Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T18:31:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valerio_AmandaAbdalla_M.pdf: 13631091 bytes, checksum: 614bd6add75c50691b0684d8afeade9b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Peçonhas de serpentes contêm enzimas que quebram ligações fosfáticas (ATPases, 5'-nucleotidases, fosfatases e fosfodiesterases ou PDE) e que agem sobre ácidos nucléicos (PDE, DNase e RNase). Nesse trabalho, purificou-se e caracterizou-se a PDE da peçonha de Bothrops alternatus. A PDE foi isolada da peçonha, usando-se uma combinação de cromatografias de gel filtração e troca iônica. Em SDS-PAGE, a enzima é constituída de uma única cadeia polipeptídica com uma massa molecular de 105 kDa, a qual foi inalterada pela presença do ß- mercaptoetanol, indicando assim que a proteína não possui subunidades. A enzima foi reconhecida por anti-soro botrópico comercial, tanto no ELlSA como no immunoblotting. A enzima purificada era desprovida de nucleotidase, fosfatase alcalina e atividade proteolítica. O pH ótimo da PDE foi de 7.5 a 9.5, com temperatura ótima de 60°C. Houve perda rápida de atividade, após 1 minuto a 70°C. O Kmda enzima foi de 2.69 mM. A atividade da PDE foi potencializada pelo cobalto e, em grau menor pelo cálcio, enquanto que o cobre, manganês, zinco, EDTA and ß-mercaptoetanol foram inibitórios. Esses resultados mostram que esta enzima é pertence à família de proteínas da PDE isoladas de outras peçonhas ofídicas / Abstract: A phosphodiesterase was purified from the venom of the snake Bothrops alternatus by a combination of gel filtration and ion exchange chromatographies. In SDS-PAGE, the enzyme gave a single band with a molecular mass of 105 kDa which was unaltered in the presence of ß -mercaptoethanol, indicating that the protein contained no subunits. There were no contaminating 5'-nucleotidase, alkaline phosphatase and protease activities. The enzyme was recognized by commercial bothropic antiserum and gave a single band in immunoblotting. The enzyme had a pH optimum in the range of 7.5-9.5 and the optimum temperature was 60°C, with activity being rapidly lost within 1 min at 70°C. The Kmof the enzyme was 2.69 mM. PDE activity was potentiated by cobalt and, to a lesser extent, by calcium, whereas copper, manganese, zinc, EDTA and ß-mercaptoethanol were inhibitory. These properties show that this enzyme is very similar to that isolated from other snake venoms.4 / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores : Marcio Alberto Torsoni, Satie Hatsushika Ogo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T01:40:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stoppa_GrazielaRenata_M.pdf: 3748270 bytes, checksum: c9ca9cbf3471e035a4742b7f591ea3ff (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: No diabetes mellitus a hiperglicemia decorrente da ausência ou da baixa secreção de insulina, ou ainda, da resistência à mesma, é responsável por inúmeros efeitos sobre a célula e seus constituintes. A glicose em particular, provoca alterações celulares decorrentes do processo de glicação não enzimática e da glicoxidação. Estes processos estão relacionados à produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a formação de advanced glycation endproduct (AGEs), que contribuem para a modificação irreversível de proteínas, DNA e lipídios. Desta maneira, a hiperglicemia pode promover sérios danos celulares, podendo induzir precocemente morte celular. É conhecido que em resposta ao estresse oxidativo, o sistema antioxidante celular aumenta sua atividade, com o objetivo de manter o equilibrio redox da célula, este comportamento é particularmente observado em eritrócitos e tecidos musculares de ratos submetidos à atividade fisica. Contudo, em condições de hiperglicemia, a glicação de proteínas pode promover a inativação de enzimas. Neste sentido, foi estudado o efeito da atividade fisica regular sobre o sistema antioxidante de animais diabéticos (induzido por estreptozotocina-STZ) sem um controle favorável da glicemia. A atividade da superóxido dismutase (SOD) diminuiu 64 % e a atividade das enzimas catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR) e a concentração de GSH no sangue de animais sádios submetidos à atividade fisica aumentou significantemente, 69, 63, 58 e 18 %, respectivamente. Por outro lado, nos animais diabéticos, as enzimas GPx e GR não responderam à atividade fisica, enquanto a CAT e o nível de GSH extracelular aumentaram e a atividade da SOD foi menor que no grupo dos diabéticos. O tratamento dos animais diabéticos com aminoguanidina (AG), um inibidor do processo de glicação_ possibilitou uma resposta positiva das enzimas antioxidantes eritrocitárias à atividade fisica. Analisando os resu1tados é possível sugerir que a condição de hiperglicemia crônica_ toma algumas enzimas incapazes de responder satisfatoriamente ao aumento do estresse oxidativo celular, possivelmente devido ao processo de glicação das enzimas. Desta maneira, a atividade física associada à hiperglicemia crônica pode provocar danos adicionais aos tecidos expostos às altas concentrações de glicose tais como nos eritrócitos / Abstract: The hyperglycaemia due to low secretion, absence or resistance for insulin is responsible for numerous effects in diabetes mellitus. The glucose leads to the cellular alterations decurrent of noneIlZYIIlatic glycation process and glucose autoxidation. These processes are related with reactive oxygen species (EROs) production and to advanced glycation endproducts (AGEs) formation, that contribute to irreversible modifications of proteins, lipids and DNA and promote cytotoxic effects. Therefore, the hyperglycaemia can induce serious cellular damages, including cellular dead. The oxidative stress generate an increased response of antioxidant system, in order to maintain the redox balance of the cell, this behavior is particularly observed in erythrocytes and muscle tissues of rats submitted to physical activity. However, in hyperglycaemia conditions, the glycation of protein can lead to inhibition of antioxidant enzymes. This work evaluated the effect of regular physical activity on the antioxidant system of diabetic animaIs (induced by streptozotocin-STZ). The catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione reductase (GR) activity and extracellular levels of glutathione (GSH) of healthy animais submitted to endurance training suffered a significant increase, 69%, 63%, 58% and 18 %, respectivity. Whereas the superoxide dismutase (SOD) activity was inhibited about 64 %. On the other hand, in diabetic animais, the enzymes GPx and GR did not show any change in activity CA T activity and extracellular GSH levei increased and SOD activity suffered a considerable decreasing. The treatment of diabetic animaIs with aminoguanidine (AG), an inhibitor of glycation process, allowed a positive response of erythrocyte antioxidant enzymes to physical activity. The results suggest that the chronic hyperglycaemia, lead to the inactivation of some enzymes due to the glycation processo Therefore, physical activity associated to the uncontroled or severe diabetes can promote damage to tissues exposed to high concentrations of glucose, such as erythrocytes / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Telma Teixeira Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-02T08:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grigolon_LisanneBeatriz_M.pdf: 4576233 bytes, checksum: a2da520280b57769ad27d737fd243776 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A quitosana é um polímero catiônico bioadesivo, biocompatível e biodegradável, e estas propriedades fazem da quitosana um material atrativo para inúmeras aplicações no campo biotecnológico e farmacêutico. O escopo do presente trabalho se insere na investigação da modificação enzimática da quitosana, visando produção de polímeros de baixa massa molar e quitooligômeros utilizando papaína livre e imobilizada. Quitina foi utilizada como suporte para imobilização da papaína, sendo o glutaraldeído utilizado como agente reticulante. A análise da superfície do suporte foi executada, e os dados sugerem que a papaína se distribui tanto na superfície como nos poros da matéria fibrosa. Os experimentos de hidrólise foram conduzidos em reator batelada em diferentes condições de pH e temperatura na presença de papaína livre e imobilizada. Em termos da produção de pOlímeros de menor massa molar, enzima imobilizada apresentou maior atividade nas condições de pH 3,2 e temperatura 50°C, enquanto a enzima na forma livre apresentou maior atividade a pH 5,3 e 54°C. Os perfis cromatográficos obtidos por cromatografia de permeação em gel (CPG) foram progressivamente alterados pela ação enzimática, apresentando um shift para a região de menor grau de polimerização (GP) / Abstract: Chitosan is a eationie biopolymer that is bioadhesive, bioeompatible and biodegradable, and these unique properties makes it an attractive material for numerous potential applieations in bioteehnologieal and pharmaeologieal fields. The scope of this work is to investigate enzymatie modifieation of ehitosan in order to produee low molar mass polymers and ehitooligomers with the aid of free and immobilised papain. Papain was immobilized onto chitin fibers, with glutaraldehyde as eros slinking agent. Surfaee area analysis of ehitin was performed, and data suggests that papain is covalently bound to chitin both at the surfaee and into the pores of the fiber. Hydrolysis experiments were performed in a bateh reactor at different pH and temperature conditions with 1% ehitosan - lactie aeid solutions in the presence of free and immobilized papain. Immobilised enzymes showed higher activity at pH 3,2 and 50°C, whereas free form showed higher activity at pH 5,3 and 54°C in terms of polymer modifieation. Chromatographie profiles are progressively altered by papain-promoted hydrolysis both for free and immobilized form and showed a shift towards the region of lower degrees of polymerisation (DP) / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:40:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_IsisSerrano_M.pdf: 39367208 bytes, checksum: 5a2f9c170b776ab05bde7e9b95810cfe (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As atividades industriais da sociedade moderna vêm produzindo grande quantidade de compostos poluentes tóxicos e persistentes nas águas e solos, acarretando desequilíbrio dos ecossistemas. A degradação de xenobióticos recalcitrantes por fungos, principalmente os de degradação branca, tem sido uma alternativa viável de biorremediação ambiental devido à produção de um sistema enzimático extracelular e não-específico por estes fungos. As enzimas ligninolíticas são capazes de atuarem na degradação da lignina e de vários compostos orgânicos xenobióticos poliaromáticos e com estruturas similares à molécula da lignina. Para uma eficiência na biotransformação e conseqüente mineralização dos compostos poluentes, os microrganismos podem produzir biosurfactantes responsáveis pela maior solubilização de moléculas recalcitrantes no meio, aumentando a superfície de contato entre poluentes e microrganismos, facilitando assim a disponibilidade a biodegradação. Neste trabalho, várias linhagens fúngicas foram capazes de crescer em hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAPs), ácido lignosulfônico e ácido tânico como fontes de carbono e produzirem enzimas ligninolíticas e biosurfactantes sob condições microaeróbia e anaeróbia. Tais compostos de difícil mineralização e resistentes as biotransformações foram degradados, parcialmente, pelos fungos estudados e a porcentagem de degradação apresentou variação de acordo com a linhagem, fonte de carbono utilizada e a condição de oxigenação. Em condição microaeróbia, os fungos 984, 1040, Q10 e 710 destacaram-se na degradação de compostos poliaromáticos. As melhores degradações foram apresentadas para decacicleno (10 anéis - 20-40%) e perileno (5 anéis - 11-40%)em relação aos HAPs de maiores massas molares. A degradação do naftaleno (2 anéis) foi maior do que fenantreno (3 anéis). Na condição anaeróbia, verificaram-se degradações para todas as fontes de carbono estudadas, exceto ácido tânico. Nesta condição, os fungos Q10, H2 e 710 apresentaram maior capacidade de degradação para a maioria das fontes de carbono estudadas. Em ambas as condições, a linhagem 984 apresentou maior produção de biosurfactante na presença de todos os HAPs testados. Os hidrocarbonetos aromáticos policíclicos e outros compostos orgânicos recalcitrantes podem ser degradados sob condições microaeróbia e anaeróbia por fungos, auxiliando assim na biorremediação de locais contaminados de difícil despoluição pela ausência de oxigênio. / Abstract: The industrial activities of modern society produce great amounts of toxic compounds, which persist in rivers, soils and oceans, causing disturbance to ecosystems. Owing to an extracellular and non-specificenzymatic system produced by whiterot fungi, degradation of these xenobióticos became a viable alternative for environmental bioremediation. Such ligninolytic enzymes are able to degrade lignin and most organic and xenobiotic polyaromatic compounds and macromolecules with complex links similar to those found in lignin. For the efficient biotransformation and consequent mineralization of pollutant compounds, microorganisms can produce biosurfactants, which are responsible for solubilization of the recalcitrant molecules, increasing surface contact between pollutant and microorganism,and thus increasing proneness to biodegradation. In this work, non-basidiomycete fungi were grown on polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs), lignosulphonic acid and tannic acid as carbon sources and were able to produce ligninolytic enzymes, and bíosurfactants, under microaerobic and anaerobic conditions.These compounds were partially degraded by the fungi and the percentage of degradation varied depending on the fungal strain, carbon source and oxigenation condition. Under mícroaerobic conditions,the fungal strains 984, 1040,Q10 and 710 were the best degraders of PAHs, were decacyclene (ten rings) was degraded from 20 to 40% and perylene (five rings) 11 to 40%. Under anaerobic conditions, there was degradation of ali the carbon sources except tannic acid. FungiQ10, H2 e 710 showed the best degradations for the majority of carbon sources. Under both conditions, strain 984 showed great production of bíosurfactant emulsions when grownin PAHs. Polycyclicaromatic hydrocarbons and others recalcitrant organic pollutants can be degraded by fungi under microaerobic and anaerobic conditions,and thereby aid in the bioremediation of anoxic environments. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Francisco Maugeri Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T19:12:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arakaki_Tomaz_D.pdf: 3392715 bytes, checksum: 92341d82e215c40dd54226b61d527d86 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O Brasil como maior produtor mundial e exportador de açúcar de cana sofre as conseqüências de um mercado internacional em que os preços das commodities variam de maneira pouco favorável aos países exportadores. A solução seria obter produtos a partir da sacarose, cujos preços fossem mais valorizados no mercado internacional. A sacarose pode ser hidrolizada, hidrólise ácida ou enzimática, produzindo glicose e frutose . A glicose pode ser transformada em ácido glucônico , através de um complexo enzimático formado pela glicose-oxidase e catalase. Teríamos então uma solução de ácido glucônico e frutose, dois produtos cujos preços unitários são maiores do que a sacarose; o espectro de utilização dessas 2 substâncias também é maior do que a da sacarose. O presente trabalho estuda o processo de transformação da glicose em ácido glucônico, usando um reator contínuo de tanque agitado com injeção de ar , junto com um sistema multienzimático de enzimas imobilizadas, formado pela glicose-oxidase e catalase . Na formação do ácido glucônico é formado também o H202 , que inativa ambas enzimas. Para diminuir a inativação a catalase é adicionada para transformar H202 em H20 e O2; O2 dissolvido é necessário para oxidar a glicose-oxidse reduzida para a glicose-oxidase oxidada, a forma ativa da enzima. O objetivo do trabalho é obter um sistema de equações capaz de simular o processo de produção de ácido glucônico a partir da glicose , para estudar e otimizar o processo. As equações diferenciais parciais descrevendo difusão-reação no interior das partículas esféricas, contendo as enzimas imobilizadas, para a glicose, O2 dissolvido, H202 e ácido glucônico foram discretizadas no espaço pelo método de colocação ortogonal com elementos finitos ; equações diferenciais também foram estabelecidas para a glicose¬oxidase e catalase que são destruídas pelo H202 no interior das partículas; mais 4 equações diferenciais foram derivadas para a glicose , O2 dissolvido, H202 e ácido glucônico no reator. Para tornar mais real o modelo utilizado os coeficientes de transporte de massa, os coeficientes de difusão das substâncias nas partículas foram calculados em função da temperatura e concentração de glicose no sistema; a concentração do O2 dissolvido saturado foi calculado em função da temperatura, pressão do ar no interior do reator e da concentração da glicose ; as constantes cinéticas de reação da glicose-oxidase e as constantes de destruição das duas enzimas foram calculadas em função da temperatura do sistema. Parâmetros como os fatores de tortuosidade do suporte para glicose, O2 dissolvido, H202 e constante cinética de Michaelis-Menten para a catalase foram obtidos através do ajuste de curvas usando dados de trabalhos sobre a produção de ácido glucônico com enzimas imobilizadas, existentes na literatura. As otimizações foram feitas em função de alto rendimento e mínima destruição das enzimas usando como variáveis concentração de glicose-oxidase , concentração de catalase ,temperatura, pressão de ar no interior do reator, tempo de residência, fração de enzima imobilizada no reator, raio das partículas; foram utilizadas nas otimizações 4 diferentes concentrações de glicose 2M, 1,5M, 1M e O,5M. Concentrações de glicose maiores que 1M na alimentação provocam rápida destruição das enzimas, curto tempo de processamento( ~ 100h) e tornam o processo economicamente inviável. Os parâmetros obtidos na otimização dos processos com concentração de glicose 2M; 1,5M; 1M e 0,5M foram: VMAXGLO = 0,5xl0-3 moles.L-1.s-1 VMAXCAT = 3 moles.L-1.s-1 Temperatura = 20°C Tempo de residência = 20 h Fração de enzima imobilizada no reator = 0,20 (volume da enzima imobilizada/volume do reator) Raio da partícula da enzima imobilizada = 0,5xl0-3 m (0,5 mm) Pressão do ar no reator: Pressão = 2026 kPa para processo com concentração de glicose na alimentação de 2M Pressão = 2026 kPa para processo com concentração de glicose na alimentação de 1,5M Pressão = 1862,10 kPa para processo com concentração de glicose na alimentação de 1M Pressão = 1128,03 kPa para processo com concentração de glicose na alimentação de 0,5M. / Abstract: Brazil as the world largest producer and exporter of sugar made from sugar cane have to deal with an intemational market subject to oscillating commodities prices which is not favourable to commodities exporting countries. Obtaining products from sucrose having higher values in the international market could be a solution. Sucrose can be hydrolized , either by enzymes or acid , producing glucose and fructose. Glucose can be transformed into gluconic acid , using an enzymatic complex of glucose-oxidase and catalase; a solution of gluconic acid and ITuctose would be obtained, these 2 products have prices per unit mass higher than sucrose and their range of utilization is broader than the one of sucrose. This work is concemed with glucose transformation into gluconic acid, using a continuous stirred tank reactor (CSTR) equiped with air injection, plus glucose-oxidase and catalase comprising an immobilized enzyme system . At the gluconic acid production H202 is formed which inactivates both enzymes; catalase is added to trasnform H202 into mo and O2; dissolved O2 is essential to oxidise reduced glucose-oxidase into is oxidised form which is the enzyme active form. The goal of the work was to simulate the próduction of gluconic acid from glucose using a system of equations , in order to study and optimize the processo The partial differential equations describing diffusion-reaction process within the spherical partic1es, which hold the immobilized enzymes, in function of time for glucose, dissolved O2, H202 and gluconic acid were discretised in space using orthogonal collocation method with finite elements; differential equations were also derived for glucose-oxidase and catalase destruction by H202 inside partic1es; more four differential equations were stablished for glucose, dissolved 02, H202 and gluconic acid in the CSTR. To make the model closer to a real process mass transport coefficients, diffusion coefficients within partic1es for the substances were derived taking into consideration temperature and glucose concentration in the reactor; saturated dissolved Oz concentration was calculated in function of temperature, air pressure and temperature within the reactor; kinetic constants for glucose-oxidase reaction and the inactivation constants for both enzymes were calculated in function of the system temperature. Parameters like tortuosity factors for glucose, disssolved Oz, HzOz and the Michaelis-Menten constant for catalase were obtained from curve fitting of data ftom previous reported works on gluconic acid production using immobilized glucose-oxidase and catalase. Optimizations were carried out concerning a high gluconic acid yield and minimum enzyme degradation, variables utilized were glucose-oxidase concentration, catalase concentration, temperature, air pressure within reactor, residence time, volumetric immobilized enzyme fraction and particle radius. Optimizations were done using 4 differents glucose concentrations feed 2M, 1.5 M, 1M and 0.5M. Glucose feed concentration greater than 1M caused fast enzymes destruction, short time process (-100 h) and turned the process into a economically infeasible one. The parameters calculated in the optimization of the processes with glucose concentration of 2M; 1.5M; 1M e O.5M were: VMAXGLO = 0.5x10-3 moles.L-1.s-1 VMAXCAT = 3 moles.L-1.s-1 Temperature = 20°C Residence time = 20 h Fraction of immobilized enzyme in the reactor = 0.20 (immobilized enzyme volume/reactor volume) Radius ofimmobilized enzyme partic1e = 0.5xl0-3 m (0.5 mm) Air pressure inside the reator: Pressure = 2026 kPa for the process with a 2M glucose concentration inlet feed Pressure = 2026 kPa for the process with a 1.5M glucose concentration inlet feed Pressure = 1862.10 kPa for the process with a 1M glucose concentration inlet feed Pressure = 1128.03 kPa for the process with a 0.5M glucose concentration inlet feed. / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador : Anita Jocelyne Marsaioli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:43:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porto_AndreLuizMeleiro_D.pdf: 7658394 bytes, checksum: e0a02bdd1551d55a35e0923180c7edc6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Orientador : Helia Harumi Sato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:29:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fleuri_LucianaFrancisco_M.pdf: 5945832 bytes, checksum: 5ab1eb6f9e401508de39c0e1711f5aba (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O presente trabalho visou o estudo da produção de b-1,3 glucanases, proteases líticas e quitinases pelas linhagens B1, B22, B26, FXX, Oerskovia sp. n04 e Celulomonas cartae nO191 em meios de cultura contendo diferentes indutores e aplicação na lise de leveduras. Entre as bactérias testadas as linhagens B26 e Cellulomonas cartae nº191 apresentaram maior produção de protease em meio de cultura TI composto de 8% de levedura seca instantânea; as linhagens Bl e C. cartae nº191 apresentaram maior produção de b-1,3 glucanase em meio de cultura m contendo 1% de parede celular de levedura extraída mecanicamente em Dyno- Mill; e a linhagem C. cartae nº191 apresentou maior produção de quitinase em meio de cultivo N contendo 1,5% de quitina neutralizada. Os sobrenadantes dos meios de cultura obtidos da fermentação das linhagens B1 e C. cartae nº191 cultivadas em meio de cultivo m mostraram maior atividade de lise de levedura. No estudo do fracionamento das enzimas líticas, a saturação do sobrenadante do meio de cultura com 60% de sulfato de amônio, foi adequada para a precipitação e obtenção de protease, b-1,3 glucanase e quitinase. As preparações de b-1,3 glucanase das linhagens B1 e C. cartae n °191 obtidas do sobrenadante do meio de cultura através de fracionamento com sulfato de amônio, apresentaram atividade de lise das leveduras Kluyveromyces lodderi, Saccharomyces cerevisiae (levedura de panificação Fleischmann), Saccharomyces cerevisiae (levedura de panificação Itaiquara) e sobre as linhagens "killer" Saccharomyces cerevisiae KL-88, Saccharomyces diastaticus NCYC 713, Saccharomyces cerevisiae NCYC 1001, Candida glabrata NCYC 388, Kluyveromyces marxianus NCYC 587 e Hansenula mrakii NCYC 500. As linhagens K marxianus NCYC 587 e H. mrakii NCYC 500 mostraram-se mais sensíveis à ação das b-1,3 glucanases e as linhagens de levedura ltaiquara e C. glabrata NCYC 388 mostraram-se mais resistentes à ação das b-1,3 glucanases, quando comparada com a susceptibilidade das células da linhagem de S. cerevisiae KL-88 à preparação enzimática. A adição da preparação de quitinase, obtida do sobrenadante do meio de cultura através de ftacionamento com sulfato de amônio, da linhagem C. cartae nº191, em alguns casos aumentou a susceptibilidade das leveduras à lise celular. O pré-tratamento das suspensões das leveduras com as preparações de protease obtidas dos sobrenadantes dos meios de culturas através de fracionamento com sulfato de amônio, da linhagem C. cartae nº191, diminuiu a lise da leveduras principalmente quando utilizada em altas concentrações. A maior produção de b-1,3 glucanase da linhagem C. cartae nº191 em meio de cultura m ocorreu a 35°C após 48 horas de fermentação a 200 rpm, entretanto, atividade de b-1,3 glucanase muito próxima foi obtida na fermentação do microrganismo a 30°C durante 24 horas. A maior produção de protease da linhagem C. cartae nO191 em meio de cultura II ocorreu a 35°C após 30 horas de fermentação a 150 rpm, enquanto que a maior produção de quitinase da linhagem C. cartae nO191 em meio de cultura N ocorreu a 35°C após 72 horas de fermentação a 150 rpm. No estudo das superfícies de respostas e das curvas de contorno referentes ao planejamento fatorial completo, foi obtido maior atividade de lise da levedura S. cerevisiae KL-88 utilizando-se a preparação enzimática de _-1,3 glucanase em pH 6,5 e a 35°C. As células de leveduras obtidas após 10 horas de fermentação em frascos sem agitação mostraram-se mais susceptíveis à lise pela b-1,3 glucanase de C. cartae nº191. Foi obtido maior lise da levedura S. cerevisiae KL-88 quando a suspensão de células da levedura foi submetida ao tratamento com b-1,3 glucanase e cisteína 1mM. A enzima invertas e intracelular ou ligada à célula de S. cerevisiae KL-88 e K marxianus NCYC 587 foi extraída após tratamento da suspensão celular de levedura com b-1,3 glucanase da linhagem C. cartae nº191. O tratamento prévio das células de S. cerevisiae KL-88 e K marxianus NCYC 587 com a enzima b-1,3 glucanase da linhagem C. cartae nº191, aumentou a susceptibilidade das células de levedura à lise com ultra-som / Abstract: The aim of this work was the study of b-1,3 glucanases, proteases and chitinases production by B1, B22, B26, FXX, Oerskovia sp. nO4 and Cellulomonas cartae nº191 strains in culture media containing differents inductors as well as their application on yeast cell lysis. The strains B26 and Cellulomonas cartae nO191 showed highest protease production using the culture medium II containing 8% of instant yeast. The strains Bl and C. cartae nº191 showed highest b-1,3 glucanase production using the culture medium III containing 1% of yeast cell wall obtained by Dyno-Mill. The strain C. cartae nº191 showed highest chitinase production using the culture medium IV containing 1.5% of chitin neutralized. The culture medium III supernatants obtained by fermentation of strains B1 and C. cartae nº191 demonstrated the biggest yeast cell lysis activity. The enzymes precipitation studies revealed that 60% ammonium sulphate was the best concentration for protease, b-1,3 glucanase and chitinase separation. The b-1,3 glucanase extract obtained by Bl and C. cartae nº191 strains demonstrated lysis activity against Kluyveromyces lodderi, Saccharomyces cerevisiae (yeast Fleischmann), Saccharomyces cerevisiae (yeast Itaiquara), Saccharomyces cerevisiae KL-88, Saccharomyces diastaticus NCYC 713, Saccharomyces cerevisiae NCYC 1001, Candida glabrata NCYC 388, Kluyveromyces marxianus NCYC 587 and Hansenula mrakii NCYC 500. K. marxianus NCYC 587 and H mrakii NCYC 500 were more sensitive to b-1,3 glucanases action, whereas Itaiquara yeast and C. glabrata NCYC 388 were more resistant when compared with S. cerevisiae KL-88 susceptibility. The chitinase extract obtained by C. cartae nO191, in some cases increased the susceptibility of yeast to cellular lysis. The previous treatment of the yeast suspensions with protease from C. cartae nº191, decreased the yeasts cell lysis, mainly when used at high concentrations. The maximum b-1,3 glucanase production by C. cartae nº191, using culture medium III, occurred after 48 hours of fermentation at 35°C and 200 rpm. However, when the fermentation was perform after 24 hours of fermentation at 30ºC and 200 rpm, the b-1,3 glucanase activity obtained was almost the same. The maximum protease production by C. cartae nº191, using culture medium II, occurred after 30 hours of fermentation at 35ºC and 150 rpm, while the highest chitinase production by C. cartae nº191, using culture medium IV, occurred after 72 hours of fermentation at 35°C and 150 rpm. The experimental design study showed that the best conditions to S. cerevisiae KL-88 lysis by b-1,3 glucanase extract were pH 6,5 and 35°C. This study also demonstrated that the yeast cells were more susceptible to lysis after 10 hours cultivation in flasks without agitation. Lysis activity was increased when S. cerevisiae KL-88 cell suspension was treated b-1,3 glucanase and cystein 1mM. The enzyme invertase of S. cerevisiae KL-88 and K marxianus NCYC 587 was extracted after treatment of cell suspension with b-1,3 glucanase obtained from C. cartae nº191. The previous treatment of S. cerevisiae KL-88 and K marxianus NCYC 587 with b-1,3 glucanase, increased the susceptibility to lysis when ultrasonic treatment was used. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Koblitz_MariaGabrielaBello_D.pdf: 1821532 bytes, checksum: 8374e5c67da3b6773d2f44dda8e21748 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo purificar e caracterizar a fração lipolítica produzida por linhagem de Rhizopus sp. e aplicar a lipase na produção de monoacilgliceróis. Apenas três etapas de purificação foram necessárias para se atingir a homogeneidade em SDS-PAGE, obtendo-se uma banda com massa molecular de 37,5KDa e atividade específica de l446U/mg de proteína. A fração purificada continha 2 isoformas da lipase, ambas com temperatura ótima de atividade de 50°C, valores para pH ótimos de 5,6 e 7,0, pH de 4,3 e 4,5 e estabilidade a valores de pH entre 6,5 e 7,5 e a temperaturas inferiores a 50°C, além de manter sua atividade em hexano. A lipase foi inativada por Hg+2 e por n-bromosuccinimida e ativada por Na+. Os estudos de purificação por diferentes métodos cromatográficos mostraram que, embora a lipase seja mais seletivamente retida por coluna de troca aniônica, ela perde parte de sua atividade no processo, o que não acontece em colunas de interação hidrofóbica. A lipase purificada por coluna de FENIL Sepharose apresentou faixa mais larga de pH de atividade, podendo variar entre 3,5 e 9,0, dependendo da temperatura de reação, porém menor estabilidade térmica do que a fração purificada por DEAE Sepharose. Entre os métodos testados, a síntese se mostrou mais promissora para obtenção de monoacilgliceróis. Após planejamento estatístico multivariável verificou-se que a remoção de água do meio reacional é fator preponderante para conversão e que a enzima testada utiliza tanto glicerol quanto monoacilgliceróis como substratos para síntese, o que torna indispensável a separação do produto do meio reacional para obtenção de taxas de conversão satisfatórias / Abstract: The aim of the present study was the purification and characterization of the lipolytic fraction secreted by a strain of Rhizopus sp. and to apply this lipase to the production of monoacylglycerols. On1y 3 steps of purification were necessary to achieve SDS-PAGE homogeneity. One band with 37.5 KDa molecular mass and with 1446 U/mg specific activity was obtained. The purified fraction presented 2 lipase isoforms; both showed optimum activity at 50°C, but at pH values of 5.6 and 7.0 and isoelectric points of 4.3 and 4.5. The lipase was stable between 6.5 and 7.5 pH values and at temperatures below 50°C and also kept its activity in hexane. The lipase was inactivated by Hg+2 and by n-bromosuccinimide and activated by Na+. The studies on purification by different chromatographic methods showed that, although the lipase is more selectively retained by the anionic exchange column, it loses part of its activity in the process, which does not happen in the hydrophobic interaction column. The lipase purified by the PHENYL Sepharose column showed activity in a larger pH range, that could vary from 3.5 to 9.0 depending on the reaction temperature, but also showed lower thermal stability when compared to the fraction purified by DEAE Sepharose column. Among the methods tested, the synthesis seemed to be the most promising for the production of monoacylglycerols. After the experimental design assays it could be verified that water removal from the reaction medium is a preponderant factor for the conversion and that the enzyme tested uses glycerol but also monoacylglycerol as synthesis substrate, what makes the separation of the product from the reaction medium indispensible for obtaining satisfactory conversion rates / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientadores: Telma Teixeira Franco, Theo Guenter Kieckbusch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:15:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Igarashi_Luciana_D.pdf: 3952323 bytes, checksum: 2470101a073b4ca053b9725ab992fd6b (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A extração contínua e semi-contínua de uma enzima modelo, xilanase, foi estudada em colunas do tipo spray, de pratos perfurados e empacotada utilizando sistema de duas fases aquosas (SDF A) composta por polietileno glicol (PEG) 4000 e fosfato de potássio dibásico. Para a coluna spray, o hold-up da fase dispersa e o coeficiente global de transferência de massa (KD a) foram avaliados para diferentes velocidades superficiais da fase leve. Os resultados indicaram que um aumento na velocidade superficial da fase dispersa na faixa de O - 0,18 mm/s apresentou um efeito positivo sobre o KD a e hold-up. Para a coluna de pratos perfurados foi observado que o aumento da velocidade superficial da fase dispersa e no número de pratos também promoveu um aumento nos dois parâmetros de extração da coluna. A seletividade de separação da xilanase e albumina de soro bovino, BSA, (contaminante modelo) foi alta, pois cerca de 60% da enzima foi extraída para a fase leve, enquanto uma quantidade insignificante de BSA foi obtida nesta fase. A possibilidade de usar a coluna de pratos e recheada na operação contínua e contra-corrente para a extração da enzima também foi avaliada. Foram estudadas a influência de diferentes tipos de recheio como os anéis de Raschig, esferas de vidro e anéis de poliestireno assim como a razão da velocidade superficial da fase leve (pEG) e pesada (sal). A melhor seletividade foi obtida com os anéis de poliestireno 94% da xilanase na fase polimérica enquanto apenas 3% do contaminante foi obtido nesta fase. Em uma segunda parte deste trabalho explorou-se o SDF A contendo apenas um copolúnero termossensível em um processo em batelada. Foram utilizados copolímeros randômicos contendo grupos de óxido de etileno (EO) e óxido de propileno (PO) hidrofobicamente modificados, sendo que a modificação foi realizada através da inserção de grupos hidrofóbicos alifáticos C1JI29 nas duas pontas do polímero. Neste sistema a fase superior é enriquecida em água e a fase inferior no polímero (cerca de 6-8%, p/p). A melhor separação do DNA e do plasmídeo utilizando o copolímero hidrofóbicabicamente modificado (HM-EOPO) carregado positivamente foi obtido usando uma baixa força iônica a pH 8. O uso do sal, K2SO4' que não possui força eletroquúnica em sistemas contendo o copolímero HM-EOPO mostrou que o coeficiente de partição (K) das proteínas não apresentou dependência com o pH do sistema, e que em pHs extremos houve indícios de que a proteína poderia ter apresentados mudanças estruturais na molécula / Abstract: The semi-continuous and continuous extraction of a model enzyme, xylanase, in spray, sieve plates and packed columns were investigated using aqueous two-phase systems composed by polyethylene glycol (PEG) 4000 and potassium phosphate. For the spray column, the dispersed phase hold-up and overall mass transfer coefficients (Ko a) were evaluated for different superficial velocities of the dispersed phase (light phase). Resuhs indicated that an increase in superficial velocity in the range of O - 0.18 mmls of the dispersed phase had a positive effect on KD a and on hold-up in all colunm heights studied, 75, 161 and 246mm. For the sieve plate column, the effect ofthe superficial velocity ofthe dispersed phase and number of plates were also studied. Results showed that the KD a and hold-up increased with an increase in both parameters. The selectivity of separation of xylanase and BSA (model contaminant) was very high, since 60% of the enzyme was extracted in the light phase, whereas no significant amount of BSA was extracted. The possibility of using the sieve plate and packed column in continuous operations for enzyme extraction was studied. The influence of several kinds of packings, Raschig rings, glass spheres and polyestirene rings was studied as well as the superficial velocity ratio of the salt and PEG phases. The best selectivity was obtained with the polyestirene ring whith 94% of xylanase recovery in the polimeric phase and just 3% of contaminant was recovery to this phase. In a second part of this work a system composed by a thermoseparating hydrophobica11y modified polymers (HM-EOPO) has been used in one-polymer extraction systems, where the top phase is enriched by water and the bottom phase is enriched by the polymer (about 6-8%, w/w). The best separation ofDNA ftom plasmid was obtained using a low ionic system at pH 8 when the polymer is positively charged. By using salts that do not produce electrochemica1 driving force in the system contained HM-EOPO copolymer it is possible to distinguish other driving forces acting on the partitioning of biomolecules. One salt used in this study, K2S04, has this property. The partition coefficient of the proteins studied in this work, showed an independence of the pH of the system, but at extreme pH variation in K with the protein charge would indicate structural changes in the proteic molecule / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Jacks Jorge Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zecchin_KarinaGottardello_D.pdf: 1127675 bytes, checksum: 206bac601728269d2d088a5b0eb6fe6d (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A osteoporose é uma doença óssea metabólica, de etiologia multifatorial, comumente associada à deficiência de estrógeno. Os efeitos da osteoporose sobre os ossos da face têm sido pouco estudados, mas há indícios de atraso na reparação alveolar pósexodontia em animais ooforectomizados. O aumento da expectativa de vida da população e o conseqüente aumento do número de pacientes afetados pela osteoporose ressaltam a necessidade de uma avaliação detalhada de seus possíveis efeitos sobre o processo de reparo ósseo alveolar. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da ausência de estrógeno sobre a expressão, produção e atividade de MMP-1, -2, -9 e colágenos tipo I e III no tecido de granulação do processo de reparo alveolar após exodontia do primeiro e segundo molares inferiores em ratas. Sessenta e seis ratas (Ratus norvegicus albinus, Wistar) com 4 semanas de idade foram submetidas a ooforectomia bilateral (grupo OVX) ou pseudo-ooforectomia (grupo controle). Após três semanas os primeiros e segundos molares inferiores foram extraídos e os animais foram sacrificados por deslocamento cervical após 3, 5 e 7 dias das exodontias. Os tecidos de granulação dos alvéolos foram coletados e utilizados para realização de RT-PCR, western blot e zimograma. Ambos os grupos apresentaram aumentos graduais da expressão, produção e atividade gelatinolítica de MMP-2 e -9 ao longo dos períodos pós-exodontia estudados nesse modelo experimental. A ausência de estrógeno no grupo OVX foi associada a diminuições significativas da atividade, expressão e produção de MMP-2 e -9, bem como redução da expressão e produção de colágenos do tipo I e III em todos os períodos estudados. Por outro lado, não foram observadas influências significativas da ausência de estrógeno sobre a produção de MMP-1. As alterações moleculares encontradas nesse trabalho refletem o atraso no processo de reparo ósseo alveolar mediante a ausência de estrógeno / Abstract: Osteoporosis is a metabolic bone disease of multifatorial aetiology commonly associated with oestrogen deficiency. The effects of osteoporosis on bone structure of the oral cavity have scarcely studied but there are evidences of delayed healing process after tooth extraction in ovariectomized rats. The increased life span of most world populations and the consequent increase in the numbers of patients affected by osteoporosis reinforces the need of knowledge about its possible influence over the alveolar socket healing after tooth extraction. The aim of this study was to describe the effects of the absence of oestrogen on the expression, production and activity of matrix metalloproteinases -1, -2 and -9, and of types I and III collagens in the alveolar granulation tissue of young female rats after tooth extraction. Sixty-six four-week-old female rats underwent bilateral ovariectomies (OVX) or sham operations. Three weeks latter, both first and second mandible molars were extracted and the animals killed by cervical dislocation 3, 5 or 7 days after tooth extraction. The granulation tissue was collected from the alveolar sockets, and used for RT-PCR, western blot or zymography analysis. There was a gradual increase on the expression and production of all proteins as well as MMP-2 and -9 activities, in all periods after surgery, with this experimental model. In contrast, OVX animals showed a significant decrease on the gelatinolytic activities, production and expression of MMP-2 and -9 and types I and III collagens. Otherwise, there was no significant influence on MMP-1 production in OVX animals. The molecular changes found here in reflect the delayed alveolar wound healing associated with the absence of estrogen / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia