Made available in DSpace on 2014-08-20T02:02:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000460424-Tese+Parcial-0.pdf: 208542 bytes, checksum: c614e57b83b06eea8ef4c11836bbd946 (MD5) Previous issue date: 2014 / Oral cancer is among the six most common types of cancer worldwide, considered as the seventh most frequent in the Brazil. Tumor angiogenesis has become a promising target for the treatment of malignancies. Methods that allow three-dimensional evaluation of the vascular network of tumors have a great importance to assess the effects of antiangiogenic treatments in tumors. The objective of this study was to evaluate the effect of sunitinib maleate and the metronomic chemotherapy with cyclophosphamide on the vascular network of the oral squamous cell carcinoma by scanning electron microscopy (SEM) of corrosion casts. 24 Syrian hamsters (Mesocricetus auratus) were divided into three groups of eight animals each and had their right buccal pouches submitted to tumor induction with dimethylbenzanthracene and carbamide peroxide for 55 days. Following, the animals were maintained without treatment (group I) or receiving sunitinib (group II), or cyclophosphamide (group III) for a period of 4 weeks. After the treatment, six animals of each group had their vascular networks casted by Mercox® resin and analyzed qualitatively and quantitatively by SEM. The two remaining animals of each group had their buccal pouches prepared for qualitative analysis by light microscopy. It was observed changes in the angioarchitecture of the pouches that were treated with these two drugs, suggesting an improvement in the tumors vascularization. The main changes caused by the treatments were the reduction of vessel tortuosity, the reestablishment of vascular hierarchy, besides the decrease of sprouting and intussusception images, compressed vessels, saccular dilations, and other vascular figures. Quantitative analysis of the samples exhibited a statistically significant reduction in vascular diameter and intervascular distances ofthe pouches treated with cyclophosphamide, when compared with the pouches no treated and those treated with sunitinb. The findings of the present study suggest that these two drugs may act in the vascular normalization of squamous cell carcinomas induced in hamster buccal pouch, however the metronomic chemotherapy exhibited superior results. / O câncer oral está entre os seis tipos mais comuns de câncer no mundo, sendo o sétimo mais encontrado entre a população brasileira. O processo de angiogênese tumoral tem-se tornado um alvo promissor para o tratamento de neoplasias malignas. Os métodos que permitem a avaliação tridimensional da angioarquitetura dos tumores são de grande importância na análise dos efeitos de tratamentos antiangiogênico. Este trabalho visou avaliar o efeito do maleato de sunitinibe e da quimioterapia metronômica com ciclofosfamida na vasculatura do carcinoma oral de células escamosas, através de microscopia eletrônica de varredura (MEV) de réplicas vasculares. Assim, 24 hamsters sírios (Mesocricetus auratus) divididos em três grupos de oito animais cada, tiveram suas bolsas jugais direitas submetidas à indução tumoral com dimetilbenzantraceno e peróxido de carbamida por 55 dias, sendo mantidos por mais 4 semanas sem tratamento (grupo I), ou recebendo sunitinibe (grupo II), ou ciclofosfamida (grupo III). Após o tratamento, seis animais de cada grupo tiveram suas redes vasculares moldadas pela resina Mercox® e analisadas qualitativa e quantitativamente em MEV. Os dois animais restantes de cada grupo tiveram suas bolsas qualitativamente analisadas em microscopia de luz. Foram observadas modificações na angioarquitetura das bolsas que receberam tratamento com os dois fármacos, o que gerou uma normalização da vascularização dos tumores. As principais modificações provocadas pelos tratamentos foram a redução da tortuosidade dos vasos, o reestabelecimento da hierarquia vascular, além da diminuição de imagens de sprouting e intussuscepções, vasos comprimidos, dilatações saculares e outras figuras vasculares. A análise quantitativa das amostras evidenciou uma redução estatisticamente significativa do diâmetro vascular e das distâncias intervasculares nas bolsas tratadas com ciclofosfamida, quando comparadas com as bolsas que não receberam tratamento e com aquelas tratadas com sunitinibe. Os achados do presente estudo sugerem que essas duas drogas podem atuar na normalização da rede vascular no carcinoma de células escamosas induzido em bolsa jugal de hamster; no entanto a quimioterapia metronômica apresentou resultados superiores.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431554.pdf: 1140347 bytes, checksum: 1a8e9f1d9a303deab64243aa1e2049fe (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Introdu??o: V?rias limita??es t?m sido levantadas em estudos de asma utilizando modelos murinos agudos sensibilizados com ovalbumina (OVA), mas este modelo ? ainda amplamente usado, ainda mantendo sua import?ncia em estudos pr?-cl?nicos. Algumas limita??es encontradas s?o o uso de adjuvante e os longos per?odos de sensibiliza??o. Objetivos: Testar se a sensibiliza??o com OVA em um per?odo curto, sem adjuvante, induziria uma resposta pulmonar eosinof?lica em camundongos similar aos protocolos j? previamente estabelecidos. M?todos: F?meas adultas de camundongos BALB/c foram utilizadas e divididas em grupos de acordo com o n?mero de sensibiliza??es com OVA (uma ou duas vezes, OVA: 20 μg) e o n?mero(duas ou tr?s vezes)/dosagem(40 μg e 100 μg) de desafios intranasais. O protocolo mais curto (10 dias) consistiu de uma sensibiliza??o subcut?nea e tr?s desafios com OVA (100 μg). Contagem total (CTC) e diferencial de c?lulas no lavado broncoalveolar (LBA), ensaio da peroxidase eosinof?lica (EPO) do tecido pulmonar e histopatologia (HE) dos pulm?es foram realizados 24 horas ap?s o ?ltimo desafio com OVA. Resultados: Contagem celular do LBA, EPO do tecido pulmonar e altera??es inflamat?rias da histologia pulmonar n?o foram diferentes entre os grupos estudados. O protocolo mais curto induziu uma resposta eosinof?lica pulmonar ? OVA semelhante ao grupo controle, ocorrendo o mesmo com os outros grupos. Conclus?o: O uso de sensibiliza??o subcut?nea com OVA, sem adjuvante, resulta em uma significativa resposta pulmonar al?rgica, permitindo sua utiliza??o em protocolos de dura??o mais curta. Nossos achados sugerem que este protocolo pode ser utilizado como teste pr?-cl?nico de primeira linha para pesquisa de novos f?rmacos, reduzindo custo, tempo e uso de adjuvante.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 416586.pdf: 2128657 bytes, checksum: ecc1def38be3df63ce848091e35a0523 (MD5) Previous issue date: 2009-03-17 / Introdu??o: A paralisia facial perif?rica traz impacto significativo na vida dos pacientes. As causas traum?ticas ficam atr?s somente da Paralisia de Bell e t?m progn?stico vari?vel. Anastomoses t?rmino-terminais s?o vi?veis em poucos casos. As c?lulas mononucleares t?m mostrado bons resultados na regenera??o de nervos perif?ricos, por?m n?o existem estudos com o s?timo par craniano. Objetivos: Estudar a recupera??o funcional do nervo facial ap?s les?o aguda com repara??o imediata utilizando c?lulas mononucleares em um modelo experimental. Material e M?todo: Estudo experimental, controlado, cegado e randomizado. Foram inclu?dos dezesseis ratos Wistar divididos em dois grupos. Foi realizada ressec??o de quatro mil?metros do tronco do nervo facial e, ent?o, interposto um tubo de silicone, preenchido com c?lulas mononucleares no grupo 1 e com ve?culo gelificado no grupo 2. Os animais foram avaliados por teste funcional: an?lise do movimento das vibrissas, do fechamento da rima ocular e somat?rio vibrissas-olhos durante 64 dias. Tamb?m foi realizado exame macrosc?pico e histol?gico no final do estudo. A compara??o dos grupos foi realizada por meio das medianas, avaliadas pelo teste U de Mann-Whitney. O n?vel de signific?ncia adotado foi 5%. Resultados: O DELTA (valor final valor inicial) para o somat?rio vibrissas-olhos foi -0,50 para o grupo 1 e -1,50 para o grupo 2, mostrando uma recupera??o funcional satisfat?ria em ambos os grupos, com uma melhora precoce no fechamento da rima ocular no grupo das c?lulas mononucleares evidenciada pelas medianas entre a segunda e terceira semanas. A ?rea sob a curva, que evidencia o efeito global dos tratamentos, n?o resultou em diferen?a estatisticamente significativa entre os grupos. Conclus?es: Os dois grupos, c?lulas mononucleares e controle, obtiveram recupera??o da m?mica facial no teste funcional ap?s a les?o aguda do VII par craniano no per?odo de 64 dias, sendo que o grupo que utilizou as c?lulas mononucleares apresentou recupera??o mais precoce no crit?rio fechamento da rima ocular.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 430802.pdf: 1429367 bytes, checksum: 77ed867ce8aa5efa441843cd19c7752d (MD5) Previous issue date: 2011-03-16 / A doen?a de Parkinson (DP) ? caracterizada pela perda progressiva dos neur?nios dopamin?rgicos da substancia negra, a qual leva a uma defici?ncia de dopamina no estriado. Essa defici?ncia ? respons?vel pelo desenvolvimento de sintomas motores como tremor em repouso, bradicinesia, rigidez e instabilidade postural. Novas alternativas para o tratamento da DP t?m sido estudadas e uma possibilidade promissora ? o transplante de c?lulas-tronco. O presente estudo visa avaliar o potencial terap?utico do transplante de c?lulas mononucleares de medula ?ssea (CMMO) em um modelo lesional da DP. Os animais foram submetidos ? estereotaxia e 1μl de 6-hidroxidopamina foi injetado no feixe prosencef?lico medial. Tr?s semanas ap?s, os camundongos foram transplantados com CMMO, fibroblasto ou salina, atrav?s da veia da cauda. A fun??o motora foi avaliada atrav?s do teste de Rotarod e do teste de rota??o induzida por apomorfina. Nosso estudo demonstrou que as CMMO, transplantadas atrav?s da veia da cauda em camundongos parkinsonianos, s?o capazes de atravessar a barreira hematoencef?lica e migrar em dire??o ao tecido encef?lico, al?m de sobreviverem por uma semana ap?s o transplante. Essas c?lulas, por?m, n?o foram capazes de restabelecer a fun??o motora desses animais, em at? 30 dias p?s-transplante. Se as CMMO conseguiram restaurar os neur?nios dopamin?rgicos nigroestriatais apenas a n?vel histol?gico, n?o podendo essa restaura??o ser detectada pelos testes motores realizados, ainda precisa ser esclarecido.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 437015.pdf: 2405577 bytes, checksum: 64fe8d7f54de71f570c0f7a29d9c6838 (MD5) Previous issue date: 2012-01-16 / Cellular therapy represent a new frontier for the treatment of several diseases, including diseases related to central nervous system. Human umbilical cord blood is an attractive source of stem cells; however, it has a heterogeneous population with a small amount of mesenchymal stem cells. Currently, cell reprogramming induced by different methodologies can confer pluripotency to differentiated adult cells. The objective of the study was to evaluate the reprogramming potential of fibroblasts and neural differentiation after co-culture with umbilical cord blood mononuclear cells. This study was approved by the Ethics Committee of PUCRS (CEP 11/05504). Cells were obtained from four human umbilical cord blood. Cell suspensions were fractionated at gradient of density 1077. The mononuclear cells of each sample were cultured for 7 days and later, the culture was infected with 105 cells of mouse fibroblast cell line NIH 3T3 and co-cultured for 6 days. To evaluate the pluripotency it was performed RNA extraction and later, amplification using primers specific for pluripotency genes. The differentiation was also confirmed by the adipogenic and osteogenic differentiation. Neural differentiation of the reprogrammed cells was obtained by the method described by Song et. al (2008) and evaluated by immunofluorescence. Population growth was quantified by hemocytometer. All co-cultured cells showed adipogenic and osteogenic differentiation capacity. After co-cultivation cells began transcribing the pluripotency gene KLF4. Statistically significant differences in the parameters area, diameter, optical density and fractal dimension were observed by confocal microscopy in reprogrammed and neural differentiated cells. The population of reprogrammed cells doubled every three days until the addition of the last medium of neural differentiation, when cultures became quiescent until the end of the neural differentiation. The contact in form of co-cultivation of fibroblasts with umbilical cord blood mononuclear fraction for six days promoted the reprogramming of these cells to a indifferentiation stage, allowing the induction of neural differentiation later. / As terapias celulares representam uma nova fronteira para o tratamento de diversas doen?as, inclusive patologias relacionadas ao sistema nervoso central. O sangue de cord?o umbilical humano ? uma atrativa fonte de c?lulas-tronco, por?m, apresenta uma popula??o heterog?nea com pouca quantidade de c?lulas-tronco mesenquimais. Atualmente, a reprograma??o celular induzida atrav?s de metodologias distintas, pode conferir pluripot?ncia ?s c?lulas adultas diferenciadas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de reprograma??o de fibroblastos e a diferencia??o neural ap?s co-cultivo com fra??o mononuclear de sangue de cord?o umbilical. Foram obtidas c?lulas da fra??o mononuclear de quatro cord?es umbilicais humanos de pacientes atendidas no Centro Obst?trico do Hospital S?o Lucas da PUCRS. As suspens?es celulares foram fracionadas em gradiente de densidade 1077. A fra??o mononuclear de cada amostra foi cultivada por sete dias e ap?s, contaminada com 105 c?lulas da linhagem de fibroblasto de camundongos NIH 3T3 e co-cultivadas por 6 dias. Para avalia??o da pluripot?ncia, foi realizada extra??o de RNA e posterior amplifica??o utilizando oligonulceot?deos espec?ficos para os genes de pluripot?ncia Oct3/4, Sox2 e KLF4. O fen?tipo mesenquimal foi confirmado pela diferencia??o adipog?nica e osteog?nica. A neurodiferencia??o das c?lulas reprogramadas seguiu o m?todo descrito por Song et. al (2008) e foi avaliada por imunofluoresc?ncia. O crescimento populacional foi quantificado em hemocit?metro. Todas as c?lulas co-cultivadas mostraram capacidade de diferencia??o adipog?nica e osteog?nica. Ap?s o co-cultivo, as c?lulas passaram a transcrever o gene de pluripot?ncia KLF4. Diferen?as estatisticamente significativas nos par?metros ?rea, di?metro, densidade ?ptica e dimens?o fractal foram observadas por microscopia confocal nas c?lulas reprogramadas e neurodiferenciadas. A popula??o de c?lulas reprogramadas duplicou a cada tr?s dias at? o momento da adi??o do ultimo meio de neurodiferencia??o, quando as culturas tornaram-se quiescentes at? o final do per?odo de neurodiferecia??o. O contato em forma de co-cultivo dos fibroblastos com a fra??o mononuclear de cord?o umbilical por seis dias promoveu a reprograma??o dessas c?lulas a um est?gio com certa plasticidade, permitindo a indu??o posterior de neurodiferencia??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460424.pdf: 208542 bytes, checksum: c614e57b83b06eea8ef4c11836bbd946 (MD5) Previous issue date: 2014-01-14 / Oral cancer is among the six most common types of cancer worldwide, considered as the seventh most frequent in the Brazil. Tumor angiogenesis has become a promising target for the treatment of malignancies. Methods that allow three-dimensional evaluation of the vascular network of tumors have a great importance to assess the effects of antiangiogenic treatments in tumors. The objective of this study was to evaluate the effect of sunitinib maleate and the metronomic chemotherapy with cyclophosphamide on the vascular network of the oral squamous cell carcinoma by scanning electron microscopy (SEM) of corrosion casts. 24 Syrian hamsters (Mesocricetus auratus) were divided into three groups of eight animals each and had their right buccal pouches submitted to tumor induction with dimethylbenzanthracene and carbamide peroxide for 55 days. Following, the animals were maintained without treatment (group I) or receiving sunitinib (group II), or cyclophosphamide (group III) for a period of 4 weeks. After the treatment, six animals of each group had their vascular networks casted by Mercox? resin and analyzed qualitatively and quantitatively by SEM. The two remaining animals of each group had their buccal pouches prepared for qualitative analysis by light microscopy. It was observed changes in the angioarchitecture of the pouches that were treated with these two drugs, suggesting an improvement in the tumors vascularization. The main changes caused by the treatments were the reduction of vessel tortuosity, the reestablishment of vascular hierarchy, besides the decrease of sprouting and intussusception images, compressed vessels, saccular dilations, and other vascular figures. Quantitative analysis of the samples exhibited a statistically significant reduction in vascular diameter and intervascular distances ofthe pouches treated with cyclophosphamide, when compared with the pouches no treated and those treated with sunitinb. The findings of the present study suggest that these two drugs may act in the vascular normalization of squamous cell carcinomas induced in hamster buccal pouch, however the metronomic chemotherapy exhibited superior results. / O c?ncer oral est? entre os seis tipos mais comuns de c?ncer no mundo, sendo o s?timo mais encontrado entre a popula??o brasileira. O processo de angiog?nese tumoral tem-se tornado um alvo promissor para o tratamento de neoplasias malignas. Os m?todos que permitem a avalia??o tridimensional da angioarquitetura dos tumores s?o de grande import?ncia na an?lise dos efeitos de tratamentos antiangiog?nico. Este trabalho visou avaliar o efeito do maleato de sunitinibe e da quimioterapia metron?mica com ciclofosfamida na vasculatura do carcinoma oral de c?lulas escamosas, atrav?s de microscopia eletr?nica de varredura (MEV) de r?plicas vasculares. Assim, 24 hamsters s?rios (Mesocricetus auratus) divididos em tr?s grupos de oito animais cada, tiveram suas bolsas jugais direitas submetidas ? indu??o tumoral com dimetilbenzantraceno e per?xido de carbamida por 55 dias, sendo mantidos por mais 4 semanas sem tratamento (grupo I), ou recebendo sunitinibe (grupo II), ou ciclofosfamida (grupo III). Ap?s o tratamento, seis animais de cada grupo tiveram suas redes vasculares moldadas pela resina Mercox? e analisadas qualitativa e quantitativamente em MEV. Os dois animais restantes de cada grupo tiveram suas bolsas qualitativamente analisadas em microscopia de luz. Foram observadas modifica??es na angioarquitetura das bolsas que receberam tratamento com os dois f?rmacos, o que gerou uma normaliza??o da vasculariza??o dos tumores. As principais modifica??es provocadas pelos tratamentos foram a redu??o da tortuosidade dos vasos, o reestabelecimento da hierarquia vascular, al?m da diminui??o de imagens de sprouting e intussuscep??es, vasos comprimidos, dilata??es saculares e outras figuras vasculares. A an?lise quantitativa das amostras evidenciou uma redu??o estatisticamente significativa do di?metro vascular e das dist?ncias intervasculares nas bolsas tratadas com ciclofosfamida, quando comparadas com as bolsas que n?o receberam tratamento e com aquelas tratadas com sunitinibe. Os achados do presente estudo sugerem que essas duas drogas podem atuar na normaliza??o da rede vascular no carcinoma de c?lulas escamosas induzido em bolsa jugal de hamster; no entanto a quimioterapia metron?mica apresentou resultados superiores.

Introdução: Empiema pleural em geral decorre de complicação de pneumonias e, se não identificado e tratado precocemente, pode ocasionar aumento morbidade ou mesmo mortalidade. A identificação de marcadores no líquido pleural de efusões parapneumônicas que mostrem a presença ou a evolução precoce para empiema tem significância clínica. Neste cenário, dosagens das concentrações de frações ativadas do complemento no líquido pleural podem ajudar no diagnóstico precoce do empiema. Objetivos: Comparar as concentrações de frações ativadas do complemento (C3a, C5a e C5b9) em efusões pleurais induzidas em ratos por inoculação intrapleural de bactérias ou por irritante químico estéril (terebentina). Métodos: Trinta e nove ratos Wistar machos, peso médio de 414g (290 a 546g), realizaram anestesia geral com isofluorano inalatório por máscara, e toracocentese no 4º espaço intercostal com abocath conectado a oscilômetro de pressão para confirmar posição intrapleural. Os animais foram divididos em 3 grupos: SA (n=17) - inoculação de Staphylococcus aureus; SP (n=12) - inoculação de Streptococcus pneumoniae; C (n=10) – inoculação de terebintina (efusão pleural estéril, controle). Doze horas após a inoculação intrapleural foi coletado liquido pleural por toracocentese, sob controle ecográfico, e realizadas dosagens de C3a, C5a e C5b9 pelo método ELISA. Resultados: A dosagem de C3a foi de 1066,82 μg/ml (937,29 – 1196,35 μg/ml) no grupo SA, 1188,28 μg/ml (1095,65 – 1280,92 μg/ml) no SP, e de 679,13 μg/ml (601,29 – 756,98 μg/ml) no C (p<0,001). A dosagem de C5a foi de 55.727 ng/ml (41,22 – 70,23 ng/ml) no grupo SA, 520.107 ng/ml (278,92-761,3 ng/ml) no SP, e de 5.268 ng/ml (1,68 – 8,85 ng/ml) no C (p<0,001). A dosagem de C5b9 foi de 15,02 ng/ml (13,1 – 16,94 ng/ml) no SA, de 16,63 ng/ml (14,37 – 18,9 ng/ml) no SP, e de 14,05 ng/ml (9,8 – 18,29 ng/ml) no C (p=0,692). A avaliação das curvas ROC demonstrou área sob a curva de 0,987 (IC95% 0,953-1) para o C3a; 1 para C5a (1-1) e 0,757 (0,523-0,990). Conclusões: As frações ativadas dos complementos C3a e C5a foram significativamente maiores nos empiemas induzidos experimentalmente por inoculação intrapleural de Staphylococcus aureus e Streptococcus pneumoniae do que com aquelas observadas após inoculação intrapleural de terebentina. A dosagem elevada destas frações ativadas do complemento foi útil para o diagnóstico do empiema pleural induzido em ratos. / Background Pleural empyema is a well-known complication of pneumonia. If treatment is delayed, empyema may increase morbidity and mortality in affected patients. Therefore, the identification of empyema biomarkers in parapneumonic pleural effusion is desirable. Previous research has suggested complement activation products as candidate empyema markers. Objective To compare the levels of complement activation products C3a, C5a, and C5b9 in pleural effusion induced by Staphylococcus aureus (SA), Streptococcus pneumoniae (SP), or turpentine (control). Method Thirty-nine male Wistar rats (mean weight 414g; 290-546g) were allocated as follows: 17 animals in the SA group, 12 in the SP group, and 10 in the control group. Bacteria or turpentine were injected into the pleural space. After 12h, intrapleural fluid was collected using ultrasound-guided thoracentesis. Levels of complement activation products were determined using ELISA kits. Results Two SA and 1 SP animals died before 12h. Mean levels were as follows: C3a: 1066.82 μg/mL (937.29-1196.35 μg/mL) in SA, 1188.28 μg/mL (1095.65-1280.92 μg/mL) in SP, and 679.13 μg/mL (601.29-756.98 μg/mL) in controls (p<0.001); C5a: 55.727 ng/mL (41.22-70.23 ng/mL) in SA, 520.107 ng/mL (278.92-761.3 ng/mL) in SP, and 5.268 ng/mL (1.68-8.85 ng/mL) in controls (p<0.001); C5b9: 15.02 ng/mL (13.1-16.94 ng/mL) in SA, 16.63 ng/mL (14.37-18.9 ng/mL) in SP, and 14.05 ng/mL (9.8-18.29 ng/mL) in controls (p=0.692). ROC analysis revealed an area under the curve of 0.987 (95%CI: 0.953-1) for C3a; 1 (1-1) for C5a; and 0.757 for C5b9 (0.523-0.990). Conclusions In the present rat model, complement activation fragments C3a and C5a accurately detected infected pleural effusion.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418376-Texto+Completo-0.pdf: 1759547 bytes, checksum: abe3efb07dc975e78ecba705690c7f76 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: The only curative treatment currently available for cirrhotic patients is liver transplantation. However, there are limitations with this treatment, making necessary the development of new methods. Acumulating evidence indicates that stem cell transplantation is therapeutically effective in chronic liver diseases. The objective of this study was to evaluate the potential of intraportal transplantation of bone marrow mononuclear cells in an induced cirrhosis model in rats. Methods: Twenty-four female Wistar rats, 14 days after ligation of the common bile duct were randomized to perform a transplantation of 1x107 mononuclear cells from bone marrow obtained from male Wistar rats or saline infusion by the portal route, guided by echography. On the 28th day of the experiment, the rats were sacrificed and serum albumin, bilirubin and aminotransferases were quantified. The area of hepatic fibrosis was determined by picrosirius red staining, and the identification of cells derived from male bone marrow was performed by immunohistochemical staining with anti-Sox 18 antibody. Results: After transplantation, a strong hepatic repopulation with cells from the donor bone marrow was detected in 75% of the treated rats. There was a significant reduction in the area of fibrosis in the cell therapy group (P=0. 036), without alteration in the biochemical parameters. However, when evaluating the group showing incorporation of bone marrow cells, besides a reduction in fibrosis (P=0. 043), there was an increase in serum albumin levels (P=0. 008).Conclusion: Intraportal transplantation of mononuclear bone marrow cells can be an effective treatment for hepatic repopulation, reduction of fibrosis, and increase in serum albumin, making this a potential alternative therapy for human cirrhosis. / Introdução: O único tratamento curativo disponível atualmente para pacientes cirróticos é o transplante hepático. Existem, entretanto, limitações na aplicação desta terapêutica, tornando necessário o desenvolvimento de novos métodos. Evidências crescentes têm demonstrado que o transplante de células-tronco pode tornar-se uma terapia eficaz em hepatopatias crônicas. O objetivo deste estudo é avaliar o potencial do transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea em modelo de cirrose induzida em ratos. Metodologia: Vinte e quatro ratos Wistar fêmeas, quatorze dias após a ligadura de ducto biliar comum, foram randomizados para realização de transplante de 1x107 células mononucleares de medula óssea de ratos Wistar machos ou infusão salina através da veia porta, orientada por ecografia. No 28º dia do experimento os ratos foram sacrificados, com quantificação de albumina, bilirrubinas e aminotransferases séricas, além da aferição quantitativa da área de fibrose hepática através do picrossirius e identificação das células derivadas da medula óssea com a realização de imunohistoquímica com Anti-Sox 18. Resultados: Após o transplante verificou-se forte repovoamento hepático com células da medula óssea do doador em 75% dos ratos. Houve redução significativa da área de fibrose no grupo da terapia celular (P=0,036), sem alteração nos parâmetros bioquímicos. Quando, entretanto, avaliaram-se os grupos pela incorporação de células da medula óssea, além da redução da fibrose (P=0,043) houve aumento dos níveis séricos de albumina (P=0,008) no grupo que apresentou repopulação. Conclusão: O transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea pode ser uma terapêutica eficaz para repopulação hepática, redução da fibrose e aumento da albumina sérica, podendo torna-se alternativa para o tratamento de cirrose em humanos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411954-Texto+Completo-0.pdf: 1943189 bytes, checksum: b8512a0b7a8966dc29fb921e76e53ab4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: The bone grafts are still used frequently in the resolution of clinical situations with loss of bone substance. The viability of bone cells transferred with the graft is crucial in the mechanical and physiological properties of the graft. A question inherent to the surgical procedure when using vascularised bone grafts is: will the bone graft maintain its viability through the vascular pedicle over time? Through an experimental model, we desire to create inferences about the viability of vascularised bone graft from the iliac crest in rats and check their histological features. Methods: We used 23 isogenic male Kyoto rats, which were divided into two groups, the first consisting of animals subjected to the technique of vascularised bone graft from the iliac crest and pedicled on the iliac branch of the iliolumbar artery, and the second (control group) underwent the same procedure the first with the addition of ligation of the vascular pedicle. The viability of bone grafts was observed for three weeks, by direct observation of the graft, histology and immunohistochemistry. Results: All vascularised grafts evaluated in the first week showed viability by direct observation, histology and immunohistochemistry. Meanwhile in the second and third weeks the grafts were shown to be not viable in 75% of cases when subjected to evaluation by the direct observation and 50% of cases when performed for histological analysis and immunohistochemistry. Conclusions: Some vascularised grafts in their design have become unviable and began to behave as if non-vascularised grafts under the direct observation and histology. Despite the possibility of failure, the use of vascularized bone grafts should be encouraged, because the descriptive histology showed greater cell density in the portion medullary bone, osteocytes with greater functionality in the deposition of bone matrix, with intra-vascular network bone preserved. / Introdução: Os enxertos ósseos continuam sendo utilizados com freqüência na resolução de situações clínicas com perda de substância óssea. A viabilidade das células ósseas transferidas com o enxerto é um dos fatores determinantes para as propriedades mecânicas e fisiológicas do enxerto. Uma dúvida inerente ao procedimento cirúrgico quando se utiliza enxertos ósseos vascularizados é: será que o enxerto ósseo manterá sua viabilidade através do pedículo vascular com o decorrer do tempo? Através de um modelo experimental, almejamos criar inferências sobre a viabilidade do enxerto ósseo vascularizado da crista ilíaca em ratos e verificar suas características histológicas. Métodos: Foram utilizados 23 ratos machos isogênicos da linhagem Kyoto, os quais foram divididos em dois grupos, o primeiro composto por animais submetidos à técnica do enxerto ósseo vascularizado da crista ilíaca baseado no ramo ilíaco da artéria iliolombar, e o segundo (grupo controle) submetidos ao mesmo procedimento que o primeiro com a adição da ligadura do pedículo vascular. A viabilidade dos enxertos ósseos foi verificada durante três semanas, através da visualização direta do enxerto, histologia e imuno-histoquímica. Resultados: Todos os enxertos vascularizados avaliados na primeira semana apresentaram viabilidade segundo a observação direta, histologia e imuno-histoquímica. Entretanto na segunda e terceira semana os enxertos mostraram-se inviáveis em 75% dos casos quando submetidos à avaliação segundo a observação direta e em 50% dos casos quando realizada a análise histológica e imuno-histoquímica. Conclusão: Alguns enxertos vascularizados em sua concepção tornaram-se inviáveis e passaram a se comportar como enxertos não-vascularizados sob a análise da observação direta e histológica. Apesar da possibilidade de falha, o uso de enxertos ósseos vascularizados deve ser incentivado, pois a histologia descritiva demonstrou maior densidade celular na porção óssea medular, osteócitos com maior funcionalidade na deposição de matriz óssea, com rede vascular intra-óssea preservada.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000410177-Texto+Completo-0.pdf: 3937581 bytes, checksum: 9588bb7a228c103426c20b2050c969d6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Epilepsy affects 1% of the world population and 30% of these patients are refractory to medication now available. Stem cells host hope in the treatment of epilepsy. Given their ability to proliferate, differentiate and regenerate tissues they could fix neural circuits and reestablish the physiological excitability of neurons. This study aimed to verify the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSC) and cells that underwent a process or lysis obtained from the bone marrow on seizure control and on progressive neuronal loss induced by experimental epilepsy. Experimental status epilepticus (SE) was induced by lithium-pilocarpine injection (127 mg/kg; ip and 60 mg/kg; ip respectively). Seizures were scored by Racine’s scale. The duration of SE was controlled with diazepan (10mg/kg; ip; 90 minutes after SE onset). Control animals received saline other than pilocarpine. Twenty-two days after SE, rats were randomly assigned into five groups: PILO; PILO+MSC; PILO+Lysis, Control and Control+MSC. MSC groups received cell transplantation (obtained from EGFP C57BL/6 mice). PILO+Lysis rats also received cells obtained from the bone marrow of EGFP C57BL/6 mice, but that previously underwent lysis. The other groups received saline in the same volume. All transplants were via tail vein (104-6 cells, 200μL).Pilocarpine-treated animals were monitored for the presence of spontaneous seizures for 21 days (7 prior to cell transplant and 14 afterwards). Forty-five days later rats were evaluated in: the Morris water maze (MWM), the object recognition task, open field and the elevated plus maze. Twenty-four hours, 7, 14, 21, 60 and 135 days after the transplant rats were sacrificed. The hippocampi were collected in order to verify the presence of EGFP using PCR. Rats included in the histological evaluation were sacrificed 4 months after transplantation. The hippocampal volume, volumes of CA1, CA2, CA3 and CA4, as well as density and total of cells were evaluated. Finally, MSC bone marrow cells were evaluated via flow cytometry before and after culture. Our results show that MSC do not reduced the frequency of spontaneous seizures. On the other hand, animals given lysed cells had reduced seizure frequency. In addtion, epileptic rats treated with MSC had improved performance in the object recognition task, but not in the MWM. On the other hand, the treatment with lysed cells did not lead to improvement in any of the aforementioned tasks. We also observed that lithium-pilocarpine-treated animals showed lower cell count, density and hippocampal volume when compared to control rats. Furthermore, neither MSC or Lise led to significative changes in any of the analysed variables, except for hippocampal volume, which was increased in PILO+MSC and PILO+Lysis when compared to PILO animals. The flow cytometry analysis of the samples revealed that MSC were positive to CD45, CD19, CD34, CD117 and Sca-1. Finally, we detected EGFP in samples obtained from the hippocampus of transplanted animals. During the last years much has been done to study the application of stem cells in several neurodegenerative diseases. In the future, this kind of approach can also be valid in the treatment of chronic epilepsy, although the ideal stem cell type remains to be established. / A epilepsia atinge cerca de 1% da população mundial, sendo que aproximadamente 30% desses pacientes não respondem ao tratamento medicamentoso. Por sua vez, as células tronco representam uma esperança de tratamento da epilepsia, porquanto têm grande capacidade de proliferação, diferenciação e regeneração de tecidos, podendo restaurar circuitos neurais e restabelecer a excitabilidade neuronal fisiológica. O objetivo deste estudo foi verificar se as células tronco mesenquimais (CTM) ou se células lisadas (Lise Celular) obtidas da medula óssea apresentam potencial terapêutico no controle das crises epilépticas e do dano neuronal progressivo induzido pela epilepsia experimental. Os animais foram injetados com lítio-pilocarpina (127 mg/kg e 60 Mg/kg i. p., respectivamente) para indução de status epilepticus (SE). As crises comportamentais foram classificadas de acordo com a escala de Racine e a duração do SE foi controlada com diazepam (10 mg/kg, i. p., 90 minutos). Os animais controle receberam solução salina. Após 22 dias, o total dos animais foi dividido em cinco grupos: PILO; PILO+CTM, PILO+Lise, Salina e Salina+CTM. Os grupos CTM receberam transplante de células tronco mesenquimais, obtidas da medula óssea de camundongos EGFP C57BL/6. O grupo PILO+Lise recebeu células também provenientes da medula óssea desses animais, mas que passaram previamente por um processo de lise celular. Os animais dos grupos Salina e PILO receberam solução salina. Todos os transplantes foram feitos via veia da cauda (104-6 células, 200μL).Os animais tratados com pilocarpina (PILO) foram monitorados por vídeo durante sete dias pré-transplante, e outros catorze dias após o procedimento, para observação e computação de crises espontâneas recorrentes (CERs). Ainda, 45 dias depois da injeção das células os animais foram avaliados nas seguintes tarefas: labirinto aquático de Morris (LAM), reconhecimento de objetos, campo aberto e labirinto em cruz elevado. Decorridos 24 horas, 07 dias, 14 dias, 21 dias, 60 dias e 135 dias do transplante os animais foram sacrificados, e foram coletados os hipocampos direito e esquerdo para análise da presença de EGFP por PCR. Para a avaliação histológica, os animais foram sacrificados 04 meses após o transplante, tendo sido analisados o volume hipocampal, o volume dos núcleos CA1, CA2, CA3 e CA4, bem como a densidade e o número total de células nestes núcleos. Finalmente, as células provenientes da medula óssea de camundongos C57/BL6 antes e após serem cultivadas foram avaliadas por citometria de fluxo. Nossos resultados demonstram que as células mesenquimais injetadas não reduzem as CERs. Já para os animais tratados com lisado celular, verificamos que há redução na freqüência de crises. A administração de CTM aos animais tratados com PILO promoveu melhora cognitiva no paradigma do reconhecimento de objetos, sem, porém, melhorar a performance destes animais no LAM. O tratamento com lisado celular, por sua vez, não levou a melhor desempenho em quaisquer dos paradigmas cognitivos citados acima. Por meio da análise histológica podemos observar que os animais tratados com lítio-pilocarpina apresentavam contagem total de células, densidade e volume inferiores aos animais controle. Ainda, CTM ou Lise não produziram aumento significativo em nenhuma das variáveis analisadas, com exceção do volume hipocampal, que se apresentou maior nos grupos PILO+CTM no hemisfério direito e PILO+Lise em ambos os hemisférios. Por outro lado, a análise dos dados obtidos na citometria de fluxo revelou que as CTM são positivas para os seguintes marcadores de superfície CD45, CD19, CD34, CD117 e Sca-1. Finalmente, detectamos a presença de EGFP em amostras obtidas do hipocampo de animais transplantados com CTM, resultado que demonstra que as células administradas intravenosamente migram ao sistema nervoso central. Nos últimos anos, estudos que buscam tratamentos baseados em células tronco para as mais diversas doenças neurodegenerativas foram vistos com muito interesse. Este tipo de tratamento pode, no futuro, ser útil também no tratamento da epilepsia crônica, embora ainda seja preciso estabelecer com mais clareza o tipo de célula tronco ideal.