%) para Cryptosporidium spp. e quatro (10,26%) para Giardia spp.; em aves não aquáticas (n=217), oito (3,7%) e quatro (1,84%), respectivamente. Não foi encontrada diferença significante na ocorrência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre os grupos de aves de cativeiro e vida livre (p=0,62 e 0,29, respectivamente). Apesar de não ter sido realizada análise estatística para a positividade de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre aves aquáticas e não aquáticas, ressalta-se que o encontro desses parasitos nas aves aquáticas pode ter implicações na transmissão desses protozoários para o homem e outros animais. Análises de RFLP e sequenciamento identificaram C. meleagridis em duas aves da família Anatidae, duas Aratinga leucophthalma (Maritaca) e duas Athene cunicularia (Corujas-buraqueira) e C. baileyi em três Amazona aestiva (papagaio-verdadeiro) e uma Amazona amazonica (papagaio-do-mangue). As amostras sequenciadas para Giardia spp., provenientes de dois Rupornis magnirostris (Gavião-carijó) e uma Theristicus caudatus (Curicaca), foram classificadas como Giardia duodenalis assemblage B. Cryptosporidium spp. e Giardia spp. estão presentes em aves silvestres de cativeiro e vida livre na microrregião de Uberlândia, MG. A presença de C. meleagridis e G. duodenalis assemblage B, considerados zoonóticos, em animais desse estudo, pode gerar impacto negativo na saúde pública. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

A giardíase e a criptosporidiose estão entre as enfermidades de veiculação hídrica originadas por protozoários que têm ganhado maior notoriedade nas últimas décadas. Os microrganismos causadores dessas doenças têm-se tornado um desafio para as empresas de abastecimento de água. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium sp e Giardia sp nas águas brutas de quatro afluentes do Lago Guaíba: Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí. Juntos, abastecem uma população de dezenas de municípios da Região Metropolitana de Porto Alegre. Foram feitas amostragens mensais, durante doze meses, em cada afluente. Foi empregado o método de filtração em membrana para pré-concentração, centrifugação para concentração, separação imunomagnética para purificação e comparados três métodos de detecção para ambos os microrganismos: DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol), Safranina e Kinyoun para Cryptosporidium e DAPI, Iodo Lugol e Iodo Tricrômico para Giardia. A avaliação microscópica e contagem de (oo)cistos foram feitas utilizando-se microscopia de imunofluorescência e contraste de fase para o DAPI e microscopia óptica para as demais colorações. Obtiveram-se os seguintes resultados: para os Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí, respectivamente: 75, 42, 33 e 25% das amostras foram positivas para Cryptosporidium e 92, 83, 67 e 50% para Giardia. As concentrações médias de Giardia foram superiores às de Cryptosporidium em todos os quatro afluentes. Os valores médios observados foram: 80 oocistos e 176 cistos/100L no Taquari; 47 oocistos e 66 cistos/100L no Caí; 19 oocistos e 53 cistos/100L no Sinos; 16 oocistos e 92 cistos/100L no Gravataí. Estes podem estar subestimados devido à baixa recuperação dos métodos analíticos existentes e empregados. As densidades encontradas indicam que os protozoários estão disseminados nas águas superficiais dos formadores do Lago Guaíba.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T12:47:32Z No. of bitstreams: 1 Joao Carlos Gomes Borges.pdf: 2198512 bytes, checksum: de1f2ccf01e9496dcc35acd9a6874feb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T12:47:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joao Carlos Gomes Borges.pdf: 2198512 bytes, checksum: de1f2ccf01e9496dcc35acd9a6874feb (MD5) Previous issue date: 2007-02-12 / The aim of the present study was to verify the occurrence of oocysts of Cryptosporidium spp. in Antillean manatees (Trichechus manatus) and Amazonian manatees (Trichechus inunguis) from Brazil, and also evaluate the hydric transmission of the coccidium and the influence between this pathogen and the staff involved directly in captive animal care and management. Fecal samples were collected from 34 Antillean manatees, 12 Amazonian manatees and also 21 employees involved in the management activities. Water samples, used to the manatees consumption and management were also collected. The fecal samples were processed by sedimentation in formol-ether and Kinyoun technique. Before the water samples were processed, this was submitted to a filtration process in membrane (diameter of 47 mm, porosity of 3 μm) under negative pressure. At the end of the analyzing operations, the positive samples were submitted to the Direct Immunoflorescence Test. The results obtained by light and fluorescence microscopy analysis showed alcohol-acid-resistant structures compatible with oocyst of Cryptosporidium spp. in 25% (34/136) and 4,30% (05/115) of thematerial proceeding from Antillean manatees and Amazonian manatees, respectively; 23,80% (10/42) of the material obtained from the employees; and 66,67% (04/06) of the water samples analyzed. The results showed the possibility of Antillean manatees and Amazonian manatees could become infected with Cryptosporidium spp., and participate in the epidemiology of this waterborne disease by eliminate of viable oocyst in water environment wich can infect man and a wide range of domestic and wild animals. The hand of the frequency of Cryptosporidium spp. in staff involved directly in captive animal care and management could be the way to prevent the infections the manatee’s species. / O objetivo neste trabalho foi verificar a ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp. em peixes-boi marinhos (Trichechus manatus) e peixes-boi amazônicos (Trichechus inunguis) no Brasil, além de avaliar a transmissão hídrica deste coccídio e a sua influência com os funcionários diretamente envolvidos no manejo dos animais mantidos em cativeiro. Para tanto foram coletadas amostras fecais provenientes de 34 peixes-boi marinhos, 12 peixes-boi amazônicos e 21 funcionários envolvidos em atividades de manejo, bem como amostras de água superficial destinada a manutenção e consumo dos animais. As amostras fecais foram processadas através da sedimentação pelo formoléter e coradas pela técnica de Kinyoun. No que concerne as amostras de água, estas foram submetidas ao processo de filtração em membranas (47 mm de diâmetro e 3 μm de porosidade) sob pressão negativa. No final das análises, as amostras positivas foram submetidas ao Teste de Imunofluorescência Direta. Os resultados obtidos namicroscopia de luz e fluorescência revelaram oocistos de Cryptosporidium spp. em 25% (34/136) e 4,30% (05/115), sendo inerentes respectivamente aos peixes-boi marinhos e amazônicos, 23,80% (10/42) do material proveniente dos funcionários e 66,67% (04/06) das análises de água. Os resultados finais apontam a possibilidade dos peixes-boi marinhos e peixes-boi amazônicos infectarem-se com Cryptosporidium spp., e participar da epidemiologia das doenças veiculadas pela água, através da eliminação de oocistos viáveis ao ambiente que podem infectar o homem e um grande número de animais domésticos e silvestres. O controle da freqüência de infecções de Cryptosporidium spp. nos funcionários diretamente envolvidos no manejo e cuidados dos animais mantidos em cativeiro pode ser um dos caminhos para prevenir a infecção nas espécies de peixes-boi.

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T17:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_MirnaAparecida_D.pdf: 2261433 bytes, checksum: 8a2057547b84881643df7c062530dc1e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Cryptosporidium spp. e Giardia spp. são parasitos causadores de gastroenterites destacando se pela elevada incidência de casos, características de resistência aos tratamentos químicos e capacidade de permanência no meio ambiente. O importante papel desses protozoários em vários surtos epidêmicos de veiculação hídrica e alimentar coloca em evidência as hortaliças que, por serem ingeridas cruas, favorecem a aquisição destas parasitoses. No Brasil, são escassos os dados sobre a ocorrência destes protozoários em vegetais como alface e rúcula, alimentos frescos amplamente consumidos pela população. O propósito deste estudo foi investigar a ocorrência destes parasitos em amostras de hortaliças cultivadas na região agrícola de Campinas (SP), e comercializadas pela Central de Abastecimento de Campinas S.A. CEASA, avaliar a água utilizada na irrigação das mesmas, e as condições higiênico sanitárias das Unidades de Produção Agrícola UPAs estudadas (n=15). Para tanto, a presença de oocistos e cistos foi determinada em amostras de alface (Lactuca saliva) e rúcula (Eruca saliva) e parâmetros fisico químicos foram estabelecidos para a água de irrigação destes vegetais, em diferentes épocas do ano. As coletas foram realizadas durante dois anos consecutivos, nos períodos de maior freqüência d<;ls chuvas e de maior ocorrência (esperada) de casos de criptosporidiose em Campinas (devido à acentuada sazonalidade do protozoário no fim do verão e início do outono) e, em períodos que correspondessem a épocas de maior utilização das águas subsuperficiais na irrigação das hortaliças, devido à escassez de chuvas. As diversas amostras de vegetais, após serem lavadas com 100ml de solução contendo Tween 80 (0,01 %), foram filtradas em membranas de ésteres mistos de celulose (47mm de diâmetro e 3/lm de porosidade nominal), seguida de eluição mediante extração mecânica. Após concentração por centrifugação (1050 x g por 10 minutos), os sedimentos resultantes foram examinados mediante a reação de imunotluorescência direta e teste confirmatório das características morfológicas empregando se o corante tluorogênico DAPI (4',6' diamidino 2 phenylindole). Também se utilizou a técnica de centrífugo tlutuação em sulfato de zinco, com o intuito de comparar a eficiência de detecção destes protozoários nos vegetais. Amostras de água de irrigação (2 litros) foram processadas pela mesma metodologia. A presença de cistos de Giardia spp. ocorreu em 4,1% das 120 amostras de hortaliças examinadas, no primeiro e terceiro períodos de coleta, e não foram encontrados na água de irrigação. Cryptosporidium spp. não foi detectado em nenhum dos períodos investigados, tanto em relação às amostras de hortaliças quanto da água de irrigação. A técnica de centrífugo flutuação em sulfato de zinco mostrou se ineficiente, pois não foi revelada a presença de cistos de protozoários e oocistos de Cryptosporidium spp. nas amostras de hortaliças, quando este método foi empregado. A sensibilidade da técnica de filtração em membranas para os vegetais foi de 2,3 % a 63,1 % para oocistos e, para cistos, 1,1 % a 29,3 %. Em amostras de água de irrigação, a sensibilidade desta metodologia variou de 6,0 % a 15 % para Cryptosporidium spp. e, de 23,6 % a 25,8 % para Giardia spp.. Cistos foram encontrados em 6,6 % das amostras de alface, com densidade de 180 a 230 cistos/50g e, 1,6% das amostras de rúcula, com densidade de 180 cistos/50g de folhas de vegetal o que representa elevada importância em Saúde Pública, dada a possibilidade de aquisição de giardiose. O esclarecimento sobre a dispersão destes protozoários no ambiente e o aperfeiçoamento de procedimentos de detecção dos mesmos, quer em amostras hídricas ou alimentares, são vantajosos para o entendimento da epidemiologia destes patógenos / Abstract: Cryptosporidium spp. and Gim-dia spp. are waterborne parasites that cause gastroenteritis. They are known for the high incidence of cases and the chemical resistance to treatments and capacity to stay intact for a prolonged time in environment. Today, the great influence of protozoa in several waterborne and foodborne outbreaks, becomes evident that vegetables eaten raw are dangerous and favor acquisition of intestinal parasitosis. In Brazil, there is little information on transmission of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in fresh vegetables as lettuce and rucola, largely consumed by population. The objective of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium and Giardia in vegetable samples from agricultural area in Campinas District (SP, Brazil), and commercialized by Central de Abastecimento de Campinas S.A, CEASA, as well to evaluate the water used in vegetable irrigation, and the health and hygiene related conditions of Unidades de Produção Agrícola - UPAs (n = 15). Therefore, the presence of cysts and oocysts was determined in lettuce (Lactuca saliva) and rucola (Eruca saliva) samples and physico chemical parameters were established for irrigation water of vegetables, in different seasons of the year. Collections were made over two consecutive years, in such a way that chqracterized seasons of higher frequency of rains corresponding to months of higher occurrence of cryptosporidiosis cases in Campinas district (due to accentuated seasonality of protozoa in the end of summer and fhe beginning of autumn) and in per~?ds that corresponded to séasons of high peak utilization of subsurface waters in vegetable irrigation due to lack of rain. After washed with 100 ml of Tween 80 (0,01 %) several vegetable samples were filtered through mixed esters of cellulose membranes (4 7mm diameter and 311m nominal porosity), followed by elution by mechanical extraction. After concentration by centrifugation (1050 x g 10 minutes), the resulting sediments were examined by means of direct immunofluorescence reaction and confirmatory morphological test using the fluorogenic stain DAP1 ( 4', 6' diamidino 2 phenylindole), it was also used zinc sulfate centrifugation flotation method to compare detection efficiency of protozoa in vegetables. Irrigation water samples (2L) were processed by the same methodology. The presence of Giardia spp. cysts occurred in 4,1% of 120 vegetable samples, in the first and third collection periods, cysts were not detected in irrigation water. Cryptosporidium spp. was not detected in either investigated seasons Cin relation to vegetable samples and irrigation water) and the presenee of eysts and ooeysts was not detected through zinc sulfate centrifugation flotation method in either vegetable samples. Sensibility of membrane filtration method for vegetables was 2,3 % to 63,1 % oocysts and 1, I % to 29,3 % eysts, respeetively. In irrigation water samples, the sensibility of methodology varied from 6,0 % to 15 % for Cryptosporidium spp. and from 2.,3 % to 25,8 % for Giardia spp.. Cysts were found in 6,6% of lettuce samples with a density of 180 to 230 cysts/50g, and 1,6 % of rueola samples with a density of 180 eysts/50g found on vegetable leaves. Therefore, it has a high importance for public health due to risk faetor for aequisition of giardiasis. The knowledge on protozoa spreading into environment and the improvement of deteetion process in food or water samples are useful for epidemiological understanding of those parasites / Doutorado / Doutor em Parasitologia

O protozoário parasita Cryptosporidium emergiu como um dos mais importantes contaminantes da água responsável por vários surtos de criptosporidiose, afetando mais de 427.000 indivíduos em todo o mundo. Até hoje, pelo menos oito espécies do gênero Cryptosporidium foram descritas, mas somente o C. parvum têm sido associado às doenças gastroentestinais em humanos. A criptosporidiose pode ser fatal para imunocomprometidos e pode debilitar severamente indivíduos imunocompetentes. Os oocistos de Cryptosporidium são resistentes às pressões ambientais, podendo sobreviver por vários meses no ambiente aquático e são também resistentes à desinfecção por cloro utilizada no tratamento convencional de água. Este estudo teve como objetivos determinar a ocorrência e densidade de Cryptosporidium em amostras de água superficiais e tratadas (após floculação, coagulação, sedimentação, filtração e desinfecção) coletadas em duas Estações de Tratamento de Água da cidade de São Paulo. A relação entre os parâmetros da qualidade da água e a ocorrência de oocistos de Cryptosporidium também foi analisada. As amostras de água foram coletadas em intervalos mensais durante o período de um ano. Estas amostras foram concentradas por ''precipitação do carbonato de cálcio'' (VESEY et alii, 1993a) e através da técnica da ''membrana filtrante'' (ALDOM & CHAGLA, 1994). Os oocistos foram identificados pela técnica de imunofluorescência direta e a presença destes foi confirmada por microscopia de contraste de fase. Os níveis de coliformes totais e E.coli nas amostras de água foram determinados pela técnica dos tubos múltiplos, empregando substrato fluorogênico e cromogênico (Colilert 18, Iddex). De um total de 24 amostras analisadas, de cada tipo de água (sendo 12 de cada Estação de Tratamento de Água), os oocistos foram detectados em 75% das amostras de água bruta e em 12,5% das amostras de água tratada, quando estas foram concentradas por precipitação química e em 73,91% das amostras de água bruta e 33,33% das amostras das água tratada, quando as mesmas foram concentradas pela técnica da membrana filtrante. A densidade de oocistos de Cryptosporidium não apresentou correlação significativa com indicadores microbiológicos e os parâmetros físico-químicos de qualidade da água (p > 0,05). Os resultados obtidos sugeriram que o tratamento de água convencional é ineficaz para a remoção de oocistos, ressaltando a necessidade de estabelecer programas de gerenciamento em bacias hidrográficas (mananciais) que efetivamente garantam a baixa densidade de oocistos de Cryptosporidium em águas / The protozoan parasite Cryptosporidium has emerged as one of the most important contaminants of water, causing waterbone outbreaks of criptosporidiosis which have affected more than 427.000 individuals worldwide. At least 8 species of the genus Cryptosporidium has been associated with gastrointestinal disease in humans. Cryptosporidiosis can be life threatening to immunocompromised humans and can severely debilitate immunocompetent people. Cryptosporidium oocysts are environmentally robust and can survive in aquatic environments for months. Oocysts are resistant to standard chlorination disinfection used for drinking water treatment. The aims of this study were to determine the occurrence and the levels of Cryptosporidium in raw water samples and in drinking water (after flocculation, coagulation, sedimentation, filtration and disinfection) collected in two potable water treatment plants of the city of São Paulo. The relationship between parameters of water quality and the occurrence of Cryptosporidium were also analysed. Samples were collected at monthly intervals for a year. The samples were concentrated by flocculation (VESEY et alii, 1993a) and by membrane filtration (ALDOM & CHAGLA, 1994). The oocysts were identified by direct immunofluorescence assay and the presence was confirmed by phase contrast microscopy. The levels of coliforms and E.coli in the water samples were determined by the multiple tube technique using chromogenic and fluorogenic substrate (Colilert 18, Iddex). From a total of 24 samples of the each type of water investigated (12 oh the each potable water treatment plant), oocysts were detected in 75% of raw water and in 12,5% of drinking water samples, when concentrated by flocculation and in 73,91% of raw water samples and in 33,33% of drinking water samples when concentrated by membrane filtration. Cryptosporidium oocysts levels in the samples investigated was not significantly associated with microbiological indicators and water quality parameters (p > 0,05). The results suggested that the conventional treatment of water is ineffective in removing the oocysts, highlighting the necessity of establishing water catchment management programs which effectively ensure low levels of Cryptosporidium in raw water supplied to the treatment plants.

Water supply systems aim, among other objectives, to protect public health by reducing the concentration of, and potentially eliminating, microorganisms pathogenic to human beings. Yet, because water supply systems are engineered systems facing variable conditions, such as raw water quality or treatment process performance, the quality of the drinking water produced also exhibits variability. The reliability of a treatment system is defined in this context as the probability of producing drinking water that complies with existing microbial quality standards. This thesis examines the concept of reliability for two physicochemical treatment technologies, conventional rapid granular filtration and ultrafiltration, used to remove the protozoan pathogen Cryptosporidium parvum from drinking water. First, fault tree analysis is used as a method of identifying technical hazards related to the operation of these two technologies and to propose ways of minimizing the probability of failure of the systems. This method is used to compile operators’ knowledge into a single logical diagram and allows the identification of important processes which require efficient monitoring and maintenance practices. Second, an existing quantitative microbial risk assessment model is extended to be used in a reliability analysis. The extended model is used to quantify the reliability of the ultrafiltration system, for which performance is based on full-scale operational data, and to compare it with the reliability of rapid granular filtration systems, for which performance is based on previously published data. This method allows for a sound comparison of the reliability of the two technologies. Several issues remain to be addressed regarding the approaches used to quantify the different input variables of the model. The approaches proposed herein can be applied to other water treatment technologies, to aid in prioritizing interventions to improve system reliability at the operational level, and to determine the data needs for further refinements of the estimates of important variables. / Applied Science, Faculty of / Civil Engineering, Department of / Graduate

Cryptosporidiosis is an infection caused by Cryptosporidium; a protozoan parasite that infects the gastrointestinal tract. The infection is of major public health concern in both developed and developing countries. Faecal samples were collected from 160 in-patient adults, with complaint of diarrhoea, admitted at Victoria hospital in Alice, Nkonkobe Municipality. Twenty apparently healthy subjects were included as controls. All diarrhoea positive patients were interviewed to record socio-demographic information, water supply and animal contact. Initial screening was carried out by microscopy and ELISA to detect positive Cryptosporidium. Genomic DNA was extracted from microscopically positive samples and a PCR reaction was perform to amplify the (18S) SSUrRNA gene for further identification and epidemiology of Cryptosporidium. Data were analysed using Pearson‘s χ2 and Fisher‘s exact test to assess the univariate association between Cryptosporidium infection and the possible risk factors. Of the 180 subjects screened for cryptosporidial infection, Cryptosporidium antigen was detected in 122 giving an overall prevalence of 67.8 percent. In HIV-positive diarrhoea patients, prevalence increased with ages; between 31-43 (mean age 36.5 yr) and 70-82 (mean age 75.8 yr) had a higher prevalence (100 percent) of the antigen than 18-30 (mean age 23.2 yr) and 83-95 (mean age 88.8 yr) (50.0 percent) in HIV-positive diarrhoea patients (P > 0.05). In HIV-negative diarrhoea patients, prevalence was highest in the 18-30 (mean age 23.2 yr) (87.5 percent) and least (35.7 percent) in those aged 83-95 (mean age 88.8 yr) (P > 0.05). Cryptosporidium antigen was higher in females than in males. Of 115 females (mean age 46.7yr) who participated in the study, antigen was detected in 90 (78.2 percent) against 32 (71.1 percent) of 45 males (mean age 42.6yr). None of the 20 apparently healthy control subjects was found to be infected with Cryptosporidium. Cryptosporidium was detected in 27 HIV-positive and 97 HIV-negative diarrhoea patients by any one of the techniques. Antigen detection by ELISA 14 showed the highest positivity 96 (76.8 percent) in HIV- negative and 26 (74.3 percent) in HIV- positive diarrhoea patients. PCR detected eighty-nine (71.2 percent) cases in HIV-negative and 23 (65.7 percent) in HIV-positive patients with diarrhoea. Only 13 (37.1 percent) HIV-positive and 34 (27.2 percent) HIV-negative diarrhoea patients were found positive for Cryptosporidium by modified ZN. No significant difference was observed in sensitivity of antigen detection by ELISA and PCR (96.9 percent) in HIV-negative diarrhoea patients, respectively. Specificity of the staining technique was 88.9 percent in HIV-positive and 96.6 percent in HIV-negative diarrhoea patients. No significant difference was found in specificity of antigen detection by ELISA and PCR in HIV-positive and HIV-negative diarrhoea patients, respectively. Positive predictive value of ZN staining in both HIV-positive and HIV-negative diarrhoea patients (92.3 and 96.9 percent) was statistically higher than ELISA and PCR. No significant difference was observed in negative predictive value of ZN technique for detection of Cryptosporidium between HIV-positive and HIV- negative diarrhoea patients. Differences found in prevalence rates due to water source, suggest that the high infection rates of specific groups are associated with their exposure to the contaminated water supply. The results indicate that Cryptosporidium infection is highly prevalent in adult faecal specimens in the Nkonkobe Municipality, an indication of active infection that is likely to emerge as major human pathogen in this location due to socioeconomic changes which favour transmission. However, sequencing analysis is required to differentiate between Cryptosporidium genotypes in the various outbreaks

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Acute diarrhea is one of the most common infectious diseases and still one of the leading causes of morbidity and mortality in the pediatric world, a global public health problem. Several efforts have been made over the years to reduce infant mortality, despite the commitment of diarrhea still occupy a significant space of malnutrition in children under 5 years. A wide spectrum of enteric pathogens can cause acute childhood diarrhea, among which we can mention Rotavirus, Norovirus and Cryptosporidium spp. Rotavirus is one of the most important. Currently two live attenuated live Rotavirus vaccines have been licensed and are available globally: a human monovalent strain (RV1) (Rotarix®, GlaxoSmithKline Biologicals) and a pentavalent bovine-human rearrangement (RV5) (Rotateq®). Brazil was one of the first countries to integrate the vaccine into its national immunization program (2006), and it was possible to observe significant improvements in reducing infant mortality and hospitalizations for diarrheal diseases in children from Rotavirus. However, diarrhea continues to be a serious health problem, and can be avoidable and treatable. Several etiological agents may be related to these intestinal infections and deserve to be investigated. The objective of this study was to verify the presence of the three etiological agents Cryptosporidium spp., Rotavirus and Norovirus, associated with diarrhea in children aged 0 to 11 years old, attended at Sergipe Emergency Hospital (HUSE). The samples were tested by Elisa for Cryptosporidium spp and Rotavirus for fecal antigen detection and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for Norovirus detection. A total of 92 diarrheic stool specimens were analyzed, of which 62% were positive for one of the pathogens studied, 49% positive for Norovirus, 10% for Rotavirus, 4% for Crysptoporidium spp and 37% of diarrheal samples were not positive for any enteropathogen studied. Norovirus was the main cause of childhood diarrhea in the period studied, with predominance (98%) of the GII genotype. The most affected age group were children younger than 24 months. Infections have shown similar symptoms. Complementary studies are needed to discover other etiological agents involved in gastroenteritis in the State of Sergipe, since a significant number of children with diarrhea did not present positivity to any of the pathogens studied. / A diarreia aguda é uma das doenças infecciosas mais comuns e ainda uma das principais causas de morbidade e mortalidade no mundo pediátrico, um problema global de saúde pública. Diversos esforços vêm sendo realizados no decorrer dos anos para redução da mortalidade infantil, apesar do empenho as diarreias ainda ocupam um significativo espaço da desnutrição em menores de 5 anos. Um amplo espectro de patógenos entéricos pode provocar a diarreia infantil aguda, dentre esses podemos citar os Rotavírus, Norovírus e Cryptosporidium spp, sendo o Rotavírus um dos mais importantes. Atualmente duas vacinas orais contra o Rotavírus, de vírus vivos atenuados foram licenciadas e estão disponíveis globalmente: uma cepa monovalente humana (RV1) (Rotarix®, GlaxoSmithKline Biologicals) e um rearranjo bovino-humano pentavalente (RV5) (Rotateq®). O Brasil foi um dos primeiros países a integrar a vacina em seu programa nacional de imunizações (2006), e foi possível observar melhorias significativas na redução da mortalidade infantil e nas hospitalizações por doenças diarreicas em crianças decorrentes de Rotavírus. No entanto, as diarreias continuam sendo um grave problema de saúde, podendo ser evitável e tratável. Diversos agentes etiológicos podem estar relacionados a essas infecções intestinais e merecem ser investigados. O objetivo desse estudo foi verificar a presença dos três agentes etiológicos Cryptosporidium spp., Rotavírus e Norovírus, associados aos quadros de diarreia aguda em crianças de 0 a 11 anos atendidas no Hospital de Urgência de Sergipe (HUSE). As amostras foram testadas por Elisa para Cryptosporidium spp e Rotavírus, para detecção de antígenos nas fezes, e reação de cadeia em polimerase após transcrição reversa (RT-PCR) para detecção de Norovírus. Foram analisadas 92 amostras de fezes diarreicas das quais 62% apresentaram positividade para um dos patógenos estudados, 49% positivos para Norovírus, 10% para Rotavírus, 4% para Crysptoporidium spp e 37% das amostras diarreicas não apresentaram positividade para nenhum enteropatógeno estudado. Norovírus foi o principal causador da diarreia infantil no período estudado, com predominância (98%) do genótipo GII. A faixa etária mais acometida foi de crianças menores de 24 meses. As infecções demonstraram sintomas semelhantes. Estudos complementares são necessários para descobrir outros agentes etiológicos envolvidos em gastroenterites do Estado de Sergipe, visto que uma quantidade significativa de crianças com diarreia não apresentou positividade para nenhum patógeno estudado. / São Cristóvão, SE