Thesis (M.S.)--West Virginia University, 2007. / Title from document title page. Document formatted into pages; contains xi, 87 p. : ill. Vita. Includes abstract. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-12Bitstream added on 2014-06-13T18:41:01Z : No. of bitstreams: 1 milbradt_el_dr_botfmvz.pdf: 801758 bytes, checksum: 520417bef297ba62a8b9c93359de36a6 (MD5) / Com objetivo de avaliar o uso de ácidos orgânicos (AOs) e produto de exclusão competitiva (EC) como alternativa ao antimicrobiano como promotor de crescimento, foram realizados dois experimentos. O primeiro objetivou avaliar a influência dos produtos no desempenho zootécnico, pH do conteúdo do inglúvio e ceco, altura dos vilos intestinais e produção de ácidos graxos voláteis (AGVs) no ceco. Na primeira semana de vida, os AOs influenciaram negativamente os parâmetros de desempenho. Na fase de engorda, o consumo de ração e conversão alimentar do grupo que recebeu AO foi inferior ao dos demais grupos. As aves que receberam AOs e produto de EC apresentaram concentrações mais elevadas de ácido propiônico, aos 14 dias, e ácido butírico aos 28, 56 e 70 dias de vida. Os valores de pH e altura dos vilos intestinais não foram influenciados pelos tratamentos. O segundo experimento objetivou avaliar a influência dos AOs e produto de EC, administrados continuamente na ração e temporariamente na água, sobre a produção de AGVs no ceco, população de bactérias do gênero Lactobacillus e da família Enterobacteriaceae e desafio de Salmonella Enteritidis (SE). A administração contínua dos ácidos orgânicos e produto de EC influenciou positivamente a quantidade de Lactobacillus no inglúvio e ceco, elevou a concentração de ácido butírico e reduziu a quantidade de bactérias da família Enterobacteriaceae e a contaminação por SE no ceco. Não houve efeito da administração dos tratamentos via água de bebida sobre a concentração de AGVs, contaminação de SE no inglúvio e ceco. A suplementação contínua de AOs e produto de EC resultou em excelente desempenho zootécnico e reduziu a colonização SE no ceco, demonstrando serem alternativas viáveis ao uso dos antimicrobianos / To evaluate the use of organic acids (OAs) and product of competitive exclusion (CE) as an alternative to antimicrobial growth promoter, two experiments were conducted. The first aimed to evaluate the influence on the performance of the products, the pH content of the crop and cecum, intestinal villous height and production of volatile fatty acids (VFAs) in the cecum. In the first week of life, the OAs negatively influenced the performance parameters. In the fattening phase, feed intake and feed conversion in the group receiving OAs was lower than the other groups. Birds that received OAs and product EC showed higher concentrations of propionic acid, at 14 days, and butyric acid at 28, 56 and 70 days of life. The pH and intestinal villous height were not affected by treatments. The second experiment evaluated the influence of the OAs and CE product, administered continuously in the diet and temporarily in the water, on the production of VFAs in the cecum, the population of bacteria of the genus Lactobacillus and Enterobacteriaceae and challenge of Salmonella Enteritidis (SE). Continuous administration of OAs and CE product increased the concentration of butyric acid and reduced contamination by SE in the cecum. There was no effect of management treatments in drinking water on the concentration of VFAs, SE contamination in crop and cecum. The continuous supplementation of OAs and CE product resulted in excellent growth performance and reduced SE colonization in the cecum, showing that they are viable alternatives to the use of antimicrobials

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:55:04Z : No. of bitstreams: 1 000858305.pdf: 630893 bytes, checksum: e53c41b93a6a9b4cede596f30d685272 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Utilizou-se o método de Separação Imunomagnética associada a Bacteriófago para detectar os seguintes sorovares: Salmonella Heidelberg, Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium, em amostras de sobrecoxas de frango contaminadas artificialmente. Para certificarmo-nos da eficiência do método, comparamos esta técnica com os testes de diagnóstico usuais para este patógeno: a análise bacteriológica padrão, que inclui a etapa de pré-enriquecimento, enriquecimento seletivo, realização de testes bioquímicos de triagem e sorologia, e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Na avaliação da capacidade dos testes na detecção de Salmonella em carne de frango, submetemos amostras de sobrecoxas de frango à contaminação artificial com 5, 10 e 100 UFC/25mL de bactéria, para cada um dos sorovares listados anteriormente, totalizando 270 análises, divididas em 90 testes para cada um dos três sorovares, e assim comparamos os resultados obtidos com a análise bacteriológica, PCR e o teste de Separação Imunomagnética associada a Bacteriófago. Ao aferirmos os resultados constatamos que a Separação Imunomagnética associada a Bacteriófago é equiparável ao método bacteriológico recomendado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e com a técnica de PCR, pois 99,6% das amostras foram positivas ao realizarmos o teste de Separação Imunomagnética associado a Bacteriófago e apenas uma amostra de Salmonella Enteritidis foi negativa neste ensaio, na concentração de 5 UFC/25mL. Já no método bacteriológico verificamos 95,5% de positividade, com nove amostras negativas para S. Heidelberg, duas negativas para S. Enteritidis e duas no ensaio com S. Typhimurium. Na técnica de PCR obtivemos 98,5% de positivos, com uma amostra negativa para S. Enteritidis na concentração de 5 UFC/25mL e três negativas para S. Typhimurium. O tempo despendido para a realização de cada teste foi aferido e constatamos... / We used the Immunomagnectic Separarion Assay associated with Bacteriophage to detect the following serovars: Salmonella Enteritidis, Salmonella Heidelberg and Salmonella Typhimurium, in poultry drumstick samples artificially contaminated. We compared the efficiency of this technique to the usual diagnostic tests for Salmonella in food samples: the standard bacteriological analysis, which includes the step of pre-enrichment and selective enrichment, biochemical and serological screening tests, and polymerase chain reaction (PCR). To evaluate the tests capability of Salmonella detection poultry meat samples were submitted to artificial contamination with 5, 10 and 100 CFU/25mL of bacteria, for each of the serovars listed above, totaling 270 analyzes divided into 90 tests for each of the three serovars, and so compare the results obtained with the bacteriological analysis, PCR and Immunomagnetic Separation Bacteriophage assay. We found that the Immunomagnetic Separation Bacteriophage assay was comparable to bacteriological method recommended by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) and the PCR technique, because 99.6% of the samples were positive to accomplish Immunomagnetic Separation Bacteriophage assay and only a sample of Salmonella Enteritidis was negative in this test, in the concentration of 5 CFU/25mL. The bacteriological method check 95.5% positivity, with nine samples negative for S. Heidelberg, two negative for S. Enteritidis and two in the test with S. Typhimurium. In PCR 98.5% positives samples were obtained, with one S. Enteritidis negative sample in the concentration of 5 CFU/25ml and three negative samples for S. Typhimurium. The time for performing each test was measured and the Immunomagnetic Separation Bacteriophage assay was the most rapid test for Salmonella diagnosis, since 20 hours, the conventional bacteriological took 88h and PCR 44h approximately. In this study we confirm the effectiveness of the ... / FAPESP: 2013/04365-3

Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Coorientador: Adriano Sakai Okamoto / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Angelo Berchieri Junior / Banca: Ivens Gomes Guimarães / Resumo: Tendo em vista a variedade de funções da serotonina e poucos estudos em aves sobre o tema, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da serotonina, através do seu precursor (5-hidroxitriptofano) e seu inibidor (m-hidroxibenzilhidrazine), associados à Lactobacillus spp. na resposta imune e na morfometria intestinal de frangos de corte desafiados com Salmonella Enteritidis. A partir da avaliação do comportamento e peso corporal das aves, estabeleceu-se a dose do precursor (5HTP), da serotonina, e do inibidor (NSD1015). Com a dose definida, o estudo foi dividido em dois experimentos, aves sem desafio com S. Enteritidis e aves com desafio. Avaliou-se a resposta imune humoral das aves através das concentrações de IgA no fluido intestinal e IgG no soro sanguíneo e recuperação de S. Enteritidis no conteúdo cecal. A morfometria intestinal foi determinada por meio da avaliação do peso corporal, número e altura das vilosidades no duodeno, e, a disponibilidade de serotonina no duodeno foi observada por ensaios imunoistoquímicos. Serotonina ocasionou alterações caracterizadas por sonolência e diminuiu o ganho de peso das aves. Seu precursor (5HTP) também ocasionou sonolência nas aves, porém em intensidade menor e o ganho de peso foi mantido. As aves em que o inibidor (NSD1015) foi administrado não apresentaram alterações no comportamento e ganho de peso. O precursor, inibidor e Lactobacillus spp. não influenciaram nas concentrações de IgA e IgG, mas o precursor e Lactobacillus spp. reduziram a quantidade de S. Enteritidis no conteúdo cecal. Com relação à morfometria intestinal, as aves tratadas com 5HTP apresentaram aumento no peso corporal, no número e altura das vilosidades no duodeno. Lactobacillus spp. e S. Enteritidis determinaram a elevação de células que imunoexpressaram serotonina no duodeno. Os resultados obtidos nos mostram uma possível interação do precursor e ... / Abstract: Given the variety of functions of serotonin and few studies in birds on the topic, this study aimed to evaluate the effects of serotonin, through its precursor (5-hydroxytryptophan) and its inhibitor (m-hidroxibenzilhidrazine) in association with Lactobacillus spp. in the immune response and the intestinal morphometric of broiler chickens challenged with Salmonella Enteritidis. From the evaluation of the behavior and body weight of the birds, established the dose of the precursor (5HTP), serotonin, and inhibitor (NSD1015). With a defined dose, the study was divided into two experiments, birds without challenge with S. Enteritidis and birds challenge. We evaluated the humoral immune response of the birds by the concentrations of IgA in intestinal fluid and the blood serum IgG recovery and S. Enteritidis in cecal contents. The intestinal morphology was determined by evaluating the weight, number of villi and duodenal villus height, and the availability of serotonin in the duodenum was observed by immunohistochemical assays. Serotonin induced changes characterized by drowsiness and decreased weight gain of birds. Its precursor (5HTP) also caused drowsiness in birds, but at a lower intensity and weight gain was maintained. And the birds in the inhibitor (NSD1015) was administered showed no changes in behavior and weight gain. The precursor, inhibitor and Lactobacillus spp. did not affect the concentrations of IgA and IgG, but the precursor and Lactobacillus spp. reduced the number of S. Enteritidis in cecal contents. With regard to intestinal morphology, 5HTP-treated birds showed an increase in body weight, the number of villi and duodenal villus height. Lactobacillus spp. and S. Enteritidis determined the elevation of cells imunoexpressaram serotonin in the duodenum. The results suggested a possible interaction of the precursor and Lactobacillus, acting on the immune response and development of villi inestinais / Mestre

No Rio Grande do Sul, a Salmonella Enteritidis vem se destacando como o principal microrganismo causador de surtos de doenças transmitidas por alimentos. A capacidade desse sorovar em aderir ao aço inoxidável e ao polietileno, assim como a resistência a desinfetantes comumente utilizados nas indústrias de alimentos foi avaliada e comparada com outros dois sorovares de Salmonella. Para mensurar a aderência bacteriana, corpos de prova de aço inoxidável (2 x 2 x 0,1cm) e de polietileno (2 x 2 x 0,7cm) permaneceram em contato com as culturas bacterianas por 15, 30 e 60 minutos e então ultrasonicados, para a realização das contagens de células aderidas. A resistência bacteriana aos desinfetantes foi avaliada através do teste de suspensão como preconizado pela legislação brasileira. Para desinfecção das superfícies, os corpos de prova permaneceram por 15 minutos em contato com as culturas bacterianas e, após dez minutos de exposição aos desinfetantes, o número de células sobreviventes foi determinado. A aderência bacteriana após os tempos de exposição indicou que a S. Typhimurium aderiu significativamente mais ao aço inoxidável que ao polietileno, enquanto que a S. Bredeney aderiu mais ao polietileno. Entretanto, não houve diferenças significativas nos níveis de aderência do sorovar S. Enteritidis, mesmo que as análises de microscopia eletrônica de varredura e de hidrofobicidade tenham indicado diferenças significativas entre os materiais. Foi observada a produção de bioemulsificante pelos três sorovares de Salmonella, sendo que a S. Enteritidis e a S. Bredeney produziram quantidades bem maiores que a S. Typhimurium. A resistência aos desinfetantes ácido peracético, hipoclorito de sódio e quaternário de amônio, quando avaliados pelo teste de suspensão, demonstraram que, nas concentrações indicadas pelo fabricante, os três compostos foram capazes de inativar os três sorovares de Salmonella. Entretanto, na concentração de 200ppm de hipoclorito de sódio comumente utilizada no Brasil, o sorovar S. Enteritidis foi o mais resistente, uma vez que sobreviveu até 15 minutos de exposição. Nenhum desinfetante conseguiu inativar todas as células aderidas (aproximadamente 5log UFC/cm2) em aço inoxidável e polietileno, exceto o quaternário de amônio que eliminou totalmente a S. Enteritidis do aço inoxidável. Tendo em vista a importância desses microrganismos como patógenos alimentares, cuidados especiais devem ser tomados nos processos de desinfecção e contaminação cruzada por Salmonella. / In Rio Grande do Sul, southern Brazil, Salmonella Enteritidis have been considered the principal microorganism responsible for foodborne disease. The ability of this sorovar in adhering to stainless steel and polyethylene, as well as the resistance to biocides commonly used in food industries was evaluated and compared with other two serovars of Salmonella. To measure the bacterial adherence, coupons of stainless steel (2 x 2 x 0,1cm) and polyethylene (2 x 2 x 0,7cm) remained in contact with the bacterial cultures for periods of 15, 30 e 60 minutes and so that ultrassonicated for count the adherent cells. The bacterial resistance to biocides was evaluated through the suspension test as praised for the Brazilian legislation. For surfaces disinfection, the coupons remained for 15 minutes in contact with bacterial cultures and after ten minutes of exposition to biocides, the surviving cells were determined. Bacterial adherence after 15, 30, and 60 minutes of exposure indicated that S. Typhimurium adhered significantly more to stainless steel than to polyethylene, whereas S. Bredeney adhered more to polyethylene than to stainless steel. However, there was no significative difference in adherence levels of S. Enteritidis, even when analysis of sacanning electronic microscopy has indicated expressive differences between adherence to the materials. The production of bioemulsifier by Salmonella serovars was observed, being that S. Enteritidis and S. Bredeney produced larger amounts than S. Typhimurium. The resistance to peracetic acid, and quaternary ammonium biocides when evaluated using suspension test in the presence of organic matter, demonstrated that in the concentrations indicated by manufacturers, all of the three biocides were able to inactivate the three serovars. However, using 200ppm of sodium hypochlorite, commonly used in Brazil, S. Enteritidis showed to be the most resistant serovar, since it has survived for up to 15 minutes of exposure. None of the biocides inactivate all the cells adhered (approximately 5log CFU/cm2) in stainless steel and polyethylene, except the quaternary ammonium which totally eliminated S. Enteritidis on the stainless steel surface. In view of the importance of these micorrganismos as alimentary pathogens, special cares of disinfection processes and cross-contamination for Salmonella must be taken.

No Rio Grande do Sul, a Salmonella Enteritidis vem se destacando como o principal microrganismo causador de surtos de doenças transmitidas por alimentos. A capacidade desse sorovar em aderir ao aço inoxidável e ao polietileno, assim como a resistência a desinfetantes comumente utilizados nas indústrias de alimentos foi avaliada e comparada com outros dois sorovares de Salmonella. Para mensurar a aderência bacteriana, corpos de prova de aço inoxidável (2 x 2 x 0,1cm) e de polietileno (2 x 2 x 0,7cm) permaneceram em contato com as culturas bacterianas por 15, 30 e 60 minutos e então ultrasonicados, para a realização das contagens de células aderidas. A resistência bacteriana aos desinfetantes foi avaliada através do teste de suspensão como preconizado pela legislação brasileira. Para desinfecção das superfícies, os corpos de prova permaneceram por 15 minutos em contato com as culturas bacterianas e, após dez minutos de exposição aos desinfetantes, o número de células sobreviventes foi determinado. A aderência bacteriana após os tempos de exposição indicou que a S. Typhimurium aderiu significativamente mais ao aço inoxidável que ao polietileno, enquanto que a S. Bredeney aderiu mais ao polietileno. Entretanto, não houve diferenças significativas nos níveis de aderência do sorovar S. Enteritidis, mesmo que as análises de microscopia eletrônica de varredura e de hidrofobicidade tenham indicado diferenças significativas entre os materiais. Foi observada a produção de bioemulsificante pelos três sorovares de Salmonella, sendo que a S. Enteritidis e a S. Bredeney produziram quantidades bem maiores que a S. Typhimurium. A resistência aos desinfetantes ácido peracético, hipoclorito de sódio e quaternário de amônio, quando avaliados pelo teste de suspensão, demonstraram que, nas concentrações indicadas pelo fabricante, os três compostos foram capazes de inativar os três sorovares de Salmonella. Entretanto, na concentração de 200ppm de hipoclorito de sódio comumente utilizada no Brasil, o sorovar S. Enteritidis foi o mais resistente, uma vez que sobreviveu até 15 minutos de exposição. Nenhum desinfetante conseguiu inativar todas as células aderidas (aproximadamente 5log UFC/cm2) em aço inoxidável e polietileno, exceto o quaternário de amônio que eliminou totalmente a S. Enteritidis do aço inoxidável. Tendo em vista a importância desses microrganismos como patógenos alimentares, cuidados especiais devem ser tomados nos processos de desinfecção e contaminação cruzada por Salmonella. / In Rio Grande do Sul, southern Brazil, Salmonella Enteritidis have been considered the principal microorganism responsible for foodborne disease. The ability of this sorovar in adhering to stainless steel and polyethylene, as well as the resistance to biocides commonly used in food industries was evaluated and compared with other two serovars of Salmonella. To measure the bacterial adherence, coupons of stainless steel (2 x 2 x 0,1cm) and polyethylene (2 x 2 x 0,7cm) remained in contact with the bacterial cultures for periods of 15, 30 e 60 minutes and so that ultrassonicated for count the adherent cells. The bacterial resistance to biocides was evaluated through the suspension test as praised for the Brazilian legislation. For surfaces disinfection, the coupons remained for 15 minutes in contact with bacterial cultures and after ten minutes of exposition to biocides, the surviving cells were determined. Bacterial adherence after 15, 30, and 60 minutes of exposure indicated that S. Typhimurium adhered significantly more to stainless steel than to polyethylene, whereas S. Bredeney adhered more to polyethylene than to stainless steel. However, there was no significative difference in adherence levels of S. Enteritidis, even when analysis of sacanning electronic microscopy has indicated expressive differences between adherence to the materials. The production of bioemulsifier by Salmonella serovars was observed, being that S. Enteritidis and S. Bredeney produced larger amounts than S. Typhimurium. The resistance to peracetic acid, and quaternary ammonium biocides when evaluated using suspension test in the presence of organic matter, demonstrated that in the concentrations indicated by manufacturers, all of the three biocides were able to inactivate the three serovars. However, using 200ppm of sodium hypochlorite, commonly used in Brazil, S. Enteritidis showed to be the most resistant serovar, since it has survived for up to 15 minutes of exposure. None of the biocides inactivate all the cells adhered (approximately 5log CFU/cm2) in stainless steel and polyethylene, except the quaternary ammonium which totally eliminated S. Enteritidis on the stainless steel surface. In view of the importance of these micorrganismos as alimentary pathogens, special cares of disinfection processes and cross-contamination for Salmonella must be taken.

Salmonella Enteritidis SE86 tem sido a principal responsável por surtos de salmonelose no Rio Grande do Sul, desde 1999. Essa bactéria apresenta várias características que a diferencia de outros sorovares de Salmonella, dentre elas a capacidade de produzir biossurfactante. Porém, a caracterização desse composto e o motivo pelo qual ele é produzido ainda não foram investigados. Assim, esse estudo teve como objetivo caracterizar o biossurfactante produzido por S. Enteriditis SE86 e verificar algumas de suas prováveis funções, como por exemplo, a influência desse composto na aderência e na resistência a desinfetantes, em folhas de alface. A produção de biossurfactante por S. Enteriditis SE86 foi avaliada em caldo infusão cérebro e coração (BHI), em meio mínimo e em folhas de alface. Foram realizados testes para caracterização do composto e S. Enteritidis SE86, com e sem biossurfactante, foi inoculada em folhas de alface, a fim de avaliar a influência do biossurfactante na aderência e resistência da bactéria a diversos métodos de desinfecção de vegetais folhosos. Os resultados demonstraram que o maior índice de emulsificação (IE24: 62,95% após 72 horas) foi produzido em caldo BHI, mas a bactéria também foi capaz de produzir biossurfactante em meio mínimo (IE24: 46% após 46 h) e em contato com as folhas de alface (IE24: 52,15% após 120h). Os testes de caracterização do demonstraram que o biossurfactante é um composto polimérico que apresenta estabilidade em diferentes pH, temperatura e salinidade. O biossurfactante aumentou a aderência de S. Enteritidis SE86 (4,1 LogUFC/cm2 para 7,3 Log UFC/cm2 após 60 minutos) e contribuiu para o aumento da resistência do patógeno na superfície das folhas de alface para todos os sanitizantes testados. / Salmonella Enteritidis SE86 has been recognized for outbreaks of salmonellosis in Rio Grande do Sul-RS since 1999. This bacteria shows several characteristics that differ it from other serovars, as its ability to produce biosurfactant. However, the characterization of this compound and the reason why its produced have not been investigated yet. The present study aimed to characterize the biosurfactant produced by S. Enteritidis SE86 and to check some of their probable functions, as checking the influence of this compound in the adherence and resistance of food pathogen on lettuce leaves. The biosurfactant production by S. Enteritidis SE86 was evaluated in Brain Heart Infusion broth (BHI), in minimal medium and on lettuce leaves. Several tests were taken to characterize the compound produced and S. Enteritidis SE86 with and without biosurfactant, was inoculated on lettuce leaves to evaluate the influence of biosurfactant in adherence and resistance to several bacterial disinfection methods of leafy vegetables. The results showed that the more emulsification index (IE24: 62.95% after 72 hours) was produced in BHI broth, but S.Enteritidis SE86 was also able to produced biosurfactants in minimal medium (IE24: 46% after 46 hours) and on lettuce leaves (IE24: 52.15% after 120 hours). The characterization tests showed that the biosurfactant is a polymeric compound which is stable at different pH, temperature and salinity. The biosurfactant increased adherence of S. Enteritidis SE86 (4.1 LogUFC / cm2 to 7.3 log CFU / cm2 after 60 minutes) and contributed to increasing pathogen resistance on surface of lettuce leaves for all tested sanitizers.

Salmonella é um dos principais agentes de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA) em todo o mundo. No Rio Grande do Sul, uma cepa de Salmonella Enteritidis vem sendo identificada como o principal agente causador de DTA na última década, a qual foi nominada SE86. Quando comparada com outros sorovares de Salmonella, a SE86 demonstrou maior capacidade de adaptação ácida e térmica, além de maior resistência contra diferentes sanificantes. O presente estudo teve como objetivo investigar o envolvimento dos genes rpoS e dps na resistência ao hipoclorito de sódio e do gene ompR na adaptação ácida e resistência térmica da cepa S. Enteritidis SE86. Os genes avaliados foram atenuados pela técnica de Knockout e a expressão dos mesmos foi investigada pela técnica Epitope Tagging - 3 x FLAG. Os resultados demonstraram que a cepa mutante SE86, sem a presença do gene dps ( dps), demonstrou uma maior sensibilidade em relação à cepa SE86 Wild Type (WT), após a exposição ao hipoclorito de sódio a 200 ppm. As proteínas Rpos e Dps foram ativamente expressas nas mesmas condições de exposição ao hipoclorito de sódio, demonstrando assim a relação destes genes com o estresse oxidativo provocado por hipoclorito de sódio na SE86. O envolvimento do gene ompR na resistência térmica foi investigado após a adaptação ácida de SE86 WT e do mutante ompR. As células ácido adaptadas do mutante ompR foram completamente inativadas após 240 minutos de exposição a temperatura de 52º C, enquanto que as células WT resistiram até 300 minutos de exposição. A expressão da proteína OmpR foi observada por Western blotting e confirmou a relação da adaptação ácida com a maior resistência térmica da SE86. / Salmonella is one of the main agents of foodborne diseases worldwide. In Rio Grande do Sul, a clone of Salmonella Enteritidis has been identified as the main cause of foodborne diseases in the last decade, which was named SE86. The the present study aimed to investigate the involvement of rpoS and dps genes in resistance to sodium hypochlorite and ompR gene in acid adaptation and thermal resistance of the strain S. Enteritidis SE86. The genes evaluated were attenuated by knockout technique and their expression was determined by tagged (3XFLAG) strains. The results demonstrated that strain S. Enteritidis SE86 without the presence of dps gene ( dps) showed a higher sensitivity to the wild type strain SE86 (WT) when exposed to sodium hypochlorite at 200 ppm. Furthermore, RpoS and Dps proteins were actively expressed in these experimental conditions, thus demonstrating the relationship of these genes with oxidative stress in S. Enteritidis SE86 caused by sodium hypochlorite. The involvement of ompR gene in thermal resistance was observed after the acid adaptation of S. Enteritidis SE86 WT and ompR since cells adapted acid without the presence of ompR have been completely inactivated when exposed to 240 min at temperature of 52 °C, while WT cells resisted until 300 min of exposure. The expression of the OmpR protein by western blotting confirmed the necessity of the acid adaptation for that S. Enteritidis SE86 resists to high temperatures.

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Nilce Maria Soares Queiroz Gama / Resumo: Devido ao grande número de casos de toxinfecção alimentar e aos prejuízos sócio-econômicos causados pela Salmonella Enteritidis aos seres humanos, tornam-se necessário estudos sobre a prevenção e controle desta bactéria nos plantéis avícolas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a análise do emprego de bacterinas inativadas oleosas contra Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE) em aves de postura comercial, visando prevenir a excreção fecal e a contaminação dos ovos. Foram utilizadas três formulações de bacterinas comerciais de SE em emulsão oleosa. As aves foram vacinadas na oitava e décima sexta semana de idade e foi mantido um grupo de aves sem vacinação (controle). Na vigésima semana de idade, treze aves de cada tratamento foram desafiadas com uma dose oral de aproximadamente 109 células viáveis de SE fagotipo 4 (resistente ao ácido nalidíxico e a espectomicina), sendo que este procedimento foi repetido na vigésima quinta e trigésima primeira semanas de idade. A eficácia das vacinas empregadas foi conferida através de exames laboratoriais, para pesquisa de SE no conteúdo cecal, baço, ovário e ovos. A vacinação conferiu proteção parcial contra colonização de SE no ceco e contra eliminação da bactéria nas fezes e nos ovos, portanto, recomenda-se que o uso das bacterinas seja complementado com outras formas de controle para SE. / Abstract: Due to the great number of outbreaks of food poisoning and the socioeconomic issues caused to the human beings by the Salmonella Enteritidis, it becomes necessary the study on the prevention and control of this bacterium in the poultry flocks. Thus, the objective of this work was the analysis of the use of bacterins against Salmonella Enteritidis infection in commercial birds, aiming to prevent the fecal excretion and the contamination of eggs. Have been used three Salmonella Enteritidis oil-emulsion commercial bacterins formulations. The laying hens were vaccinated in the eighth and sixteenth weeks old and one group of birds was kept as nonvacinated control. On twentieth weeks ago, thirteen birds of each treatment were challenged with an oral dose of approximately 109 viable cells of phage type 4 Salmonella Enteritidis (resistant to the acid nalidixic and the espectomicin), this procedure was repeated in the twentieth fifth and thirtieth first weeks ago. The efficacy of employed vaccines was conferred through laboratorial examinations, for research of SE from fecal samples, spleen, ovary and eggs. The vaccination conferred partial protection against caecal colonization and against shedding of SE in the feces and eggs, therefore, it is recommended that the use of the killed bacterins be complemented with other forms of SE control. / Mestre

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Salmonella enterica es rutinariamente encontrada en el tracto gastrointestinal de una amplia variedad de animales y generalmente no causa enfermedad en ellos. Sin embargo, cuando causa enfermedad, las manifestaciones comunes de salmonelosis en el ganado incluyen diarrea, neumonía, abortos y muerte. En humanos, normalmente se presenta como gastroenteritis autolimitada; no obstante, en niños, pacientes inmunodeprimidos o ancianos, puede llevar a la muerte, si no es tratada apropiadamente. Esta investigación busca detectar y caracterizar la resistencia antimicrobiana de S. enterica en muestras de heces de bovinos de comunas rurales de la Región Metropolitana, Chile. Para ello se obtuvieron 670 muestras de heces ambientales de bovinos de lechería, en un total de 14 muestreos en 4 localidades: María Pinto, Peñaflor, Melipilla e Isla Maipo. Las muestras fueron procesadas en el Laboratorio de Enfermedades Infecciosas, de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile, donde se realizó el aislamiento y confirmación por PCR, y posteriormente se analizaron en cuanto a su resistencia a antimicrobianos. Se registró un 6,7% de detección, de las cuales un 54% correspondió a S. enterica ser. Livingstone, 39% a S. enterica ser. Typhimurium y 7% a S. enterica ser. Infantis; con una detección de 6,7% en Isla Maipo, 9,2% en Peñaflor y 0% para Melipilla y María Pinto. Los mayores índices de resistencia antimicrobiana se presentaron contra ciprofloxacino, tetraciclina y cefotaxima, expresados en 8 perfiles distintos. Se encontró asociación estadísticamente significativa entre las variables lugar de detección, perfiles de resistencia y serotipos detectados. Si bien los valores de resistencia y multiresistencia a antimicrobianos encontrados no son excepcionalmente altos, es importante destacar que esto no debe ser motivo de disminución de la atención a esta bacteria, debido a los índices y alertas internacionales / Salmonella enterica is routinely found in the gastrointestinal tract of a wide variety of animals and generally does not cause disease. However, when it causes, common manifestations of salmonellosis in cattle include diarrhea, pneumonia, abortions and death. In humans, it usually presents as self-limited gastroenteritis; but, in children, immunosuppressed or elderly patients, it can lead to death, it can lead to death, if not treated properly. This research seeks to detect and characterize the antimicrobial resistance of S. enterica in stool samples of bovines from rural communes of the Metropolitan Region, Chile. For this, 670 samples of environmental feces of dairy cattle were obtained, in a total of 14 samplings from dairies located in 4 localities: María Pinto, Peñaflor, Melipilla and Isla Maipo. The samples were processed in the Laboratory of Infectious Diseases, in the Faculty of Veterinary and Animal Sciences of the University of Chile, where the isolation and confirmation was carried out by PCR, and later they were analyzed in terms of their antimicrobial resistance. There was a 6.7% detection, of which 54% corresponded to S. enterica ser. Livingstone, 39% to S. enterica ser. Typhimurium and 7% to S. enterica ser. Infantis; obtaining a detection of 6.7% in Isla Maipo, 9.2% in Peñaflor and 0% for Melipilla and María Pinto. The highest resistance indices were presented to ciprofloxacin, tetracycline and cefotaxime, expressed in 8 different profiles. A statistically significant association was found between the variables detection site, resistance profiles, and serotypes detected. Although the values of resistance and multiresistance to antimicrobials found are not exceptionally high, it is important to emphasize that this should not be the reason for diminishing attention to this bacterium, in response to international indicators and alerts / Proyecto FONIS SA15110094