Made available in DSpace on 2014-12-17T14:14:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NicaciaBC.pdf: 325579 bytes, checksum: 3a55757ec6b6aa0195f9152f3b8605f1 (MD5) Previous issue date: 2005-09-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Dermatomycoses are fungal infections that attack the skin, hair and nails, in addition to the mucosal and cutaneous-mucosal zones. Objective: Observe the frequency of dermatomycoses, identify etiological agents and establish an association between the results and sex. Age, collection site, time and lesion location. Methods: Between February, 2002 and December, 2004, samples were collected from patients at Giselda Trigueiro Hospital in Natal, Brazil, by lesion scraping and hair removal, following 70% alcohol disinfection, and submitted to direct and culture examination. Results: Of the 817 lesions collected, 325 (39.8%) were fungus positive, with the hair collection site yielding the highest number of positive results (65.8%) and the scalp and hair representing the most frequent lesion sites (65.9%). Negative results occurred mainly in the lower limbs (78.6%). Of the species identified, 55.9% were yeasts, 41.6% dermatophytes and 2.5% Fusarium spp. Non-albicans Candida was the most isolated yeast (43.3%), mainly in females (61.7%) over the age of 40 years (56.4%). T. rubrum was the most isolated dermatophyte (67.9%),notably in males (59.2%) in the 0-20 age group (44.7%). With respect to collection site, 73.9% of the dermatophytes were present in the skin and 61.1% of the yeasts in the nails. When assessing the collection site, the inguinocrural regional was 22.6% positive for dermatophytes, and the nails and hands, 41.8% for yeasts. Conclusions: The results obtained verified that: most of the positive lesions were found in the hair, whereas skin and nail lesions yielded more negative results; T. rubrum was the most isolated dermatophyte and non-albicans candida the most commonly found yeast; positivity was greater in males in the 0-20 year age group at the skin site and in the inguinocrural region, while yeasts were more frequent in females in the over-40 age group at the nail sites / As dermatomicoses s?o infec??es f?ngicas humanas que atingem pele, p?los e unhas, al?m de mucosas e zonas cut?neo-mucosas. Objetivo: Observar a freq??ncia das dermatomicoses, identificar os agentes etiol?gicos e estabelecer uma associa??o dos resultados encontrados com sexo, idade, s?tio de coleta, tempo e local da les?o. M?todos: No per?odo de fevereiro de 2002 a dezembro de 2004, as amostras foram coletadas de pacientes atendidos no Hospital Giselda Trigueiro, por meio da raspagem das les?es e remo??o dos p?los, ap?s desinfec??o com ?lcool a 70%, e submetidas ao exame direto e cultura. Resultados: Das 817 les?es coletadas, 325 (39,8%) foram positivas para fungos, sendo o s?tio de coleta p?los o respons?vel pelo maior n?mero de resultados positivos (65,8%), e couro cabeludo e cabelos foi o local de les?o mais freq?ente (65,9%). Resultados negativos ocorreram principalmente nos membros inferiores (78,6%). Quanto ?s esp?cies identificadas, 55,9% eram leveduras, 41,6% dermat?fitos e 2,5% Fusarium spp. Candida n?o albicans foi a levedura mais isolada (43,3%), principalmente no sexo feminino (61,7%), com idade acima de 40 anos (56,4%). T. rubrum foi o dermat?fito mais isolado em 67,9% dos casos notadamente no sexo masculino (59,2%) e na faixa et?ria de 0-20 anos (44,7%). No tocante ao s?tio de coleta, 73,9% dos dermat?fitos estavam presentes na pele e 61,1% das leveduras nas unhas. Ao se avaliar o local da les?o, a regi?o inguno-crural apresentou positividade de 22,6% de dermat?fitos e as unhas das m?os, 41,8% de leveduras. Conclus?es: Diante dos resultados obtidos, constatou-se que: a maioria das les?es positivas foi encontrada nos p?los, enquanto les?es de pele e unhas geraram mais resultados negativos; T. rubrum foi o dermat?fito mais isolado e Candida n?o albicans a levedura mais presente; a positividade por dermat?fitos foi maior no sexo masculino, na faixa et?ria de 0-20 anos, no s?tio de coleta pele e na regi?o inguino-crural, enquanto que as leveduras foram mais freq?entes no sexo feminino, na faixa et?ria acima de 40 anos, no s?tio de coleta unhas e nas unhas das m?os

Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Resumo: O fungo ascomiceto, Pyricularia oryzae, tem distribuição mundial como patógeno doarroz, mas recentemente emergiu como patógeno causando a brusone do trigo noBrasil. Os grupos de fungicidas estrobirulinas e triazóis tem sido intensivamenteutilizados para manejo de doenças do trigo há cerca de três décadas. Há relato deresistência de P. oryzae do trigo a estrobirulinas no Brasil e a ineficácia dos fungicidastriazóis aponta para um cenário semelhante. Os triazóis, inibidores da desmetilaçãode esteróis (DMI), inibem a biossíntese de ergosterol e possuem como alvo a enzima14α-demetilase, codificada pelo gene cyp51. Em nosso estudo, determinamos asdistribuições de frequência da sensibilidade de 180 isolados de P. oryzae do trigoamostrados de sete estados do Centro-Sul do Brasil, com base na EC50 a tebuconazole epoxiconazol. Descrevemos, também, a presença de mutações no gene cyp51A ereconstruímos sua filogenia reticulada para esclarecer a relação evolutiva entrehaplotipos. Relatamos que todas as populações de P. oryzae amostradas semostraram insensíveis aos fungicidas testados, comparando-se com as dosesrecomendadas para o manejo da doença no campo. Com base na sequência do genecyp51A de P. oryzae do trigo, foram detectados oito haplotipos distintos. Foramencontradas sete mutações não-sinônimas, que podem estar correlacionadas com aresistência à DMI's. / Abstract: The fungus ascomycete Pyricularia oryzae has worldwide distribution as rice pathogen, but it has recently emerged as pathogen causing wheat blast in Brazil. The strobirulin and azole fungicides have been intensively used for management of wheat diseases in the last three decades. The report of resistance of P. oryzae from wheat to strobirulins in Brazil and the inefficiency of azole fungicides indicates a similar scenario. The triazoles represented sterols demethylation inhibitor fungicides group (DMI), characterized by inhibiting the biosynthesis of ergosterol and their target is the 14α-demethylase enzyme, encoded by the cyp51 gene. We determined the azole sensitivity frequency distributions of 180 isolates of P. oryzae of wheat sampled in seven states of the south-central Brazil, based on the EC50 of tebuconazole and epoxiconazole. We described the presence of mutations in the cyp51A gene and built their reticulate phylogeny to identify the evolutionary relationship among haplotypes. We reported that all P. oryzae populations sampled were insensitive to the azoles when compared to the recommended doses for the management of the disease in the field. Based on the sequence of cyp51A gene from P. oryzae of wheat, eight distinct haplotypes were detected. We found seven non-synonymous mutations that could be correlated with resistance to DMI's. / Mestre

Resumo: As formigas da tribo Attini são conhecidas pela complexa simbiose que mantêm com fungos, os quais cultivam como alimento. É sabido que além desse fungo, outros microrganismos podem ser encontrados nos ninhos desses insetos e estudos prévios apontaram que alguns microfungos (i.e. leveduras e fungos filamentosos) podem ser importantes nessa simbiose. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel desses microfungos associados aos jardins dessas formigas. Analisando várias espécies do gênero Acromyrmex do sul do Brasil, demonstrou-se que as formigas importam uma comunidade diversa de microfungos para seus ninhos, provavelmente provenientes do solo e do substrato vegetal que as formigas utilizam para cultivar seu fungo. Num segundo estudo, avaliando formigas Attini da América do Norte (Atta texana, Trachymyrmex septentrionalis e Cyphomyrmex wheeleri) observou-se que a estrutura das comunidades de microfungos nos jardins desses insetos não se correlaciona com a variação sazonal, sugerindo que não existam relações espécie-específicas entre as formigas e os microfungos. Apesar de tais microrganismos não serem especialistas dos jardins desses insetos, é sugerido que os microfungos atuem como antagonistas do fungo simbionte. Ainda, descobriu-se que o parasita especializado Escovopsis spp. parece ser menos freqüente nas populações de formigas da América do Sul em relação as Attini da América Central, porém estudos adicionais são necessários para estabelecer a epidemiologia desse parasita nos ninhos das Attini. Num terceiro estudo, demonstrou-se que leveduras presentes nos jardins de fungos da formiga cortadeira A. texana inibem o crescimento de Escovopsis spp., sugerindo que esses insetos utilizam outros microrganismos, além das bactérias presentes em suas cutículas (Pseudonocardia spp.), para inibir esse parasita. Esse achado traz importantes implicações para essa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ants in the tribe Attini are well-known social insects that maintain a symbiotic relationship with fungi which they cultivate as food. Besides of the cultivated fungi, fungus gardens contain several other microorganisms considered to be potential players in this symbiosis. The aim of the present study was to evaluate the possible roles of microfungi (i.e. yeasts and filamentous fungi) in attine gardens. Our microbial profiling of gardens from several species in the genus Acromyrmex from South Brazil revealed that ants can harbor a diverse community of microfungi that probably originated from the surrounding soil or from the substrate used to manure the cultivated fungus. In this sense, additional studies of North American attine species (Atta texana, Trachymyrmex septentrionalis and Cyphomyrmex wheeleri) demonstrated that the structure of microfungal communities in gardens of these ants did not correlate with seasonal changes over a one year period, again suggesting there are no species-specific relationships among ants and microfungi species. Although, the microfungi are not specialized parasites of the attine ant-fungus symbiosis we suggest they can be considered antagonists to the cultivated fungus. Moreover, we demonstrated that the specialized parasite Escovopsis spp. is probably less frequent in South America than in Central America and we reinforce that additional studies are necessary to unravel the epidemiology of this parasite in attine gardens. In another study, we showed that yeasts isolated from gardens of the leafcutter ant A. texana can significantly inhibit the growth of Escovopsis sp. This interesting finding suggests that attine ants may use additional microbes to protect their gardens against Escovopsis spp. and not only actinomycete bacteria (Pseudonocardia spp.) found in their cuticles. Finally, we studied microfungi relationships with female alates (gynes) in two... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Fernando Carlos Pagnocca / Coorientador: Mauricio Bacci Junior / Banca: Carlos Augusto Rosa / Banca: Lara Durães Sette / Banca: Luiz Carlos Forti / Banca: Maria José Aparecida Hebling / Doutor

Resumo: Este trabalho objetivou avaliar o efeito da aplicação de Metarhizium anisopliae em pastagem de Brachiaria decumbens naturalmente infestada, submetida ao pastejo com bovinos, visando o controle do carrapato Boophilus microplus. O estudo foi realizado no período de maio de 2006 a março de 2007, em pastagem de B. decumbens, implantada em solo de textura argilosa da Fazenda do Glória, pertencente à Universidade Federal de Uberlândia (UFU), em Uberlândia, MG. Utilizou-se população de B. microplus naturalmente existente na pastagem com área de 12.000 m2 e 24 novilhos mestiços com cerca de 1 ano de idade, como hospedeiros experimentais. A randomização dos animais foi feita pela contagem de fêmeas ingurgitadas (instar entre 4,5 a 8 mm de comprimento), no terceiro, segundo e primeiro dias anteriores à primeira aplicação do fungo na pastagem. A área da pastagem foi então dividida em dois pastos com 6.000 m2, e grupos homogêneos de 12 animais foram introduzidos em cada pasto, determinando-se por sorteio o pasto tratado e o controle. Para pulverizar o pasto tratado, foram utilizados 5 a 6 kg de arroz contendo o isolado E9 de M. anisopliae esporulado, com os quais se produziu 400 L de suspensão conidial, quantidade suficiente para pulverizar, em média, 66,7 mL de suspensão por metro quadrado de pasto ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work the efficacy of spraying Brachiaria decumbens pasture with Metarhizium anisopliae against natural infestation with the cattle tick Boophilus microplus was evaluated. The study was conducted from May 2006 to March 2007 at the Gloria farm from the Federal University of Uberlândia, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. Experimental pasture of 12.000 m2, naturally infested with B. microplus and had 24 one year old mixed breed bovines was used. The area was halved in two pastures of 6.000 m2 and each pasture received 12 animals. Tick susceptibility of bovines of each area was similar. Pastures were than sprayed with either a conidial suspension of E9 M. anisopliae isolate (treated pasture) or the conidial suspension vehicle without the fungus (control pasture). Pastures were sprayed 12 times with 21 day intervals between applications. Bovines remained on the pasture during the spraying. Fungus persistence on the soil and the grass was evaluated on first, seven and 14 days after each spraying. Pasture infestation with larvae and animal infestation with engorging female ticks were evaluated 17, 19, 21, 26 and 33 days after each pasture treatment ...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Antõnio Carlos Monteiro / Coorientador: Matias Pablo Juan Szabó / Banca: Marcelo Bahia Labruna / Banca: Márcio Botelho de Castro / Banca: Luís Garrigos Leite / Banca: Ely Nahas / Doutor

Resumo: No Brasil os testes ecotoxicológicos são realizados com diversos organismos, porém para a avaliação da poluição dos solos apenas as minhocas são utilizadas como organismo-teste ou bioindicador e não há normas de testes para os outros organismos. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar a sensibilidade e a variação da resposta do fungo A. cassiae ao dicromato de potássio como substância de referência. Para a determinação da concentração efetiva (CE (I)50;7d), foram realizados sete testes com as concentrações 0,0; 50,0; 90,0; 130,0; 170,0; 210,0; e 250,0 mg.L-1 de dicromato de potássio no meio de cultivo BDA, mantido em placas de Petri. O dicromato de potássio foi adicionado ao meio após a autoclavagem, quando este ainda apresentava consistência líquida. Após o resfriamento e solidificação do meio, nas placas, foi colocado um disco com 6,5 mm de A. cassiae. As placas inoculadas foram incubadas a 25ºC com fotoperíodo de 12 horas, durante sete dias. O crescimento do fungo foi avaliado por meio de medidas transversais do diâmetro da colônia. A CE (I)50;7d estimada foi de 65,97 ± 9,48 mg.L-1. No controle não ocorreu inibição do crescimento. Em 50 mg.L-1 a inibição foi de 29%; em 90 mg.L-1, de 72%; em 130 mg.L-1, de 86%; em 170 mg.L-1, de 92%; em 210 mg.L-1, de 95%; e em 250 mg.L-1. de 94%. Assim, há viabilidade na utilização do fungo A. cassiae como representante dos microorganismos do solo em testes ecotoxicológicos e o dicromato de potássio pode ser utilizado como substância de referência. / Abstract: In Brazil the ecotoxicological tests are conducted with various organisms, but among the soil organisms only earthworms have standardized tests. For other soil organisms there are not standard methods for these studies. The objective of this study was to evaluate the adequacy of potassium dichromate as substance reference to the fungus Alternaria cassiae. To determine the effective concentration (EC (I)50;7d), seven tests were conducted using the concentrations (0.0, 50.0, 90.0, 130.0, 170.0, 210.0, and 250 , 0 mg.L-1) in the BDA media. The respective potassium dichromate concentrations were introduced in the BDA medium while it had liquid consistency. After cooling and solidification of the medium was placed on each plate, a disc with 6.5 mm of A. cassiae, which were incubated at 25 °C with photoperiod of 12 hours for seven days. The EC (I)50;7d estimated was 65.97 ± 9.48 mg.L-1. In concentration of 0.0 mg.L-1 there was no growth inhibition. In 50 mg.L-1 inhibition was 29%, in 90 mg.L-1, 72%; in 130 mg.L-1, 86%; in 170 mg.L-1, 92%; in 210 mg.L-1, of 95% and in 250 m.L-1 was 94%. Thus, it is feasible using the fungus A. cassiae as the representative of microorganisms in the soil ecotoxicological tests and the potassium dichromate as reference substance. / Orientador: Robinson Antonio Pitelli / Coorientador: Claudinei da Cruz / Banca: Joaquim Gonçalves machado Neto / Banca: Pedro Antonio Zagatto / Mestre

Resumo: O eucalipto é a arbórea mais plantada no Brasil, devido ao seu amplo uso e após seu corte, os tocos e raízes que permanecem no local, dificultam o manejo da cultura. Com base nessa necessidade, o objetivo do presente estudo foi avaliar as características fisiológicas e funcionais de fungos basidiomicotas, isolados de campos de reflorestamento de Eucalyptus spp., com vistas à possibilidade do uso destes na destoca natural. Os fungos Pycnoporus sanguineus, Lentinus bertieri, Xylaria sp. e Lentinula edodes e um isolado não identificado foram estudados. No primeiro experimento, avaliou-se a patogenicidade dos mesmos em plantas de eucalipto urograndis (10 meses de idade), através da inoculação de disco de meio de cultura colonizado e não colonizado (Testemunha). As avaliações foram feitas aos 30 e 60 dias após a inoculação, com base no tamanho das lesões internas e externas. No segundo experimento, avaliou-se o crescimento micelial dos fungos P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp., L. edodes e S. ostrea, em substrato à base de serragem enriquecida com farelos, e em três composições de meios de cultura, Batata-Dextrose-Ágar (BDA); Malte-Ágar (MA) e Serragem-Dextrose-Ágar (SDA), e incubados a 23, 27 e 31ºC. No terceiro experimento, avaliou-se a produção das enzimas ligninocelulolíticas lacase e celulase, e outras ligadas à degradação de tecidos vegetais, as proteases, pectinases e lipase, em meios de cultura específicos. No quarto experimento, estudou-se, pelo método "soil block", a perda de massa (%) de corpos-de-prova de eucalipto urograndis, inoculados com os fungos P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp. e L. edodes, mantidos sob dois regimes de umidade (50 e 100%), e avaliados aos 30, 60, 90 e 120 após inoculação. Estudaram-se também as características químicas da madeira, após 120 dias da inoculação / Abstract: The Eucalyptus spp. tree is the most planted in Brazil, due to its widespread use and after its use, the stumps and roots that remains in the area, hinder crop management. Based on this need, the purpose of this work was evaluate the physiological and functional characteristics of basidiomycetes fungi, obtained in reforestation fields of Eucalyptus spp., with the possibility of using the fungi in natural stump removal. Pycnoporus sanguineus, Lentinus bertieri, Xylaria sp., Stereum ostrea and a unidentified isolate, were studied. In the first, was evaluate the fungi pathogenicity in eucalipt urograndis plants (10 months old), by means of disk inoculation into culture medium colonized and non-colonized (control) by fungi. Evaluations were performed at 30 and 60 days after inoculation based on the external and internal size of lesions. In experiment 2, the mycelial growth of P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp., L. edodes and S. ostrea was evaluated in bran and sawdust-based substrate, as well as in three culture media: Potato-Dextrose-Agar (PDA), Malt-Agar (MA) and Sawdust-Dextrose-Agar (SDA), and at three incubation temperatures, at 23, 27 and 31ºC. In experiment 3, the production of lignolytic enzymes lacase and cellulase, and other enzymes related to degradation of plant tissues, like protease, pectinases and lipase was assessed in specific culture media. In experiment 4, mass loss (%) and chemical features of eucalipt urograndis wood degraded by the soil block method were evaluated by the P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp. and L. edodes fungi. Thus, test specimens were inoculated with the fungi and kept under two moisture regimes, 50 and 100%, and incubated at 25 ±2ºC. Mass loss was assessed at 30, 60, 90 and 120 days after inoculation. The chemical features of eucalipt urograndis test specimens were only analyzed at 120 days / Orientador: Marli Teixeira de Almeida Minhoni / Coorientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Celso Garcia Auer / Banca: Elias Taylor Durgante Severo / Mestre

Orientador: Paulo Câmara Marques Pereira / Coorientador: Fátima Regina Vilani Moreno / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Maria Esther Salles Nogueira / Banca: Sônia Maria Usó Ruiz Silva / Banca: Silvio Luís de Oliveira / Resumo: A doença de Jorge Lobo é micose cutânea-subcutânea de evolução crônica causada pelo fungo Lacazia loboi. Esta micose é predominante na região Amazônica e afeta principalmente trabalhadores rurais que vivem em contato constante com a vegetação e o solo, como é o caso dos seringueiros dessa região. Até o momento não existem estudos sobre a participação do estado nutricional na resposta imunológica abordando a doença de Jorge Lobo; assim, este estudo tem por finalidade avaliar os efeitos da desnutrição protéico-calórica na resposta imune de camundongos isogênicos da linhagem BALB/c inoculados com L. loboi, empregando parâmetros imunológicos e histopatológicos. O presente estudo foi desenvolvido com 120 camundongos do sexo masculino, da linhagem BALB/c, com idade aproximada de 12 semanas e cerca de 25g de peso corporal. Foram constituídos quatro grupos: G1: 30 camundongos inoculados com o fungo L. loboi, recebendo restrição dietética de 20% da dieta normal; G2: 30 camundongos não inoculados, recebendo restrição dietética de 20% da dieta normal; G3: 30 camundongos inoculados, recebendo dieta normal; G4: 30 camundongos sadios. Os animais dos grupos G1 e G2 foram submetidos previamente, por 20 dias, antes do início do estudo, a restrição dietética com oferta diária de 80% da quantidade ingerida pelos grupos G3 e G4. Após instalada a desnutrição, os animais foram inoculados no coxim plantar, via intradérmica, com fungo L. loboi e depois de 4 meses (período de aparecimento das lesões macroscópicas no coxim plantar), os animais foram sacrificados e submetidos ao lavado peritoneal e à necrópsia para a retirada dos órgãos: fígado e baço. Os coxins plantares foram removidos para determinação da viabilidade e do número total de fungos, além do histopatológico. As células do lavado peritoneal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Jorge Lobo's disease is a cutaneous and subcutaneous mycosis with chronicle evolution caused by the fungus Lacazia loboi. This mycosis is predominant in the Amazon region and affects mainly rural workers who live in constant contact with the vegetation and the soil, such as the rubber tappers in this region. Up to this date there haven't been studies about the participation of the nutritional state in the immunological response approaching the Jorge Lobo; thus, this study aims to evaluate the effects of the protein-calorie malnutrition in the immune response of the isogenic mice lineage BALB/c inoculated with L. loboi, using hystopatological and immunological parameters. The present study was developed with 120 male mice lineage BALB/c, with approximately 12 weeks old and circa 25g of body weight. Four groups were made: G1: 30 mice inoculated with L. loboi fungus, receiving diet restriction of 20% of the normal diet; G2: 30 non inoculated mice, receiving diet restriction of 20% of normal diet; G3: 30 mice inoculated receiving normal diet; G4: 30 healthy mice. The animals in the groups G1 and G2 were previously submitted for 20 days before the beginning of the study to a diet restriction with a daily offer of 80% of the quantities ingested by groups G3 e G4. After malnutrition was installed the animals were inoculated in the plantar cushion, via intradermic, with L. loboi fungus and after 4 months (period of the appearance of the macroscopic lesions in the plantar cushion), the animals were sacrificed and submitted to a peritoneal washing and to a necropsy to remove the organs: liver and spleen. The plantar cushions were removed for determining the viability and the total number of fungi, besides the hystopatological. The cells in the peritoneal washing were used for: total cell culture for the dosage of cytokine IFN-γ, macrophage... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Eleni Gomes / Banca: Eleonora Cano Carmona / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: Maria de Lourdes T. de M. Polizeli / Resumo: O fungo Rhizomucor pusillus A 13.36, quando cultivado por fermentação em estado sólido utilizando farelo de algodão como fonte de carbono por 72 horas, produziu altos níveis de poligalacturonase (18,6U/g). Essa enzima apresentou atividade máxima em pH 5,5 e em 55oC. A poligalacturonase bruta apresentou estabilidade na faixa de pH entre 4,5 e 6,5, com uma atividade residual de 91,3% no pH 6,5, e também até 70oC por 1h, com atividade residual de 80% nas temperaturas de 55 a 60oC. Esta enzima foi purificada por concentração e uma combinação de procedimentos de gel filtração e cromatografia de troca-iônica. A massa molecular da enzima foi 53,7kDa. A focalização isoelétrica mostrou uma única banda cujo ponto isoelétrico (pI) foi 3,8. A atividade máxima da enzima purificada também ocorreu em pH 5,5 e a 55oC. A enzima purificada foi estável na faixa de pH 4,5 a 6,5, com atividade residual na faixa de 80 a 100%, e também até 70oC por 1h, com atividade residual de 100% nas temperaturas de 55 a 60oC. A enzima purificada foi totalmente inibida por Ca2+, Cu2+, Hg2+ e 80% inibida por Fe2+ e Ag+. Mg2+ estimulou a atividade da poligalacturonase em 100%. Entre os substratos avaliados, a pectina de citrus (D.E. 92%) foi o que mais estimulou a ação da enzima. A afinidade por pectinas de alta esterificação e a ausência de atividade quando o ácido poligalacturônico foi usado como substrato, indica que a enzima purificada é uma polimetilgalacturonase. Os resultados obtidos pela cromatografia de papel demonstraram que a polimetilgalacturonase purificada possui o modo de clivagem endo/exo misto. O Km com pectina de citrus foi 10,78mg mL-1 e a Vmax foi 2379,04μmolmin-1mg-1. As possíveis aplicações desta enzima incluem composição de detergentes, processamento têxtil e de fibras de celulose, degradação ou modificação de material vegetal, aditivo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rhizomucor pusillus A 13.36 produced high levels of polygalacturonase (18.6U/g) in solid state fermentation in medium composed by cotton bran for 72 hours. This enzyme showed maximal activity at pH 5.5 and 55oC. Crude polygalacturonase was stable from pH 4.5 to 6.5, with remaining activity of 91,3% at pH 6.5, and stable until 70oC for 1h, with remaining activity of 80% at 55-60oC. This enzyme was purified by concentration and a combination of gel filtration and ion exchange chromatographic procedures. The molecular mass of the enzyme was 53.7kDa. Isoelectric focusing showed a single band with an isoelectric point (pI) of 3.8. The purified enzyme also showed maximum activity at pH 5.5 and 55oC. The purified enzyme was stable from pH 4.5 to 6.5, with remaining activity range of 80 to 100%, and stable until 70oC for 1h, with remaining activity of 100% at 55-60oC. The purified enzyme was totally inhibited by Ca2+, Cu2+, Hg2+ and 80% inhibited by Fe2+ and Ag+. Mg2+ increased poligalacturonase activity in 100%. Citrus pectin (D.E. 92%) was found to be the preferred substrate among the different substrates tested in the enzyme assay. The affinity for high pectin esterification and the lack of activity when polygalacturonic acid was used as substrate, indicates that the enzyme is a polymethylgalacturonase. The results obtained by paper chromatography showed that the purified polymethylgalacturonase has the mixed endo/exo mode of cleavage. The Km with citrus pectin was 10.78mg mL-1 and the Vmax was 2379.04μmolmin-1mg- 1. The possible applications of this enzyme include the composition of detergents, textile and cellulosic fiber processing, degradation or modification of plant material, animal feed additive and wine and juice processing. / Doutor

Orientador: Fernando Carlos Pagnocca / Banca: Derlene Attili de Angelis / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Resumo: A simbiose entre as formigas Attini e o fungo cultivado permitiu a expansão das suas colônias e a utilização dos fungos como parte da dieta alimentar dos adultos e como principal alimento das larvas. Em troca, as formigas suprem os fungos com substrato vegetal, dão abrigo, os dispersam para novas localidades e oferecem proteção contra seus predadores e patógenos. Apesar dos diversos mecanismos para manter o ninho livre de outros micro-organismos, bactérias, leveduras e fungos filamentosos podem ser encontrados. Na literatura, há pouca informação sobre a presença e o papel biológico das leveduras em ninhos de Attini. Portanto, neste trabalho a ênfase foi isolar e identificar as leveduras encontradas em jardins de fungo e em alguns materiais de descarte de ninhos de Attini. Esta abordagem permitiu a criação de um banco de estirpes específico que deverá ser utilizado em outras pesquisas que possam possibilitar uma análise mais apronfundada sobre a participação delas na simbiose. Foram analisados quarenta e quatro ninhos pertencentes a espécies de Attini de sete gêneros distintos, a saber: Mycocepurus, Myrmicocrypta, Mycetophylax, Sericomyrmex, Trachymyrmex, Acromyrmex e Atta. Deles, foi isolado um total de cento e cinqüenta e duas estirpes, distribuídas em trinta e três espécies, as quais foram identificadas por análises morfológicas, fisiológicas e pelo seqüenciamento dos domínios D1/D2 da região 26S do rDNA; contudo, em alguns casos, foi necessário seqüenciar a região ITS. A espécie mais encontrada nos ninhos de Mycocepurus goeldii, Trachymyrmex sp e Acromyrmex sp foi Pichia guilliermondii, prevalente nos ninhos dos dois últimos gêneros. Houve predominância das espécies Pichia caribbica e Candida railenensis no único ninho de Myrmicocrypta sp e de Cryptococcus flavescens nos ninhos de Atta sexdens rubropilosa. Observamos também a dominância... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The symbiosis between the Attini ants and their cultivated fungi allowed the expansion of their colonies as well as the use of fungi as part of the adults' diet and the main food of the larvae. In return, the ants supply the fungi with plant substrates, provide shelter, disperse the fungi to new locations and offer protection against predators and pathogens. Although several mechanisms to keep the nest free of other microorganisms, several bacteria, yeasts and filamentous fungi can be found. In literature, there is little information about the presence and biological role of yeasts in Attini nests, therefore, the emphasis of this study was to isolate and identify yeasts in fungus gardens and in some waste deposits of Attini ants. This approach permitted a database creation of specific strains which can be used in other researchs that may facilitate a deeper analysis about their participation in symbiosis. Forty-four nests of seven different attine genera were analyzed, which are: Mycocepurus, Myrmicocrypta, Mycetophylax, Sericomyrmex, Trachymyrmex, Acromyrmex e Atta. A total of one hundred and fifty-two strains were isolated, belonging to thirty-three yeasts species, wich were identified by morphological and physiological analysis and the D1/D2 domains of the nuclear large subunit (26S) ribosomal DNA were sequenced; however, in some cases, it was necessary to identify the ITS region of the ribosomal DNA. Pichia guilliermondii was the most dominant specie encountered in nests of Mycocepurus goeldii, Trachymyrmex sp and Acromyrmex sp, with prevalence in the nests of the last two genera. Pichia caribbica and Candida railenensis predominated in the single Myrmicocrypta sp nest studied while Cryptococcus flavescens dominated in the Atta sexdens rubropilosa nests. It was observed that basidiomycete yeasts were most associated with leaf-cutting ant nests. The genera Moniliella, Torulaspora... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A proposta deste trabalho foi demonstrar in vivo, por meio de técnicas específicas de isolamento, a presença de fungos filamentosos nos canais radiculares de dentes portadores de necrose pulpar e lesão periapical, relacionar sua presença a pacientes com resposta imunológica comprometida e realizar o estudo taxonômico dos isolados. Foram realizadas culturas de 60 canais radiculares com polpa necrosada e lesão periapical. Os pacientes responderam a um questionário de saúde e assinaram permissão para realização da pesquisa. Após isolamento absoluto e assepsia do campo operatório, as amostras foram coletadas utilizando-se 3 pontas de papel absorvente estéreis inseridas no canal radicular uma a uma, durante 1 minuto. Em campo isolado por duas lamparinas, o material coletado foi inoculado em um tubo de ensaio contendo meio de Saboraud Agar acrescido de Cloranfenicol. Próximo ao campo isolado pelas duas lamparinas, foi colocada uma placa de Petri aberta contendo o mesmo meio de cultura contido no tubo de ensaio, com o intuito de verificar a acuidade do isolamento do campo (controle negativo). Ao mesmo tempo foi efetuado um controle positivo, através de uma placa de Petri que permaneceu aberta durante a coleta, fora do campo isolado. Os tubos e placas de Petri foram mantidos em temperatura ambiente por um período de sete a quatorze dias observando o crescimento micelial. Aqueles que apresentaram crescimento foram semeados em meios específicos para microcultivo CYA Agar, Extrato de Malte Agar, ou Agar Batata. Com o auxílio de microscopia óptica, as colônias foram identificadas em gênero e espécie. Das 60 amostras coletadas, 17 apresentaram cultura positiva para fungos filamentosos, perfazendo um total de 28,3%. O gênero Aspergillus foi isolado, in situ, de 7 amostras (11,6%), sendo que a espécie Aspergillus ustus foi isolada de 3 pacientes (5%). O Aspergillus granulosus, Aspergillus niger e o Aspergillus sydowii foram isoladas de 3 pacientes respectivamente. A espécie Emericella quadriluniata, forma sexuada de Aspergillus, foi isolada de 1 paciente. O gênero Penicillium foi isolado, in situ, de 4 amostras (6,6%), sendo as espécies isoladas: Penicillium implicatum, Penicilium micsynvisk, Penicillium lividum e Penicillium citrionigrum. O gênero Fusarium foi isolado, in situ, de 2 amostras (3,3%), sendo as espécies identificadas como Fusarium moniliforme, Fusarium melanochorum, respectivamente. As espécies Aureobasidium pullulans, Exophiala jeancelmei, Eurotium amstelodame e Cladosporium sphaerospermum foram isoladas in situ de 4 amostras. Todos as amostras nas quais foi isolado fungo filamentoso pertenciam a pacientes com comprometimento da resposta imunológica. Nas placas de Petri empregadas no raio das duas lamparinas, não houve crescimento micelial. Entretanto nas placas controle positivo abertas para verificar a contaminação do meio ambiente houve crescimento de fungos ambientais que não eram compatíveis com os isolados dos canais radiculares, além de não apresentarem culturas puras. Pôde-se concluir que canais radiculares, com necrose pulpar e lesão periapical, podem apresentar cultura positiva para fungos filamentosos e que este resultado, neste estudo, apresentou relação direta com a deficiência da resposta imunológica do hospedeiro. / The purpose of the present study was to evaluate in vivo, with specific techniques that isolates the presence of filament fungus in the root canal of teeth with necrotic pulp and perirradicular disease, see the relationship between the presence of these fungus and patients with immunological deficiency and carry out a taxonomic study of the fungus isolated. It was fulfilled the culture of 60 root canals of teeth with necrotic pulp and perirradicular disease. The patients answered a health questionnaire and signed a term to allow the research. After the absolute isolation and cleaning the operating field the samples were collected using three sterile paper points inserted into the root canal during 1 minute. In an isolated field by two lamps, the collected materials were inoculated in a tube with Saboraud Agar with Cloranfenicol. Nearby the isolated field with lamps it was placed an opened Petri plaque with the same culture material from the tubes with the purpose to verify the perceptiveness of the isolated field (negative control). At the same time it was carried out the positive control group with an opened Petri plaque that was maintained far from the isolated fields. The tubes and the Petri plaque were maintained in atmosphere temperature during seven to fourteen days to observe micelial growth. Those that showed growth were spread on specific environment for microcultivation CYA Agar, Extract of Agar Malt or Agar potato. With the help of an optic microscope the colonies were identified in genre and species. Among the 60 samples collected, 17 showed positive culture for filament fungus, making up a total of 28,3%. The genre Aspergillus was isolated, in situ, of 7 samples (11,6%), and the species Aspergillus ustus was isolated from 3 pacients (5%). The Aspergillus granulosus, Aspergillus niger e o Aspergillus sydowii were isolated from 3 pacients respectivaly. The species Emericella quadriluniata, sexual form of Aspergillus, was isolated from 1 pacient. The genre Penicillium was isolated, in situ, from 4 samples (6,6%), where the species isolated were Penicillium implicatum, Penicilium micsynvisk, Penicillium lividum and Penicillium citrionigrum. The genre Fusarium was isolated, in situ, from 2 samples (3,3%), where the species identified were Fusarium moniliforme, Fusarium melanochorum, respectively. The species Aureobasidium pullulans, Exophiala jeancelmei, Eurotium amstelodame and Cladosporium sphaerospermum were isolated in situ from 4 samples. All the samples where it was isolated the filament fungus belonged to pacients with the imunolgical response compromised. On the Petri plaques employed at the range of the two lamp, it was not seen micelial growth. Thereby, on the positive control plaques, opened to check the contamination of the environment showed the growth of ambiental fungus that were not compatible with the fungus isolated from the root canal, and did not shor pure culture. It was concluded that root canal with necrotic pulp and periapical disease, can show positive culture for filament fungus and these results were directly related to the deficiency of the immunological response of the hostess.