Xylella fastidiosa Wells et al. (1987) é agente causal de doenças em diversas culturas de importância econômica, entre elas a clorose variegada dos citros (CVC). Em recente levantamento da incidência da CVC no Estado de São Paulo, foi observado que a doença está presente em toda a região citrícola e é mais severa na região Norte que na Sul. Este estudo teve por objetivo averiguar o grau de diversidade genética existente entre 138 isolados de X. fastidiosa coletados nas regiões citrícolas Sul, Centro e Noroeste do Estado de São Paulo. Isolados de videira, ameixeira e cafeeiro também foram incluídos para servirem como referências nos estudos moleculares. A identidade dos isolados foi confirmada com a amplificação de DNA por reação de polimerase em cadeia (PCR) com os iniciadores RST 31/33. A sequencia nucleotídica do fragmento genômico amplificado por estes iniciadores foi determinada para isolados de X. Fastidiosa. Não foram observados polimorfismos de seqüência nucleotídica entre isolados de citros. Já os isolados obtidos de videira, cafeeiro e ameixeira apresentaram polimorfismos de seqüência quando comparados a X. fastidiosa de citros. Esta seqüência apresenta alto grau de homologia com gens rpoD que codificam a subunidade sigma de RNA polimerase em diversos gêneros bacterianos. Comparações dessa seqüência com a de 12 espécies de Proteobactérias agrupou X. fastidiosa com Xanthomonas campestres pv. campestris, concordando com o seu posicionamento taxonômico dentro do grupo das Xanthomonadaceas. A diversidade genética entre os isolados também foi averiguada por amplificação de seqüências conservadas e repetitivas no DNA genômico de X. fastidiosa com os indicadores ERIC, REP e BOX (rep-PCR). Os perfis obtidos com os três iniciadores foram analisados em conjunto e um total de dezenove haplótipos combinados foi obtido. Maior diversidade de haplótipos combinados foi encontrada em Neves Paulista, representante da região Noroeste do Estado de São Paulo. Alguns haplótipos só foram detectados nessa área. Os isolados de Santa Rita do Passa Quatro apresentaram maior freqüência do haplótipo onze e os isolados de Gavião Peixoto, do haplótipo quartoze. Foi possível identificar a existência de isolados de X. fastidiosa geneticamente distintos dentro de uma mesma planta de citros. Estimativas de similaridade genética entre haplótipos combinados variaram acima de 60%. Isolados de videira apresentaram perfis bem distintos entre si e diferiram dos demais isolados de outros hospedeiros. Os isolados de cafeeiro e ameixeira apresentaram perfis similares aos dos isolados de citros. A ocorrência do plasmídio pXF51, seqüenciado recentemente pelo Projeto Genoma de X. fastidiosa, foi determinada por PCR. Iniciadores específicos foram sintetizados e a amplificação do fragmento de 750 pb foi positiva em 73 dos 90 isolados incluídos neste estudo / not available

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:05:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6215_1.pdf: 1677963 bytes, checksum: e550537f637e0f99ab5e08d9174c5447 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / O gênero Aspergillus pertence ao grupo de fungos filamentosos de grande dispersão no meio ambiente. Algumas espécies estão associadas a doenças, principalmente em pessoas imunocomprometidas. Outras são importantes por razões econômicas, devido à aplicação biotecnológica ou à produção de aflatoxinas. A identificação das espécies por métodos tradicionais, aliados ao uso de marcadores moleculares, estão somando conhecimentos e estabelecendo maior eficiência na caracterização de isolados. Foram utilizados os marcadores moleculares ISSR, utilizando os primers (GACA)4 e (GTG)5, e os marcadores ITS e RAPD, com o objetivo de caracterizar geneticamente linhagens de Aspergillus flavus e linhagens de outras espécies pertencentes ao grupo A. flavus. Alta diversidade genética foi obtida com os marcadores RAPD e ISSR, sendo que o primer (GTG)5 gerou menor diversidade que o (GACA)4, mas apresentou perfis característicos para cada espécie. A partir destes dados foi construída uma matriz de similaridade e confeccionados os dendrogramas, através do método de agrupamento UPGMA. Os perfis dos marcadores ISSR e RAPD mostraram que entre as linhagens estudadas de A. flavus, quatro apresentaram perfis diferenciados, tendo sido reclassificadas como A. oryzae, A. parasiticus e duas como A. tamarii. No entanto, uma das linhagens previamente identificadas como A. parasiticus, devido ao seu perfil de marcadores ser idêntico ao de A. flavus, foi revisada como sendo desta espécie. Esses resultados reforçam a importância do uso de marcadores moleculares para a diferenciação de espécies e linhagens fúngicas

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-23T14:02:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1255542 bytes, checksum: 80a1a0887eec0d47d3397629b89ddfb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T14:02:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1255542 bytes, checksum: 80a1a0887eec0d47d3397629b89ddfb2 (MD5) Previous issue date: 2015-07-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A seca dos ponteiros causada por Erwinia psidii é um dos fatores limitantes para a produção de goiaba no Brasil. Recentemente, essa bactéria foi relatada como o agente causal da seca de ponteiros e murcha de Eucalyptus spp. no Brasil, Uruguai e Argentina. Como se trata de uma enfermidade recentemente descoberta, há ainda poucos estudos sobre o patossistema E. psidii - eucalipto, especialmente quanto à variabilidade genética do patógeno e resistência de Eucalyptus à doença. Assim, neste trabalho, compararam-se, por meio de marcadores de DNA, Rep - PCR, a variabilidade genética entre 21 isolados oriundos de eucalipto e cinco de goiabeira e avaliou-se a resistência de Eucalyptus spp. à doença. Baseado em 33 loci amplificados com os três marcadores (REP, ERIC e BOX), observou-se variabilidade genética relativamente baixa, apesar de terem se agrupado de acordo com o hospedeiro de origem (eucalipto e goiaba) e a região geográfica. Dentre as espécies avaliadas quanto à resistência (E. pellita, E. urophylla, E. camaldulensis, E. saligna e E. grandis), E. pellita e um acesso de E. urophylla apresentaram maior frequência de genótipos resistentes e constituem boas fontes de resistência à doença. / Dieback caused by Erwinia psidii is a limiting factor for the production of guava in Brazil. Recently, this bacterium was reported as the causal agent of dieback and wilt in Eucalypus spp. in Argentina, Brazil and Uruguay. As this is a new disease there are few studies regarding the E. psidii-eucalyptus pathosystem, especially about the genetic variability of the pathogen and resistance of Eucalyptus to this disease. In this work, the genetic variability among 21 isolates from eucalyptus and five from guava was compared using DNA markers Rep-PCR and the resistance of Eucalyptus spp. to the disease evaluated. Based on 33 loci amplified by three markers (REP, ERIC and BOX), we observed a relatively low variability for the isolates, however, in the cluster analysis, we observed a split of the isolates according to the source host (eucalyptus and guava) and geographic region. Among species of E. pellita, E. urophylla, E. camaldulensis, E. saligna and E. grandis tested, the first two had a higher frequency of resistant genotypes and are good disease resistance sources, although all presented intra variability specific.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-25T15:48:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1728299 bytes, checksum: 9536bb852b8406140722b5b88e410730 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-25T15:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1728299 bytes, checksum: 9536bb852b8406140722b5b88e410730 (MD5) Previous issue date: 2015-07-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A família Geminiviridae é composta por vírus com genoma de DNA circular de fita simples, encapsidado em partículas icosaédricas geminadas. Os vírus pertencentes ao gênero Begomovirus são transmitidos pela mosca-branca Bemisia tabaci a plantas dicotiledôneas. Os begomovírus apresentam taxas de mutação e substituição nucleotídica semelhantes às relatadas para vírus de RNA, e uma elevada taxa de recombinação. Devido ao seu rápido processo evolutivo, novas espécies de begomovírus são frequentemente encontradas no campo. Este trabalho teve como objetivos realizar a caracterização molecular de duas espécies de begomovírus infectando Pavonia sp. (Malvaceae), e quantificar a evolução do Tomato severe rugose virus (ToSRV) em um hospedeiro cultivado e um não-cultivado. Dois begomovírus foram isolados de plantas de Pavonia sp. coletadas nos municípios de Albuquerque e Corumbá, Mato Grosso do Sul. Comparação de sequências e análise filogenética indicaram tratar-se de duas novas espécies com as características de begomovírus bissegmentados das Américas. Foram propostos os nomes Pavonia mosaic virus (PavMV) e Pavonia yellow mosaic virus (PavYMV). No estudo para avaliar a dinâmica evolutiva do ToSRV, plantas de tomateiro e Nicandra physaloides foram inoculadas via biobalística com clone infeccioso do ToSRV e mantidas em casa-de-vegetação. DNA total foi extraído de folhas coletadas aos 30, 75 e 120 dias após a inoculação, e submetido a sequenciamento na plataforma Illumina HiSeq 2000. As bibliotecas de DNA foram submetidas a análise de qualidade no software FastQC. O alinhamento dos reads foi realizado no software Geneious, utilizando o clone infeccioso como sequência referência. Ambos os componentes genômicos do ToSRV apresentam taxa de substituição semelhantes a de vírus de RNA: 3,06 x 10-3 e 2,03 x 10-3 subst/sítio/ano para o DNA-A e DNA-B, respectivamente, em N. physaloides, e 1,38 x 10-3 e 8,68 x 10-4 subst/sítio/ano para o DNA-A e DNA-B, respectivamente, em tomateiro. Valores de taxa de substituição similares aos já descritos para begomovírus foram encontrados também para os genes CP, Rep, MP e NSP em ambos os hospedeiros. Foram quantificadas substituições sinônimas e não- sinônimas, transversões e transições, além de deleções e inserções nos genes CP, Rep, MP e NSP. Foi observado um decréscimo no número de variações ao longo do tempo e consequente aumento do número de sítios idênticos ao genoma referência. Nas bibliotecas provenientes de N. physaloides foi observada a supressão dos códons de terminação dos genes MP e NSP em todo decorrer da infecção, sugerindo uma estratégia adaptativa. O cálculo da entropia de Shannon identificou como hotspots de mutação a região N-terminal do gene Rep, as regiões comuns no DNA-A e DNA-B (CR-A e CR-B, respectivamente) e a região intergênica longa entre os genes MP e NSP no DNA-B (LIR-B). Estes dados sugerem que o ToSRV evolui como quasispecies, apresentando elevada variabilidade genética, o que poderia explicar em parte sua prevalência no campo. / The family Geminiviridae is comprised of viruses with a circular, single-stranded DNA genome encapsidated in twinned icosahedral particles. The viruses in the genus Begomovirus are transmitted by the whitefly Bemisia tabaci to dicot plants. Begomoviruses have mutation and nucleotide substitution rates similar to those reported for RNA viruses, and a high frequency of recombination. Due to their rapid evolutionary process, new begomovirus species are often found in the field. This study aimed to perform the molecular characterization of two begomovirus species infecting Pavonia sp. (Malvaceae), and to follow and quantify the evolution of Tomato severe rugose virus (ToSRV) in a cultivated and a non-cultivated host. Two begomoviruses were isolates from Pavonia sp. plants collected in the municipalities of Albuquerque and Corumbá, Mato Groso do Sul, Brazil. Sequence comparisons and phylogenetic analysis showed that these were two novels species, with the typical features of bipartite, New World begomoviruses. The names Pavonia mosaic virus (PavMV) and Pavonia yellow mosaic virus (PavYMV) were proposed for the two new species. In the study to evaluate the evolutionary dynamics of ToSRV, tomato and Nicandra physaloides plants were inoculated via biobalistics with an infectious clone of ToSRV and maintained in a greenhouse. Total DNA was extrated from leaves collected at 30, 75 and 120 days after inoculation, and was sequenced in the Illumina HiSeq 2000 platform. The DNA libraries from each of the two hosts were submitted to quality control analysis with FastQC software. The genome assembly was performed with the program Geneious using the infectious clone as reference. Both genomic components of ToSRV showed substitution rates similar to those of RNA viruses: 3.06 x 10-3 and 2.03 x 10-3 sub/site/year for the DNA-A and DNA-B, respectively, in N. physaloides, and 1.38 x 10-3 and 8.68 x 10-4 sub/site/year for the DNA-A and DNA-B, respectively, in tomato. Substitution rates in the range of those already described for other begomoviruses were found also for the CP, Rep, MP and NSP genes in both hosts. We quantified synonymous and non-synonymous substitutions, transversions and transitions, as well as deletions and insertions in the CP, Rep, MP and NSP genes. A decrease in the number of variable sites was observed during the course of the experiment, with a corresponding increase in the number of identical sites to the reference genome. Suppression of the stop codons of the MP and NSP genes was observed in the N. physaloides libraries, suggesting an adaptive strategy. Determination of Shannon entropy indicated mutation hotspots in the N-terminal region of the Rep gene, the intergenic common region in the DNA-A and DNA-B (CR-A and CR-B, respectively) and the long intergenic region between the MP and NSP genes in the DNA-B (LIR-B). Overall, the results indicate that ToSRV evolves as a quasispecies, with a high degree of genetic variability which could be partly responsible for its prevalence in the field.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-27T13:12:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2209787 bytes, checksum: 3979328b83150d607ad68ec8c4f1d534 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-27T13:12:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2209787 bytes, checksum: 3979328b83150d607ad68ec8c4f1d534 (MD5) Previous issue date: 2015-03-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Com a crescente demanda do mercado mundial de cafés especiais, os produtores brasileiros têm demonstrado interesse em retomar o cultivo do Bourbon, principalmente devido a seu potencial para produzir cafés de qualidade superior de bebida. Dessa forma, os melhoristas têm buscado incorporar acessos de Bourbon nos programas de melhoramento, a fim de obter cultivares para a produção de cafés especiais. Visando dar suporte aos programas de melhoramento da Empresa de Pesquisa Agropecuária de Minas Gerais (Epamig), foi instalado em Patrocínio, MG, um Banco Ativo de Germoplasma (BAG) com 1594 acessos, destes, 140 correspondem a Bourbon. Entretanto, a coleção de germoplasma de Bourbon ainda não foi devidamente caracterizada, fato que interfere no seu aproveitamento para fins comerciais e uso no melhoramento. Deste modo, a caracterização molecular desses genótipos é essencial para ampliar o conhecimento dos materiais genéticos disponíveis e, assim, incorporar os mais adequados nos programas de melhoramento genético do cafeeiro. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar, por meio de marcadores SSR e AFLP, a coleção de Bourbon da Epamig, como uma ferramenta auxiliar na identificação dos acessos, avaliação da diversidade genética e do perfil molecular (Fingerprinting) dos genótipos. Na identificação dos acessos, apresentado no capítulo 1, os marcadores SSR foram utilizados para discriminar os genótipos de Bourbon juntamente com as técnicas de analise discriminante e redes neurais artificiais. Os locos SSR analisados foram adequados para diferenciar os acessos. Observou-se que as redes neurais artificiais apresentaram maior eficiência na classificação dos acessos de Bourbon do que a análise discriminante e foi possível identificar acessos que apresentaram misturas ou problemas na identificação inicial. Na avaliação da diversidade genética e do perfil molecular (Fingerprinting) dos acessos, apresentados no capítulo 2, os marcadores SSR e AFLP utilizados permitiram separar a maioria dos indivíduos analisados. Esses dados moleculares sugerem que, apesar da reconhecida base genética estreita de C. arabica, o germoplasma de Bourbon pertencente a Epamig apresenta variabilidade genética que pode ser explorada nos programas de melhoramento. A análise de fingerprinting permitiu identificar os perfis moleculares de cada acesso de Bourbon avaliado, os quais podem ser utilizados na identificação dos cafeeiros no banco. Dessa forma, os resultados obtidos nesse estudo fornecem subsídios para a manutenção e conservação da coleção de germoplasma de Bourbon. Além disso, deve auxiliar os melhoristas na escolha de genitores para possíveis hibridações em programas de melhoramento que buscam o desenvolvimento de cultivares com potencial para qualidade de bebida. / With the increasing demand of specialty coffee in the world, the Brazilian coffee producer have demonstrated interest to retake cultivating Bourbon due to its potential of producing high cup quality. So, the breeders are working to incorporate the Bourbon in the breeding programs to develop coffee cultivars with special cup quality. To support the breeding programs, the Agricultural Research Company of Minas Gerais (Epamig) established the active germplasm bank in Patrocínio, MG. This germplasm comprises of 1594 coffee accessions, among these 140 are Bourbons. However, the collection of Bourbon is not well characterized, which interferes with its efficient use for commercial purpose and genetic improvement. This shows the importance of molecular characterization of these genotypes to increase the knowledge about the genetic materials available and incorporated adequately in the genetic improvement of coffee. Thus, the present work was done with the objective of characterizing the Bourbon collections of Epamig using SSR and AFLP molecular markers as a tool to identify the accessions, genetic diversity study and Fingerprinting of the genotypes. In chapter 1, SSR molecular marker combined with discriminant analysis and artificial neural network were used to discriminate the genotypes of Bourbon. The result showed that the artificial neural network is more efficient to classify the accessions of Bourbon than discriminant analysis. It was possible to identify accessions with mixture or with identification problem. In the genetic diversity and fingerprinting analysis presented in chapter 2, SSR and AFLP markers used permitted to separate most of the individuals analyzed. These data suggested that despite the known narrow genetic base of C. arabica, the Bourbon germplasm belonging to Epamig has enough genetic variability that can be exploited in breeding programs. The fingerprinting analysis allowed identifying molecular profile for each accession of Bourbon evaluated that can be used in identification of coffee plants of the germoplasm. Besides this, it can aid the breeders to select the parents for possible hybridization in the breeding programs to develop cultivars with high cup quality potential.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-02T16:18:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 704726 bytes, checksum: 12ea6abf87e26aaed63ff994b006639e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-02T16:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 704726 bytes, checksum: 12ea6abf87e26aaed63ff994b006639e (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Brasil se destaca como um dos maiores produtores de frutas cítricas do mundo e, emprega o melhoramento genético com o intuito de aumentar a qualidade e produtividade dos produtos. O processo de seleção corresponde a uma das principais etapas de um programa de melhoramento, portanto, a adoção de procedimentos que proporcionem maior acurácia seletiva é de suma importância. A seleção pode ser realizada com base apenas em fenótipos ou com base nos efeitos de marcadores moleculares sobre os fenótipos. Este trabalho foi realizado com o objetivo de estimar parâmetros genéticos, ganhos com a seleção e diversidade genética de genótipos provenientes de uma população de Citrus utilizando a metodologia de modelos mistos (REML/BLUP); aplicar a seleção genômica ampla (GWS) no melhoramento de Citrus e verificar a sua eficiência sobre a seleção baseada apenas em fenótipos. Neste estudo foi analisada uma população híbrida de Citrus composta por 180 indivíduos. Estes, foram fenotipados para 15 variáveis relacionadas à qualidade de frutos e resistência à clorose variegada dos citros (CVC), e genotipados com 5.287 marcadores moleculares DArT_seqTM. Com base nos resultados, observou-se que a população de Citrus avaliada apresenta potencial para o melhoramento genético para a maioria das variáveis avaliadas (11) e, a introdução de novos genótipos deve ser realizada para aumentar o potencial de seleção da população para as variáveis que não apresentaram variabilidade genética. A seleção genômica ampla (GWS) apresenta superioridade à seleção com base apenas em dados fenotípicos, em termos de ganho genético por unidade de tempo. Portanto, GWS é uma ferramenta promissora para o melhoramento genético do Citrus, uma vez que, proporciona acuradas predições dos fenótipos em estádios iniciais do desenvolvimento da planta. / Brazil stands out as one of the largest producers of Citrus fruits in the world, and employs breeding in order to increase the quality and productivity of products. The selection process is one of the main phases of a breeding program; therefore, the adoption of procedures that provide greater selective accuracy is very important. The selection can be performed based only on phenotypic effects or based on molecular markers effects on phenotypes. This work was carried out in order to estimate genetic parameters, gains from genetic selection and diversity of genotypes from a population of Citrus using the mixed model methodology (REML/BLUP); apply Genome Wide Selection (GWS) in the Citrus breeding and verify its effectiveness on the selection based only on phenotypes. In this study was evaluated a hybrid population of Citrus composed of 180 individuals. The individuals were phenotyped for 15 variables related to fruit quality and resistance to Citrus variegated chlorosis (CVC), and genotyped with 5,287 molecular markers DArT_seqTM. Based on the results, it was observed that the population of Citrus evaluated presents potential for genetic improvement for the majority of variables (11), and the introduction of new genotypes should be performed to increase the selection potential of the population for variables that did not present genetic variability. The GWS shows superiority to the selection based only on phenotypic data, in terms of genetic gain per unit time. Therefore, GWS is a promising tool in Citrus breeding, since it provides accurate predictions of phenotypes in the early stages of plant development.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-02T17:27:23Z No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Título maiúsculo on 2015-12-03T11:34:10Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-03T11:47:25Z No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Palavras-chave: primeira letra de cada palavra em maiúsculo. Acrescentar uma em cada linha (não precisa colocar ponto e nem vírgula no final) on 2015-12-03T12:00:49Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-03T13:29:45Z No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-03T13:58:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T13:58:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O estudo de diversidade genética é importante na caracterização de populações de espécies vegetais como forrageiras. O aumento da produtividade é um objetivo constante do melhoramento das forrageiras e depende diretamente da diversidade genética existente. O Azevém (Lolium multiflorum Lam.) é uma forragem de inverno, muito utilizada para o gado devido à sua alta palatabilidade, digestibilidade e resistência ao pisoteio. A espécie é proveniente da Europa e, largamente utilizada no Sul do Brasil. Como parte do Programa de Melhoramento de Azevém da Embrapa Gado de Leite o presente trabalho teve como objetivo principal estimar a diversidade genética de 32 populações de azevém. O DNA de 628 indivíduos foi extraído, e marcadores microssatélites obtidos por amplificação cruzada foram utilizados. Um dendrograma foi gerado pelo algoritmo UPGMA, usando-se o software NTSYS, através do coeficiente de similaridade de Dice. Dentre os trinta e cinco pares de primers testados, vinte e cinco (71,5%) apresentaram amplificação cruzada em L. multiflorum, demonstrando a eficiência de utilização de marcadores desenvolvidos para espécies proximamente relacionadas. Quinze marcadores foram selecionados com base no sucesso da amplificação cruzada e maior número de polimorfismos. Os valores da matriz de coeficientes de similaridade obtidos variaram de 0,43 a 0,93. Observou-se a presença de divergência genética entre as populações, indicando que elas possuem uma ampla base genética. Este resultado está de acordo com a extensa distribuição geográfica e com o sistema alógamo de reprodução da espécie. / The genetic diversity estimation is important to characterize plant populations including forage species. The increase of productivity is a constant objective in forage breeding programs and is directly dependent of the genetic diversity. The ryegrass (Lolium multiflorum Lam.) is a winter grass, widely used for cattle due to its high palatability, digestibility and resistance to trampling. The species was introduced from Europe and is widely used in southern Brazil. As part of The Embrapa Dairy Cattle Ryegrass Breeding Program, the present work aimed to estimate the genetic diversity among 32 ryegrass populations. The DNA of 628 individuals was extracted and microsatellite markers obtained by cross amplification were used. A dendrogram was generated by UPGMA algorithm, using NTSYS software and Dice’s similarity coefficient. Among the thirty-five pairs of tested primers, twenty five (71.5%) showed cross amplification in L. multiflorum, demonstrating the efficiency of using cross amplification of microsatellite markers from related species. Fifteen markers were chosen based on the cross amplification success and the level of polymorphism. The values of similarity coefficient matrix varied from 0.43 to 0.93. Genetic divergence among the populations was observed, indicating that the populations possess a wide genetic base. This result corroborates the wide geographical distribution and the allogamous reproduction system previously reported for the species.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliana_bandeira.pdf: 2631156 bytes, checksum: ca9c7bffe1ab510a5dbabad6a80c602f (MD5) Previous issue date: 2007-03-26 / Medicinal plants are widely used, therefore they are important sources of natural chemical products. However, they can present problems in their use with regard to quality and to genetic identity of the vegetal material. Molecular techniques contribute in the identification of species through the construction of fingerprints, whereas the tissue culture has important hole for providing massive production of plants, free of pathogenic agents and genetically uniforms. Plectranthus includes species that are commonly know as boldo for having anti-dyspeptics and analgesic properties, and stimulant of digestion. The aim of this work was to evaluate the genetic diversity among four species of Plectranthus genus, through RAPD technique and quantitative analysis of their essential oils and to verify the in vitro micropropagation. The DNA extraction and amplification of four Plectranthus species (P. grandis, P. barbatus, P. neochilus e P. amboinicus) was carried out by RAPD. The essential oil of these species was extracted by hidrodestilation. For the establishment of axillaries buds and meristems of P. grandis, P. barbatus and P. neochilus, MS and MS medium supplemented with 0.1 mg L-1 of BAP, 0.01 mg L-1 of ANA and 0.1 mg L-1 of GA3, were used respectively. As alternative medium for the establishment of axillaries buds of P. grandis and P. barbatus, the MS and WPM medium were used complete and with ¾ of the concentration of their salts, combined with 30 and 50 g L-1 of sucrose. Higher genetic similarity was observed between species P. neochilus and P. amboinicus (80%), followed by P. grandis and P. barbatus (77%). Regarding the essential oil concentration, the P. neochilus presented higher value (0.43% b.s.), compared with the P. grandis with lower values (0.09% b.s.). After 40 days of culture, the P. neochilus was the species with better multiplication in MS medium, while for P. grandis and P. barbatus the alternative medium WPM¾ with 30 g L-1 of sucrose presented better condition for the development of both species. The variability detected by RAPD and the diversity of answers obtained during in vitro multiplication, allowed a clear separation among the four analyzed species. / Plantas medicinais são amplamente utilizadas pela população, pois são importantes fontes de produtos químicos naturais. Entretanto, podem apresentar problemas na sua utilização com relação à qualidade e à identidade genética do material vegetal. Técnicas moleculares auxiliam na identificação de espécies através da construção das impressões digitais, enquanto que a cultura de tecidos tem importante papel por proporcionar produção massiva de plantas, livres de agentes patogênicos e geneticamente uniformes. O gênero Plectranthus abrange espécies que são referidas como boldo por possuírem propriedades anti-dispépticas, analgésicas e estimulantes da digestão. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade genética entre quatro espécies do gênero Plectranthus, através da técnica de RAPD, analisar quantitativamente seus óleos essenciais e a micropropagação in vitro. A extração de DNA e amplificação foi realizada pela técnica de RAPD, de quatro espécies de Plectranthus (P. grandis, P. barbatus, P. neochilus e P. amboinicus). O óleo essencial destas espécies foi extraído através da hidrodestilação. Para o estabelecimento de gemas e meristemas de P. grandis, P. barbatus e P. neochilus foram utilizados os meios MS e MS suplementado com 0,1 mg L-1 de BAP, 0,01 mg L-1 de ANA e 0,1 mg L-1 de AG3, respectivamente. Como meios alternativos para o estabelecimento de gemas do P. grandis e P. barbatus, foram utilizados os meios MS e WPM íntegros e com ¾ da força de seus sais, combinados com 30 e 50 g L-1 de sacarose. Maior similaridade genética foi observada entre as espécies P. neochilus e P. amboinicus (80%), seguido de P. grandis e P. barbatus (77%). Quanto à concentração de óleo essencial, P. neochilus foi o que apresentou maior valor (0,43% b.s.), comparado a P. grandis com valores bem menores (0,09% b.s.). Após 40 dias de cultivo, P. neochilus foi a espécie com melhor multiplicação no meio MS, enquanto para P. grandis e P. barbatus o meio alternativo, WPM ¾ com 30 g L-1 de sacarose apresentou melhor condição para o desenvolvimento de ambas as espécies. A variabilidade detectada através da análise de RAPD e a diversidade de respostas obtidas durante a multiplicação in vitro permitiram uma clara separação entre as quatro espécies analisadas.

Clostridium perfringens é um dos microrganismos mais freqüentemente envolvidos em surtos de enfermidades transmitidas por alimentos. Este microrganismo pode ser classificado em cinco tipos toxigênicos (A-E), de acordo com a detecção dos genes codificadores de suas principais toxinas: alfa (cpa), beta (cpb), épsilon (etx) e iota (iap), sendo que técnicas moleculares empregando a PCR são atualmente utilizadas para genotipagem desses isolados. Alguns isolados de C. perfringens produzem uma enterotoxina (CPE) que é responsável pelos sintomas clínicos desenvolvidos em casos de toxinfecção alimentar, sendo que esta toxina é codificada pelo gene cpe. A simples detecção de C. perfringens em um alimento, mesmo naqueles suspeitos de causar surtos, não é suficiente para considerá-lo como de risco à saúde do consumidor. Isto porque dentre os isolados de C. perfringens apenas um número muito pequeno apresenta o gene cpe. Além disso, isolados de C. perfringens não produtores de CPE estão amplamente disseminados no ambiente, em alimentos e mesmo em fezes de pessoas. Desta forma, com o presente estudo verificou-se a freqüência de C. perfringens dentre isolados de clostrídios sulfito redutores, a freqüência de C. perfringens potencialmente enterotoxigênicos e sua variabilidade genética, de modo a evidenciar a importância dessas cepas como causadoras de doenças, além de fornecer subsídios para melhorar os conhecimentos sobre as características das cepas circulantes em nosso meio. Foram utilizados 335 isolados de clostrídios sulfito redutores provenientes de alimentos (126), solo (84) e fezes de animais (125). Dos 335 isolados, 146 (43,6%) foram caracterizados, através de reações bioquímicas e moleculares, comoC. perfringens, sendo 75 isolados (59,5%) provenientes de alimentos, 43 (51,2%) de solo e 28 (22,4%) de fezes de animais. Todas as cepas de C. perfringens analisadas foram tipadas como C. perfringens tipo A. Dos 75 isolados de C. perfringens provenientes de alimentos, 20 apresentaram o gene cpe, sendo 13 (65%) com localização cromossomal; nas demais cepas não foi possível determinar sua localização. Nos isolados de C. perfringens provenientes de solo e das fezes de animais não se verificou a presença desse gene. Das 20 cepas de C. perfringens que apresentaram o gene cpe detectou-se em 15 a produção de enterotoxina; as cinco cepas restantes não apresentaram esporulação no meio DUNCAN STRONG modificado, não sendo possível avaliar sua atividade enterotoxigênica. As 146 cepas de C. perfringens quando submetidas à PFGE geraram 69 perfis PFGE distintos, sendo 42 exclusivos para uma única cepa, indicando uma grande variabilidade genética, entre isolados provenientes de amostra de alimentos, fezes ou solo. A utilização de clostrídios sulfito redutores, ou mesmo de C. perfringens como indicador de possível risco à saúde dos consumidores pode levar à condenação desnecessária de alimentos, uma vez que existe baixa correlação entre costrídios sulfito redutores e C. perfringens, independente da fonte de isolamento, além da baixa freqüência do gene cpe nas cepas estudadas. / Clostridium perfringens is one of the most frequently microorganism involved in outbreaks of foodborne diseases. This microorganism can be classified into five toxigenic types (A to E), according to the detection of genes encoding its major toxins: alpha (cpa), beta (cpb), epsilon (etx) and iota (iap). Molecular techniques using PCR are currently used for genotyping this isolates. Besides the major toxins, some isolates of C. perfringens produce an enterotoxin (CPE) that is responsible for clinical symptoms developed in cases of food poisoning. This enterotoxin is encoded by the cpe gene. The simple detection of C. perfringens in food, even in those suspected of causing outbreaks, is not enough to consider it as a risk to consumers´ health. This happens because among the isolates ofC. perfringens only a very small number shows the cpe gene. In addition, isolates of C. perfringens that do not produce CPE are widespread in the environment, food and even in feces of humans. Thus, the present study examined the frequency of C. perfringens isolates among sulfite reducing clostridia, the frequency of potentially enterotoxigenic C. perfringens and its genetic variability in order to highlight the importance of these strains in causing diseases, and provides subsidies to improve the knowledge about the strains that are circulating in our environment. A total of 335 isolates of sulfite reducing clostridia from foods (126), soil (84) and animal feces (125) were used. Among the 335 isolates, 146 (43.6%) were characterized by biochemical and molecular reactions as C. perfringens, being 75 (59.5%) from foods, 43 (51.2%) from soil and 28 (22.4%) from animal feces. All strains of C. perfringens were typed as C. perfringens type A. Of the 75 isolates of C. perfringens from food, 20 had the cpe gene, and in 13 (65%) the gene was chromosomally located. In the other strains it was not possible to determine the location of this gene. In isolates of C. perfringens from soil and animal feces the cpe gene was not present. Amongst the 20 strains of C. perfringens positive for cpe, enterotoxin production was detected in 15. Five strains showed no sporulation in the medium modified Duncan Strong, being not possible to verify their enterotoxigenic activity. All C. perfringens were subjected to PFGE and generated 69 different PFGE profiles, being 42 unique to a single strain, indicating a great genetic variability among isolates from food, feces or soil. The use of sulfite reducing clostridia, or even C. perfringens as an indicator of possible health risk to consumers can lead to unnecessary condemnation of food, since there is low correlation between sulfite reducing clostridia and C. perfringens, regardless of source of isolation. This study also shows a low frequency of cpe gene in the strains indicating the low risk in causing foodborne disease.

Populações naturais de Tabebuia cassinoides Lam (DC) vem sedo intensivamente exploradas a mais de 70 anos, sendo que atualmente restam poucas populações em condições de exploração comercial. Contudo, a pressão para a contínua exploração das populações remanescentes permanece, embora estudos recentes venham indicando que a intensidade de exploração adotada está causando forte perda de diversidade genética. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar os impactos do manejo nos níveis de diversidade genética de populações naturais de T. cassinoides, usando dados de isoenzimas de amostras de árvores adultas de sete populações, sendo quatro naturais e três manejadas, procedentes do Vale do Ribeira-SP. Foram amostradas aproximadamente 60 árvores por populações, com exceção de uma população, onde foram amostradas 100 árvores e medido o diâmetro a altura do peito (DAP) de cada árvore. Os efeitos do manejo foram avaliados simulando-se diferentes intensidades de desbaste em função de classes de DAP e retenção de diferentes tamanhos populacionais por hectare (20, 30, 50, 75 e 100 genótipos). Os diferentes cenários foram avaliados comparando-se os índices porcentagem de locos polimórficos (), número médio de alelos por locos (), heterozigosidade observada () e esperada em equilíbrio de Hardy-Weinberg () e índice de fixação (). A estrutura genética espacial intrapopulacional de cinco das sete populações foi estuda amostrando-se 12 a 20 grupos aleatórios, formados pelas cinco árvores mais próximas. Em cinco populações as coordenadas geográficas das árvores amostradas foram registradas (usando GPS) para o estudo da distribuição espacial dos genótipos. T. cassinoides apresenta altos níveis de diversidade genética (=3,1; =0,455; =0,445) quando comparada a outras espécies arbóreas tropicais. Comparando as médias das populações naturais e manejadas, foram detectados maiores níveis de diversidade genética nas populações naturais (=2,64; =0,491; =0,504), relativamente as manejadas (=2,29; =0,406; =0,353). A maior parte da diversidade genética encontra-se dentro das populações (mínimo 27,6%). Nas populações naturais, 12,8% da diversidade genética encontra-se entre populações e nas manejadas e 28,4%. Dentro das populações naturais, 12,3% da diversidade genética encontra-se entre grupos e nas manejadas 9,7% encontrava-se entre grupos, sugerindo que a coancestria média dentro das populações aproxima-se da esperada em meios-irmãos (0,125) e, portanto, que existe estrutura genética espacial nas populações de T. cassinoides. Igualmente, a análise da distribuição espacial dos genótipos por autocorrelação espacial detectou indícios significativos de estruturação genética espacial até a distância aproximada de 50 m de raio. Na estimativa dos índices de diversidade genética para cinco classes diamétricas não foram detectadas correlações significativas entre as classes diamétricas e os índices e . Contudo, associações significativas foram detectadas entre as classes diamétricas e os índices (AˆoHˆeHˆfˆAˆeHˆoHˆAˆeHˆoHˆAˆeHˆoHˆAˆeHˆoHˆrˆ=0,813) e (fˆ910,0ˆ−=r), sugerindo que árvores de maiores classes diamétricas apresentam maiores heterozigosidades e existe provável seleção para heterozigotos. Simulando a retenção de diferentes tamanhos amostrais por hectares, observou-se que todos os parâmetros genéticos foram afetados e que é necessário reter aproximadamente 75 árvores por hectare para que os efeitos negativos em relação à população base sejam baixos. / Natural populations of Tabebuia cassinoides Lam (DC) have been intensively harvested in the last 70 years. The pressure for continuum exploitation of remaining populations remains, although few populations remain in conditions that allow commercial exploitation and recent studies indicated that intensive harvest causes strong loss of genetic diversity. Thus, the objective of this work was to study the impacts of harvesting on genetic diversity levels of T. cassinoides natural populations from Vale do Ribeira-SP, Brazil, using isozymes markers. We collected leaf tissues of adult trees from seven populations, four natural and three harvested. Sixty trees were sampled per population, with the exception of one population, where we sampled 100 trees and also measured their diameter at breast height (DBH). The effects of harvest were evaluated by simulating different logging intensity in this one population, considering several DBH classes and retaining different populational sizes per hectare (20, 30, 50, 75 and 100 remaining trees). The different resulting pictures were evaluated comparing the indexes of the percentage of polymorphic loci (), the mean numbers of alleles per locus (), observed () and expected in Hardy-Weinberg heterozigosity () and the fixation index (). The intrapopulational spatial genetic structure was studied in five of the seven populations, sampling 12 to 20 random groups, formed by the five nearest trees. In order to study the spatial genetic structure, we registered, with the use of GPS, the geographic coordinates of the sampled trees in five populations. The results showed that T. cassinoides has high levels of genetic diversity (=3.1; =0.455; =0.445) when compared with other tropical tree species. By comparing the mean values found for the natural and for the harvested populations, we detected higher levels of genetic diversity in natural populations (=2.64; =0.491; =0.504), relatively to the harvested ones (=2.29; =0.406; =0.353). The largest part of the genetic diversity was found within population (minimum 27.6%). In natural populations, 12.8% of genetic diversity was found among populations and 28.4% on the harvested ones. Within natural populations, 12.3% of genetic diversity was found among groups and 9.7% in the harvested ones, suggesting that the mean coancestry within population is close to the expected in half-sibs (0.125) and, thus, that there is spatial genetic structure in T. cassinoides populations. The analysis of genotypes spatial genetic structure by spatial autocorrelation detected a significant indication for spatial genetic structure at approximately 50 meters distance radius. The genetic diversity index estimation for five diametric classes did not detect significant correlations among diametric classes and and indexes. However, significant associations were detected among the diametric classes and (fˆAˆeHˆoHˆAˆeHˆoHˆAˆeHˆoHˆAˆeHˆoHˆrˆ=0.813) and (fˆrˆ=-0.910) indexes, suggesting that trees of the higher diametrical classes have higher heterozigosity and, thus, preferential selection for heterozygous. When simulating the retention of different sample sizes per hectare, we observed that all genetic parameters were affected and that, in order to maintain low negative effects, it is necessary to retain approximately 75 trees per hectare.