Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T13:02:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3228996 bytes, checksum: 780644153c363d1add4ea91f8694ce39 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T13:02:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3228996 bytes, checksum: 780644153c363d1add4ea91f8694ce39 (MD5) Previous issue date: 2003-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As doenças infecciosas estão entre as principais causas de morte da população humana. Esse fato é causado, em grande parte, pelo surgimento de microrganismos multi-resistentes aos antibióticos. Portanto, apesar da disponibilidade de um grande número de antibióticos de última geração, torna-se ainda fundamental buscar compostos que possam atuar como novas drogas a serem utilizadas no combate as doenças infecciosas. Em plantas, a atividade antimicrobiana pode ser demonstrada por vários tipos de moléculas, como as proteínas relacionadas com a patogenicidade, os componentes orgânicos das plantas, as famílias de peptídeos antimicrobianos e as espécies ativas de oxigênio e nitrogênio. Atualmente, peptídeos antimicrobianos de origem vegetal estão sendo utilizados como modelos para o desenho de novas drogas com aplicação nas áreas agrícolas e de saúde. Deste modo, nosso trabalho objetivou a determinação da metodologia mais eficaz para a purificação dos peptídeos catiônicos, presentes em sementes maduras de soja, com atividade antimicrobiana ou outras, e a caracterização bioquímica destes peptídeos visando à obtenção de informações de importância para a elucidação de suas funções biológicas. Os peptídeos de semente madura de soja foram extraídos, na proporção de 1:5 (gramas semente : mL tampão), em tampão fosfato de sódio 25 mM, pH 7,4, contendo KCl 100 mM, EDTA 2 mM, PVP 1,5% (p/v), tiouréia 2 mM, PMSF 1 mM e benzamidina 1 mM por homogeneização do extrato durante 2 h a 4 °C, em banho de gelo. O extrato obtido foi centrifugado a 20.300 x g a 4 °C e o sobrenadante obtido após o final da extração foi fracionado com sulfato de amônio sólido 35% sat. e centrifugado sob as mesmas condições. O sobrenadante foi aquecido a 80°C por 15 min e novamente centrifugado sob as mesmas condições. Após a diálise do extrato em membrana de exclusão de 1.000 Da, foram realizadas as cromatografias de troca aniônica, em coluna DEAE- Sepharose equilibrada com tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0; a de exclusão molecular, em coluna Superdex Peptide equilibrada com tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, contendo 150 mM de NaCl; e a de fase reversa, em coluna C 18 equilibrada com acetonitrila 80% e TFA 0,1%, para obtenção dos peptídeos catiônicos purificados. A análise em espectrômetro de massa das frações eluídas do HPLC indicou a presença de compostos de massas moleculares menores do que 500 Da, 678,61 Da e 700,60 Da, a presença de peptídeos com massas moleculares de 5.809,11 Da, 8.526,97 Da e 14.113,18 Da. A seqüência de aminoácidos do peptídeo de 5.809,11 Da foi determinada e mostrou alta homologia com as cadeias B da pró-insulina humana e de vários outros organismos, da insulina bovina e da insulina de feijão-de-porco (Canavalia ensiformes). Os compostos presentes em dois pools eluídos da cromatografia de exclusão molecular, pool 2 e pool 3, inibiram o crescimento da bactéria Gram-negativa Ralstonia solanacearum, enquanto que, para a bactéria Gram-positiva Clavibacter michiganensis, somente o pool 3 exerceu alguma ação, mas com a inibição do crescimento muito menor do que a obtida para a Ralstonia solanacearum. Assim, estes compostos apresentam potencial antimicrobiano a ser explorado na indústria agrícola. / The infectious diseases are among the main causes of death of the human population. That fact occurs, mainly, for the appearance of multi-resistant microrganisms to the antibiotics. Therefore, in spite of the readiness of a great number of antibiotics of last generation, it becomes still important to look to substances new that can act as new drugs it be used in the combat the infectious diseases. In plants, the antimicrobial activity can be demonstrated by several types of molecules, as the proteins related with the patogenicity, the organic components from the plants, the families of antimicrobial peptides and the active species of oxygen and nitrogen. Now, antimicrobial peptides of vegetable origin are being used as models for the drawing of new drugs with application in the agricultural areas and health. In this way, our work objectified the determination of the most effective methodology for the purification of the cationic peptides, presents in mature seeds of soybean, with antimicrobial activity or other, and the biochemical characterization of these peptides seeking to the obtaining importance information for the elucidation of its biological functions. The peptides of mature seed of soybean was extracted, in the proportion of 1:5 (grams seed: mL), in 25 mM buffer phosphate, pH 7.4, with 100 mM KCl, 2 mM EDTA, 1.5% (p/v) PVP, 2 mM thioureia, 1 mM PMSF and 1 mM benzamidine for stirring of the extract during 2 h at 4 °C and centrifuged (20,300 x g, 4 °C). As the first steps of purification, proteins were recovered from a 35% sat. ammonium sulfate precipitation (2h, 4 o C) after centrifugation, incubated at 80 o C for 15min and centrifuged again. After the dialysis of the extract in membrane of 1,000 Da, they were accomplished the chromatography of anion exchangers, in DEAE-Sepharose column equilibrated in 50 mM Tris-HCl, pH 8.0; the one of gel filtration, in Superdex Peptide column equilibrated in 50 mM Tris-HCl, pH 8.0, with 150 mM of NaCl; and the one RP- HPLC, in C18 column equilibrated with acetonitrile 80% and TFA 0,1%, for obtaining of the cationic peptides purified. The analysis in mass spectrometer of the fractions eluted from HPLC indicated the presence of composed of smaller molecular mass than 500 Da, 678.61 Da and 700.60 Da, the peptides presence with molecular mass of 5,809.11 Da, 8,526.97 Da and 14,113.18 Da. The sequence of amino acids of the peptide of 5,809.11 Da was determined and it showed high homology with the chain B of the human pro-insulin and of several other organisms, of the bovine insulin and of jack bean insulin (Canavalia ensiformes). The present compositions in two pools eluted of the chromatography of molecular exclusion, pool 2 and pool 3, inhibited the growth of the bacteria Gram-negative Ralstonia solanacearum, while, for the bacteria Gram-positive Clavibacter michiganensis, only the pool 3 exercised some action, but with the inhibition smaller growth than obtained it for the Ralstonia solanacearum. Thus, these matters own antimicrobial potential to be explored in the agricultural industry. / Dissertação importada do Alexandria

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-01-12T19:01:18Z No. of bitstreams: 1 2007_CarolineRabeloCosta.PDF: 5069365 bytes, checksum: b9c867378f94411d3febf444f1d88bd2 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-12T21:32:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_CarolineRabeloCosta.PDF: 5069365 bytes, checksum: b9c867378f94411d3febf444f1d88bd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-12T21:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_CarolineRabeloCosta.PDF: 5069365 bytes, checksum: b9c867378f94411d3febf444f1d88bd2 (MD5) Previous issue date: 2007 / A floricultura tropical têm-se se destacado como uma rentável opção para o agronegócio, em virtude da sua beleza, rusticidade e exoticidade. Existem hoje no Brasil, vários pólos produtores, dentre eles se destaca o Distrito Federal, devido ao seu consumo per capita e condições de cultivo, tais como altitude, localização e demanda. Condições de cultivo associada à falta de informação e condições fitossanitárias inadequadas, limitam a produção, causando danos e prejuízos. Em vista desses fatores, o objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento dos sintomas associados à fitopatógenos de origem fúngica das famílias Heliconiaceae, Zingiberaceae, Costaceae, Strelitziaceae e Musaceae. As coletas foram realizadas em dois núcleos produtores, Planaltina e Brazlândia-DF, com técnicas de cultivo diferentes, e as amostras com sintomas levadas para o laboratório de Fitopatologia da Universidade de Brasília para análise. O material coletado foi submetido diretamente ao exame em microspcópio estereoscópico e microscópio ótico, identificando suas estruturas, fotografados e parte do material infestado foi prensado, para secagem. Posteriormente, as amostras foram identificadas, numeradas, rotuladas e depositadas na Coleção Micológica do Herbário da Universidade de Brasília. Vários tipos de sintomas foram encontrados, dentre eles, uma maior freqüência de manchas foliares. Fungos do gênero Bipolaris, foram os patógenos mais frenquentes. O fungo Colletotrichum gloeosporioides, foi identificado causando doença juntamente com sua fase teleomórfica, Glomerella cingulata em folhas de Etlingera elatior e houve em várias amostras uma associação de patógenos numa mesma lesão ou mancha, sendo notado um complexo de doença nas plantas analisadas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tropical floricultura has been distinguished as an income-producing option for the agribusiness, in virtue of its beauty, rusticidade and exoticidade. They exist today in producing Brazil, some polar regions, teeth they if it detaches the District Federal, due to its per capita consumption and conditions of culture, such as altitude, localization and demand. Conditions of associated culture healthy plants lack of information and inadequate conditions, limit the production, causing damages and damages. In sight of these factors, the objective of this work was to carry through a survey of the symptoms patogens of plants associates of the fungic origin of the families Heliconiaceae, Zingiberaceae, Costaceae, Strelitziaceae and Musaceae. The collections had been carried through in two producing nuclei, Planaltina and Brazlândia-DF, with different techniques of culture, and has samples with taken symptoms for the laboratory of Fitopatologia of the University of Brasilia for analysis. The collected material was submitted directly to the examination in followed stereoscopic microscope and ótico microscope, identifying its structures, photographed and part of the infested material was pressed, for drying. Later, samples they had been identified, numbered, friction and deposited in the Micológica Collection of the Herbário of the University of Brasilia. Some types of symptoms, had been found, amongst them, a bigger frequency of foliares spots. Fungi of the Bipolaris sort, had been the frequent patogens. Some fungos as Colletotrichum gloeosporioides, were identified causing illness together with its teleomorphic phase, Glomerella cingulata in leves of Etlingera elatior and had in some samples an association of patogens in one same injury or spot, being noticed a complex of illness in the analyzed plants.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-15T16:00:40Z No. of bitstreams: 1 2014_ElianeAmaraldeSouzaArmando_Parcial.pdf: 681202 bytes, checksum: 5366c3e8b5f9c5f259cdccf132b15022 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-05-15T18:54:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ElianeAmaraldeSouzaArmando_Parcial.pdf: 681202 bytes, checksum: 5366c3e8b5f9c5f259cdccf132b15022 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T18:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ElianeAmaraldeSouzaArmando_Parcial.pdf: 681202 bytes, checksum: 5366c3e8b5f9c5f259cdccf132b15022 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnologia (CNPq) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Professores de Nível Superior (CAPES). / Foram estudados cinquenta fungos associados a espécies hospedeiras pertencentes a vinte e duas famílias diferentes, distribuídas em 30 gêneros de plantas com potencial para uso medicinal, todas nativas do Cerrado brasileiro. Entre os fungos estudados, vinte e três são prováveis gêneros novos e vinte e uma prováveis espécies novas foram descritas, assim distribuídas: treze prováveis gêneros novos de hifomicetos, 10 prováveis espécies novas de fungos cercosporóides, quatro prováveis espécies novas do gênero Alternaria, quatro prováveis gêneros novos de celomicetos, quatro prováveis gêneros novos de ascomicetos e uma provável espécie nova do gênero Schizothyrium e um provável gênero novo de basidiomiceto, além de seis espécies já descritas na literatura. Em folhas de Anacardium humile St. Hil. (Anacardiaceae) foram identificados três hifomicetos, um celomiceto e dois ascomicetos prováveis gêneros novos. Em Schefflera macrocarpa (Araliaceae) foi estudado um provável gênero novo de basidiomiceto, um hifomiceto e um celomiceto. Em membros das famílias Cecropiaceae, Fabaceae, Guttiferae, Lythraceae, Malpighiaceae, Rubiaceae, Styracaceae e Verbenaceae foram estudadas em cada uma delas uma provável espécie nova de Pseudocercospora. Já em Vellozia squamata foi identificada uma provável espécie nova de Passalora. As prováveis espécies novas do gênero Alternaria foram estudadas nas famílias Fabaceae, Moraceae e Tiliaceae, sendo que em Fabaceae foram identificadas duas em Acosmium dasycarpum e em Bauhinia sp. Além disso, foram ainda descritas prováveis espécies novas dos seguintes gêneros: Asterostomella, Camarosporium, Janetia, Leprieurina, Periconia e Sirosporium, sendo a provável espécie nova do gênero Janetia provavelmente a fase conidial de um ascomiceto inédito encontrado agora em A. dasycarpum. / Fifty fungi were studied on host plants belonging in twenty-two different families, distributed in thirty genera of native plants from the Cerrado with potential for medicinal use. All fungi studied are here only preliminarily described here potential new taxa to be published according to the requirements of the International Code for Nomenclature of Algae, Fungi and Plants. Among the them twenty-three belong in new genera, and twenty-one are new fungal species. Thirteen species will be allocated in new genera of hyphomycetes, ten in new species of cercosporoid fungi, four are new Alternaria species, four are new coelomycete genera, four are new ascomycete genera. Additionally a new Schizothyrium species, a new basidiomycete genus, and six known fungal species. On leaves of Anacardium humile (Anacardiaceae), three potentially new hyphomycetes, one coelomycete, and two new ascomycete genera were found. On Schefflera macrocarpa (Araliaceae) the fallowing taxa were found one species belonging to a new basidiomycete genus, and two asexual morphs of ascomycetes, one new genus of coelomycete, and a new hyphomycete genus. A new Pseudocercospora species was found in one member of each of the following host families: Cecropiaceae, Fabaceae, Guttiferae, Lythraceae, Malpighiaceae, Rubiaceae, Styracaceae and Verbenaceae. A new Passsalora species was found growing on Vellozia squamata (Velloziaceae). Four novel Alternaria species were described causing leaf spots on hosts belonging the Fabaceae, Moraceae e Tiliaceae. On fabaceous hosts there were new species are on Acosmium dasycarpum and another on Bauhinia sp. Furthermore, new species were described belonging to the fallow genera Asterostomella, Camarosporium in Hymenaea stignocarpa, Janetia in Acosmium dasycarpum, Leprieurina in Brosimum gaudichaudii, Periconia in Aegyphilla lhokstana, and Sirosporium in Senna micrantha. Finally, another Janetia species was described as the asexual morph of a new ascomycete found on Acosmium dasycarpum (Fabaceae).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-06-26T22:46:49Z No. of bitstreams: 1 2010_WelcimarGoncalvesCunha.pdf: 2975091 bytes, checksum: 539028d8614ac1d1f4d4b204dd2e7de4 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-27T14:27:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_WelcimarGoncalvesCunha.pdf: 2975091 bytes, checksum: 539028d8614ac1d1f4d4b204dd2e7de4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-27T14:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_WelcimarGoncalvesCunha.pdf: 2975091 bytes, checksum: 539028d8614ac1d1f4d4b204dd2e7de4 (MD5) / O mofo branco, causado pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum, é hoje um dos principais problemas da cultura da soja e afeta diretamente a economia dos principais países produtores. A incidência desse patógeno acarreta em danos expressivos na produção e qualidade dos grãos, podendo atingir perdas em torno de 80%. O ácido oxálico, produzido pelo fungo durante o processo de infecção, é considerado o principal fator de patogenicidade do fungo S. sclerotiorum. A expressão de enzimas que degradam o ácido oxálico em plantas transgênicas tem sido utilizada em diversas culturas visando o desenvolvimento de cultivares resistentes. No presente trabalho, o gene oxdc que codifica para a enzima oxalato descarboxilase, isolado do fungo Flammulina velutipes, foi inserido via biobalística no genoma da soja. Dezesseis eventos T2 foram avaliados via inoculação de discos de micélio do fungo S. sclerotiorum em folhas destacadas. A análise da curva de progresso da doença revelou que todos os eventos transgênicos apresentaram atraso no desenvolvimento dos sintomas quando comparados com o controle não transgênico. A área abaixo da curva de progresso da doença foi utilizada para sumarizar a severidade da doença em cada evento transgênico e no controle. O teste de Kruskal-Wallis revelou que houve diferença significativa (P ≤ 0,05) entre os tratamentos. Os eventos OXDC.9.21 e OXDC.8.18 tiveram os menores índices de severidade. Tais eventos apresentaram respectivamente, índices de severidade 96% e 93% menor que o apurado para o controle. Os resultados impetrados a partir da curva de progresso da doença e da severidade da doença utilizando o teste de inoculação da folha destacada com o fungo S. sclerotiorum sugerem que a expressão do gene da oxdc em soja confere aumento do nível de resistência das plantas ao patógeno.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T20:54:47Z No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-18T10:29:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-18T10:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / O mofo branco, doença causada pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary possui em seu ciclo de hospedeiros 408 espécies dentro de 278 gêneros, distribuídas em 75 famílias botânicas e é responsável por perdas de rendimento que podem chegar a 100% em culturas agronômicas. As medidas de controle na maioria das vezes são ineficazes. O uso de defensivos químicos é muito oneroso, tornando-se inviável. Quanto ao controle biológico, vários estudos têm sido realizados com fungos antagonistas e, dentre eles, espécies do gênero Trichoderma tem demonstrado atividade antagônica contra S. sclerotiorum, em testes conduzidos tanto em laboratório, quanto em condições de campo. Neste trabalho, 20 isolados de Trichoderma foram testados em laboratório e em casa de vegetação. Em campo, três desses isolados foram avaliados em termos de redução do impacto do patógeno sobre o desenvolvimento das culturas de feijão comum e soja. Nestes ensaios, utilizou-se além da microbiolização de sementes, aplicação no sulco de plantio com jato direto e aplicação na parte aérea por barra traçada, cuja concentração de propágulos na suspensão de inóculo para aplicação dos isolados foi de 1x109 conídios – mL-1. Nos testes de laboratório, quatro isolados apresentaram grau máximo de antagonismo (classe 1), 10 isolados alocaram-se na classe 2 e quatro na classe 3, estas duas consideradas com potencial médio e moderado de biocontrole, respectivamente. Dois isolados exerceram baixa atividade antagônica contra S. sclerotiorum (classe 4). Quanto à germinação de escleródios, 10 isolados de Trichoderma inibiram pelo menos em 90%; quatro apresentaram índices de inibição entre 80% e 65%; dois apresentaram índices de 35% e 25% e os quatro restantes não apresentaram atividade inibitória sobre os escleródios. Já nos testes com metabólitos não voláteis, verificou-se diferença significativa na inibição do crescimento de S. sclerotiorum, com os valores médios da porcentagem de inibição micelial variando desde zero (ausência de inibição) até 100%. Dentre os 20 isolados, seis apresentaram os melhores níveis de controle de doença. Os ensaios conduzidos em campo indicaram maior eficiência dos isolados quando o inoculo foi aplicado via barra, juntamente com as sementes microbiolizadas, seguindo-se a aplicação por meio de aspersão da suspensão de esporos e, por fim, onde só houve aplicação pela microbiolização das sementes, quanto ao desenvolvimento das plantas. Os resultados obtidos indicam que esses isolados são promissores para o desenvolvimento de um programa de controle biológico. Assim, foi avaliada a produção de esporos em laboratório, utilizando dois substratos preparados com diferentes teores de água e tempo de embebição. As maiores taxas de esporulação foram observadas com os CEN162 e CEN238, em arroz parboilizado. Adição de água na proporção de 80%, e períodos de embebição superiores a 15 horas favoreceram a esporulação, independentemente do substrato. Nestas condições, os isolados apresentaram diferentes picos de esporulação no decorrer de 30 dias. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / White mold disease caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary has its cycle of hosts 408 species in 278 genera, distributed in 75 botanic families and is responsible for loss of income that can reach 100 % in agronomic crops. Control measures are most often ineffective. The use of pesticides is very expensive, making it unfeasible. As for biological control, several studies have been conducted on fungi and antagonists, among them species of the genus Trichoderma have demonstrated antagonistic activity against S. sclerotiorum in trials conducted both in laboratory and in field conditions. In this study, 20 isolates of Trichoderma were tested in laboratory and greenhouse. In the field, three of these isolates were evaluated in terms of reducing the impact of the pathogen on the development of crops of beans and soybeans. In these tests, we used beyond microbiolization seed, application in furrow application with jet direct and shoot with a slash drawn, where the concentration of propagules in the inoculum suspension for application of the isolates was 1x109 conidia - mL-1. In laboratory tests, four isolates showed maximum degree of antagonism (class 1), 10 isolates allocated to the Class 2 and four in Class 3, these two considered potential biocontrol medium and moderate, respectively. Two isolates have had low antagonistic activity against S. sclerotiorum (class 4). As for the germination of sclerotia, 10 strains of Trichoderma inhibited at least 90%, four showed inhibition rates between 80% and 65% had two rates of 35% and 25% and the remaining four showed no inhibitory activity on the sclerotia. Already in the tests with non-volatile metabolites, there was significant difference in growth inhibition of S. sclerotiorum, with the mean percentage inhibition of mycelial ranging from zero (no inhibition) to 100%. Among the 20 isolates, six showed the highest levels of disease control. Tests conducted in the field suggest greater efficiency of the isolates when the inoculum was applied by bar, along with microbiolization seeds, followed by the application by spraying the spore suspension and, finally, where there was only applied by microbiolization seeds, for the development of plants. The results indicate that these isolates are promising for developing a biological control program. Thus, we evaluated the production of spores in the laboratory using two substrates prepared with different amounts of water and soaking time. The highest rates of spore production were observed with CEN162 and CEN238 in parboiled rice. Addition of water at a ratio of 80%, and soaking periods exceeding 15 hours favored sporulation, regardless of the substrate. Under these conditions, the isolates showed different peaks for spore collecting in the course of 30 days.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-11-26T16:39:45Z No. of bitstreams: 1 2007_AnaAngelicaAlvesFelix.PDF: 2494604 bytes, checksum: 8789c6d849ecc146c1154916d3f7eb96 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-01-19T16:55:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_AnaAngelicaAlvesFelix.PDF: 2494604 bytes, checksum: 8789c6d849ecc146c1154916d3f7eb96 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-19T16:55:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_AnaAngelicaAlvesFelix.PDF: 2494604 bytes, checksum: 8789c6d849ecc146c1154916d3f7eb96 (MD5) Previous issue date: 2007 / Amostras de sementes de plantas nativas de matas, cerrado e de campo empregadas para a confecção de artesanato de várias regiões do Brasil foram avaliadas quanto aos aspectos fitossanitários. Realizou–se o levantamento e identificação de fungos associados às sementes, bem como os sintomas nas mesmas. Técnicas de desinfestações superficiais e de tratamento natural com uma solução de óleos vegetais extraídos de essências florestais foi empregada para o controle dos fungos. As sementes de Euterpe oleraceae, E. precatoria var. precatoria, Dipterix alata, Orbignya phalerata, Phytelephas macrocarpa, Socratea exorrhiza, Hymenaea courbaril L. var. stilbocarpa, Leucaena leucocephala, Schefflera morototoni, Astrocaryum faranae, Sapindus saponaria, Ipomoea pes-caprae, Caesalpinia peltophoroides, Heliconia metallica, Cyperus rotundus e Astrocaryum aculeatum, apresentaram – se naturalmente infectadas com uma gama significante de fungos. Os fungos mais freqüentes associados às sementes foram Alternaria alternata, Aspergillus spp., Cladosporium sp., Chaetomium sp., Botryodiplodia sp., Epicoccum sp., Eurotium sp., Fusarium sp., Monilia sp., Nigrospora sphaerica, Penicillium sp., Pestalotiopsis sp., Phialophora sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp., Syncephalastrum sp. e Verticillium sp. Os danos causados por estes fungos foram deformações, manchas necróticas, podridões moles e deterioração parcial ou total das sementes. O tratamento com a solução de óleos foi bastante eficiente para todos os fungos, com a erradicação da maioria deles. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Some seed samples of native plants from forestry, cerrado and savannas which are currently employed for the confection of handcrafts from several brazilian regions were valued as far as the phytosanitary aspects are concerned. The fungi overview and identification associated to the seeds as well as their symptoms were accomplished. Techniques of superficial de-infections and natural treatment with appropriate vegetable oil solutions extracted from tree essences were used to the control of fungi studied in the current work. Seeds of Euterpe oleraceae, E. precatoria var. precatoria, Dipterix alata, Orbignya phalerata, Phytelephas macrocarpa, Socratea exorrhiza, Hymenaea courbaril L. var. stilbocarpa, Leucaena leucocephala, Schefflera morototoni, Astrocaryum faranae, Sapindus saponaria, Ipomoea pes-caprae, Caesalpinia peltophoroides, Heliconia metallica, Cyperus rotundus and Astrocaryum aculeatum, have shown themselves naturally infected with a significant range of fungi. The most frequent fungi associated to the seeds were Alternaria alternata, Aspergillus spp., Cladosporium sp., Chaetomium sp., Botryodiplodia sp., Epicoccum sp., Eurotium sp., Fusarium sp., Monilia sp., Nigrospora sphaerica, Penicillium sp., Pestalotiopsis sp., Phialophora sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp., Syncephalastrum sp. e Verticillium sp. The damages caused by these fungi have been associated to deformations, necrotic spots and soft rotten as well as partial or total decay of seeds. The treatment we propose here was accomplished with the natural oils solution and it has been shown that the proposed technique is very efficient in the control of all the fungi for the complete eradication of them.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2011-06-13T18:57:55Z No. of bitstreams: 1 2010_MariaLainePenhaTinoco.pdf: 5054232 bytes, checksum: 30658ac8cfaf7157c5a40d4216ab99ed (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-06-20T13:58:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_MariaLainePenhaTinoco.pdf: 5054232 bytes, checksum: 30658ac8cfaf7157c5a40d4216ab99ed (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-20T13:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_MariaLainePenhaTinoco.pdf: 5054232 bytes, checksum: 30658ac8cfaf7157c5a40d4216ab99ed (MD5) / Transcritos de RNA auto complementar formam um RNA dupla fita (dsRNA) que aciona uma degradação de uma seqüência específica de RNA mensageiro (mRNA), em um processo conhecido como RNA (RNAi) interferente levando ao silenciamento gênico. Em plantas vasculares, o tráfico de moléculas de RNAi ocorre entre células e sistemicamente por toda a planta. Sinais de RNAi pode espalhar sistematicamente ao longo de uma planta, mesmo em enxertos transgênicos sobre cavalos não-transgênicos. Há também um grande interesse na aplicação do RNAi para fungos patogênicos. A inibição específica da expressão gênica por RNAi tem se mostrado adequado para uma grande variedade de fungos filamentosos fitopatogênicos, no entanto, o silenciamento por dsRNA / siRNA não foi observado in vivo. Este estudo demonstra pela primeira vez o fenômeno de interferência in vivo no fungo patogênico Fusarium verticillioides, em que a expressão de um transgene foi especificamente silenciado pela inoculação de células do micélio em plantas transgênicas de fumo transformadas geneticamente para expressar pequenos RNAs de interferência (siRNA) a partir de um dsRNA correspondente ao transgene. Estas resultados fornecem uma poderosa ferramenta para estudos sobre a interação molecular plantapatógenos, e interações simbióticas. Do ponto de vista biotecnológico, silenciamento de genes de fungos por geração de siRNAs no hospedeiro fornece uma nova ferrameta para o desenvolvimento de estratégias de resistência de fungos nas plantas e outros organismos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Self-complementary RNA transcripts form a double-stranded RNA (dsRNA) that triggers a sequence-specific mRNA degradation, in a process known as RNAinterference (RNAi), leading to gene silencing. In vascular plants, RNAi molecules trafficking occur between cells and systemically throughout the plant. RNAi signals can spread systemically throughout a plant, even across graft junctions from transgenic to non-transgenic stocks. There is also a great interest in applying RNAi to pathogenic fungi. Specific inhibition of gene expression by RNAi has been shown to be suitable for a multitude of phytopathogenic filamentous fungi; however, dsRNA/siRNA silencing effect has not been observed in vivo. This study demonstrates for the first time the in vivo interference phenomenon in the pathogenic fungus Fusarium verticillioides, in which expression of an individual fungal transgene was specifically abolished by inoculating mycelial cells in transgenic tobacco plants engineered to express small interfering RNAs (siRNA) from a dsRNA corresponding to the particular transgene. The results provide a powerful tool for further studies on molecular plant-microbe and symbiotic interactions. From a biotechnological perspective, silencing of fungal genes by generating siRNAs in the host provides a novel strategy for the development of broad fungi-resistance strategies in plants and other organisms.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-10T21:30:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-10-01T23:08:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-01T23:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Fungos fitopatogênicos são aqueles que, assim como endófitos, habitam no interior dos tecidos vegetais. No entanto, os micro-organismos denominados como fitopatogênicos, diante de estresses bióticos e abióticos, tornam-se patógenos e causam doenças nas plantas por meio de distúrbios em seu metabolismo celular. A família Cactaceae possui uma fisiologia propícia para o surgimento de doenças, a incidência de fungos fitopatogênicos é alta devido a sua fisiologia, por apresentarem caule, ramos e cladódios suculentos. O controle das doenças tem sido feito principalmente por meio da utilização de defensivos agrícolas, produtos como inseticidas, fungicidas, herbicidas, vermífugos e solventes. Porém, diante dos prejuízos causados por esses produtos de natureza química, tem levantado uma preocupação com a saúde e o meio ambiente e alternativas estão sendo procuradas para substituir o uso desses produtos. Entre as alternativas, encontram-se os fungos isolados de plantas da Caatinga, dentre elas os cactos. Esses fungos isolados das partes aéreas dos vegetais, denominados fungos endofíticos têm despertado o interesse da comunidade científica, especialmente por seus potenciais na produção de metabólitos. O presente estudo objetivou selecionar fungos endofíticos de cactáceas crescendo em áreas da Caatinga que estão depositados na Micoteca URM-UFPE quanto à atividade antagônica a fungos fitopatogênicos isolados de palma forrageira (Nopalea cochenillifera). Foram testados 20 espécies de fungos endofíticos frente a 10 isolados de fitopatógenos da palma forrageira. O potencial antagônico foi analisado por três parâmetros: inibição, parasitismo e competição. O antagonismo por inibição foi o mais expressivo, contando com 17 espécies de endófitos com potencial inibitório. As melhores espécies foram Aspergillus tamarii e Penicillium griseofulvum que inibiram todos os isolados de fitopatógenos utilizados no teste. Além destas, A. niger, A. ochraceus, A. parasiticus, A. versicolor, Cladosporium sphaerospermum, P. chrysogenum, P. commune e Purpureocillium lilacinum que obtiveram 90% no potencial de inibição. Trichoderma longibrachiatum obteve resultado expressivo, porém, apresentou apenas antagonismo por parasitismo. Todas as 20 espécies de fungos endofíticos isolados de cactáceas depositadas na Micoteca URM-UFPE mostraram-se eficientes na produção de quitinase. Aspergillus parasiticus URM6868 foi o fungo endofítico que apresentou maior atividade 4,28 (U/mL). / Phytopathogenic fungi live within internal plant tissues like endophytic fungi. However microorganisms phytopathogenic when when they are affected by biotic and abiotic stresses, these become pathogens and cause disease in plants through disturbances in their cellular metabolism. The Cactaceae family has a favorable physiology to the emergence of diseases, the incidence of pathogenic fungi is high due to their physiology, presenting stem, branches and succulent cladodes. The disease control has been done mainly through the use of pesticides. Such as insecticides, fungicides, herbicides, wormers and solvents. However, the damage caused by these products of chemical nature, a concern have been raised about health and environment and the alternatives are being sought to replace the use of these products. Amongst the alternatives are the fungi isolated from Caatinga's plants, among them fungi from cactaceae. These fungi isolated from the aerial parts of the plant, called endophytes have awoken the interest of the scientific community, especially for its potential in the production of metabolites. This study aimed to select endophytic fungi isolated from Caatinga's cactaceae that are deposited in the URM Culture Collection- UFPE with antagonistic activity to pathogenic fungi isolated from the cacti (Nopalea cochenillifera). Twenty species of endophytic fungi against 10 isolated of pathogenic fungiwere tested. The antagonistic potential was analyzed by three parameters: Inhibition, parasitism and competition. Antagonism by inhibition was the most expressive, presented 17 species of endophytic with inhibitory potential. The best species were Aspergillus tamarii and Penicillium griseofulvum with 100% of inhibition. Aspergillus niger, Aspergillus ochraceus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus versicolor, Cladosporium sphaerospermum, Penicillium chrysogenum, Penicillium commune and Purpureocillium lilacinum showed 90% of inhibition. Trichoderma longibrachiatum obtained significant results, however, showed only antagonism by parasitism. All 20 species of endophytic fungi isolated from cactus deposited in the URM Culture Collection -UFPE were effective in producing chitinase. Aspergillus parasiticus URM 6868 was the endophytic fungus that demonstrated higher activity 4.28 (U / mL).

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-08-29T11:24:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361685 bytes, checksum: 6cf508d911e3f6c1ff5a61ecf5b8b708 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T11:24:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361685 bytes, checksum: 6cf508d911e3f6c1ff5a61ecf5b8b708 (MD5) Previous issue date: 2017-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A conservação de frutos in natura com qualidade é primordial para reduzir as perdas no período após a colheita, devido à recorrente contaminação por fungos patogênicos. No entanto, a forma usual de controle por fungicidas e agentes químicos vem causando danos ao meio ambiente, à saúde humana e selecionando linhagens de patógenos resistentes. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito antagonista da levedura Kluyveromyces marxianus e seu mecanismo de ação contra o fitopatógeno Botrytis cinerea. Os resultados obtidos mostram que K. marxianus é capaz de secretar simultaneamente enzimas hidrolases envolvidas na degradação da ultra-estrutura da parede celular fúngica. O extrato protéico secretado foi testado contra os substratos Azocaseína e ρ-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo e apresentou atividades de glicosidase e proteásica para todas as linhagens testadas. O sequenciamento, por espectrometria de massas, das proteínas majoritárias que foram visualizadas em SDS-PAGE identificou vinte e sete proteínas, sendo 13 delas classificadas como hidrolases. Entre as hidrolases foram identificadas 4 β-glicanases, 4 glicosidases, uma protease aspártica, uma endoquitinase e uma inulinase. Quando se avaliou o efeito do extrato enzimático secretado por K. marxianus sobre a ultra-estrutura da parede celular de Saccharomyces cerevisiae foi observado um dano substancial, causando deformações celulares e redução da viabilidade da população de células. Neste trabalho foi observada a atividade de antagonismo da K. marxianus in vitro e in vivo utilizando conhecidos alvos do patógeno Botrytis cinerea: morangos e uvas de mesa. Os resultados obtidos dos testes de antagonismo in vitro mostram que em cultivo simultâneo K. marxianus inibe 88% a germinação de esporos de B. cinerea (p-valor 0,0003) nas primeiras 12h, sugerindo que, além da competição por nutrientes, a inibição do crescimento micelial esteja relacionada com a capacidade de secretar enzimas líticas exibidas pela levedura antagonista. Os resultados dos testes in vivo em uvas não mostraram atividade de antagonismo da K. marxianus contra B. cinerea. Os resultados dos testes in vivo em morangos sugerem que a habilidade de secretar enzimas líticas fazem da K. marxianus um agente potencial para o controle biológico de B. cinerea. / The conservation of fresh fruits is essential to reduce losses in the post-harvest period due to recurrent pathogenic fungi contamination. However, the usual way of control, which is by using fungicide and chemical agents, has been causing damage to the environment, human health and selecting strains resistant to pathogens. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of the antagonist yeast Kluyveromyces marxianus and its mechanism of action against the phytopathogen fungus Botrytis cinerea. The results show that K. marxianus is able of simultaneously secreting hydrolyses enzymes, which are involved in the degradation of the ultra structure of the fungal cell wall. Recently, our group has identified a β-1-3(4)-glucanase secreted by K. marxianus and defined the best cultivation conditions for glucanases secretion. The secreted protein extract was tested against the substrates Azocasein and p-nitrophenyl-β- D-glucopyranoside, and it showed glycosidase and protease activities for all examined strains. The mass spectrometry sequencing of the major proteins that were visualized on the SDS- PAGE identified twenty seven proteins, thirteen of them being classified as hydrolases. Among the hydrolases, four β-glucanases, four glycosidases, one aspartic protease, one endoquitinase and one inulinase were identified. When the effect of the enzymatic extract secreted by K. marxianus was evaluated against the ultra structure of S. cerevisiae cell wall, a substantial damage was observed, which caused cell deformations and reduction of cell populations viability. In this study, it was observed the antagonist activity of K. marxianus in vitro and in vivo using known targets of the B cinerea: strawberries and table grapes. The results obtained from the in vitro antagonist testes show that the simultaneous cultivation of K. marxianus and spores of B. cinerea inhibit spores germination by 88% (p-valor 0,0003) during the first 12 hours. The simultaneous cultivation with fungal mycelium of B. cinerea suggests that, in addition to nutrient competition, the inhibition of mycelium growth may be related to the ability of the antagonist yeast to secrete lytic enzymes. The results of the in vivo tests on strawberries suggest that the ability of secreting lytic enzymes makes K. marxianus a potential agent for the biological control of B. cinerea.

Dentre as principais doenças que afetam a bananeira está a Sigatoka-amarela, causada pelo fungo Mycosphaerella musicola Leach. O objetivo do trabalho foi estudar a diversidade genética e estrutura populacional do fungo M. musicola nas principais regiões produtoras de banana, assim como verificar se a estrutura populacional está correlacionada com a origem geográfica. Para isto, foram avaliados 83 isolados coletados nos Estados da Bahia (BA), Rio Grande do Norte (RN) e Minas Gerais (MG) por meio dos marcadores SSR, ISSR e pela combinação dos dois (SSR/ISSR). De acordo com a AMOVA, para as três análises ocorreu maior variação genética entre os haplótipos dentro de municípios, em que apenas com o uso dos ISSR não foi significativo. Alta variabilidade foi detectada entre os isolados, com os primers combinados observou-se 100% haplótipos distintos, com os SSR 98,79 % de haplotipos únicos e com os ISSR foram 83,13 % haplótipos diferentes. Em relação à composição genética com base no agrupamento Bayesiano, notou-se a presença de 21 prováveis grupos ancestrais para as localidades em estudo com os primers combinados, diferente do que ocorreu com o uso dos SSR e dos ISSR, em que foram encontrados 14 prováveis grupos ancestrais. O maior valor de Gst foi de 0,11 entre RN e MG para os SSR, já o Nm que indica o fluxo gênico foi alto entre todos os Estados. Em relação ao IA e rd, a hipótese de recombinação sexual foi aceita para algumas microrregiões no estudo. Contudo, não foi detectada nenhuma estruturação da população de acordo com os locais de coleta, sendo que o conhecimento sobre a distribuição da variabilidade genética de M. musicola irá auxiliar nas estratégias para o controle da doença. / Dentre as principais doenças que afetam a bananeira está a Sigatoka-amarela, causada pelo fungo Mycosphaerella musicola Leach. O objetivo do trabalho foi estudar a diversidade genética e estrutura populacional do fungo M. musicola nas principais regiões produtoras de banana, assim como verificar se a estrutura populacional está correlacionada com a origem geográfica. Para isto, foram avaliados 83 isolados coletados nos Estados da Bahia (BA), Rio Grande do Norte (RN) e Minas Gerais (MG) por meio dos marcadores SSR, ISSR e pela combinação dos dois (SSR/ISSR). De acordo com a AMOVA, para as três análises ocorreu maior variação genética entre os haplótipos dentro de municípios, em que apenas com o uso dos ISSR não foi significativo. Alta variabilidade foi detectada entre os isolados, com os primers combinados observou-se 100% haplótipos distintos, com os SSR 98,79 % de haplotipos únicos e com os ISSR foram 83,13 % haplótipos diferentes. Em relação à composição genética com base no agrupamento Bayesiano, notou-se a presença de 21 prováveis grupos ancestrais para as localidades em estudo com os primers combinados, diferente do que ocorreu com o uso dos SSR e dos ISSR, em que foram encontrados 14 prováveis grupos ancestrais. O maior valor de Gst foi de 0,11 entre RN e MG para os SSR, já o Nm que indica o fluxo gênico foi alto entre todos os Estados. Em relação ao IA e rd, a hipótese de recombinação sexual foi aceita para algumas microrregiões no estudo. Contudo, não foi detectada nenhuma estruturação da população de acordo com os locais de coleta, sendo que o conhecimento sobre a distribuição da variabilidade genética de M. musicola irá auxiliar nas estratégias para o controle da doença. / Among the major diseases affecting banana is yellow Sigatoka, caused by Mycosphaerella musicola Leach. The objective was to study the genetic diversity and population structure of the fungus M. musicola, the main banana-producing regions. Additionally, we investigated the population structure is correlated with geographic origin. For this, we evaluated 83 isolates collected in the states of Bahia (BA), Rio Grande do Norte (RN) and Minas Gerais (MG) through SSR, ISSR and the combination of the two (SSR / ISSR). According to AMOVA analysis for the three most genetic variation occurred among haplotypes within municipalities, in which only the use of ISSR was not significant. High variability was detected among isolates, with primers combined observed distinct haplotypes 100%, with 98.79% of SSR haplotypes with unique and ISSR were 83.13% different haplotypes. Regarding the genetic composition based on Bayesian clustering was noted the presence of 21 probable ancestral groups for study sites with primers combinations, different from what occurred with the use of SSR and ISSR were found in which the presence of 14 probable ancestral groups. The highest Gst was 0.11 between RN and MG for SSR, already Nm indicating gene flow was high among all states. Compared to IA and rd, the hypothesis was accepted for sexual recombination in some micro study. However, it was not detected any structuring of the population according to the sampling sites, and the knowledge about the distribution of genetic variability of M. musicola will assist in strategies to control the disease. / Dissertação submetida ao Colegiado de Curso do Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais da Universidade Federal do Recôncavo da Bahia e Embrapa Mandioca e Fruticultura, como requisito para obtenção do Grau de Mestre em Recursos Genéticos Vegetais.