Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-14Bitstream added on 2014-06-13T20:59:23Z : No. of bitstreams: 1 garcia_f_me_araiq.pdf: 2358383 bytes, checksum: cddacd0254ddf476a84efe742b9370b6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho visou o estudo químico da Arrabidaea brachypoda, uma espécie pouco estudada, possuindo somente um registro de trabalho sobre o seu estudo químico na literatura. Primeiramente foi feito um trabalho de desreplicação dos extratos etanólicos dos caules, das folhas e das inflorescências em HPLC-DAD usando padrões de xantonas isoladas da A. samydoides. Observou-se que a espécie estudada não possuia xantonas como seus principais constituintes. A fração AcOEt do extrato etanólico das folhas forneceu dois flavonóis derivados de quercetina inéditos: arrabidosídeo A e arrabidosídeo B, além dos flavonóis rutina e isoquercitrina. A atividade antioxidante desses flavonóis frente ao radical DPPH foi avalidada e os valores de CI50 foram: isoquercetrina 15,10 μM, rutina 4,88 μM, arrabidosídeo A 8,95 μM e arrabidosídeo B 5,34 μM. Além disso, essas substâncias foram ensaiadas para a atividade inibitória de mieloperoxidase (MPO). Os valores de CI50 para essa atividade foram: isoquercetrina 3,75 nM, rutina 3,60 nM, arrabidosídeo A 1,80 nM e arrabidosídeo B 4,82 nM e mostraram o potencial antiinflamatório desses flavonóis. / The scope of this work was the phytochemical study of Arrabidaea brachypoda with only one previous chemical study reported in the literature. Initially a dereplication method was applied to the barks, leaves and flowers ethanolic extracts using xanthones previously isolated from A. samydoides as standards. The crude extract of A. brachypoda did not show xanthones as major constituents. The AcOEt fraction obtained from leaves ethanolic extract yielded two new falvonols: arrabidoside A and arrabidoside B, along with isoquercitrin and rutin. The antioxidant activity of these flavonols was evaluated using DPPH and IC50 values obtained were: isoquercitrin 15,10 μM, rutin 4,88 μM, arrabidoside A 8,95 μM and arrabidoside B 5,34 μM. Inhibitory activity of mieloperoxidase enzyme of the four flavonols was also evaluated. The values of IC50 obtained were: isoquercitrin 3,75 nM, rutin 3,60 nM, arrabidoside A 1,80 nM and arrabidoside B 4,82 nM and showed de anti-inflammatory potential of these flavonols.

Submitted by NATÁLIA CAROLINA VIEIRA null (vieira_naty@hotmail.com) on 2016-03-21T18:33:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Natália Carolina Vieira.pdf: 4489683 bytes, checksum: bb278e0db97defa0e9b2982e4b2a0703 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T18:08:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_nc_me_araiq.pdf: 4489683 bytes, checksum: bb278e0db97defa0e9b2982e4b2a0703 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T18:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_nc_me_araiq.pdf: 4489683 bytes, checksum: bb278e0db97defa0e9b2982e4b2a0703 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cada ano vem crescendo a busca por novas fontes de produtos naturais, na qual os micro-organismos recebem uma grande atenção, sendo eles de extrema importância na descoberta de compostos bioativos e promissores a novos fármacos. Esse trabalho teve como foco o estudo de fungos filamentosos da rizosfera de Senna spectabilis. Foram testadas suas viabilidades e após esse processo, dez fungos foram escolhidos para esse trabalho e submetidos aos testes biológicos como citotóxico, anticolinesterásico e antifúngico e também foram obtidos seus perfis cromatográficos e químicos por CLAE-DAD e RMN, além da identificação filogenética. Após esses resultados iniciais, dois fungos foram escolhidos para desenvolver o método de desreplicação, sendo eles Fusarium solani e F. oxysporum. Esses fungos apresentaram atividade antifúngica contra C. cladosporioides e C. sphaerospermun e também apresentaram atividade anticolinesterásica, além disso, F. oxysporum apresentou também atividade antitumoral contra câncer do colorretal. Através das técnicas CG-EM, CLAE-EM, CLAE-EM/EM e RMN foram propostas estruturas moleculares interessantes para substâncias produzidas por esses micro-organismos, sendo que para o extrato de Fusarium solani foram identificados 12 metabólitos: ácido fumárico, ácido málico, tirosol, ácido p-hidroxibenzóico, ácido azelaico, ácido fusárico, (-)-ácido jasmônico/ácido (+)-7-iso-jasmônico, 10-hidroxicaptotecina, C-16-esfinganina, xestoaminol C, armilarina/armilaripina e beauvericina e para o extrato do fungo Fusarium oxysporum foram observados 14 metabólitos: ácido succínico, ácido phidroxibenzóico, ácido hexadecanóico, ácido octadecanóico, ácido fusárico e três de seus derivados, integracídeo C, fusagerina C/D, C-16-esfinganina, xextoaminol C, armilarina/armilaripina e beauvericina. Além desses compostos, outros 5 metabólitos comuns às espécies solani e oxysporum foram observados, mas não puderam ser estruturalmente caracterizados por CLAE-EM/EM, no entanto, suas massas moleculares já foram relatadas para espécies de Fusarium. / The search for new sources of natural products has been increasing to the rational exploration of microorganisms as great sources for the discovery of bioactives and promising compounds as well as new drugs. This work focused on the study of filamentous fungi, isolated from Senna spectabilis’s rhizosphere from which were tested its viabilities. Thereon, ten fungi were chosen for this work and were submitted to biological tests, such as cytotoxic, anticholinesterase and antifungal. In addition, their chemical profiles were obtained for HPLC and NMR, besides phylogenetic identification. Finally, two fungi were chosen to develop dereplication method, being them Fusarium solani and F. oxysporum.These fungi howed anticholinesterase activity and antifungal activity against C. cladosporioides and C. sphaerospermun. Additionally, F. oxysporum showed antitumor activity against colorectal cancer. Through the GC-MS, HPLC-MS, HPLC-MS/MS and NMR, we were able to obtained interesting molecular chemotypes for these microorganisms; for F. solani we identified 12 metabolites, fumaric acid, malic acid, tyrosol, p-hydroxybenzoic acid, azelaic acid, fusaric acid, (+)-7-iso-jasmonic acid/(-)-jasmonic acid, 10- hydroxycamptotecin, C16-sphinganine, xestoaminol C, armillarin/armillaripin and beauvericin and for F. oxysporum was observed 14 metabolites, succinic acid, phydroxybenzoic acid, hexadecanoic acid, octadecanoic acid, fusaric acid and its three derivatives, integracide C, fusagerin C/D, C-16-sphinganine, xestoaminol C, armillarin/armillaripin and beauvericin. Besides these compounds, others 5 metabolites common to both species (solani and oxysporum) couldn’t be structurally characterized thorough LC-MS/MS, but they were accounted in several Fusarium species.

Submitted by Mariana Bordin Campideli null (mbcampideli@hotmail.com) on 2017-06-27T02:40:31Z No. of bitstreams: 1 Mariana_Dissertação_MS_versão final.pdf: 6017792 bytes, checksum: 08fb6b0078076af870beca0702bd4e17 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-28T19:37:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 campideli_mb_me_araiq.pdf: 6017792 bytes, checksum: 08fb6b0078076af870beca0702bd4e17 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T19:37:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 campideli_mb_me_araiq.pdf: 6017792 bytes, checksum: 08fb6b0078076af870beca0702bd4e17 (MD5) Previous issue date: 2017-06-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O gênero Eugenia pertence à família Myrtaceae e compreende cerca de 400 espécies de ocorrência em todo o território nacional. Algumas espécies são muito conhecidas pelas atividades antifúngica, antiviral e bactericida. Outras são descritas pelas propriedades apresentadas na redução dos níveis de triglicerídeos e colesterol. As espécies de Eugenia apresentam uma composição química diversificada, como relatos na literatura da presença de terpenos, derivados flavonoidicos (quercetina, metoxiquercetina, miricetina) e outros fenólicos como chalconas, taninos e flavonas. Mesmo tratando-se de espécies com frutos comestíveis, a literatura é bastante escassa quanto à composição química das folhas de E. handroana e E. pyriformis, e todo trabalho relatado até o presente trata-se especialmente dos óleos essenciais. Desta forma, este projeto tem como objetivo o estudo bioguiado dos extratos das folhas de três espécies do gênero: E. pyriformis Cambess, E. uniflora L. e E. handroana D. Legrand, visando identificar substâncias presentes nas frações bioativas nos ensaios antioxidante e de inibição da glicação com vistas ao desenvolvimento de cosméticos e alimentos funcionais. Extratos hidroetanólicos e suas frações foram analisados por CLAE-DAD e avaliados por ensaios biológicos (ensaio antioxidante com radical DPPH•, ação redutora sobre radicais peroxila e antiglicação), sendo a fração acetato de etila a mais ativa nas três espécies estudadas nos ensaios descritos. A fração acetato de etila de E. pyriformis e E. handroana foi submetida a cromatografia em coluna e as frações resultantes a ensaios biológicos. A fração C foi selecionada por apresentar resultados significativos nos ensaios antioxidantes e promissores no ensaio antiglicação. Esta fração foi submetida ao fracionamento por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em escala preparativa, levando a identificação de seis bandas na fração C de E. pyriformis e quatro bandas na fração C de E. handroana. A identificação estrutural das substâncias presentes nestas bandas foi feita por ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas com ionização por electrospray (IES-EM) por infusão direta, como também pela utilização de dados da literatura. Foram identificados os seguintes compostos: miricetina-3-O-α-L-ramnosídeo, quercetina-3-O-β-D-glicosídeo, quercetina-3-O-β-D-galactosídeo, quercetina-3-O-β-D-xilosídeo, quercetina-3-O-α-L-ramnosídeo, miricetina-3-O-(2″-O-galloil)-α-L-ramnosídeo, miricetina-3-O-(4″-O-galloil)-α-L-ramnosídeo, quercetina-3-O-(2″-O-galloil)-α-L-ramnosídeo e quercetina, que foram submetidos aos ensaios biológicos propostos nesse projeto. A fração acetato de etila de E. uniflora foi explorada por meio da técnica de desreplicação, devido ao seu perfil cromatográfico bastante semelhante ao das outras espécies em estudo. Assim a identificação tentativa das substâncias foi realizada através das técnicas de IES-EM, CLAE-DAD e dados de EM publicados na literatura, sendo provavelmente as mesmas substâncias observadas nas outras espécies em estudo. / The genus Eugenia belongs to the family Myrtaceae and comprises about 400 species of occurrence throughout the national territory. Some species are well known for antifungal, antiviral and bactericidal activities. Others are described by their properties in reducing triglyceride and cholesterol levels. The species of Eugenia have a diverse chemical composition, such as reports in the literature of the presence of terpenes, flavonoid derivatives (quercetin, methoxyquercetin, myricetin) and other phenolics such as chalcones, tannins and flavones. Even though it is species with edible fruits, the literature is rather scarce as to the chemical composition of the leaves of E. handroana and E. pyriformis, and all the literature reported to date is especially about the essential oils. In this way, this project aims at the bio-guided study with leaf extracts of three species of the genus: E. pyriformis Cambess, E. uniflora L. and E. handroana D. Legrand, aiming to identify substances present in the bioactive fractions, in the antioxidant and inhibition of glycation assays with a view to the development of cosmetics and functional foods. Hydroethanolic extracts and their respective fractions were analyzed by HPLC-DAD and accompanied by biological assays (antioxidant assay with DPPH• radical, reducing action on peroxyl radicals and antiglycation), with ethyl acetate fraction being the most active in the three species studied in the described assays. The ethyl acetate fraction of E. pyriformis and E. handroana was fractionated by column chromatography and the resulting fractions were submitted to biological assays. The fraction C was selected because for presented significant results in the antioxidant and promising results in the antiglycation assay. This fraction was then submitted to fractionation by preparative high performance liquid chromatography (HPLC), leading to the identification of six bands in the C fraction of E. pyriformis and four bands in the C fraction of E. handroana. The structural identification of the substances present in these bands were made through nuclear magnetic resonance (NMR) and electrospray ionisation mass spectrometry (ESI-MS) by direct infusion, as well as the use of data from the literature. The following compounds were identified: myricetin-3-O-α-L-rhamnoside, quercetin-3-O-β-D-glucoside, quercetin-3-O-β-D-galactoside, quercetin-3-O-β-D-xyloside, quercetin-3-O-α-L-rhamnoside, myricetin-3-O-(2"-O-galloyl)-α-L-rhamnoside, myricetin-3-O-(4"-O-galloyl)-α-L-ramnoside, quercetin-3-O-(2 "-O-galloyl) -α-L-rhamnoside and quercetin, which were submitted to the biological tests proposed in this project. The ethyl acetate fraction of E. uniflora was explored through the technique of dereplication because it presented a very similar chromatographic profile with that of the other species under study, so the tentative identification of the substances was performed through the ESI-MS, HPLC-DAD and MS data published in the literature, being probably the same substances observed in the other species under study.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-09Bitstream added on 2014-06-13T18:58:36Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_dc_me_araiq.pdf: 9558332 bytes, checksum: c58bd085bd26f441ab4f37dc7311835b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A espécie Garcinia xanthochymus, comumente conhecida como Gamboja, é uma árvore nativa da Índia com aproximadamente 8-10 metros, utilizada extensamente na medicina popular como antidiarréica. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico das folhas e frutos de G. xanthochymus. Dentre as substâncias isoladas, podemos destacar 3 triterpenos obtidos do extrato hexânico das folhas: friedelina (1), lanosta-8,24-dien-3-ol (2) e lanosta-7,24-dien-3-ol (3), sendo as substâncias 2 e 3 relatadas pela primeira vez na literatura da espécie. A prospecção química da fase acetato de etila das folhas revelou uma abundante presença de biflavonóides, sendo as substâncias saharanflavona (4), I3, II8-biapigenina (5), GB1a (6), (+)-morelloflavona (8), GB2a (11), volkensiflavona (12), GB2 (14), xantochimusídeo (15) e fukugisídeo (16), caracterizadas pela ligação interflavonoídica do tipo 38’’, e as substâncias podocarpusflavona (7) e amentoflavona (9), pela ligação do tipo 3’8’’. Merece destaque a substância 4, isolada pela primeira vez de fontes naturais. A composição química de G. xanthochymus constituiu-se ainda das substâncias diidrokaempferol (10), ácido vanílico (13), cinco derivados de ácidos fenilpropanoídicos: ácido 3-O-cafeoilquínico (17), ácido 5-O-cafeoilquínico (18), ácido 3-p-coumaroilquínico (21), ácido 4-O-cafeoilquínico (22) e ácido 4-p-coumaroilquínico (23); e ainda a mistura binária das benzofenonas xantochimol (19) e cicloxantochimol (20). Todas as substâncias foram relatadas pela primeira vez nas folhas de G. xanthochymus, com exceção da substância 7 e as substâncias 10, 13, 17, 18, 21, 22 e 23 ainda não haviam sido identificadas na espécie. Através da técnica CG-DIC foram identificados 15 triterpenos e/ou esteróides nos extratos de baixa polaridade e através das técnicas hifenadas, como CLAE-UV e CLAE-EM, foi... / The species Garcinia xanthochymus, known as Gamboja is a native Indian tree ca. 8-10 m high, which is extensively used as folk medicine for treating diarrhea and dysentery. This work describes the study of the chemical profile of G. xanthochymus leaves and fruits. Among the isolated substances three triterpenes were obtained from the hexane extract of the leaves: friedelin (1), lanosta-8,24-dien-3-ol (2) e lanosta-7,24-dien-3-ol (3), with compounds (2) and (3) described for the first time in the literature of this species. The chemical prospection of the ethyl acetate extract of the leaves revealed an abundant amount of biflavonoids, with compounds saharanflavone (4), I3,II8-biapigenin (5), GB1a (6), (+)-morelloflavone (8), GB2a (11), volkensiflavone (12), GB2 (14), xanthochymuside (15) and fukugiside (16) characterized by the interflavonoid 38” bond, and compounds podocarpusflavone (7) and amentoflavone (9), by the interflavonoid 3’8’’ bond. Substance 4 was isolated for the first time from a natural source. The chemical composition of G. xanthochymus included additionally dihydrokaempferol (10), vanillic acid (13), and five phenylpropanoid acid derivatives: 3-O-caffeoylquinic acid (17), 5-O-caffeoylquinic acid (18), 3-p-coumaroylquinic acid (21), 4-O-caffeoylquinic acid (22) and 4-p-coumaroylquinic acid (23); as well a binary mixture of xanthochymol (19) and cycle-xanthochymol (20) benzophenones. All the compounds were reported for the first time in the leaves of G. xanthochymus, with the exception of compound 7, and compounds 10, 13, 17, 18, 21, 22 e 23, which had not yet been identified in this species. By CG-FID technique fifteen triterpenes and/or steroids were identified in the low polarity extracts. Hyphenated techniques such as HPLC-UV and HPLC-MS were used to locate previously isolated compounds from different fractions and/or isolated substances from other works... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-20Bitstream added on 2014-06-13T20:59:17Z : No. of bitstreams: 1 carnevaleneto_f_me_araiq.pdf: 2909237 bytes, checksum: d5dbb04db98f4d6c5f87cfc6ae4bfcca (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Neste trabalho foi desenvolvida uma metodologia de desreplicação bioguiada para Qualea grandiflora e Q. cordata, duas espécies da família Vochysiaceae presentes no Cerrado Brasileiro com potencial etnofarmacológico, através dos bioensaios in vitro de inibição da polimerização da β-hematina bovina (compostos antimaláricos), redução do radical estável DPPH (antioxidante), bioautografia para avaliação da inibição da enzima acetilcolinesterase, avaliação citotóxica em linhagens celulares, avaliação de atividade antifúngica por microdiluição em placa e avaliação tripanocida frente à cepas Y de epimastigotas de Tripanosoma cruzi e, da detecção in silico dos constituintes moleculares majoritários a partir da técnica hifenada de HPLC-DAD-HRMS(ESI). As folhas e os ramos secos de Q.grandiflora e Q.cordata foram extraídos por maceração com etanol:água (8:2) e posteriormente fracionados em extração líquido-líquido com os solventes hexano, AcOEt e n-butanol. Entre os bioensaios realizados, a avaliação de inibição do radical DPPH apresentou valores significativos para as frações AcOEt dos ramos de Q.grandiflora e das folhas de Q. cordata. A partir disto, estas frações foram analisadas através da técnica hifenada HPLC-DAD-HRMS(ESI) e permitiram a detecção das flavanonas: 4',5,7-triidroxi-3'-metoxi-6,8-dimetilflavanona e 5,6,7-triidroxi-3',4'-dimetoxi-8-metilflavanona e dos diidroflavonóis: 4',7-diidroxi-5-metoxi-6-metildiidroflavonol e 3',4'-dimetoxi-5,7-diidroxi-6,8-dimetildiidroflavonol na fração AcOEt nas folhas de Q.cordata, e das flavanonas: 8-metilnaringenina e 4',5,7-triidroxi-3',6-dimetoxi-8-metilflavanona; benzofenona: Bis(2-hidroxi-4,6-dimetoxi-3-metilfenil)metanona e diidroflavonol: 3',4',5,6,7-pentaidroxi-8-metildiidroflavonol da fração AcOEt dos ramos de Q.grandiflora. Também realizou-se a análise in silico por RMN da fração... / In this work the bioguided phytochemical studies of Qualea grandiflora and Q. cordata, two species of Vochysiaceae greatly represented in the Brazilian Cerrado and with ethnopharmacology potential, were perfomed according to in vitro bioassays from antioxidant capacity and inhibition of ß-hematin polymerization (antimalarial compounds), scavenging activity of DPPH (antioxidant capacity), inhibition of acetyl cholinesterase (anti-Alzheimer), citotoxic activity against tumoral cell lines (anticancer), antifungal activity using a microdilution assay and tripanocidal activity performed with the Y-strain epimastigote forms of Tripanosoma cruzi, as well as in silico dereplication by means of HPLC-DAD-HRMS(ESI). The leaves and stem of Q.grandiflora and Q.cordata were extracted by maceration in etanol:water (8:2) and fractionated by liquid-liquid using hexane, AcOEt and n-butanol. The bioassays showed that AcOEt stem fraction of Q.grandiflora and AcOEt leaves fraction of Q. cordata are significantly activity in DPPH reduction. According to this results, the AcOEt fraction of the stem of Q.grandiflora and the leaves of Q.cordata were evaluated using HPLC-DAD-HRMS(ESI) and allowed the detection of two flavanones: 4',5,7-trihydroxy-3-methoxy-6,8-dimethylflavanone and 5,6,7-trihydroxy-3',4'-dimethoxy-8-methylflavanone, and the dihydroflavonols: 4',7-dihydroxy-5-methoxy-6-methyldihydroflavonol and 3',4'-dimethoxy-5,7-dihydroxy-6,8-dimethyldihydroflavonol from AcOEt leaves fraction of Q.cordata, and the flavanones: 8-methyl-naringenine and 4',5,7-trihydroxy-3',6-dimethoxy-8-methylflavanone, the benzophenone: bis (2-hydroxy-4,6-dimethoxy-3-methylphenyl) metanone, and the dihydroflavonol: 3',4',5,6,7-pentahydroxy-8-methyldihydroflavonol from AcOEt stem fraction of Q. grandiflora. The AcOEt stem fraction of Q. grandiflora was analyzed through in silico NMR, comparing virtual 1H NMR standards spectra... (Complete abstract click electronic access below)

Esponjas do gênero Aplysina (Ordem: VERONGIDA) são conhecidas por apresentarem em seu metabolismo secundário compostos derivados da dibromotirosina, os quais são um importante aliado para o processo de identificação dessas esponjas. Este trabalho descreve o estudo do perfil químico de 14 espécimens de esponjas do gênero Aplysina, coletadas na Bahia de Todos os Santos-BA, no ano de 2007. Também foi desenvolvida uma metodologia de desreplicação, utilizando-se da técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI), busca na literatura (MarinLit) e comparação com padrões. Os resultados obtidos demonstram claramente que essas esponjas apresentam os derivados da dibromotirosina e que a metodologia de desreplicação permitiu confirmar e/ou prever possíveis estruturas desses compostos com eficiência e sem a necessidade do seu isolamento. Entretanto, não foi possível distinguir as espécies dos organismos estudados através do seu perfil químico, uma vez que eles apresentaram praticamente os mesmos metabólitos em todas as frações analisadas. Isto demonstra que a classificação taxonômica em nível de espécie requer, necessariamente, a análise do esqueleto (espículas) das esponjas e possivelmente análises genômicas. A análise das frações aquosas permitiu apenas confirmar a presença desses derivados através da análise das absorções típicas no espectro de UV. Também, este é o primeiro trabalho sobre o estudo do perfil químico dessas esponjas com a utilização de um sistema de desreplicação que inclui a técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI). / Sponges of the genus Aplysina (Order: VERONGIDA) are commonly recognized by the presence of dibromotyrisine derivates at their secondary metabolites, compounds which are an important tool for their taxonomic identification. The present study describes the chemical profile of 14 sponges of Aplysina sp., collected in Bahia de Todos os Santos-BA. We developed a dereplication methodology using the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI), a database research (MarinLit) and comparison with chemical standards. The results showed that the 14 sponges analysed present dibromotyrisine derivates and that the dereplication methodology enabled the prediction and/or confirmation of such structures without their previous isolation. However, the taxonomic identification of the 14 individual sponges at the species level was impossible due to the fact that chemical profile was of the sponges too similar. This result demonstrates that the taxonomic identification Aplysina sponges at the species level also requires the skeleton analysis and possibly genomic studies. Analyses of aqueous fraction confirmed the presence of dibromotyrisine derivates. Furthermore, this is the first study of the chemical profile of Aplysina sponges that utilizes a dereplication methodology which includes the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI).

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:02:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felipe_M_A_Silva.pdf: 3616233 bytes, checksum: ce467adbd10803245e8d0c5fdf015ab2 (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The neotropical genus Unonopsis, one among the 130 genera belonging to the Annonaceae family, has been a promising source of aporphine alkaloids and derivatives. The antiprotozoal activity of this class of substances, mainly anti-leishmania activity, has aroused the interest of several research groups around the world. In the present work were carried out the analysis from alkaloidal fractions of the leaves, twigs and barks of the trunk from Unonopsis duckei and Unonopsis guatterioides by mass spectrometry, doing an investigation in the alkaloid profile in order to obtain promising structures with activity against Leishmania. The analysis of MSn and LC/APCI/MS of the alkaloidal fractions of U. guatterioides confirmed the presence of some alkaloids previously reported in the literature such as anonaine, asimilobine, liriodenine and lysicamine. It was possible identify the nornuciferine alkaloid which was characterized for the first time in the Unonopsis genus, and suggest the presence of azafluorenone type alkaloid. The spectrometric investigation of U. duckei revealed the presence of aporphine and oxoaporphine alkaloids which were already reported in this genus, as well as guided the isolation of the proaporphine alkaloid glaziovine and the mixture of glaucine and norglaucine alkaloids. These compounds are inedit in the Unonopsis genus. The triterpene polycarpol was isolated from both species, observed U. duckei like the best yield. In the phytochemical investigation of the apolar extracts of U. guatterioides was possible to identify a mixture of sitosterol/stigmasterol steroids. The biological analyses of U. duckei and U. guatterioides alkaloidal fractions showed that four of them were considered highly active, one of them was moderatly active and only one was not showed active against Leishmania amazonensis. Among the substances evaluated, the alkaloid glaziovine showed the most effective activity against Leishmania amazonensis. / O gênero neotropical Unonopsis, um dos 130 gêneros pertencentes à família Annonaceae, tem se mostrado uma fonte promissora de alcalóides aporfínicos e derivados. A atividade antiprotozoário desta classe de substâncias, principalmente a atividade antileishmania, tem despertado o interesse de diversos grupos de pesquisa ao redor do mundo. No presente trabalho foram realizadas as análises das frações alcaloídicas das folhas, galhos e cascas do tronco de Unonopsis duckei e Unonopsis guatterioides por meio de espectrometria de massas, investigando seu perfil alcaloídico com vistas à obtenção de estruturas promissoras em atividade antileishmania. Através das análises de MSn e LC/APCI/MS das frações alcaloídicas de U. guatterioides foi possível confirmar a presença dos alcalóides anonaina, asimilobina, liriodenina e lisicamina, já reportados na literatura da espécie, identificar pela primeira vez no gênero o alcalóide nornuciferina, além de sugerir a presença de um alcalóide do tipo azafluorenona, previamente reportado na espécie U. lindimanii. A investigação espectrométrica de U. duckei revelou a existência de alcalóides aporfínicos e oxoaporfínicos já reportados no gênero, bem como conduziu ao isolamento do alcalóide aporfínico glaziovina e de uma mistura de glaucina e norglaucina, sendo todos esses alcalóides inéditos no gênero. Foi realizado o isolamento do triterpeno policarpol de ambas as espécies, sendo o melhor rendimento observado em U. duckei. A investigação dos constituintes menos polares de U. guatterioides levou ao isolamento de misturas de sitosterol/estigmasterol. Das frações alcaloídicas de U. duckei e U. guatterioides analisadas, quatro foram consideradas altamente ativas, uma ativa e apenas uma não se apresentou ativa frente a Leishmania amazonensis. Entre as substâncias avaliadas, o alcalóide glaziovina apresentou alta atividade frente a Leishmania amazonensis.

Submitted by Rafael Vieira (vieira.rafa1986@gmail.com) on 2016-01-06T18:57:51Z No. of bitstreams: 1 dissertacao final rafael.pdf: 11211535 bytes, checksum: e982b9dd12cb7bf43a451db3f5e30076 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-01-06T19:24:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_r_me_araiq_par.pdf: 1125273 bytes, checksum: 201f41df3c870e0118ce7d37d6eca396 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T19:24:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_r_me_araiq_par.pdf: 1125273 bytes, checksum: 201f41df3c870e0118ce7d37d6eca396 (MD5) Previous issue date: 2015-12-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho de mestrado tem, como foco principal, analisar o comportamento do fungo Xylaria sp. perante variações físico-químicas, através da abordagem OSMAC (One Strain, Many Compounds). Para realizar tais induções e explorar a variabilidade da rede metabólica deste micro-organismo, um planejamento fatorial foi desenhado visando induzir a variabilidade (ou a potencialização) de metabólitos. Diante de respaldos quimiométricos, induções planejadas foram impostas ao micro-organismo e observou-se variações no perfil químico nos extratos brutos. Somado a isso, técnicas de desreplicação foram usadas a fim de estudar quimicamente as matrizes complexas produzidas por este fungo visando a produção de metabólitos de alto valor agregado e determinou-se condições específicas para produção de moléculas de citocalasina D e de griseofulvina. / This work has as its main focus, analyze the behavior of the fungus Xylaria sp. before physicochemical variations via the OSMAC approach (One Strain, Compounds Many). To achieve such induction and exploit the variability of the metabolic network of this micro-organism, a factorial design was designed to induce variability (or potentiating) metabolites. Before chemometric backrests, planned inductions were imposed on the micro-organism and it was observed variations in the chemical profile in crude extracts. Added to this, dereplication techniques were used to study the chemically complex matrices produced by this fungus aimed at producing high added value and metabolites was determined specific conditions for the production of molecules cytochalasin D and griseofulvin.

Esponjas do gênero Aplysina (Ordem: VERONGIDA) são conhecidas por apresentarem em seu metabolismo secundário compostos derivados da dibromotirosina, os quais são um importante aliado para o processo de identificação dessas esponjas. Este trabalho descreve o estudo do perfil químico de 14 espécimens de esponjas do gênero Aplysina, coletadas na Bahia de Todos os Santos-BA, no ano de 2007. Também foi desenvolvida uma metodologia de desreplicação, utilizando-se da técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI), busca na literatura (MarinLit) e comparação com padrões. Os resultados obtidos demonstram claramente que essas esponjas apresentam os derivados da dibromotirosina e que a metodologia de desreplicação permitiu confirmar e/ou prever possíveis estruturas desses compostos com eficiência e sem a necessidade do seu isolamento. Entretanto, não foi possível distinguir as espécies dos organismos estudados através do seu perfil químico, uma vez que eles apresentaram praticamente os mesmos metabólitos em todas as frações analisadas. Isto demonstra que a classificação taxonômica em nível de espécie requer, necessariamente, a análise do esqueleto (espículas) das esponjas e possivelmente análises genômicas. A análise das frações aquosas permitiu apenas confirmar a presença desses derivados através da análise das absorções típicas no espectro de UV. Também, este é o primeiro trabalho sobre o estudo do perfil químico dessas esponjas com a utilização de um sistema de desreplicação que inclui a técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI). / Sponges of the genus Aplysina (Order: VERONGIDA) are commonly recognized by the presence of dibromotyrisine derivates at their secondary metabolites, compounds which are an important tool for their taxonomic identification. The present study describes the chemical profile of 14 sponges of Aplysina sp., collected in Bahia de Todos os Santos-BA. We developed a dereplication methodology using the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI), a database research (MarinLit) and comparison with chemical standards. The results showed that the 14 sponges analysed present dibromotyrisine derivates and that the dereplication methodology enabled the prediction and/or confirmation of such structures without their previous isolation. However, the taxonomic identification of the 14 individual sponges at the species level was impossible due to the fact that chemical profile was of the sponges too similar. This result demonstrates that the taxonomic identification Aplysina sponges at the species level also requires the skeleton analysis and possibly genomic studies. Analyses of aqueous fraction confirmed the presence of dibromotyrisine derivates. Furthermore, this is the first study of the chemical profile of Aplysina sponges that utilizes a dereplication methodology which includes the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI).

Os micro-organismos são profícuas fontes de produtos naturais bioativos. Diversos fármacos de importância clínica são de origem microbiana, sendo que a maioria dos antibióticos usados clinicamente é produzida por actinobactérias, principalmente do gênero Streptomyces. A resistência a múltiplas drogas por microorganismos patogênicos e também pelas células tumorais leva à necessidade por novos fármacos antibacterianos e antitumorais. Actinobactérias endofíticas têm demonstrado grande potencial para a busca de produtos naturais bioativos. O presente trabalho relata o estudo químico de duas linhagens de actinobactérias endofíticas, Streptomyces sp. RTd 22 e Streptomyces sp RTd 31, isoladas das raízes de Tithonia diversifolia. As frações ativas nos ensaios biológicos foram fracionadas para a identificação dos compostos bioativos, sendo eles os antibióticos macrolídeos concanamicinas A (S31-1) e B (S31-2), anidro-agliconas das concanamicinas A (S31-3) e B (S31-4), todos produzidos por Streptomyces sp RTd31, e o ionóforo poliéter grisorixina (S22-2), produzido por Streptomyces sp. RTd22. Foi realizado o monitoramento da produção desses compostos bioativos por UPLC-MS através do modo SIM. As concanamicinas A e B tiveram um máximo de produção com 96h, já a grisorixina obteve um máximo com 192h. Outros compostos identificados por desreplicação dos extratos butanólicos de ambas as actinobactérias foram os sideróforos norcardamina (S31-7) e desoxi-nocardamina (S31-8), já o sideróforo desferrioxamina B (S31-9) foi identificado apenas nos extratos butanólicos de Streptomyces sp RTd31. Experimentos de variação do meio de cultivo e co-cultura com bactérias patogênicas foram empregados a fim de estimular a biossíntese de novos compostos, porém nenhum novo metabólito foi identificado. O sequenciamento genético da actinobactéria Streptomyces sp. RTd22 permitiu verificar a presença de vários clusters biossintéticos nesse micro-organismo através da análise feita pelo antiSMASH. Foi possível identificar o cluster da himastatina (S22-4) e da coeliquelina (S22-5), sendo que ambos os compostos não foram biossintetizados nas condições de cultivo utilizadas. O cluster biossintético da grisorixina foi determinado e o experimento de recombinação homóloga para a deleção do gene análogo a flavina mono-oxigenase da nigericina nigC foi realizado. Dois mutantes foram obtidos e um deles foi cultivado para a análise do perfil metabólico por espectrometria de massas. Não houve a produção da grisorixina nem do seu possível precursor pelo mutante, mas outros metabólitos foram produzidos / Microorganisms are prolific sources of bioactive natural products. Several clinically important drugs have microbial origin, and most of the therapeutically used antibiotics are produced by actinobacteria, mainly from the genus Streptomyces. The multidrug resistance observed in pathogenic microorganisms and tumor cells lead to the need for new antibacterial and antitumor drugs . Endophytic actinobacteria have shown great potential in the search for bioactive natural products. This work describes the chemical study of two endophytic actinobacteria strains: Streptomyces sp. RTd 22 and Streptomyces sp RTD 31, isolated from Tithonia diversifolia roots. Active fractions in biological assays were further fractionated for identifying the bioactive compounds, which are: the macrolide antibiotics concanamycins (S31-1) and B (S31-2), anhydrous aglycones of concanamycins A (S31-3) and B (S31-4), all four produced by Streptomyces sp. RTd31, and the ionophore polyether grisorixin (S22-2), produced by Streptomyces sp. RTd22. The production of these bioactive compounds was monitored by UPLC-MS via the SIM mode. Concanamycins A and B had maximum production at 96 h, and grisorixin at 192 h. Other compounds identified by the dereplication of buthanolic extracts of both actinobacteria were the siderophore norcardamine (S31-7) and deoxy-nocardamine (S31-8), the siderophores desferrioxamine B (S31-9) was identified only in buthanolic extracts of Streptomyces sp RTd31. Experiments varying media and co-culture were tested to stimulate the biosynthesis of novel compounds, but nothing new was identified. By genome sequencing of Streptomyces sp RTd22 and antiSMASH analysis it was possible to verify the presence of several biosynthetic clusters in the genome of this strain. It was possible to identify the biosynthetic clusters of himastatin (S22-4) and its analogous compound coelichelin (S22-5); however, these compounds were not biosynthesized in the culture conditions used. The grisorixin biosynthetic cluster was determined, and homologous recombination was performed for deleting the analogue gene of nigericin flavin monooxygenase nigCI. Two mutants were obtained, and one of them was cultured for analyzing its metabolic profile by mass spectrometry. There was no production of grisorixin or its possible precursor by the mutant, but others compounds were produced.