O colostro bovino contém fatores imunológicos, como imunoglobulinas, leucócitos e citocinas, absorvidos pela mucosa intestinal do neonato até 48 horas de vida, no entanto, pouco se conhece sobre a função de alguns desses componentes, como as citocinas, participantes da resposta imune inata e adaptativa. Acredita-se que estas substâncias possuem papel importante na imunidade dos neonatos nos seus primeiros dias de vida. Assim, os objetivos específicos desta pesquisa foram: determinar as concentrações das citocinas IL-1&#946, IL-6, IFN-γ e TNF-α no soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa; verificar a liberação de citocinas pelas células mononucleares do colostro e sangue bovino "in vitro" antes e após a estimulação com Escherichia coli enterotoxigênica (ECET); avaliar a transferência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α do colostro aos bezerros neonatos, por meio da determinação das concentrações destas citocinas no soro sanguíneo dos bezerros, durante os quinze primeiros dias de vida. O trabalho foi realizado em duas etapas, em duas propriedades distintas: (1) avaliação do soro sanguíneo e colostro de primeira ordenha proveniente de 22 fêmeas; (2) avaliação das citocinas sanguíneas de 11 bezerros, antes e após a mamada de colostro. Nesta pesquisa foi possível determinar as medianas da concentração de citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no colostro bovino e soro sanguíneo, correspondente a 70,5 e 41,5; 86,1 e 13,5; 41 e 57,9; 139,9 e 20,8 pg/mL, respectivamente, verificando menores valores de IFN-γ no colostro e TNF-α e IL-6 no soro sanguíneo. Observou-se diferença entre as citocinas no colostro e soro sanguíneo para a TNF-α. Observou-se produção de citocinas pelas células do colostro e sangue das mães mediante liberação espontânea e pela ECET com tendência ao aumento dessa produção entre os períodos de incubação celular e pela estimulação com ECET. A avaliação do soro dos bezerros mostrou ausência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α antes da ingestão de colostro, que atingiram pico após 48 horas de vida. Os valores médios das concentrações de citocinas presentes no soro das vacas e novilhas foram de 98,3; 88,4; 53,5 e 235,9 pg/mL e 144,5; 94,5; 83,9 e 116,2 pg/mL, para IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α, respectivamente. Os valores médios das concentrações de citocinas (pg/mL) presentes no colostro das vacas e novilhas foram de 97,4; 21,3; 143,3 e 35,1 pg/mL e 69,5; 6,4; 51,9 e 16,32 pg/mL, para as citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α, respectivamente. Quando se comparou os dois grupos analisados verificou-se que os valores médios de IFN-γ e TNF-α foram significativamente maiores nas vacas. Assim, com base nos resultados desta pesquisa foi possível: (a) determinar a concentração de citocinas do soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas; (b) verificar a produção de citocinas pelas células do soro e colostro das vacas, verificando-se diferentes perfis nestas duas regiões; (c) verificar a absorção das citocinas do colostro pelo neonato bovino; (d) verificar que as vacas possuem maiores concentrações de citocinas IFN-γ e TNF-α no colostro, quando comparadas às novilhas; (e) não há diferenças entre a concentração das citocinas do colostro obtidas em diferentes quartos mamários. / Bovine colostrum contains immunological factors, such as immunoglobulins, leukocytes and cytokines, which are absorbed by the intestinal mucous membrane of the neonate up to 48 hours of life. However, little is known about the function of some of these components, such as cytokines, which take part in innate and adaptive immune responses. It is believed that these substances have important roles in neonate immunity on their first days of life. Therefore, the specific objectives of this study were: to determine the concentration of cytokines IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α in serum and colostrum of Holstein cows; to assess the in vitro release of cytokines by mononuclear cells of colostrum and blood before and after stimulation with enterotoxigenic Escherichia coli (ECET); to evaluate IL-1β, IL-6 and TNF-α transfer from colostrum to neonate calves by determining cytokine concentrations in calf blood during the first 15 days of life. The study was carried out in two stages, in different farms: (1) evaluation of blood and first milking colostrum in 22 females; (2) evaluation of blood cytokines of 11 calves, before and after colostrum intake. In this study, it was possible to determine the medians of IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α concentration in blood and colostrum as equal to 70.5 and 41.5; 86.1 and 13.5; 41 and 57.9; 139.9 and 20.8 pg/mL, respectively. The lowest values of IFN-γ were observed in colostrum, and of TNF-α and IL-6, in serum. TNF-α concentration was different in serum and in blood. It was observed colostrum and blood cells of the cows produced cytokines spontaneously and by means of ECET, with a tendency to increase production in periods of cell incubation and stimulation with ECET. Evaluation of calf serum showed absence of cytokines IL-1β, IL-6 and TNF-α before colostrum ingestion, and these cytokines reached a peak after 48 hours of life. Mean values for cytokine concentration in the serum of cows and heifers were 98.3; 88.4; 53.5 and 235.9 pg/mL, and 144.5; 94.5; 83.9 and 116.2 pg/mL, for IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α, respectively. Mean values for cytokine concentration in the colostrum of cows and heifers were 97.4; 21.3; 143.3 and 35.1 pg/mL, and 69.5; 6.4; 51.9 and 16.32 pg/mL, for IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α, respectively. When the two groups were analyzed, it was observed that mean de IFN-γ and TNF-α were significantly greater in the cows. Thus, based on the results of this study, it was possible to: (a) determine the concentration of cytokines in serum and colostrum of cows; (b) assess cytokine production by cells of cow serum and colostrum, observing different profiles in the two samples; (c) observe cytokine absorption from colostrum by the calves; (d) assess that cows show greater concentrations of IFN-γ and TNF-α in the colostrum, when compared with heifers; (e) that there are no differences between cytokine concentrations observed in the different quarters.

O colostro bovino contém fatores imunológicos, como imunoglobulinas, leucócitos e citocinas, absorvidos pela mucosa intestinal do neonato até 48 horas de vida, no entanto, pouco se conhece sobre a função de alguns desses componentes, como as citocinas, participantes da resposta imune inata e adaptativa. Acredita-se que estas substâncias possuem papel importante na imunidade dos neonatos nos seus primeiros dias de vida. Assim, os objetivos específicos desta pesquisa foram: determinar as concentrações das citocinas IL-1&#946, IL-6, IFN-γ e TNF-α no soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa; verificar a liberação de citocinas pelas células mononucleares do colostro e sangue bovino "in vitro" antes e após a estimulação com Escherichia coli enterotoxigênica (ECET); avaliar a transferência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α do colostro aos bezerros neonatos, por meio da determinação das concentrações destas citocinas no soro sanguíneo dos bezerros, durante os quinze primeiros dias de vida. O trabalho foi realizado em duas etapas, em duas propriedades distintas: (1) avaliação do soro sanguíneo e colostro de primeira ordenha proveniente de 22 fêmeas; (2) avaliação das citocinas sanguíneas de 11 bezerros, antes e após a mamada de colostro. Nesta pesquisa foi possível determinar as medianas da concentração de citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no colostro bovino e soro sanguíneo, correspondente a 70,5 e 41,5; 86,1 e 13,5; 41 e 57,9; 139,9 e 20,8 pg/mL, respectivamente, verificando menores valores de IFN-γ no colostro e TNF-α e IL-6 no soro sanguíneo. Observou-se diferença entre as citocinas no colostro e soro sanguíneo para a TNF-α. Observou-se produção de citocinas pelas células do colostro e sangue das mães mediante liberação espontânea e pela ECET com tendência ao aumento dessa produção entre os períodos de incubação celular e pela estimulação com ECET. A avaliação do soro dos bezerros mostrou ausência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α antes da ingestão de colostro, que atingiram pico após 48 horas de vida. Os valores médios das concentrações de citocinas presentes no soro das vacas e novilhas foram de 98,3; 88,4; 53,5 e 235,9 pg/mL e 144,5; 94,5; 83,9 e 116,2 pg/mL, para IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α, respectivamente. Os valores médios das concentrações de citocinas (pg/mL) presentes no colostro das vacas e novilhas foram de 97,4; 21,3; 143,3 e 35,1 pg/mL e 69,5; 6,4; 51,9 e 16,32 pg/mL, para as citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α, respectivamente. Quando se comparou os dois grupos analisados verificou-se que os valores médios de IFN-γ e TNF-α foram significativamente maiores nas vacas. Assim, com base nos resultados desta pesquisa foi possível: (a) determinar a concentração de citocinas do soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas; (b) verificar a produção de citocinas pelas células do soro e colostro das vacas, verificando-se diferentes perfis nestas duas regiões; (c) verificar a absorção das citocinas do colostro pelo neonato bovino; (d) verificar que as vacas possuem maiores concentrações de citocinas IFN-γ e TNF-α no colostro, quando comparadas às novilhas; (e) não há diferenças entre a concentração das citocinas do colostro obtidas em diferentes quartos mamários. / Bovine colostrum contains immunological factors, such as immunoglobulins, leukocytes and cytokines, which are absorbed by the intestinal mucous membrane of the neonate up to 48 hours of life. However, little is known about the function of some of these components, such as cytokines, which take part in innate and adaptive immune responses. It is believed that these substances have important roles in neonate immunity on their first days of life. Therefore, the specific objectives of this study were: to determine the concentration of cytokines IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α in serum and colostrum of Holstein cows; to assess the in vitro release of cytokines by mononuclear cells of colostrum and blood before and after stimulation with enterotoxigenic Escherichia coli (ECET); to evaluate IL-1β, IL-6 and TNF-α transfer from colostrum to neonate calves by determining cytokine concentrations in calf blood during the first 15 days of life. The study was carried out in two stages, in different farms: (1) evaluation of blood and first milking colostrum in 22 females; (2) evaluation of blood cytokines of 11 calves, before and after colostrum intake. In this study, it was possible to determine the medians of IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α concentration in blood and colostrum as equal to 70.5 and 41.5; 86.1 and 13.5; 41 and 57.9; 139.9 and 20.8 pg/mL, respectively. The lowest values of IFN-γ were observed in colostrum, and of TNF-α and IL-6, in serum. TNF-α concentration was different in serum and in blood. It was observed colostrum and blood cells of the cows produced cytokines spontaneously and by means of ECET, with a tendency to increase production in periods of cell incubation and stimulation with ECET. Evaluation of calf serum showed absence of cytokines IL-1β, IL-6 and TNF-α before colostrum ingestion, and these cytokines reached a peak after 48 hours of life. Mean values for cytokine concentration in the serum of cows and heifers were 98.3; 88.4; 53.5 and 235.9 pg/mL, and 144.5; 94.5; 83.9 and 116.2 pg/mL, for IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α, respectively. Mean values for cytokine concentration in the colostrum of cows and heifers were 97.4; 21.3; 143.3 and 35.1 pg/mL, and 69.5; 6.4; 51.9 and 16.32 pg/mL, for IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α, respectively. When the two groups were analyzed, it was observed that mean de IFN-γ and TNF-α were significantly greater in the cows. Thus, based on the results of this study, it was possible to: (a) determine the concentration of cytokines in serum and colostrum of cows; (b) assess cytokine production by cells of cow serum and colostrum, observing different profiles in the two samples; (c) observe cytokine absorption from colostrum by the calves; (d) assess that cows show greater concentrations of IFN-γ and TNF-α in the colostrum, when compared with heifers; (e) that there are no differences between cytokine concentrations observed in the different quarters.

O formaldeído (FA) é um poluente ambiental gerado pela indústria, originando-se também pela queima de tabaco, gasolina, álcool e GLP. É irritante de vias aéreas; a exposição ao FA pode contribuir para mediar a inflamação alérgica pulmonar (IAP) a outros antígenos. Neste estudo analisamos o estado funcional de fagócitos do pulmão e da medula óssea de ratos Wistar machos após inalação de FA (1%, 90 min/dia, 3 dias) e a seguir submetidos a IAP (sensibilizados e desafiados com ovoalbumina), bem como a expressão de moléculas de adesão. Sobrenadantes de culturas de pulmão, de fagócitos pulmonares e da medula óssea foram coletados após 1, 4 ou 24 h. Verificou-se em ratos submetidos a IAP que, no pulmão, a exposição prévia ao FA aumentou NO2, H2O2, LTB4, TXB2, PGE2, IL-1<font face=\"symbol\">b, TNF-<font face=\"symbol\">a e diminuiu IL-10; na medula óssea, aumentou NO2 e PGE2, e diminuiu H2O2, LTB4, TXB2, IL-1<font face=\"symbol\">b e IL-10. A interação FA/OVA reduziu a expressão de ICAM-1, VCAM-1 e PECAM-1. Em conclusão, o FA medeia alterações na atividade funcional de fagócitos envolvidos com o desenvolvimento da asma. / Formaldehyde (FA) is an ambiental pollutant generated in industry and by burning of tobacco, alcohol, gasoline and LPG. As an airways irritant agent, the exposure to it may affect the modulation of allergic lung inflammation (ALI) triggered by unrelated antigens. We studied the functional activity of lung phagocytes and bone marrow cells from male Wistar rats previously subjected to FA inhalation (1%, 90 min/day, 3 days) and then subjected to ALI (ovalbumin sensitized and challenged), as well as the expression of adhesion molecules. Supernatants of lung explants, lung phagocytes and bone marrow cells were collected after 1, 4 or 24 h upon or not LPS or PMA stimulation. After FA inhalation, ALI increased NO2, H2O2, LTB4, TXB2, PGE2, IL-1<font face=\"symbol\">b, TNF-<font face=\"symbol\">a and decreased IL-10 in the lung, whereas enhanced NO2 e PGE2 and reduced H2O2, LTB4, TXB2, IL-1<font face=\"symbol\">b and IL-10 in bone marrow cells. The interaction FA/OVA decreased the expression of ICAM-1, VCAM-1 e PECAM-1. In conclusion, FA significantly alters the functional activity of phagocytes involved with asthma induction.

Expressão aumentada do receptor Fc de IgA (CD89) e da cadeia g associada, avaliadas respectivamente por citometria de fluxo e por “immunobloting", foram encontradas em fagócitos do sangue de pacientes com bacteremia por germes gram-negativos, em comparação com controles e pacientes com bacteremia por gram-positivos. A Mr do CD89 avaliada por SDS-PAGE estava diminuída, com núcleo protéico de 32kDa, sugerindo alteração de glicosilação. O aumento da expressão do CD89 correlacionou-se com aumento dos níveis séricos de IL-6. A cadeia g estava fosforilada nos neutrófilos, sugerindo participação do CD89 na sepsis por gram-negativos. / The expression and function of FcaRI (CD89) were analyzed on blood monocytes and neutrophils of patients with gram-positive and gram-negative bacteremia. Eighteen patients with gram-positive bacteremia, sixteen patients with gram-negative bacteremia and twenty healthy individuals were studied. CD89 expression were analyzed by flow cytometry using specific stained antibodies. Analysis of the surface iodinated CD89 molecules by SDS-PAGE and of the CD89 g-associated chain by immunoblotting also were performed. A marked increase in expression of the a and g subunits of the FcaRI were found on both types of cells in patients with gram-negative bacteremia, but not in patients with gram-positive bacteremia. This increase was independent of serum IgA levels. FcaRI Mr was lower on cells from gram negative patients than on cells from controls (50-65 kDa vs 55-75 kDa) despite of similar 32 kDa backbone, indicating altered glycosylation. Increased levels of FcaRI on blood phagocytes correlated with enhanced serum IL-6 levels, but not with IFN-g or TNF-a levels. The CD89 g-associated chain was phosphorylated on neutrophils, suggesting an engagement of CD89 during gram negative sepsis.

A doença granulomatosa crônica é uma imunodeficiência primária dos fagócitos causada por mutações no sistema NADPH oxidase resultando em burst oxidativo ausente ou reduzido. Nosso objetivo foi realizar uma análise genética molecular do complexo NADPH oxidase em pacientes com diagnóstico clínico de DGC. Cinqüenta e quatro pacientes com diagnóstico clínico sugestivo da DGC foram incluídos em nosso estudo. As populações de neutrófilos e monócitos foram avaliadas pela capacidade de produzir peróxido de hidrogênio por meio do teste de DHR. Dezoito pacientes apresentaram defeito no burst oxidativo, enquanto trinta e oito apresentaram produção de peróxido normal. O DNA genômico dos dezoito pacientes com burst oxidativo diminuído foi extraído, os genes da cadeia beta polipeptídica do complexo citocromo b e o factor citoplasmático de neutrófilos, foram sequenciados. Sete pacientes apresentaram diferentes mutações, tanto no gene CYBB como no NCF1. Concluímos que a combinação do teste de DHR e o sequenciamento direto são métodos eficazes para o diagnóstico genético da DGC. / Chronic granulomatous disease is a primary immunodeficiency caused by mutations in the phagocyte NADPH oxidase system resulting in absent or reduced oxidative burst. Our goal was to perform a molecular genetic analysis of complex NADPH oxidase in patients with clinical diagnosis of CGD. Fifty-four patients with a clinical diagnosis of CGD were included in our study. The populations of neutrophils and monocytes were evaluated for the ability to produce hydrogen peroxide through the DHR test. Eighteen patients had a defect in the oxidative burst, while thirty-eight had normal peroxide production. Genomic DNA of the eighteen patients with decreased oxidative burst was extracted, the genes the chain complex cytochrome beta polypeptide and the neutrophil cytoplasmic factor, were sequenced. Seven patients had different mutations, both in the CYBB gene as in NCF1. We conclude that the combination of direct sequencing and DHR test methods are effective for the genetic diagnosis of CGD.

Expressão aumentada do receptor Fc de IgA (CD89) e da cadeia g associada, avaliadas respectivamente por citometria de fluxo e por “immunobloting”, foram encontradas em fagócitos do sangue de pacientes com bacteremia por germes gram-negativos, em comparação com controles e pacientes com bacteremia por gram-positivos. A Mr do CD89 avaliada por SDS-PAGE estava diminuída, com núcleo protéico de 32kDa, sugerindo alteração de glicosilação. O aumento da expressão do CD89 correlacionou-se com aumento dos níveis séricos de IL-6. A cadeia g estava fosforilada nos neutrófilos, sugerindo participação do CD89 na sepsis por gram-negativos. / The expression and function of FcaRI (CD89) were analyzed on blood monocytes and neutrophils of patients with gram-positive and gram-negative bacteremia. Eighteen patients with gram-positive bacteremia, sixteen patients with gram-negative bacteremia and twenty healthy individuals were studied. CD89 expression were analyzed by flow cytometry using specific stained antibodies. Analysis of the surface iodinated CD89 molecules by SDS-PAGE and of the CD89 g-associated chain by immunoblotting also were performed. A marked increase in expression of the a and g subunits of the FcaRI were found on both types of cells in patients with gram-negative bacteremia, but not in patients with gram-positive bacteremia. This increase was independent of serum IgA levels. FcaRI Mr was lower on cells from gram negative patients than on cells from controls (50-65 kDa vs 55-75 kDa) despite of similar 32 kDa backbone, indicating altered glycosylation. Increased levels of FcaRI on blood phagocytes correlated with enhanced serum IL-6 levels, but not with IFN-g or TNF-a levels. The CD89 g-associated chain was phosphorylated on neutrophils, suggesting an engagement of CD89 during gram negative sepsis.

A doença granulomatosa crônica é uma imunodeficiência primária dos fagócitos causada por mutações no sistema NADPH oxidase resultando em burst oxidativo ausente ou reduzido. Nosso objetivo foi realizar uma análise genética molecular do complexo NADPH oxidase em pacientes com diagnóstico clínico de DGC. Cinqüenta e quatro pacientes com diagnóstico clínico sugestivo da DGC foram incluídos em nosso estudo. As populações de neutrófilos e monócitos foram avaliadas pela capacidade de produzir peróxido de hidrogênio por meio do teste de DHR. Dezoito pacientes apresentaram defeito no burst oxidativo, enquanto trinta e oito apresentaram produção de peróxido normal. O DNA genômico dos dezoito pacientes com burst oxidativo diminuído foi extraído, os genes da cadeia beta polipeptídica do complexo citocromo b e o factor citoplasmático de neutrófilos, foram sequenciados. Sete pacientes apresentaram diferentes mutações, tanto no gene CYBB como no NCF1. Concluímos que a combinação do teste de DHR e o sequenciamento direto são métodos eficazes para o diagnóstico genético da DGC. / Chronic granulomatous disease is a primary immunodeficiency caused by mutations in the phagocyte NADPH oxidase system resulting in absent or reduced oxidative burst. Our goal was to perform a molecular genetic analysis of complex NADPH oxidase in patients with clinical diagnosis of CGD. Fifty-four patients with a clinical diagnosis of CGD were included in our study. The populations of neutrophils and monocytes were evaluated for the ability to produce hydrogen peroxide through the DHR test. Eighteen patients had a defect in the oxidative burst, while thirty-eight had normal peroxide production. Genomic DNA of the eighteen patients with decreased oxidative burst was extracted, the genes the chain complex cytochrome beta polypeptide and the neutrophil cytoplasmic factor, were sequenced. Seven patients had different mutations, both in the CYBB gene as in NCF1. We conclude that the combination of direct sequencing and DHR test methods are effective for the genetic diagnosis of CGD.

INTRODUÇÃO: A ativação da NADPH oxidase de neutrófilos requer o acoplamento das subunidades citosólicas p47phox, p67phox, p40phox e Rac2 ao componente de membrana citocromo b558. Em trabalhos anteriores, nós mostramos que as isoformas vasculares da oxidase são reguladas pela proteína dissulfeto isomerase (PDI), uma chaperona redox. Neste trabalho, nós utilizamos um sistema cellfree semirecombinante como ferramenta para investigar o papel da PDI na ativação da NADPH oxidase do neutrófilo. RESULTADOS: Inibidores da PDI, scrambled RNAse (100g/mL) ou bacitracina (1mM), praticamente suprimiram a geração de superóxido. Para avaliação dos efeitos do estado redox da PDI sobre a atividade da oxidase, amostras de PDI foram previamente oxidadas (H2O2; 0,5 mM) ou reduzidas (DTT; 0,5 mM). A PDI oxidada (100 nM) aumentou a produção de superóxido em aproximadamente 30%, enquanto a mesma concentração de PDI reduzida promoveu efeito inverso, inibindo a atividade do complexo. A adição de um peptídeo contendo a seqüência peptídica do sítio ativo da PDI inibiu a produção de superóxido em 70%. Dados de imunolocalização e colocalização demonstraram que a interação da PDI com a subunidade p47phox parece ser intensificada pelo estímulo com PMA e envolvem modificações do estado redox de ambas as proteínas. CONCLUSÕES: Nossos dados confirmam a associação física e funcional entre a PDI e o complexo NADPH oxidase. Além disso, sugerem que a PDI exerça um importante papel como fator de regulação redox da ativação da oxidase. / Activation of the leukocyte NADPH oxidase requires the assembly of the cytosolic subunits p47phox, p67phox and p40phox and Rac2 with the membranebound cytochrome b558. We have previously shown that the vascular oxidase is regulated by the redox chaperone protein disulfide isomerase (PDI). Taking advantage of the semirecombinant cellfree system, we sought to investigate the role of PDI in the activation of neutrophil NADPH oxidase. The PDI thiol inhibitors scrambled RNase (100g/mL) or bacitracin (1mM), almost suppressed superoxide generation. In order to investigate if the redox status of PDI thiols could modulate superoxide generation, PDI was oxidized or reduced by treatment with H2O2 (0.5mM) or DTT (1mM), respectively. Oxidized PDI increased by 30% superoxide production, while reduced PDI diminished superoxide generation also in 30%. The addition of a peptide (1M) containing PDI´s exact active site sequence inhibited superoxide production by 70 %. Immuno and colocalization data demonstrated the interaction of PDI with the subunit p47phox to be intensified by PMA stimulation and to involve redox status exchange of both proteins. Our data confirm the physical and functional association between PDI and the oxidase complex. Moreover, we show a relevant role for PDI as a redoxdependent supportive factor for NADPH oxidase activation.

Macrófagos recuperados de peritôneo de camundongos 48 horas após administração de concanavalina A (Con A) são ativados e possuem um conteúdo maior de mieloperoxidase (MPO) do que macrófagos residentes. Este aumento pode ser observado por immunobloting e pelo aumento da atividade peroxidásica. Esta atividade foi avaliada pela quimiluminescência desencadeada por homogenato de macrófagos e peróxido de hidrogênio, durante a oxidação de luminol e melatonina. Os macrófagos contendo MPO são capazes de gerar ácido hipocloroso quando estimulados com acetato de forbol miristato (PMA). O aumento do conteúdo de MPO em macrófagos é um processo que independe de interferon-&#947; (IFN-&#947;), uma vez que camundongos IFN-&#947;-\"knockout\" têm uma atividade ainda maior que camundongos \"wild type\". O contato entre macrófagos e neutrófilos in vivo, não é necessário para o incremento observado, visto que macrófagos de camundongos tratados com anticorpo anti-granulócitos preservam a atividade peroxidásica. Este achado é uma evidência de que em algumas condições a ativação de macrófagos é acompanhada por um aumento da atividade peroxidásica. Dentre o amplo espectro de ação da MPO, este processo pode ter um papel especial na inflamação. Também é de especial interesse o fato de macrófagos serem capazes de oxidar melatonina, um hormônio com vários efeitos imunomodulatórios. / Macrophages recovered from mice peritoneum 48 after concanavalin-A (Con A) administration are primed and have a higher content of myeloperoxidase (MPO) than resident cells. The increase of MPO is accompanied by an increment in peroxidase activity, evaluated by the chemiluminescence during the oxidation of luminol and melatonin triggered by macrophages homogenates plus hydrogen peroxide. MPO present in macrophages are able to generate hypochlorous acid when macrophages are stimulated with phorbol myristate acetate. Interferon-&#947; (IFN-&#947;) does not participate in the process that lead macrophages to become enriched in MPO, since IFN-&#947; knockout mice have an even higher peroxidase activity compared to the wild type. The contact of macrophages with neutrophil in vivo seems to be not necessary for the observed increment in peroxidase since macrophages recovered from mice treated with antigranulocyte antibody preserves the peroxidase activity. These finding provides evidences that, at least in some conditions, macrophage activation is accompanied by an increment in peroxidase activity. Given the broad spectrum of action of MPO, this process might play a special role in inflammation. Also of special interest is the finding that macrophages are able to oxidize melatonin, a hormone with several immunomodulatory effects.

Neste trabalho avaliamos a formação de oxigênio singlete in vitro em fagócitos, (células mononucleares e neutrófilos) isolados de sangue periférico humano, e eosinófilos, de lavado bronco alveolar de camundongos balb/c, ativados por estímulo partículado: zimosan opsonizado contendo o 9,10difenilantraceno (DPA) adsorvido como sonda captadora de 1O2. Por este método, a formação do 1O2 pode ser verificada pela formação do 9,10-difenilantraceno endoperóxido (DPAO2), que é detectado por HPLC. Observamos, que os fagócitos formam 1O2 e que esta formação parece ocorrer de forma diferenciada para os dois tipos celulares (neutrófilos e células mononucleares). Visando ampliar os estudos anteriores sobre o papel da melatonina (MLT) no processo inflamatório, foi testado seu efeito em fagócitos e a relação na produção de 1O2 destas células. Observamos que MLT inibe a formação de 1O2 totalmente no caso de neutrófilos e parcialmente no caso de células mononucleares e eosinófilos. Paralelamente, foi desenvolvida a síntese de um novo captador químico de 1O2, o éster 9,10-antracenil-3-bispropionato de etila (ABPE), cuja finalidade principal é o acúmulo no interior da célula, depois de sofrer hidrólise enzimática. Esta sonda, terá facil acesso ao interior das células em sua forma ester. Este novo captador de 1O2 foi testado em células mononucleares e neutrófilos estimulados de formas diferentes: via receptor independente e dependente. Os resultados demonstraram produção equivalente de 1O2 nestes fagócitos. / In this study, we evaluated the singlet oxygen (1O2) formation in vitro from phagocytes (neutrophils and mononuclear cells) isolated from human blood cells and eosinophils isolated from bronchoalveolar lavage fluid of mice balb/c activated, by opsonized zymosan. To determine whether singlet oxygen is produced by phagocytes, zymosan particles were coated with a specific chemical trap for 1O2, 9,10-diphenylanthracene (DPA). The production of 1O2 was followed using HPLC, to measure its product, 9,10-diphenylanthracene endoperoxide (DPAO2). We also noticed that the 1O2 production occurs at different levels of for two cell types, neutrophils and mononuclear cells. In order to broaden previous studies on the role of melatonin (MLT) in inflammatory processes, its effect was tested in phagocytes was tested in relation to 1O2 formation by these cells. We observed that MLT inhibits the 1O2 formation totallymt neutrophils and partiallym mononuclear cells and eosinophils. At the some time, it was also developed the synthesis of a new probe for 1O2, the 9,10-anthracene-bis-3-ethyl-propionate (ABEP), with the purpose to accumulate inside the cells, after its enzymatic hydrolysis. This probe presents easy acess to the inferior of the cells in its ester form. This new probe for trapping 1O2 was tested in mononuclear cells and neutrophils stimulated in two ways: via independent and dependent receptor. The results showed equivalent production of 1O2 for both cell types.