OLIVEIRA, Gersilene Valente de. Avaliação do efeito do (-)-a-bisabolol em parâmetros de estresse oxidativo em camundongos submetidos ao tratamento agudo com etanol absoluto. 2011. 70 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-27T16:06:48Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_gvoliveira.pdf: 868258 bytes, checksum: 54ce36dde0ddb0c931e316d8f3c6cbd6 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-27T16:13:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_gvoliveira.pdf: 868258 bytes, checksum: 54ce36dde0ddb0c931e316d8f3c6cbd6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-27T16:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_gvoliveira.pdf: 868258 bytes, checksum: 54ce36dde0ddb0c931e316d8f3c6cbd6 (MD5) Previous issue date: 2011 / The (-)-α-bisabolol, at doses of 100 and 200 mg / kg, is an alcohol commonly obtained from Matricaria chamomilla and species of the genus (Vanillosmopsis), it was tested in ethanol-induced gastric injury model for research gastroprotective effect microscopically of this drug, the influence of neutrophil migration in this effect, as well as THE involvement of superoxide dismutase (SOD) and catalase (Cat) enzymes. It was also quantified the lipid peroxidation (Thiobarbituric Acid Reactive Substances-TBARS), and the nitric oxide metabolism product (NO), the anion nitrite. The (-)-α-bisabolol was able to decrease ethanol-induced gastric damage, parameter microscopically analyzed. The (-)-α-bisabolol decreased neutrophils migration to the gastric mucosa in absolute ethanol-induced ulcer model in mice, quantified by the myeloperoxidase enzyme (MPO), present in neutrophils. The (-)-α-bisabolol interacted with the anti-oxidant enzyme system decreasing the catalase enzyme activity in the gastric mucosa in animals treated with absolut ethanol, decreased lipid peroxidation (TBARS) in gastric tissue in rats exposed to ethanol and it was able to increase the superoxide dismutase activity in the same tissue. The (-)-α-bisabolol did not significantly alter the amount of nitrite in the ulcerated animals stomach. Thus, the (-)-α-bisabolol in the doses tested reduced the gastric lesions associated with administration of ethanol, probably by reducing oxidative stress in the stomach while reducing the activity of MPO, it being explained the gastroprotective action of this drug, however the reduction of enzymatic activity of Catalase would be a less important finding to explain the antiulcer activity observed it. / O (-)-α-bisabolol, em doses de 100 e 200 mg/Kg, é um álcool sesquiterpênico comumente obtido de Matricaria chamomilla e de espécies do gênero (Vanillosmopsis), foi testado no modelo de lesão gástrica induzida por etanol para a investigação microscópica do efeito gastroprotetor dessa droga, da influência da migração de neutrófilos neste efeito, assim como envolvimento das enzimas Superóxido dismutase (SOD) e Catalase (Cat). Foram quantificadas também a peroxidação lipídica (Substancias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico-TBARS), e o produto do metabolismo do óxido nítrico (NO), o ânion nitrito. O (-)-α-bisabolol foi capaz de diminuir o dano gástrico induzido pelo etanol, parâmetro analisado microscopicamente. O (-)-α-bisabolol diminuiu a migração de neutrófilos na mucosa gástrica em modelo de úlcera induzida por etanol absoluto em camundongos, quantificado através da enzima mieloperoxidase (MPO), presente nos neutrófilos. O (-)-α-bisabolol interagiu com o sistema enzimático anti-oxidante diminuindo a atividade da enzima catalase na mucosa gástrica, nos animais tratados com etanol absoluto, diminuiu a peroxidação lipídica (TBARS) no tecido gástrico em animais submetidos a aplicação de etanol absoluto e foi capaz de aumentar a atividade da enzima superóxido dismutase no mesmo tecido. O (-)-α-bisabolol não alterou significativamente a quantidade de nitrito no estômago dos animais ulcerados. Desta forma, o (-)-α-bisabolol nas doses testadas reduz as lesões gástrica associadas a administração de etanol, provavelmente pela redução do estresse oxidativo no estomago, além de reduzir a atividade da MPO, contudo se explica a ação gastroprotetora dessa droga, no entanto a redução da atividade enzimática da catalase seria um achado menos importante para explicar a atividade antiulcerogênica verificada.

SILVEIRA, Sarah Sanders. Avaliação da atividade muscular mastigatória, nocicepção associada e participação do sistema endocanabinóide no comportamento bruxismo-símile em ratos. 2015. 111 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T14:03:04Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_sssilveira.pdf: 3224473 bytes, checksum: 7181a1c0611e57fbd96e90d669828a23 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T14:21:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_sssilveira.pdf: 3224473 bytes, checksum: 7181a1c0611e57fbd96e90d669828a23 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T14:21:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_sssilveira.pdf: 3224473 bytes, checksum: 7181a1c0611e57fbd96e90d669828a23 (MD5) Previous issue date: 2015 / The increased masticatory muscle activity is considered a physical response to changes in emotional state. Stress and anxiety increase the myoelectric activity of the stomatognathic system muscles, with resulting parafunctions increase, as teeth clenching. Bruxism is a diurnal or nocturnal parafunctional activity including clenching or teeth grinding. Bruxism is strongly associated with the masticatory myofascial pain, a chronic facial pain of the masticatory muscles with possible blockage and limited mouth opening. The endocannabinoid system consists of cannabinoid receptors by the endogenous ligands (endocannabinoids) and proteins responsible for its metabolism. Endocannabinoids are involved in different physiological and pathological functions. The antinociceptive action of cannabinoids has been shown in several experimental models of pain, but there are no literature reports of cannabinoids involvement in nociception associated with muscle hyperactivity in parafunctional habits situations. The aim of this study was to study the masticatory muscle activity and nociception associated in emotional stress model in rats and the endocannabinoid system involvement. The study was approved by the Animal Research Ethics Committee of the Federal University of Ceará (N° 35/13). The communication box was used as stimulus instrument for emotional stress for 14 days. Subcutaneous electrodes were implanted in the masseter and temporal muscles region to evaluate the masticatory muscle activity and it was performed mechanical hyperalgesia test in these muscles during the emotional stress stimulation. Were also evaluated anxiety behavior parameters, body weight, adrenal glands gross weight and c-Fos expression and cannabinoid CB1 and CB2 receptors in the trigeminal ganglion and trigeminal spinal tract. Cannabinoid CB1 antagonist was administered and evaluated the nociceptive behavior. The expression of cannabinoid receptors in the masseter muscle was also assessed. The results showed a significant increase in stressed animals masticatory muscle activity on the seventh day of emotional stress stimulus. A significant reduction of masticatory muscles nociceptive threshold was observed, peaking on the eleventh day of emotional stress. The stressed animals showed anxiety behavior, with no differences in body weight or adrenal glands gross weight. The results also pointed that the stressed animals showed cytoplasmic vacuoles accumulation in the adrenal glands cortex, and increased expression of c-Fos and CB1 and CB2 receptors in the trigeminal ganglion and trigeminal spinal tract. The administration of the antagonist CB1 intensified the nociception on the fourth day of emotional stress. Cannabinoids CB1 and CB2 receptors have increased expression in the masseter muscle of the stressed animals. The data suggest that animals exposed to emotional stress have increased masticatory muscle activity and ‘brux-like’ behavior with a reduction in masticatory muscles nociceptive thresholds. Endocannabinoid system appears to be involved in the modulation of nociception induced emotional stress with increased expression of CB1 and CB2 receptors in the trigeminal ganglion, trigeminal spinal tract and masseter muscle. / O aumento da atividade muscular mastigatória é considerado uma resposta física de mudanças no estado emocional. O estresse e a ansiedade aumentam a atividade mioelétrica dos músculos do sistema estomatognático, com resultante aumento das parafunções, como apertamento dos dentes. O bruxismo é uma atividade parafuncional diurna ou noturna, incluindo apertamento ou ranger os dentes. Tem forte associação com a dor miofascial mastigatória, uma dor facial crônica dos músculos mastigatórios com possível bloqueio e limitação da abertura de boca. O sistema endocanabinoide é composto pelos receptores canabinoides, pelos ligantes endógenos (endocanabinoides) e proteínas responsáveis pelo seu metabolismo. Os endocanabinoides estão envolvidos em diferentes funções fisiológicas e patológicas, como imunomodulação, inflamação e analgesia. A ação antinociceptiva dos canabinoides tem sido demonstrada em vários modelos experimentais de dor, porém, não há relatos na literatura do envolvimento dos canabinoides na nocicepção associada à hiperatividade muscular em situações de hábitos parafuncionais. O objetivo da presente pesquisa foi estudar a atividade muscular mastigatória e a nocicepção associada em modelo de estresse emocional em ratos e o envolvimento do sistema endocanabinoide. O estudo foi aprovado pela Comissão de Ética em Pesquisa Animal da Universidade Federal do Ceará (nº 35/13). A caixa de comunicação foi utilizada como instrumento de estímulo do estresse emocional, durante 14 dias. Foram implantados eletrodos subcutâneos na região dos músculos masseter e temporal para avaliar a atividade muscular mastigatória e realizado teste de hipernocicepção mecânica nos referidos músculos durante o estímulo do estresse emocional. Foram avaliados também parâmetros de comportamento de ansiedade, peso corporal, peso bruto das glândulas adrenais e expressão de c-Fos e receptores canabinoides CB1 e CB2 no gânglio trigeminal e trato espinhal trigeminal. Foi administrado um antagonista canabinoide CB1 e avaliado o comportamento nociceptivo. A expressão dos receptores canabinoides no músculo masseter também foi avaliada. Os resultados demonstraram um aumento significativo da atividade muscular mastigatória nos animais estressados no sétimo dia de estímulo do estresse emocional. Observou-se uma redução significativa do limiar nociceptivo dos músculos mastigatórios, com pico no décimo primeiro dia do estresse emocional. Os animais estressados apresentaram comportamento de ansiedade, sem diferenças no peso corporal e no peso bruto das glândulas adrenais. Os resultados demonstraram ainda que os animais estressados apresentaram acúmulo de vacúolos citoplasmáticos no córtex das glândulas adrenais, e expressão aumentada de c-Fos e receptores CB1 e CB2 no gânglio trigeminal e trato espinhal trigeminal. A administração do antagonista CB1 intensificou a nocicepção no quarto dia de estresse emocional. Os receptores canabinoides CB1 e CB2 apresentam expressão aumentada no músculo masseter dos animais estressados. Os dados sugerem que animais expostos ao estresse emocional apresentaram atividade muscular mastigatória aumentada e comportamento bruxismo-símile, com redução nos limiares nociceptivos dos músculos mastigatórios. O sistema endocanabinoide parece estar envolvido na modulação da nocicepção induzida por estresse emocional com aumento da expressão dos receptores CB1 e CB2 nos gânglios trigeminais, no trato espinhal do trigêmeo e no músculo masseter.

As espécies reativas de oxigênio (ROS) são importantes moléculas sinalizadoras, ou mensageiros secundários, em uma complexa rede de sinalização, que em plantas, é fundamental para o desenvolvimento, e para a resposta a diferentes estímulos ambientais. Por outro lado, estas moléculas representam uma ameaça oxidativa à celula, e em altas concentrações podem danificar diferentes componentes celulares. Dessa forma, as vias de produção e eliminação de ROS devem ser finamente moduladas. Apesar destas vias terem sido amplamente estudadas, incontáveis aspectos ainda permanecem desconhecidos. Este trabalho objetivou estudar os mecanismos de geração e eliminação de ROS nas mitocôndrias e cloroplastos, e seus efeitos no desenvolvimento e na resposta de plantas ao estresse. Assim, foi demonstrado que a enzima succinato desidrogenase (SDH), correspondente ao complexo II da respiração, é um importante sítio de geração de ROS em células vegetais. Além disso, a manipulação da geração de ROS em organelas, como a mitocôndria e o cloroplasto, promoveu alterações claras no padrão de desenvolvimento e nas respostas de plantas a diferentes estresses. Enquanto a indução da geração mitocondrial de ROS via SDH inibiu o desenvolvimento e levou a ativação da expressão de genes de defesa. Por outro lado, alterações nas respostas antioxidantes no cloroplasto, via manipulação genética das ascorbato peroxidases cloroplastídicas (OsAPX7 e OsAPX8), embora tenham afetado em menor grau o desenvolvimento da planta, modularam os parâmetros fisiológicos e a resposta ao estresse. Desta forma, plantas de arroz silenciadas, ou nocaute, para a isoformas cloroplastídicas de APX apresentaram um padrão diferenciado de abertura estomática e tolerância ao estresse hídrico. Além disso, experimentos de monohíbrido permitiram a identificação dos fatores de trasncrição OsDST, OsABF7, Os11g28270 e OsVOZ1, como potenciais reguladores da expressão de OsAPX8. A complexidade das respostas induzidas por ROS indicam que estas possuem uma alta especificidade e dependem da localização subcelular e da atividade de cada um dos componentes dessa intricada rede de sinalização, assim como o nível de expressão de cada um deles. O conjunto dos resultados obtidos amplia a visão do papel das ROS no desenvolvimento vegetal e nos mecanismos de respostas de plantas a estímulos ambientais geradores de estresse oxidativo. / The reactive oxygen species (ROS) are important signaling molecules, or secondary messengers, involved in a complex signaling network, which, in plants, is essential for development, and different environmental stimuli responses. Moreover, these molecules represent an oxidative risk to the cell, and at high concentrations may damage various cellular components. Thus, the ROS production and elimination routes should be finely regulated. Although these pathways have been extensively studied, many aspects remain unknown. Here we investigated the mechanisms of generation and elimination of ROS in mitochondria and chloroplasts, and its effects in plant development and stress responses. The results demonstrated that the enzyme succinate dehydrogenase, which corresponds to the mitochondrial complex II, is an important site of ROS production in plant cells. In addition, the control of ROS production in cellular organelles, such as mitochondria and chloroplast, promotes changes in development patterns and in plant stress response. While the induction of mitochondrial ROS production by SDH inhibit the development and activated defense genes expression, changes in chloroplast antioxidant response, by genetic manipulation of chloroplastic ascorbate peroxidases (OsAPX7 e OsAPX8), modulates physiologic parameters and stress response, despite inducing lower changes related to plant development. In this way, rice plants silenced or knockout for chloroplastic isoforms of APX showed a differential stomata opening pattern and drought stress tolerance. In addition, one-hybrid experiments, allowed the identification of the transcription factors OsDST, OsABF7, Os11g28270 e OsVOZ1, as potential regulators of the OsAPX8 expression. The complexity of the responses induced by ROS indicates that these mechanisms have a high specificity and is dependent of the subcelullar location, their activity, and the expression of each one of the components of this signaling network. The results obtained expands our vision of the role of ROS in plant development and in plant responses to environmental stimuli related to oxidative stress.

As nitrorredutases compreendem uma família de enzimas dependentes de flavina adenina mononucleotideo (FMN) capazes de metabolizar nitrocompostos usando nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD(P)H) como fonte de elétrons. Essas enzimas desempenham um papel central na metabolização de nitrocompostos recebendo grande atenção devido a sua habilidade em mediar a toxicidade desses compostos, tendo aplicações biotecnológicas e importância clínica. Essas enzimas podem ser encontradas em bactérias e em menor escala em fungos, protozoários e mamíferos. Em relação ao seu papel fisiológico, algumas hipóteses, como a participação na bioluminescência, homeostase metálica, biossíntese de cobalamina e resposta a estresse oxidativo têm sido propostas. Entretanto, não se tem conhecimento exato sobre a sua real função biológica. Neste cenário, este estudo tem como objetivo investigar possíveis funções das nitrorredutases no metabolismo de Escherichia coli e Saccharomyces cerevisiae, com ênfase na possível participação dessas enzimas na resposta ao estresse oxidativo. Para tanto, foi construída a rede de interações proteína-proteína das nitrorredutases NfsA e NfsB de E. coli e identificadas cinco sub-redes representando diferentes processos biológicos. Os resultados permitiram a elaboração de modelos sugerindo que as nitrorredutases de E. coli podem participar do metabolismo de ferro, manutenção do conteúdo de NADPH, metabolismo de compostos aromáticos e síntese de glicogênio. Estas vias podem contribuir nas respostas a estresse oxidativo e a limitação de nutrientes. Na levedura S. cerevisiae, foi determinada a influência das nitrorredutases Frm2p e Hbn1p na resposta a estresse oxidativo. Os resultados mostraram uma menor atividade basal de superóxido dismutase (SOD) e elevada sensibilidade a óxido de 4-nitroquinolina (4-NQO) e N-nitrosodietilamina (NDEA), indução de mutantes citoplasmáticos (petites), produção intracelular de ERO e peroxidação lipídica nas linhagens frm2 hbn1e frm2 hbn1quando expostas a estes agentes geradores de superóxido. Ainda foi observada elevada atividade basal de catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e conteúdo de glutationa (GSH) nas linhagens frm2 e frm2 hbn1. Estas linhagens possuem menor produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e peroxidação lipídica quando expostas aos peróxidos H2O2 e t-BOOH. Para elucidar os mecanismos pelos quais as nitrorredutases Frm2p e Hbn1p podem regular as defesas antioxidantes, foram identificadas, por biologia de sistemas, as interações dessas proteínas, tendo cinco sub-redes representando diferentes processos biológicos. Esta análise foi seguida por uma avaliação de índices de centralidade, que identificaram importantes proteínas da rede. Uma triagem dos fenótipos de sensibilidade a oxidantes foi realizada com linhagens proficientes e deficientes nestas proteínas identificadas e foram selecionadas as proteínas envolvidas nas respostas mais evidentes ao estresse oxidativo: as proteínas Ski8 (contribui na degradação do RNAm no sentido 3’-5’) e Cad1 (um ativador transcricional). Esta informação foi usada para a construção de linhagens duplo e triplo mutantes deficientes em Frm2p, Hbn1p, Ski8p ou Cad1p, seguindo a determinação da sensibilidade, acúmulo intracelular de ERO e nível de peroxidação lipídica na exposição a oxidantes e ainda a atividade basal de enzimas antioxidantes. Com base nos resultados obtidos, foi construído um modelo considerando que Cad1p ativa a expressão do gene FRM2 e a interação Frm2p-Ski8p regula as atividades das enzimas antioxidantes pela degradação do RNAm ou pela modulação da degradação dos transcritos do gene OLE1 (Ole1p atua na síntese de ácidos graxos insaturados) modificando a composição de ácidos graxos da membrana plasmática. A interação Hbn1p-Nab2p (Nab2p é necessária para a exportação do RNAm do núcleo para o citoplasma) controla a atividade de SOD pela exportação do RNAm. / The nitroreductase family comprises a group of flavine mononucleotide (FMN)-dependent enzymes able to metabolize nitrosubstituted compounds using the reducing potential of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD(P)H). Nitroreductase proteins play a central role in the activation of nitrocompounds and have received attention in recent decades based on their role in mediating nitrosubstituted compound toxicity, by its biotechnological application for bioremediation biocatalysis, and clinical importance in chemotherapeutic tumor treatment, ablation of specific cells and antibiotic resistance. Due to its relevance, different bacterial nitroreductases have been purified, and their biochemical, kinetic parameters and structure have been determined. Nitroreductases can be found within bacterial species and, in a less extend, in eukaryotes, such as fungi, protozoan and mammalian. A feature of the nitroreductase family is our lack of knowledge about its biological function. Therefore, new hypotheses have been proposed to solve the physiological role of nitroreductases, such as bioluminescence, metal homeostasis, vitamin B12 biosynthesis and oxidative stress response. In this context, this study aims to investigate possible functions of nitroreductases in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae metabolism, with emphasis on possible role of these enzymes in oxidative stress response. Thus, a systems biology study was performed by generating protein-protein interactions (PPI) for NfsA and NfsB nitroreductases of E. coli. The results obtained from these systems biology analyses allow us to draw some models suggesting that E. coli nitroreductases can participate in iron metabolism, NADPH pool maintenance, aromatic compound metabolism, methionine and glycogen synthesis. In the yeast S. cerevisiae, the influence of Frm2p and Hbn1p nitroreductases in oxidative stress response was determined. The results showed a weaker basal activity of superoxide dismutase (SOD) and higher sensitivity for 4-nitroquinoline-oxide (4-NQO) and N-nitrosodiethylamine (NDEA), induction of petites, production of reactive oxygen species (ROS) and lipid peroxidation when exposed the these superoxide-generating agents. The results showed a higher basal activity of catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and reduced glutathione (GSH) content in the single and double mutant strains frm2 and frm2 hbn1. These strains were less ROS-producing and lipid peroxidation when exposed to peroxides-generating agents such as H2O2 and t-BOOH. To elucidate the mechanisms how nitroreductases regulate antioxidant defenses, we undertook a systems biology approach to identify Frm2p and Hbn1p interactions. A protein-protein interaction (PPI) network was obtained and biological processes related to RNA metabolism were observed. Thus, network centrality analysis was performed, which allows for selection of important proteins of network. A sensitivity screening of yeast strains proficient and deficient in these proteins to oxidants was performed and selected Ski8p (mediates 3'-5' RNA degradation) and Cad1p (transcriptional activator). This information was used to construct double and triple mutants defective for Frm2p, Hbn1p, Cad1p or Ski8p followed by determination of sensitivity, ROS accumulation, lipid peroxidation following oxidants exposure and basal antioxidant-enzyme activities. The results obtained allow us to draw model suggesting that Cad1p activate FRM2 following Frm2p-Ski8p interaction influences to oxidative stress response by regulates mRNA degradation of antioxidant-enzyme following their activities or OLE1 (Ole1p act in unsaturated fatty acid synthesis) transcripts degradation modifying the plasma membrane fatty acid composition. The Hbn1p-Nab2p (Nab2p act in mRNA export) interaction controls SOD activity by mRNA export.

Modelos de estadiamento para transtornos mentais graves têm sido propostos para personalizar e otimizar o tratamento. A lógica do estadiamento é baseada na avaliação de cada paciente para fornecer diferentes abordagens de acordo com a patofisiologia, sintomatologia e alterações estruturais da doença. Alterações do sistema inflamatório, regulado pelas citocinas, e desequilíbrio oxidativo são cada vez mais estudados como possíveis responsáveis pela patofisiologia da esquizofrenia (SZ). O objetivo deste estudo foi investigar os níveis séricos de marcadores de estresse oxidativo e de inflamação em pacientes com início recente de doença (RO) e pacientes crônicos (CP) com SZ em remissão sintomática. Medimos dois grupos de possíveis biomarcadores séricos para estadiamento da doença: marcadores de estresse oxidativo e de defesa antioxidante (artigo 1) e marcadores inflamatórios (artigos 1 e 2). A fim de examinar os marcadores de estresse oxidativo e inflamatórios, foram selecionados vinte e dois pacientes RO (com até 10 anos de doença), trinta e nove CP (com no mínimo 10 anos de diagnóstico de SZ) e seus respectivos controles pareados. Analizamos TBARS, PCC, TRAP, IL-6, IL-10 e TNF-alfa. Encontramos aumento significativo dos níveis séricos de TBARS, IL-6 e PCC em ambos os grupos RO e CP com SZ comparados com os controles saudáveis. Não ocorreu diferença nos níveis séricos de TRAP e TNF-alfa em ambos os grupos RO e CP comparados aos seus controles. Níveis séricos de IL-10 aumentados foram encontrados no grupo CP, e ocorreu uma tendência ao aumento desta interleucina no grupo RO em comparação aos controles (artigo 1). Para caracterizar o papel das quimiocinas no curso da SZ, medimos os níveis séricos da CCL-11 (Eotaxin) e da CCL-24 (Eotaxina-2) em vinte e três pacientes RO (com até 5 anos de doença) e dezoito CP (com no mínimo 20 anos de diagnóstico de esquizofrenia) e seus respectivos controles pareados. Os níveis séricos da CCL- 24 estavam significativamente aumentados nos dois grupos de pacientes comparados com os controles. Os níveis séricos da CCL-11 não estavam diferentes nos pacientes RO, mas estavam significativamente aumentados nos CP em relação aos seus controles (artigo 2). Nossos resultados sugerem que a SZ está associada com a inflamação e que os marcadores biológicos têm níveis similares ao longo do curso da doença. Sendo assim, o conceito de estadiamento proposto para outros transtornos não é visto nesta coorte de pacientes com SZ, pelo menos para citocinas e marcadores de estresse oxidativo. Contudo, a CCL-11 parece indicar um caminho promissor na investigação de marcadores associados ao envelhecimento precoce para fins de estadiamento. / Staging models for severe mental disorders have been proposed to personalize and optimize the treatment. The logic of staging is based on accessing each patient to provide them different approaches according to the pathophysiological, symptomatomatic and structural changes of the disease. Alterations on the immune system, which is regulated by cytokines, and oxidative imbalance are increasingly being studied as potentially implicated in the pathophysiology of schizophrenia (SZ). The aim of this study was to investigate serum markers of oxidative stress and inflammation in recent onset (RO) and chronic patients (CP) with SZ in symptomatic remission. We measured two groups of potential biomarkers for staging the disease: oxidative stress and antioxidant defense serum markers (article 1) and inflammatory markers (articles 1 and 2). In order to examine serum markers of oxidative stress and inflammation, we selected twenty-two RO patients (within 10 years of disease), thirty-nine CP (minimum of 10 years after the diagnosis of SZ) and their matched controls. We analyzed TBARS, PCC, TRAP, IL-6, IL-10 and TNF-alpha. We found a significant increase in serum levels of TBARS, PCC and IL-6 in both RO and CP groups with SZ compared with healthy controls. There was no difference in TRAP and TNF-alpha serum levels in both RO and CP groups compared with their controls. IL-10 levels were increased in CP group, and an increase trend in RO group was found compared with controls (article 1). In order to characterize the role of chemokines in the course of SZ, we measured serum levels of CCL-11 (Eotaxin) and CCL-24 (Eotaxin-2) in twenty-three RO patients (within first 5 years of SZ diagnosis) and nineteen CP (minimum of 20 years after the diagnosis of SZ) and their matched controls. CCL-24 serum levels were significantly increased in both groups of patients with SZ compared with controls. CCL-11 serum levels were not different in RO, but were significantly increased in CP when compared with their controls (article 2). Our results suggest that SZ is associated with infflamation and that biological markers have similar levels throughout the course of the chronic disease. Thus, the proposed staging concept for other disorders is not seen in this cohort, at least for cytokines and oxidative stress markers. However, CCL-11 seems to indicate a promising path in the investigation of accelerated aging markers for staging.

Mucopolissacaridose do tipo I (MPS I) é uma doença de acúmulo lisossomal que leva a neurodegeneração e déficits neurológicos, entre outras conseqüências patológicas e clínicas. A ausência de estudos sobre parâmetros neurocomportamentais do modelo murino de MPS I capazes de avaliar sua função cognitiva motivou a realização deste trabalho. O primeiro nosso objetivo foi analisar parâmetros cognitivos que possam ser utilizados na avaliação de diferentes terapias e seus efeitos sobre o SNC. Durante a exploração do campo aberto, camundongos MPS I (Idua-/-) adultos mostraram locomoção e ansiedade normais, mas reduzido número de rearings. Camundongos Idua-/- tiveram uma performance normal no reconhecimento de objeto novo e mostraram memória de curta duração de esquiva inibitória normal. Entretanto a memória de longa duração de esquiva inibitória estava prejudicada. O déficit observado na esquiva inibitória não pode ser atribuído a redução na reatividade ao choque. Os resultados indicam que camundongos Idua-/- apresentam um déficit na memória de longa duração para treinamento aversivo e comportamento exploratório. O segundo objetivo foi avaliar biomarcadores de estresse oxidativo neste modelo animal. Nós avaliamos atividade enzimática antioxidante, dano a proteínas e peroxidação lipídica no telencéfalo, cerebelo, coração, pulmão, diafragma, fígado, rim, e baço. De oito órgãos analisados, sete tiveram alteração em no mínimo um parâmetro. Os resultados indicam que camundongos Idua-/- podem estar sofrendo estresse oxidativo. / Mucopolysaccharidosis type I (MPS I) is a lysosomal storage disease that leads to neurodegeneration and neurological deficits, among other pathological and clinical consequences. The absence of behavioral parameters from the MPS I mouse model motivated the accomplishment of this work. Our first objective was to analyze behavioral parameters that might be used to essay the effect of different therapies on the CNS. During exploration of an open field, adult MPS I (Idua-/-) mice showed normal locomotion and anxiety, but reduced number of rearings. Idua-/- mice performed normally in a novel object recognition memory task and showed normal short-term retention of inhibitory avoidance training. By contrast, long-term retention of inhibitory avoidance was impaired. The deficit in inhibitory avoidance memory could not be attributed to reduced footshock reactivity. The results indicate that Idua-/- mice present deficits in long-term memory for aversive training and reduced exploratory behavior. The second aim was to evaluate oxidative biomarkers on this mice model. We evaluated antioxidant enzymatic activity, protein damage and lipid peroxidation on forebrain, cerebellum, heart, lung, diaphragm, liver, kidney and spleen. From eight analyzed organs, seven had alteration on at least one parameter. The results indicate that Idua-/- mice can be under oxidative stress.

A Parada Cardiorrespiratória (PCR) é caracterizada pela parada abrupta da ventilação e circulação espontâneas. A Síndrome Pós-parada Cardiorrespiratória (SPCR) surge após a PCR, destacando-se por acarretar disfunção do miocárdio, lesão cerebral, resposta sistêmica inflamatória devido à isquemia/reperfusão, possuindo importante causa de mortalidade em todo o mundo. O processo de isquemia/reperfusão gerado pela PCR contribui para o dano tecidual, em parte pela geração de espécies reativas. A formação de espécies reativas pode tanto gerar dano direto em biomoléculas como lipídeos, DNA e proteínas quanto alterar a composição celular de antioxidantes enzimáticos e não enzimáticos, componentes de diferentes vias celulares como apoptose e necrose e ativar inflamação. O objetivo do estudo (observacional, coorte prospectivo) foi analisar, em humanos, o perfil do processo de estresse oxidativo na SPCR acompanhando os pacientes durante as diferentes fases da síndrome. Foi coletado sangue total de 30 pacientes pós-PCR 6, 12, 36 e 72 horas após a ressuscitação bem sucedida, os quais se encontravam internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) do Hospital Nossa Senhora da Conceição – Grupo Hospitalar Conceição (HNSC-GHC) de Porto Alegre (entre maio de 2011 a novembro de 2012). Excluíram-se pacientes menores de 18 anos, vítimas de trauma, pós-operatório imediato (<7 dias), gestantes e pacientes terminais. O dano em biomoléculas foi analisado através da dosagem de grupos carbonil (proteínas), malondialdeído (MDA) (lipídeos) e nitritos/nitratos, além da dosagem da proteína S100B como um marcador de dano neuronal; os antioxidantes enzimáticos através da atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), glutationa S-tranferase (GsT) e consumo de H2O2; antioxidantes não-enzimáticos através da concentração de glutationa (total (tGSH), reduzida (GSH) e oxidada (GSSG)) e vitamina C. Além disso, dados clínicos e bioquímicos foram fornecidos pelo hospital, como pH, glicose, lactato, hemoglobina, hematócrito, proteína-C reativa e eletrólitos. Dos 30 pacientes, 60% eram homens e apenas 18 sobreviveram durante todo o período de coleta (72h pós-PCR). A análise estatística foi realizada através do teste The Generalized Estimation Equations (GEE). Os pacientes apresentaram em três dos quatro momentos de coleta médias correspondentes à acidose e lactato com valores superiores aos considerados normais em todos os momentos. Os níveis de hemoglobina diminuiram significativamente do primeiro dia para o último. Os níveis de proteína-C reativa aumentaram significativamente do primeiro dia para o último e os valores médios de todos os momentos foram altos comparados com valores normais. Os níveis de nitritos/nitratos em eritrócitos encontraram-se significativamente mais elevados no último momento do que no penúltimo. Os níveis de tGSH, GSH e GSSG diminuíram significativamente do primeiro momento para o terceiro. Também foram realizadas análises desses parâmetros comparando homens e mulheres. A atividade de GsT teve aumento das 6 para 36 h pós-PCR. Mulheres apresentaram variações significativas nos níveis de glicose (relacionado a hiperglicemia), com o valor mais alto nas 72h pós-PCR. Homens tiveram variação nos níveis de GSSG, tendo seu menor valor 36h pós-PCR, bem como diminuição do consumo de H2O2 de 6h para 36h pós-PCR. Concluise que o estresse oxidativo não influencia no processo da SPCR somente nos momentos iniciais deste, mas continua sua influência ao longo de todas as fases. Além disso, homens e mulheres possuem resposta fisiológica diferente à SPCR. Enfatizando que este é o primeiro trabalho comparando as diferenças entre os sexos nesta síndrome em humanos com um número maior de parâmetros analisados. / Cardiac arrest (CA) is characterized by the abrupt stop of spontaneous ventilation and circulation. The Post- Cardiac Arrest Syndrome (Post-CA Syndrome) arises after CA, distinguished by cause myocardial dysfunction, brain injury, systemic inflammatory response due to ischemia/reperfusion, having important cause of mortality worldwide. The process of ischemia/reperfusion generated by CA contributes to tissue injury, in part by generating reactive species. The formation of reactive species can generate both direct damage to biomolecules such as lipids, DNA and proteins and alter the cellular composition of enzymatic and non-enzymatic antioxidants, components of different cellular pathways such as apoptosis and necrosis and activate inflammation. The objective of the study (observational, prospective cohort study) was to analyze, in humans, the profile of the process of oxidative stress in SPCR accompanying patients during different stages of the syndrome. Whole blood of 30 patients post-CA 6, 12, 36 and 72 hours were collected after successful resuscitation, which were admitted to the Intensive Care Unit (ICU) of the Hospital Nossa Senhora da Conceição - Conceição Hospital Group (HNSC - GHC) of Porto Alegre (from May 2011 to November 2012). We excluded patients younger than 18 years, victims of trauma, immediate postoperative period (< 7 days), pregnant and terminally ill patients. The damage to biomolecules was examined through measurement of carbonyl groups (proteins), malondialdehyde (MDA) (lipids) and nitrites/nitrates, dosage of S100B protein as a marker of neuronal damage, through enzymatic activity of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), glutathione S-transferase (GST) and consumption of H2O2; non-enzymatic antioxidants through the concentration of glutathione (total (tGSH) , reduced (GSH) and oxidized (GSSG)) and vitamin C. In addition, biochemical and clinical data were provided by the hospital, such as pH, glucose, lactate, hemoglobin, C-reactive protein and electrolytes. Of the 30 patients, 60 % were men and only 18 survived throughout the collection period (72h post- CA). Statistical analysis was performed using Generalized Estimation Equations test (GEE). Patients reported in three of four times average collection corresponding to acidosis and lactate values over that considered normal at all times. Hemoglobin decreased significantly from the first day to the last. The C-reactive protein increased significantly from the first day to the last, and the averages of all times were high compared with normal values. Nitrites/nitrates found in erythrocytes were significantly higher than the last time in the penultimate. tGSH, GSH and GSSG decreased significantly from the first moment to the third. We also did the analysis of these parameters comparing men and women. Women showed significant variations in glucose levels (hyperglycemia associated) with the highest value at 72h post-CA. GsT activity had decreased from 6 to 36 h post-CA. Men had a variation in the levels of GSSG, having its lowest value 36h post-CA as well as reducing the consumption of H2O2 6h for 36h post-CA. We conclude that oxidative stress does not influence the process of SPCR only in the early moments of this, but his influence continues throughout all stages. In addition, men and women have different physiological response to Post-CA Syndrome. Emphasizing this is the first study to compare differences between genders in this syndrome in humans with a greater number of parameters analyzed. Key words: Post cardiac arrest syndrome, cardiac arrest, oxidative stress.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2015-04-08T21:07:26Z No. of bitstreams: 1 Arnaldo Rocha Silva.pdf: 853243 bytes, checksum: 2ddb94b7f13cbf248529a4d141134bd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T21:07:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arnaldo Rocha Silva.pdf: 853243 bytes, checksum: 2ddb94b7f13cbf248529a4d141134bd5 (MD5) Previous issue date: 2011-12-13 / O presente estudo, realizado em dois ambulatórios de referência na Bahia, no período de fevereiro de 2006 a agosto de 2007, tem como finalidade, determinar a prevalência de estresse nos pacientes neurológicos portadores de HTLV-I e as diversas fases em que se encontram; determinar a prevalência dos mecanismos de enfrentamento nos referidos pacientes e as estratégias utilizadas; avaliar a associação entre fatores de estresse e mecanismos de enfrentamento e avaliar uma possível associação entre estresse e mecanismos de enfrentamento de acordo com gênero, idade e escolaridade. A população foi composta por 45 pacientes atendidos no ambulatório de HTLV-I da Escola Bahiana de Medicina e Saúde Pública e da Fundação de Neurologia e Neurocirurgia – Instituto do Cérebro, na cidade de Salvador-BA. Foram utilizados dois instrumentos na coleta dos dados: Inventário de Sintomas de Stress de Lipp (ISSL) e Inventário de Estratégias de Coping de Folkman e Lazarus. Os resultados foram tabulados e analisados, utilizando-se o pacote estatístico R versão 2.13.1 para Linux. Obteve-se pela avaliação dos instrumentos aplicados que 71% dos entrevistados percebem-se estressados. Quanto às estratégias de enfrentamento utilizadas pelos pacientes destaca-se a reavaliação positiva, seguida de afastamento e autocontrole. O paciente acometido por infecção com HTLV-1 é estressado, mas percebe-se no mesmo, estratégias de enfrentamento que oferecem apoio a seguir em frente na luta pela vida.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Marise Leite (marise_mg@yahoo.com.br) on 2016-03-30T13:34:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) TESE_BacharisTrimeraInibe.pdf: 4250249 bytes, checksum: 017bf78c37553de53434dedcda157702 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-04-05T13:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) TESE_BacharisTrimeraInibe.pdf: 4250249 bytes, checksum: 017bf78c37553de53434dedcda157702 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T13:58:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) TESE_BacharisTrimeraInibe.pdf: 4250249 bytes, checksum: 017bf78c37553de53434dedcda157702 (MD5) Previous issue date: 2015 / Baccharis trimera, popularmente conhecida como "carqueja", é uma planta nativa sul-americana que possui uma alta concentração de compostos fenólicos e, portanto, alto potencial antioxidante. Apesar do potencial antioxidante de B. trimera descrito na literatura, não existem relatos sobre as vias de sinalização envolvidas neste processo. A enzima NADPH oxidase é uma fonte importante na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) em condições patológicas, como no câncer, no diabetes e em processos inflamatórios. Esta enzima é ativada por meio de diferentes moduladores, entre os quais destaca-se a proteína cinase C (PKC), que fosforila a subunidade p47phox da NADPH oxidase, como um contribuinte para a ativação do complexo enzimático e a consequente geração de ERO. Com base nestas informações, o objetivo do presente estudo foi avaliar a composição fitoquímica dos extratos aquoso e hidroetanólico de Baccharis trimera bem como a influência destes extratos na modulação de ERO e na via de sinalização da PKC e NADPH oxidase em células de hepatocarcinoma humano (SK Hep-1). No presente estudo, a quercetina e a rutina foram utilizadas como controles positivos, pois o efeito antioxidante destes flavonoides tem sido bem estabelecido, sendo estes compostos já identificados em extratos de B. trimera. No extrato hidroetanólico foram identificados cinco flavonoides enquanto no extrato aquoso foram identificados três flavonoides por CLAE-EM. A atividade antioxidante in vitro por DPPH também foi avaliada e os resultados demonstraram que o extrato hidroetanólico possui um maior potencial em sequestrar o radical DPPH bem como uma maior quantidade de compostos fenólicos em comparação ao extrato aquoso. Em relação à viabilidade celular, observamos que o extrato hidroetanólico de B. trimera manteve acima de 70% a porcentagem de células viáveis, entretanto em 24 e 48 horas de incubação houve uma redução da viabilidade (<70%) em concentrações iguais ou superiores a 25μgmL-1. Em relação ao extrato aquoso observamos que a porcentagem de células viáveis foi mantida acima de 70% em 12, 24 e 48 de incubação. Em relação a produção de espécies reativas foi observado que os extratos de B. trimera (aquoso e hidroetanólico) diminuíram os níveis de ERO em células SK Hep-1 não estimuladas. Níveis reduzidos de ERO também foram observados nas células tratadas com quercetina e rutina. Os resultados mostraram que as células estimuladas com PMA / ionomicina (ativadores de PKC) tiveram um aumento significativo na produção de ERO, e esta produção voltou aos níveis basais após tratamento com o DPI (inibidor da NADPH oxidase). O extrato hidroetanólico de B. trimera e quercetina, mas não o extrato aquoso e a rutina, modularam a produção de ERO através da inibição da expressão e atividade da proteína PKC e também através da redução da fosforilação da subunidade p47phox da enzima NADPH oxidase. Em conjunto, estes resultados sugerem um mecanismo potencial de ação de B. trimera na inibição da produção de ERO através da via de sinalização da PKC/NADPH oxidase. __________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Baccharis trimera, popularly known as "carqueja" is a native South American plant having high concentration of phenolic compounds and therefore high potential antioxidant. Although the antioxidant potential of B. trimera described in the literature there are no reports on the signaling pathways involved in this process. The NADPH oxidase is a major source in production of reactive oxygen species (ROS) in pathological conditions such as cancer, diabetes and inflammation. This enzyme is activated by different modulators, among which we highlight protein kinase C (PKC), which phosphorylates p47phox subunit of NADPH oxidase, as a contributor to the activation of the enzyme complex and the subsequent generation of ROS . Based on this information, the aim of this study was to evaluate the phytochemical composition of aqueous and hydroethanolic extracts of Baccharis trimera and the influence of these extracts on ROS modulation induced by PKC signaling pathway in human hepatocellular carcinoma cells (SK-Hep 1). In the present study, quercetin and rutin were used as positive controls, since the antioxidant effect of these flavonoids have been well established, and these compounds have been identified in B. trimera extracts. In hydrethanolic extract five flavonoids were identified, and in the aqueous extract identified three flavonoids by CLAE-MS. The antioxidant activity in vitro was also evaluated by DPPH and the results demonstrated that the hydroethanolic extract has a higher potential scavenger the DPPH radical as well as a greater quantity of phenolic compounds as compared to aqueous extract. About cell viability, we observed that the hydroethanolic extract of B. trimera maintained above 70% of viable cells, however at 24 and 48 hours of incubation there was a reduction of viability (<70%) in concentrations equal to or greater than 25μgmL-1. About aqueous extract we found that the percentage of viable cells was maintained above 70% at 12, 24 and 48 of incubation. It was observed that extracts of B. trimera (aqueous and hydroethanolic) decreased ROS levels in the SK-Hep 1 cells unstimulated. Reduced levels of ROS were also observed in cells treated with quercetin and rutin. The results showed that cells stimulated with PMA / ionomycin (PKC activators) had a significant increase in ROS production and this production returned to basal levels after treatment with DPI (NADPH oxidase inhibitor). The B. trimera hydroethanolic extract and quercetin, but not the aqueous extract and rutin, modulate the production of ROS by inhibiting the expression and activity of PKC protein and downregulation p47phox phosphorilation. Together, these results suggest a potential mechanism of inhibition by B. trimera in ROS production by PKC/NADPH oxidase signaling pathway.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas. Programa de Pós-Graduação em Psicologia. / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 309420.pdf: 1488441 bytes, checksum: a3ab0a8544f66a3620eafe5acd3037d4 (MD5) / O estresse constitui um fenômeno complexo que necessita ser compreendido por meio de diferentes contextos, âmbitos e influências. Diariamente as pessoas, de modo geral, vivenciam situações estressantes em seu cotidiano de trabalho e podem utilizar diferentes formas de enfrentamento para possibilitar a redução do impacto do estresse. Diversas formas de enfrentamentos também têm sido utilizadas pelos dirigentes de organizações universitárias em um contexto de constantes desafios e processos de mudanças impostos às universidades e, por extensão, aos seus gestores. Os objetivos dessa tese foram identificar as situações estressantes vivenciadas por gestores universitários públicos e identificar, caracterizar e comparar as estratégias de enfrentamento utilizadas por eles. Foi utilizado um roteiro de entrevista semiestruturado com o propósito de aprofundar as respostas de dezessete gestores em uma universidade pública do Sul do país, precedidas pela aplicação do Inventário de Estratégias de Coping de Folkman e Lazarus. O procedimento de coleta de informações foi recorrente, ou seja, os conteúdos foram posteriormente checados pelos próprios participantes. A análise dos dados foi feita por meio da construção de categorias pré-estabelecidas, complementadas por categorias pós-estabelecidas, a partir das verbalizações dos participantes e da indicação obtida no preenchimento do inventário das estratégias mais utilizadas e menos utilizadas. As situações estressantes foram analisadas em cinco âmbitos: indivíduo, função, grupo, organização e ambiente externo, evidenciando sua inter-relação. O âmbito com maior número de ocorrências foi o da organização, com menção a diferentes situações estressantes. Os âmbitos do indivíduo e do ambiente externo tiveram o menor número de ocorrências. As estratégias de enfrentamento do estresse foram classificadas em dois tipos: as focalizadas no problema (resolução de problemas e confronto), e as focalizadas na emoção (suporte social, autocontrole, aceitação de responsabilidade, reavaliação positiva, afastamento e fuga e esquiva). Juntamente com essas, foram pós-estabelecidas outras estratégias: características pessoais dos gestores, tempo e planejamento de trabalho, vida pessoal e profissional, e estilo de vida (relacionadas aos hábitos de alimentação e sono; prática de atividades físicas e atividades de lazer). As estratégias com maior número de ocorrências foram de resolução de problemas e suporte social. Os gestores costumam buscar diferentes alternativas para a resolução dos problemas e recorrem ao auxílio de pessoas em geral, no âmbito da organização (gestores, equipe de trabalho, professores, entre outros) e no ambiente externo (companheiros, família, amigos, psicoterapeuta, empregada doméstica, etc.). As estratégias com menor número de ocorrências foram fuga e esquiva, e afastamento. As estratégias indicadas foram consideradas pelos gestores universitários públicos como adequadas e positivas para reduzir o impacto do estresse no seu trabalho cotidiano. Apesar da indicação de situações estressantes no contexto de trabalho, o cargo de gestão foi considerado como uma experiência positiva.