Orientador: Luiz Fernando Bleggi Torres / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias da Saude, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi a embriologia, histologia e epidemiologia das doenças que acometem o tegumento das crianças. A embriologia, histologia e variações anatômicas da pele (experimento 1) foram estudadas através da avaliação histológica de amostras da pele da região interna da coxa direita coletadas de fetos, natimortos, neomortos, préescolares e adolescentes submetidos a autópsia no Hospital de Clínicas, UFPR. Os aspectos epidemiológicos (experimento li) foram estudados através da revisão de 662 biópsias de pacientes pediátricos, entre 1990 e 1995, diagnosticadas no Serviço de Anatomia Patológica do Hospital de Clínicas, UFPR. Os resultados do experimento 1 foram descritos através de esquemas e fotomicrografias e comparados com dados de literatura. Os resultados do experimento li revelaram predomínio de pacientes com idades oscilando de 7 a 15 anos. Há uma prevalência maior de lesões císticas incluindo cistos epidermóides e dermóides, e lesões tumorais incluindo pilomatricoma e angiomas, em relação as dermatoses neste estudo. Estes resultados são comparados com os de outras séries publicadas. XIV / Abstract: The aim of the present study was the embriology, histology and epidemiology of cutaneous diseases in childhood. The embriological and histological observations (experiment 1), including the study of the anatomical variations of the normal skin, were carried out through the microscopical analysis of fragments of the skin obtained from the internai right thigh of fetus, stillborns, infants and adolecents autopsied at Hospital de Clínicas, UFPR. lhe epidemiological observations (experiment li) were based on the study of 662 skin biopsies that were reviewed from the files of the Division of Anatomic Pathology, Hospital de Clínicas, UFPR between 1990 and 1995. The results of experiment 1 were presented through schemes and pictures, and compared with previous observations reported in the literature. The results of experiment li revealed that there was predominance of skin biopsies from patients with age ranging from 7 to 15 years old. The most prevalent pathological diagnosis in this study were the cystic lesions including epidermoid and dermoid cysts, and benign tumours represented mainly by pylomatrixoma and angiomas. These results were also compared with the world literature.

Orientadora : Profª. Drª. Chirlei Glienke / Coorientador : Prof. Dr. Fabricio Packer Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/03/2014 / Inclui referências : f. 42-44;61-63;67-71 / Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC) é uma doença que ameaça a Citricultura brasileira, causando lesões em frutos e sua queda prematura em estágios mais severos, levando a prejuízos de produção e rejeição no mercado consumidor. É causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, presente em folhas caídas em decomposição na forma sexuada (ascósporos) e nas lesões dos frutos, em folhas aderidas à planta e ramos secos na forma assexuada (picnidiósporos). O uso de fungicidas sistêmicos ainda é a principal alternativa de controle, mas se depara com os principais problemas do seu uso excessivo como toxicidade ambiental, acúmulo de resíduos nos frutos e seleção de patógenos resistentes. A busca por um controle alternativo pode envolver microrganismos endofíticos de plantas medicinais, uma vez que é conhecido seu potencial biotecnológico e poder protetor da planta hospedeira, mas depende do conhecimento do ciclo infeccioso do patógeno sob vários aspectos. Sabe-se da importância do manejo de ramos secos no controle da doença mas pouco se conhece sobre a participação dos ramos na epidemiologia da MPC. Técnicas tradicionais de isolamento em meio de cultura juntamente com ensaios moleculares têm agilizado o diagnóstico de doenças, oferecendo dados importantes sobre vários patosistemas. Adicionalmente, o uso de microrganismos transformados geneticamente para expressão de uma proteína repórter, como a green fluorescente protein (gfp), trazem uma nova ferramenta para o monitoramento desses microrganismos e entendimento do seu ciclo infeccioso. No presente estudo foram avaliados 128 ramos de área de alta incidência da MPC, pertencentes a quatro estados fenológicos: novo, jovem, velho e seco. O isolamento destes tecidos revelou 1,6% de amostras positivas para P. citricarpa, apenas em tecidos de estado fenológico velho, enquanto a extração de DNA direto dos tecidos seguido de PCR espécie específico não revelou a presença do patógeno. Foi avaliada a sobrevivência do fungo patogênico em ramos de citros destacados, pela inoculação de suspensão conidial da linhagem transformante LGMF06-T2 (gfp) de P. citricarpa. Foi possível recuperar o fungo inoculado dos tecidos após 45 dias da sua inoculação, não sendo recuperado após 90 e 135 dias. A espécie inoculada foi confirmada por microscopia de fluorescência, e este resultado sugere a sobrevivência do patógeno nos ramos por pelo menos 45 dias. Adicionalmente, foi avaliado o efeito do extrato metabólico do fungo endofítico Diaporthe terebinthifolii sobre a formação de picnídios de P. citricarpa em ramos autoclavados. Fragmentos de 1 cm de ramos autoclavados foram depositados sobre meio ágar-agua e em suas laterais foram inoculados fragmentos miceliais do patógeno. Comparou-se o crescimento micelial e formação de picnídios nos ramos tratados com o extrato do fungo endofítico com relação aos ramos não tratados e ramos tratados com fungicida comercial. Observou-se que o extrato reduz a formação de picnídios comparativamente ao controle negativo, apresentando efeito similar ao promovido pelo fungicida. Tais resultados confirmam o potencial do extrato do fungo D. terebinthifolii no controle do patógeno P. citricarpa. Palavras-chave: Mancha Preta dos Citros, Phyllosticta citricarpa, endófitos, controle alternativo / Abstract: The Citrus Black Spot (CBS) is a threat to the Brazilian Citrus, causing fruit lesions and premature fruit drop in more severe cases, leading to yield losses and fruit rejection in the consumer market. CBS is caused by the fungus Phyllosticta citricarpa, which ascospores are the sexual stage, found in decomposing fallen leaves, and picnidiospores are the asexual stage, present in fruit lesions, attached leaves and dried branches. Systemic fungicides are the main control alternative, but its overuse causes problems like the environmental toxicity, residues accumulation in fruits and also the selection of resistant pathogens. The search of an alternative disease control method may involve endophytic microorganisms of medicinal plants, due to their biotechnological potential and protective power of the host plant, but it is important to know about the infectious cycle of the pathogen. We know the importance of handling dry branches for CBS control but there is a lack of information about this pathosystem, mainly about the influence of branches in the disease epidemiology. The use of traditional isolation techniques coupled with molecular techniques have enhanced the diagnosis of diseases, providing important data on the interaction between the plant and the pathogen. Additionally, the use of genetically transformed microorganisms for the expression of a reporter protein, such as green fluorescent protein (GFP) brings a new tool to understand the pathogen infectious cycle. In the present study, we evaluated 128 branches in area of high incidence of CBS, belonging to four growth stages: new, young, old and dried. The isolation of these tissues showed 1.6% of samples with the presence of P. citricarpa, only in branches in old growth stages, while the method used for DNA extraction and PCR directly from the branches tissue did not reveal the pathogen. We also evaluated the fungus survival in detached citrus branches by inoculating a conidial solution of the LGMF06-T2 transformed strain expressing the green fluorescent protein (GFP). The pathogen was reisolated from the branches after 45 days of inoculation, with the gfp strain confirmed by fluorescence microscopy. These findings suggests that the pathogen can survive in branches for at least 45 days. Additionally, we evaluated the control effect of metabolic extract of the endophytic fungus Diaporthe terebinthifolii over micelial growth and pycnidia formation of P. citricarpa in autoclaved branches. Branches fragments (1 cm) were placed on water agar media and mycelium fragments of the pathogen were inoculated on its sides. It was evaluated the micelial growth and pycnidia formation on the branches treated with the the endophytic fungus extract, compared with non-treated branches and branches treated with commercial fungicide. The extract treatment reduced the formation of pycnidia compared to the non-treated branches, and its inhibition was similar to the fungicide treatment. These findings confirm the potential of D. terebinthifolii extract in the control of P. citricarpa. Keywords: Citrus Black Spot, Phyllosticta citricarpa, epidemiology, disease control, endophytes, alternative control

Resumo: A Mancha Foliar de Glomerella (MFG) é causada por espécies de Colletotrichum e é a principal doença de verão da cultura da macieira, ocasionando sintomas em folhas e frutos e prejudicando a produção do ano subsequente à sua ocorrência devido à intensa desfolha que provoca nas plantas. Os objetivos deste trabalho foram (I) verificar as fontes de inóculo primário existentes em um pomar com alta pressão de inóculo, (II) monitorar a densidade de conídios de Colletotrichum spp. disseminados pelo ar e pela água em diferentes alturas da planta, em áreas sem e com tratamento químico, e verificar se ocorre a dispersão dos conídios por insetos-praga da cultura e (III) verificar a época de início da epidemia, o progresso da doença e a relação entre a severidade da MFG com a desfolha das plantas, de acordo com a localização das folhas no dossel. Para avaliação da sobrevivência do patógeno no outono e no inverno, coletas mensais de ramos e gemas dormentes, folhas caídas e de solo foram realizadas entre os meses de abril e agosto, e para avaliação da sobrevivência do patógeno de forma epifítica, coletas mensais de folhas assintomáticas foram realizadas entre setembro e março, durante dois anos. A patogenicidade dos isolados foi verificada em frutos com e sem ferimento e em folhas. A densidade de conídios de Colletotrichum spp. ao longo do tempo foi determinada pela coleta destes com armadilhas caça-esporos instaladas a 0,3, 1,0 e 2,5 m de altura em relação ao solo e com a coleta do escorrimento interno de água na planta a 0,3 e 1,0 m de altura em relação ao solo. Insetos-praga da cultura (Grapholita molesta e Bonagota cranaodes) foram coletados quinzenalmente para verificação da presença do patógeno externamente a estes. A incidência, severidade e desfolha ocasionada pela MFG foram quantificadas em 10 folhas por ramo, posicionados a 0,3, 1,0 e 1,8 m de altura em relação ao solo. Detectou-se a presença de inóculo do patógeno no outono/inverno em ramos e gemas dormentes e em folhas caídas no solo, sendo que o número de isolados e sua patogenicidade variou de acordo com o órgão vegetal de origem e o ano de obtenção. Em nenhum momento foi observada a presença de Colletotrichum spp. no solo durante o período de outono/inverno, e em folhas assintomáticas durante o período vegetativo. A disseminação de conídios de Colletotrichum spp. foi observada a partir dos meses de outubro e novembro em áreas sem tratamento e a partir dos meses de novembro e janeiro em áreas com tratamento, cessando em meados do mês de abril. A maior densidade de conídios foi observada nos meses de janeiro e fevereiro, independentemente do manejo fitossanitário. Em ano com maior pressão de inóculo a aplicação de fungicidas não foi capaz de reduzir a área abaixo da curva calculada a partir da quantidade de conídios ao longo do tempo. A maior captura de conídios ocorreu próximo ao solo e a presença destes foi constatada tanto no ar quanto no escorrimento de água no interior da planta. Não foram observados conídios de Colletotrichum spp. em G. molesta e B. cranaodes. A quantidade de sintomas de MFG foi altamente dependente das condições ambientais observadas, principalmente a quantidade de precipitação e a umidade relativa do ar, havendo correlação positiva entre a severidade imediatamente anterior a queda e o tempo de permanência da folha na planta para todas as alturas avaliadas. A desfolha mostrou-se mais acentuada nas partes altas do dossel das plantas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-10-24Bitstream added on 2014-06-13T21:06:03Z : No. of bitstreams: 1 wludarski_arl_dr_botfm.pdf: 773384 bytes, checksum: 74f01eeb08ae5dc6190358c9ed1581dc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A falência hepática aguda (FHA) é uma síndrome caracterizada por hepatite aguda grave complicada pelo rápido aparecimento de encefalopatia hepática. As etiologias reconhecidas são infecções virais, reações a fármacos, doenças metabólicas, doenças infiltrativas, hepatite auto-imune, afecções isquêmicas e uma considerável proporção de casos com etiologia não definida. O prognóstico da FHA é bastante reservado, sendo o transplante hepático a única forma efetiva de tratamento no momento. Sendo assim, este trabalho tem como objetivo estudar os componentes celulares que participam do processo de regeneração hepática na FHA. Foram utilizados 19 casos de fígados com FHA, 10 oriundos de autópsias e 9 oriundos de explantes; foram incluídos 10 casos de fígados controle histologicamente normais de autópsias. Foram confeccionados 2 blocos de parafina pela técnica de tissue microarray dos 19 casos de FHA e 10 controles. Esses blocos foram cortados e corados com Hematoxicilina-Eosina, Tricrômico de Masson e Picrossirius red para avaliação semi-quantitativa histológica. Foram imunomarcados com HepPar 1, CK7, CK19, CD34, 1A4, CD68 e Ki67 para avaliação quantitativa das populações celulares presentes na FHA. À avaliação semi-quantitativa das lesões dos casos de FHA observaram-se alterações histológicas similares às relatadas na literatura, mas chamaram a atenção a presença de infiltrado inflamatório mononuclear composto por macrófagos, linfócitos e plasmócitos, além de raros eosinófilos. As colorações pelo tricrômico de Masson e Picrossirius red evidenciaram a presença de fibrose incipiente nas áreas de necrose e de proliferação ductal/ductular. Na avaliação quantitativa todos os marcadores imuno-histoquímicos revelaram diferenças estatisticamente significativas das variáveis estudadas dos casos de FHA em relação aos controles, exceto... / Acute liver failure (ALF) is a syndrome characterised by severe acute hepatitis associated to a rapid development of hepatic encephalopathy. There are many cases with known etiology as viral infections, drugs, chemicals and toxins induced lesions, metabolic diseases, neoplastic involvement, autoimmune hepatitis, ischemic lesions and a large proportion of cases without a known etiology. Prognosis of ALF is very poor and hepatic transplant is the only effective treatment available at present day. Thus, the objective of this project is to study the cellular components associated to hepatic regeneration in ALF. Nineteen livers of ALF (10 cases collected from autopsy and 09 cases of liver explant) and 10 histologicaly normal control cases obtained from autopsy were included. Original paraffin blocs of these 29 cases were submitted to tissue microarray technique and two new blocs were produced. These blocs were seccioned and processed for HE, Masson trichrome and Picrossirius red staining for semiquantitative analysis. HepParl, CK7, CKI9, CD34, lA4, CD68 and Ki67 were used as immunomarker for quantitative analysis of different cell populations present in ALF cases. ResuIts of semiquantitative analysis of histopathologic lesions in cases of ALF were similar to those described in the literature, but attention was attracted to the mononuclear inflammatory reaction with presence of macrophages, lymphocytes and plasmacells besides some eosinophils. Masson trichromeand Picrossirius red staining showed presence of incipient fibrosis within areas of necrosis and ductal/ductular proliferation. All markers submitted to quantitative analysis on tissue marked with immuno histochemicaI techniques showed statistically significant differences when compared to control group, except CD34 and Ki67. Hepatocytes decreased and all the other variables increased. There were dependence relationship between 1A4 and CK7... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-01Bitstream added on 2014-06-13T20:45:02Z : No. of bitstreams: 1 holzhausen_m_dr_arafo.pdf: 559368 bytes, checksum: 51789d0c2dd266f844233dcff205401f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O receptor tipo 2 ativado por protease (PAR2) é responsável pela regulação in vitro de respostas celulares a proteases, como a gingipain, que é produzida pelo periodontopatógeno Porphyromonas gingivalis (Pg). A principal hipótese do presente estudo foi a de que a ativação do PAR2 participa da doença periodontal. Primeiramente, avaliou-se o papel da ativação do PAR2, com o uso de uma agonista seletivo (SLIGRL), sobre a doença periodontal em ratos. Os resultados demonstraram que a aplicação tópica gengival de SLIGRL não apenas causou periodontite, mas também levou à exacerbação de uma periodontite existente, através de um mecanismo envolvendo a participação de cicloxigenases e metaloproteinases da matriz. Depois, avaliou-se a contribuição específica do PAR2 na defesa do hospedeiro durante a infecção por Pg. A injeção de Pg em câmeras subcutâneas em camundongos levou ao aumento da atividade proteolítica, a qual foi responsável pela ativação do PAR2 em células KNRK transfectadas com o receptor. Além disso, a inoculação de Pg induziu uma maior resposta inflamatória em camundongos normais comparada aos deficientes em PAR2 (PAR2-/-). Ainda, a infecção oral com Pg resultou em perda óssea alveolar a qual foi reduzida em animais PAR2-/- aos 42 e 60 dias após infecção. Os resultados do presente estudo demonstraram que o PAR2 desempenha um importante papel na resposta inflamatória associada com a doença periodontal. No futuro, a inibição do PAR2 poderá representar uma nova alternativa terapêutica na modulação da resposta do hospedeiro na periodontite. / Protease-Activated Receptor-2 (PAR2) mediates in vitro cellular responses to proteases, such as gingipain, a protease produced by the periodontal pathogen Porphyromonas gingivalis (Pg). The main hypothesis of the present study was that PAR2 activation may participate to periodontal disease. First, we have investigated the role of PAR2 activation by a selective agonist (SLIGRL) on periodontal disease in rats. The results showed that gingival topical application of SLIGRL not only causes periodontitis but also exacerbates existing periodontitis through a mechanism involving activation of cyclooxigenases and matrix metalloproteinases. Then, we have investigated the specific contribution of PAR2 to host defense during Pg infection. Injection of Pg into subcutaneous chambers in mice resulted in increased proteolytic activity, which was able to activate PAR2 in KNRK cells transfected with the receptor. In addition, Pg inoculation induced a higher inflammatory response in wild-type mice compared to PAR2-deficient (PAR2-/-) mice. Moreover, oral infection with Pg resulted in alveolar bone loss which was significantly reduced in PAR2-/- mice at 42 and 60 days after infection. Taken together, the results from the present study clearly show that PAR2 plays an important role in the inflammatory response associated with periodontal disease. Inhibition of PAR2 may represent in the future, a novel therapeutic approach that modulates the host response in periodontitis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-02Bitstream added on 2014-06-13T21:06:15Z : No. of bitstreams: 1 aquino_sg_dr_arafo.pdf: 759547 bytes, checksum: 4e34b22dfd872d1204fc5fa9fad9442f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embora a etiologia da artrite reumatóide (AR) não seja ainda totalmente elucidada, estudos sugerem a associação entre a AR e a doença periodontal (DP). Entretanto, os mecanismos envolvidos nessa interação ainda não são bem conhecidos. Objetivo: Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a interação da DP induzida por Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) e da artrite induzida por antígeno (AIA) em camundongos e, em seguida, investigar in vitro e in vivo a influência de P. gingivalis e Prevotella nigrescens (P. nigrescens) na severidade da artrite induzida por colágeno (CIA), com foco especial no fenótipo de células T. Métodos:Camundongos C57/Bl6 foram submetidos à AIA e/ou DP induzida por P. gingivalis. Perda óssea alveolar, histopatologia, hipernocicepção e produção de citocinas articular, bem como a porcentagem de células Th17 e T reg foram analisadas. Em seguida, o efeito de P. gingivalis e P. nigrescens na diferenciação de células T e o envolvimento dos receptores tipo Toll (TLRs) foram investigados in vitro. In vivo, camundongos com CIA receberam as inoculações orais de P. gingivalis e P. nigrescens. Histopatologia articular, expressão gênica sinovial, fenótipo de células T e a produção de anticorpos anti peptídeos citrulinados (ACPA) foram analisados. Resultados: AIA não modula a reabsorção óssea alveolar induzida por P. gingivalis enquanto camundongos com AIA expostos à P. gingivalis apresentam maior inflamação articular e perda de proteoglicanos. Além disso, o aumento da hipernocicepção e da produção articular de TNF-α e IL-17, bem como a porcentagem de células Th17 nos linfonodos drenantes articulares foram induzidos por P. gingivalis em camundongos imunizados e desafiados, enquanto o efeito sobre... / Although the etiology of rheumatoid arthritis (RA) remains unknown, several studies have suggested a pathologic link between RA and periodontal disease (PD). However, the mechanisms involved in this interaction are not well known. Objectives: The aim of this study was to evaluate the basis of Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) -induced PD and antigen-induced arthritis (AIA) interaction in mice, and further investigate the influence of P. gingivalis and Prevotella nigrescens (P. nigrescens) on severity of collagen-induced arthritis (CIA), with a special focus on T cell phenotype in vitro and in vivo. Methods: C57/Bl6 mice were subjected to antigen-induced arthritis (AIA) and/or P. gingivalis-induced PD. Alveolar bone loss, joint histopathology, articular hypernociception and cytokine production, as well as the percentage of Th17 and Treg cells from lymph nodes were analyzed. Thus, the effect of P. gingivalis and P. nigrescens on T cell differentiation and the involvement of Toll-like receptors (TLRs) were studied. In vivo, collagen-induced arthritis mice received oral inoculations of P. gingivalis or P. nigrescens. Joint histopathology, synovial gene expression, T cell phenotype, cytokine and anti-citrullinated peptides antibodies (ACPA) production were analyzed. Results: AIA does not modulate the alveolar bone resorption levels induced by P. gingivalis whereas AIA mice exposed to P. gingivalis presented higher articular inflammatory scores and proteoglycan loss, increased hypernociception and articular production of TNF-α and IL-17 as well as higher percentage of Th17 cells in articular draining lymph nodes, while no effect on T reg cells was verified. In vitro, P. gingivalis and P. nigrescens activated dendritic cells to produce T cell affecting proinflammatory cytokines as well as strongly induced Th17 differentiation... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-01Bitstream added on 2014-06-13T20:46:39Z : No. of bitstreams: 1 braganeto_ar_dr_botfm.pdf: 558985 bytes, checksum: 2d6e135d455babda4cdff06b19ed7964 (MD5) / Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP) / Avaliar a influência do índice apoptótico e da imuno-expressão da survivina em tecido molar no prognóstico e tratamento de pacientes com mola hidatiforme completa (MHC). Estudo observacional, retrospectivo, incluindo 78 pacientes com MHC diagnosticadas, tratadas e acompanhadas no Centro de Doenças Trofoblásticas de Botucatu/SP, Brasil, entre 1995 e 2006. Baseado nas curvas de regressão da gonadotrofina coriônica, as pacientes foram divididas em dois grupos: remissão espontânea (MHC-RE - 59 pacientes) e evolução para NTG pós-molar (MHC-NTG - 19 pacientes). Avaliação imunohistoquímica do trofoblasto viloso foi realizada pela técnica da avidina-biotina-peroxidase, usando dois marcadores: anticorpo policlonal anti-caspase-3 (diluição 1:200; Cell Signaling Technology; TX, USA) e anticorpo monoclonal anti-survivina (clone 5E8; diluição 1:100; Neomarkers, TX, USA). O índice apoptótico foi expresso em porcentual (número de células caspase-3 positivas / número de células contadas x 100). A imuno-expressão da survivina foi determinada por um método semi-quantitativo. Foi significativo o efeito do índice apoptótico sobre a evolução de pacientes com MHC, de tal modo que, o aumento de 1 unidade no índice apoptótico reduziu, em média, 61% a chance de desenvolvimento de NTG pósmolar (OR = 0,61, 95% IC: 0,45-0,84). Nenhuma influência significativa da imunoexpressão da survivina foi observada no desenvolvimento de NTG pós-molar (p > 0,01; teste exato de Fisher). Não foi possível estabelecer correlações entre efeito do índice apoptótico e da imuno-expressão da survivina e variáveis do tratamento. Nesse estudo, o índice apoptótico foi bom preditor do desenvolvimento de NTG depois de MHC, com potencial para ser usado como biomarcador prognóstico dessa doença. Ao contrário, a imuno-expressão... / To assess the influence of the apoptotic index and survivin expression of molar tissue on the prognosis and treatment of patients with complete hydatidiform mole (CHM). This retrospective observational study included 78 patients with CHM, who were diagnosed, treated and followed up in the Center of Trophoblastic Diseases, Botucatu/SP, Brazil, between 1995 and 2006. Based on chorionic gonadotrophin regression curves, patients were divided into two groups: spontaneous remission (CHM-RE - 59 patients) and post-molar GTN (CHM-NTG - 19 patients). Immunohistochemical analysis of the villous trophoblast was perfomed by avidin-biotin-peroxidase, using anti-caspase-3 polyclonal antibodies (1:200; Cell Signaling Technology; TX, USA) and anti-survivin monoclonal antibodies (clone 5E8; 1:100; Neomarkers, TX, USA). The apoptotic index was expressed in percent (number of caspase-3-positive cells / number of cells counted x 100). Survivin immuno-expression was determined by a semiquantitative method. The influence of the apoptotic index on the prognosis of patients with CHM was significant. A 1-unit increase in the apoptotic index represented an average 61% reduction in the chance of developing post-molar GTN (OR = 0.61, 95% CI: 0.45-0.84). No significant influence of survivin immuno-expression was observed on the development of post-molar GTN (p > 0.01; Fisher’s exact test). No correlations of treatment variables with apoptotic index or survivin immunoexpression were found. In this study, the apoptotic index was a good predictor of GTN development after CHM and may be a useful prognostic biomarker of this disease. On the other hand, survivin immuno-expression in the villous trophoblast had no influence on the development of post-molar GTN.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-05-09T13:47:20Z No. of bitstreams: 1 2012_PauloMarcioYamaguti.pdf: 2588662 bytes, checksum: fe98add2d59fc855b5ac7354150d230a (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-10T11:42:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_PauloMarcioYamaguti.pdf: 2588662 bytes, checksum: fe98add2d59fc855b5ac7354150d230a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-10T11:42:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_PauloMarcioYamaguti.pdf: 2588662 bytes, checksum: fe98add2d59fc855b5ac7354150d230a (MD5) / O objetivo desse trabalho foi relatar as manifestações bucais de pacientes com doenças renais hereditárias e nefrocalcinose atendidos no serviço de nefrologia de três Hospitais da área metropolitana de Brasília, e realizar análise de mutação abordando genes candidatos em três pacientes que apresentaram fenótipo de amelogênese imperfeita (AI). Um total de seis pacientes com hipomagnesemia e hipercalciúria familiar com nefrocalcinose (FHHNC), um paciente com acidose tubular renal distal (ATRd), dois pacientes com ATRd e surdez, e uma paciente com osteopetrose foram estudados. Todos os pacientes apresentaram defeitos de desenvolvimento do esmalte variando de leves opacidades difusas a hipoplasias severas. Com exceção da paciente com osteopetrose que apresentou maloclusão e alteração da cronologia de erupção dentária com retenção de dentes decíduos e permanentes, não foram observadas outras manifestações bucais nos pacientes. Em dois dos três pacientes com FHHNC e AI que foram submetidos à análise de variação de sequência, foram observadas três substituições em heterozigose composta nos genes CLDN16 e CLDN19. O paciente com fenótipo de AI hipomaturada e hipoplásica apresentou as substituições F85L na CLDN16 e G20D e L90R na CLDN19. O paciente com AI hipoplásica apresentou as substituições F85L na CLDN16 e G20D e R200Q na CLDN19. Aparentemente, a outra paciente apresentou uma deleção no gene CLDN16 que precisa ser confirmada por outros métodos. Os resultados sugerem que pacientes com doenças renais hereditárias e nefrocalcinose podem apresentar defeitos de desenvolvimento do esmalte com fenótipo de AI e que pacientes com AI sem etiologia definida podem ser portadores de doenças renais hereditárias. Outros estudos são necessários para comprovar o efeito funcional da associação das substituições de aminoácido encontrada nos pacientes com AI e FHHNC desse estudo. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to describe the oral manifestations of inherited renal diseases patients with nephrocalcinosis followed by three Nephrology Services from three Hospitals located in the metropolitan area of Brasilia. Besides, three patients who exhibited enamel defects resembling amelogenesis imperfecta (AI) were submitted to sequence analysis using candidate genes approach. A total of six patients with hypomagnesemia and hypercalciuria with nephrocalcinosis (FHHNC), one patient with distal renal tubular acidosis (dRTA), two patients with dRTA and hearing loss, and one patient with osteopetrosis were included in this study. All patients exhibited developmental defects of enamel ranging from slight diffuse opacities to severe hypoplasia. Except for the osteopetrosis patient who also exhibited malloclusion, altered tooth eruption chronology and deciduous and permanent teeth retention, patients did not present any other oral manifestation. Two of the patients with FHHNC and enamel defects resembling AI who were submitted to sequence analysis, presented three compound heterozygous substitutions in the CLDN16 and CLDN19 genes. The patient with hypomature and hypoplasic AI phenotype presented a F85L substitution in the CLDN16 and a G20D and a L90R substitution in the CLDN19. The patient with hypoplasic AI presented a F85L substitution in the CLDN16 and a G20D and a R200Q substitution in the CLDN19. One patient exhibited an apparent deletion in the CLDN16 gene which has to be confirmed using other methods. The results suggest that inherited renal diseases patients with nephrocalcinosis may present developmental defects of enamel resembling AI, and that non-diagnosed AI patients` may present inherited renal disturbances. Other studies are necessary to determine the functional effects of the amino acids substitutions detected in this study in the FHHNC patients with AI.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Psicologia, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-05-17T15:45:27Z No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaSousaSantos.pdf: 1757729 bytes, checksum: b8ca081113e4b602f86eee41185f27f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-23T11:26:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaSousaSantos.pdf: 1757729 bytes, checksum: b8ca081113e4b602f86eee41185f27f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-23T11:26:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaSousaSantos.pdf: 1757729 bytes, checksum: b8ca081113e4b602f86eee41185f27f4 (MD5) / A literatura sobre estresse ocupacional costuma frisar demasiadamente as características da tarefa e/ou do trabalhador, negligenciando a participação de características organizacionais no processo em questão. Diversos pesquisadores apontam a importância de estudos que abarquem estas características enquanto potencialmente estressoras e a generalização de resultados. O presente trabalho objetivou construir e buscar evidências de validação empírica de um instrumento com vistas a mensurar características organizacionais como estressores em potencial, denominado escala de estresse organizacional (EEO). Um conjunto de 60 itens foi inicialmente elaborado e aplicado a uma amostra de 454 profissionais vinculados a instituições públicas, privadas e de economia mista. A análise fatorial resultou num instrumento composto por 32 itens, cuja estrutura indicou a presença de um fator geral de segunda ordem e quatro fatores de primeira ordem, a saber: Decisões organizacionais, Suporte, Incentivo à competição e Entraves ao crescimento profissional. O fator geral é a somatória dos quatro fatores, fornecendo uma medida geral sobre o estresse organizacional. Ao apresentar parâmetros psicométricos satisfatórios, a EEO é a primeira medida brasileira que trata de características organizacionais desenvolvida e validada para a avaliação de estresse organizacional. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Much of the literature on occupational stress emphasizes the characteristics of the task and/or the employee, neglecting the participation of organizational characteristics in this process. Several researchers point to the importance of studies that include these characteristics as potentially stressors and the generalization of the results. This study aimed to develop and seek evidence of empirical validation of an instrument designed to measuring organizational characteristics as potential stressors, termed organizational stress scale (EEO). A set of 60 items was developed and applied to a sample of 454 professionals of different organizations. Factor analysis resulted in an instrument composed of 32 items, whose structure indicated the presence of a general second-order factor (organizational stress general) and four first-order factors, namely “organizational decisions”, support”, “encouragement of competition” and “barriers to professional growth”. The general factor is the sum of these four factors, providing a general measure of organizational stress. In presenting satisfactory psychometric parameters, the EEO is the first Brazilian measure that deals with organizational features developed and validated for the assessment of organizational stress.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-18T13:33:46Z No. of bitstreams: 1 2013_KarolinedosAnjos.pdf: 3589277 bytes, checksum: 7b03dec6adca57f1166616d32f22f689 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-19T18:39:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_KarolinedosAnjos.pdf: 3589277 bytes, checksum: 7b03dec6adca57f1166616d32f22f689 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-19T18:39:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_KarolinedosAnjos.pdf: 3589277 bytes, checksum: 7b03dec6adca57f1166616d32f22f689 (MD5) / A família Caliciviridae é formada por vírus pertencentes a cinco gêneros: Sapovirus, Norovirus, Lagovirus, Vesivirus e Nebovirus. Alguns sapovírus e norovírus são conhecidos como agentes causadores de gastrenterites em humanos, sendo sapovírus o segundo agente viral mais importante depois dos norovírus. O genoma do sapovírus é linear, de senso positivo, ssRNA, com tamanho de cerca de 7,5 kb, poliadenilado na região terminal 3'. Os sapovirus, atualmente, são divididos em sete genogrupos (GI-GVII) que infectam humanos, suínos e visons. Essa classificação é baseada, principalmente na sequência da proteína do capsídeo. Nesse estudo, o genoma completo de um sapovírus isolado (Sapovirus Hu/GI.2/BRDF01/ BRA/2009) em Brasília, Brasil, foi analisado com todas as sequências de sapovírus disponíveis para determinar sua relação filogenética e possíveis eventos de recombinação intra- e inter-genogrupos. Foi determinada uma proximidade filogenética com uma sequência obtida em 2005 em Bangladesh. Uma possível recombinação inter-genogrupo entre GI (humano) e GIII (suíno) assim como recombinações intra-genogrupo foram encontradas nas análises. Outro achado relevante é a região RdRp-CP como sítio de recombinação. Devido à ausência de ferramenta eficaz de diagnóstico imunológico do vírus baseada em procedimento de ELISA, surgiu à demanda de se expressar o capsídeo viral utilizando sistema de expressão de proteína heteróloga para obter anticorpo específico. Dessa forma o segundo objetivo desse trabalho foi produzir VLP de sapovírus utilizando o sistema de baculovírus recombinante. Para a confirmação da montagem dessa particular além de análise em microscopia eletrônica foi produzido um anticorpo policlonal contra a porção variável da proteína do capsídeo (P2). A análise ao microscópio eletrônico de transmissão demonstrou partículas esféricas com tamanhos de 20-40 nm, no entanto a ligação entre o anticorpo anti-P2 e possível VLP expressa não foi demonstrada. Esses resultados indicam que maiores estudos quanto a expressão e purificação de VLP de sapovírus devem ser realizados. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The family Caliciviridae consists of viruses belonging to five genera: Sapovirus, Norovirus, Lagovirus, Vesivirus and Nebovirus. Certain sapovirus and norovirus strains are well-known causative agents of serious human gastroenteritis. Sapovirus is the second most important causative agent of human diseases next to norovirus. The sapovirus genome is linear, positive-sense, single-stranded RNA, of approximately 7,5kb that is polyadenylated at the 3’ terminus. Sapovirus is divided into, at moment, seven genogroups (GI-GVII). This classification is based mainly on capsid protein sequence divergence. In this study, the entire genome of one sapovirus isolated in Brasília, Brazil (Sapovirus Hu/GI.2/BRDF01/ BRA/2009) was evaluated with all available sequences of sapovirus to determine its phylogenetic relationship and possible intra- and inter-genogroups recombination events using RDP3 program. It was determined the identity between the Brazilian sequence and one sequence collected in 2005 in Bangladesh and its possible recombination such as a possibility of an inter-genogroup recombination event between GI (human) and GIII (porcine). Another relevant found is the region of RdRp-CP as a hot spot of recombination. Due to the lack of the efficient diagnostic tools based on ELISA procedure, the preparation of capsid protein of the virus using heterologous protein expression system was requested. Thus the second objective of this work was to produce VLP sapovirus using recombinant baculovirus system. To confirm this particle assembly besides electronic microscopy analysis a polyclonal antibody was produced against the variable region (P2) of the capsid protein. The analysis by transmission electron microscope showed spherical particles with sizes of 20-40 nm, however the response between the anti-P2 and the possible VLP could not be demonstrated. These results indicate that further studies regarding the expression and purification of VLP sapovirus should be performed.