Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-09-16T22:49:16Z No. of bitstreams: 1 474864 - Texto Completo.pdf: 4783570 bytes, checksum: 1da454a8aaea971c62e4fff0a6d841a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-16T22:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 474864 - Texto Completo.pdf: 4783570 bytes, checksum: 1da454a8aaea971c62e4fff0a6d841a2 (MD5) Previous issue date: 2015-08-03 / Introduction : The cellular and physiological changes that accompany the aging process has pronounced effects in neurodegenerative diseases. Factors that produce neurodegeneration do so through different processes that culminate in a common signaling pathway cascade. Stem cells communicate via cellular signaling mechanisms, which is part of a complex system which governs and coordinates activities and cell functions. Understanding the mechanisms and forms of intercellular communication and their relationship in the activation of signaling cascades from the surface receptor to the cell nucleus during neurogenesis, will answer some pertinent questions to the mechanisms of action of stem cells in repair central nervous system. Objective : This study aimed to determine which RTKs being activated during neurogenesis of adult stem cells from human umbilical cord tissue. Methods : Adult stem cells were obtained from human umbilical cord tissue (n = 3) and subjected to specific inducers in neurodifferentiation means. The kit Human Phospho-RTK Array was used for evaluating the phosphorylation of the RTK and the expression determined by realtime PCR. Results : The mesenchymal stem cells obtained from umbilical cord tissue were confirmed by differentiation induction in adipocytes and osteocytes cells. The neurodifferentiation was confirmed by expression of genes that are expressed during neurogenesis in cells and neural cells, as well as immunocytochemistry technique markings which showed nuclear (DAPI) and cell processes (Fluoropan). During the neuroinduction processes and neurodifferentiation the phosphorylation levels of RTKs were variable, with no clear pattern. The Ryk receptor showed no significant changes in their levels of phosphorylation of the three samples studied and the different stages of differentiation, ie, mesenchymal, neuroinductions and neurodifferentiates cells. Conclusions : The tyrosine kinases are actively being phosphorylated during neuroinduction and neurogenesis, with varying standards between the different stages and between different samples, reflecting the variability of human adult stem cells. / Introdu??o : As altera??es celulares e fisiol?gicas que acompanham o processo de envelhecimento tem efeitos pronunciados nas doen?as neurodegenerativas. Os fatores que produzem neurodegenera??o o fazem atrav?s de diferentes processos, que culminam em uma via comum de cascata de sinaliza??o. As c?lulas-tronco se comunicam por mecanismos de sinaliza??o celular, que faz parte de um complexo sistema que governa e coordena as atividades e fun??es celulares. Compreender os mecanismos e as formas de comunica??o intercelular e a sua rela??o na ativa??o das cascatas de sinaliza??o, desde o receptor de superf?cie at? o n?cleo celular, durante a neurog?nese, permitir? responder algumas quest?es pertinentes aos mecanismos de a??o das c?lulas-tronco no reparo do sistema nervoso central. Objetivo : Este estudo teve como objetivo determinar quais os RTKs que est?o sendo ativados durante a neurog?nese de c?lulas-tronco adultas de tecido de cord?o umbilical humano. Metodologia : C?lulas-tronco adultas foram obtidas de tecido de cord?o umbilical humano (n=3) e submetidas a neurodiferencia??o em meios indutores espec?ficos. O kit Human Phospho-RTK Array foi utilizado para avalia??o da fosforila??o dos RTKs e a express?o determinada por PCR em tempo real. Resultados : As c?lulas-tronco mesenquimais obtidas do tecido do cord?o umbilical foram confirmadas atrav?s da indu??o de diferencia??o em c?lulas adip?citas e oste?citas. A neurodiferencia??o foi confirmada atrav?s da express?o de genes que s?o expressos nas c?lulas durante a neurog?nese e em c?lulas neurais, como tamb?m a t?cnica de imunocitoqu?mica que mostrou marca??es nucleares (DAPI) e prolongamentos celulares (Fluoropan). Durante os processos de neuroindu??o e neurodiferencia??o os n?veis de fosforila??o dos RTKs foram vari?veis, sem um padr?o definido. O receptor Ryk n?o apresentou altera??es significativas nos seus n?veis de fosforila??o entre as tr?s amostras estudadas e nas diferentes etapas de diferencia??o, isto ?, c?lulas-tronco mesenquimais, c?lulas neuroinduzidas e c?lulas neurodiferenciadas. Conclus?es : Os receptores tirosina quinases est?o sendo ativamente fosforilados durante a neuroindu??o e neurog?nese, com padr?es vari?veis entre as diferentes etapas e entre diferentes amostras, refletindo a variabilidade das c?lulas-tronco adultas humanas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 452977.pdf: 5521705 bytes, checksum: 123159632e5331d0676a4575af283f7b (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / Modafinil is a drug that promotes increased alertness. It was approved for the treatment of excessive daytime sleepness in narcolepsy and obstructive sleep apnea. Some studies indicate that Modafinil can improve learning, memory and reverse cognitive loss induced by sleep deprivation and stress. This study was aimed to characterize the effects of modafinil on control adult rat s memory. Further, its effects were also studied using three models of cognitive decline to assess modafinil effects on memory. The iron overload model on neonatal period related to the degenerative diseases, maternal deprivation on neonatal period that generates emotional and cognitive impairment on adulthood, and, paradoxal sleep deprivation, which is known to interfere with on memory consolidation. The first experiment investigated the effects of the drug on memory consolidation and retrieval using distinct paradigms of learning; object recognition and inhibitory avoidance (aversive memory task) in healthy adult rats. Male Wistar rats received a single injection of acute modafinil (0.0; 0.75; 7.5 or 75 mg/kg) immediately after training or one hour before object recognition or inhibitory avoidance retention tests. Acute administration of modafinil to healthy rats did not affect memory consolidation or retrieval. The second experiment examined the acute or chronic administration of modafinil on the reversal of memory deficits induced by iron overload in the neonatal period, a model of cognitive decline related to neurodegenerative disorders. Rats treated with iron between 12 and 14 postnatal days received in adulthood, acute intraperitoneal injection of modafinil (0.0; 0.75; 7.5 and 75 mg/kg) immediately after training in the recognition task object. A single injection of modafinil at the highest dose was able to recover recognition memory in rats treated with iron. In order to investigate the effects of chronic treatment with modafinil, irontreated rats received intraperitoneal injections of modafinil at the same doses for seventeen days. Twenty-four hours after the last injection, the animals were submitted to object recognition or inhibitory avoidance training. Memory retention tests were performed twenty four hours after training. Chronic administration of modafinil fully recovered memory deficits induced by iron both in recognition memory and emotional memory. Experiment III evaluated the effects of maternal deprivation combined with paradoxical sleep deprivation (PSP) on recognition memory. Wistar rats separated from their mothers for fourteen days, three hours per day, underwent PSP for twenty four hours in adulthood. The model allowed to investigate the ability to reverse such deficits with administration of modafinil that was effective in restoring cognitive decline caused by maternal deprivation and PSP. The use and commercialization of modafinil as a stimulant is widely proved. To support its application in the memory loss associated with neurodegenerative disorders, stress in early life and PSP, additional preclinical and clinical research are needed. This study shows, however, through the proposed models of cognitive decline, the drug effectiveness in reversing such memory deficits. / O Modafinil ? um f?rmaco que promove o aumento do estado de alerta, e foi aprovado para o tratamento da sonol?ncia diurna excessiva na narcolepsia e apn?ia obstrutiva do sono. Alguns estudos indicam que o modafinil pode melhorar a aprendizagem, a mem?ria e reverter d?ficits cognitivos induzidos pela priva??o de sono e estresse. No presente trabalho tivemos como objetivo caracterizar os efeitos do modafinil sobre a mem?ria em ratos adultos saud?veis. Al?m disso, seus efeitos tamb?m foram estudados utilzando-se tr?s modelos de decl?nio cognitivo para avaliar os efeitos do modafinil sobre a mem?ria: o modelo da sobrecarga de ferro no per?odo neonatal relacionado com as doen?as neurodegenerativas, a separa??o materna no per?odo neonatal que gera um preju?zo emocional e cognitivo na idade adulta e, por fim, a priva??o de sono paradoxal que interfere na consolida??o da mem?ria. No experimento I foram investigados os efeitos do f?rmaco sobre a consolida??o e a evoca??o da mem?ria utilizando-se distintos paradigmas de aprendizagem: reconhecimento de objetos e esquiva inibit?ria (tarefa de mem?ria aversiva) em ratos adultos saud?veis. Ratos Wistar adultos receberam uma inje??o aguda de modafinil (0,75; 7,5 ou 75 mg/kg) ou ve?culo imediatamente ap?s o treino ou 1 hora antes do teste nas tarefas de reconhecimento de objetos ou de esquiva inibit?ria. A administra??o aguda de modafinil em ratos saud?veis n?o afetou a consolida??o e nem a evoca??o da mem?ria. O experimento II analisou os efeitos da administra??o aguda ou cr?nica de modafinil sobre os d?ficits de mem?ria induzidos pela sobrecarga de ferro no per?odo neonatal, um modelo de decl?nio cognitivo relacionado a dist?rbios neurodegenerativos. Ratos tratados com ferro entre o 12? e 14? dia p?s natal receberam, na idade adulta, uma inje??o intraperitoneal aguda de modafinil (0,75; 7,5 e 75 mg/kg) ou ve?culo imediatamente ap?s o treino da tarefa de reconhecimento de objeto. Uma inje??o aguda de modafinil na dose mais elevada foi capaz de recuperar a mem?ria de reconhecimento em ratos tratados com ferro. A fim de investigar os efeitos do tratamento cr?nico com modafinil, os ratos tratados com ferro receberam inje??es di?rias de modafinil nas mesmas doses por 17 dias. Vinte e quatro horas ap?s a ?ltima inje??o, os animais foram submetidos ?s tarefas de reconhecimento de objetos e esquiva inibit?ria. Os testes de reten??o de mem?ria foram realizados 24 horas ap?s o treino. A administra??o cr?nica de modafinil recuperou completamente os d?ficits de mem?ria induzidos pelo ferro, tanto na mem?ria de reconhecimento quanto na mem?ria emocional. O experimento III avaliou os efeitos da separa??o materna combinada com a priva??o de sono paradoxal (PSP) sobre a mem?ria de reconhecimento. Ratos Wistar separados da m?e durante 14 dias, tr?s horas por dia, foram submetidos a PSP por vinte e quatro horas na idade adulta. O modelo permitiu investigar a capacidade de revers?o de tais d?ficits com a administra??o de modafinil que foi efetivo em recuperar o decl?nio cognitivo causado pela separa??o materna e pela PSP. A utiliza??o e a comercializa??o do modafinil como estimulante s?o amplamente fundamentadas. Para dar suporte ? sua aplica??o na perda de mem?ria associada ?s perturba??es neurodegenerativas; ao estresse no in?cio da vida e ? PSP, pesquisas pr? cl?nicas e cl?nicas adicionais s?o necess?rias. Este estudo comprova por meio dos modelos de decl?nio cognitivo propostos, a efetividade do f?rmaco em reverter tais d?ficits de mem?ria.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-03-22T00:26:39Z No. of bitstreams: 1 JulianaChrisSilvaDeAzevedo_TESE.pdf: 3335761 bytes, checksum: 5840f8f561d3f40aa1c1d8a4d26f2dce (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-03-22T23:34:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JulianaChrisSilvaDeAzevedo_TESE.pdf: 3335761 bytes, checksum: 5840f8f561d3f40aa1c1d8a4d26f2dce (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T23:34:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaChrisSilvaDeAzevedo_TESE.pdf: 3335761 bytes, checksum: 5840f8f561d3f40aa1c1d8a4d26f2dce (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / O camu-camu (Myrciaria dubia H.B.K. (McVaugh)) ? um fruto nativo da Regi?o Amaz?nica, que se tornou mundialmente conhecido por seu alto teor de ?cido asc?rbico. Devido a seu elevado grau de acidez, o fruto ? consumido principalmente como suco ou utilizado como ingrediente na prepara??o de alimentos. Dessa maneira, durante seu processamento s?o geradas quantidades consider?veis de res?duo agroindustrial. Apesar de estudos que apontam sua riqueza em compostos bioativos e efeitos biol?gicos, poucas s?o as informa??es sobre t?cnicas de transforma??o, aproveitamento e preserva??o dos frutos e de seu res?duo industrial, as quais poderiam ser empregadas em prol de sua utiliza??o funcional. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a aplica??o de dois processos de secagem, por convec??o em secador de bandejas e por liofiliza??o sobre o res?duo de camu-camu (constitu?do por casca e sementes com polpa aderida), visando obter um produto com qualidades funcionais. A presente tese foi dividida em tr?s etapas: a primeira etapa mostra os estudos relacionados ? secagem convectiva e liofiliza??o, na qual foi avaliado o impacto de ambos os processos sobre compostos bioativos selecionados, tomando o res?duo fresco como amostra controle. Dentre as condi??es estudadas, os grupos obtidos por convec??o a 50?C e 4 m/ s (SC50) e 80?C e 6 m/ s (SC80) apresentaram melhor combina??o de concentra??o de ?cido asc?rbico, capacidade redutora do Folin-Ciocalteau e caroten?ides totais, e foram selecionados para estudos complementares. Al?m disso, o res?duo liofilizado (RL) e o res?duo fresco (RF) foram investigados nas etapas posteriores da pesquisa. De maneira geral, foi observada maior concentra??o dos constituintes bioativos no grupo RF, seguido do RL e, por fim, os res?duos desidratados por convec??o, SC50 e SC80, respectivamente. Na segunda etapa, foram avaliadas atividades antioxidante, microbiol?gica e antienzim?tica, onde tamb?m foi observada a mesma tend?ncia nos resultados. Nessa etapa, foi identificada, pela primeira vez na literatura, a presen?a do ?cido sir?ngico no res?duo do camu-camu. A terceira parte desta tese abordou a investiga??o dos efeitos do res?duo de camu-camu desidratado sobre o envelhecimento e doen?as neurodegenerativas, utilizando o modelo in vivo C. elegans. Os extratos de camu-camu foram capazes de favorecer genes importantes das vias de ativa??o/inibi??o do estresse oxidativo e t?rmico (p < 0,05). Para o verme do tipo selvagem N2, as fra??es do extrato de baixo peso molecular PA (fase aquosa e polar ?cida), PB (fase aquosa e polar b?sica) e PN (fase org?nica e polar neutra) do grupo SC50 estenderam o tempo de vida em 20% e 13% (p < 0,001). Os resultados obtidos revelaram que a paralisia induzida pelo pept?deo Amil?ide ?1-42 associada a doen?a de Alzheimer, foi retardada significativamente (p < 0,0001) na linhagem CL4176. Da mesma forma, os extratos de camu-camu foram capazes de atenuar a indu??o dopamin?rgica associada ao mal de Parkinson. Finalmente, a an?lise global dos dados mostra que o res?duo de camucamu, co-produto obtido a partir de uma fruta nativa Brasileira, constitui uma fonte natural de compostos relevantes para a sa?de humana. Dessa forma, a presente tese mostra de maneira in?dita a multifuncionalidade desse produto ainda subaproveitado do ponto de vista cient?fico, comercial e tecnol?gico. / Camu-camu (Myrciaria dubia H.B.K. (McVaugh)) is a native Amazon fruit, recognized worldwide as one of the main natural sources of ascorbic acid. Due to its great acidity, this fruit is generally consumed after processing into juice or as ingredient in food preparations. As a co-product of the camu-camu processing, a significant amount of agroindustrial residue is generated. Despite the studies showing the bioactive value and biological potential of the fruit, few studies have approached the possible processing techniques, transformation and preservation of camu-camu fruits and its agroindustrial pomace. Therefore, the present work has the objective of evaluating two different drying processes applied to camu-camu pomace (peel and seeds with residual pulp), freeze drying and hot air drying, in order to obtain a functional fruit product. This thesis was divided into three stages: the first one shows the studies related to the freeze drying and hot air drying, where we demonstrated the impact of the selected drying techniques on the bioactive components of camu-camu, taking the fresh pomace as the control group. Among the investigated conditions, the groups obtained at 50?C and 4 m/s (SC50) and 80?C and 6 m/s (SC80) were selected as for further studies, based on their ascorbic acid final content and Folin-Ciocalteau reducing capacity. In addition to SC50 and SC80, the fresh pomace (RF) and freeze dried (RL) samples were also evaluated in these further stages of the research. Overall, the results show higher bioactive concentration in the RF samples, followed by RL, SC50 and SC80. On the second step of the research, the antioxidant, antimicrobial and antienzymatic activities were evaluated and the same tendency was observed. It was also reported, for the first time in the literature, the presence of syringic acid in dried camu-camu pomace. In the third and final stage of the research, it was investigated the effect of dried camu-camu on aging and neuroprotective disorders, using the in vivo model C.elegans. It was observed that camu-camu extracts were able to modulate important signaling genes relevant to thermal and oxidative stresses (p < 0.05). The polar acid, polar basic and polar neutral fractions obtained from the low molecular extracts of SC50 were able to extend the lifespan of wild type N2 C. elegans in 20% and 13% (p < 0.001). Results also showed that the paralysis induced by the ?1-42 amyloid was significantly (p < 0.0001) retarded in CL4176 worms. Similarly, the camu-camu extracts attenuated the dopaminergic induction associated to Parkinson?s disease. Finally, a global analysis of the data presented here reveal that the camu-camu pomace, a co-product obtained from the industrial processing of a native Brazilian fruit, is a relevant natural source of health relevant compounds. This thesis, shows for the first time, the multifunctionality of camu-camu pomace, a natural resource still underexploited for scientific, commercial and technological purposes.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 417575.pdf: 5448343 bytes, checksum: c2400c3e66de9c19b7b14a8dd168d231 (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / O presente estudo foi planejado para investigar altera??es neuropatol?gicas em ratos adultos e velhos, e em camundongos trang?nicos APP/PS1 submetidos ? administra??o de ferro suplementar num per?odo cr?tico p?s-natal, com o objetivo de estudar a contribui??o de fatores de risco ambientais e gen?ticos na patog?nese de doen?as neurodegenerativas. Nenhuma diferen?a significativa foi vista na abund?ncia das prote?nas &#946;-amil?ide, tau fosforilada e na &#945;-sinucle?na, analisados por IHC no enc?falo, quando ratos tratados com ferro e sem ferro s?o comparados. Aumento de astrocitose, detectada por densitometria de astr?citos imunoreativos marcados por GFAP, foi encontrado em ratos velhos (24 meses) tratados com ferro na subst?ncia negra e estriado e no hipocampo de ratos adultos (3 meses) tratados com ferro quando comparados com controles pareados por idade. Nenhuma modifica??o nas placas de &#946;-amil?ide foram vistas em camundongos trang?nicos APP/PS1 tratados e n?o tratados. Nenhuma diferen?a na rea??o microglial foi observada quando comparados os 4 grupos: trang?nicos com ferro (TgFe), transg?nicos com sorbitol (TgSb), wild type com ferro (WtFe), wild type com sorbitol (WtSb). Ainda, aumento em astrocitose, revelado por densitometria de astr?citos reativos marcados por GFAP, e aumento de n?veis de express?o de GFAP, revelados por western blotting, foram encontrados em camundongos tratados com ferro (tanto Tg como Wt) quando comparados com TgSb e WtSb. Este aumento foi acompanhado por altera??es significativas na composi??o de ?cidos graxos no c?rebro de camundongos APP/PS1 que levaram ? diminui??o do ?ndice de capacidade peroxidativa de membrana e redu??o do dano oxidativo prot?ico. Os presentes achados claramente documentam que o excesso de ferro durante o per?odo neonatal impacta na composi??o celular e molecular de c?rebros de ratos adultos e velhos e de camundongos trang?nicos APP/PS1. Estas observa??es podem encorajar mais estudos focados nos efeitos de suplementa??es na dieta de crian?as.