Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-15Bitstream added on 2014-06-13T19:44:13Z : No. of bitstreams: 1 sterzo_ev_dr_jabo.pdf: 1284040 bytes, checksum: 1b92a11284babaa3c1ccc125e04e5893 (MD5) / O presente estudo teve por objetivo descrever as alterações morfológicas ocorridas nos cecos de pintos de corte, machos e fêmeas, tratados com Microbiota Cecal (MC) antes e após infecção por Salmonella enterica enterica sorovar Enteritidis (SE) durante a primeira semana de vida. No 1º dia de vida, os pintos foram tratados com MC antes e depois da infecção por SE. Durante todo o período experimental as condições clínicas, assim como a taxa de mortalidade foram observadas. No 1º, 3º, 5º e 7º dias pós infecção (dpi) quatro aves de cada sexo/tratamentos foram sacrificadas por meio de deslocamento cervical para obtenção de amostras do ceco para análises morfológicas (histologia e microscopia eletrônica de varredura), morfométricas e contagem do número de células inflamatórias e células caliciformes PAS+ e AB+. Os dados mostraram alguns episódios de diarréia e quadros de depressão nos pintos infectados com SE no 5º e 7º dpi; nesse período não foi observada mortalidade. No tocante às análise morfológicas, os pintos infectados por SE respondem ao processo infeccioso com um processo inflamatório agudo no 1º dpi, e a partir do 3º dpi, o processo se cronifica. A Microbiota Cecal (MC) antes da infecção, evita as alterações morfofuncionais causadas pela bactéria nos cecos dos pintos de corte, além disso, a MC induz a proliferação de células caliciformes PAS+ e AB+ e, conseqüentemente aumenta a produção de muco, sendo um fator de proteção ao epitélio cecal / This study aimed to describe the morphological changes occurred in the caecu, of males and females broiler chickens treated with Cecal Microbiote (CM) before and after the infection with Salmonella enterica enterica serovar Enteritidis (SE) during the first week of life. On the first day of life, chickens were treated with CM before and after the infection with SE. Throughout the experimental period, the clinical conditions as much as the mortality rates were observed. On 1st, 3rd, 5th and 7th days post infection (dpi), four birds of each sex/treatment were slaughtered by cervical dislocation in order to obtain samples from the caecum for morphological analysis (histology and scanning electron microscopy), morphometrical analysis and counting of the number of inflammatory and goblet cells PAS+ and AB+. The data showed some diarrhea episodes and depression symptoms in the chickens infected with SE on 5th and 7th dpi; in this period it was not observed any mortality. Concerning the morphological analysis, the chicks infected with SE respond to infectious process with and acute inflammatory process on 1st dpi and after the 3rd dpi the process gets chronicle. The Cecal Microbiote (CM) prior to infection avoid the morphological and functional alterations caused by the bacteria in broiler chickens caecum, in addition, the CM induces the proliferation of goblet cells PAS+ and AB+ and consequently increases mucus production being a protection factor to the caecum epithelium

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:58Z : No. of bitstreams: 1 000833104.pdf: 1779688 bytes, checksum: bf0d766b289bced5e12146e923a25bdd (MD5) / Com o objetivo de avaliar o desempenho zootécnico, a biometria entérica e o rendimento de carcaça e cortes comerciais de frangos de corte, um experimento foi realizado com 720 pintos machos, de um dia de idade da linhagem Cobb®, com densidade populacional de 12 aves/m2. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com 3 tratamentos e 8 repetições de 30 aves cada. Os tratamentos foram: T1 (controle): pintos provenientes de ovos vacinados in ovo no 18º dia de incubação contra a doença de Marek; T2: pintos provenientes de ovos inoculados com probiótico no 18º dia de incubação utilizando como diluente a vacina de Marek; T3: pintos provenientes de ovos vacinados in ovo no 18º dia de incubação contra a doença de Marek e pulverizados ao nascimento com solução contendo probiótico. Foi avaliado o ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar e viabilidade aos 7, 21, 35 e 42 dias de idade; e índice de eficiência produtiva ao final do período de criação. As análises de biometria entérica foram realizadas ao nascimento, 7, 21, 35 e 42 dias de idade, sendo utilizado 15 aves por tratamento, totalizando 45 aves por abate. Aos 42 dias de idade para as análises de rendimento de carcaça foram coletadas, ao acaso, 25 aves por tratamento. Os resultados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5%. A conversão alimentar na fase préinicial de criação, apresentou diferença; sendo que as aves submetidas à inoculação de probiótico in ovo apresentaram melhor conversão alimentar quando comparado com as aves que receberam probiótico pulverizado via spray, mas sem diferirem do tratamento controle. Aos 21 dias de idade observou-se diferença no comprimento do segmento de jejuno, sendo os maiores comprimentos encontrados no tratamento in ovo, porém sem diferir do tratamento pulverizado via spray. O uso de probiótico não ... / A trial was conducted to evaluate broiler performance, intestinal biometric parameters, carcass and commercial cuts yield. Day-old male Cobb® chicks (720; stocking density 12 birds/m2) were allotted to one of three treatments (T1, T2 and T3; eight replications per treatment; 30 birds per pen) in a completely randomized design. Chicks were vaccinated in ovo against Marek's disease on day 18 of incubation (T1, control), inoculated in ovo with probiotics diluted in Marek's disease vaccine on day 18 of incubation (T2), or vaccinated in ovo against Marek's disease on day 18 of incubation and sprayed with probiotic solution at hatching (T3). Weight gain, feed intake, feed conversion rate (FCR) and livability were evaluated at 7, 21, 35 and 42 days of age; production efficiency factor was determined at the end of the rearing period. Intestinal biometric analysis (15 birds per treatment; 45 birds per slaughter) was performed at hatching and at 7, 21, 35 and 42 days of age; 42 day-old birds (25 birds per treatment) were randomly selected for carcass yield determination. Data were analyzed using analysis of variance and means compared using the Tukey test at a 5% significance level. In the pre-starter phase, birds submitted to T2 had significantly higher FCR than birds submitted to T3, but similar FCR to birds submitted to T1 (control). At 21 days of age, birds submitted to T2 or T3 had significantly longer jejunal segments than birds submitted to T1 (control). Probiotic inoculation in ovo improved feed conversion rates in the first week of life and affected intestinal biometric parameters at 21 days of age. Probiotic treatment had no impact on carcass or commercial cuts yield.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-06. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:24Z : No. of bitstreams: 1 000845411.pdf: 3451364 bytes, checksum: 80e865130ecdaad0f2b3fd5d563d2863 (MD5) / Salmonella Enteritidis (SE) é responsável pela maioria dos casos de infecções alimentares em seres humanos e, geralmente, está associada ao consumo de produtos de origem avícola. Nas aves, SE coloniza o intestino, podendo sobreviver utilizando como substrato o 1,2 propanodiol (1,2-Pd) disponível neste ambiente, cujo metabolismo é viabilizado pela ação da enzima propanodiol desidratase, codificada por genes do operon pdu. A enzima propanodiol desidratase necessita de cianocobalamina como cofator enzimático, a qual é codificada pelos genes cobS e cbiA. Neste estudo, utilizou-se uma estirpe de SE e duas mutantes, sendo uma com os genes pduC, pduD, pduE defectivos (SE ΔpduCDE) e outra com os genes pduC, pduD, pduE, cobS e cbiA (SE ΔcobSΔcbiAΔpduCDE) inativados, na tentativa de avaliar a importância do 1,2-Pd para a colonização intestinal e invasão de órgãos durante a infecção de aves por SE. No primeiro experimento, estimou-se as quantidades das estirpes em baço, fígado e conteúdo cecal de aves de postura de variedades vermelha e branca. Um segundo ensaio foi realizado para verificação da excreção fecal, por meio de suabes cloacais. Aliado a isso, caracterizou-se a resposta imunológica em aves SPF desafiadas com estirpes de SE acima descritas por meio da avaliação das populações de linfócitos T CD4+ e TCD8+ em fígado e tonsilas cecais e também pela quantificação de genes responsáveis pela expressão das citocinas IL-6, CCL4, CXCLi2 e IL-22 em tonsilas cecais e IL-6 e IL-18 em baço. Observou-se que as estirpes mutantes foram capazes de colonizar o intestino e invadir o baço e fígado da mesma forma que a estirpe selvagem, sendo que as aves de postura de variedade vermelha foram mais susceptíveis a infecção sistêmica. Tanto a estirpe selvagem como as mutantes estimularam o mesmo perfil de resposta imune nas aves SPF. Portanto, os genes pduC, pduD, pduE, cobS e cbiA não são necessários para... / Salmonella Enteritidis (SE) is responsible for majority of the cases of foodborne diseases in humans and usually is associated with the consumption of poultry origin products. In birds, SE colonizes the intestine and can survive using 1,2 propanodiol (1,2-Pd) as substrate. The metabolisation of the 1,2-Pd is possible by the action of propanodiol dehydratase enzyme, encoded by genes pdu operon. Cyanocobalamin, which is encoded by genes cobS and cbiA, is the cofactor required by propanodiol dehydratase. In this study, we used one SE wild type strain and two mutants, one with mutations in pduC, pduD and pduE genes (SE ΔpduCDE) and another with mutations of pduC, pduD, pduE, cobS and cbiA genes (ΔcobSΔcbiAΔpduCDE) in attempt to evaluate the importance of 1,2-Pd for intestinal colonization and invasion of organs during infection of birds. In the first experiment, bacterial counts for all strains were obtained from spleen, liver and cecal content of white and brown varieties of commercial egg-layers. In the second assay, faecal shedding of the strains was assessed by cloacal swabs. Additionaly, immunological responses were characterised by the assessment of T CD4+ and T CD8+ cell populations in liver and cecal tonsils from SPF (Specific Pathogen Free) chicks challenged with the three strains. Complementary transcripts of genes encoding the cytokines IL-6, CCL4, CXCLi2 and IL-22 in cecal tonsils, and IL-6 and IL-18 in liver were obtained for relative quantification by qRT-PCR. It was observed that SE mutant strains were able to colonise the intestine and invade spleen and liver in the same way as the wild type strain. Brown variety of birds was more susceptible to systemic infection than white birds. Furthermore, the immune response profiles triggered by the SE wild type and the two mutants in SPF chicks were very similar. Therefore, data for the present study suggest that pduC, pduD, pduE, cobS e cbiA genes would not be essencial to ...

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-18. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:21Z : No. of bitstreams: 1 000866910.pdf: 1935220 bytes, checksum: e56b37e9050493f55dcf68e77d76d9ee (MD5) / A microbiota intestinal das aves exerce papel fundamental no desenvolvimento de seu potencial produtivo por garantir o bom funcionamento do trato gastroentérico e do sistema imunológico a ele intimamente ligado. Por isso diversos aditivos já foram utilizados para favorecer o desenvolvimento de uma microbiota saudável, entretanto, ainda não temos informações sobre o perfil desejável para ela. Sendo assim, nos propusemos a utilizar a Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE), para avaliar a microbiota do ceco de aves alimentadas com dietas acrescidas de halquinol, ácido caprílico e Lactobacillus, e posteriormente desafiadas com Salmonella Enteritidis (SE). Aos 10, 20, 30 e 42 dias de vida foram quantificadas as imunoglobulinas IgA, IgM, IgY e interleucinas 17 e 8, avaliada a colonização cecal de SE (UFC/mL), observação histopatológica de tonsila cecal, e esses resulatados relacionados com a microbiota cecal avaliada pelo método TGGE. O tratamento com ácido caprílico foi igualmente eficaz ao halquinol na diminuição da colonização por SE, seguidos do grupo tratado com Lactobacillus. As concentrações de Il-8 e IgM demonstraram relação com a maturação e desenvolvimento imune local e sistêmico das aves, porém, não identificamos relação com o aumento da complexidade da microbiota, entre os diferentes trtamentos e nos grupos desafiados. No presente estudo também nao foi possível reproduzir a técnica de TGGE / The intestinal microbiota of birds plays a fundamental role in the development of their production potential to ensure the proper functioning of a gastrointestinal tract and immune system closely linked to it. So many additives have been used to encourage the growth of a healthy microbiota, however, we still have no information about the desired profile for her. So we set out to use the Gel Electrophoresis with Temperature Gradient (TGGE) to assess the cecal microbiota of birds fed diets plus halquinol, caprylic acid and Lactobacillus, and subsequently challenged with Salmonella Enteritidis (SE). At 10, 20, 30 and 42 days old were quantified immunoglobulins IgA, IgM, IgY and interleukins 17:08 assessed cecal colonization IF (CFU / ml), cecal tonsil histopathological observation, and those related to resulatados cecal microbiota evaluated by TGGE method. The treatment with caprylic acid was equally effective in reducing the halquinol colonization by IF, followed by the group treated with Lactobacillus. IL-8 and IgM concentrations shown maturation and compared with the local and systemic immune development of the poultry, however, we do not identify relationship with the increased complexity of the microbiota between different trtamentos and challenged groups. In this study it was also not possible to reproduce the TGGE

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Marcelo Brocchi / Resumo: Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) é o agente causador do tifo aviário, uma doença septicêmica que afeta principalmente aves adultas. Enquanto que Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) é o micro-organismo causador da pulorose, uma doença sistêmica de aves jovens que evolui para infecção persistente em algumas das que se recuperam da enfermidade. Essas bactérias são genética e fenotipicamente semelhantes, mas causam doenças distintas nos seus hospedeiros. Ainda não se sabe quais seriam as informações genéticas responsáveis pelas diferenças na patogenia e epidemiologia do tifo aviário e da pulorose. Com o intuito de investigar essas diferenças, realizou-se o presente estudo, o qual teve por objetivo a comparação dos genomas de S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 e de S. Pullorum RKS5078 para identificação de regiões de diferenças ("regions of difference" - RODs). Foram identificadas e caracterizadas 68 RODs, buscando correlacioná-las com a patogenicidade desses micro-organismos. Além disso, verificou-se a conservação de algumas dessas RODs em 25 estirpes de S. Gallinarum e 17 de S. Pullorum, todas isoladas de aves com tifo aviário ou pulorose. De modo geral, as RODs continham genes relacionados à funções celulares (reparo de DNA e desagregação de proteínas celulares), produção de energia e virulência. No presente estudo foi observado que a maioria das RODs conservadas era gerada por deleções que, putativamente, provocaram perda de sua função em S. Pullorum. Por esse motivo, foi possível sugerir que a diferente epidemiologia de S. Pullorum poderia ser decorrente de perdas gênicas e não de características adquiridas... / Abstract: Salmonella enterica subspecie enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) is the causative agent of fowl typhoid, a septicaemic disease that affects mainly adult birds, whereas Salmonella enterica subespécie enterica serovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) causes pullorum disease, a systemic disease of young birds that can evolve for persistent infection in some of the birds that recovered. These two bacteria are genetic and phenotypically similar but cause distinct diseases. The genetic bases that would be responsible for these differences are still unknown. For this reason the present study was elaborated and aimed at comparing S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 and S. Pullorum RKS5078 whole genomes in order to identify regions of difference (RODs). In total, 68 RODs were identified and characterized attempting to correlate them with pathogenicity features of S. Gallinarum and S. Pullorum. Furthermore, the conservation status of some RODs was verified in 25 strains of S. Gallinarum and 17 strains of S. Pullorum, all of them isolated from birds with fowl typhoid or pullorum disease. Overall, the RODs have genes involved in cellular functions (as DNA repair and protein disaggregation), energy production and virulence. In the present study, it was noticed the majority of conserved RODs were generated by deletions in genes which, putatively, would lead to loss of their function in S. Pullorum. Consequently, it was feasible to suggest that S. Pullorum epidemiology would be a negative characteristic stemming from gene losses rather than acquired features... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-18Bitstream added on 2014-06-13T19:35:18Z : No. of bitstreams: 1 casella_t_me_sjrp.pdf: 770175 bytes, checksum: f7648712bfc8fa3decfd5d296852e540 (MD5) / A ampla utilização de drogas antimicrobianas tem resultado em aumento e disseminação da resistência aos antimicrobianos entre bactérias patogênicas para o homem. Além do uso indiscriminado em humanos, estas drogas também são extensivamente utilizadas em medicina veterinária e no manejo de animais para a produção de alimentos, o que é reconhecido como um fator associado ao desenvolvimento da resistência em bactérias patogênicas ou comensais de animais. Evidências microbiológicas e clínicas reforçam a associação entre o uso de antimicrobianos na produção animal e o aumento da prevalência de bactérias resistentes na população humana. Sendo assim, a regulamentação da utilização de antimicrobianos no manejo de animais de produção e na terapêutica veterinária é de grande interesse para o Brasil, pois envolve além de importantes aspectos de saúde pública, questões comerciais, pois o país é um dos maiores exportadores de carnes do mundo. Neste estudo, foram analisadas amostras de carnes bovina, suína e de frango, visando à detecção de Salmonella e Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro estendido (ESBLs). Os isolados bacterianos, obtidos de novembro de 2010 a agosto de 2011, foram submetidos ao teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, e 34 cepas foram submetidas à PCR para detecção dos genes blaCTX-M, blaGES, blaSHV e blaTEM. A presença de genes de ESBLs foi confirmada em seis isolados, sendo blaCTX-M-2 detectado em uma cepa de Proteus mirabilis, uma Klebsiella pneumoniae, uma Citrobacter diversus e duas E. coli. O gene blaSHV-2 foi detectado em uma cepa de K. pneumoniae. A caracterização do ambiente genético de blaCTX-M-2 indicou a presença de integrons de classe 1 em todas as cepas, exceto C. diversus. Todos os blaCTX-M-2 foram detectados em cepas... / The wide use of antimicrobial drug has resulted in increase and spread of antimicrobial resistance among pathogenic bacteria for humans. In addition, these drugs are extensively used in veterinary and agriculture for food production, which is recognized as a factor associated with the development of resistance in pathogenic or commensal bacteria of animals. Microbiological and clinical evidence strengthen the association between use of antimicrobials in animal production and the increasing prevalence of resistant bacteria in the human population. Thus, regulation of the use of antimicrobials in the management of livestock and veterinary therapy has great interest for Brazil, because it involves, in addition to important public health issues, trade issues, as the country is one of the largest exporters of beef in the world. In this study, we analyzed samples of beef, pork and chicken meat, focusing on the detection of extended-spectrum β-lactamase (ESBLs)-producing Salmonella and Escherichia coli. The bacterial isolates, obtained from November, 2010, to August, 2011, were tested for antimicrobial susceptibility, and 34 strains were tested by PCR for detection of blaCTX-M, blaGES, blaSHV and blaTEM genes. The presence of ESBLs genes was confirmed in six isolates, being blaCTX-M-2 detected in a strain of Proteus mirabilis, one Klebsiella pneumoniae, one Citrobacter diversus and two E. coli. The blaSHV-2 gene was detected in a K. pneumoniae strain. The characterization of the genetic environment of blaCTX-M-2 indicated the presence of a class 1 integron in all strains, except C. diversus. All blaCTX-M-2 were detected in strains isolated from pork samples. The presence of other multidrug-resistant Enterobacteriaceae carrying... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-15Bitstream added on 2014-06-13T20:57:08Z : No. of bitstreams: 1 000748513.pdf: 992457 bytes, checksum: 7cbeb4a71be76b703d15cd7ff8afac1e (MD5) / Tendo em vista a variedade de funções da serotonina e poucos estudos em aves sobre o tema, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da serotonina, através do seu precursor (5-hidroxitriptofano) e seu inibidor (m-hidroxibenzilhidrazine), associados à Lactobacillus spp. na resposta imune e na morfometria intestinal de frangos de corte desafiados com Salmonella Enteritidis. A partir da avaliação do comportamento e peso corporal das aves, estabeleceu-se a dose do precursor (5HTP), da serotonina, e do inibidor (NSD1015). Com a dose definida, o estudo foi dividido em dois experimentos, aves sem desafio com S. Enteritidis e aves com desafio. Avaliou-se a resposta imune humoral das aves através das concentrações de IgA no fluido intestinal e IgG no soro sanguíneo e recuperação de S. Enteritidis no conteúdo cecal. A morfometria intestinal foi determinada por meio da avaliação do peso corporal, número e altura das vilosidades no duodeno, e, a disponibilidade de serotonina no duodeno foi observada por ensaios imunoistoquímicos. Serotonina ocasionou alterações caracterizadas por sonolência e diminuiu o ganho de peso das aves. Seu precursor (5HTP) também ocasionou sonolência nas aves, porém em intensidade menor e o ganho de peso foi mantido. As aves em que o inibidor (NSD1015) foi administrado não apresentaram alterações no comportamento e ganho de peso. O precursor, inibidor e Lactobacillus spp. não influenciaram nas concentrações de IgA e IgG, mas o precursor e Lactobacillus spp. reduziram a quantidade de S. Enteritidis no conteúdo cecal. Com relação à morfometria intestinal, as aves tratadas com 5HTP apresentaram aumento no peso corporal, no número e altura das vilosidades no duodeno. Lactobacillus spp. e S. Enteritidis determinaram a elevação de células que imunoexpressaram serotonina no duodeno. Os resultados obtidos nos mostram uma possível interação do precursor e... / Given the variety of functions of serotonin and few studies in birds on the topic, this study aimed to evaluate the effects of serotonin, through its precursor (5-hydroxytryptophan) and its inhibitor (m-hidroxibenzilhidrazine) in association with Lactobacillus spp. in the immune response and the intestinal morphometric of broiler chickens challenged with Salmonella Enteritidis. From the evaluation of the behavior and body weight of the birds, established the dose of the precursor (5HTP), serotonin, and inhibitor (NSD1015). With a defined dose, the study was divided into two experiments, birds without challenge with S. Enteritidis and birds challenge. We evaluated the humoral immune response of the birds by the concentrations of IgA in intestinal fluid and the blood serum IgG recovery and S. Enteritidis in cecal contents. The intestinal morphology was determined by evaluating the weight, number of villi and duodenal villus height, and the availability of serotonin in the duodenum was observed by immunohistochemical assays. Serotonin induced changes characterized by drowsiness and decreased weight gain of birds. Its precursor (5HTP) also caused drowsiness in birds, but at a lower intensity and weight gain was maintained. And the birds in the inhibitor (NSD1015) was administered showed no changes in behavior and weight gain. The precursor, inhibitor and Lactobacillus spp. did not affect the concentrations of IgA and IgG, but the precursor and Lactobacillus spp. reduced the number of S. Enteritidis in cecal contents. With regard to intestinal morphology, 5HTP-treated birds showed an increase in body weight, the number of villi and duodenal villus height. Lactobacillus spp. and S. Enteritidis determined the elevation of cells imunoexpressaram serotonin in the duodenum. The results suggested a possible interaction of the precursor and Lactobacillus, acting on the immune response and development of villi inestinais

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-31Bitstream added on 2014-06-13T20:17:35Z : No. of bitstreams: 1 moura_amg_me_jabo.pdf: 217826 bytes, checksum: a7582335f0d6673050625302eb64e73a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Devido ao grande número de casos de toxinfecção alimentar e aos prejuízos sócio-econômicos causados pela Salmonella Enteritidis aos seres humanos, tornam-se necessário estudos sobre a prevenção e controle desta bactéria nos plantéis avícolas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a análise do emprego de bacterinas inativadas oleosas contra Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE) em aves de postura comercial, visando prevenir a excreção fecal e a contaminação dos ovos. Foram utilizadas três formulações de bacterinas comerciais de SE em emulsão oleosa. As aves foram vacinadas na oitava e décima sexta semana de idade e foi mantido um grupo de aves sem vacinação (controle). Na vigésima semana de idade, treze aves de cada tratamento foram desafiadas com uma dose oral de aproximadamente 109 células viáveis de SE fagotipo 4 (resistente ao ácido nalidíxico e a espectomicina), sendo que este procedimento foi repetido na vigésima quinta e trigésima primeira semanas de idade. A eficácia das vacinas empregadas foi conferida através de exames laboratoriais, para pesquisa de SE no conteúdo cecal, baço, ovário e ovos. A vacinação conferiu proteção parcial contra colonização de SE no ceco e contra eliminação da bactéria nas fezes e nos ovos, portanto, recomenda-se que o uso das bacterinas seja complementado com outras formas de controle para SE. / Due to the great number of outbreaks of food poisoning and the socioeconomic issues caused to the human beings by the Salmonella Enteritidis, it becomes necessary the study on the prevention and control of this bacterium in the poultry flocks. Thus, the objective of this work was the analysis of the use of bacterins against Salmonella Enteritidis infection in commercial birds, aiming to prevent the fecal excretion and the contamination of eggs. Have been used three Salmonella Enteritidis oil-emulsion commercial bacterins formulations. The laying hens were vaccinated in the eighth and sixteenth weeks old and one group of birds was kept as nonvacinated control. On twentieth weeks ago, thirteen birds of each treatment were challenged with an oral dose of approximately 109 viable cells of phage type 4 Salmonella Enteritidis (resistant to the acid nalidixic and the espectomicin), this procedure was repeated in the twentieth fifth and thirtieth first weeks ago. The efficacy of employed vaccines was conferred through laboratorial examinations, for research of SE from fecal samples, spleen, ovary and eggs. The vaccination conferred partial protection against caecal colonization and against shedding of SE in the feces and eggs, therefore, it is recommended that the use of the killed bacterins be complemented with other forms of SE control.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:10Z : No. of bitstreams: 1 000868807_20170803.pdf: 1048307 bytes, checksum: 0dffab6c7285f2f758c8340bfb3f7e3b (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-07T14:09:10Z: 000868807_20170803.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-07T14:10:14Z : No. of bitstreams: 1 000868807.pdf: 3365386 bytes, checksum: ea272827c7ffe9fa7ea3385d0c22cf85 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella Enteritidis é um patógeno pertencente à Família Enterobacteriaceae que frequentemente está relacionada a infecções alimentares em humanos, principalmente em crianças, idosos e pacientes imunossuprimidos. A importância deste micro-organismo se dá pela sua prevalência significativa, com distribuição mundial, nos lotes de frangos de corte e de postura de ovos, levando a sérias implicações na saúde pública e ao mercado avícola. O controle eficaz da salmonelose é um desafio, pois envolve um complexo manejo dos animais e tratamento com uso de antibióticos que não garantem a eliminação da infecção. O uso de bacteriófagos líticos contra infecções bacterianas (fagoterapia) vem atender uma demanda crescente por alternativas ao tratamento antimicrobiano convencional. Todavia, a literatura tem relatado o surgimento de certa resistência bacteriana a alguns bacteriófagos líticos, como por exemplo, em Salmonella sp. Diversos são os mecanismos bacterianos de resistência aos fagos, tais como a prevenção de adsorção, o bloqueio da injeção do DNA do fago, restrição-modificação, infecção abortiva e o sistema CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) /Cas (CRISPR associated proteins) de imunidade adquirida. Assim sendo, o presente trabalho objetivou a caracterização molecular da resistência bacteriana de fagos líticos isolados contra cepas de Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (SE). Para tal, os mecanismos-alvos escolhidos foram o sistema CRISPR/Cas e o bloqueio da adsorção de fagos, via lipopolissacarídeo (LPS). Nas 22 cepas de estudo, um total de 72 CRISPRs foi identificado, com 14 diferentes domínios repetitivos (DR), apresentando um total de 551 sequências de espaçadores e os genes associados cas1, cas2 e cas3. Cas 9 e cas 10 não foram identificados. Foi observado que as cepas resistentes aos fagos líticos possuíam um maior número total... / Salmonella Enteritidis is a pathogen that belongs to the Enterobacteriaceae family and is often related to infections transmitted by food in humans, especially in children, elderly and immunosuppressed patients. The importance of this microorganism is because it's significant prevalence with worldwide distribution in lots of poultry, leading to serious implications for public health and poultry industry. Effective control of salmonellosis is a challenging because involves a complex animal handling and treatment with antibiotics that do not guarantee the elimination of infection. The use of lytic bacteriophages against bacterial infections (phage therapy) meets a demand for alternatives to the conventional antimicrobial treatment. However, the literature has reported the emergence of bacterial resistance to some lytic bacteriophages, such as in Salmonella sp. There are several mechanisms of bacterial resistance to phages, such as prevention of adsorption, blocking the injection of phage DNA, restriction-modification, abortive infection and the CRISPR/Cas System acquired immunity. Thus, this research aims to study in a molecular level the bacterial resistance of lytic phages isolated from pathogenic strains of Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (SE). Two mechanisms have been chosen: the CRISPR/Cas system and blocking of phage adsorption via LPS. From 22 SE strains, a total of 72 CRISPRs was identified with 14 different repetitive domains (DR), presenting a total of 551 spacers' sequences and cas1, cas2 and cas3 CRISPR associated genes. Cas 9 and cas 10 genes weren't identified. It was observed that phage lytic resistant strains have a higher total number of spacers in the CRISPR locus in relation to sensitive strains, and this difference was statistically significant. Phylogenetic analysis of cas genes from CRISPR/Cas system, of rfaC, rfaH, cpsG, manB, manc, lpxA, lpxB and lpxC genes (related to LPS) and of... / FAPESP: 2011/11761-7

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas / Banca: Ana Maria Iba Kanashiro / Banca: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Resumo: Salmonella Enteritidis (SE) causa o paratifo aviário em aves e frequentemente está relacionada aos surtos de infecção alimentar em seres humanos. A contribuição do flagelo versus motilidade na interação patógenohospedeiro requer estudos mais aprofundados. Para melhor entendimento da contribuição individual desses fatores de virulência em aves, pintinhos de um dia de vida foram desafiados oralmente com estirpe selvagem de SE, uma mutante não-móvel mas flagelada (SE ΔmotB) e outra mutante aflagelada (SE ΔfliC). Excreção fecal e colonização de fígado, baço e conteúdo cecal pelas estirpes de SE foram avaliadas. Além disso, também foi realizada a avaliação das alterações macroscópicas e microscópicas. Nos estágios iniciais da infecção, ambos mutantes mostraram menor capacidade de colonizar o ceco, além de menor recuperação no baço por SE ΔfliC comparando a estirpe selvagem SE. Após 7 dpi não havia diferenças na contagem das três estirpes em conteúdo cecal, fígado e baço. Análises histopatológicas demonstraram que estirpes flageladas (SE ΔmotB e SE) induziram reatividade linfóide em inglúvio, ceco, íleo e fígado. No entanto, nos estágios iniciais da infecção a estirpe SE ΔfliC não estimulou a reatividade linfóide em lâmina própria de ceco e íleo mas induziu discretos focos necróticos em fígado. Portanto, neste estudo a presença de estrutura flagelar e motilidade parece exercer um papel nos estágios iniciais da colonização intestinal e infecção sistêmica por SE nas aves. / Abstract: Salmonella Enteritidis (SE) causes fowl paratyphoid in poultry often related to outbreaks of food-borne diseases in humans. The contribution of flagella and motility in host pathogen interaction require further investigation. To better understand the individual contribution of these virulence factors in poultry, one day old chickens were challenged orally with wildtype strain of SE, a nonmotile but fully flagellated (SE ΔmotB) and aflagellated mutant (SE ΔfliC). Faecal excretion and colonization of liver, spleen and cecal contents by the SE strains were assessed. Additionally, the assessment of gross and microscopic alterations was also performed. At the early stages of infection both mutants showed lower capacity to colonize the ceca, besides the lower recovering in spleen of SE ΔfliC comparing to the wild type of SE. After 7 dpi there were no differences among the counts of the three strains in ceca, liver and spleen. Histopathological analyses demonstrated that flagellated strains (wild type SE and SE ΔmotB) induced lymphoid reactivity in crop, ceca, ileum and liver. On the other hand, in the early stages of infection, SE ΔfliC strain did not stimulate lymphoid reactivity in lamina propria of ceca and ileum but induced discrete necrotic foci in liver. Thus in the present study the flagellar structure and motility seemed to play a role at the early stages of the intestinal colonization and systemic infection by SE in the chicken. / Mestre