Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo Mención: Fruticultura / Durante la temporada 2000/2001 se desarrolló una investigación dirigida a estudiar el efecto del manejo de la canopia sobre el crecimiento vegetativo, la fotosíntesis y algunas características físico-químicas del mosto y del vino en vides de la variedad Cabernet Sauvignon, en el Valle del Maipo. Adicionalmente, se asociaron los procesos de desarrollo de algunos órganos de la vid y ciertos eventos fenológicos con la acumulación de días grado. El ensayo quedó compuesto por cuatro repeticiones para el tratamiento 1: despunte a fines de primavera, y ocho repeticiones para el tratamiento 2: poda severa en envero. De acuerdo a los resultados, se concluyó que frente a una poda severa en envero, equivalente a un 25 % del área foliar del brote, no se modifica la tasa de asimilación de CO2 de las hojas remanentes, ni el rendimiento de fruta de las plantas. Ambos tratamientos modificaron considerablemente el microclima de la canopia que resultaron en cambios en algunas características del mosto y del vino, tales como la acidez, la intensidad colorante y el contenido de antocianos.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo Mención: Fruticultura / Con el propósito de caracterizar el comportamiento de la actividad fotosintética de plantas de vid cv. Cabernet Sauvignon durante la temporada de crecimiento, se realizó una investigación en la temporada 2002-2003 en un viñedo ubicado en la localidad de Huelquén, Valle del Maipo, Chile. Se escogieron doce plantas al azar y se efectuaron mediciones de tasas de asimilación de CO2, radiación fotosintéticamente activa (PAR) incidente, conductancia estomática y temperatura foliar a lo largo del día, entre las 8:00 h y 18:00 h, en seis oportunidades en la temporada. Las evaluaciones se realizaron en las hojas de los nudos 4, 8, 12 y 16 desde la base del brote hacia el extremo distal, considerando las dos exposiciones de la planta (este-oeste). En forma simultánea se midió la PAR, medida en forma horizontal y vertical, la temperatura y humedad relativa ambiental. Además, se realizaron mediciones del contenido de clorofila de hojas sanas. Cada lado de la espaldera, conducida en orientación norte-sur es expuesto a diferentes condiciones ambientales determinando, en la exposición este, tasas más altas de asimilación de CO2, niveles de conductancia estomática más altos, mayor contenido de clorofila y menores temperaturas foliares, respecto de la exposición oeste. Las mañanas presentaron condiciones ambientales más favorables para una adecuada actividad fotosintética, respecto de las condiciones de la tarde. El déficit hídrico, comúnmente impuesto a las vides de interés enológico, sumado a la alta radiación y altas temperaturas del aire, determinan una disminución de las tasas de asimilación de CO2 e inducen a un activo metabolismo fotorespiratorio. El contenido de clorofila aumenta con la edad de la hoja, alcanzando el máximo hacia el envero para luego disminuir progresivamente hacia la cosecha. / Photosynthesis in grapevine cv. Cabernet Sauvignon, located in Huelquén in the Maipo Valley, Chile was characterized throughout the growing season 2002-2003. Twelve plants, trained to a vertical trellis system, were selected in a randomized design and, CO2 assimilation, stomatal conductance, leaf temperature and incident light were measured under field conditions along the day and the season. Measurements were carried out between 8:00 h and 18:00 h six times throughout the season, from the base to the top and in both sides of the canopy. Simultaneously, photosynthetic active radiation (PAR), temperature and relative humidity were measured. The chlorophyll content in healthy leaves was determined. The environmental conditions in the East side determine a higher rate for photosynthesis, higher stomatal conductance, lower temperature, and higher chlorophyll content, compared to the West exposure. The environmental conditions in the morning were more favorable for suitable CO2 assimilation than environmental condition in the afternoon. Plants grown under drought conditions added to the high incident light and air temperature induced a decrease in the rate for CO2 assimilation, in turn, increasing photorespiration. The chlorophyll content increased with increasing leaf age, reaching the maximum value at veraison and then started to decline toward the end of the season.

Plastids are the cellular organelles where many of the visual, health and flavor-related metabolites are produced and stored in the fruit, and therefore are valuable components for consumers and breeders. The more sugar and flavor the fruit has, the more appreciated is for the consumer and industry. Thus, one of the breeder's goals is to obtain new varieties with fruits improved in these aspects. Paradoxically, fruits with a high content in chloroplasts have been avoided by the breeders because it usually suffers of oxidative stress disorders; such yellow shoulder impairment and fruit cracking when the light intensity increases. For this reason breeding efforts has been focused mainly on avoiding fruit losses and organoleptic characteristics have been neglected. This thesis aims to improve tomato fruit quality by engineering plants to produce fruits with enhanced fruit chloroplast functions and improved tolerance to oxidative stress, using cisgenic/ intragenic approaches. SlGLK1, SlGLK2 and SlAPRR2 transcription factors have been suggested to be involved in chloroplast development. Tomato MoneyMaker plants were engineered to express SlGLKs and SlAPRR2 either singly or in combination early in development. Those lines provide fruits which accumulate more sugars, carotenoids and specific volatiles than WT. The fruit chloroplast enhanced lines were characterized at the structural, metabolic, proteomics and transcriptomics. A novel additive effect in the chloroplast regulation network resulted when both transcription factors were coexpressed and a hypothesis for this effect is presented. In addition, two tomato traditional varieties (Muchamiel and Pera) expressing tomato genes for BMW anthocyanin regulatory complex under the control of the light inducible promoter (PLI) were produced and characterized. Engineered tomato plants showed large accumulation of anthocyanin specifically in the fruit peel and in Type VI trichomes. Characterization of those tissues indicated specific alterations of the flavonoid pathway that were highly dependent on the light conditions. These tomato lines could be of high interest to protect the fruit chloroplast enhancement lines from eventual stresses involving ROS, and also to assess the effect on plant growth under high light stress and in plant-pest interaction studies. / Los plastidos son orgánulos celulares donde se producen y almacenan muchos de los metabolitos relacionados con atributos organolépticos y compuestos beneficiosos para la salud, por lo tanto se consideran componentes de alto valor añadido para consumidores y mejoradores vegetales. Cuanto mayor contenido en azúcares solubles y sabor presente el fruto más se valoran por los consumidores y la industria. Por lo tanto uno de los objetivos actuales de los mejoradores de tomate es mejorar el fruto en estos aspectos. Paradójicamente, se ha seleccionado en contra de frutos con alto contenido en cloroplastos porque este carácter, bajo alta intensidad lumínica, suele estar asociado a daños en el fruto por estrés oxidativo; como los hombros amarillos del tomate o el agrietado del fruto. Por este motivo los esfuerzos en mejora se han orientado principalmente a evitar pérdidas y consecuentemente la calidad organoléptica se ha visto reducida. El objetivo de esta tesis es mejorar la calidad del fruto de tomate mediante el empleo de técnicas de ingeniería genética orientadas a incrementar los cloroplastos en fruto y mejorar la tolerancia al estrés oxidativo con una aproximación cis/ intragenica. Los factores de transcripción SlGLK1, SlGLK2 y SlAPRR2 han sido estudiados por influir en el desarrollo del cloroplasto. Plantas de tomate de variedad MoneyMaker fueron mejoradas genéticamente para expresar de forma individual o conjunta SlGLKs y SlAPRR2 en estadios tempranos de desarrollo. Estas líneas proveen frutos con mayor acumulo de azúcares, carotenos y volátiles que el control MoneyMaker. Las líneas potenciadas en desarrollo de cloroplastos se caracterizaron a nivel estructural, metabólico, proteómico y transcriptómico. Se descubrió un novedoso efecto aditivo en la regulación génica del cloroplasto cuando ambos factores de transcripción se expresan simultáneamente y se presentó una hipótesis para dicho efecto. Además se caracterizaron dos variedades tradicionales de tomate (Muchamiel and Pera) diseñadas para expresar genes pertenecientes al complejo de regulación de antocianinas BMW, bajo el control del promotor inducible por luz (PLI). Las plantas mejoradas genéticamente presentan una gran acumulación de antocianos, especialmente en piel de fruto y en tricomas tipo VI. Caracterización de estos tejidos indican alteraciones específicas en la ruta de flavonoides y una alta dependencia a condiciones de luz. Estas plantas podrían ser de gran interés para proteger frutos con altos niveles de cloroplastos frente al estrés oxidativo generado por ROS, para evaluar el efecto en el crecimiento de la planta bajo condiciones de alta luz y en futuros estudios de interacción planta-patógenos / Els plastidis són orgànuls cel.lulars on es produeixen i emmagatzemen molts dels metabòlits relacionats amb atributs organolèptics i composts beneficiosos per a la salut, per tant es consideren components d'alt valor afegit per a consumidors i milloradors vegetals. Quant major contingut en sucres solubles i sabor presenta el fruït, més serà valorat per part dels consumidors i la industria. Paradoxalment, s'ha seleccionat en contra dels fruïts amb alt contingut en cloroplasts perquè aquest caràcter, davall alta intensitat lumínica, sol estar associat amb danys en el fruït per estrés oxidatiu; com muscles groguencs de la tomata o clevitjament del fruït. Per aquest motiu, l'esforç en millora s'ha orientat principalment a evitar pèrdues de manera que la qualitat organolèptica s'ha vist reduïda. L'objectiu d'aquesta tesi es millorar la qualitat del fruït de tomata mitjançant l'ús de tècniques d'enginyeria genètica orientades a incrementar els cloroplasts al fruït i millorar la tolerància a l'estrès oxidatiu amb una aproximació cis/intragènica. Plantes de tomata de la varietat MoneyMaker foren millorades genèticament per expressar de manera individual o conjunta SlGLK1, SlGLK2 y SlAPRR2 als moments inicials del desenvolupament. Aquestes línies donen fruïts amb major acumulació de sucres, carotens i volàtils que el control MoneyMaker. Les línies potenciades amb el desenvolupament de cloroplasts es caracteritzaren a nivell estructural, metabòlic, proteòmic i transcriptòmic. Es va descobrir un nou efecte additiu en la regulació gènica del cloroplast quan ambdós factors de transcripció s'expressen de manera simultània i es va presentar una hipòtesi per a dit efecte. A més, es van caracteritzar dos varietats tradicionals de tomata (Muchamiel i Pera) dissenyades per a expressar gens que pertanyen al complex de regulació d'antocians BMW, davall el control del promotor induïble per llum (PLI). Les plantes millorades genèticament presentaren una gran acumulació d'antocians, especialment a la pell del fruït i en tricomes de tipus VI. La caracterització d'aquest teixit indica alteracions específiques en la ruta dels flavonoides i una altra dependència a condicions de llum. Aquestes plantes podrien ser de gran interès per a protegir els fruïts d'alts nivells de cloroplasts front a l'estrès oxidatiu generat pels ROS, i per a avaluar l'efecte en el creixement de la planta davall condicions d'alta llum i en futurs estudis d'interacció planta-patògen. / Cocaliadis Caisson, MF. (2017). A multilevel, developmentally controlled gene engineering strategy for tomato fortification and protection [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/90401 / TESIS