Made available in DSpace on 2017-07-25T19:29:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 francielicolussi.pdf: 2001927 bytes, checksum: 373492674f45bb0ed7d467ad407070d5 (MD5) Previous issue date: 2006-09-01 / The general objective of this research was the evaluation of in vitro culture of Euphorbia heterophylla L. one of the principal weeds that effects yield of important economic crops such as soybean and corn. In addition, some assays considered the evaluation of the species’ potential biochemical value to the pharmaceutical industry. In vitro germination of E. heterophylla seed was tested on cotton batting as substrate, full strength and ½ MS basal medium. Results show a greater percent germination and better growth indices of plant development on the ½ MS medium. Explants tested for organogenesis included hypocotyls, cotyledon and root explants which were plated on media containing the following plant growth regulators (phytohormones): 0.5 mg/L 2ip, 1mg/L Kin + 0.1 mg/L IAA, 0.5 mg/L 2ip + 0.1 mg/L IAA, 1mg/L 2ip + 0.1mg IAA, 1.5 mg.L-1 2iP + 0.1 mg.L-1 AIA added to ½ MS media. Explants were evaluated for the presence of buds, the number of buds/ explant and the number of plantlets that were rooted and re-established. On the average, hypocotyls explants responded with two buds/ explant and 50% of these developed by direct organogenesis on media containing 0.5 mg/L of 2ip. No regeneration was observed on cotyledon or root explants. Root cultures developed in all treatments with or without auxin. These results will assist in future physiological tests such as evaluating the herbicide resistance of this species and also in evaluating possible use in the pharmaceutical industry. With this objective in mind we tested the sensitivity of root cultures in vitro. Roots were placed in ½ MS media containing 0,1,2,4 and 8 times the manufacturer’s recommended dose for the products Scepter® and Flex®. The active ingredients were imazaquin and fomesafen respectively, and they are inhibitors of ALS synthesis and PROTOX. The results obtained showed evidence of suppression of the normal growth of these roots as compared to the control treatment. Therefore, this suggests that an in vitro test of this type can be used to measure resistance this species to herbicides. / O objetivo geral deste trabalho foi estudar o cultivo in vitro de Euphorbia heterophylla. L, que é uma das principais plantas daninhas que afeta a produtividade das grandes culturas como soja e milho. Essa espécie também vem sendo estudado pelos aspectos fitoquímicos para indústria farmacêutica, para isto foram propostos alguns ensaios. Para avaliar a germinação in vitro de sementes de E. heterophylla foram testados substratos de algodão, meio MS e MS/2. Os resultados mostraram maior porcentagem de germinação e melhores índices de desenvolvimento das plantas em meio MS/2. Para o teste de organogênese foram utilizados explantes hipocotiledonares, cotiledonares e radiculares com as seguintes tratamentos: 0,5 mg.L-1 2iP, 1mg.L-1 CIN + 0,1 mg.L-1 AIA, 0,5 mg.L-1 2iP + 0,1 mg.L-1 AIA, 1 mg.L-1 2iP + 0,1 mg.L-1 AIA , 1,5 mg.L-1 2iP + 0,1 mg.L-1 AIA adicionado ao meio MS/2. Foram avaliados o número de explantes com gema, número de gemas por explante, número de plântulas enraizadas e aclimatadas. Obteve-se em média duas gemas por explante hipocotiledonar, em 50% destes, a partir de organogênese direta com o uso de 0,5 mg.L-1 de 2iP. Não houve regeneração a partir dos explantes cotiledonares e radiculares. A cultura racinar desenvolveu-se em todos os tratamentos contendo ou não auxina. Com o objetivo de avaliar a resistência desta planta a herbicidas, testamos a sensibilidade de culturas de raízes in vitro. As raízes foram repicadas em meio MS/2 com as seguintes concentrações: 0; 1; 2; 4 e 8 vezes a dose recomendada pelo fabricante dos herbicidas com ingrediente ativo imazaquin o fomesafen, inibidores da síntese de ALS e PROTOX. Com nomes comerciais de Scepter® e Flex®, respectivamente. Os resultados obtidos evidenciaram um retardo no crescimento normal destas raízes, quando comparada a testemunha.

As atividades que envolvem a floricultura vêm se destacando positivamente no cenário econômico do agronegócio brasileiro. Dentre as espécies de plantas utilizadas para este fim ressaltam-se as espécies pertencentes à família botânica Asteraceae, principalmente as do gênero Chrysanthemum. A espécie C. cinerariaefolium Vis. (Piretro da Dalmácia) é mundialmente cultivada visando à produção de aleloquímicos que apresentam atividades de inseticidas naturais (piretrinas). No Brasil chegou a ser produzida para esse fim em larga escala, no município de Taquara-RS na década de 30 a 40. Recentemente o interesse de seu cultivo tem aumentado como uma alternativa natural de manejo de pragas como planta ornamental, principalmente para jardins. Contudo, o fato de não produzir sementes férteis limita sua capacidade de propagação massal. Visando aperfeiçoar sua micropropagação foram realizados dois experimentos. No experimento 1 foi avaliado aos 30 dias de cultivo a influência de cinco concentrações de hipoclorito de sódio (10, 20, 30, 40 e 50% do produto comercial Mazzarolo) e cinco tempos de permanência na solução durante a desinfestação dos explantes (5, 10, 15, 20, 25 min.). Ao todo foram isolados 125 meristemas totalizando 25 tratamentos com cinco repetições. Os explantes isolados foram inoculados no meio de isolamento, o qual foi constituído de MS + 1,0 mg.L-1 de BAP + 0,1 mg.L-1 de GA3 + 0,01 mg.L-1 ANA + 30 g.L-1 de Sacarose em 7,0 g.L-1 de Agar. No experimento 2 foi avaliado a influência das diferentes concentrações de hipoclorito e dois tempos de permanência na solução desinfetante sobre a porcentagem de necrose, estruturas amorfas, plântulas formadas e comprimento de brotos. As plântulas regeneradas do experimento 1 foram inoculadas no meio de multiplicação que constou do MS + 0,4 mg.L-1 de Thiamina HCl + 100 mg.L-1 de Mio-Inositol + 0,05 mg.L-1 de ANA + 1,0 mg.L-1 de BAP + 40 g.L-1 de Sacarose e 7,0 g.L-1 de Agar. O pH dos meios foi ajustado em 5,9 antes da autoclavagem. Os resultados obtidos no experimento 1 indicaram que quanto maior o tempo de permanência na solução, maior a porcentagem de necrose. Porém, quanto menor a permanência maior a taxa de contaminação microbiana. No experimento 2, observou-se que a porcentagem de necrose é maior na concentração de 50%. Não houve influência dos fatores analisados na produção de estruturas amorfas. Para o número de brotos/explante e comprimento de brotos, o melhor desempenho se deu na solução 30%. Porém, a taxa de brotos por explante diminuiu à medida que aumentou o tempo de permanência na solução. Com relação ao comprimento dos brotos, os melhores resultados foram observados até o tempo de 15 minutos de permanência. Assim conclui-se que C. cinerariaefolium Vis. responde positivamente ao cultivo in vitro. A taxa de necrose aumenta à medida que aumenta a concentração de hipoclorito. Por outro lado, a taxa de contaminação aumenta à medida que diminui a concentração da solução desinfetante. A concentração de hipoclorito de sódio e o tempo de permanência na solução desinfetante afetam o número e o comprimento de brotos produzidos nos subcultivos. / The activities that involve floriculture have distinguished positively in the economic scenario of the Brazilian agribusiness. Among the plant species used for that purpose it can be distinguished the species belonging to the botanical family Asteraceae, mainly from the genus Chrysanthemum. The species C. cinerariaefolium Vis. is worldwide cultivated in order to produce the alelochemicals, which have activities of natural insecticides (pyretrine). In Brazil it was produced in large scale, in the Taquara-RS County in the decade of 30 to 40. Recently the interest on its cultivation has increased as natural alternative of pest management as ornamental plant, mainly in yards. However, the fact of no seed is produced by the plant that limits its capacity of massal production. In order to optimize its micropropagation two experiments were developed. In the experiment 1 it was evaluated 30 days after cultivation the influence of five concentrations of sodium hipochlorine (10, 20, 30, 40 and 50% of the commercial product Mazzarolo), and five time lengths of the explants permanence in the disinfecting solution (5, 10, 15, 20 and 25 min.). It was isolated 125 meristems, 25 treatments with five replications. The isolated explants were inoculated in isolation media, that was constituted of MS + 1.0 mg.mL-1 of BAP + 0.1 mg.L-1 of GA3 + 0.01 mg.L-1 ANA + 30 g.L- 1 of sucrose in 7.0 g.L-1 of Agar. In the experiment 2 it was evaluated the influence of different concentrations of hipochlorine and two length of time in disinfection solution measuring the percentage of necrosis, amorphous structures, seedlings formed and length of the sprouts. The regenerated seedlings from experiment 1 were inoculate in a medium of multiplication that was of MS + 0.4 mg.L-1 of Thiamine HCl + 100 mg.L-1 of Mio-Inositol 0.05 mg.L-1 of ANA + 1.0 mg.L-1 of BAP + 40 g.L-1 of sucrose and 7.0 g.L-1 of Agar. The pH of the medium was adjusted to 5.9 before the autoclaving process. The results obtained in the experiment 1 indicated that the higher the time length in the solution, the higher is the percentage of necrosis. However, the higher is the permanence of higher rate of microbial contamination. In the experiment 2; it was observed that the percentage of necrosis is higher at the concentration of 50%. There was no influence of the analyzed factors in the yield of amorphous structures. For the number of sprouts/explants and length of sprouts, the better performance was in the solution of 30%. However, the rate of sprouts per explants diminished as the length of time in the solution increased. The best results for sprout length were obtained up to 15 minutes of permanence. Therefore, it can be concluded that C. cinerariaefolium Vis. responds positively to in vitro culture. The rate of necrosis increases as the hipochlorine concentration is higher. On the other hand, the contamination rate increases as the disinfection solution diminishes. The concentration o hipochlorine sodium as the length of time of permanence in the initial disinfecting solution used during the explants disinfection affects the number and the sprout length produced during the subculture.

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.

Gramíneas do gênero Brachiaria apresenta importância econômica como forrageiras no Brasil. O melhoramento genético, entretanto, é restrito devido a diferenças de ploidia entre os genótipos e a reprodução por apomixia. A indução de haplóides e duplo-haploides pelo cultivo in vitro de anteras ou de micrósporos isolados é relatada em diversas espécies. Além da criação de novos genótipos linhagens duplo-haplóides podem ser utilizadas como ferramentas para o estudo de marcadores moleculares. Dentre os fatores essenciais para o sucesso da técnica está o estádio do desenvolvimento do micrósporo, sendo o estádio uninucleado, geralmente, o mais responsivo. Um dos objetivos deste trabalho foi contribuir para a definição de parâmetros para a cultura de haplóides em Brachiaria. Flores e anteras isoladas de B. brizantha (B105) em diferentes estádios de desenvolvimento foram processadas para microscopia de luz. Os eventos observados foram associados a marcadores morfologicos. Experimentos de cultura de anteras foram estabelecidos e estruturas semelhantes a calos ocorreram em pouco explantes. Secções histológicas revelaram a ocorrência de micrósporos com divisão simétrica, indicando um possível desvio da rota do micrósporo para a rota esporofítica. Genes definidos como marcadores de embriogênese como SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE), podem ser utilizados para identificar o potencial embriogênico de células ou grupo de células, possibilitando monitorar a resposta in vitro. Duas seqüências parciais de cDNA isoladas de B. brizantha apresentaram alta identidade com homólogos de SERK1 e SERK2 de monocotiledôneas. Análise filogenética confirmou a alta similaridade sugerindo serem os possíveis ortólogos de SERK em Brachiaria, sendo nomeados como BbrizSERK1 e BbrizSERK2. Clones parciais da seqüência genômica foram obtidos. Análise de Southern blot identificou duas cópias deste gene tanto na planta apomítica como na sexual. A análise da expressão de BbrizSERK2 por RT-qPCR na planta apomítica e sexual e durante a embriogênese somática revelou que este gene não é específico de tecidos reprodutivos. Expressão diferencial de BbrizSERK entre ovários apomíticos e sexuais, especialmente durante a megasporogênese, foi observada por hibridização in situ. Detectou-se forte sinal na célula-mãe do megásporo em ovários sexuais e ausência de sinal em ovários apomíticos. Após a antese, a expressão na planta apomítica foi observada apenas na região micropilar e proembriões. Na sexual, foi observada nas antípodas e aparato da oosfera. Em anteras o mesmo padrão de expressão foi observado entre a planta apomítica e sexual, com forte expressão no tapete e nas células-mãe do grão de pólen, o que sugere um importante papel deste gene na esporogênese em Brachiaria. Em calos embriogênicos forte sinal foi observado em massas proembriogênicas, em embriões globulares e também em embriões somáticos mais desenvolvidos, confirmando a função de SERK como marcador de embriogênese em Brachiaria. Em anteras cultivadas in vitro, forte sinal foi observado em micrósporos binucleados com divisão simétrica e em alguns micrósporos vacuolados. Experimentos futuros com genes desta família poderão contribuir para monitorar processos in vitro em Brachiaria, indicando células ou grupos de células com potencial embriogênico, ajudando na definição das melhores condições de cultivo para a embriogênese e também para o estudo da reprodução neste gênero / Brachiaria, gramineae present economic importance as forage in Brazil. The genetic breeding, however, is restricted by differences in ploidy among the genotypes and the apomixis. The development of a haploid and double haploid production has been reported for several species. Besides the production of new genotypes the development of double haploid lineages may be used for studies with molecular markers. Among important factors for the success of haploid plant development relies on the microspore developmental stage, with the uninucleate stage being usually the most responsive. One of the objectives of this work was to contribute for the definition of parameters for the development of haploid cultures in Brachiaria. B. brizantha (B105) flowers and isolated anthers were collected in different stages of development and processed for light microscopy. The events observed were associated to morphological markers. Anther culture experiments were established and calli formation ocurred to a few explants. Histological sections of anthers cultivated in vitro, however, revealled the occurrence of microspores with symmetrical divisions, indicating a possible alternative to the sporophytic route. Genes defined as markers of embryogenesis, such as SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE), may be utilized to identify the embryogenic potential of cells, or cell clusters, in an attempt to monitor the in vitro response. Two partial sequences of cDna isolated from B. brizantha (B30) showed high identity of these two sequences to SERK1 and SERK2 homologs from monocots. The phylogenetic analysis confirmed high similarity with these genes, indicating that these sequences are possible orthologs of SERK in Brachiaria, hence these were named BbrizSERK1 and BbrizSERK2. Partial clones of genomic sequences were obtained. Southern blot analysis suggested two copies of this gene in both apomictic and sexual B. brizantha. The expression analysis of BbrizSERK2 by RT-qPCR revealed that this gene is not specific to reproductive tissues. Differential expression of BbrizSERK between apomictic and sexual ovaries, especially during megasporogenesis, was observed by in situ hybridization. A strong signal was detected in the megaspore mother cell in sexual ovaries, with absence in apomictic ovaries. After anthesis, the expression in the apomictic plant was observed only in the micropylar region and proembryos, however, in the sexual plant, the expression was observed in the antipodals and egg apparatus. In anthers, the same in situ pattern was observed in the apomictic and the sexual plant, with a strong expression in the tapetum and the pollen grain mother cell, suggesting an important role of this gene in the sporogenesis in Brachiaria. In embryogenic calli, strong signal was observed in proembryogenic masses, globular embryos and somatic embryos in later stages of development, confirming the role of SERK as an embryogenic marker in Brachiaria. In cultivated anthers, a strong signal was observed in binuclear microspores with symmetric division and vacuolated microspores. Further studies with this gene family may contribute to monitoring the in vitro processes in vitro in Brachiaria, defining cells or cell clusters with an embryogenic potential, helping for the definition of culture conditions for embryogenesis and also for reproductive studies in this genus

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:24:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Capa Camila Marillac.pdf: 113274 bytes, checksum: 456413e1a73b4f6c572c42092e6ba8a6 (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / Cyrtopodium eugenii Rchb. f. (Orchidaceae) is a specie widely distributed in Brazilian savannah, being the Planalto Central its main center of diversification. C. eugenii is a terrestrial specie, usually found in the Cerrado, growing in sand soil, dry environment and to the half shade. Due the beauty and exotic character of its flowers, C. eugenii present high ornamental and commercial potential. However, no studies were found of its preservation even in vitro protocols for shoots obtainment to be used in flower production. Thus, the present study has as objective to characterize the fenology, morphology and reproductive biology in C. eugenii and to establish protocols for symbiotic and asymbiotic germination in vitro. The plants studied grows at the Biological Reserve Prof. Jose Ângelo Rizzo, a forest remainder of 500 ha of bioma Cerrado, whose predominant vegetation is of the type Cerrado Rupestre, located in the Serra Dourada, city of Mossâmedes-GO. From the months of July of 2007 through August of 2008 monthly visits had been carried out for accompaniment and collects of data of 51 plants, distributed in three populations. For the establishment of the germination protocols in vitro of C. eugenii established the symbiotic culture, pairs the isolated fungic contends the mycorrhizae Epulorhiza sp., obtained from roots of C. eugenii, with the seeds of C. eugenii in medium FA, and the asimbytic culture, where the seeds had been cultivated in culture mediuns that are regularly used for seed orchids germination, being the complete MS medium, the MS medium with reduction to the half of the concentration of macronutrients (½ MS) and the Knudson medium (KC). The analysis of the behavior of C. eugenii allowed to verify that this species present annual budding and at the dry time. At the rainy time, when the temperature raised, plants of C. eugenii start to invest its energy in the production of vegetative parts, such as sprouts of pseudobulbs and leves. The flowers of C. eugenii are disposed of cyclical form in the floral connecting rods, which arrive to reach up to 130 cm of height. This species is self-compatible, even so in natural conditions, the fruit set is low. Not evidenced was presence of efficient pollinators. High frequency of ants during budding of C. eugenii was verified. However, the observations indicated that these insects only act as visitors and they are attracted by the secretion of substance at the time of the budding throughout the floral connecting rod and that have high concentration of soluble solid. The establishment of the symbiotic germination in vitro did not disclose resulted satisfactory because no protocorms formation were obtained. However, satisfactory results had been founded in the asymbiotic germination in vitro, being the ½ MS medium superior to the KC and the complete MS medium for the time, germination of seeds and establishment of new plants of C. eugenii. / A espécie Cyrtopodium eugenii Rchb. f. (Orchidaceae) é amplamente distribuída pelo Brasil, sendo o Planalto Central o seu principal centro de diversidade. C. eugenii é uma espécie terrestre, comumente encontrada no Cerrado, crescendo em solos arenosos, ambientes secos e à meia sombra. Devido ao caráter exótico de sua inflorescência e à beleza de suas flores, C. eugenii apresenta elevado potencial ornamental e comercial. Entretanto, não são encontrados estudos para sua preservação ou métodos para obtenção de mudas que possam ser utilizadas na floricultura ou no paisagismo. Assim, o presente estudo tem como objetivos caracterizar a fenologia, a morfologia e os apectos reprodutivos desta espécie de orquídea e estabelecer protocolos para germinação simbiótica e assimbiótica in vitro. Parte do trabalho foi desenvolvida na Reserva Biológica Prof. José Ângelo Rizzo, um remanescente florestal de 500 ha do bioma Cerrado, cuja vegetação predominante é do tipo Cerrado Rupestre, localizada na Serra Dourada, município de Mossâmedes GO. No período de julho de 2007 a agosto de 2008 foram realizadas visitas mensais para acompanhamento e coleta de dados fenológicos e de biologia floral de 51 indivíduos, distribuídos em três sub-populações. Para o estabelecimento dos protocolos de germinação in vitro de C. eugenii estabeleceu-se o cultivo simbiótico, pareando o isolado fúngico contendo o micélio micorrízico de Epulorhiza sp., obtido a partir de raízes de C. eugenii, com as sementes de C. eugenii em meio FA, e o cultivo assimbiótico, em que as sementes foram cultivadas em meios de cultura comumente usados para germinação de orquídeas, sendo o meio MS completo, o meio MS com redução à metade da concentração de macronutrientes (½ MS) e o meio de Knudson (KC). A análise do comportamento de C. eugenii permitiu verificar que esta espécie apresenta floração anual e na época seca. Na época chuvosa, quando a temperatura é mais elevada, plantas de C. eugenii passam a investir sua energia na produção de partes vegetativas, tais como brotos de pseudobulbos e folhas. As flores de C. eugenii são dispostas de forma cíclica nas hastes florais, as quais chegam a atingir até 130 cm de altura. Esta espécie é autocompatível, embora em condições naturais, a taxa de frutificação seja baixa. Não foi observada presença de polinizadores eficientes. Foi verificada elevada freqüência de formigas durante a floração. Porém, as observações indicaram que estes insetos atuam apenas como pilhadores e que são atraídos pela secreção de uma substância liberada constantemente na época da floração ao longo da haste floral e cujo teor de sólidos solúveis é elevado. O estabelecimento da germinação simbiótica in vitro não revelou resultados satisfatórios uma vez que a formação de protocormos não foi obtida. Todavia, resultados satisfatórios foram encontrados na germinação assimbiótica in vitro, sendo o meio ½ MS superior ao KC e ao MS completo para o tempo, taxa de germinação de sementes e estabelecimento de novas plântulas de C. eugenii.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-05-16T17:16:14Z No. of bitstreams: 1 1998 - Martin de Oliveira Freire.pdf: 3405177 bytes, checksum: 9dd9696f361aee86d23af9b3a1182c2e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T17:16:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1998 - Martin de Oliveira Freire.pdf: 3405177 bytes, checksum: 9dd9696f361aee86d23af9b3a1182c2e (MD5) Previous issue date: 1998-03-02 / The aim of this study is to test the viability of in vitro produced mini-tuber as potato propagules (Jeat Bintje cultivar) under field conditions. We set up a 8X2 factorial type experiment, testing eight different growth regulators balances and the number of explants per vial (1 and 4 explants/vial). The evaluated variables were: number of mini-tubers, total weight and average weight of mini-tubers. The number of mini-tubers produced shows no significant difference between treatments was observed. The use of auxin concentration 1mg/l produced the best results in total and average weight. The number of explants per vial also produced significant difference in the mini-tuber average weight, one explants per vial treatment (1 explant /10 ml medium) showing better results than four explants per vial (1 explant / 6.25 ml media). Subsequently, the material was planted first in a greenhouse, and then transplanted to beds under conditions similar to the field. Seventy percent (70%) of the planted material yielded tubers, indicating the possibility of using mini-tubers as field propagules. Other experiments are suggested to optimize the production of tubers in the field using mini-tubers as propagules. / Com o objetivo de estudar a viabilidade da utiliza??o de minitub?rculos, produzidos in vitro, como prop?gulo de batata em condi??es de campo, foi implantado, preliminarmente, um experimento do tipo fatorial 8X2, testando oito diferentes balan?os de fitorreguladores e dois tipos de frascos com diferentes n?meros de explantes. A cultivar utilizada foi JeatBintje. Os resultados avaliados foram: n?mero de minitub?rculos, peso total e peso m?dio de minitub?rculos. Em rela??o ao n?mero de minitub?rculos produzidos n?o houve diferen?a significativa entre os tratamentos. Em rela??o a peso total e a peso m?dio, o uso de auxina na concentra??o 1mg/l apresentou os melhores resultados. Em rela??o ao frasco, a ?nica diferen?a significativa foi para peso m?dio do minitub?rculo, sendo o tratamento com 1 explante por frasco (1 explante/ 10 ml de meio) superior ao com 4 explantes por frasco (1 explante/ 6,25 ml de meio). Posteriormente, o material obtido foi plantado, primeiro em casa de vegeta??o e em seguida transplantado para canteiros em condi??es semelhantes ao campo. Setenta por cento (70%) do material plantado em canteiro apresentou produ??o de tub?rculos, indicando a possibilidade da utiliza??o do minitub?rculo como prop?gulo em condi??es de campo. Novos experimentos s?o recomendados para otimizar a produ??o de tub?rculos em campo utilizando os minitub?rculos como prop?gulos

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Due to a raise in forest ecosystem alterations, either by anthropic or natural action, there has been a need for knowledge and conservation of Brazilian forest genetic resources, since environment preservation has a great social and economical interest. Eugenia involucrata DC. (Cerejeira-do-mato), a Brazilian forest fruit species which has been used in projects for the recovery of degraded areas and legal and permanent reservation areas can as well be an alternative income for family agriculture, through the use of its non-timber products. However, besides this species having recalcitrant seeds, which lose viability fast, there is a lack of scientific and technological information that subsidize its sustainable use. Because of this, the present paper aimed at selecting efficient methods of calogenesis induction from leaf explants, addressing indirect somatic embryogenesis and, simultaneously, the improvement of this species in vitro cultivation techniques. In regard to calogenesis in vitro, microbial contamination and callus induction on leaf discs of Eugenia involucrata were assessed and selected, about phenolic oxidation: the combinations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and Thidiazuron (TDZ) concentrations, the same way, the embryogenic potential of the calluses formed was assessed, through a histochemical test; sucrose concentrations; the combinations of sucrose and TDZ concentrations; and, also, the reduction of sucrose and 2,4-D and TDZ phytoregulators concentrations. All of them added to MS nutrient medium. As main results, the following stand out: the phenolic oxidation was higher in the presence of 2,4-D, and the combination of 2,4-D and TDZ was not significant in callus formation, only cytokinin, however the presence of auxin in the nutrient medium is essential for calogenesis. The same way, the calluses presented embryogenic potential with a friable aspect and nodular structures; TDZ has influenced the microbial contamination, once in its presence there is a smaller occurrence of bacterial colonies and fungal mycelia. Sucrose and TDZ, when applied in isolation, influenced the formation and quality of the calluses, however, the interaction between them was not significant. The decrease of sucrose and phytoregulators 2,4-D and TDZ did not affect the tested variables. The best combinations of 2,4-D and TDZ for calogenesis on leaf discs of Eugenia involucrata are 5 and 5 μM and 5 and 10 μM, respectively. The most indicated concentration of TDZ is 5 μM, for it being the concentration with which the calluses have an improved quality and, simultaneously, contributes for cost reduction. The most efficient sucrose concentrations for calogenesis are 30 or 90 gL-¹, being that the calluses quality is superior in the bigger one. The calogenic formation on leaf discs of Eugenia involucrata aiming at an indirect somatic embryogenesis is possible. / Em decorrência do aumento nas alterações dos ecossistemas florestais, por ação natural ou antrópica, tem havido uma demanda por conhecimento e conservação de recursos genéticos florestais do Brasil, haja vista que é de grande interesse social e econômico a preservação do ambiente. A Eugenia involucrata DC. (Cerejeira-do-mato) por ser uma espécie frutífera florestal, nativa do Brasil, que vem sendo utilizada em projetos de recuperação de áreas degradadas, em áreas de reserva legal e de preservação permanente, pode servir, também, como uma alternativa de renda para a agricultura familiar, por meio da utilização de seus produtos não madeireiros. Entretanto, além dessa espécie possuir sementes recalcitrantes, que perdem a viabilidade com rapidez, há carência de informações científicas e tecnológicas que subsidiem a sua utilização sustentável. Em virtude disso, o presente trabalho objetivou selecionar métodos eficientes de indução à calogênese a partir de explantes foliares, visando à embriogênese somática indireta, e, simultaneamente, o aperfeiçoamento de técnicas de cultivo in vitro dessa espécie. No que diz respeito à calogênese in vitro, foram avaliadas e selecionadas, sobre a oxidação fenólica, a contaminação microbiana e a indução de calos em discos foliares de Eugenia involucrata: as combinações de concentrações de ácido 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) e Thidiazuron (TDZ), bem como foi avaliado o potencial embriogênico, por meio de teste histoquímico, dos calos formados; as concentrações de sacarose; as combinações de concentrações de sacarose e TDZ; e, ainda, a diminuição de concentrações de sacarose e dos fitorreguladores 2,4-D e TDZ. Todos adicionados ao meio nutritivo MS. Como principais resultados destacam-se: a oxidação fenólica foi maior na presença do 2,4-D, e a combinação de 2,4-D e TDZ não foi significativa na formação de calos, somente a citocinina, entretanto a presença da auxina no meio nutritivo é essencial para a calogênese. Igualmente, os calos apresentaram potencial embriogênico com aspecto friável e estruturas nodulares; o TDZ influenciou a contaminação microbiana, já que na sua presença há menor incidência de colônias bacterianas e micélios fúngicos. A sacarose e o TDZ, quando empregados isoladamente, influenciaram a formação e a qualidade dos calos, entretanto, a interação entre eles não foi significativa. A diminuição da sacarose e dos fitorreguladores 2,4-D e TDZ não afetaram as variáveis testadas. As melhores combinações de 2,4-D e TDZ para a calogênese em discos foliares de Eugenia involucrata são 5 e 5 μM ou 5 e 10 μM respectivamente. A concentração de TDZ mais indicada é de 5 μM, por ser a concentração em que os calos têm a qualidade incrementada, e, simultaneamente, contribui para a redução de custos. As concentrações de sacarose mais eficientes para a calogênese são 30 ou 90 gL-1, sendo que na maior, a qualidade dos calos é superior. É possível a formação calogênica em discos foliares de Eugenia involucrata visando à embriogênese somática indireta.

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-01-23T14:01:53Z No. of bitstreams: 5 13.pdf: 1084974 bytes, checksum: 385f250239d33b253937c1a0da7c2522 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2109 bytes, checksum: aa477231e840f304454a16eb85a9235f (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-10T11:17:33Z (GMT) No. of bitstreams: 5 13.pdf: 1084974 bytes, checksum: 385f250239d33b253937c1a0da7c2522 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2109 bytes, checksum: aa477231e840f304454a16eb85a9235f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T11:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 5 13.pdf: 1084974 bytes, checksum: 385f250239d33b253937c1a0da7c2522 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2109 bytes, checksum: aa477231e840f304454a16eb85a9235f (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Este trabalho teve por objetivo avaliar a germina??o in vitro de sucupira-preta (Bowdichia virgilioides) e adaptar um procedimento b?sico de micropropaga??o para essa mesma esp?cie. Para a germina??o in vitro, sementes escarificadas e n?o escarificadas foram inoculadas em diferentes concentra??es e formula??es de meios de cultura suplementados com aditivos (PVP e carv?o ativado). Posteriormente, as plantas foram transferidas para tubetes e aclimatadas em casa de vegeta??o. Para a micropropaga??o, explantes foram inoculados em meio de cultura WPM, suplementado com concentra??es de BAP, constituindo a fase de multiplica??o. No alongamento, os tratamentos foram constitu?dos de combina??es de ANA e BAP adicionadas ao meio de cultura. Para a fase o enraizamento, brota??es foram inoculadas em meio contendo concentra??es de AIB ou combina??es dos aditivos (PVP e carv?o ativado) com concentra??es de ANA. Na aclimata??o, as plantas foram transplantadas para substrato e cobertas com saco de polietileno que foram, posteriormente, retirados, perfurados ou n?o-retirados, e mantidas em ambiente de laborat?rio, constituindo os tratamentos da pr?-aclimata??o. A aclimata??o em casa de vegeta??o foi realizada ap?s o per?odo de pr?-aclimata??o. A germina??o in vitro de sementes escarificadas de sucupira-preta foi alcan?ada utilizando-se os meios de cultura MS e WPM a 50% e ocorreu independentemente do tipo de aditivo utilizado. A aclimata??o de plantas germinadas in vitro ocorreu independentemente do hist?rico de aditivos ou meios de cultura utilizados. Durante a micropropaga??o da esp?cie, a multiplica??o foi alcan?ada utilizando-se segmentos cotiledonares e a concentra??o de 0,3 mg.L-1 de BAP adicionada ao meio. A combina??o de 0,3 mg.L-1 de ANA com 0,03 mg.L-1 de BAP promoveu o alongamento. A indu??o de ra?zes ocorre na aus?ncia de AIB ou em resposta ?s concentra??es de 0,5 e 2,5 mg.L-1. O carv?o ativado adicionado ao meio de cultura de enraizamento melhorou a qualidade das brota??es. A aclimata??o foi alcan?ada utilizando-se uma cobertura pl?stica entorno da planta. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncia Florestal, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2012. / ABSTRACT This study aimed to evaluate the in vitro germination of sucupira-preta (Bowdichia virgilioides) and develop a basic micropropagation procedure for that species.? For in vitro germination seeds scarified or not scarified were inoculated at different concentrations and types of culture medium supplemented with two types of additives (PVP or activated charcoal). Subsequently, plants were transferred to tubes and acclimatized in the greenhouse.?For micropropagation, explants were inoculated in culture medium WPM supplemented with BAP being the multiplication phase.?For elongation, the treatments were combinations of BAP with ANA that were added to the medium of culture.?For rooting, shoots were inoculated in culture medium containing concentrations of AIB or combinations of additives (PVP or activated charcoal) with concentrations ANA.?For the period of acclimatization, the plants were transplanted and covered with polythene bags which were subsequently removed or not, and kept in closed environment, providing treatments for pre-acclimatization, and later, in a greenhouse constituting acclimatization.?The culture media MS and WPM 50% promoted in vitro germination of scarified seeds.?The germination of the species occurred regardless of the type of additive used.?The acclimatization of plants germinated in vitro occurred regardless of history or culture media additives used.?During the micropropagation, explants obtained from cotyledon segments and the concentration of 0,3 mg L-1 BAP added to culture medium promoted multiplication.?The combination of 0,3 mg.L-1 ANA with 0,03 mg.L-1 BAP promoted elongation.?The induction of roots occurred in absence of AIB or in response to concentrations of 0,5 and 2,5 mg L-1.?Charcoal activated added to the culture medium increased rooting quality of the shoots.?The plastic cover around the plant promoted acclimatization.

Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-19T12:44:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) rafaela_naiara_oliveira.pdf: 828917 bytes, checksum: 4fca08e2402e176f89301c9fc6e5d35b (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-12-19T16:54:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) rafaela_naiara_oliveira.pdf: 828917 bytes, checksum: 4fca08e2402e176f89301c9fc6e5d35b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T16:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) rafaela_naiara_oliveira.pdf: 828917 bytes, checksum: 4fca08e2402e176f89301c9fc6e5d35b (MD5) Previous issue date: 2016 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Este trabalho teve como objetivo desenvolver procedimentos de propaga??o in vitro de Eremanthus incanus e controlar a hiperidricidade em explantes durante o cultivo. Foram realizados cinco experimentos, que envolveram as etapas de germina??o, multiplica??o e alongamento. No experimento um, avaliou-se a influ?ncia dos meios de cultura MS e WPM (25, 50, 75 e 100% dos sais e vitaminas) no percentual de germina??o e na altura, n?mero de folhas e peso de mat?ria seca das pl?ntulas produzidas. Nos experimentos dois, tr?s e quatro os tratamentos consistiram de dois tipos de recipientes (tubos de ensaio e frascos de cultura) e quatro formas de veda??o (pel?cula de PVC, papel celofane, fita microporosa e tampas espec?ficas). No experimento dois, avaliou-se a influ?ncia dos recipientes e das formas de veda??es sobre o percentual de germina??o e de contamina??o, altura, n?mero de folhas e peso de mat?ria seca de pl?ntulas. No experimento tr?s, foram avaliados o n?mero de brota??es e a hiperidricidade em explantes na fase de multiplica??o, em tr?s subcultivos. J? no experimento quatro, a fase de alongamento foi avaliada em fun??o dos recipientes e formas de veda??o, em rela??o ?s vari?veis altura, hiperidricidade e peso de mat?ria seca. No experimento cinco, foram testadas quatro concentra??es de BAP e de TDZ e avaliados o n?mero de brota??es, hiperidricidade e calosidade, em dois subcultivos. No experimento um, o meio WPM75 apresentou o maior percentual de germina??o, enquanto o meio MS75 apresentou maior altura e n?mero de folhas, e o WPM100 maior peso de mat?ria seca. No experimento quatro, as combina??es tubo+fita, tubo+PVC e frasco+PVC proporcionaram os maiores percentuais de germina??o, enquanto os menores percentuais de contamina??o foram observados nos tratamentos tubo+fita e tubo+tampa. A combina??o tubo+celofane apresentou maior valor de altura e peso de mat?ria seca, e frasco+PVC maior n?mero de folhas. Observou-se no experimento tr?s, com rela??o ao n?mero de brota??es, que no subcultivo um a combina??o frasco+celofane foi superior, enquanto nos subcultivos dois e tr?s o tratamento tubo+celofane se destacou. Para a hiperidricidade, no subcultivo um, a combina??o tubo+tampa foi a que apresentou menor hiperidricidade, no subcultivo dois os tratamentos tubo+PVC e tubo+tampa se destacaram, e no subcultivo tr?s o melhor tratamento foi tubo+celofane. Na fase de alongamento (Experimento quatro), a combina??o tubo+celofane foi a que apresentou maior altura m?dia de explantes. Nos tr?s subcultivos, n?o ocorreu hiperidricidade na combina??o frasco+celofane, sendo tamb?m nessa combina??o observado o maior peso de mat?ria seca. No experimento cinco, o tratamento 0,75 mg L-1 BAP apresentou o maior n?mero de brota??es, nos dois subcultivos. Para a hiperidricidade, em ambos subcultivos, o BAP apresentou plantas com menor n?vel de hiperidricidade. Conclui-se que, na germina??o de sementes de Eremanthus incanus, o meio WPM com 75% de sais e vitaminas ? o mais indicado, enquanto para o estabelecimento da cultura o melhor ? o MS 75%. O tipo de recipiente e veda??o influenciam na multiplica??o, no alongamento e na hiperidricidade dos explantes, sendo que a combina??o do recipiente tubo de ensaio com a veda??o papel celofane transparente proporcionou, em geral, os melhores resultados. Quando comparadas as citocininas BAP e TDZ na multiplica??o, indica-se 0,75 mg L-1 de BAP. Mais estudos envolvendo a propaga??o in vitro devem ser realizados, principalmente relacionados ?s etapas de enraizamento e aclimata??o, de forma a consolidar uma metodologia para E. incanus. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncia Florestal, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / This study aimed to develop procedures for in vitro propagation of Eremanthus incanus and control the vitrification in explants during cultivation. Five experiments were carried out, involving the stages of germination, multiplication and stretching. In experiment 1, we evaluated the influence of culture medium MS and WPM (25, 50, 75 and 100% of salts and vitamins) in the percentage of germination and height, number of leaves and dry weight of the produced seedlings. The experiments 2, 3 and 4 treatments consisted of two types of containers (test tubes and culture vials) and four types of sealing (PVC film, cellophane, micropore tape and specific covers). In experiment 2, we evaluated the influence of the containers and sealing forms on the percentage of germination and contamination, height, number of leaves and dry weight of seedlings. In experiment 3, we evaluated the number of shoots and vitrification in explants in multiplication phase in three subcultures. In the experiment 4, the elongation phase was assessed according to the containers and sealing forms in relation to height variables, vitrification and dry matter weight. In experiment 5, four concentrations of BAP and TDZ were tested and the number of shoots, vitrification and callus were evaluated in two subcultures. In experiment 1, the culture medium WPM75 had the highest percentage of germination, while the MS75 medium showed higher height and number of leaves, and the WPM100 presented the greater weight of dry matter. In experiment 2, the combinations tube + tape, PVC pipe + tube and PVC + vial provided the highest percentage of germination, while the lowest percentage of contamination were observed in the treatments tube + tape and tube + cover. The tube combination tube + cellophane showed higher height and dry matter weight, and vial + PVC larger number of leaves. It was observed in the experiment 3, in relation with the number of sprouts, that in the subculture 1 the combination vial + cellophane was superior, while in subcultures 2 and 3 the treatment tube + cellophane stood out. For vitrification, in subculture 1 the combination tube + cover showed the lowest vitrification, in subculture 2 the treatments tube + PVC tube and cover + tube stood out, and in subculture 3 the best treatment was tube + cellophane. In the elongation phase (Experiment 4), the combination tube + cellophane showed the highest average height of explants. In the three subcultures, there was no vitrification in combination vial + cellophane, also being observed in this combination the greater weight of dry matter. In experiment 5, treatment 0.75 mg L-1 BAP had the highest number of shoots in the two subcultures. For vitrification, in both subcultures, BAP presented plants with lower vitrification. In conclusion, for the germination of Eremanthus incanus seeds, WPM medium with 75% of salts and vitamins is the most suitable, while for crop establishment the best medium is MS 75%. The type of container and sealing influence the multiplication, on elongation and vitrification of explants, being that the combination of the test tube container with transparent cellophane sealing provided, in general, the best results. When comparing the cytokinins BAP and TDZ in proliferation it is indicated 0.75 mg L-1 BAP. Further studies involving the in vitro propagation must be carried out, mainly related to steps of rooting and acclimatization to consolidate a methodology for E. incanus.