Mulungu (Erythrina verna Vell.- Fabaceae) é uma espécie arbórea nativa do Brasil, conhecida popularmente por amansa-senhor, árvore-de-coral, corticeira, suiná-suinã, dentre outros. Quimicamente é caracterizada principalmente pela presença de flavonóides, pterocarpanos, alcalóides e outros. Dentre os alcalóides isolados, pode-se citar hipaforina, eritravina, erisotrina, eritrartina e seus derivados. Inúmeros artigos científicos descrevem atividades biológicas tais como ansiolítica, anticonvulsivante, antinociceptiva e antibacteriana, além de efeitos tóxicos frente a larvas de camarão Artemia salina. O presente trabalho visa estabelecer parâmetros para o controle de qualidade da droga vegetal, casca de Erythrina verna, bem como comparar o perfil cromatográfico do extrato alcaloídico de suas diferentes partes e confrontar os dados com outras espécies do mesmo gênero. A descrição botânica macro e microscópica das cascas foi realizada, assim como o estabelecimento dos parâmetros de controle de qualidade, tais como cinzas totais (6,47±0,58%) e insolúveis (1,08±0,43%), teor de extrativos (12,03±0,81%) teor de alcalóides totais (0,081±0,0081%) e perda por dessecação, tanto pelo método gravimétrico (10,54±0,009%) quanto por balança de infravermelho (10,39±0.07%). Também foi estabelecido que as condições mais favoráveis para a produção de extrato bruto de E. Verna é a decocção do pó das cascas em solvente hidroalcoólico. Com base no perfil cromatográfico dos alcalóides de E. verna, foi possível identificar a presença de eritravina por meio de co-injeção com o produto isolado/identificado, bem como comparar o perfil das diferentes partes da planta e ainda confrontar os dados de E. verna a outras espécies do gênero. / Mulungu (Erythrina verna vell. - Fabaceae) is an arboreal species native of the Brazil, and popularly known as amansa-senhor, árvore-de-coral, corticeira, suiná-suinã, tiricero, among others. Chemically, it is mainly characterized by the presence of, flavonoids, alkaloids and pterocarpans. Hypaphorine, erythravine, erysothrine, erythrartine and its derivatives, are the main isolated alkaloids. Some scientific articles describe biological activities such as anxiolytic, antibacterial, anticonvulsant and antinociceptive. Toxicity against shrimp Artemia salina is also described. This work aims to establish parameters for the quality control of raw vegetable bark of E. verna, as well as compare the chromatographic profile of the alkaloidic extract obtained from defferent parts of the plant and compare the data to other related species of the same genus. The macro and microscopic description of the barks was performed, as well as the establishment of quality control parameters such as the total ash (6.47 ± 0.58%) and insoluble ash (1.08 ± 0.43%), water-soluble extractives (12.03 ± 0.81%), total alkaloids content (0.081 ± 0.0081%) and loss on drying by gravimetric method (10.54 ± 0.009%) and infrared balance (10,39±0.07%).It was established that the more favourable condition for the production of crude extract of E. verna is the decoction of powered bark in hydroalcoholic solvent. Based on the chromatographic profile of alkaloids of E. verna, it was possible to identify the presence of erythravine through isolated/identified coinjection product, as well as to compare the profile of the different parts of the plant and still confronting data E. verna to other species of the genus.

Orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Maysa Furlan / Banca: Carmen Lúcia Cardoso / Resumo: O gênero Erythrina (Fabaceae) é amplamente conhecido pela forte presença de alcaloides eritrínicos, os quais são uma classe de metabólitos secundários descritos como marcadores quimiotaxonômicos do gênero. Estes alcaloides também são responsáveis por uma série de atividades biológicas relacionadas ao tratamento de desordens como insônia, ansiedade, depressão e epilepsia, dentre outras ações no Sistema Nervoso Central, tornando as espécies deste gênero potenciais drogas vegetais para o desenvolvimento de fitoterápicos. A eficácia de tais medicamentos só é possível se houver controle de qualidade rigoroso de todo o processo produtivo para garantir segurança toxicológica e constância na ação terapêutica, os quais são requisitos fundamentais exigidos para os medicamentos modernos. Um dos meios utilizados para tal fim é o perfil cromatográfico (fingerprint), o qual é indicado pela Farmacopeia Chinesa como um método potencial e mais confiável para o controle de qualidade de misturas complexas, como plantas medicinais. Neste contexto, o intuito deste trabalho é desenvolver método por UPLC-DAD-MS para obtenção de perfil cromatográfico dos extratos hidroalcoolicos de três espécies de Erythrina: E. verna, E. falcata e E. dominguezii, amplamente citadas em compêndios de medicina popular. Por apresentarem mesmo nome popular, mulungu, o controle de qualidade das espécies deste gênero faz-se necessário já que apresentam composições químicas diferentes. A abordagem empregada neste trabalho ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Erythrina (Fabaceae) is widely known for the strong presence of alkaloids, which are a class of secondary metabolites described as chemotaxonomic markers of the genus. These alkaloids are also responsible for a number of biological activities related to the treatment of disorders such as insomnia, anxiety, depression and epilepsy, among other actions in the Central Nervous System, making the species of this genus potential plant drugs for the development of herbal medicines. The efficacy of such drugs is only possible if there is strict quality control of the entire production process to ensure toxicological safety and consistency in therapeutic action, which are fundamental requirements for modern medicines. One of the means used for this purpose is the fingerprint, which is indicated by the Chinese Pharmacopoeia as a potential and more reliable method for quality control of complex mixtures, such as medicinal plants. In this context, the aim of this work is to develop a method by UPLC-DAD-MS to obtain a chromatographic profile of the hydroalcoholic extracts of three species of Erythrina: E. verna, E. falcata and E. dominguezii, widely cited in compendia of popular medicine. Because they present the same popular name, mulungu, the quality control of the species of this genus is necessary since they present different chemical compositions. The approach used in this work was the preparation of a representative and complex sample (MIX) containing the three species und... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-02-21T16:55:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3585750 bytes, checksum: 4665eaf37ac59831b46791b3008ff303 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T16:55:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3585750 bytes, checksum: 4665eaf37ac59831b46791b3008ff303 (MD5) Previous issue date: 2016-08-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A espécie Coffea arabica L. (café arábica) originou-se no sub-bosque de sombra moderada da Etiópia. A introdução no Brasil seguiu os padrões nativos dos sub-bosques africanos, posteriormente com a exportação, começaram a ser plantado a pleno sol, entretanto, em regiões montanhosas de altitude elevada, a produção sombreada continuou sendo realizada por pequenos agricultores familiares. O sombreamento proporciona barreira contra ventos e geadas, melhora na qualidade do fruto devido à maturação mais lenta e a redução da bienalidade do café. No entanto, devido a divergências de resultados, favoráveis e desfavoráveis do cultivo do café sombreado, faz-se necessário um estudo maior quanto ao modelo necessário para que o cultivo do café sombreado seja melhor e eficiente, capaz de gerar predições sobre melhor disposição de sombreamento do café em diferentes climas e relevos. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivo geral criar modelo capaz de predizer o melhor formato para o cultivo do café sombreado em diferentes relevos bem como quais espécies de árvores podem ser inseridas nesse cultivo. Para isso, foram realizadas avaliações micrometeorológicas, por período de oito meses (2015 e 2016), em experimento de cultivar Oeiras, espécie Café Arábica, com oito anos de idade, espaçadas em 2,80 por 0,75 m, conduzido a pleno sol e consorciado com, eritrina (Erythrina poppigiana), com distância do cafeeiro para as árvores na 1a linha de 1,40 m e 2a linha de 4,20 m, em área experimental da UFV. A umidade do solo foi aferida com auxílio de sensores TDR, temperatura do ar foi avaliada com sensores termisor e a precipitação por pluviógrafo tipo báscula. Foi realizado o escaneamento, com o equipamento laser scanner das feições do relevo, altura e diâmetro da copa da copa dos cafeeiros, calculando o índice de área foliar (IAF). As feições do relevo foram incluídos na estatística de programação com o ArcGIS, gerando o modelo digital de superfície e de elevação. A Radiação Global foi verificada através de piranômetro. Após a coleta dos dados de radiação in situ, foi simulado o modelo do sistema agroflorestal, através da ferramenta Solar Analyst, do ArcGIS. Esse modelo foi relacionado com as medições reais, verificando se a simulação realizada pelo software correspondem às leituras realizadas em campo durante o mesmo período. Foi observado que a precipitação no período do experimento, no geral, teve um comportamento próximo da Normal Climatológica - NC, com a exceção dos meses de janeiro e fevereiro de 2016. Para todo o período do experimento as temperaturas máximas medidas em Viçosa estiveram em média cerca de 1,7oC acima da NC, com valores mais extremos nos meses de novembro e dezembro de 2015, cerca de 3,6oC e 3,1oC respectivamente. O mesmo ocorreu para as temperaturas máximas coletadas no experimento, porém com valores em média de 3,2oC acima da NC, com destaque para os meses de novembro e dezembro de 2015 em que a temperatura máxima atingiu valores de cerca de 5,0oC acima do esperado. O SAF reduziu o gradiente de temperatura, apresentando redução de 2 oC para médias de temperaturas máximas e aumento de 1 oC para temperaturas mínimas. Foi possível identificar as feições do café e calcular o IAF, apresentando média de 4,4 e 3,6 para SAF e SPS, respectivamente. Valores próximos de IAF foram encontrados em cafeeiros com idades semelhantes utilizando técnicas convencionais de estimativa do IAF. No modelo de radiação foram encontrados correlações entre os dados medidos e simulados de 0,95 para dias de céu limpo. / The species Coffea arabica L. (arabica) originated in the moderate shade sub-forest of Ethiopia. The introduction in Brazil followed the native patterns of the African sub-forests, later with the export, began to be planted in full sun, however, in mountainous regions of high altitude, the shaded production continued being realized by small familiar farmers. Shading provides a barrier against wind and frost, improved fruit quality due to slower maturation and reduced coffee bienniality. However, due to disagreements of favorable and unfavorable results of the cultivation of shaded coffee, it is necessary to study more about the model necessary for shade cultivation to be better and efficient, capable of generating predictions about better shading arrangement Of coffee in different climates and reliefs. Therefore, this work had as general objective to create a model able to predict the best format for the cultivation of shaded coffee in different reliefs as well as which tree species can be inserted in this crop. For that, micrometeorological evaluations were carried out for a period of eight months (2015 and 2016), in an experiment of cultivar Oeiras, species Café arabica, with eight years of age, spaced at 2.80 by 0.75 m, conducted in full sun (Erythrina poppigiana), with distance from the coffee tree to the trees in the 1st line of 1,40 m and the 2nd line of 4,20 m in the experimental area of the UFV. Soil moisture was measured with the aid of TDR sensors, air temperature was evaluated with thermometer sensors and rainfall by scale type pluviometer. Scanning was performed with laser scanner equipment of the relief features, height and diameter of the cup crown of the coffee trees, calculating the leaf area index (LAI). Relief features were included in the programming statistics with ArcGIS, generating the After the collection of in situ radiation data, the model of the agroforestry system was simulated using the ArcGIS Solar Analyst tool, which was related to the Measurements were performed in the field during the same period. It was observed that the precipitation in the period of the experiment, in general, had a behavior close to the Normal Climatological - NC, with the exception of the months of January and February, 2016. For the whole period of the experiment the maximum temperatures measured in Viçosa were on average about 1.7oC above the NC, with more extreme values in the months of November and December, 2015, about 3.6oC and 3.1 °C respectively. The same occurred for the maximum temperatures collected in the experiment, but with values on average of 3.2oC above the NC, highlighting the months of November and December of 2015 when the maximum temperature reached values of about 5.0oC above the expected. The SAF reduced the temperature gradient, presenting a reduction of 2oC for averages of maximum temperatures and increase of 1oC for minimum temperatures. It was possible to identify the coffee features and to calculate the LAI, presenting an average of 4.4 and 3.6 for SAF and SPS, respectively. Values close to IAF were found in coffee trees of similar ages using conventional IAF estimation techniques. In the radiation model correlations were found between the measured and simulated data of 0.95 for days of clear skies.

Mulungu (Erythrina verna Vell.- Fabaceae) é uma espécie arbórea nativa do Brasil, conhecida popularmente por amansa-senhor, árvore-de-coral, corticeira, suiná-suinã, dentre outros. Quimicamente é caracterizada principalmente pela presença de flavonóides, pterocarpanos, alcalóides e outros. Dentre os alcalóides isolados, pode-se citar hipaforina, eritravina, erisotrina, eritrartina e seus derivados. Inúmeros artigos científicos descrevem atividades biológicas tais como ansiolítica, anticonvulsivante, antinociceptiva e antibacteriana, além de efeitos tóxicos frente a larvas de camarão Artemia salina. O presente trabalho visa estabelecer parâmetros para o controle de qualidade da droga vegetal, casca de Erythrina verna, bem como comparar o perfil cromatográfico do extrato alcaloídico de suas diferentes partes e confrontar os dados com outras espécies do mesmo gênero. A descrição botânica macro e microscópica das cascas foi realizada, assim como o estabelecimento dos parâmetros de controle de qualidade, tais como cinzas totais (6,47±0,58%) e insolúveis (1,08±0,43%), teor de extrativos (12,03±0,81%) teor de alcalóides totais (0,081±0,0081%) e perda por dessecação, tanto pelo método gravimétrico (10,54±0,009%) quanto por balança de infravermelho (10,39±0.07%). Também foi estabelecido que as condições mais favoráveis para a produção de extrato bruto de E. Verna é a decocção do pó das cascas em solvente hidroalcoólico. Com base no perfil cromatográfico dos alcalóides de E. verna, foi possível identificar a presença de eritravina por meio de co-injeção com o produto isolado/identificado, bem como comparar o perfil das diferentes partes da planta e ainda confrontar os dados de E. verna a outras espécies do gênero. / Mulungu (Erythrina verna vell. - Fabaceae) is an arboreal species native of the Brazil, and popularly known as amansa-senhor, árvore-de-coral, corticeira, suiná-suinã, tiricero, among others. Chemically, it is mainly characterized by the presence of, flavonoids, alkaloids and pterocarpans. Hypaphorine, erythravine, erysothrine, erythrartine and its derivatives, are the main isolated alkaloids. Some scientific articles describe biological activities such as anxiolytic, antibacterial, anticonvulsant and antinociceptive. Toxicity against shrimp Artemia salina is also described. This work aims to establish parameters for the quality control of raw vegetable bark of E. verna, as well as compare the chromatographic profile of the alkaloidic extract obtained from defferent parts of the plant and compare the data to other related species of the same genus. The macro and microscopic description of the barks was performed, as well as the establishment of quality control parameters such as the total ash (6.47 ± 0.58%) and insoluble ash (1.08 ± 0.43%), water-soluble extractives (12.03 ± 0.81%), total alkaloids content (0.081 ± 0.0081%) and loss on drying by gravimetric method (10.54 ± 0.009%) and infrared balance (10,39±0.07%).It was established that the more favourable condition for the production of crude extract of E. verna is the decoction of powered bark in hydroalcoholic solvent. Based on the chromatographic profile of alkaloids of E. verna, it was possible to identify the presence of erythravine through isolated/identified coinjection product, as well as to compare the profile of the different parts of the plant and still confronting data E. verna to other species of the genus.

Mulungu (Erythrina verna Vell.- Fabaceae) é uma espécie arbórea nativa do Brasil, conhecida popularmente por amansa-senhor, árvore-de-coral, corticeira, suiná-suinã, dentre outros. Quimicamente é caracterizada principalmente pela presença de flavonóides, pterocarpanos, alcalóides e outros. Dentre os alcalóides isolados, pode-se citar hipaforina, eritravina, erisotrina, eritrartina e seus derivados. Inúmeros artigos científicos descrevem atividades biológicas tais como ansiolítica, anticonvulsivante, antinociceptiva e antibacteriana, além de efeitos tóxicos frente a larvas de camarão Artemia salina. O presente trabalho visa estabelecer parâmetros para o controle de qualidade da droga vegetal, casca de Erythrina verna, bem como comparar o perfil cromatográfico do extrato alcaloídico de suas diferentes partes e confrontar os dados com outras espécies do mesmo gênero. A descrição botânica macro e microscópica das cascas foi realizada, assim como o estabelecimento dos parâmetros de controle de qualidade, tais como cinzas totais (6,47±0,58%) e insolúveis (1,08±0,43%), teor de extrativos (12,03±0,81%) teor de alcalóides totais (0,081±0,0081%) e perda por dessecação, tanto pelo método gravimétrico (10,54±0,009%) quanto por balança de infravermelho (10,39±0.07%). Também foi estabelecido que as condições mais favoráveis para a produção de extrato bruto de E. Verna é a decocção do pó das cascas em solvente hidroalcoólico. Com base no perfil cromatográfico dos alcalóides de E. verna, foi possível identificar a presença de eritravina por meio de co-injeção com o produto isolado/identificado, bem como comparar o perfil das diferentes partes da planta e ainda confrontar os dados de E. verna a outras espécies do gênero. / Mulungu (Erythrina verna vell. - Fabaceae) is an arboreal species native of the Brazil, and popularly known as amansa-senhor, árvore-de-coral, corticeira, suiná-suinã, tiricero, among others. Chemically, it is mainly characterized by the presence of, flavonoids, alkaloids and pterocarpans. Hypaphorine, erythravine, erysothrine, erythrartine and its derivatives, are the main isolated alkaloids. Some scientific articles describe biological activities such as anxiolytic, antibacterial, anticonvulsant and antinociceptive. Toxicity against shrimp Artemia salina is also described. This work aims to establish parameters for the quality control of raw vegetable bark of E. verna, as well as compare the chromatographic profile of the alkaloidic extract obtained from defferent parts of the plant and compare the data to other related species of the same genus. The macro and microscopic description of the barks was performed, as well as the establishment of quality control parameters such as the total ash (6.47 ± 0.58%) and insoluble ash (1.08 ± 0.43%), water-soluble extractives (12.03 ± 0.81%), total alkaloids content (0.081 ± 0.0081%) and loss on drying by gravimetric method (10.54 ± 0.009%) and infrared balance (10,39±0.07%).It was established that the more favourable condition for the production of crude extract of E. verna is the decoction of powered bark in hydroalcoholic solvent. Based on the chromatographic profile of alkaloids of E. verna, it was possible to identify the presence of erythravine through isolated/identified coinjection product, as well as to compare the profile of the different parts of the plant and still confronting data E. verna to other species of the genus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Não informado. / A ansiedade no ambiente odontológico é um dos grandes problemas encontrados e entraves para os tratamentos propostos. O estado emocional ao que o paciente encontra-se é fator decisivo na resposta fisiológica. Entre o fator principal encontra-se a diminuição do limiar de dor. O objetivo deste trabalho foi avaliar e comparar a eficácia de 3 drogas frente a um placebo no controle de ansiedade odontológica em pacientes submetidos a exodontia de terceiros molares inclusos. Foi realizado um ensaio clínico, randomizado, controlado, triplo-cego, paralelo, envolvendo uma amostra de 200 voluntários, após diagnóstico e indicação para exodontia de terceiros molares mandibulares inclusos, assintomáticos e em posições e dificuldades cirúrgicas similares. Foi administrado Passiflora incarnata 500 mg ou Midazolam 15 mg ou Erythrina mulungu 500mg ou placebo, por via oral, 60 minutos antes do início do procedimento cirúrgico, de forma aleatória e paralela. Em todos os casos, para prevenção da hiperalgesia e o controle do edema foi administrado uma única dose de dexametasona 8 mg intramuscular, 30 minutos antes da cirurgia. A avaliação do grau de ansiedade dos sujeitos da amostra foi feita por meio de questionários (escala de ansiedade de Corah) e de parâmetros físicos, como frequência cardíaca (FC), pressão arterial (PA) e teor de saturação de oxigênio (SpO2), sendo delineada em três fases distintas: Fase I (basal); Fase II (dia da intervenção) e Fase III (consulta de retorno). Não houve diferenças estatisticamente significantes (qui-quadrado, p=0,9703) entre os grupos em relação aos gêneros dos indivíduos e nem em relação às idades. Também não houve diferenças estatisticamente significantes (Qui-quadrado, p=0,6440) entre os grupos com relação a proporção de indivíduos que se declararam “muito pouco” / “levemente” ansiosos com aqueles que se declararam “moderadamente” / “extremamente” ansiosos, previamente ao tratamento. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os diferentes tempos operatórios em nenhum dos grupos (Kruskal-Wallis, p>0.05) considerando a pressão arterial sistólica, diastólica e SpO2. Houve aumento da FC (Kruskal-Wallis, p<0.05) durante a anestesia para todos grupos, sendo que os valores diminuíram após esse período. Os pacientes que utilizaram midazolam e passiflora mostraram menores (Qui-quadrado, p<0,0001) níveis de ansiedade que o placebo e que o mulungum, sendo que não houve diferenças estatisticamente significantes entre o mulungum e placebo (p=0,1585) e nem entre midazolam e passiflora (p=0,7946). Houve mais (p<0,0001) voluntários relatando piora no quadro de ansiedade pelo uso do mulungum ou placebo do que em relação ao midazolam ou passiflora, mas não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (p=0,31) aqueles que relataram melhora no quadro de ansiedade. Concluiu-se que a Passiflora incarnata apresentou um efeito ansiolítico similar ao Midazolam, sendo segura e eficaz na sedação consciente de pacientes adultos submetidos a exodontias de terceiros molares mandibulares inclusos. Para cirurgia oral, mulungu não se mostrou eficaz no controle ansiolítico sob anestesia local.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The phytochemical study of the crude extract hexane, methanol and fractions (acid ether, basic ether and basic acetate) from the stem bark of E. crista-galli (Fabaceae) resulted in the isolation of four compounds: The phytosterol stigmasterol (70), the triterpene lupeol (71) and the alkaloids erysotrine (1) and epierythratidine (50), usual in the genus Erythrina. The structures of the isolated metabolites were elucidated by 1H and 13C NMR uni and bidimensional, and compared with standard sample and data available in the literature. The extracts, fractions and isolated compounds were tested for their antimicrobial and antitumor front cancer cells HT29 (colorectal) activities, as well as regarding the capacity of inhibition of enzymes prolyl oligopeptidase, dipeptidil peptidase-VI and acetylcholinesterase. The crude methanolic extract, all fractions and individual compounds showed high antimicrobial activity mainly against Gram-positive and Gram-negative bacteria. The results were satisfactory in POP inhibition assays, when the crude methanolic extract and its fractions, mainly acid ether fraction, showed great inhibitor potential against this enzyme. For DPP-IV only the crude hexane extract was active. The in vitro antitumoral activity of the crude methanolic extract, basic fractions and the isolate alkaloids was investigated at different concentrations against the human colon cancer cell line HT-29 (PicoGreen dsDNA assay). The results suggest that the anti-proliferative effect of E. crista-galli extract on HT-29 cancer cells may be attributed, at least in part, to the presence of the erythrinian alkaloids 1 and 50. / O estudo fitoquímico do extrato bruto hexânico, metanólico e frações (éter ácida, éter básica e acetato básica) das cascas do caule de E. crista-galli (Fabaceae) resultou no isolamento de quatro compostos: o fitoesterol estigmasterol (70) e o triterpeno lupeol (71) além dos alcaloides erisotrina (1) e epieritratidina (50) usuais do gênero Erythrina. As estruturas dos metabólitos isolados foram elucidadas através de RMN 1H e 13C, uni e bidimensionais, além de comparação com amostra padrão quando existente e dados disponíveis na literatura. Os extratos, as frações e os compostos isolados foram testados quanto à sua atividade antimicrobiana, antitumoral frente a células cancerígenas HT29 (colorretal) e de inibição das enzimas POP, DPP-IV e AChE. Dentre as amostras testadas, o extrato bruto metanólico (EBM), suas frações (FEA, FEB e FAB) e compostos isolados apresentaram grande potencial antimicrobiano principalmente frente as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Os resultados obtidos nos ensaios enzimáticos foram satisfatórios para a enzima POP, onde o EBM e suas frações, principalmente a fração éterea ácida (FEA), demonstraram grande potencial inibidor desta enzima. Para a DPP-IV apenas o extrato bruto hexânico (EBH) mostrou-se ativo. O efeito antitumoral da planta em questão também foi investigado e os resultados obtidos indicam que o EBM, a combinação das frações FEB e FAB e o alcaloide epieritratidina (50) possuem um grande efeito antiproliferativo frente às células do colorretal (HT29) após 72 horas de exposição.

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreyaKO_TESE.pdf: 2078188 bytes, checksum: f46c8cd05065c06b6071c9f058738b3f (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work was to analyze the activity of plants from Caatinga biome on the emergence and development of cowpea, melon and corn seedlings. From November 2011 to June 2012, on Laboratório de Análise de Sementes (UFERSA), the activity of extracts from seeds and leaves of juazeiro (Zizyphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.), mulungu (Erythrina vellutina Willd.) and cumaru (Amburana cearenses (Allemão) A. C. Smith.) in five levels of concentrations (1, 0.5, 0.25, 0.125 and 0%), in corn seeds (Zea. mays L.), melon (Cucumis melo L) and cowpea (Vigna unguiculata (L) Walp.). These tests corresponded to the first experimental part, in which each species and its respective organ integrated an experiment (E1, E2, E3 extracts of seeds of juazeiro on corn, melon and cowpea and E4, E5, E6 extracts of leaves of juazeiro on corn, melon and cowpea). On the second part of the study, it was made a fractionation of the extract of cumaru seeds with the solvents hexane, dichloromethane, ethyl acetate and water, where the activity of these extracts on the initial development of melon seeds was tested, as each portion with its respective dilution formed an experiment (E1 hexane fraction (1, 0.5, 0, 25, 0,.25, 0%), E2 dichloromethane fraction (1, 0.5, 0.25, 0.125, 0%), E3 - ethyl acetate fraction (1 and 0%), E4 water fraction (1 and 0%). On the last part, it was made a phyto-chemical prospection of the extracts resulting from the previous stage. The preparation of the dry and aqueous extracts used in this experiment, phyto-chemical prospection and fractionation were accomplished on Laboratório de Análise Cromatográfica (UERN) from November 2011 to February 2013. Statistical design was completely randomized with four replications with twenty seeds. Treatments were formed by the concentrations 1, 0.5, 0.25, 0.125 and 0%, corresponding to each extract. The evaluation of the behavior of the litmus test was made through the analysis of the percentage and emergence speed index characters, percentage of normal seeds, dry matter, aerial parts length and root and number of roots on corn. The averages were compared by Tukey test, at 5% possibility, analyzed by the statistical program SISVAR. In the end of the experimental analysis, we may conclude that leaves and seeds of the Caatinga biome species influenced reducing or increasing the average of the variables used on the evaluation of corn, melon and cowpea seeds development, and the effects were greater when in the presence of cumaru seeds extract. The extracts obtained from the hexane portion provided adverse effects on melon seeds development. Cumarina was the dominant composite on the phyto-chemical prospection on the cumaru seed extract / Este trabalho objetivou verificar a atividade de extratos de plantas da Caatinga sobre a emergência e desenvolvimento de plântulas de feijão-caupi, melão e milho. De novembro de 2011 a junho de 2012, no Laboratório de Análise de Sementes (UFERSA), testou-se a atividade de extratos de sementes e folhas de juazeiro (Zizyphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.), mulungu (Erythrina vellutina Willd.) e cumaru (Amburana cearenses (Allemão) A. C. Smith.), em cinco níveis de concentrações (1; 0,5; 0,25; 0,125 e 0 % ), em sementes de milho (Zea. mays L.), melão (Cucumis melo L) e feijão-caupi (Vigna unguiculata (L) Walp.). Estes testes corresponderam à primeira parte experimental, em que cada espécie e seu respectivo órgão nas diferentes doses de extrato formaram um experimento (E1, E2, E3 - extratos de semente de juazeiro no milho, melão e feijão-caupi e E4, E5, E6 - extratos de folhas de juazeiro no milho, melão e feijão). Na segunda parte do estudo, foi feito um fracionamento do extrato de semente de cumaru com os solventes hexano, diclorometano, acetato de etila e água, em que se testou a atividade destes extratos sobre o desenvolvimento inicial de plântulas de melão, de modo que cada fração com suas respectivas diluições formavam um experimento (E1- fração hexânica (1; 0,5; 0, 25; 0,125; 0%), E2- fração diclorometano (1; 0,5; 0, 25; 0,125; 0%), E3 - fração acetato de etila (1 e 0%), E4 - fração aquosa (1 e 0%). Na ultima fase, foi feita uma prospecção fitoquímica dos extratos resultantes da etapa anterior. O preparo dos extratos secos e aquosos usados no trabalho experimental, a prospecção fitoquímica e o fracionamento foram realizados no Laboratório de Análise Cromatográfica (UERN) no período de novembro de 2011 até fevereiro de 2013. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado com quatro repetições com vinte sementes. Os tratamentos foram compostos das concentrações 1; 0,5; 0,25; 0,125 e 0%, correspondentes de cada extrato. A avaliação do comportamento das espécies teste diante dos extratos foi feito analisando-se as características de porcentagem e índice de velocidade de emergência, porcentagem de plântulas normais, matéria seca, comprimento de parte aérea e raiz e número de raizes no milho. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey, ao nível 5% de probabilidade, analisadas pelo programa estatístico SISVAR. Ao final das análises experimentais, concluiu-se que as folhas e sementes das espécies da caatinga inteferiram diminuindo ou acrescentando as médias das variáveis empregadas na avaliação do desenvolvimento de plântulas de milho, melão e feijão-caupi e os efeitos foram ainda maiores na presença do extrato de sementes de cumaru. Os extratos obtidos da fração hexânica proporcionaram efeitos desfavoráveis ao desenvolvimento de plântulas de melão. A cumarina foi o composto predominante na prospecção fitoquímca do extrato de semente de cumaru

A double sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to quantify the proteinaceous inhibitor of tissue plasminogen activator (t-PA) which occur in the tissue of Erythrina caffra Thunb. Using the ELISA the t-PA inhibitor could be detected in nanogramme quantities on the micro titer plate. The concentration of the t-PA inhibitor was determined in different tissues of Erythrina caffra. t-PA inhibitor concentrations in the order of 1 000 microgrammes per gramme protein were found in the seeds. Relatively small quantities of t - PA inhibitor, in the order of 10 to 50 microgrammes per gramme protein, occurred in root, shoot, leaf and living bark material. The t-PA inhibitor was found to accumulate in a similar way to the storage proteins in developing seeds. The accumulation of the inhibitor is at a relatively low level during the early period of seed development but increases exponentially just before the seeds reach their maximum size. The t-PA inhibitor content of the cotyledons decreased drastically during the process of germination and subsequent seedling development. The disappearance of the inhibitor be the result of total degradation of the molecule can or partial proteolysis with the modified molecule still being present in the tissue. An attempt was made to increase the t-PA inhibitor content of excised leaves of Erythrina caffra with protein inducing substances such as polyamines, precursors of ethylene and phytic acid. The protein inducing compounds included cell wall hydrolysates of Erythrina caffra, the marine alga Ecklonia maxima Osbeck (Papenfuss) as well as Lycopersicon esculentum Mill which induced the, synthesis of proteinase inhibitors suggested to be involved in the defense mechanism of plants. None of the substances used, increased the t-PA inhibitor content of excised leaves or in vitro cultures of Erythrina caffra. It is suggested that the t-PA inhibitor is probably not involved in a defense mechanism of Erythrina caffra. A callus and suspension culture derived from shoot tissue was developed to determine the occurrence of the t-PA inhibitor in vitro. The optimal nutrient medium for the growth of callus was the salts and vitamins of MURASHIGE and SKOOG (1962). The medium was supplemented with 3 % sucrose, 0. 1 gramme per litre meso - inositol, 10 micromoles per litre benzyl adenine and 5 micromoles per litre 2,4- dichlorophenoxyacetic acid . Different auxins and cytokinins had a similar growth stimulatory effect on the growth of callus derived from a number of organs of Erythrina caffra. The callus from different organs did however, grow at different rates on the same nutrient medium. Callus derived from leaf, shoot, and cotyledonary tissue grew at similar rates on the nutrient media of MURASHIGE and SKOOG (1962), SCHENK and HILDEBRANDT (1972) and B5 (GAMBORG, MILLER and OJIMA, 1968) despite large differences in the concentration of the nutrients in the three nutri.ent media. The source of nitrogen and ratio of nitrate to ammonium was critical to the growth of callus cultures . The optimal concentration of nitrate and ammonium was 30 millimoles per litre . The growth of callus from different organs was significantly affected by the concentration of sucrose in the nutrient medium. A concentration of 3% was optimal for callus growth. Temperature had a significant effect on the growth of callus. The optimal temperature for callus growth was 25 °C. A shoot cell suspension culture was established and maintained at the same temperature and on the same medium as the callus cultures but with a ten times lower concentration of growth regulators. A low shake speed was essential for the growth of the suspension culture. Maximum growth was obtained at a shake speed of 60 rpm. Relatively low quantities of t-PA inhibitor, in the order of 1 to 5 microgrammes per gramme protein, was detected in the suspension cultures. An attempt was made to increase the t-PA inhibitor content of the suspension cultures with the pro te in i nduc i ng compounds used on excised leaves, but without success. However, the t-PA inhibitor content of the suspension culture was significantly increased with a ten times increase in the sulphate content of the nutrient medium. / Thesis (Ph.D.)-University of Natal, Pietermaritzburg, 1990.

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Os Aβ são os principais componentes das placas amilóides, um dos marcos fisiopatológicos no encéfalo dos pacientes. A infusão intracerebral de Aβ em ratos é um modelo animal de DA muito utilizado, produzindo seu acúmulo em regiões cerebrais afetadas, como o hipocampo e o neocórtex e, produzindo déficits cognitivos compatíveis com os sintomas, como déficits na memória espacial. Porém, a maioria dos estudos evidencia déficits equivalentes aos estágios moderado e avançado da DA após a infusão prolongada de Aβ, sem avaliar déficits sutis de estágios iniciais. Isso seria relevante para compreensão dos mecanismos fisiopatológicos e para o teste de possíveis tratamentos neuroprotetores. Uma tarefa utilizada para avaliar déficits relacionados à disfunção hipocampal em ratos é o labirinto de Barnes. Os animais são expostos a uma plataforma circular, com buracos ao redor, sendo apenas um deles conectado a um esconderijo. Nessa tarefa, os animais guiam-se por pistas distais para encontrar o local seguro. O desempenho é avaliado por parâmetros, como latência e distância até o alvo, número de visitas a buracos errados, dentre outros, e por uma análise específica de estratégias de busca usadas para atingir o alvo. O animal pode se localizar pelas pistas distais (dispostas ao redor do labirinto), utilizando informação espacial (estratégia direta) ou outros tipos de busca, visitando de maneira aleatória ou seriada buracos do aparato (estratégias não diretas). Essa avaliação permite a detecção de alterações no modo de solução da tarefa. No presente trabalho, objetivamos investigar sinais cognitivos iniciais da DA em ratos Wistar submetidos à infusão intracerebral de Aβ, e os efeitos de um potencial tratamento neuroprotetor, por meio da avaliação da memória espacial no labirinto de Barnes. Utilizamos o extrato alcalóide de Erythrina velutina (“mulungu”), cujos componentes mostram ações ansiolíticas, antiinflamatórias, antioxidantes e pró-colinérgicas. Na 1ª etapa, padronizamos a tarefa de Barnes para as nossas condições experimentais, e verificamos se há influência da repetição de exposições ao labirinto (importante para verificação de progressão de sinais cognitivos) ou da implantação das cânulas intracerebrais no desempenho dos animais. Animais que passaram ou não pela cirurgia para implantação de cânulas (bilateralmente na sub-região hipocampal CA1 e no ventrículo lateral) passaram por 5 sequências de exposição ao labirinto de Barnes (4 treinos com 4 trials cada, um teste após 24h e um teste após 10 dias). Os resultados mostraram que houve aprendizado e evocação da tarefa. Concluímos que a tarefa pode ser realizada repetidamente, e em animais com implantes cerebrais de cânulas, sem prejuízo de desempenho. Na segunda etapa, investigamos o uso de diferentes estratégias no labirinto de Barnes na presença ou ausência de pistas distais. Ratos foram expostos aos treinos no labirinto de Barnes, e no teste (24h após) parte dos animais foi exposta ao labirinto na presença de pistas distais (condição ‘espacial’) e a outra parte passou pelo teste com uma cortina preta em volta do labirinto (condição ‘nãoespacial’). Ambos os grupos aprenderam e evocaram a tarefa, entretanto os animais expostos às pistas distais preferiram o uso de estratégia direta, enquanto o grupo nãoespacial preferiu outras estratégias. Concluímos que a retirada de pistas distais não impede que os animais encontrem o alvo, e para isso utilizam estratégias de busca alternativas ao uso de informação espacial. Na terceira etapa (2 experimentos) verificamos os efeitos da infusão intracerebral de peptídeos Aβ sobre o aprendizado e a memória no labirinto de Barnes. No experimento 1, ratos receberam 15 infusões diárias de salina ou Aβ (30, 100 ou 300 pmol) i.c.v., sendo que no 1º dia de tratamento houve infusões em CA1. Foram submetidos a 3 sequências de exposição ao Barnes (treinos, teste 24h e reteste 10 dias). A sequência I foi realizada antes da cirurgia (na qual ocorreu o aprendizado para todos os animais), a II a partir da 11ª infusão, e a III 10 dias depois. Nas sequências II e III, houve grande variação do comportamento dos animais Aβ, de modo que não foram observadas diferenças entre os grupos, além de uma alta mortalidade dos animais. Ao fim dos experimentos comportamentais, os animais foram eutanasiados e submetidos à imunohistoquímica para Aβ, cuja análise por densitometria ótica relativa mostrou aumento de sua marcação no hipocampo e neocórtex. No 2º experimento verificamos os efeitos da infusão de Aβ sobre o desempenho geral e estratégias de busca no labirinto de Barnes, com algumas alterações no protocolo de infusão e execução da tarefa. Os animais (salina ou Aβ 30 pmol) foram submetidos a uma sequência de exposição ao Barnes com 4 treinos de 2 trials cada e um teste realizado 3 dias depois, visando dificultar a tarefa. Não houve diferenças entre os grupos no aprendizado. No teste, embora os animais Aβ mostrassem alguma evocação, estes utilizaram preferencialmente estratégias aleatória e seriada, enquanto o grupo salina preferiu a estratégia direta. Concluímos que a infusão de Aβ promoveu alterações sutis na memória espacial compatíveis com a manifestação inicial da DA, indicando relevância para investigações mecanicísticas e terapêuticas em estágios precoces da doença. Na última etapa, animais submetidos ao mesmo tratamento de infusão com Aβ (30 pmol) foram tratados concomitantemente com 200 mg/kg do extrato de mulungu por via oral. Os grupos (salina, Amulungu e Amulungu) foram submetidos a 2 sequências de Barnes (a partir da 11ª infusão e dez dias depois). De forma geral, não foram observadas diferenças entre os grupos nos parâmetros referentes ao aprendizado ou à evocação da tarefa. Sendo assim, concluímos que o protocolo utilizado não foi capaz de detectar um efeito benéfico do extrato de mulungu no modelo de DA por infusão de peptídeos Aβ. / Alzheimer’s disease (AD) is present in 46.8 million people in the world, and is characterized by the progressive decline of cognition, mainly episodic memory. AD is multifactorial, and the accumulation of amyloid peptides (Aβ) is the main proposed mechanism underlying neurodegeneration. Aβ are the main components of the amyloid plaques in the brain, that are physiopathological hallmarks of the disease. Intracerebral infusion of Aβ in rats is usually used as an animal model of DA and generates the accumulation of these peptides in the brain together with spatial memory impairment. However, most studies show moderate to severe deficits after chronic Aβ infusion, without evaluation of possible subtle initial deficits. The study of the initial stages of AD is relevant for mechanicistic and therapeutic investigations. The Barnes maze has been used for investigating deficits in the hippocampal function in rats. The animals are exposed to a circular apparatus with holes in its periphery. One of the holes is connected to a safe place. In this task, rats navigate guided by distal cues to find this safe compartment. The evaluation is conduct by parameters of general performance (latency and distance to reach target, number of errors, among others) and by a specific analysis of search strategies. In this way, the animal use spatial information and move directly towards the target (direct strategy), visit sequential holes until reach the target (serial strategy) or visit holes in a non-systematic fashion until reach the target (aleatory search). The analysis of strategies allows the detection of alterations in the mode of solution of the task. In the present study, we aimed to investigate initial cognitive signs of AD in Wistar rats submitted to intracerebral infusions of Aβ, as well as the effects of a potentially neuroprotective treatment, by the evaluation of spatial memory in the Barnes maze. We used the alkaloid extract of Erythrina velutina (“mulungu”), which was previously studied for anxiolytic, anti-inflammatory, antioxidant and cholinergic actions. First, we standardized the task to our experimental conditions, and verified a possible influence of repeated expositions to the apparatus (for future long-term protocols) or of the implantation of the cannulas in the brain. Rats went through (or not) to implantation of cannulas (bilaterally in the hippocampal CA1 and in the lateral ventricle) and were exposed to 5 sequences of exposition to the Barnes maze (4 trainning sessions with 4 trials each, a 24h test and a 10-day retest sessions). Both groups showed task retrieval, and there was a slightly improved performance in the implanted group. We concluded that the task can be held repeatedly, and in implanted animals, without altering the performance. In the second phase, we investigated the use of different strategies in the Barnes maze by rats submitted to the presence of absence of distal cues. Rats were exposed to the training phase, and in the probe session (24 h later) half the animals were exposed to the maze in the presence of the same distal cues used in training (spatial group), while the other rats went through the probe test without those cues (a black curtain was placed around the maze – non-spatial group). Both groups learned the task, but the spatial group preferred the used of direct strategies, while the non-spatial group preferred other strategies. We concluded that the removal of distal cues does not hinder the execution of the task, and the animals use alternative search modes under this condition. In the third phase (two experiments) we verified the effects of the intracerebral infusion of Aβ on the acquisition and retrieval of Barnes task. In experiment 1, rats received 15 daily i.c.v. infusions of saline or Aβ (30, 100 or 300 pmol) plus bilateral CA1 infusions in the first day, and were exposed to 3 sequences of Barnes task (training, 24h test and 10-day retest in each sequence). Sequence I was held before surgery (all the animals learned the task), II started at 11th infusion and III started 10 days after II. The behavior of the Aβ-treated animals varied greatly at sequences II and III, and hence no differences were observed. There was high mortality due to treatment. At the end of the behavioral sessions, saline and Aβ 30pmol groups were euthanized for Aβ immunohistochemistry. The analysis by relative optical density showed increased Aβ staining in the hippocampus and neocortex. In experiment 2 we investigated the effects of Aβ (30 pmol) infusion on the search strategies in the Barnes maze. Animals went through one sequence of Barnes task (4 trainings with 2 trials each and a 3-day test, in order to increase difficulty). In the probe test, although Aβ animals showed some retrieval, they showed preference for nonspatial strategies, opposed to saline-treated rats. We concluded that Aβ infusion induced subtle alterations in spatial memory, compatible with the initial stages of AD, which is relevant for investigations of potential neuroprotective approaches. In the last stage, animals submitted to the same infusion protocol described above were concomitantly treated orally with 200 mg/kg of E. velutina (mulungu) extract and went through 2 Barnes task sequences. In general, no differences were observed among the groups in acquisition or retrieval. Thus, we concluded that the protocol used here was not able to detect a beneficial effect of mulungu extract in the Aβ infusion AD model.