Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-06Bitstream added on 2014-06-13T19:55:58Z : No. of bitstreams: 1 santos_ps_me_jabo.pdf: 335704 bytes, checksum: 115114dd0becad3405d05e364da4f676 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP) / Nos últimos anos o ataque da Dactylopius opuntiae, conhecida como cochonilha-do-carmim, à palma forrageira no Nordeste, tem causado grandes prejuízos principalmente na região da Paraíba, Pernambuco e Alagoas. Uma alternativa em desenvolvimento para o controle da praga é a seleção de fungos patogênicos e virulentos ao inseto. Neste estudo foi proposta a avaliação de produtos a serem usados como componentes da formulação de bioinseticidas, para o preparo de caldas a serem aplicadas no controle da cochonilha. Foi utilizado o isolado LCB63 de Beauveria bassiana previamente selecionado quanto à patogenicidade e virulência ao inseto. Avaliou-se a exposição do isolado a diferentes concentrações (0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 e 1,0%) de surfactantes (Unitol L/20, Ultranex NP/100, Ultratan D, Surfon 3403, Surfon 5409, Sabão OMO®, Detergente neutro Ypê®) através do crescimento de colônias, germinação após exposição temporária aos produtos e a influência do balanço hidrofílico-lipofílico (HLB) na dispersão e viabilidade de conídios. Em outro experimento, avaliou-se a tolerância dos conídios do isolado à radiação solar e ultravioleta em fluxo laminar sob efeito de diferentes concentrações de fotoprotetores (Neo Heliopan AV, Neo Heliopan E1000, Oxibenzona, Amido e Leite) em diferentes períodos de exposição. Finalmente, verificou-se a mortalidade de ninfas de D. opuntiae utilizando-se formulações contendo os surfactantes e fotoprotetores que apresentaram os melhores resultados nos experimentos anteriores. Unitol L/20 e Ultranex NP/100 não apresentaram efeito deletério na formação de colônias, e Surfon 5409, detergente neutro Ypê® e sabão OMO®, apresentaram grande toxicidade ao fungo. Não houve interferência de Unitol L/20, Ultranex NP/100 e Ultratan D na germinação dos conídios nos primeiros 10 minutos de exposição aos surfactantes... / For the last years the attack of Dactylopius opuntiae know as Carmine cochineal to forage palm, in northern states of Brazil, have causes great prejudice, mainly in the regions of Paraíba, Pernambuco e Alagoas. One developing alternative for the control of this pest is the selection of pathogenic and virulent fungi to the insect. This study proposed the evaluation of products to be used as compounds in the formulation of bioinsecticides, for the preparation of broths applied in the control of cochineal. The isolate LCB63 of Beauveria bassiana previously selected for its pathogenicity and virulence to the insect, was used. The exposition of the isolate in different concentrations (0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5 and 1.0%) of surfactants (Unitol L/20, Ultranex NP/100, Ultratan D, Surfon 3403, Surfon 5409, OMO® washing powder, Ypê® neutral detergent) was evaluated through the colonies growth, germination after temporary exposition to the products and influence of the hydro-lipofilic balance (HLB) in the dispersion and viability of the conidia. Another experiment evaluated the tolerance of the conidia to solar radiation and ultraviolet in laminar flow hood, under the effect of different photoprotector concentrations (Neo Heliopan AV, Neo Heliopan E1000, Oxibenzona, starch and milk) with different exposition timing. Finally, the mortality of D. opuntiae in the nymph stage was verified by using the formulations containing the surfactants and the photoprotectors that demonstrated the best results in the previous experiments. Unitol L/20 and Ultranex NP/100 didn’t show a deleterious effect in the formation of the colonies, while Surfon 5409, Ypê® neutral detergent and OMO® washing powder showed great toxicity to the fungus. There was no interference of Unitol L/20, Ultranex NP/100 and Ultratan D in the conidia germination during the first ten minutes of exposition to the surfactants... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-03-15T14:34:52Z No. of bitstreams: 1 PGCA15MA209.pdf: 754313 bytes, checksum: d222ad27deddfb1802f4b7162c86c21e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-15T14:34:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA209.pdf: 754313 bytes, checksum: d222ad27deddfb1802f4b7162c86c21e (MD5) Previous issue date: 2015-12-03 / FUMDES / Ergotism is a disease caused by ingestion of sclerotia called ergot, which contains alkaloids that act on adrenergic, dopaminergic and serotonergic causing direct effect on blood vessels, smooth muscle and central and autonomic nervous system. The present study describes epidemiological data, clinical signs and lesions of a cattle disease characterized by hyperthermia, tachycardia, tachypnea and injuries in the coronary band of the hoof. Initially cause was attributed to the fungus Claviceps purpurea. Between 2000 and 2014 were reported 13 outbreaks, three distérmica form, three nervous form and seven gangrenous form. However, in five of the seven outbreaks of the gangrenous form, in places where animals grazed there was loads of inflorescences of smut grass (Sporobolus indicus) contaminated by a blackened fungus, classified as Bipolaris australis. The disease was reproduced experimentally by administration of inflorescences of smut grass contaminated by B. australis. For five cattle were administered daily doses of 0.1 g/kg, 0.2 g/kg, 0.2 g/Kg, 0.26 g/kg and 0.34 g/kg for 4, 7, 9, 30 and 30 days respectively. After three to seven days of eating contaminated inflorescences four cattle had diarrhea, tachycardia, tachypnea and intermittent hyperthermia. These clinical signs coincided with warmer days and warmer temperatures of the day. An animal showed hyperemia in the coronary band of the hoof and loss of the tail end of the hair. According to results of this study in cattle, can prove that smut grass (Sporobolus indicus) contaminated by B. australis can cause hyperthermia, tachycardia, tachypnea, injuries in the coronary band of the hoof and loss of the tail end of the hair / Ergotismo é uma enfermidade causada pela ingestão de escleródios chamados de ergot, que contém alcalóides que atuam em receptores adrenérgicos, dopaminérgicos e seratoninérgicos causando efeito direto em vasos sanguíneos, musculatura lisa e sistema nervoso central e autônomo. Descrevem-se dados epidemiológicos, sinais clínicos e lesões de uma enfermidade de bovinos caracterizada por hipertermia, taquicardia, taquipneia e ulcerações na coroa do casco de bovinos. Inicialmente a etiologia foi atribuída ao fungo Claviceps purpurea. Entre 2000 e 2014 foram descritos 13 surtos, três da forma distérmica, três da forma nervosa e sete da forma gangrenosa. Porém, em cinco destes sete surtos, nos locais onde esses animais pastoreavam havia grande quantidade de inflorescências de Sporobolus indicus conhecido como “capim-mourão”, contaminadas por um fungo com coloração enegrecida, identificado como Bipolaris australis. A enfermidade foi reproduzida experimentalmente em cinco bovinos com a administração destas inflorescências. Os bovinos em experimentação receberam respectivamente doses diárias de 0,1g/kg, 0,2g/kg, 0,2g/kg, 0,26g/kg e 0,34g/kg por um período de 4, 7, 9, 30 e 30 dias. Após três a sete dias de ingestão das inflorescências contaminadas, quatro dos cinco animais apresentaram diarreia e manifestaram taquicardia, taquipneia e hipertermia em algum período durante a ingestão. Estes sinais coincidiram com os dias mais quentes deste período. Um animal manifestou hiperemia na coroa do casco e perda de pêlos da extremidade da cauda. Baseado na reprodução experimental é possível afirmar que o capim Sporobolus indicus contaminado pelo fungo Bipolaris australis é capaz de causar hipertermia, taquicardia, taquipneia, hiperemia na coroa do casco e perda de pêlos da extremidade da cauda

Orientador: Antônio Carlos Monteiro / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Lúcia Padilha Cury Thomaz de Aquino / Banca: Inajá Marchizeli Wenzel / Banca: Fernando Antonio de Ávila / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar "in vitro", a ação de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, para larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas não alimentadas de Rhipicephalus sanguineus e para onde as mesmas fases do ciclo de vida do ácaro mantidas alimentadas em cães por meio de câmaras de alimentação coladas no dorso do animal. A ação no ambiente habitado pelo cão foi avaliada por meio de infestações naturais em boxes com todos os estádios do ácaro. Foram usadas suspensões contendo 108 conídios mL-1 de cada isolado. Nos ensaios com as fases não alimentadas os estádios foram imersos nas suspensões dos fungos e no ensaio com de alimentação no cão os diversos estádios do ciclo biológico do carrapato foram imersos ou pulverizados com as suspensões de conídios, e no ensaio do ambiente do cão as suspensões foram pulverizadas em todo o canil. Nos ensaios "in vitro" foram avaliadas a mortalidade de larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas, e no ensaio com alimentação no cão avaliou-se a mortalidade de cada estádio e os indivíduos sobreviventes foram colocados para ingurgitar em coelhos, para avaliação dos estádios subseqüentes do ciclo do carrapato, até se obter novamente a mesma fase em que iniciaram o ciclo. No ensaio do ambiente do cão foi avaliada diariamente a infestação dos animais com as diversas fases do ciclo de vida do ácaro. B. bassiana e M. anisopliae promoveram significativa redução da sobrevivência de todos os estádios não alimentados, deixando claro a atividade patogênica para a fase não alimentada de R. sanguineus. No experimento com a alimentação em cães, B. bassiana promoveu mortalidade de fêmea, mas não houve mortalidade de larvas e ninfas, fato este também observado para M. anisopliae ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work aimed to assess the "in vitro" action of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, for unfed larvae, nymphs and adult male and female of Rhipicephalus sanguineus and for the same stadiums the tick life cycle maintained fed on dogs through feeding cameras fixed on dog's dorsal region. The action on the ambient where the dog lives was also evaluated through natural infestations with all of the stadiums of the acarid. Suspensions containing 108 conidia mL-1 of each isolated were used. In every assay with the unfed phase, the stadiums were immersed in the suspensions of the fungus and in the assays with feeding cameras, all the phases of the biological cycle of the tick were immersed or powdered with the conidial suspension and in the assay in the ambient suspensions were spread powdered in the whole box. In the "in vitro" assays it was evaluated the larvae, nymphs and adult male and female mortality. In the feeding cameras assay, the mortality of each stadium was evaluated and the surviving individuals were put for engorged in rabbits, to evaluate subsequent stadiums of the cycle of the tick, until obtain the same stadium wich was attained at the moment they began the cycle. In the environmental assay it was daily evaluated the infestation of the animals with all the phases of the life cycle of the acarid. B. bassiana and M. anisopliae promoted a significant reduction of the survival rate of all unfed stadiums of the tick what brings a strong evidence of pathogenicicity to unfed phases of R. sanguineus. In the experiment with feeding cameras, B. bassiana promoted female mortality, but mortality of larvae and nymphs were not observed fact this also observed for M. anisopliae. In the environment of the dog naturally infested with the stadiums of R. sanguineus was possible to observe that B. bassiana reduced the number of unfed and engorged larvae in the first week after treatment ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Com o objetivo de avaliar a dependência espacial de Phytophthora nicotianae na cultura da cebola e testar cultivares resistentes ao fungo, vários ensaios foram realizados. O primeiro deles constituiu-se da avaliação de amostras de solo da área experimental em Jaboticabal e outro em área comercial de Monte Alto. Para detectar a presença de P. nicotianae nas amostras de solo, discos de folhas limão Siciliano (Citrus limonum) foram utilizados como "iscas" na suspensão do solo e que posteriormente foram colonizados pelo patógeno. Para isso, distribui-se em recipientes, nessa suspensão 30 discos de 3 mm de diâmetro, que permaneceram flutuando, durante 72 h sob luz fluorescente branca e temperatura ambiente. Na área experimental ao finalizar o primeiro ensaio, foram plantadas 13 cultivares de cebola para testar a resistência ao fungo. Para o experimento seguinte, utilizou-se das amostras de solo da área comercial, distribuindo-as em copos descartáveis para o plantio de mudas de cebola, sendo mantidas em condições de casa de vegetação. O processo de avaliação nesse consistiu da quantificação do número de plantas mortas ao longo do ciclo da cultura. Todos os dados foram submetidos á análise estatística descritiva, geoestatística e Krigagem. Os resultados da área experimental demonstraram uma distribuição agregada, que foi confirmado também pelo índice de dispersão empregado. Para as cultivares testadas, nenhuma se mostrou resistente ao fungo. Na área comercial, a distribuição do fungo demonstrou agregada. Para a avaliação por meio no número de plantas mortas em casa de vegetação, os resultados confirmaram o comportamento observado na área comercial, com um crescente índice de mortalidade nas observações feitas em direção a base... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: With the purpose of evaluating the spatial distribution of Phytophthora nicotianae from onion crop under of soU samples of different planting conditions, as well as testing cultivars for resistance to the fungus, several assays were carried out (or Several assays were carrieo out with the purpose of evaluating the spatial dependence of Phytophthora nicotianae from onion crop in soil samples of different planting conditions, as well as testing cultivars for resistance to the fungus. In the first one, soil samples were obtained from beds for evaluating, while the other one, was made in field conditions with an area. The data obtained were through of number of lemon discs (Citrus limonum), used as "baits" in the soil solution, which were infected with the pathogen. Hence 30 discs (3mm dia meter) punched from lemon leaves were placed on this solution in containers, and kept afloat for 72 hOurs, in white cold light, and at room temperature. When the first assay was completed, 13 onion cultivars were planted in the bedding area, in order to be tested for resistance to the fungus. In the next experiment, onion seedlings were planted containing soi! samples from the second assay, in a greenhouse. The evaluation process of this experiment was based on the quantification of dead plants throughout the cycle. Descriptive Statistics, Geostatistics and Kriging were used to analyze ali the data. Results for the beds showed a random distribution, which was also confirmed by the dispersion rate used. None of the cultivars tested were resistant. In soil field, the fungus exhibited an aggregated distribution. Results of the evaluation were based by number of dead plants in the greenhouse supported the behavior observed in field with the death rate increasing towards the samples obtained near of center pivot. The methodology adopted in this study allowed... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Modesto Barreto / Coorientador: José Carlos Barbosa / Banca: Érika Auxiliadora Giacheto Scaloppi / Banca: César Júnior Bueno / Banca: Margarete Camargo / Banca: Rita de Cassia Panizzi / Doutor

Orientador: Antonio Batista Filho / Banca: Carlos Frederico Wilcken / Banca: Silvia Renata Siciliano Wilcken / Banca: Laerte Antonio Machado / Banca: Inajá Marchizeli Wenzel / Resumo: Nematóides entomopatogênicos (NEPs) dos gêneros Heterorhabditis e Steinernema vem sendo utilizados para o controle de mosca-dos-fungos em diversos países. Esse estudo teve por objetivo avaliar diferentes isolados de NEPs, contra larvas de Bradysia mabiusi, em condições de laboratório e casa de vegetação. Nos testes de seleção de isolados, o nematóide Heterorhabditis indica apresentou melhor desempenho comparado a todos os demais isolados, proporcionando mortalidade do inseto de até 98%. Para o estudo em casa de vegetação, avaliou-se o efeito dos nematóides entomopatogênicos Heterorhabditis indica e Steinernema feltiae, nas dosagens de 10, 50 e 100 JI/cm2, em cultivo protegido de Chrysanthemum sp. Foram realizados 3 experimentos. Houve diferença significativa entre os tratamentos somente no terceiro teste, entretanto, nos três testes os nematóides demonstraram uma tendência de redução na população do inseto, em função do aumento das dosagens, o que sugere o efeito dos agentes no controle do inseto. Da mesma forma, em todos os testes, o nematóide H. indica apresentou maior redução na população da mosca-dos-fungos que o S. feltiae, confirmando sua maior eficiência com níveis de controle variando de 6 a 67,5% no primeiro ensaio, de 17 a 77,5% no segundo, e de 62,5 a 78,5% no terceiro. Os resultados revelam que H. indica apresenta potencial de uso para o controle da mosca-dos-fungos. / Abstract: Entomopathogenic nematodes (EPNs) of the genus Heterorhabditis and Steinernema have been use against the fungus gnat in several countries. This study aimed to evaluate different strains of EPNs against larvae of Bradysia mabiusi, in laboratory and greenhouse conditions. At the screening of EPNs, the nematode H. indica showed better performance compared to the other nematodes, providing up to 98% mortality of the insect. To the study in greenhouse, evaluated the effects of the entomopathogenic nematodes Heterorhabditis indica e Steinernema feltiae, at dosage of 10, 50 and 100 IJ/cm2 in commercial growth of Chrysanthemum sp., in greenhouse conditions. Three experiments were accomplished. There were significative difference among the treatments only for the third experiment, mean while, in the three tests, the nematodes showed a tendency of reduction on the insect population according to the dosage increase, which suggest the effect of the agents on the insect control. In addition, in all the tests, the nematode H. indica showed higher reduction on the insect population compared to the S. feltiae, confirming its higher efficiency with control levels ranging from 6 to 67,5% in the first test, from 17 to 77,5% in the second, and from 62,5 to 78,5% in the third. The data show that H. indica has potential use for the controlling of the fungus gnat. / Doutor

Descrição: Bola fúngica é definida como uma macrocolônia composta por emaranhado de hifas, células inflamatórias, fibrina, muco e fragmentos de tecidos. Aspergillus fumigatus é o agente etiológico mais frequente, responsável por cerca de 90% dos casos, seguido de A niger e A flavus, respectivamente. O antecedente mais comum para o desenvolvimento da bola fúngica é cavidade secundária à tuberculose e a manifestação clínica mais presente e causadora de óbitos nesses pacientes é a hemoptise. Objetivos: Investigar as espécies de Aspergillus causadoras de bola fúngica pulmonar, determinar as condições predisponentes e/ou associadas e a comprovação laboratorial para o diagnóstico etiológico e observar a resposta as diferentes medidas terapêuticas dos pacientes com bola fúngica pulmonar. Delineamento: Foram analisados retrospectivamente, prontuários de pacientes para a caracterização da bola fúngica pulmonar por Aspergillus. Local do estudo: Laboratório de Micologia da Santa Casa Complexo Hospitalar, no período de 1980 a 2009. Pacientes e métodos: Foram incluídos neste estudo todos os pacientes com diagnóstico de bola fúngica pulmonar aspergilar de uma população de 750 casos de aspergilose, de 1980 a 2009. Os critérios para o diagnóstico foram os seguintes: isolamento da espécie de Aspergillus proveniente do material de cavidade pulmonar associado à imagem radiográfica compatível; isolamento da espécie de Aspergillus em outros materiais do trato respiratório, excluindo material da cavidade, associado ou não ao exame direto positivo; imunodifusão radial dupla positiva para Aspergillus associada ao exame de imagem compatível. Resultados: Foram incluídos 391 pacientes com bola fúngica pulmonar aspergilar, a idade variou de 18-78 anos, sendo 67,3% do gênero masculino. O diagnóstico foi baseado nos achados clínicos, radiológicos e laboratoriais. Em todos os pacientes foram detectados achados característicos de bola fúngica tanto no radiograma quanto na tomografia de tórax e bola fúngica complexa foi detectado em 97,4% da casuística. Tuberculose curada foi a principal condição predisponente (89%). Hemoptise foi manifestação clínica mais frequente (89%). A espécie A. fumigatus foi o agente etiológico mais isolado, 89,3% dos casos, seguido de A niger 7,1% e menos frequente A flavus 3,3%. A positividade no cultivo foi de 84,7% nos espécimes clínicos e a imunodifusão radial dupla de 81,6% dos pacientes. A principal medida terapêutica foi ressecção cirúrgica apresentando desfecho favorável em 88,3%. A eliminação da bola fúngica por lise espontânea ocorreu em 2,3% dos casos. Mortalidade foi atribuída à cirurgia e a hemoptise em 32,3 e 13,8%, respectivamente. Conclusões: Tuberculose curada e hemoptise é a primeira hipótese diagnóstica de bola fúngica pulmonar. O sinal radiológico indicativo de bola fúngica é cavidade contendo produto patológico com densidade de partes moles, espessamento da parede da cavidade e da pleura circunjacente. A detecção de anticorpos séricos por imunodifusão radial dupla, e o cultivo de espécimes do trato respiratório inferior determinaram A. fumigatus como o principal agente etiológico da bola fúngica pulmonar. A medida terapêutica mais utilizada nos pacientes do presente estudo foi ressecção cirúrgica, e a metade da ocorrência de óbito esteve presente nestes casos. / Background: Pulmonary fungus ball is defined as a conglomeration, within a cavity of intertwined Aspergillus hyphae, inflammatory cells, fibrin, mucus and cellular debris. Aspergillus fumigatus is the most frequent etiologic agent, about 90% of cases, followed by A niger and A flavus, respectively. The most common condiction to develop fungus ball is residual cavities of healed tuberculosis, and the most prevalent clinical manifestation and cause of death is hemoptysis in these patients. Objectives: To investigate the species of Aspergillus causing pulmonary fungus ball, we compared underlying conditions, laboratory evidence to the etiological diagnosis, and response of the different therapy, and outcome of patients with pulmonary fungus ball. Design: We analyzed retrospectively the medical records of patients for the characterization of pulmonary Aspergillus fungus ball. Settings: A university-based tertiary care hospital in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Patients and methods: The study included patients diagnosed with pulmonary Aspergillus fungus ball in a population of 750 cases of aspergillosis, from 1980 to 2009. The criteria for the diagnosis were: isolation of Aspergillus species from the material of the pulmonary cavity associated with the compatible radiographic image; isolation of Aspergillus species from other materials of the respiratory tract, excluding cavity material, with or without direct examination positive; double immunodiffusion positive for Aspergillus associated with compatible image. Results: We included 391 patients with pulmonary Aspergillus fungus ball, age ranged from 18 to 78 years, 67.3% were male. The diagnosis was based on clinical, radiological, and laboratory findings. In all patients we detected the characteristic findings of fungal ball, on X-ray and tomography; and complex fungal ball, on their radiological appearance, was detected in 97.4% of cases. Healed tuberculosis was the commonest pre-existing disease (89%). Hemoptysis was the major symptoms (89%). The species A. fumigatus was the most common etiologic agent, 89.3% of cases, followed by 7.1% A niger and A flavus less frequent in 3.3%. Culture was positive in 84.7% specimes, and immunodiffusion in 81.6% patients. The main treatment was surgical resection in 88.3% that had a favorable outcome. Spontaneous lysis was obtained in 2.3% of cases. Mortality was attributed to the surgery and hemoptysis in 32.3 and 13.8%, respectively. Conclusions: Patient with healed tuberculosis and hemoptysis is the first hypothesis diagnostic fungus ball. The most frequent radiological signs were rounded dense opacity surrounded with a halo of air in a thick cavity wall and thickening of the pleura over cavity. The detection of serum antibodies by double immunodiffusion, and the cultive of the lower respiratory tract specimens determined A. fumigatus as the main agent of pulmonary fungal ball. The detection of serum antibodies by double immunodiffusion, and the cultivation of the lower respiratory tract specimens determined A. fumigatus as the main agent of pulmonary fungal ball. The measure most commonly used therapy in patients of this study was to surgical resection, and half of the patients who died were in these cases.

Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2018-03-05T19:50:05Z No. of bitstreams: 2 Debora_Dudek2017.pdf: 1099947 bytes, checksum: eb7356b2bdfdfe7d3d4da8e48d12d05c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T19:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Debora_Dudek2017.pdf: 1099947 bytes, checksum: eb7356b2bdfdfe7d3d4da8e48d12d05c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Second generation bioethanol employs lignocellulosic materials in its preparation. One of the steps for these materials degradation utilizes cellulases produced by microorganisms. Among these, Trichoderma reesei fungus is one of the main cellulases producers used in industry. This fungus genetic modification can lead to enzimes production optimization, reducing cost and improving biofuels manufacture. Thus, the present work objective was delete the sequence encoding zinc fingers motifs of cellulase ACE1repressor transcription factor from T. reesei RUT-C30 fungus, seeking enzymatic production optimization. In primers construction for amplification ACE1 regions 5’ and 3' and the hph selection marker, which confers hygromycin B resistance, Joint Genome Institute - JGI site and the BioEdit ® program were used. The deletion cassette with pRS426 vector construction was mediated by Saccharomyces cerevisiae SC9721 yeast. After the cassette construction, T. reesei RUT-C30 transformation was made by protoplast and this transformation confirmation was effected by part of the hph using hphNestF and hphNestR amplification primers. After transformation with mutants obtained, endoglucanase, exoglucanase and total cellulase activity was quantified with carboxymethylcellulose substrates (CMC), microcrystalline cellulose (Avicel®) and Whatman paper filter (PF), respectively. The enzymatic production and biomass hydrolysis efficiency were performed comparing RUT-C30 strain for mutants. After deletion cassette construction, a 3501 bp fragment amplification confirmed the cassette formation. Posteriorly, RUT-C30 strain transformation, a 989 bp amplification was observed, confirming the 3 mutants target sequence deletion. With cellulase activity assay, 3 transformed strain showed higher enzymatic production when compared to RUT-C30 strain. In this comparison, a significant statistical difference was observed of RUT-C30Δace1-1 strain with Avicel® and PF (p <0.001) CMC (p <0.01), RUT-C30Δace1-2 strain with CMC (p<0,01) e PF (p<0,05), and RUT-C30Δace1-3 strain with Avicel (p<0,001), CMC and PF (p<0,01). The mutants also showed greater efficiency in biomass hydrolysis, with release sugar increase between 21 and 42%. Based on this study, mutants are promising for most efficient and viable ethanol production. Nevertheless, additional tests must be carried out to better understand these fungi applicability in the industrial level. / O bioetanol de segunda geração emprega materiais lignocelulósicos na sua elaboração. Uma das etapas para a degradação destes materiais utiliza celulases produzidas por microrganismos. Dentre estes, o fungo Trichoderma reesei é um dos principais produtores de celulases utilizadas na indústria. A modificação genética deste fungo pode levar à otimização da produção de suas enzimas, diminuindo o custo e melhorando a fabricação de biocombustíveis. Desta forma, o objetivo do trabalho foi deletar a região dos motivos dedos de zinco no gene que codifica o fator de transcrição repressor de celulase ACE1 do fungo T. reesei RUT-C30, buscando a otimização na produção enzimática. Na construção dos primers para amplificação das regiões 5’ e 3’ de ace1 e do marcador de seleção hph, que confere resistência à higromicina B, utilizou-se o site Joint Genome Institute – JGI e o programa BioEdit®. A construção do cassete de deleção com o vetor pRS426 foi mediado pela levedura Saccharomyces cerevisiae SC9721. Posteriormente, a construção do cassete, a transformação de T. reesei RUT-C30 foi realizada através de protoplasto e a confirmação desta transformação foi efetuada por amplificação de parte do hph utilizando os primers hphNestF e hphNestR. Após a transformação, com os mutantes obtidos, a atividade de endoglucanase, exoglucanase e celulase total foi quantificada com os substratos carboximetilcelulose (CMC), celulose microcristalina (Avicel®) e papel de filtro Whatman (PF), respectivamente. A produção enzimática e a eficiência na hidrólise da biomassa foram realizadas comparando-se a linhagem RUT-C30 aos mutantes. Após a construção do cassete de deleção, a amplificação de um fragmento de 3501 pb confirmou a formação do cassete. E, posteriormente à transformação da linhagem RUT-C30, o amplificado de 989 pb foi observado, confirmando a deleção da sequência alvo em 3 mutantes. Com o ensaio de atividade de celulases, as 3 linhagens transformadas mostraram maior produção enzimática quando comparadas à linhagem RUT-C30. Nessa comparação, foi observada diferença estatística significativa da linhagem RUT-C30Δace1-1 com Avicel® e PF (p<0,001), da linhagem RUTC30Δace1- 2 com CMC (p<0,01) e PF (p<0,05) e da linhagem RUT-C30Δace1-3 com Avicel (p<0,001), CMC e PF (p<0,01). Os mutantes também apresentaram maior eficiência na hidrólise da biomassa, com aumento na liberação de açúcar entre 21 e 42%. Com base nos dados deste estudo, os mutantes apresentam-se promissores para a produção mais eficiente e viável de etanol. Apesar disso, testes adicionais devem ser realizados para melhor entendimento da aplicabilidade destes fungos a nível industrial.

O meloeiro é uma cultura de relevância econômica no Brasil, principalmente na região Nordeste, onde grande parte da produção é exportada. Entre os fatores limitantes da cultura está o oídio, que pode ser controlado através do uso de variedades resistentes. No entanto, para que isto seja possível, é necessário que se tenha conhecimento sobre qual é o agente causal em ocorrência na região de produção e quais são as fontes de inóculo desta doença. O presente trabalho teve como objetivos o levantamento das espécies e raças de oídio com ênfase na região Nordeste, a verificação da patogenicidade de isolados provenientes de outras cucurbitáceas em relação ao meloeiro, a avaliação de germoplasma de meloeiro para resistência a P. xanthii raça 2 (francesa), a proposição de um sistema de cultivares de meloeiro para caracterização de raças de P. xanthii e a otimização de um protocolo de extração de DNA de P. xanthii. No total de 65 isolados analisados, observou-se que Podosphaera xanthii foi a única espécie encontrada entre as amostras. Dentre estas, as raças 1 e 2 foram as prevalentes. Também foram observadas as raças 0, 3, 4 e 5 em menor freqüência. As culturas de abóbora, abobrinha, melancia e pepino apresentaram-se como fontes de inóculo de oídio para o meloeiro, uma vez que todos os isolados provenientes destas culturas colonizaram discos foliares de meloeiro. Em geral, os genótipos de melão cultivados comercialmente no Brasil apresentaram-se resistentes a raça 2 (francesa) de P. xanthii. A partir da observação das raças ocorrentes no país e de dados da literatura, propôs-se um sistema de cultivares de meloeiro diferenciadoras para raças de P. xanthii a ser empregado em monitoramentos do patógeno. Um protocolo para extração de DNA de P. xanthii também foi obtido com a finalidade de facilitar estudos genéticos sobre o patógeno com base em marcadores moleculares. / Melon is an economically important crop in Brazil, mainly in the north-east region, where most of the production is exported. Among the limiting factors of the crop is powdery mildew, which can be controled by using resistant varieties. However, to make it possible, it is necessary to know the causal agent in occurrence in the production region and what are the inoculum sources of this disease. The present work had as objectives the survey of the powdery mildew species and races with emphasis in the north-east region; the verification of the strains pathogenicity deriving from others cucurbits in melon; the evaluation of melon germplasm to Podosphaera xanthii race 2 (french) resistance; the proposition of a system of melon cultivars to characterize the P. xanthii races and the optimization of a protocol to P. xanthii DNA extraction. Over all of the 65 strains analysed, it was observed that P. xanthii was the unique specie encountered between the samples. Within that, the races 1 and 2 were prevalents. Also were observed the races 0, 3, 4 and 5 at low frequency. Squash, zucchini, watermelon and cucumber crops showed up like inoculum sources of powdery mildew to melon. Usually, the melon genotypes commercially cultivated in Brazil showed up resistant to P. xanthii race 2 (french). After the observation of races in occurrence and datas from literature, a system of melon cultivars was proposed to differentiate P. xanthii races to be used in surveys of the pathogen. A protocol to extraction P. xanthii DNA also was proposed with the purpose to facility genetics studies about the pathogen basis on molecular markers.

Foi realizado um estudo na cultura do algodoeiro (Gossypium hirsutum L. var latifolium Hutch), no ano agrícola 2002/2003, na Fazenda Areão, unidade experimental da Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, USP/ESALQ, localizada no município de Piracicaba, SP, com o objetivo de avaliar o comportamento e evolução da Ramulose do algodoeiro, doença causada pelo fungo Colletotrichum gossypii var cephalosporioides Costa em sistema de semeadura com e sem palha de milheto (Pennisetum glaucum L.), nas cultivares IAC 23 (resistente à Ramulose) e Makina (suscetível à Ramulose). Foram avaliadas também as interações entre o sistema de semeadura com e sem palha na produção de algodão em caroço, produtividade da cultura, caracteres agronômicos de laboratório e características tecnológicas das fibras. O delineamento experimental adotado foi o de parcelas subdivididas (split-plot), utilizando-se 4 blocos alternados entre semeadura convencional e semeadura sobre a palhada de milheto (parcelas), cada um com 8 subparcelas, totalizando 32 subparcelas. Aos 34 dias após a emergência (DAE) o patógeno foi inoculado artificialmente com a suspensão de inóculo pulverizada no terço superior das plantas através de equipamento de Co2. A doença foi avaliada através de escala de notas (1 a 5), e os resultados permitiram concluir que a quando as condições meteorológicas são favoráveis ao patógeno, a presença da palha na superfície do solo influencia negativamente no crescimento da doença na cultivar suscetível. A cultivar resistente IAC 23 retoma o crescimento vegetativo quando as condições meteorológicas são desfavoráveis ao patógeno e na cultivar Makina, sob condições favoráveis, a doença cresce, mas continua estável quando as condições se tornam desfavoráveis ao patógeno. A palha não afetou a produção de algodão em caroço, a produtividade, os caracteres agronômicos de laboratório e nem as características tecnológicas das fibras. Quando as condições meteorológicas são típicas, o Sistema de Plantio Direto desfavorece o desenvolvimento da doença, podendo ocorrer o inverso quando as condições meteorológicas forem atípicas / A study in the culture of cotton plant (Gossypium hirsutum L. var latifolium Hutch), was conducted in the agricultural year of 2002/2003, at the experimental unity of Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", USP/Esalq, located in the city of Piracicaba, SP, with the objective to evaluate the behavior and evolution of the Ramulosis of the cotton plant, disease caused by the fungus Colletotrichum gossypii var cephalosporioides Costa in the system of sowing with and without cover residue (straw), when cultivar IAC 23 (resistant to Ramulosis) and Makina (susceptible to Ramulosis). It has also been evaluated the interactions between the the system of sowing with and without the cover residues (straw) in the production of cotton and yield of the culture, agronomics characters of laboratory,and the characteristics of the fibers. The experimental delineation adopted split-splot, using 4 blocks alternated between conventional sowing on the cover residue (parcels), each one with 8 suparcels, totalizing 32 sub parcels. To the 34 days after the emergency (DAE) the fungus was inoculated artificially in the plants. The disease was evaluated through grading scales (1 to 5), and the results allowed to conclude that he presence of the cover residue (straw) in the surface of the soil influence negatively to the growth of the disease only when the meteorological conditions are favorable to the development of the pathogenic, and depending on the used cultivar. When cultivar resistant IAC 23 it presented greater sensitivity to meteorological conditions retaking the vegetative development with healthy sprouts, when the meteorological conditions had been unfavorable to the growth of the disease, while that in cultivar susceptible Makina the disease if kept steady when the conditions had been unfavorable. The cover residue (straw) did not affect the production of the cotton, neither the yield, the agronomic characters of laboratory, or the characteristics of the fibers.

O fungo filamentoso Trichoderma reesei é caracteristicamente reconhecido pela produção de celulases e hemicelulases, que lhe permitem utilizar uma ampla variedade de polissacarídeos como fonte de carbono. Neste trabalho, descrevemos a caracterização de dois genes de T. reesei, Trhxt1 e Trhxt2, que codificam proteínas com alta similaridade a transportadores de glicose de vários microorganismos. Os dois genes foram identificados em um banco de dados de ESTs de T. reesei. A análise computacional de Trhxt1 e Trhxt2 indica que ambos fazem parte da major facilitator superfamily (MFS), apresentando, tipicamente, 12 segmentos transmembrânicos. A expressão de Trhxt1 ocorre apenas em baixos níveis de glicose(&#8776; 100 &#181;mol 1-1), enquanto a de Trhxt2 parece ocorrer de forma constitutiva, independentemente da fonte de carbono. Em baixas concentrações de oxigênio, a expressão de Trhxt1 é induzida e a de Trhxt2, reprimida. O sistema de transporte em T. reesei apresenta um componente de afinidade muito alta por glicose (Km &#8776; 20 &#181;mol 1-1) semelhante ao de outros fungos filamentosos. Dados sobre o transporte de glicose em uma cepa mutante &#916;Trhxt1 indicam que o gene Trhxt1 está envolvido com o transporte em baixos níveis de glicose (&#8804; 100 &#181;mol 1-1) que correspondem, provavelmente, aos valores encontrados no solo, o habitat natural de T. reesei.. Interessantemente, a indução do sistema de celulases de T. reesei por celulose está retardada no mutante &#916;Trhxt1, o que sugere a importância do transporte de glicose na expressão dos genes das celulases. Finalmente, além de descrever os primeiros genes de transportadores de glicose em T. reesei, esperamos que este trabalho possa contribuir para o preenchimento de uma lacuna em relação ao transporte de açúcares em fungos filamentosos em geral. / The filamentous fungus Trichoderma reesei is a natural soil inhabitant capable of metabolizing a vast number of polysaccharide substrates. In this work, we describe two genes of T. reesei, named Trhxt1 and Trhxt2, which code for proteins with significant similarities to glucose transporters from other fungi. These genes were identified in an EST database of T. reesei. Sequence analysis of TrHXT1 and TrHXT2 revealed 12 putative transmembrane domains and several other characteristic motifs found in members of the major facilitator superfamily (MFS). Trhxt1 is transcriptionally induced only by low levels of glucose(&#8776; 100 &#181;mol 1-1), while Trhxt2 expressionis independent of both glucose concentration and carbon source. We also show that Trhxt1 expression is enhanced when cells are exposured to low oxygen levels; in contrast, Trhxt2 expression seems to be repressed at these conditions. Glucose transport in T. reesei is apparently mediated by a multicomponent uptake system, in which the high-affiníty component has a Km of approximately 20 &#181;mol 1-1. This low Km value is similar to the values reported for glucose uptake by other filamentous fungi. Kinetics of glucose transport in a T. reesei &#916;Trhxt1 strain suggests that Trhxt1 is involved in glucose uptake in conditions of low glucose (&#8804; 100 &#181;mol 1-1), which are most probably found in the soil, a low-nutrient environment. Interestingly, índuction ofthe T. reesei cellulase system by cellulose ís significantly delayed in the &#916;Trhxt1 mutant, suggesting that glucose transport may be important to the mechanisms of expression of the cellulase genes. Finally, we hope that this work may be helpful to provide a better understanding of sugar uptake in filamentous fungi, for which there is little information available.