Os resultados permitiram a redação de quatro artigos. Aspectos microbiológicos e clínicos de corinebacterioses em pacientes com câncer observados durante cinco anos foram descritos no Artigo 1. No Artigo 2 foram apresentados casos de bacteremia causados por corinebactérias invasivas não toxigênicas em dois períodos com intervalo de sete anos. As infecções em pacientes com câncer por C. diphtheriae, causando casos clínicos atípicos foram descritas no Artigo 3, além do estudo dos principais fatores de virulência de uma cepa de C. diphtheriae isolada de infecção associada ao cateter de nefrostomia foi descrita no Artigo 4. Resumidamente no Artigo 1, além dos aspectos clínico-epidemiológicos foram avaliados os perfis de resistência aos antimicrobianos e o potencial de virulência dos micro-organismos. Em cinco anos, 932 amostras de corinebactérias, com perfis de resistência aos antimicrobianos testados, foram isoladas de pacientes com câncer. As espécies predominantes foram Corynebacterium amycolatum (44,7%), Corynebacterium minutissimum (18,3%) e Corynebacterium pseudodiphtheriticum (8,5%). O uso de catéteres de longa permanência e a neutropenia, foram às condições importantes para infecção por corinebactérias. As doenças de base mais comuns foram os tumores sólidos. Pacientes hospitalizados apresentaram risco seis vezes maior de morrer, quando relacionadas às taxas de mortalidade com 30 dias (RC= 5,5; IC 95%= 1,15-26,30; p= 0,033). As bacteremias (Artigo 2) causadas por corinebactérias foram observadas em dois períodos: 2003-2004 (n=38) e de 2012-2013 (n=24). As espécies multirresistentes C. amycolatum e Corynebacterium jeikeium foram os principais responsáveis pelos quadros de bacteremia. Havia 34 pacientes com tumores sólidos e 28 pacientes com doenças linfoproliferativas, sendo que 21 deles apresentavam neutropenia e 54 utilizavam cateter venoso central. Em 41 pacientes havia infecção relacionada ou associada aos dispositivos intravasculares. Os pacientes com bacteremia responderam ao tratamento com vancomicina após a remoção do cateter. O comportamento agressivo da neoplasia, o tempo de internação hospitalar e o uso de CVC aumentaram o risco de bacteremias por Corynebacterium spp. No Artigo 3, 17 casos de infecções atípicas causadas por Corynebacterium diphtheriae foram diagnosticadas de 1996 a 2013. A incidência de C. diphtheriae correspondeu a 15,8 casos/100.000 admissões, 465 vezes maior que a incidência de difteria na população brasileira. Sintomas toxêmicos foram observados em nove pacientes, embora quadros de difteria clássica e endocardite não fossem observados. O perfil eletroforético em campo pulsado (PFGE) demonstrou um perfil de distribuição endêmica, apesar de haver dois casos de pacientes com o mesmo perfil eletroforético sugerindo transmissão relacionada aos cuidados à saúde. A adesão em superfícies bióticas e abióticas e produção de biofilme em cateter de poliuretano (Artigo 4) foi demonstrada em C. diphtheriae não toxigênico no sítio de inserção do cateter de nefrostomia. Os dados desses artigos permitiram concluir que (i) diferentes espécies de corinebactérias multirresistentes foram capazes de causar infecções em pacientes com câncer, incluindo bacteremias; (ii) C. diphtheriae foi capaz de causar infecções graves em indivíduos imunocomprometidos, incluindo infecções relacionadas ao uso de dispositivos invasivos em populações de risco, tais como pacientes com câncer. / A retrospective study at the InstitutoNacional doCâncer-INCA (National Cancer Institute) in Rio de Janeiro, Brazil examined infections of Corynebacterium sp. in cancer patients. The results were presented in four papers. Article 1 describes microbiological and clinical aspects of corynebacteriosis in cancer patients observed over five years. Article 2 presents cases of bacteremia caused by invasive non-toxigenic corynebacteria observed in 2003-2004 and seven years later in 2012-2013. Article 3 presents atypical clinical cases of cancer patients infected by Corynebacterium diphtheriae, while Article 4 is a study of the major bacterial virulence factors of an isolated strain of C. diphtheriae in infections associated with nephrostomy catheters.In addition to clinical and epidemiological aspects, Article 1 evaluates the antimicrobial resistance profiles and potential virulence factor of microorganisms. Over a period of five years, 932 samples of corynebacteria with antimicrobial resistance profiles were isolated from patients with cancer. The predominant species were Corynebacterium amycolatum (44.7%), Corynebacterium minutissimum (18.3%) and Corynebacterium pseudodiphtheriticum (8.5%).Long-term catheter use and neutropenia were the major conditions for infection by corynebacteria. Solid tumors were the most common underlying illness. The 30-day mortality rate for patients with corynebacteria infections was six times greater in hospitalized patients than for non-hospitalized patients (OR = 5.5, 95% CI = 1.15 to 26.30, p = 0.033).In Article 2, bacteremia caused by corynebacteria were observed in two time frames: 2003 to 2004 (n=38) and 2012 to 2103 (n=24). The multidrug-resistant species C. amycolatum and Corynebacterium jeikeium were responsible for invasive diseases.There were 34 patients with solid tumors and 28 patients with lymphoproliferative diseases, of which 21 had neutropenia and 54 used central venous catheter. Forty-one patients experienced infection related to or associated with intravascular device. Patients with bacteremia responded to treatment with vancomycin after removal of the catheter. The aggressive behavior of the neoplasia, the hospital stay and the use of central venous catheter increased risk of bacteremias by Corynebacterium sp. In Article 3, 17 cases of atypical infections caused by Corynebacterium diphtheriae were diagnosed from 1996 to 2013. The incidence of C. diphtheriae corresponded to 15.8 cases per 100,000 admissions which is 465 times greater than the incidence of diphtheria in the Brazilian population. Toxemic symptoms were observed in nine patients, although clinical signs of classical diphtheria and endocarditis were not observed.The Pulsed-field gel electrophoretic (PFGE) demonstrated a profile of endemic distribution, although there were two cases with identical profiles suggesting health care-related infections.Article 4demonstrates that non-toxigenic C. diphtheriae attaches to biotic and abiotic surfaces with the production of biofilm in polyurethane catheters at the nephrostomy insertion site. The data presented in these papers permit a conclusion the (i) different species of multidrug-resistant corynebacteria are capable of causing infections in cancer patients, including bacteremias; (ii) C. diphtheriae is capable of causing serious infections in immunocompromised individuals, including infections related to the use of disposable devices among at-risk populations such as those with cancer.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na década de 80 dramáticas ocorrências atingiram o país e o mundo na área da saúde com a descoberta da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (Aids) síndrome, causada pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). O objetivo deste estudo foi descrever as representações sociais do HIV/Aids e as memórias sociais do cuidado de enfermagem construídas na década de 80 pela equipe de enfermagem. Optou-se por uma abordagem qualitativa, embasada na teoria de representações sociais e nos conceitos do campo da memória social. Os sujeitos do estudo foram 20 profissionais de enfermagem de serviços ambulatoriais e/ou da atenção básica, atuantes em 11 instituições públicas de saúde da cidade do Rio de Janeiro que possuem o Programa Nacional de DST/Aids. A coleta de dados foi realizada através de entrevista semiestruturada e questionário de caracterização sócio profissional. A análise dos dados deu-se em duas etapas, a primeira atraves da técnica de análise de conteúdo temática destinada a identificar nos depoimentos dos entrevistados os conteúdos discursivos relativos a década de 80. Posteriormente os trechos selecionados foram submetidos à análise lexical pelo software Alceste 4.10. Obteve-se três classes temáticas que abordaram: As percepções e as ações do cuidado de enfermagem na década de 80; Os primeiros contatos profissionais e pessoais com HIV/Aids e A mídia e a construção das representações sociais do HIV/Aids. Na primeira classe os profissionais de enfermagem relatam as memórias referentes aos cuidados prestados na década de 80, descrevendo como esse cuidado era prestado, o medo da contaminação e os profissionais que atuavam na prestação de serviços. Na classe 2 os sujeitos resgatam as primeiras vivências com as pessoas com HIV/Aids e os sentimentos experimentados neste primeiro contato. As características físicas, os aspectos emocionais, a introdução do AZT e o abandono familiar são elementos destacados. Na classe 3 são relatas as memórias referentes ao início da epidemia de HIV/Aids, com destaque para as ancoragens representacionais do surgimento do vírus, tendo especialmente o macaco como hospedeiro. Os meios de comunicação surgiram como formadores das memórias do início da epidemia, veiculando imagens, como a do cantor Cazuza, fortemente citado pelos sujeitos. Conclui-se que este estudo permitiu compreender, através das memórias e das representações, como se constituiu a atuação dos profissionais no início da epidemia, assim como a permanência de elementos simbólicos até hoje nas representações sociais do HIV/Aids. / In the 80s dramatic events reached Brazil and the whole world in health area with the discovery of the Acquired Immune Deficiency Syndrome (Aids), caused by Human Immunodeficiency Virus (HIV). The aim of this study is to describe social representations of HIV/Aids and the social memories of nursing care constructed in the 80s by nursing staff. A qualitative approach was chosen based on theory of social representations and the concepts in the field of Social Memory. The subjects of this study were 20 nursing professionals of outpatient clinic and/or of basic attention, who acted in 11 public health institutions at Rio de Janeiro where the National Program of STD/Aids exists. The data collection was achieved by an interview structured in questions about social and professional profile. The data analysiswas performed in two stages first, by an analysis of contents to identify, at the speeches of the professionals asked, the discursive contents in the 80s; after, the pages selected were submitted to an analysis by the software Alceste 4.10. Were acquired three thematic classes which approached: the perceptions and actions of nursing care in the 80s; the first professional and personal contacts with HIV/Aids; the media and the construction of social representations of HIV/Aids. In the first class, the nursing professionals relate memories which refer to the care developed in the 80s, describing how this care were rendered, the fear of contamination and the professionals who acted rendering the tasks. In the second class, the subjects rescue first experiences with the people who have the HIV/Aids and the feelings experienced at this first contact. The material characteristics, emotional aspects, the introduction of AZT and the abandon by family are contrasted elements. In the third class, the memories are related in the beginning of HIV/Aids epidemic and detach representational anchorages by appearance of the virus having, specially, the monkey as a harbored. The Medias appeared as creator of memories in the beginning of epidemic conveying pictures, as some of the singer Cazuza, strongly referred by the subjects. Concluding that this study enables to comprehend, by the memories, how were constituted the acting of professionals at the beginning of epidemic, so as how the permanence of symbolic elements since then until today in social representations of Aids.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Ciência da Computação. / Made available in DSpace on 2012-10-20T00:00:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T01:02:10Z : No. of bitstreams: 1 195461.pdf: 9490329 bytes, checksum: 00f10c86414b1996c6324e750d6bebe4 (MD5) / Este trabalho mostra a utilização de uma arquitetura de Rede Neural, conhecida como Redes Auto-organizáveis de Kohonen, no auxílio ao diagnóstico médico usando-se uma abordagem conexionista. Esta topologia de rede possui grande plausibilidade biológica que se auto-organiza através de mecanismos de competição permitindo detectar similaridades entre vários sinais, grupando-os em classes. A hipótese deste trabalho é verificar se esta topologia é plausível para o problema do diagnóstico médico de maneira geral, e comparar os resultados obtidos através da topologia de rede direta. Diversos modelos foram implementados, através de uma série de experiências com uma base de 50 casos de três doenças reumatológicas quais sejam: Espondilite Anquilosante, Artrite Gotosa e Artrite Reumatóide. Na parte 1 usou-se a base amostral como conjunto de treinamento bem como para os testes, foram realizadas três experiências. Na parte 2 dividiu-se a base amostral em duas, a primeira contendo 32 casos e utilizada para treinamento e a segunda com 18 casos e utilizada para teste e validação dos resultados, foram realizadas duas experiências: na experiência 4 treinou-se a rede com 32 casos e testou-se com os 18, ignoraram-se os parâmetros sexo e idade. Na experiência 5 tomou-se primeiramente os 8 primeiros casos dos 32 para treinamento, aumentou-se para 10, depois 12, 14, 16, 18, 20, 26 e por fim 32 casos, para a base de teste utilizaram-se os 18 casos da experiência 1. Consideraram-se todos os parâmetros. Foi possível analisar o aprendizado da rede para padrões que não haviam sido apresentados à priori, bem como a capacidade de generalização para poucos exemplos de treinamento. Ao final foram comparados os resultados com os obtidos através de Rede Neural Direta, sendo observado um bom desempenho das redes de Kohonen quando comparadas com aquela. A Rede de Kohonen conforme a topologia e modelos propostos nesta dissertação mostrou-se capaz de clusterizar os padrões de entrada em classes distintas permitindo ser possível distinguir com clareza os três diagnósticos

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos dos consumos agudo e crônico de etanol, da sua cessação e do co-tratamento com vitamina E em parâmetros de estresse oxidativo na mucosa e na atividade proliferativa no epitélio lingual de ratos. Após realizar-se uma revisão de literatura, observou-se que o acúmulo de acetaldeído (um metabólito do etanol), o polimorfismo das enzimas que metabolizam o álcool e o estresse oxidativo poderiam ser mecanismos envolvidos na patogênese do dano pelo álcool na mucosa bucal, sendo o estresse oxidativo escolhido como tema do estudo. Uma amostra de 48 ratos Wistar, fêmeas, com 3 meses, foram divididos em 6 grupos (álcool, álcool cessação, álcool vitamina E, controle, tween e vitamina E). O grupo tween recebeu solução de 5% de Tween 80 (veículo da vitamina E) por meio de gavagem enquanto os outros animais receberam solução salina. Após 14 dias os animais foram anestesiados e uma biópsia foi realizada no centro do dorso da língua. Esse material foi utilizado para análise do efeito do consumo agudo de etanol e do co-tratamento com vitamina E em parâmetros de estresse oxidativo (TBARS, grupos carbonil, atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase-SOD e catalase-CAT e relação SOD/CAT). Após 60 dias de experimento, os animais do grupo álcool cessação tiveram o álcool substituído por água. Após 120 dias, os animais foram mortos e as línguas foram removidas. Esse material foi utilizado para a avaliação de parâmetros de estresse oxidativo (TBARS, grupos carbonil, SOD, CAT e relação SOD/CAT, imunoconteúdos da CAT e do Nrf2), da atividade proliferativa (AgNORS) e da possível relação entre ambos. Os animais submetidos ao tratamento agudo com álcool mostraram redução dos níveis de TBARS. A atividade da CAT foi mais alta no grupo álcool vitamina E após o tratamento agudo. O consumo crônico de etanol induziu aumento da atividade proliferativa no epitélio do ventre da língua quando comparado ao grupo controle. Esse efeito foi atenuando pela cessação do consumo. Além disso, houve aumento da atividade da CAT e diminuição dos níveis de TBARS nesse grupo. O grupo álcool vitamina E mostrou maior atividade proliferativa em relação ao grupo vitamina E e maior atividade da SOD, indicando que o co-tratamento com vitamina E não teve efeito protetor nos tecidos linguais. Conclui-se que o aumento da proliferação relacionado ao álcool no epitélio lingual não está associado ao estresse oxidativo. Uma vez que o dano provocado pelo álcool foi revertido, é possível sugerir que o álcool atua como um promotor de câncer bucal. / The aim of the present study was to evaluate the effects of acute and chronic alcohol consumption, alcohol consumption cessation and vitamin E cotreatment on rats tongue mucosa oxidative stress parameters and on tongue epithelium proliferative activity. After to conduce a literature review it was observed that acetaldehyde accumulation (an alcohol metabolite), the polimorphism of alcohol metabolization enzymes and oxidative stress could be mechanisms related to pathogenesis of alcohol damage in oral mucosa, and the former was choosen for the study. Forty-eight Wistar rats, female, 3 months-old were separated into 6 groups (alcohol, alcohol cessation, alcohol vitamin E, control, vitamin E, tween, vitamin E). The tween group received 5% tween 80 (vitamin E vehicle) by gavage, and the other animals received saline. At day 14, the animals were anesthetized and a biopsy was performed on tongue dorsum. In this sample, it was evaluated the acute alcohol consumption and vitamin cotreatment effects on oxidative stress parameters (thiobarbituric acid reactive substances-TBARS, carbonyl groups, superoxide dismutase activity-SOD and catalase activity-CAT and SOD/CAT ratio). After 60 days, 40% (v/v) ethyl alcohol was replaced with water in the alcohol cessation group. Vitamin E was given by gavage to animals in the alcohol/vitamin E and vitamin E groups. After 4 months, the animals were killed and the tongue was removed. Cell proliferation rate was evaluated using AgNOR quantification in histological sections. Oxidative stress parameters (TBARS, carbonyl groups, SOD and CAT, CAT and Nrf2 immunocontent) were quantified in tongue homogenates as well as the association between oxidative parameters and cell proliferation. The animals subjected to acute alcohol treatment showed TBARS decrease. SOD activity was lower and CAT activity was higher in alcohol and vitamin E group after acute treatment. Chronic alcohol consumption induced increase in cell proliferation rates of ventral tongue epithelium when compared to the Control group. This effect was attenuated after alcohol cessation. In addition, an imbalance of superoxide dismutase and catalase activities and decrase in TBARS were found in this group. The alcohol/vitamin E group showed higher proliferation rate than the Vitamin E group, suggesting that vitamin E cotreatment had no protective effects on the tongue tissues. It was concluded that the alcohol-related cell proliferation increase in tongue epithelium is not associated to oxidative stress parameters. Since the alcohol damage was reversible, it is possible to suggest that alcohol acts as an oral cancer promoter.

O objetivo do presente trabalho é analisar os componentes celulares e de fibras do tecido conjuntivo nas hiperplasias inflamatórias (HI), nos fibromas (F) e na fibromatose gengival hereditária (FGH), além de investigar a imunocompetência e efetuar análises moleculares de pacientes com FGH. Para atingir os objetivos foram desenvolvidos 4 artigos, com diferentes metodologias e universos amostrais. No 1º artigo, pretendeu-se estabelecer critérios microscópicos válidos para diferenciar F e HI. Foram avaliadas em microscópio óptico 136 lesões coradas pela Hematoxilina-eosina (HE) e pelo Tricrômico de Masson quanto às características microscópicas. Os resultados mostraram que uma área central de fibras colágenas dispostas de forma enovelada e mais densa, circundada por uma camada de fibras dispostas de forma paralela são características dos F, enquanto a presença de hiperplasia epitelial, infiltrado inflamatório e fibras colágenas organizadas de forma paralela são características das HI. Tais resultados motivaram o 2º artigo, no qual estudamos 18 lesões de F e 13 de HI, que foram preparadas histologicamente e coradas pelo picrosírius red e pelo direct blue para avaliação quantitativa das fibras colágenas e de fibras do sistema elástico, respectivamente, em microscopia a laser confocal. Os resultados confirmaram a disposição estrutural das fibras colágenas observada no 1º artigo, além de apontarem diferenças nas áreas ocupadas pelas fibras colágenas em todas as regiões estudadas. A fim de proceder a uma avaliação dos componentes fibroso e celular das 3 lesões fibrosas, foi desenvolvido o 3º artigo. Espécimes das 3 lesões foram estudados em microscopia ótica, a fim de avaliar suas populações de fibroblastos e de células inflamatórias e os seguintes componentes fibrosos do tecido conjuntivo: fibras colágenas, sistema de fibras elásticas, fibras reticulares e fibras oxitalânicas. Os resultados mostraram disposição e concentração diferente das fibras colágenas nas 3 lesões e uma maior concentração de fibras reticulares na FGH. A análise dos componentes celulares mostrou um maior número de fibroblastos no F e uma maior contagem de células inflamatórias na HI. A partir do encaminhamento de uma família com FGH, optouse por inclui-la no estudo, tendo em vista serem lesões do mesmo grupo. Com isso, foi desenvolvido um 4º estudo, que utilizou uma avaliação morfológica semelhante à dos 2 artigos anteriormente descritos. Dos pacientes com FGH foi obtido sangue periférico para avaliação da proliferação celular de linfócitos através do teste do MTT e para o sequenciamento do gene SOS-1. Os resultados mostraram hiperplasia epitelial na porção externa da gengiva dos pacientes com FGH, maior concentração de fibras colágenas e poucas células inflamatórias. Os 3 pacientes com FGH não mostraram diferenças no seu índice de proliferação de linfócitos em relação aos controles e não apresentaram a mutação descrita no gene SOS-1 de outras famílias com FGH. Pode se concluir que as 3 lesões apresentam estrutura conjuntiva diferente tanto no aspecto quantitativo quanto na disposição estrutural de seus componentes. / The objective of this study was to analyze the cellular and fibrous components of connective tissue in inflammatory hyperplasia (IH), oral fibroma (OF) and hereditary gingival fibromatosis (HGF), and to investigate the immunocompetence and to perform molecular analysis in HGF patients. To achieve the goals were developed 4 articles, with different methodologies and sample universes. In the 1st article, we intended to establish microscopic criteria to differentiate F and IH. The microscopic characteristics of the lesions (n=136) stained by hematoxylin-eosin (HE) and Masson trichrome were evaluated in an optical microscope. The results showed that a central area of wound collagen fibers and arranged in a higher density, surrounded by a layer of parallel fibers are characteristic of F, while the presence of epithelial hyperplasia, inflammatory infiltrate and parallel collagen fibers are characteristics of HI. These results led the 2nd article, which studied 18 F and 13 and IH, histologically prepared and stained by picrosírius red and direct blue for the direct quantitative assessment of collagen fibers and elastic fibers of the system, respectively, in the confocal laser microscope. The results confirmed the structural arrangement of collagen fibers found in Article 1, and indicate differences in the areas of collagen fibers in all regions studied. In order to evaluate the cellular and fibrous components of the 3 fibrous lesions, was developed the 3rd article. Specimens of the 3 lesions were studied in optical microscopy, to assess their populations of fibroblasts and inflammatory cells and the following components of fibrous connective tissue: collagen fibers, elastic fiber system, reticular fibers and oxytalan fibers. The results showed different arrangement and concentration of collagen fibers in the 3 lesions and a higher concentration of reticular fibers in HGF. The analysis of cellular components showed a greater number of fibroblasts in F and a higher count of inflammatory cells in IH. With the identification of a family with HGF, we chose to include it in the study because the lesions belong to the group of benign fibrous lesions. With that, it developed a 4th study, which used a similar morphologic evaluation of the 2 articles described above. Periferic blood was extracted from the HGF patients in order to determine the proliferative capacity of the peripheral lymphocytes, by the MTT test, and in order to sequence the SOS1 gene. The 3 HGF affected patients did not present the described mutation for the SOS1 gene, and the lymphocyte proliferative capacity in HGF patients was similar to those on controls. The results showed epithelial hyperplasia in the outer portion of the gingiva of patients with HGF, greater concentration of collagen fibers and few inflammatory cells. We can conclude that the 3 lesions present a different connective structure, considering both the quantitative aspect and the architectural disposition of their components.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989226 bytes, checksum: 4444a05127595802e408a02323a024a6 (MD5) Previous issue date: 2008-12-12 / Escherichia coli is a potential causative agent of bovine mastitis, which can present different virulence factors and, thus, be grouped in different pathotypes. The present study aims at investigating the presence of these factors in isolates of E. coli from clinical mastitis cases, interrelating them and establishing a probable connection with the clinical infection. Twenty-seven clinical bovine mastitis E. coli cultures were characterized due to the different virulence factors of phenotypical and genotypical analysis. All the isolates presented biofilms production in different levels, 96,2% presented resistance to the serum , 33,3% resistance to the antimicrobials, and 7,4% verotoxins production. None of the isolates was positive to haemolysins and capsular antigen K1. The PCR was used to detect the presence of genetic markers of virulence. It was possible to verify presence of type1 Fimbria in 100% of the isolates and Cs31A in 29,3%. Concerning the toxins, it was verified the presence of gens to termostable enterotoxin in 55,6%, EAST-1 enterotoxin in 11,1%, and verotoxin 2 in 7,4%. Yet, fimbrial markers to Pap were detected in 7,4%, aer in 3,7% and kps in 3,7%. The isolates that presented gen to verotoxin 2 also presented positivity in the phenotypical evaluation. The phylogenetic analysis demonstrated that the isolates belong to groups A (85%) and B1 (15%), related to comensal strains, revealing the necessity of studies that can clarify the adaptability of these isolates to the mammary glands. These results suggest that the E. coli isolates characterized in this study are opportunist pathogens presenting different virulence factors, without correlation evidence among them. / Escherichia coli é um microrganismo Gram-negativo pertencente ao grupo dos coliformes, e potencial agente causador de mastites em bovinos. A bactéria pode possuir diferentes fatores de virulência e esses são definidos como estruturas, produtos ou estratégias que contribuem para a bactéria aumentar sua capacidade em causar infecção. O presente estudo tem como objetivo investigar a presença destes fatores em isolados de E. coli obtidos de casos de mastite clínica, interrelacioná-los e estabelecer provável ligação com a infecção clínica. Vinte e sete culturas de E. coli isoladas de mastites bovinas clínicas foram caracterizadas quanto a diferentes fatores de virulência por análises fenotípicas e genotípicas. Todos os isolados apresentaram produção de biofilmes em diferentes níveis, além de 96,2% apresentarem resistência ao soro, 33,3% resistência aos antimicrobianos e 7,4% produção de verotoxinas. Nenhum dos isolados apresentou positividade para expressão de hemolisinas e antígeno capsular K1. A técnica de Reação em Cadeia de Polimerase PCR foi usada para detectar a presença de marcadores genéticos de virulência. Verificou-se presença de fatores de colonização do tipo 1 em 100% dos isolados e Cs31A em 29,6%. Quanto às toxinas, verificou-se a presença de genes para enterotoxina termo-estável em 55,6%, enterotoxina EAST-1 em 11,1% e verotoxina 2 em 7,4%. Ainda, foram detectados marcadores fimbriais para Pap em 7,4%, aer em 3,7% e kps em 3,7%. Todos os isolados que apresentaram gene para verotoxina 2 também apresentaram positividade na avaliação fenotípica. A análise filogenética demonstrou que os isolados pertencem aos grupos A (85%) e B1 (15%), tipicamente relacionados a cepas comensais, naturalmente presentes no meio ambiente. Esses resultados sugerem que os isolados de E. coli caracterizados nesse estudo são patógenos oportunistas, apresentando diferentes fatores de virulência, sem evidências de correlação entre eles.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1143577 bytes, checksum: 11dd7b0d8acf42b358fe44ee8ed9ea61 (MD5) Previous issue date: 2012-04-20 / Mastitis is one of the most important diseases of the dairy herd, which has has great economic impact on the milk production chain. The bacterial etiology of this disease had moved from contagious pathogens for environmental ones in which Escherichia coli, is one of the main etiologic agents. Among other things, crashes in therapy could be attributed to the multidrug efflux systems present in bacteria. These systems have the ability to drive virtually all antimicrobial classes, thus contributing to its resistance. Were studied 27 strains of Escherichia coli from cattle with clinical mastitis, which were subjected to sensitivity tests, to the main antimicrobials used in the treatment of this disease in the region. The technique of polymerase chain reaction, was used to identify the presence of genes encoding three multidrug efflux systems, AcrAB, AcrEF and EmrAB. We also evaluated in vitro effectiveness of two inhibitors of these systems, the Phe-Arg-ß-naphthylamide (PAßN) and 1 -(1-naphthylmethyl)-piperazine (NMP), using the minimum inhibitory concentration (MIC) as a reference. In the resistant strains was quantified the relative expression of genes related aspect of these systems in relation to the seven treatments performed by the technique of Quantitative Real Time PCR (qRT-PCR). The results showed that only four strains of E. coli (14.8%) were resistant to ampicillin and trimethoprim/sulfamethoxazole, simultaneously. However, all 27 strains were sensitive to ceftiofur, gentamicin, enrofloxacin and cephalexin. The isolates showed at least a multidrug efflux system. In MIC were observed for values ranging from 6 mg ampicillin / mL to 250 mg / mL, and trimethoprim / sulfamethoxazole 12 mg / mL to 1500 mg / mL and was found to reduce the MIC of ampicillin and trimethoprim/ sulfamethoxazole in all isolates in the presence of two inhibitors, except for trimethoprim / sulfamethoxazole in the presence of NMP. The genes analyzed showed different relative expression levels, relative to the seven treatments done, although literature reporting the AcrAB-efflux system is the main Tolc E. coli, the genes that constitute this system were the least expressed themselves, but the genes Emra and emrB had the highest relative expressions. It has been found that inhibitors contributed to the measured decrease in the relative expression of the gene acrF, treatment with ampicillin. / A mastite é uma das doenças mais relevantes do rebanho leiteiro, a qual tem um grande impacto econômico na cadeia produtiva do leite. A etiologia bacteriana desta enfermidade tem mudado de patógenos contagiosos para ambientais onde Escherichia coli, é um dos principais agentes etiológicos. Entre outros fatores, falhas na terapia poderiam ser atribuídas aos sistemas de efluxo multidrogas presentes em bactérias. Estes sistemas têm a capacidade de expulsar antimicrobianos praticamente de todas as classes, contribuindo na sua resistência. Estudaram-se 27 isolados de Escherichia coli provenientes de leite de bovinos com mastite, os quais foram submetidos a testes de sensibilidade aos principais antimicrobianos usados no tratamento desta doença na região. A técnica de reação em cadeia da polimerase, foi utilizada para identificar a presença de genes que codificam três sistemas de efluxo multidrogas, AcrAB, AcrEF e EmrAB. Avaliou-se também a efetividade in vitro de dois inibidores desses sistemas, o Phe-Arg-ß-naphthylamide e 1-(1-naphthylmethyl)-piperazine, utilizando a Concentração Inibitória Mínima (CIM) como referência. Nos isolados resistentes, quantificou-se a expressão relativa dos genes relacionados a esses sistemas, em relação aos sete tratamentos realizados, pela técnica de PCR em Tempo Real. Os resultados revelaram que apenas quatro isolados de E. coli (14,8%), apresentaram resistência a ampicilina e a sulfametoxazol∕trimetoprim, simultaneamente. Enquanto todos os 27 foram sensíveis a ceftiofur, gentamicina, enrofloxacina e cefalexina. Os isolados apresentaram pelo menos um sistema de efluxo multidrogas. Na CIM, observaram-se valores para ampicilina variando de 6 μg/mL a 250 μg/mL e para sulfametoxazol∕trimetoprim de 12 μg/mL a 1500 μg/mL e verificou-se redução das CIM de ampicilina e sulfametoxazol∕trimetoprim em todos os isolados na presença dos dois inibidores, exceto para sulfametoxazol∕trimetoprim na presença do NMP. Os genes analisados apresentaram diferentes níveis de expressão relativa em relação aos sete tratamentos realizados, embora a literatura reporte que o sistema de efluxo AcrAB-TolC é o principal em E. coli, os genes que constituem esse sistema foram os que menos se expressaram, porem os genes emrA e emrB tiveram as maiores expresoes relativas. Verificou-se que os inibidores avaliados contribuíram na diminuição da expressão relativa do gene acrF, no tratamento com ampicilina.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1625922 bytes, checksum: 8e4e59f3e5a2481a04957bd2da9aa918 (MD5) Previous issue date: 2012-09-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) is the etiological agent of paratuberculosis, a disease which causes chronic granulomatous enteritis preferably in domestic and wild ruminants. It is considered a disease of economic and social impact, because of losses in livestock and importance in human health, since there is evidence of possible correlation of MAP with Crohn's disease. However, much is still unknown about the developing the pathophysiology and immunopathogenesis this disease, in the sites of infection. Thus, this study has proposed verify the response of cytokines proinflammatory and anti-inflammatory by quantitative PCR and associate the expression of these cytokines with the lesions and the presence of the agent in organs of C57BL/6 mice infected intraperitoneal with strain MAP66115-98. It was applied 250μl of inoculum at 3 x 108 UFC/ml in 20 mice, and it was applied saline phosphate buffers (PBS) in eight control species. The animals were sacrificed at 30, 60, 90 and 120 days post-inoculation. In each period were collected spleen, liver, intestine (ileum and colon) and Peyer's patches of five challenged mice and two controls. It was found in the majority an upregulation in the expression profiles of proinflammatory cytokines IL-2, IFN-, and TNF-α ү, and anti-inflammatory IL-4 and IL-10 analyzed in the organs compared to controls during period of the experiment. It was observed also negative regulations in the fourth week in spleen and colon, twelfth in the spleen, ileum and Peyer's patch and the sixteenth week in the liver, colon and ileum. Statistical differences were only observed at the eighth week after the challenge for IFN-ү in liver, in spleen for expression of IL-2 and IFN-ү and in the ileum for IL-4 and TNF-α. In the fourth week, it was possible to identify increased levels of mRNA transcripts of the cytokines studied. In the liver, ileum and colon IFN-ү showed the highest level of mRNA transcripts compared to the negative control, however at higher levels spleen were observed for IL- 10. Only eight weeks it was possible to observe a statistically significant difference for the cytokine IFN-ү in the liver and spleen samples for TNF-α and IL-4 in the ileum and IL-2 in spleen. The highest levels of mRNA transcript were observed in the liver for IFN- ү, spleen for IL-2, and in the ileum Peyer's patch for IL-4 and colon for IL-10. In the twelfth week, the major mRNA transcript levels were observed in liver for IL-10 in spleen and ileum for IL-2 in colon for TNF-α and Peyer's patch for IL-4. In the sixteenth week, the major mRNA transcript levels were observed in liver and colon for IL-10 in spleen and ileum for IFN-ү and Peyer's patch for TNF-α. The animals showed increased expression of mRNA transcripts of cytokines studied organs after challenge with MAP, although not verified gross and microscopic changes (hematoxylin and eosin staining). However it was possible to observe the presence of alcohol-acid resistant rods in two samples of Peyer's patches (Ziehl-Neelsen) and nested-PCR technique was possible to observe the presence of MAP in every organ analyzed. Thus, these results contribute to a better understanding of the expression of proinflammatory and anti-inflammatory in local infection at different post-inoculation in both organs taken as site specific as MAP intestine (colon and ileum) and Peyer's patch and organs extraintestinal, and thus find a better understanding of the immunopathogenesis of infection in the local. / Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis (MAP) é o agente etiológico da paratuberculose, uma enfermidade que causa enterite granulomatosa crônica preferencialmente em ruminantes domésticos e silvestres. É considerada uma doença de impacto econômico e social, devido às perdas no rebanho e na saúde humana, uma vez que se têm indícios da possível relação de MAP com a doença de Crohn. Contudo, muito ainda se desconhece sobre o desenvolvimento da patofisiologia e imunopatogênese desta doença, nos locais da infecção. Desse modo, este estudo propôs verificar a resposta de citocinas pró e anti-inflamatórias por meio da técnica de PCR quantitativo e associar a expressão destas citocinas com as lesões e a presença do agente em órgãos de camundongos C57BL/6 infectados por via intraperitoneal com a cepa MAP66115-98. Em 20 camundongos foram aplicados 250μl de inóculo a 3 x 10 8 UFC/ml e, em oito controles foram aplicados PBS. Os animais foram sacrificados aos 30, 60, 90 e 120 dias pós-inoculação. Em cada período, foram coletado baço, fígado, intestino (cólon e íleo) e placas de Peyer de cinco camundongos desafiados e de dois controles. Verificou-se na maioria, uma regulação positiva nos perfis de expressões das citocinas pró-inflamatórias IL-2, IFN-ү e TNF-α, e anti-inflamatórias IL-4 e IL-10 nos órgãos analisados em relação aos controles durante o período do experimento. Observaram-se também regulações negativas na quarta semana no baço e colón, na décima segunda no baço, íleo e placa de Peyer e na décima sexta semana no fígado, colón e íleo. Diferenças estatísticas foram observadas somente na oitava semana após o desafio no fígado para IFN-ү, no baço para expressão da IL-2 e IFN-ү e no íleo para IL-4 e TNF-α. Na quarta semana, foi possível identificar aumento dos níveis de transcritos de RNAm das citocinas estudadas. No fígado, íleo e colón o IFN-ү apresentou maior nível de transcritos de RNAm em relação ao controle negativo, no entanto no baço os maiores níveis foram observados para a IL-10. Somente na oitava semana foi possível observar diferença estatística significativa para a citocina IFN-ү, em amostras do fígado e baço, para o TNF-α e IL-4 no íleo e para a IL-2 no baço. Os maiores níveis de transcrito de RNAm foram observados no fígado, para o IFN-ү , no baço para a IL-2 , no íleo e placa de Peyer para a IL-4 e no colón para a IL-10. Na décima segunda semana, os maiores níveis de transcrito de RNAm foram observados no fígado para a IL-10, no baço e íleo para a IL-2, no colón para o TNF-α e na placa de Peyer para a IL-4. Na décima sexta semana, os maiores níveis de transcrito de RNAm foram observados no fígado e colón para a IL-10, no baço e íleo para o IFN-ү e na placa de Peyer para o TNF-α. Os animais apresentaram uma maior expressão dos transcritos de RNAm das citocinas estudadas nos órgãos após o desafio com MAP, embora não tenham sido verificadas alterações macro e microscópica (coloração de Hematoxilina e Eosina). No entanto foi possível observar presença de bastonetes álcool ácido resistentes em duas amostras de placas de Peyer, (coloração de Ziehl-Neelsen) e pela técnica de nested-PCR foi possível observar a presença de MAP em todos os órgão analisados. Assim, estes resultados contribuem para a melhor compreensão da expressão de citocinas pró e anti-inflamatória nos locais da infecção em diferentes tempos pós-inoculação tanto em órgãos tidos como sitio específicos de MAP como intestino (colón e íleo) e placa de Peyer e órgãos extra-intestinais, e com isso buscar o melhor entendimento da imunopatogênese nos locais da infecção.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 709722 bytes, checksum: 25ae10b4477351d0ee2293c5f5d08d05 (MD5) Previous issue date: 2012-04-27 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) is the etiological agent of paratuberculosis, a disease which causes chronic granulomatous enteritis preferably in domestic and wild ruminants. It is characterized by intermittent diarrhea, progressive weight loss and reduced milk production. The major route of transmission is the ingestion of food and water contaminated by feces of infected animals. It is considered a disease of high economic importance, because of losses in livestock and importance in human health, since there is evidence of possible correlation of MAP with Crohn's disease. Although previous researches have contributed to advances in the diagnosis of subclinical MAP in animals, there is a lack of studies concerning the correct understanding of its pathophysiology. Thus, the aim of this study was to investigate the distribution of MAP by means of the histology and nested-PCR techniques in organs of C57BL/6 mice infected with MAP66115-98 strain at a dose of 3 x 108 CFU /mL intraperitoneally (IP). It was applied 250μl of inoculum in 20 mice, and it was applied saline phosphate buffer (PBS) in eight control species. The animals were euthanized at 30, 60, 90 and 120 days post-inoculation, and fragments of spleen, liver, colon, ileum and Peyer's patches of five mice and two control, for each period of time, were performed molecular and histopathological evaluations. Although it was not found histologic lesions in sections stained by Hematoxylin Eosin, there was a positive staining for two Peyer s patches referring to 90 and 120 days after inoculation, stained by Ziehl-Neelsen. Among the collected organs, 64.9% were positive by molecular technique. The spleen (0.85), colon (0.75) and liver (0.60) had the highest proportion of positive regardless of the evaluation period. Taking into consideration the time after inoculation, the spleen had a higher proportion of positive results after 60 days of infection (1.00), remaining stable until 120 days. The colon had a higher proportion at 30 days (1.00) and drastically reduced to 90 days (0.40). The liver ranged between 0.40 and 0.80 during the four periods of evaluation and the Ileum showed positivity ratio equal to 0.80 only at 120 days of infection. Moreover, Peyer's patches did not vary significantly (0.40) from day 60, remaining with the lowest ratio among the organs studied. The assessment of the probability of infection of an organ relative to another was obtained by the Relative Risk, where the highest values were observed in the ratio of spleen/Peyer's patches (2.00), colon/Peyer's patches (1.74), spleen/ileum (1.54) and spleen/liver (1.40). The highest odds ratio values were observed in the spleen/Peyer s patches (7.56), spleen/ileum (4.64), spleen/liver (3.78), and colon/ileum (2.45). However, among all the established associations, only the relations spleen / ileum and spleen / Peyer's patches were statistically significant at the level of 95%, showing that the spleen was the organ with higher risk and chances of positivity in relation to the ileum and Peyer's patches. Thus, these results can contribute to better understanding of the distribution of MAP in experimental models during the course of systemic infection, being this the first study to correlate the infective capacity of the strain MAP66115- 98 in C57BL/6 mice with a distribution in different organs after inoculation by intraperitoneal route. / Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis (MAP) é o agente etiológico da paratuberculose, uma enfermidade que causa enterite granulomatosa crônica preferencialmente em ruminantes domésticos e silvestres. É considerada uma doença de impacto na economia, devido às perdas no rebanho e na saúde humana, uma vez que se têm indícios da possível relação de MAP com a doença de Crohn. Embora pesquisas tenham contribuído para avanços no diagnóstico de MAP, há carências de estudos relacionados à compreensão de sua patofisiologia. Desse modo, este estudo propôs avaliar a distribuição de MAP por meios das técnicas de nested-PCR e histologia em órgãos de camundongos C57BL/6 infectados por via intraperitoneal com a cepa MAP66115-98. Em 20 camundongos foram aplicados 250μl de inóculo contendo 3 x 108 UFC/mL e, em oito controles foram aplicados tampão fosfato-salina (PBS). Os animais foram eutanasiados aos 30, 60, 90 e 120 dias pós-inoculação. Em cada período, foram coletados baço, fígado, cólon, íleo e placas de Peyer de cinco camundongos desafiados e dois controles. O material foi dividido para avaliação molecular e histopatológica. Embora não tenham sido verificadas alterações histológicas nas lâminas coradas pela Hematoxilina Eosina, houve marcação positiva para duas placas de Peyer, referentes a 90 e 120 dias pós-inoculação, quando coradas pela técnica de Ziehl-Neelsen. Dentre os órgãos coletados, 64,9% foram positivos pela técnica molecular. Os órgãos que apresentaram maiores valores proporcionais de positividade independentemente do período de avaliação foram o baço (0,85), o cólon (0,75) e o fígado (0,60). Ao levar em consideração o tempo pós-inoculação, o baço apresentou maior proporção de positividade após 60 dias (1,00), permanecendo estável até os 120 dias, enquanto o cólon apresentou maior proporção aos 30 dias (1,00) e reduziu drasticamente aos 90 dias (0,40) da inoculação. O fígado variou entre 0,40 e 0,80 durante os quatro períodos de avaliação e o Íleo apresentou proporção de positividade igual a 0,80 apenas aos 120 dias de inoculação. Por outro lado, as placas de Peyer não variaram significativamente a partir dos 60 dias (0,40) permanecendo com a menor proporção dentre os órgãos analisados. A avaliação da probabilidade de infecção de um órgão em relação a outro foi obtida pelo Risco Relativo, onde os maiores valores foram verificados na relação entre baço/placas de Peyer (2,00); cólon/placas de Peyer (1,74); baço/íleo (1,54) e baço/fígado (1,40). Os maiores valores de Razão de Chances foram verificados na relação entre baço/placas de Peyer (7,56); baço/íleo (4,64); baço/fígado (3,78) e cólon/íleo (2,45). Contudo, dentre todas as associações estabelecidas, apenas as relações: baço/íleo e baço/placas de Peyer foram estatisticamente significativas à nível de 95%, demonstrando que o baço foi o órgão com maior risco e chances de positividade em relação ao íleo e placas de Peyer. Assim, estes resultados podem contribuir para a melhor compreensão da distribuição de MAP em modelos experimentais durante o curso de uma infecção sistêmica, sendo o primeiro trabalho a correlacionar a capacidade infectiva da cepa MAP66115-98 nos camundongos C57BL/6 com a sua distribuição em diferentes órgãos pós-inoculação usando a via intraperitoneal.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LuisMMG_DISSERT.pdf: 554524 bytes, checksum: 726d718c86891fca5133b4e10f1f792f (MD5) Previous issue date: 2012-05-21 / A sobrevida das pessoas com AIDS tem aumentado com o uso das terapias com antiretrovirais (TARV), esses, entretanto, possuem efeitos colaterais que interferem no padr?o morfofuncional e hematol?gico, o que pode levar a altera??es na qualidade de vida (QV). Este estudo quase-experimental objetivou avaliar par?metros antropom?tricos, funcionais, hematol?gicos e de QV em pessoas com HIV/AIDS submetidas a um programa de exerc?cios de 16 semanas. Os participantes tinham idade entre 35 e 51 anos (n=15), eram registrados no N?cleo de atendimento do Hospital Giselda Trigueiro em Natal/Rio Grande do Norte e apresentaram CD4350cel/mm3, lipodistrofia e estavam em TARV. Foram avaliados o ?ndice de massa corp?rea (IMC), a rela??o cintura-quadril (RCQ), o percentual de gordura (%G), a for?a escapular e manual, a contagem de CD4, carga viral e QV, antes e ap?s a interven??o. Essa foi realizada com exerc?cios de aquecimento e utilizou como base os exerc?cios resistidos, realizados 3x/semana, com 1h e intensidade de 60 a 75% de 1RM. Observaram-se modifica??es significativas no %G (p=0,031), for?a escapular (p=0,007) e preens?o manual (p=0,039). Houve aumento no CD4 e a carga viral manteve-se indetect?vel. Nos dom?nios da QV, houve mudan?a significativa no do meio ambiente (p=0,021), espiritualidade, religiosidade e cren?as pessoais (p=0,032) e na percep??o da qualidade de vida e sa?de geral (p=0,005). Os resultados sugerem que os exerc?cios resistidos para essa popula??o constituem agente terap?utico coadjuvante no controle dos efeitos colaterais advindos da TARV, promovendo modifica??es na composi??o corporal, aumento da capacidade funcional e dos n?veis de CD4, mantendo est?vel a carga viral e melhorando a QV. Sugerimos novos estudos com maior tempo de interven??o e com o acompanhamento de equipes multidisciplinares, o que poder? promover melhorias mais significativas na qualidade de vida e efetuar maior controle nas vari?veis intervenientes