Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Patrícia Simone Leite Vilamaior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:20:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_SergioMarcelinode_D.pdf: 4535012 bytes, checksum: 94d22a407f286cbbf5f47c367a330c46 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A próstata feminina (glândula parauretral de Skene) está localizada na parede da uretra feminina e histologicamente possui as mesmas partes da próstata masculina, apresentando um epitélio colunar pseudoestratificado e componentes celulares, enzimáticos e estromais necessários para sua função exócrina e neuroendócrina. O tecido prostático possui uma alta dependência em relação aos andrógenos, e a ação destes hormônios sobre as células prostáticas é mediada via receptor nuclear. Nem todos os tipos celulares prostáticos possuem receptor para andrógenos, sugerindo que somente certos tipos celulares podem ser considerados alvos diretos da ação de andrógenos. A próstata feminina também é alvo da testosterona, pois estudos recentemente publicados demonstram que a reposição hormonal com este hormônio promove o desenvolvimento morfofuncional da próstata feminina em gerbilos. Mesmo sendo a próstata um tecido andrógeno dependente, os estrógenos são necessários para manutenção do seu funcionamento, o que se explica devido a presença dos dois tipos de receptores de estrógeno (ER- alfa e ER-?). Dados recentes da literatura propõem que os hormônios relacionados com a gravidez e ciclo ovariano promovem certo grau de proteção para o tecido da mama contra o câncer e que a aplicação de estradiol e progesterona previne a carcinogênese de mama em ratas nulíparas, mimetizando o efeito da gravidez, e ainda, que tanto o câncer de próstata quanto o câncer de mama, além de serem os principais tumores que incidem em homens e mulheres, respectivamente, e possuírem associações epidemiológicas e etiológicas, apresentam várias anormalidades genéticas em comum. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as modificações morfo-funcionais na próstata feminina do gerbilo da Mongólia sob a influência da prenhez e avaliar a influencia desse estágio do ciclo reprodutivo na homeostase dos compartimentos prostáticos das fêmeas velhas. Para tanto, foram utilizados 50 animais, sendo: 5 fêmeas adultas nulíparas (AN); 5 fêmeas adultas multíparas (AM); 5 fêmeas velhas nulíparas (VN); 5 fêmeas velhas multíparas (VM); 5 fêmeas velhas nulíparas (VNT) e 5 velhas multíparas (VMT), as quais receberam suplementação de 0,25ml de testosterona em dias alternados (1mg/kg/dia de cipionato de testosterona em óleo vegetal) por 21 dias; 5 fêmeas velhas nulíparas (VND) e 5 velhas multíparas (VMD) as quais receberam suplementação diária de 0,1ml DHEA (5mg/kg diluída em solução salina) por 21 dias; 5 fêmeas velhas nulíparas (VNE2) e 5 velhas multíparas (VME2), as quais receberam suplementação de 0,1ml de estradiol (10mg/ml de óleo vegetal), em dias alternados, por 21 dias. O grupo VM apresentou uma maior incidência de lesões proliferativas, o que nos leva a concluir que o tecido prostático de fêmeas que passam por sucessivas gravidezes possuem maior probabilidade de serem acometidas por tais lesões. Além disso, a reposição hormonal seja com testosterona, estrógeno ou dihidrotestosterona se mostrou mais agressivo no caso de fêmeas multíparas, pois a incidência de lesões proliferativas foi maior neste grupo / Abstract: The gerbil female prostate is located paraurethrally and has all the main histological components of the male prostate, like secretor epithelium and fibromuscular stroma. This gland, like the prostate in males, is targeted by testosterone action, which promotes morphofunctional development. Furthermore, estrogens are required to maintain the male and female prostate and this gland presents both estrogen receptors (ER-alfa and ER-?). In the present work the structural and morphometric-stereological and serological aspects, as well as the quantification of the incidence, multiplicity and percentage of acini affected by different lesions were analyzed. Fifty senile female gerbils were divided into ten groups (five animals each): Adult nulliparous gerbils (AN) and adult multiparous gerbils (AM); senile nulliparous (SN) and senile multiparous (SM) female gerbils; senile nulliparous gerbils (SND) and senile multiparous gerbils (SMD) that received daily 0,1 ml of DHEA during 21 days; senile nulliparous gerbils (SNE) and senile multiparous gerbils (SME) that received 0,1 ml of ?-estradiol on alternate days during 21 days; senile nulliparous gerbils (SNT) and senile multiparous gerbils (SMT) that received 0,2ml of T (1mg/kg/day) for 21 days. This work was performed to quantify the incidence, multiplicity and percentage of acini affected by different lesions in prostate of nulliparous and multiparous senile female gerbils under different types of hormonal replacement using morphometric, stereological and immunohistochemical techniques and to try to establish a relationship between hormonal serum levels in these groups. The proliferative ratio (PCNA/TUNEL) were higher in al multiparous groups when compared with nulliparous groups, mainly in SMT, the same group where were found higher multiplicity of proliferative lesions / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T23:59:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hetzl_AmandaCia_M.pdf: 12135293 bytes, checksum: f1fc50c54b270c1cdccb661cac491ab5 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A senescência é fator determinante para a ocorrência de alterações na biologia molecular da próstata, considerando-se tanto o desequilíbrio hormonal quanto o das interações epitélioestroma. Assim, os objetivos desse estudo foram caracterizar e comparar a biologia celular e molecular da zona periférica prostática de homens senis, com e sem diagnóstico de lesões prostáticas, através da morfologia e imunolocalização dos receptores androgênicos (AR), estrogênicos ? e ? (ER?, ER?), metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP2, MMP9), distroglicanas ? e ? (DG?, DG?), laminina e fator de crescimento homólogo à insulina (IGFR-1). Para tal, foram utilizadas 60 amostras das zonas periféricas prostáticas provenientes de necrópsias e/ou prostatectomias de homens (60-90 anos), as quais foram divididas em 4 grupos (15 amostras cada): Grupo Senil (sem lesões prostáticas); Grupo Neoplasia Intraepitelial Prostática (NIP); Grupo Hiperplasia Benigna Prostática (HBP); Grupo Câncer Prostático (CP). O diagnóstico das lesões prostáticas baseou-se em critérios morfológicos e por imunomarcação para citoqueratina de alto peso molecular. Os resultados foram avaliados por microscopias de luz e eletrônica de transmissão, métodos morfométricos, imunohistoquímicas e Western Blotting. Os resultados mostraram danos morfológicos no estroma e organelas celulares envolvidas no processo secretor da próstata de homens senis. As diferentes lesões prostáticas na senescência demonstraram desequilíbrio nas taxas de proliferação/apoptose, indicando predomínio do processo proliferativo. Além disso, a imunolocalização para AR se manteve similar em todos os grupos estudados, com predominância da imunolocalização no compartimento epitelial. Já o ER? foi preferencialmente localizado no compartimento epitelial, sendo ausente no compartimento estromal do grupo CP. A imunolocalização do ER? foi preferencialmente no compartimento epitelial dos grupos estudados, sendo intensa nos grupos CP e NIP em relação aos demais. Também, intensa imunoreatividade para IGFR-1, MMP2 e MMP9 foi verificada nos grupos CP e NIP em relação aos demais grupos. As imunolocalizações para DG?, DG? e laminina foram mais fracas nos grupos CP e NIP em relação aos grupos HBP e Senil. Assim, pode-se concluir que o desequilíbrio da interação epitélio-estroma prostático causado pelas mudanças estruturais é fator decisivo para o desenvolvimento e progressão da carcinogênese na senescência. Ainda, a diminuição dos níveis protéicos do complexo das DGs e o aumento dos níveis das MMPs estão associados com a gravidade da lesão prostática e tem importante papel na manutenção do fenótipo maligno. A ocorrência de IGFR-1 sinalizou o grau de comprometimento glandular e a perda da imunolocalização da laminina provavelmente propiciou a progressão das lesões. Também, a localização diferencial dos receptores esteróides nas diferentes lesões prostáticas entre os compartimentos epitelial e estromal de homens senis certamente indicou diferentes sinalizações parácrinas para a dinâmica prostática, indicando ação diferencial desses receptores a partir dos compartimentos prostáticos e apontaram a importância das vias estrogênicas nos mecanismos de ativação dessas alterações. Finalmente, a interação do IGFR-1 com as MMP2 e MMP9 apontaram arelevância dessas moléculas nas investigações e tratamentos das doenças prostáticas. / Abstract: Senescence is a determining factor for the occurrence of morphological changes in the prostate, considering hormonal imbalance and paracrine signaling disturbance between the epithelium and the stroma. Thus, the objective of this work was to characterize and correlate the ? and ?-dystroglycans (?-DG, ?-DG), androgen receptor (AR), ? and ?-estrogen receptors (?ER, ?ER), matriz metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2, MMP-9) and insulin-like growth factor receptor (IGFR-1) reactivities in both the stroma and epithelium compartments in the prostatic peripheral zone of elderly men showing Benign Prostatic Hyperplasia (BPH), Prostatic Intraepithelial Neoplasia (PIN) and Prostatic Cancer (PC). Sixty prostate samples from 60-90 year old patients were divided into 4 groups: The Senile Group (without prostatic lesions); The Prostatic Intraepithelial Neoplasia (PIN) Group; The Prostatic Cancer (PC) Group and The Prostatic Benign Hyperplasia (BPH) Group. The lesion diagnosis was based on architectural disturbance according to morphological criteria and by immunostaining for cytokeratin. The results were evaluated by light microscopy and transmission electron, morphometric methods, immunohistochemical and Western Blotting. The different prostatic lesions in senescence showed an imbalance in the rates of proliferation/apoptosis, indicating predominance of proliferative process. The results showed more intense IGFR-1, MMP-2 and MMP-9 immunoreactivities in the PC and PIN groups than in the other groups. The ?-DG and ?-DG immunolocalization were weaker in the PC and PIN groups than in the BPH and Senile groups. Intensified AR reactivity was verified in the epithelial compartment in all studied groups. ?ER immunoreactivity was more intense in the epithelial compartment in the PC and PIN groups than in the other groups. ?ER immunoreactivity was weaker in the epithelial compartment of the PIN and PC groups than in the BPH and Senile groups. Also, this receptor was absent in the stromal compartment in the PC group. The different prostatic lesions showed abnormal epithelial-stromal interaction, due to decreased ?-DG and ?-DG levels and increased IGFR-1, MMP-2 and MMP-9 levels, which are essential elements for the maintenance of glandular paracrine signaling, contributing to disease progression in the senescence. The differential steroid hormone receptor reactivity in the different lesions in both prostatic compartments certainly indicated different paracrine signals to the dynamics of the prostate and pointed out the importance of estrogenic pathways in the activation mechanisms of these changes. Also, these findings indicated that there was a direct correlation between IGFR-1, MMPs and steroid hormone receptors, pointing towards IGFR-1 as a molecule target in prostate therapy, as well as being a possible factor for MMPs positive signaling. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Alice da Cruz-Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:32:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fontana_Karina_D.pdf: 9531755 bytes, checksum: f7da29bd456d891709484931aa26063a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O uso abusivo de esteróides anabólico androgênicos para melhorar a performance e aparência física tem sido associado a sérios efeitos adversos, alguns dos quais fatais, entretanto o seu uso controlado terapeuticamente pode trazer benefícios. O presente trabalho teve por objetivo avaliar no músculo sóleo (SOL), tibial anterior (TA) e gastrocnêmio (GAS), no músculo cardíaco e nos tendões, o efeito do uso oral do esteróide anabólico androgênico mesterolona (M, 17 beta-hydroxy-1 alpha methyl-5 alpha-androstan-3-one, C20H32O2) em camundongos sedentários e submetidos a um intenso programa aeróbico de corrida em esteira, usando um modelo murino transgênico (CETP+/-LDLr-/+). Grupos experimentais de camundongos machos (8 semanas no início dos experimentos) sedentários e exercitados (6 semanas de corrida involuntária em esteira, média de 16 m/min, 50 min/dia, 5 dias/semana) foram tratados com mesterolona dissolvida em goma arábica (veículo), ou com o veículo (ambos na concentração de 2 µg/g corpóreo: dose supra-fisiológica) nas últimas 3 semanas. Os animais eram semanalmente pesados e a pressão arterial aferida através de coxim caudal com pletismógrafo e os seus músculos foram pesados no momento do sacrifício. Foram delineados os tipos de fibras musculares com base na reação de m-ATPase, bem como a ação miotrófica da mesterolona, do exercício ou de ambos combinados nos diferentes tipos de fibras musculares. Ao microscópio de luz e eletrônico de transmissão foram avaliados no SOL, o número de miofibras, a área seccional transversa das miofibras e das mitocôndrias, a densidade mitocondrial/área de miofibra, o número de capilares/miofibra, a presença de células satélites ativadas, de "split fibers" (fibras fendidas) e a morfologia dos fusos musculares, bem como possíveis alterações da ultraestrutura em geral. A expressão da isoformas de óxido nítrico sintase neuronal (NOS I) e endotelial (NOS III) foi investigada através de imunohistoquímica e immunoblotting. Como parte, do sistema músculo esquelético, foi avaliada a resposta do tendão de Aquiles em termos de síntese de colágeno, concentração de hidroxiprolina, diâmetro e área (relativa) das fibras colágenas e aspecto ultraestrutural dos fibroblastos tendinosos (tenócitos). Finalmente, a investigação estendeu-se ao músculo cardíaco e métodos quantitativos, morfológicos e bioquímicos foram empregados para a avaliação da plasticidade cardíaca e do perfil lipídico desse modelo murino transgênico, o qual foi geneticamente modificado para estar mais próximo ao perfil lipídico humano. · Os resultados mostraram que os músculos soleo, tibial anterior e gastrocnêmio respondem diferentemente ao tratamento com mesterolona, ao exercício aeróbico ou a ambos associados. Igualmente, o mesmo se dá em relação à fibra tipo I ou aos vários tipos de fibras II, ou seja, dependendo do músculo em que estão inseridas, há variabilidade na sua resposta, isto é, elas podem ser recrutadas, não serem recrutadas, ou serem recrutadas diferencialmente. O mesmo pode ser dito em relação à sofrerem ou não hipertrofia e em que proporção ela ocorre. Igualmente, a expressão das óxido nítrico sintases, NOS I e NOS III, sofre modulação diferente dependendo do tratamento e músculo analisado. A associação do tratamento com mesterolona ao exercício físico intenso pode gerar efeitos sinérgicos ou antagônicos. · Os resultados mostraram que a mesterolona, o exercício físico e a combinação de ambos foram capazes de aumentar o conteúdo de hidroxiprolina, o diâmetro e área das fibrilas colágenas (contidas em uma área teste) do tendão e ao microscópio eletrônico os fibroblastos mostram-se hipertrofiados, com muitos prolongamentos e grande desenvolvimento da maquinaria sintética. · Os resultados mostraram o indesejável remodelamento e dano cardíaco, a indução de perfil pró-aterogênico nos animais tratados com mesterolona, e que o exercício neutraliza alguns desses efeitos. / Abstract: The abuse of anabolic-androgenic steroids (AAS) to improve physical performance is associated with serious adverse effects sometimes fatal, however benefits can be gain by its therapeutic controlled use. The present study aimed to evaluate the effects of the use of the anabolic androgenic steroid mesterolone (M, 17 beta-hydroxy-1 alpha methyl-5 alpha-androstan-3-one, C20H32O2) in the soleus (SOL), tibialis anterior (TA) and gastrocnemius (GAS), in the Achilles tendon and in the cardiac muscle remodeling and lipemic profile of transgenic mice (CETP+/-LDLr-/+), sedentary or submitted to a treadmill running aerobic exercise program. Experimental groups of male mice (aged 8 weeks at the beginning of the experiments) sedentary or exercised (6 weeks involuntary treadmill running, average of 16 m/min, 50 min/day, 5 days/week) were treated with mesterolone dissolved in gum arabic (vehicle), or with the vehicle (both at 2 µg/g body weight administered orally - supra physiological dose) in the last three weeks. The animals were weighed every week and the muscles were weighed after sacrifice of the animals. The arterial blood pressure was measured by tail-cuff plethismographys weekly. The delineation of the fibers types was done in the SOL, TA and GAS muscles through the m- ATPase reaction. The myotrophic action of mesterolone, exercise, or both combined, were also determined in relation to fiber types. The number of myofibers, the crosssectional area of the myofibers, and mitochondria, the density of mitochondria/area of myofiber, the number of capillaries/myofiber, the presence of activated satellite cells, split fibers and the morphology of the muscle spindles and of muscle tissue in general were evaluated by light and electron microscopy. The expression of the neuronal (NOS I) and endothelial (NOS III) nitric oxide synthase isoforms was investigated through immunohistochemistry and immmunoblotting. As part of the musculoskeletal system, the Achilles tendon response was evaluated in regard to the collagen synthesis, quantification of hydroxyproline, collagen fibers diameter and area (relative) and ultrastructure of the tendon fibroblasts (tenocytes). Finally, the investigation focused on the cardiac muscle remodeling and quantitative, morphological and biochemical approaches were employed for evaluating the cardiac plasticity and the lipid profile from this transgenic murine model whose lipid profile was transgenically modified to be more close to the human lipid profile. · The results showed that the soleus, tibialis anterior and gastrocnemius muscles respond differentially to the mesterolone treatment, to the aerobic exercise or both in association. Seemingly, fiber type I and the several types of II fibers showed variability. Depending on the muscle to which they belong to they can be recruited, not be recruited or be recruited differentially. Likewise, different degrees of hypertrophy, or absence of hypertrophy can be displayed by a given fiber type depending on the muscle. Similarly, the expression of the nitric oxide synthases, NOS I and NOS III, can be modulated differentially depending on the treatment and muscle analyzed. The association of mesterolone treatment and intense physical exercise can generate synergic or antagonistic effects. · The results showed that mesterolone, physical exercise or both combined were able to increase the hydroxyproline content, the diameter and area of tendon collagen fibrils (contained in an area probe), and to show evidences of increased synthesis of proteins by the fibroblasts, which besides showed several long and slender processes in agreement with characteristics of hypertrophy and enhancement of the synthetic machinery. · The results showed that mesterolone alone induced a pro-atherogenic profile and a pathogenic cardiac hypertrophy. The exercise counteracted these effects and modified favorably both the lipoprotein profile and the cardiac remodeling. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Glicocorticóides são utilizados no tratamento de doenças auto-imunes e inflamatórias. Um novo composto, arilpirazola (L5) exibiu efeito antiinflamatórios e um perfil reduzido de efeitos colaterais. Avaliamos ações antiinflamatórias do L5 in vivo e os efeitos do L5 na estrutura e biomecânica ósseas em camundongos C57BL/6J. Prednisolona (Pred) e L5 reduziram o número de total leucócitos na dose de 2,1 mg/kg.pc/dia e 2,4 mg/kg.pc/dia, respectivamente. A Pred reduziu a massa corporal e o L5. Pred e L5 promoveram aumento na massa do coração. A Pred promoveu redução na massa muscular, enquanto que o L5 não teve efeito. Pred e L5 não alteraram o tecido adiposo. Na análise por microtomografia computadorizada o tratamento com L5 diminuiu BV/TV, Tb/Sp e DA, já a Pred reduziu apenas Tb/Sp. Pred e L5 não promoveram alteração no osso cortical. Pred não alterou parâmetros biomecânicos do fêmur e da tíbia e L5 reduziu energia em quebra da tíbia. Este estudo sugere que o L5 tem o mesmo potencial anti-inflamatório da Pred e que não se mostrou deletério à massa muscular. / Glucocorticoids are used to treat autoimmune and inflammatory diseases. A new compound, arilpirazola (L5) exhibited anti-inflammatory effect and reduced side effect profile. We evaluated the anti-inflammatory actions in vivo L5 and L5 on the effects of structure and biomechanical bone in mice C57BL/6J. Prednisone (Pred) and L5 reduced the overall number of leukocytes in a dose of 2.1 mg/kg.pc/day and 2.4 mg/kg.pc/day, respectively. The Pred decreased body mass and not L5. Pred and L5 caused an increase in heart mass. The Pred promoted reduction in muscle mass, while the L5 had no effect. Pred and L5 did not alter adipose tissue. The analysis by computed microtomography treatment with L5 decreased BV/TV, Tb/Sp and DA, since the only Pred reduced Tb/Sp. Pred and L5 did not promote changes in cortical bone. Pred has not altered biomechanical parameters of the femur and tibia and L5 reduced energy breaks the tibia. This study suggests that the L5 have the same potential anti-inflammatory Pred and was not deleterious to the muscle.

As enfermidades endócrinas, notadamente o hiperadrenocorticismo, têm grande importância dentre os quadros mórbidos que acometem a espécie canina. A produção excessiva de ACTH pode, nas adrenais, estimular o aumento não só de glicocorticóides, mas também de hormônios sexuais. Os objetivos do presente estudo foram: avaliar as concentrações séricas dos hormônios esteroidais sexuais (progesterona, 17-hidroxiprogesterona, testosterona e androstenediona), em cães com hiperadrenocorticismo de decurso natural (não iatrogênico) e em cães hígidos; e correlacionar as alterações do perfil esteroidal sexual em cães com hiperadrenocorticismo às manifestações clínicas tegumentares e sistêmicas. Foram utilizados 14 cães com hiperadrenocorticismo endógeno e 15 cães hígidos, os quais compuseram o Grupo controle. O Grupo 1 (animais com hiperadrenocorticismo) foi submetido às determinações bioquímicas, hematimétricas, exame de urina, ultra- sonografia abdominal e ao teste de supressão com dexametasona em dose baixa com colheita basal e oito horas após supressão. Tanto os animais doentes (Grupo 1) quanto aqueles hígidos do (Grupo 2) foram submetidos ao teste de estimulação com ACTH com determinação dos esteróides sexuais no momento zero e após uma hora da administração do fármaco. Os achados mais freqüentes nos animais doentes foram: polidpsia, poliúria, polifagia, cansaço fácil, intolerância ao exercício, abdômen abaulado, hepatomegalia e alterações dermatológicas. As alterações laboratoriais encontradas nos cães com hiperadrenocorticismo foram: hiperfosfatasemia alcalina, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, leucocitose por neutrofilia, linfopenia, eosinofilia, monocitose, hipercortisolismo basal e após supressão com dexametasona. No exame de urina evidenciou-se hipostenúria, bacteriúria e glicosúria. Na ultra- sonografia, adrenomegalia e hepatomegalia foram os achados mais freqüentes. As determinações dos esteróides sexuais foram realizadas nos dois grupos e os valores detectados nos animais hígidos serviram de comparação com aqueles enfermos onde foram observados, no momento basal, aumentos de testosterona (três cães) e 17-hidroxiprogesterona (um cão). Após o estímulo com ACTH observou-se aumento da testosteronemia em três cães, da 17-OHP em cinco animais e em um hiperprogesteronemia. / The endocrine disorders, especially hyperadrenocorticism, has notorious importance among all the diseases that affect the canine species. The high production of ACTH can stimulate the adrenals to produce highly amount of glicocorticoid and sexual hormones. The aim of this study were: determine the serum concentration of sexual hormones (progesterone, 17-hydroxyprogesterone, testosterone and androstenedione) in dogs with natural hyperadrenocorticism (not iatrogenic) and in health dogs, and correlate the alterations between sexual steroids in dogs with hyperadrenocorticism and the clinical manifestations of skin and systemic. It was selected 14 dogs with natural hyperadrenocorticism and 15 healthy dogs that were the control group. The group 1 (dogs with hyperadrenocorticism) were submitted to bioquimical determination, CBC, urine test, abdominal ultrasonography and the low dose of dexamethasone suppression test, with two gather, basal and eight hours after use of dexamethasone. Both Group 1 and 2 were submitted to ACTH stimulation test with determination of sexual steroids at first moment (zero moment) and after one hour of ACTH. The most often find on group 1 (dogs with hyperadrenocorticism) were: polydpsia, polyuria, polyphagia, high exhaustion exercise intolerance, pot belly abdomen, hepatomegaly and the dermatologic alterations. The laboratorial alterations on Group 1 were: high alkaline phosphatase, high triglycerides, high cholesterol, leukocytosis, neutrofilia, linfopenia, eosinofilia, monocytosis, high basal cortisol and after suppression with dexamethasone. At the urine test hypostenuria, high prevalence of bacteria and glicosúria. At ultrasonography adrenomegaly and hepatomegaly were most frequently finds. The sexual steroids rating were done in both groups and the results of healthy dogs (Group 2) were used of reference values of comparison with sickness dogs (Group 1), at zero moment were seen the rise of values of testosterone (tree dogs) and 17-hydroxyprogesterone (one dog). After stimulations of ACTH were seen the rise of testosterone on tree dogs, the 17-hydroxyprogesterone in five dogs e the progesterone in one dog.

A cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC/MS) é na atualidade a técnica analítica de escolha para a detecção de esteróides androgênicos anabólicos (EAA) em amostras biológicas. Os EAA, apesar de determinarem alterações endócrinas e bioquímicas graves em seus usuários, são amplamente utilizados no âmbito esportivo. O presente trabalho teve como objetivo a validação de um método para a detecção de EAA e/ou seus produtos de iotransformação em urina e avaliação de seus efeitos tóxicos sobre os parâmetros séricos laboratoriais. O estudo foi realizado em 20 voluntários freqüentadores de academias da cidade de São Paulo (SP), os quais responderam a um questionário e cederam amostras de urina e sangue. Os dados obtidos dos 10 voluntários usuários de EAA (teste) foram estatisticamente comparados com os de 10 voluntários não usuários (controle). O método analítico validado apresentou-se adequado para a aplicação em programas de controle de dopagem no esporte e os dados séricos demonstraram aumento nos níveis de LDL (178,2 vs 117,6 mg/dL; p< 0.001) e queda nos de HDL (13,8 vs 44,6 mg/dL; p< 0.001), LH (0,45 vs 2,69 mUI/dL; p< 0.001) e FSH (0,67 vs 3,88 mUI/dL; p< 0.001) nos voluntários usuários de EAA. Os questionários demonstraram diferentes padrões de uso para os EAA, os quais eram obtidos sem receita médica em farmácias ou em lojas de suplementos alimentares e utilizados em associação com outros fármacos ou drogas de abuso. Os resultados desse trabalho demonstram alterações no perfil lipoprotéico e supressão do eixo hipofisário em usuários crônicos de EAA, além da necessidade da adoção de ações educativas junto à população expostas a tais substâncias. / Gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS) has been applied as standard analytical method for detection of anabolic steroids (AAS) in biological samples. The AAS have been used extensively in sports, despite of their reported toxicological effects in biochemistry and endocrine profile. The aim of this study was the validation of an analytical method for the detection of AAS and their metabolites in urine samples and evaluation of their effects on blood laboratories parameters. The study was conducted with 20 volunteers of professionally equipped private gym in São Paulo. Urine and blood samples were drawn and a questionnaire was answered. The data from 10 active users of AAS (test group) was statistically compared to 10 nonusers (control group). The optimized method was shown to be suitable for sports antidoping control programs and significant differences were found in laboratory parameters of test group: increase of LDL (178,2 vs 117,6 mg/dL; p< 0.001) and reduction in HDL (13,8 vs 44,6 mg/dL; p< 0.001), LH (0,45 vs 2,69 mUI/dL; p< 0.001) and FSH (0,67 vs 3,88 mUI/dL; p< 0.001) serum levels. The questionnaire demonstrated distinct user\'s profile of AAS, which were bought in drugstores or food supplemental stores and were frequently used in association with other medicines and drugs of abuse. These results indicate that chronic anabolic steroids intakes cause an alteration in serum lipoprotein profile and suppression of the hypothalamus-pituitary glandgonad axis as well as the necessity of educational programs to people exposed to AAS.

Desde as primeiras dosagens de hormônios esteróides efetuadas em fezes por Adlercreuetz em 1976, os estudos baseados no uso desta técnica se multiplicaram com animais selvagens, como também em algumas espécies domésticas e, mais recentemente, em animais de laboratório. Diversos protocolos para a extração dos esteróides fecais foram elaborados e estão disponíveis na literatura. A eficiência dos mesmos pode ser avaliada medindo a sua capacidade de recuperar uma quantidade conhecida de hormônio marcado radioativamente e incorporado a algumas amostras fecais antes de submetê-las ao processo de extração. O presente trabalho teve por objetivo a determinação da capacidade de recuperação de três protocolos de extração de esteróides fecais dentre os mais freqüentemente empregados no nosso meio. São eles os protocolos descritos respectivamente por Brown et al. (1994), Graham et al. (2001) e Schwarzenberger et al. (1991). O estudo abrange sete espécies: hamster Sírio (Mesocricetus auratus), cutia (Dasyprocta aguti), lobo guará (Chrysocyon brachyurus), cabra doméstica (Capra hircus), ovelha doméstica (Ovis aries), chimpanzé (Pan troglodytes), gorila (Gorilla gorilla) e orangotango (Pongo pygmaeus) e três hormônios: progesterona, testosterona e cortisol. O protocolo de Graham alcançou maiores índices de recuperação da progesterona e da testosterona triciada. O protocolo de Schwarzenberger mostrou-se mais eficiente, do ponto de vista numérico, na recuperação do cortisol triciado. Os resultados obtidos sugerem, porém, que a metodologia empregada para avaliação da capacidade de recuperação dos três protocolos subestimou a eficiência do protocolo de Brown. / Adlercreutz performed the first quantifications of steroid hormones in human feces in 1976. Since then, studies based on this technique have been applied to wildlife, domestic animals, and recently to laboratory animals. Several procedures for extracting fecal steroids were established and are available in the literature. It is possible to assess the efficiency of these techniques measuring how they recover known amounts of radio-labelled hormones added to some fecal samples just before extraction. The aim of this study was to determine the recovery of three procedures for fecal steroid extraction that are commonly used in our laboratory. We assessed, then, how the techniques described by Brown et al. (1994), Graham et al. (2001) and Schwarzenberger et al. (1991) recover 3H-progesterone, 3H-testosterone and 3H-cortisol in the feces from eight animal species: Syrian hamster (Mesocricetus auratus), agouti (Dasyprocta aguti), maned wolf (Chrysocyon brachyurus), goat (Capra hircus), sheep (Ovis aries), chimpanzee (Pan troglodytes), gorilla (Gorilla gorilla) e orangutan (Pongo pygmaeus). Average recovery of Graham et al. (2001) procedure was higher for progesterone and testosterone and Schwarzenberger et al. (1991) procedure recovered more cortisol. However, our results suggested that the efficiency of the method established by Brown et al. (1994) was underestimated.

O objetivo deste trabalho foi avaliar de maneira detalhada e sistemática os perfis hormonais sanguíneos, fecais, urinários e salivares das progestinas e estrógenos durante o ciclo estral induzido de ovinos. Foram colhidas amostras diárias durante um período de 60 dias de sete fêmeas adultas (n=8) saudáveis e sexualmente maduras. Antes do início da fase de colheita das amostras, todos os animais foram submetidos ao protocolo de tratamento hormonal para indução e sincronização do cio durante dozes dias. O primeiro ciclo ovariano de cada animal desse experimento, detectado logo após a indução do cio foi descartado e seus valores não foram utilizados nas análises hormonais, pois poderiam estar sob o efeito dos hormônios exógenos. A concentração dos progestágenos foi determinada pelas técnicas analíticas de Radioimunoensaio (RIE) e Enzimaimunoensaio (EIE) e os estrógenos por RIE. Houve correlações entre as concentrações de progesterona medidas nas matrizes sérica e fecal, sérica e salivar, fecal e salivar (r=0,90, p<0,0001; r=0,90, p<0,0001; r=0,92, p<0,0001, respectivamente) durante os ciclos estrais observados (n=15). Obtivemos correlação (r=0,74, p<0,0001) entre as concentrações dos estrógenos quantificados nas matrizes sérica e fecal, mas não entre estas concentrações e aquelas medidas na matriz salivar. Não obtivemos nenhuma correlação entre as concentrações medidas na matriz urinária com as quantificadas nas outras matrizes para nenhum dos hormônios estudados. Obtivemos correlação entre as concentrações de progesterona medidas na matriz fecal pelos métodos de RIE e EIE (r=0,78, p<0,0001) e também na matriz salivar pelos dois métodos empregados (r=0,81, p<0,0001). Os resultados do presente experimento indicam que os imunoensaios utilizados podem ser utilizados para a avaliação das concentrações de progestágenos nas matrizes fecal e salivar durante o ciclo estral em ovinos. / The aim of the present work was evaluate the hormonal profiles of progestins and estrogens in blood, feces, urine and saliva during the induced estral cycle in ovine. Samples were collected daily a 60-day period from eight adult (n=8) cycling ewes. The animals were previously submitted to a protocol of estrus induction and synchronization for twelve days. In order to avoid the effect of exogenous hormones, the first cycle immediately after the synchronization was not considered for hormonal analysis. Progestagen concentrations were quantified by two analytical techniques, radioimmunoassay (RIA) and enzyme immunoassay (EIA). Estrogen concentrations were assessed by radioimmunoassay. Correlations in progesterone concentrations were found to be significant for serum and feces, serum and saliva and feces and saliva (r=0.90, p<0.0001; r=0.90, p<0.0001; r=0.92, p<0.0001, respectively) during the estrous cycles (n=15). Estrogen concentrations in the serum and feces were also positively correlated (r=0.74, p<0.0001). Salivary concentrations of estrogens were not correlated with fecal or serum concentrations of the same hormone. No correlation was found between urinary concentrations and concentrations found in other matrixes for both progestagens and estrogens. Concentrations of progestagens obtained using RIA and EIA were correlated on feces (r=0.78, p<0.0001) and saliva (r=0.81, p<0.0001). Results indicate that both immunoassays used in the present experiment can be used to evaluate progestagen concentrations on fecal and salivary matrixes during the estrous cycle of sheep.

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2018-05-25T13:06:30Z No. of bitstreams: 2 Leilaine Elisa Romano.pdf: 1471293 bytes, checksum: 6b285121668b66c678267cc210609ebe (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-25T13:06:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Leilaine Elisa Romano.pdf: 1471293 bytes, checksum: 6b285121668b66c678267cc210609ebe (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-05 / Emerging contaminants can be defined as chemical compounds in commercial products, which can be recorded in environmental and biological matrices, although they do not have legal regulations yet regarding their disposal and presence in the environment. Drugs as emerging pollutants have stood out among researches due to their impact on the environment and health, for example by impairing surface water quality and so its consumption. The presence of these substances into the environment occurs because of their use to treat diseases in humanbeings and animals. Drugs are, so, realeased by excretion, and also by effluents into water bodies. The consumption of non-steroidal anti-inflammatory drugs by the population has been quite high due to their analgesic and antipyretic properties. Thus, this study aimed at evaluating the presence of diclofenac sodium as an anti-inflammatory drug in river of Cascavel city, Paraná. Water samples were collected from the Cascavel river, from July to November, 2017. Samples were pH adjusted, filtrated and solid phase extracted with SPE cartridges. After elution, the analytes were analyzed by High Performance Liquid Chromatography, using C18 column and UV-VIS detector. The method underwent a validation study, so that linearity, limit of detection and quantification, intermediate precision and recovery were analyzed. The data show that the studied parameters are in accordance with the current legislation on analytical validation. The samples results, analyzed by the proposed method, showed some ranging from 0.70 to 1.06 μg.L-1. Chapter I introduces the scientific paper containing the chromatographic method optimization to determine diclofenac sodium in environmental samples as well as the results concerning its occurrence in the studied samples. / Contaminantes emergentes podem ser definidos como compostos químicos presentes em produtos comerciais, que podem ser encontrados em matrizes ambientais e biológicas e que ainda não possuem regulamentação legal quanto ao descarte e à presença no ambiente. Fármacos como contaminantes emergentes têm ganhado destaque entre as pesquisas devido ao impacto que podem causar no meio ambiente e na saúde, a partir, por exemplo, do comprometimento da qualidade das águas superficiais e para consumo. A introdução destas substâncias no ambiente ocorre por uso no tratamento de doenças em humanos e animais, as quais são, então, liberadas por excreção, e também pelo lançamento de efluentes em corpos hídricos. O consumo de fármacos anti-inflamatórios não esteroides pela população é bastante elevado devido também às suas propriedades analgésicas e antipiréticas. Por conseguinte, o objetivo deste trabalho foi avaliar a presença do fármaco anti-inflamatório diclofenaco sódico em águas superficiais de rio na cidade de Cascavel-PR. Foram coletadas amostras de água no rio Cascavel no período de agosto a novembro de 2017. As amostras passaram por ajuste no pH, filtração e extração em fase sólida com cartuchos SPE. Após a eluição, os analitos foram analisados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, utilizando coluna C18 e detector UV-VIS. O método passou por estudo de validação, em que foram analisados a linearidade, o limite de detecção e quantificação, a precisão intermediária e a recuperação. Os dados registram que tais parâmetros estão em conformidade com a legislação vigente sobre validação analítica. Os resultados das amostras analisadas pelo método prosposto apresentaram variação de 0,70 a 1,06 μg.L-1. O Capítulo I apresenta o artigo científico contendo a otimização de um método cromatográfico para determinação de diclofenaco sódico em amostras ambientais e os resultados em termos da ocorrência deste nas amostras estudadas.

Apesar do recente conhecimento do papel anti-inflamatório e anti-nociceptivo do H2S na artrite induzida por carragenina (CGN) em rato, os mecanismos envolvidos ainda não são conhecidos. Tampouco se sabe se compostos híbridos antiinflamatórios não esteroides (AINEs) doadores de H2S possuem vantagens farmacológicas adicionais quando comparados aos doadores de H2S clássicos. Apesar de H2S exercer um efeito anti-nociceptivo em modelos de inflamação e dor aguda, pouco se sabe sobre o papel deste gás na dor crônica. Neste estudo investigou-se os mecanismos do H2S no modelo de sinovite e participação desse gás na dor crônica. Verificou-se que os canais de K+ATP, canais de Ca2+ tipo L ou receptores TRPV1 não estão envolvidos no mecanismo protetor do H2S na sinovite, diminuição da IL-1b e aumento da IL-10 e não houve diferença em relação a participação das enzimas oxidantes GPx e GR. Ainda, o tratamento agudo com o doador de H2S não reverteu o desconforto do teste do Rota Rod e alodinia térmica. / Despite recent knowledge of the anti-inflammatory and anti-nociceptive role of H2S in the carrageenin-induced arthritis (CGN) in rats, the mechanisms involved are not yet known. Nor is it known whether hybrid compounds antiinflammatory drugs (NSAIDs) H2S donors have additional pharmacological advantages when compared to classical H2S donors. Although H2S exert an anti-nociceptive effect in models of inflammation and acute pain, little is known about the role of this gas in chronic pain . In this study we investigated the protective mechanisms of H2S in the model of synovitis and chronic pain . It was found that the K+ATP channel, L type Ca2+ channel or TRPV1 receptors are not involved in the protective mechanism of H2S in synovitis , decreased IL-1b and increased IL-10 and there was no difference in the participation of oxidant enzymes GPx and GR . Still, the acute treatment with H2S donor did not reverse the discomfort of the Rota Rod test and thermal allodynia.