Seminario de Título para optar al Título de Ingeniera en Biotecnología Molecular. / La enzima convertidora de endotelina-1 (ECE-1) es una metaloproteasa de membrana encargada de la conversión del péptido Endotelina-1 a su forma activa. Presenta cuatro isoformas, las cuales solo difieren en sus extremos citoplasmáticos N-terminales. Elevados niveles de expresión de ECE-1 han sido reportados en diferentes cánceres, siendo solo la isoforma ECE-1c asociada a características malignas en líneas celulares de cáncer de próstata y de colon. Resultados de nuestro grupo señalan que la fosforilación de ECE-1c en sus residuos Thr-9, Ser-18 y Ser-20, promueve la estabilidad al evitar su degradación proteasomal, aumentando además la capacidad invasiva de células de cáncer colorrectal DLD-1 de manera dependiente de la caseína kinasa-2 (CK2). Pese a que solo se comprobó la fosforilación de Ser-18 y Ser-20 por CK2, resultados obtenidos usando mutantes fosfo miméticas de estos dos residuos y una mutante súper estable de ECE-1c, hacen sospechar que el residuo Thr-9 estaría involucrado en el aumento de la estabilidad y sus efectos celulares. De esta manera, el objetivo general fue determinar el efecto de la fosforilación del residuo Thr-9 en la estabilidad proteica de ECE-1c y su participación en el potencial migratorio y tumorigénico de células de cáncer de colon DLD-1. Mediante ensayos de estabilidad proteica se determinó que la fosforilación en Thr-9 aumenta la estabilidad de ECE-1c incluso en presencia de un inhibidor de CK2. Además, se observó que la fosforilación en Thr-9 promueve la capacidad migratoria y tumorigénica de células DLD-1. Los resultados funcionales obtenidos en este trabajo constituyen el primer paso xiii en el estudio del mecanismo mediante el cual ECE-1c promueve proliferación, invasión y tumorigénesis en células de cáncer colorrectal DLD-1.

Na presente investigação estudamos a possível influência da falta da insulina sobre a atividade de duas enzimas importantes para a via glicolítica: a hexoquinase (HK) e a fosfofrutoquinase-1 (PFK-1), nas glândulas submandibular (GLSM) e parótida (GLPA) de ratos. Para isso, em ratos mantidos em jejum durante aproximadamente 15 horas foi injetado, via intraperitonial, estreptozotocin dissolvido em tampão citrato 0,1M pH 4,5 (60 mg/Kg de peso corporal). 48 horas após a indução, o sangue dos animais foi coletado e a glicemia determinada. Somente aqueles ratos que apresentaram glicemia igual ou acima de 350mg de glicose/100 ml de sangue foram utilizados. Os animais foram sacrificados 30 dias após a indução do estado diabético, por traumatismo craniano. As GLSM e GLPA foram removidas e analisadas para atividade e distribuição das enzimas HK e PFK-1. A enzima HK foi determinada no citosol (fração solúvel) e ligada a mitocôndria (fração ligada). A enzima PFK-1 foi determinada no citosol (fração solúvel) e ligada ao citoesqueleto (fração ligada) em dois pHs: pH 6,9, sujeito a regulação alostérica e pH 8,2, em que mostra atividade máxima. Na GLPA observamos aumento da atividade da HK tanto na fração solúvel (aproximadamente 33%) quanto na fração ligada a mitocôndria (aproximadamente 85%). Relativamente a isoenzimas de HK, não verificamos alteração no estado diabético. A atividade da enzima PFK-1 na GLPA não apresentou alterações quer considerando a forma sujeita a regulação alostérica, quer a forma com atividade máxima e portanto, não sujeita a regulação. Na GLSM constatamos uma redução da enzima HK ligada a mitocôndria de aproximadamente 74%, não havendo alteração da forma determinada no citosol (forma solúvel). Relativamente às formas isoenzimáticas, verificamos a perda de uma forma isoenzimática tanto na fração solúvel quanto na fração ligada. Por outro lado, observamos um aumento da atividade da PFK-1 da fração solúvel de aproximadamente 50% quando determinada em pH 6,9, que reflete a forma regulada alostericamente, e de aproximadamente 84% quando determinada em pH 8,2 e, portanto, não sujeito a regulação. Contrariando ao esperado, o conteúdo de Fru-2,6-P2 nas GLSM de ratos diabéticos apresentou redução de aproximadamente 42% enquanto a atividade da PFK-2 também apresentou redução. / We have studied in the present investigation a possible influence of the diabetic state of the rats on the activity of two important enzymes of the glycolitic pathway, namely, the HK and PFK-1 of the submandibular and parotid gland. The diabetic state was induced by an injection of streptozotocin (60mg/Kg body weight) dissolved in 0,1M citrate buffer pH 4,5 in rats overnight fasted. Forty-eight hours after the injection, blood was collected and the glucose determined. Only those animals presenting a blood glucose equal or above 350mg glucose/100ml blood we used in this experiment. The animals were sacrificed by cranial traumatism, thirty days after the induction of the diabetes, the submandibular and parotid glands were removed and analyzed for activity and distribution of the enzymes HK and PFK-1. The activity of the enzyme HK was determined in the cytosol (soluble fraction) and bound to mitochondria (solubilized fraction). The activity of the enzyme PFK-1 was determined in the cytosol (soluble fraction) and bounded to cytoscheletal (bound fraction)at two pHs, pH 6,9 that respond to allosteric regulation and pH 8,2 in which it show maximum activity. In the parotid gland it was observed an increase in the HK activity in both fractions, soluble and bond to mitochondria, of about 33% and 85% respectively. It was not possible to observe alterations in the isoenzymes profile. The activity of PFK-1 in the parotid gland showed no variation either considering the soluble fraction on the bound form, at both pHs in which it was determined. In the submandibular gland, it was verified a reduction of the bound HK of about 74%, but no variation in the soluble form. Concerning the isoenzymes, it was observed the disappearance of an isoenzyme in both fraction. On the other hand, we observed an increase in the activity of PFK-1 of the soluble fraction of about 50%, when determined at pH 6,9, pH in which it respond to allosteric control, and about 84% when determined at pH 8,2. Contrary to what it was expected, the content of Fru-2,6-P2 were reduced in the submandibular gland of diabetic rats.

Microrganismos foram isolados de solos e em ambientes aquáticos da região Amazônica. Entre os 87 isolados, dois bacilos gram-negativos, designados BL16 e BL20 foram selecionados pelo crescimento em ágar contendo carboximetilcelulase (CMC) como única fonte de carbono. Essas bactérias produziram largas zonas incolores em ágar contendo CMC e corado com vermelho Congo, característica de atividade celulolítica. O crescimento dos isolados ocorreu em pH 6,0 a 9,0 e entre 25ºC e 45ºC, com pH e temperatura ótimos em 7,0 e 37ºC, respectivamente. Os microrganismos celulolíticos BL16 e BL20 foram crescidos em meio contendo resíduos agrícolas submetidos a métodos de pré-tratamento químicos e físicos. A quantidade de celulase produzida e açúcares redutores formados durante a hidrólise dos substratos foi monitorada. / Microorganisms were isolated from soil and aquatic samples of the Amazonian region envinronment. Among 87 isolates, two gram-negative rods designated BL16 e BL20 were selected by growth on carboxymethyl cellulose (CMC) as sole carbon source. These bacteria produced large clearing zones when screened for cellulase activity on CMC-agar stained with Congo red. Growth of the strains ocurred between pH 6.0 and 9.0 and between 25ºC and 45ºC, with optimum pH and temperature 7.0 and 37ºC respectively. The cellulolytic microorganisms BL16 and BL20 were growth in medium with crop residues chemical and physically pretreated. The amount of cellulase produced and reducing group formed during hydrolysis of substrates were monitored.

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-11-17T11:59:21Z No. of bitstreams: 2 edina_fatima_aguiar.pdf: 670293 bytes, checksum: 119465413d518fcabad52c9ad611083d (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-11-17T12:01:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 edina_fatima_aguiar.pdf: 670293 bytes, checksum: 119465413d518fcabad52c9ad611083d (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T12:01:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 edina_fatima_aguiar.pdf: 670293 bytes, checksum: 119465413d518fcabad52c9ad611083d (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Objetivou-se com este trabalho, reduzir os n?veis de amino?cidos sulfurosos com suplementa??o enzim?tica na dieta e avaliar seus efeitos sobre as caracter?sticas de desempenho, rendimento de carca?a e cortes e o empenamento de frangos de corte. Utilizou-se 744 pintainhos, sexados, de um dia de idade, da linhagem Cobb 500, com peso m?dio de 45g, que foram distribu?dos segundo um delineamento inteiramente casualisado, em esquema fatorial 4x2, constituindo 4 n?veis de redu??o de amino?cidos sulfurosos (0, 4, 6 e 8%) e 2 sexos, com 3 repeti??es por tratamento de 31 aves por unidade experimental. Os tratamentos foram: T1- ra??o basal sem a suplementa??o da enzima protease; T2- ra??o basal com redu??o de 4% de amino?cidos sulforosos suplementados com a enzima protease, T3- ra??o basal com redu??o de 6% de amino?cidos sulforosos suplementados com a enzima protease, T4- ra??o basal com redu??o de 8% de amino?cidos sulforosos suplementados com a enzima protease. No per?odo de 1 a 7 dias, a redu??o dos n?veis de amino?cidos sulfurosos afetaram o peso final, ganho de peso e convers?o alimentar das aves e o sexo afetou o peso inicial. Para o per?odo de 1 a 21 dias de idade, n?o houve efeito da redu??o dos n?veis de amino?cidos sulfurosos sobre as vari?veis, embora o sexo tenha afetado o desempenho, exceto a convers?o alimentar. No per?odo de 1 a 35 dias, quando reduziu os n?veis de amino?cidos sulfurosos, a mortalidade apresentou efeito quadr?tico, sendo que o sexo afetou o desempenho. No per?odo de 1 a 42 dias de idade, os tratamentos afetaram o consumo de ra??o e a mortalidade, e o sexo afetou o peso final, o ganho de peso e a mortalidade. N?o foi observada nenhuma intera??o significativa em nenhuma das fases de cria??o. Os rendimentos de carca?a de peito, patas, cora??o e f?gado, foram afetados com a redu??o dos n?veis de amino?cidos sulfurosos na dieta, enquanto o sexo afetou o peso vivo e o rendimento de patas. O empenamento n?o foi afetado por nenhuma das caracter?sticas avaliadas. Com os resultados obtidos, pode-se concluir que a redu??o dos n?veis de amino?cidos sulfurosos com suplementa??o enzim?tica n?o afeta o desempenho e o rendimento de carca?a e cortes das aves at? o n?vel de 8%. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Zootecnia, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2010. / ABSTRACT The use of enzymes in the production of rations has the function to minimize the waste of nutrients, especially protein, which is considered the most expensive nutrient supply. Thus, the protease enzyme has been the target of research because they degrade proteins and therefore provides the best amino acids for protein synthesis, reducing the use of synthetic amino acids. The objective this work been reduce levels of sulfur amino acids with enzyme supplementation in diet on performance parameters, carcass yield and cuts and feathering of broilers. Seven hundred and forty-four chicks sexed one-day-old Cobb 500, with an average weight of 45.0 g were distributed in a completely randomized, 4x2, consisted of 4 levels of sulfur amino acids (0%, 4%, 6% and 8%) and 2 sex, with 3 replicates per treatment, 31 birds per experimental unit. The treatments were: T1, basal diet without supplementation of the enzyme protease, T2-basal diet with 4% reduction of sulfur amino acids supplemented with the protease enzyme, T3, basal diet with 6% reduction of sulfur amino acids supplemented with the protease enzyme, T4, basal diet with 8% reduction of sulfur amino acids supplemented with the protease enzyme. From 1 to 7 days, the treatments affected broilers performance (final weight, weight gain and feed conversion) and gender affected the initial weight. For the period from 1 to 21 days of age, treatment no affected on performance, while sex has affected the performance, except the feed conversion. From 1 to 35 days, the mortality rate showed a quadratic effect, and gender affected performance. From 1 to 42 days of age, treatments affected the intake and mortality, and sex affected the final weight, weight gain and mortality. The carcass of the breast, legs, heart and liver were affected by reducing the levels of sulfur amino acids in the diet. How much sex affect body weight and yield of legs. The feathering was not affected by any of the parameters. With the results, we can conclude that the reduced levels of sulfur amino acids with enzyme supplementation does not affect performance and carcass yield and cuts of birds to the level of 8%.

A carne mecanicamente separada de frango (CMSF), material oriundo do processamento de carcaças na indústria avícola, foi empregada como fonte protéica para a produção do hidrolisado utilizando enzimas proteolíticas. As condições de hidrólise foram otimizadas usando metodologia de superfície de resposta (MSR). A influência das variáveis temperatura (T), pH e concentração de enzima (E) foram avaliadas em função do Índice de Hidrólise (IH). As condições ótimas encontradas para a enzima Alcalase e Flavourzyme foram T de 50 °C, pH de 7,5 e (E) de 2,5 % e T de 50 °C, pH de 6,0 e (E) de 3,5%, respectivamente. Alcalase obteve uma recuperação protéica de 89 % e a Flavourzyme obteve 66,5 %. Alcalase foi utilizada para a produção do hidrolisado, posteriormente seco em spray-drier, o qual obteve um conteúdo de proteína total de 57,90 %. O hidrolisado apresentou boa qualidade microbiológica e o perfil molecular indicou a presença de pequenas proteínas e peptídeos na faixa de 12 000 a 5807 Da. A avaliação biológica mostrou elevada digestibilidade e NPR para a proteína hidrolisada quando comparada com a caseína, contrastando com os baixos valores encontrados para metionina e cistina na análise de aminoácidos. / Mechanically deboned chicken meat (MDCM), obtained from surplus carcasses in the poultry process industry, was used as a source to the production of protein hydrolysates using proteolytic enzymes. Hydrolysis conditions were optimized using the response surface methodology (RSM). The influence of the process variables temperature (T ºC), pH and enzyme concentration, (E) was studied with regard to the hydrolysis index (HI). The optimum values for Alcalase and Flavourzyme were T of 50 ºC, pH of 7.5 and (E) of 2.5 % and T of 50 ºC, pH of 6.0 and (E) of 3.5 %, respectively. Alcalase recovered 89 % of protein and Flavourzyme 66.5 %. The Alcalase was used to produce the spray-dried hydrolysate and obtained 57.90 % of total protein. The spray-dried hydrolysate presented good microbiological quality and molecular weight ranging from 5,807 to 12,000 Da. The biological evaluation showed high digestibility and NPR to protein hydrolysate when compared with casein, contrasted with the low values of methionine and cystine found in amino acid analysis.

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-01T18:20:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 814506 bytes, checksum: 72a5b8760b3236d37f898dddf3ac222a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T18:20:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 814506 bytes, checksum: 72a5b8760b3236d37f898dddf3ac222a (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As espécies do gênero Melipona são conhecidas como abelhas indígenas sem ferrão. Apresentam grandes relevâncias econômica e ecológica devido à sua importância na polinização e na produção de mel. Até o momento foram estudadas citogeneticamente 16 das 42 espécies descritas do gênero. Na citogenética, a utilização das endonucleases de restrição in situ (REs) tem se mostrado muito útil, por produzir informações sobre a constituição da cromatina. O presente trabalho teve como objetivos utilizar duas REs seguidas da coloração com fluorocromos, para obter informações a respeito da composição e organização da cromatina das três espécies do gênero Melipona (M. bicolor, M. quadrifasciata e M. subnitida); incrementar o entendimento dos mecanismos de atuação das enzimas de restrição in situ; e, com base no padrão de bandeamento, inferir sobre as relações de parentesco entre as espécies estudadas. Os cromossomos metafásicos foram tratados com a combinação das REs HaeIII e DraI, com os fluorocromos QM e CMA 3 , obtendo, assim, quatro tratamentos para cada espécie. As presenças ou ausências de bandas foram analisadas e os cladogramas, montados com o auxílio do programa PAUP ® . Foi reconhecida uma nova modalidade de atuação das REs nos cromossomos das espécies estudadas, que resultou no aumento da fluorescência de algumas regiões dos cromossomos. Os tratamentos com as REs parecem ter amplificado as marcações dos fluorocromos, provavelmente devido à descondensação do DNA, que aumentou a acessibilidade dos fluorocromos. A utilização dos caracteres obtidos com a aplicação das REs produziu um cladograma informativo, no qual se percebe uma grande divergência entre as espécies M. bicolor e M. subnitida. / The bees of genus Melipona are known as stingless indigenous bees. They have great economical and ecological relevance due to their importance on pollination and honey production. Until present, 16 out of 42 species of Melipona have been cytogenetically studied. In cytogenetics, the use of in situ restriction endonucleases (REs) has been very useful for generating information towards a better comprehension of the nature of chromatin. The objective of this work was to apply two REs, followed by fluorochrome dying, to characterize chromatin composition and organization in three species (M. bicolor, M. quadrifasciata and M. subnitida); and infer about the degree of similarity among these species. Metaphase chromosomes were treated with the combination of the REs HaeIII and DraI with fluorochromes QM and CMA 3 , representing four treatments for each species. The presence or absence of bands were recorded as characters and a Neighbor Joining analysis was carried out with PAUP*. Combination of REs action and fluorochromes resulted in the increase of fluorescence at some regions of the chromosomes, probably because of the DNA decondensation, which increased the accessibility of the fluorochromes. REs patterns suggest greater divergence between the species M. bicolor and M. subnitida.

Microrganismos foram isolados de solos e em ambientes aquáticos da região Amazônica. Entre os 87 isolados, dois bacilos gram-negativos, designados BL16 e BL20 foram selecionados pelo crescimento em ágar contendo carboximetilcelulase (CMC) como única fonte de carbono. Essas bactérias produziram largas zonas incolores em ágar contendo CMC e corado com vermelho Congo, característica de atividade celulolítica. O crescimento dos isolados ocorreu em pH 6,0 a 9,0 e entre 25ºC e 45ºC, com pH e temperatura ótimos em 7,0 e 37ºC, respectivamente. Os microrganismos celulolíticos BL16 e BL20 foram crescidos em meio contendo resíduos agrícolas submetidos a métodos de pré-tratamento químicos e físicos. A quantidade de celulase produzida e açúcares redutores formados durante a hidrólise dos substratos foi monitorada. / Microorganisms were isolated from soil and aquatic samples of the Amazonian region envinronment. Among 87 isolates, two gram-negative rods designated BL16 e BL20 were selected by growth on carboxymethyl cellulose (CMC) as sole carbon source. These bacteria produced large clearing zones when screened for cellulase activity on CMC-agar stained with Congo red. Growth of the strains ocurred between pH 6.0 and 9.0 and between 25ºC and 45ºC, with optimum pH and temperature 7.0 and 37ºC respectively. The cellulolytic microorganisms BL16 and BL20 were growth in medium with crop residues chemical and physically pretreated. The amount of cellulase produced and reducing group formed during hydrolysis of substrates were monitored.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-10T15:10:06Z No. of bitstreams: 1 2017_AlessandraRodriguesSilva_Parcial.pdf: 358353 bytes, checksum: 002a0190d50a73b32404b7a1197b851b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-06T21:18:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_AlessandraRodriguesSilva_Parcial.pdf: 358353 bytes, checksum: 002a0190d50a73b32404b7a1197b851b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T21:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_AlessandraRodriguesSilva_Parcial.pdf: 358353 bytes, checksum: 002a0190d50a73b32404b7a1197b851b (MD5) / O bloqueio do sistema renina-angiotensina (SRA) vem sendo amplamente utilizado para tratamento da insuficiência cardíaca (Insf.C.), melhorando significativamente a morbi-mortalidade desses pacientes. Essa inibição pode ser feita com inibidores da enzima conversora de angiotensina I (iECA), bloqueadores do receptor de angiotensina II (BRA) ou inibidor direto da renina (IDR). A associação dos inibidores do SRA com intuito de bloquear o SRA mais efetivamente no tratamento da Insf.C. ainda é matéria controversa, já que efeitos adversos, como a piora da função renal são frequentes. Por essa razão, investigou-se, através da metodologia da revisão sistemática de ensaios clínicos randomizados (ECR), os efeitos do uso do bloqueio duplo do SRA, BRA combinado a iECA ou alisquireno combinado à BRA ou iECA, em pacientes com Insf.C. portadores de disfunção renal. Foi realizada busca nos seguintes bancos de dados bibliográficos: Biblioteca Cochrane CENTRAL, EMBASE, LILACS (Literatura Latino Americana em Ciências da Saúde), PubMed e Web of Science. Registos de ensaios clínicos: ICTRP (WHO International Clinical Trials Registry Platform) e NCT (Clinicaltrials.gov). Literatura cinzenta: Google Scholar, OpenGrey. Outros: Pesquisa manual de bibliografias de estudos incluídos. Foram coletadas 4.608 referências não duplicadas, destas, apenas três ECR foram selecionados para metanálise, totalizando 13.680 pacientes. Os desfechos analisados foram morte, morte cardiovascular (CV) e hospitalização por Insf.C., piora aguda da função renal, taxa de filtração glomerular estimada (TFGe), eventos adversos (piora da função renal, hipotensão e hipercalemia). A metanálise para a morte mostrou que o grupo submetido ao bloqueio duplo apresentou um hazard ratio (HR) 0,92 (0,84-1,01), porém sem significância estatística (p 0,07). Por outro lado, a metanálise demonstrou que o bloqueio duplo do SRA diminuiu significativamente a morte CV e hospitalização por Insf.C. em 11% (HR 0,89 – 0,83-0,99; p 0,0006), sem diferença entre os pacientes com e sem disfunção renal, com estudos homogêneos (I²-33%). Além disso, quando comparados com a monoterapia, os pacientes que utilizaram o bloqueio duplo apresentaram um aumento de 29% no risco para piora da função renal, 35% para hipercalemia e 28% para hipotensão. A análise da descontinuação do tratamento por efeito adverso demonstrou que a combinação terapêutica levou 3,59% dos pacientes (vs. 2,34% em monoterapia) a descontinuar por piora da função renal, 3,37% (vs.1,72% em monoterapia) por hipercalemia e, 2,56% (vs. 1,58% em monoterapia) por hipotensão. Há poucos ECR sobre o assunto, não sendo possível analisar os dados referentes à proteinúria e TFGe ≥60 mL/min/1,73m² devido a ausência de dados. A metanálise demonstrou que o bloqueio duplo do SRA diminui o risco de morte CV e hospitalização por Insf.C.. Como os eventos adversos são monitoráveis por exames de rotina e, a grande maioria dos pacientes não descontinuou o tratamento, a recomendação para uso do bloqueio duplo não deve ser formalmente contraindicada, devendo-se levar em consideração a relação de custo-benefício individual de cada paciente para sua utilização. / Renin-angiotensin system (RAS) blockade has been widely used in heart failure (HF) treatment since it significantly improves the morbidity and mortality of these patients. Inhibition of RAS may be obtained by the use of angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi), angiotensin II receptor blocker (ARB) or direct renin inhibitors (DRI). To effectively block RAS more efficiently in the treatment of patients with HF, it has been proposing the combination of two of these three classes of inhibitors. However, the use of double blockers RAS inhibitors in patients with HF is still controversial, since adverse effects such as worsening renal function are frequent. Therefore, it is critical to investigate the consequences of the use of double blocker RAS inhibitors, BRA combined with an ACEi or aliskiren in combination with BRA or an ACEi, in patients with HF that also display renal dysfunction, using the systematic review methodology. The search was performed in bibliography database: the Cochrane Library CENTRAL, EMBASE, LILACS (Literatura Latino-Americana em Ciências da Saúde), PubMed and Web of Science. Clinical trial registries: clinical trials: ICTRP (WHO International Clinical Trials Registry Platform) and NCT (Clinicaltrials.gov), Grey literature: Google Scholar, OpenGrey. Others: Handsearching of bibliographies from included studies. Of 4,608 nonduplicate records screened, three randomized trials were included for meta-analysis, totaling 13,680 patients. The outcomes analyzed were death, cardiovascular (CV) death or hospitalization, early worse renal function, estimated glomerular filtration rate (eGFR), adverse events (renal impairment, hypotension, and hyperkalemia). The meta-analysis for death showed that the patients submitted to double blocker RAS inhibitors displayed an HR of 0.92 (0.84-1.01), although this difference was not statistically significant (p 0.07). On the other hand, meta-analysis demonstrated that patients in use of double blockers RAS inhibitors showed a significantly reduced 11% of CV death or HF hospitalization (HR 0.89-0.83-0.99, p 0.0006) without difference between the groups of patients with and without renal dysfunction and homogeneous studies (I²-33%). Besides, when compared to patients treated with monotherapy, patients who used double-blockers exhibited a 29% increase in risk for renal impairment, 35% increase for hyperkalemia, and 28% increase for hypotension. The rate of discontinuation of treatment by adverse side-effect was higher in the combination therapy. Discontinuing due to renal impairment occurred in 3.59% (vs. 2.34% in monotherapy) discontinuing due to hyperkalemia was 3.37% (vs. 1.72% in monotherapy) and, was 2.56% (vs. 1.58% monotherapy) for hypotension. There are few ECRs on the subject. It was not possible to analyze data regarding proteinuria and eGFR ≥60 mL/min/1.73m² due to lack of data. This meta-analysis demonstrated that dual blockade of RAS reduces the risk of CV death and HF hospitalization. Since adverse events are monitored by daily basis exams, and a large majority of patients did not discontinue treatment, the recommendation for the use of dual blockade inhibition of RAS should not be categorically contraindicated. It is recommended to evaluate the relationship of the cost-benefit ratio of each patient.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La enzima convertidora de angiotensina I homóloga (ECA2) es un nuevo componente del sistema renina-angiotensina-aldosterona que cataliza la hidrólisis de Angiotensina (Ang) I a Ang-(1-9) y de Ang II a Ang-(1-7). Se ha sugerido que esta enzima puede ser un importante blanco terapéutico en el control de las enfermedades cardiovasculares, ya que se ha determinado que tiene acciones antagónicas a la Ang II. Por otra parte, se ha comprobado la utilidad de sobreexpresar diferentes proteínas mediante transferencia genética para estudiar su papel en distintas patologías. El propósito de este trabajo fue construir un adenovirus que sobreexprese ECA2 humana en los cardiomiocitos de rata neonata y determinar si eficiencia de transducción. En este trabajo se caracterizó el gen que codifica para ECA2 humana por secuenciación y posteriormente se clonó en el vector adenoviral pDC316. Para ello el gen ECA2 contenido en un fragmento Xho I / Sal I se insertó en el sitio Sal I del vector pDC316. Como resultado se logró obtener dos construcciones, uno en orientación sentido y otro en orientación antisentido respecto al promotor de expresión PCMV. Ambos plasmidios se caracterizaron por mapa de restricción y por PCR para ECA2. Después de amplificar y purificar por gradiente de CsCl ambos plasmidios, se procedió a la construcción de los adenovirus. Para ello se cotransfectaron células HEK 293 con pBHGloxΔE1,3Cre y ambos vectores adenovirales (pDC316 / ECA2 sentido y antisentido). Después de cultivar entre 30 a 40 días se logró generar 8 clones diferentes de adenovirus para ECA2 sentido (Ad ECA2 sense) y 12 clones para el adenovirus ECA2 antisentido (Ad ECA2 anti). Mediante Western blot para ECA2 se determinó que el Ad ECA2 sense se sobreexpresó la proteína ECA2 en células HEK 293 y en cardiomiocitos en cultivo, en forma dependiente de la cantidad de virus usado en la transducción. Debido a que los niveles basales de proteína ECA2 en cardiomiocitos era muy bajo, sólo se pudo evaluar inhibición de la síntesis de ECA2 del Ad ECA2 anti en cardiomiocitos que sobreexpresaron ECA2 mediante transducción con el Ad ECA2 sense. Además, en cardiomiocitos en cultivo a las 48 h de transducción, Ad ECA2 sense aumentó significativamente la actividad enzimática ECA2 a partir de multiplicidades de infección (MOI) 300. Sin embargo, Ad ECA2 anti en estas mismas condiciones no disminuyó la actividad enzimática ECA2 en cardiomiocitos en cultivo. En resumen, estos datos demuestran que es posible sobreexpresar ECA2 humano mediante vectores adenovirales en cardiomiocitos de rata neonata in vitro.

Microrganismos foram isolados de solos e em ambientes aquáticos da região Amazônica. Entre os 87 isolados, dois bacilos gram-negativos, designados BL16 e BL20 foram selecionados pelo crescimento em ágar contendo carboximetilcelulase (CMC) como única fonte de carbono. Essas bactérias produziram largas zonas incolores em ágar contendo CMC e corado com vermelho Congo, característica de atividade celulolítica. O crescimento dos isolados ocorreu em pH 6,0 a 9,0 e entre 25ºC e 45ºC, com pH e temperatura ótimos em 7,0 e 37ºC, respectivamente. Os microrganismos celulolíticos BL16 e BL20 foram crescidos em meio contendo resíduos agrícolas submetidos a métodos de pré-tratamento químicos e físicos. A quantidade de celulase produzida e açúcares redutores formados durante a hidrólise dos substratos foi monitorada. / Microorganisms were isolated from soil and aquatic samples of the Amazonian region envinronment. Among 87 isolates, two gram-negative rods designated BL16 e BL20 were selected by growth on carboxymethyl cellulose (CMC) as sole carbon source. These bacteria produced large clearing zones when screened for cellulase activity on CMC-agar stained with Congo red. Growth of the strains ocurred between pH 6.0 and 9.0 and between 25ºC and 45ºC, with optimum pH and temperature 7.0 and 37ºC respectively. The cellulolytic microorganisms BL16 and BL20 were growth in medium with crop residues chemical and physically pretreated. The amount of cellulase produced and reducing group formed during hydrolysis of substrates were monitored.