O objetivo deste estudo foi determinar as espécies de fungos fitopatogênicos presentes em sementes de P. guenoarum Arech. ecótipo “Azulão”, bem como, verificar a sensibilidade in vitro dos fungos isolados a diferentes fungicidas e avaliar a eficiência do tratamento químico no controle de fungos e no desempenho fisiológico das sementes. Cinco lotes de sementes (2011, 2012, 2013, 2014 e 2015), obtidos de área experimental na EEA/UFRGS, foram analisados quanto à qualidade física e fisiológica através dos testes de umidade, pureza, germinação e vigor (PCG, IVG e TZ). Para a avaliação da qualidade sanitária fez-se o isolamento dos fungos fitopatogênicos associados às sementes pelo método de “blotter test”. A patogenicidade dos fungos encontrados foi avaliada por inoculação de plântulas, através de suspensões de conídios. Os fungos fitopatogênicos foram caracterizados através de análise morfológica e molecular. Para a caracterização molecular utilizou-se o espaçador interno de transcrição de rDNA [primers ITS1 / ITS4] e o gene RNA polimerase II (RPB2) [primers 5f2 / 7cr]. Por meio de ensaios de fungitoxicidade in vitro, estudou-se a sensibilidade dos isolados fúngicos detectados nas sementes, testando-se quatro fungicidas (Carboxina + Tiram, Cabendazim + Tiram, Metalaxil-M + Fludioxonil e Tiofanato-metílico) e cinco concentrações (1; 2,5; 5; 10 e 30 ppm), determinando-se a DL50. Os fungicidas mais eficientes foram avaliados no tratamento das sementes, somente no lote 2015. Os lotes 2014 e 2015 apresentaram maior porcentagem de germinação e vigor. O objetivo deste estudo foi determinar as espécies de fungos fitopatogênicos presentes em sementes de P. guenoarum Arech. ecótipo “Azulão”, bem como, verificar a sensibilidade in vitro dos fungos isolados a diferentes fungicidas e avaliar a eficiência do tratamento químico no controle de fungos e no desempenho fisiológico das sementes. Cinco lotes de sementes (2011, 2012, 2013, 2014 e 2015), obtidos de área experimental na EEA/UFRGS, foram analisados quanto à qualidade física e fisiológica através dos testes de umidade, pureza, germinação e vigor (PCG, IVG e TZ). Para a avaliação da qualidade sanitária fez-se o isolamento dos fungos fitopatogênicos associados às sementes pelo método de “blotter test”. A patogenicidade dos fungos encontrados foi avaliada por inoculação de plântulas, através de suspensões de conídios. Os fungos fitopatogênicos foram caracterizados através de análise morfológica e molecular. Para a caracterização molecular utilizou-se o espaçador interno de transcrição de rDNA [primers ITS1 / ITS4] e o gene RNA polimerase II (RPB2) [primers 5f2 / 7cr]. Por meio de ensaios de fungitoxicidade in vitro, estudou-se a sensibilidade dos isolados fúngicos detectados nas sementes, testando-se quatro fungicidas (Carboxina + Tiram, Cabendazim + Tiram, Metalaxil-M + Fludioxonil e Tiofanato-metílico) e cinco concentrações (1; 2,5; 5; 10 e 30 ppm), determinando-se a DL50. Os fungicidas mais eficientes foram avaliados no tratamento das sementes, somente no lote 2015. Os lotes 2014 e 2015 apresentaram maior porcentagem de germinação e vigor. / This study was aimed to determine the phytopathogenic fungi species present in P. guenoarum Arech seeds. "Azulão" ecotype, as well as to verify the in vitro sensitivity of the isolated fungi to different fungicides and to evaluate the efficiency of the chemical treatment in the control of fungi and the physiological performance of the seeds. Five seed lots (2011, 2012, 2013, 2014 and 2015), obtained from the experimental area of the EEA / UFRGS, were analyzed for physical and physiological quality by means of moisture, purity, germination and vigor tests (PCG, IVG and TZ). For the evaluation of the sanitary quality, the phytopathogenic fungi associated to the seeds were isolated by the blotter test method. The pathogenicity of the fungi found was evaluated by inoculation of seedlings by conidial suspensions. Phytopathogenic fungi were characterized by morphological and molecular analysis. The internal transcription spacer of rDNA [primers ITS1 / ITS4] and RNA polymerase II (RPB2) [primers 5f2 / 7cr] was used for the molecular characterization. The sensitivity of the fungal isolates detected in the seeds was evaluated using four fungicides (Carboxin + Thiram, Cabendazim + Thiram, Metalaxyl-M + Fludioxonil and Thiophanate-methyl) and five concentrations (1; 2,5; 5; 10 and 30 ppm), the LD50 being determined. The most efficient fungicides were evaluated in the treatment of seeds only in lot 2015. The lots 2014 and 2015 presented a higher percentage of germination and vigor. The species of phytopathogenic fungi most frequent in seed lots of P. guenoarum ecotype "Azulão" are Bipolaris micropus, Curvularia geniculata, Fusarium incarnatum and Phoma herbarum. In vitro conditions, the fungicide Carboxin + Thiram inhibits the mycelial growth of the fungi F. incarnatum, C. geniculata and B. micropus with high efficacy (LD50 < 1 ppm), whereas Metalaxyl + Fludioxonil inhibits with high efficacy the fungi P. herbarum, C. geniculata and B. micropus. The chemical treatment with the fungicides Carboxin + Thiram, Metalaxyl-M + Fludioxonil and the combination of both products in the seeds of P. guenoarum is efficient in the control of B. micropus, C. geniculata, F. incarnatum and P. herbarum and promotes better physiological performance.

Avaliou-se, por testes in vitro, a fungitoxicidade dos produtos Cabrio Top, Captan SC, Comet, Derosal 500, Derosal Plus, Frowncide 200 SC, Nativo, Opera, Stratego e Vitavax-Thiram 200 SC em isolados de Trichoderma sp. (T1R, T2R, T4R, T6R, T7R, TSV e PCT). Os fungicidas foram adicionados em meio de cultura BDA e em discos de papel filtro na dosagem recomendada pelo fabricante, metade e dobro desta dose. Os tratamentos foram mantidos a 23 ± 1ºC e fotoperíodo de 14 horas. Após sete dias de incubação foi medido o diâmetro da colônia dos fungos na presença dos fungicidas e o halo de inibição formado em torno do disco de papel filtro. Os fungicidas Cabrio Top, Captan SC, Comet, Stratego e Vitavax-Thiram 200 SC não se mostraram tóxicos aos isolados. O isolado T4R foi o menos sensível aos fungicidas e os isolado T6R e PCT foram os mais sensíveis. Avaliou-se também, a fungitoxicidade in vitro destes mesmos defensivos agrícolas a Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli, agente causal da murcha do feijoeiro e o potencial antagônico dos isolados de Trichoderma sp. ao fitopatógeno. Os fungicidas, Derosal 500, Derosal Plus, Nativo, Opera e Vitavax-Thiram 200 SC foram efetivos no controle de F. oxysporum f.sp. phaseoli in vitro. Experimentos in vitro, testando o potencial antagônico dos isolados T4R, TSV e PCT de Trichoderma sp. ao fitopatógeno mostraram que os isolados são efetivos no controle de F. oxysporum f.sp. phaseoli quando inoculados 48 horas antes e simultaneamente com o fitopatógeno. Em experimento de casa de vegetação, sementes de feijão foram tratadas com os fungicidas Vitavax-Thiram 200 SC e Derosal Plus, com os isolados T4R, TSV e PCT e com o fitopatógeno F. oxysporum f. sp. phaseoli. Somente o isolado TSV foi efetivo no controle do fitopatógeno. Todos os isolados de Trichoderma sp. foram recuperados de raízes de plantas cujas sementes foram tratadas com fungicidas. / The fungitoxicity of the products Cabrio Top, Captan SC, Comet, Derosal 500, Derosal Plus, Frowncide 200 SC, Nativo, Opera, Stratego and Vitavax-Thiram200 SC was evaluated through in vitro tests in strains of Trichoderma sp. (T1R, T2R, T4R, T6R, T7R, TSV and PCT). The fungicides were added in a PDA culture medium and on discs of filter paper following manufactures recommended dosages, half and the double of this dose. The treatments were maintained at 23±1ºC and at a photophase of 14 hours. After 7 days of incubation the diameter of the fungus colony in the presence of fungicides and the halo of inhibition formed around the disc of paper filter were measured. The fungicides Cabrio Top, Captan SC, Comet, Stratego and Vitavax-Thiram 200 SC were not toxic towards the isolates. The isolate T4R was less sensitive towards the fungicide while the isolates T6R and PCT were the most sensitive ones. The fungitoxicity in vitro of these same agricultural defensives towards Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli (the casual agent of Fusarium Wilt and the antagonistic potential of the isolates of Trichoderma sp. towards the pathogen) was evaluated. The fungicides Derosal 500, Derosal Plus, Nativo, Opera and Vitavax-Thiram 200 SC were effective in the control of F. oxysporum f.sp. phaseoli in vitro. Experiments in vitro, testing the antagonistic potential of the isolates T4R, TSV and PCT of Trichoderma sp. towards the pathogen have shown that the isolates are effective in the control of F. oxysporum f.sp. phaseoli when inoculated before 48 hour period and simultaneanously with the pathogen. In experiment in greenhouse bean seeds were treated with the fungicides Derosal Plus and Vitavax-Thiram200 SC with the isolates T4R, TSV and PCT and with the pathogen Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli. Only the isolated TSV was effective in the control of the pathogen. All isolated of Trichoderma sp. Tested they had been recouped of roots of plants whose seeds had been with fungicides.

O uso de fungicidas representa um dos principais métodos de controle de doenças em plantas, entretanto, o uso de produtos químicos causa impactos no meio ambiente e na saúde humana. O uso do controle integrado é uma alternativa ao uso desses produtos. A implementação dessa prática requer cuidado, já que os agentes de controle biológico podem ser afetados pelos produtos químicos. O trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito de princípios ativos captana, carbendazim, fluazinam, iprodiona e tiofanato metílico sobre o fungo antagonista, Trichoderma spp. (Trichoderma harzianum TH11, Trichoderma viride TV21 e Trichoderma sp. T04, T16 e T20). Foram analisados os parâmetros crescimento vegetativo, esporulação, confronto direto, produção de metabólitos voláteis, produção de enzimas e sideróforos em meio de cultura suplementado com cada princípio ativo. Os princípios ativos carbendazim, fluazinam e iprodione mostraramse muito tóxicos aos isolados testados, em todas as concentrações. O princípio ativo captana mostrou-se moderadamente tóxico ao isolado T04 e tóxico ao isolado TV21 na concentração 120 g/L. Para os demais isolados e concentrações captana foi compatível. O princípio ativo tiofanato metílico também foi compatível em todas as concentrações para os isolados T04, T16, T20 e TV21. A concentração de 2800 g/kg desse princípio ativo foi moderadamente tóxica ao isolado TH11. As demais concentrações de tiofanato metílico foram compatíveis com esse isolado. Não é possível definir o efeito de captana, carbendazim, fluazinam e iprodiona sobre o confronto direto dos isolados testados e o patógeno, já tiofanato metílico não interfere na ação dos isolados. A produção de metabólitos voláteis é afetada pelos princípios ativos captana, carbendazim, iprodiona e tiofanato metílico. Com fluazinam, o desenvolvimento do patógeno foi menor devido a ação dos metabólitos voláteis, entretanto não é possível definir se a ação é sinérgica ou apenas provocada pelo produto químico. Todos os isolados produziram enzimas e sideróforos. Os princípios ativos impediram a detecção da produção de enzimas. Captana inibiu a produção de sideróforos. Dessa forma, é necessária a realização de testes de compatibilidade entre princípios ativos e agentes de controle biológico antes de sua aplicação no campo para controle integrado de doenças de plantas. / The use of fungicides is one of the main methods of plant disease control, however, these chemicals cause impacts on the environment and on human health. The use of integrated control is an alternative to the use of these products. The implementation of this practice requires caution as the biological control agents can be affected by the chemical products. The aim of this work was to evaluate the effects of active ingredients captan, carbendazim, fluazinam, iprodione and thiophanate-methyl on Trichoderma spp. isolates (Trichoderma harzianum TH11, Trichoderma viride TV21 and Trichoderma sp. T04, T16 and T20). Samples were analyzed for vegetative growth, sporulation, direct confrontation, volatiles metabolites production, enzymes and siderophores production in culture medium supplemented with each active ingredient. The active ingredients carbendazim, fluazinam and iprodione were very toxic to isolates at all concentrations. The active ingredient captan was moderately toxic to T04 and toxic to TV21 isolates in 120 g/L of concentration. For other isolates and captan concentrations was compatible. The active ingredient thiophanate-methyl was also compatible at all concentrations for isolates T04, T16, T20 and TV21. The concentration of 2800 g/kg of this active ingredientc was moderately toxic to TH11. The remaining concentrations of thiophanate-methyl was compatible with this isolate. Can not define the effect of captan, carbendazim, iprodione and fluazinam in direct confrontation of the isolates and pathogens, just tiophanate-methyl does not affect the action of isolates. The prodution of volatiles metabolites is affected by the active ingredients captan, carbendazim, iprodione and thiophanate-methyl. With fluazinam, the development of the pathogen was reduced by the action of volatiles metabolites, however is not possible to define if the action is synergistic or merely caused by the chemical product. All isolates produced enzymes and siderophores. The ingredient actives prevented the enzyme production detection. Captan inhibited the siderophores production. Thus, with this work it was possible to verify the need of compatibility tests between active ingredients and biological control agents before their implementation at the field level for the integrated control of plant diseases.

O uso de fungicidas representa um dos principais métodos de controle de doenças em plantas, entretanto, o uso de produtos químicos causa impactos no meio ambiente e na saúde humana. O uso do controle integrado é uma alternativa ao uso desses produtos. A implementação dessa prática requer cuidado, já que os agentes de controle biológico podem ser afetados pelos produtos químicos. O trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito de princípios ativos captana, carbendazim, fluazinam, iprodiona e tiofanato metílico sobre o fungo antagonista, Trichoderma spp. (Trichoderma harzianum TH11, Trichoderma viride TV21 e Trichoderma sp. T04, T16 e T20). Foram analisados os parâmetros crescimento vegetativo, esporulação, confronto direto, produção de metabólitos voláteis, produção de enzimas e sideróforos em meio de cultura suplementado com cada princípio ativo. Os princípios ativos carbendazim, fluazinam e iprodione mostraramse muito tóxicos aos isolados testados, em todas as concentrações. O princípio ativo captana mostrou-se moderadamente tóxico ao isolado T04 e tóxico ao isolado TV21 na concentração 120 g/L. Para os demais isolados e concentrações captana foi compatível. O princípio ativo tiofanato metílico também foi compatível em todas as concentrações para os isolados T04, T16, T20 e TV21. A concentração de 2800 g/kg desse princípio ativo foi moderadamente tóxica ao isolado TH11. As demais concentrações de tiofanato metílico foram compatíveis com esse isolado. Não é possível definir o efeito de captana, carbendazim, fluazinam e iprodiona sobre o confronto direto dos isolados testados e o patógeno, já tiofanato metílico não interfere na ação dos isolados. A produção de metabólitos voláteis é afetada pelos princípios ativos captana, carbendazim, iprodiona e tiofanato metílico. Com fluazinam, o desenvolvimento do patógeno foi menor devido a ação dos metabólitos voláteis, entretanto não é possível definir se a ação é sinérgica ou apenas provocada pelo produto químico. Todos os isolados produziram enzimas e sideróforos. Os princípios ativos impediram a detecção da produção de enzimas. Captana inibiu a produção de sideróforos. Dessa forma, é necessária a realização de testes de compatibilidade entre princípios ativos e agentes de controle biológico antes de sua aplicação no campo para controle integrado de doenças de plantas. / The use of fungicides is one of the main methods of plant disease control, however, these chemicals cause impacts on the environment and on human health. The use of integrated control is an alternative to the use of these products. The implementation of this practice requires caution as the biological control agents can be affected by the chemical products. The aim of this work was to evaluate the effects of active ingredients captan, carbendazim, fluazinam, iprodione and thiophanate-methyl on Trichoderma spp. isolates (Trichoderma harzianum TH11, Trichoderma viride TV21 and Trichoderma sp. T04, T16 and T20). Samples were analyzed for vegetative growth, sporulation, direct confrontation, volatiles metabolites production, enzymes and siderophores production in culture medium supplemented with each active ingredient. The active ingredients carbendazim, fluazinam and iprodione were very toxic to isolates at all concentrations. The active ingredient captan was moderately toxic to T04 and toxic to TV21 isolates in 120 g/L of concentration. For other isolates and captan concentrations was compatible. The active ingredient thiophanate-methyl was also compatible at all concentrations for isolates T04, T16, T20 and TV21. The concentration of 2800 g/kg of this active ingredientc was moderately toxic to TH11. The remaining concentrations of thiophanate-methyl was compatible with this isolate. Can not define the effect of captan, carbendazim, iprodione and fluazinam in direct confrontation of the isolates and pathogens, just tiophanate-methyl does not affect the action of isolates. The prodution of volatiles metabolites is affected by the active ingredients captan, carbendazim, iprodione and thiophanate-methyl. With fluazinam, the development of the pathogen was reduced by the action of volatiles metabolites, however is not possible to define if the action is synergistic or merely caused by the chemical product. All isolates produced enzymes and siderophores. The ingredient actives prevented the enzyme production detection. Captan inhibited the siderophores production. Thus, with this work it was possible to verify the need of compatibility tests between active ingredients and biological control agents before their implementation at the field level for the integrated control of plant diseases.

Dissertação (mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Ambientes Aquáticos Continentais, Instituto de Ciências Biológicas, 2012. / Submitted by Cristiane Gomides (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2014-01-13T17:44:25Z No. of bitstreams: 1 0000010069.pdf: 1538365 bytes, checksum: c202c5228cc013b57b32fa76d75fad5d (MD5) / Approved for entry into archive by cristiane soares (krikasoares@live.com) on 2014-02-23T02:04:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 0000010069.pdf: 1538365 bytes, checksum: c202c5228cc013b57b32fa76d75fad5d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-23T02:04:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 0000010069.pdf: 1538365 bytes, checksum: c202c5228cc013b57b32fa76d75fad5d (MD5) Previous issue date: 2012 / A contaminação de ambientes aquáticos por compostos potencialmente tóxicos oriundos de atividades agrícolas é um problema que tem se agravado nos últimos anos. O tebuconazol é um fungicida amplamente usado na agricultura, frequentemente encontrado em águas naturais, inclusive no Rio Grande do Sul, e cuja toxicidade para o fitoplâncton não é conhecida. O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade do tebuconazol em quatro espécies fitoplanctônicas dulcícolas subtropicais. Foram montadas culturas estanque em triplicata testando seis diferentes concentrações de tebuconazol (10; 100; 500; 1.000; 5.000 e 10.000 μg L-1) para Cosmarium depressum var. planctonicum, Desmodesmus communis, Pediastrum boryanum e Spondylosium pygmaeum, assim como um controle somente com a microalga, sem a adição do tebuconazol, para verificar o crescimento padrão. Os experimentos foram mantidos por 13 dias, nos quais foram realizadas amostragens diárias nos 4 primeiros dias e a cada 72 h até o final do experimento para a análise de crescimento (clorofila-a e densidade celular) e parâmetros toxicológicos. As quatro cepas apresentaram diferença significativa de crescimento em relação ao controle, para C. depressum var. planctonicum nas concentrações 5.000 e 10.000 μg L-1, D. communis e P. boryanum em 1.000, 5.000 e 10.000 μg L-1 e S. pygmaeum a partir de 500 μg L-1. A EC50 (concentração que inibe 50% do crescimento) foi de 3.616 μg L-1 para C. depressum var. planctonicum, 3.246 μg L-1 para D. communis, 3.863 μg L-1 para P. boryanum e 1.851 μg L-1 para S. pygmaeum, sendo o S. pygmaeum a cepa mais sensível. Para LOEC (concentração mais baixa com efeito observado) e NOEC (concentração mais alta sem efeito observado) S. pygmaeum também apresentou concentrações mais baixas, seguido de C. depressum var. planctonicum, D. communis e P. boryanum. / Public concern has increased regarding the uncontrolled use of pesticides, including fungicides. Tebuconazol is a broad-spectrum fungicide that is used worldwide; however, its toxicity to phytoplankton is unknown. This work aims to evaluate the tebuconazol influence on the growth of four subtropical freshwater phytoplanktonic strains. Experimental cultures of Cosmarium depressum var. planctonicum, Desmodesmus communis, Pediastrum boryanum and Spondylosium pygmaeum were prepared with six tebuconazol concentrations (10, 100, 500, 1.000, 5.000 and 10.000 μg L-1), besides a control that was also prepared to measure the regular growth of each microalgae. The cultures (triplicates) were maintained for 13 days to determine both the growth (cellular density and chlorophyll-a content) and toxicological parameters. Tebuconazol inhibited the growth of all phytoplanktonic strains when they were exposed to 5.000 and 10.000 μg L-1. D. communis and P. boryanum were also inhibited when exposed to 1.000 μg L-1, while S. pygmaeum was inhibited since 500 to 10.000 μg L-1. The calculated EC50 was 3.616 μg L-1 to C. depressum var. planctonicum, 3.246 μg L-1 to D. communis, 3.863 μg L-1 to P. boryanum and 1.851 μg L-1 to S. pygmaeum, that was the most sensible strain to tebuconazol. LOEC and NOEC were also lower to S. pygmaeum followed by C. depressum var. planctonicum, D. communis and P. boryanum.

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-09-04T12:26:36Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 435085 bytes, checksum: 8774babf45904f27b2aac08c22720241 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T12:26:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 435085 bytes, checksum: 8774babf45904f27b2aac08c22720241 (MD5) Previous issue date: 2018-07-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A abelha Apis mellifera está entre as mais usadas para serviços de polinização e seus produtos como mel, própolis, cera e veneno possuem importância econômica. O Distúrbio do Colapso de Colônias está relacionado com o declínio de abelhas, e é causado por fatores como doenças, pesticidas e problemas de manejo. Os fungicidas são responsáveis pela maior parte do teor de pesticidas nos grãos de pólen e podem atingir as abelhas pela alimentação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citotóxico do fungicida iprodione nas células digestivas do intestino médio de operárias adultas de A. mellifera. O teste de toxicidade para o iprodione foi realizado utilizando operárias recém-emergidas alimentadas com diferentes concentrações do fungicida diluído em sacarose 50% por 72 h sendo a mortalidade avaliada a cada 24 h. Como não houve mortalidade significativa no teste de toxicidade, a microscopia de luz, eletrônica e a expressão do gene de autofagia atg-1 foram realizadas com abelhas alimentadas com a DL 50 indicada pelo fabricante por 12 h e 24 h. Houveram danos nas células digestivas como vacuolização citoplasmática, protrusões celulares apicais e condensação e fragmentação da cromatina nuclear, características indicativas de apoptose. A ultraestrutura mostrou que os vacúolos eram autofágicos e que algumas células apresentaram necrose. A expressão de atg-1 foi similar nas abelhas tratadas e controles, o que pode ser explicado pelo fato de ATG-1 estar presente nas fases iniciais da autofagia e a maioria dos vacúolos autofágicos encontrados na ultraestrutura serem maduros. O iprodione atua inibindo a síntese da glutationa, o que culmina na formação de espécies reativas de oxigênio que podem induzir os diferentes tipos de morte celular. Os resultados obtidos indicam a necessidade de atenção no uso do iprodione, uma vez que ele tem possíveis efeitos colaterais para organismos não-alvo, como as abelhas. / The honey bee Apis mellifera is an important pollinator and produces honey, propolis, wax and venom, which are economically relevant. The decline of bees population is related to Colony Collapse Disorder, and it is caused by factors such as diseases, use of pesticides and handling problems. Fungicides account for most of the pesticide content in pollen grains and can affect the bees through feeding. The objective of this work was to evaluate the cytotoxic effect of the fungicide iprodione in midgut digestive cells of A. mellifera workers. The toxicity test was carried out using newly emerged workers fed with different concentrations of iprodione diluted in 50% sucrose for 72 h, and the mortality evaluated every 24 h. As there was no significant mortality in the toxicity test, light and electron microscopy as well as atg-1 autophagy gene expression were performed on bees fed with iprodione for 12 h and 24 h with the LD50 indicated by the manufacturer. Results showed damages in digestive cells such as cytoplasmic vacuolization and apical cell protrusions in addition to condensation and fragmentation of nuclear chromatin, characteristics indicative of apoptosis. The ultrastructure showed that vacuoles were autophagic and that some cells exhibited necrosis. The expression of atg-1 was similar in treated bees and controls, which may be explained by the fact that ATG-1 is present in the early stages of autophagy and most of the autophagic vacuoles found in the ultrastructure are already mature. Iprodione acts by inhibiting glutathione synthesis, which culminates in the production of reactive oxygen species that can induce different types of cell death. The results indicate the need of caution in the use of iprodione, since it has possible side effects for non-target organisms, such as bees.

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-08-31T17:34:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) RAFAELDORETO.pdf: 1784788 bytes, checksum: 792dc42ea6c4c0915fa5a820da978fae (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T17:34:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) RAFAELDORETO.pdf: 1784788 bytes, checksum: 792dc42ea6c4c0915fa5a820da978fae (MD5) Previous issue date: 2009-10-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Among the main factors that limit the productivity, profitability and success of soybean production there are distinguished the diseases, particularly asian soybean rust, which has been considered one of the most important cause of soybean losses. Potassium is cited as one that has a major impact on soybean diseases due to fact that is crucial in many metabolic reactions. Thus, the objective this research was to evaluate the effect of potassium fertilization on incidence and severity of asian soybean rust, nutrient content on leaves, and productivity under field conditions in Dourados – MS, Brazil. The experiment was lead in Dourados-MS in Oxisol (Typic Haplustox), cultivated on no-tillage system on corn mulching. The experimental design chosen was Randomized block with six replications, and the treatments were arranged in split-plots (plots - five K2O rates (0, 40, 80, 120 and 160 kg ha-1) using as fertilizer the potassium chloride (KCl) and subplots (presence and absence of fungicide sprays with azoxystrobin+ciproconazole)). The nutrient content in the leaves, incidence and severity asian soybean rust, productivity and weight of 100 grains were analyzed. Potassium fertilization had no effect on nutrient content. Fungicide application was essential to reduce the incidence and severity of asian soybean rust and increase productivity and weight of 100 grains. Without fungicide application, productivity was reduced 22% (574.1 kg ha-1), and the weight of 100 grains decreased 18.6%. The rate of 80 kg ha-1 K2O in presence of fungicide application was promising to reduce the deleterious effects of asian soybean rust on incidence of the middle third and upper third and severity in the upper third of the soybean plants. When fungicide was not sprayed rates greater than 120 kg ha-1 of K2O were needed in order to achieve higher yields. / Entre os principais fatores que limitam a produtividade, a lucratividade e o sucesso da produção de soja destacam-se as doenças, principalmente a ferrugem asiática, que tem sido considerada uma das mais importantes por causar perdas na produtividade de grãos de 10% a 75%. Dentre os nutrientes, o potássio é citado como um dos que exerce mais influência sobre as doenças da soja, por ser crucial em muitas reações metabólicas da planta. Assim, objetivou-se com essa pesquisa avaliar o efeito da adubação potássica sobre a incidência e severidade da ferrugem asiática, teores de nutrientes, e produtividade da cultura da soja na região de Dourados-MS na safra 2007/08. O experimento foi conduzido em Dourados-MS num Latossolo Vermelho Distroférrico, cultivado em sistema de semeadura direta sobre palhada de milho. O delineamento experimental utilizado foi em blocos completos casualizados, com seis repetições onde os tratamentos foram alocados em parcelas subdivididas (parcelas - cinco doses de K2O (0, 40, 80, 120 e 160 kg ha-1) e subparcelas (presença e ausência de aplicação de fungicida azoxystrobin+ciproconazole). Foram avaliados os teores de nutrientes nas folhas, incidência e severidade da ferrugem asiática, produtividade e a massa de 100 grãos. A adubação potássica não teve efeito nos teores foliares de nutrientes. A aplicação de fungicida foi essencial para redução da incidência e severidade da ferrugem asiática e, aumento da produtividade e massa de 100 grãos na cultura da soja. Quando não houve aplicação de fungicida, a produtividade foi reduzida 22%, ou seja, 574,1 kg ha-1. O mesmo ocorreu com a massa de 100 grãos que reduziu 18,6 %. A aplicação de fungicida e a dose de 80 kg ha-1 de K2O foram promissoras em diminuir os efeitos deletérios da ferrugem asiática com relação incidência no terço médio e superior e, severidade no terço superior das plantas de soja. Na ausência do fungicida foram necessárias adubações potássicas mais elevadas (maior que 120 kg ha-1 de K2O) para obtenção de produtividade acima de 2.000 kg ha-1.

Os produtos do metabolismo secundário, também conhecidos por produtos naturais, representam uma fonte inexplorada de compostos com atividade biológica. Os micro-organismos, entre eles os endófitos, são fontes promissoras de obtenção dessas substâncias. Assim sendo, essa pesquisa visou obter compostos de importância biotecnológica produzidos por fungos endofíticos isolados de folhas das plantas Anthurium alcatrazense, Begonia venosa e B. fischeri. Para isso, 5 linhagens de fungos endofíticos isolados dessas plantas (códigos P7BDA1F2, P8BDA1F1, AM29, D28 e D29) foram estudadas. A identificação desses micro-organismos foi realizada por meio de análises morfológicas e moleculares, revelando serem estas linhagens Hymenochaete-like, Trichoderma sp., Neopestalotiopsis sp., Aspergillus sp. e Diaporthe sp., respectivamente. A partir do extrato bruto de Hymenochaete-like (código P7BDA1F2) foram isolados os compostos 5,7-dimetoxiftalida e metil orselinato, os quais foram testados contra Leishmania (L.) infantum e alvo do proteassoma e não apresentaram atividade. A partir do extrato bruto de Trichoderma sp. (código P8BDA1F1) foram isolados os compostos trilongins BI-BIV. Estes apresentaram atividade inibitória ao fitopatógeno C. gloeosporioides, com MIC de 40, 320, 160 e 310 &mu;M, respectivamente. As trilongins BI-BIV foram testadas contra a subunidade ChTL do proteassoma e apresentaram os valores de IC50 de 6,5 ± 2,7; 4,7 ± 1,8; 6,3 ± 2,2; e 2,7 ± 0,5 &mu;M. Os compostos também foram testados ex vivo contra os amastigotas intracelulares de Leishmania (L.) infantum, mas não apresentaram seletividade. A partir do extrato bruto de Neopestalotiopsis sp. (código AM29), foi isolado um composto de massa molecular 366,0570 Da (que pode ser inédito na literatura), o qual apresentou atividade inibitória ao fitopatógeno P. sojae, com MIC de 312 &mu;g mL-1. A partir dos extratos brutos de Aspergillus sp. e Diaporthe sp. foram isolados 9 compostos, cujas frações precursoras apresentaram atividade contra as bactérias formadoras de biofilme S. aureus e P. aeruginosa. Para a identificação desses compostos, análises adicionais precisam ser realizadas. Este é o primeiro relato do isolamento dos compostos 5,7-dimetoxiftalida e metil orselinato do basidiomiceto Hymenochaete-like. Também está sendo relatada pela primeira vez a atividade antifúngica das trilongins a C. gloeosporioides e contra o alvo do proteassoma, assim como o isolamento de um possível novo composto de Neopestalotiopsis sp. e sua atividade contra P. sojae. / Secondary metabolism products, also known as natural products, represent an unexplored source of compounds with biological activity. Microorganisms, including endophytes, are promising sources of these substances. Thus, this research aimed to obtain compounds with biotechnological importance produced by endophytic fungi isolated from leaves of the plants Anthurium alcatrazense, Begonia venosa and B. fischeri. To this end, 5 endophytic fungal strains isolated from these plants (codes P7BDA1F2, P8BDA1F1, AM29, D28 and D29) were studied. The identification of these microorganisms was carried out by morphological and molecular analyzes, revealing that these strains are Hymenochaete-like, Trichoderma sp., Neopestalotiopsis sp., Aspergillus sp. and Diaporthe sp., respectively. From the crude extract of Hymenochaete-like (code P7BDA1F2) the compounds 5,7-dimethoxyphthalide and methyl orselinate were isolated, which were tested against Leishmania (L.) infantum and proteasome target and showed no activity. From the crude extract of Trichoderma sp. (code P8BDA1F1) the trilongins BI-BIV were isolated. These compounds presented inhibitory activity to the plant pathogen C. gloeosporioides, with MIC of 40, 320, 160 and 310 &mu;M, respectively. The trilongins BI-BIV were tested against the ChTL subunit of the proteasome and showed IC50 values of 6.5 ± 2.7, 4.7 ± 1.8, 6.3 ± 2.2, 2.7 ± 0, 5 &mu;M. The compounds were also tested ex vivo against the intracellular amastigotes of Leishmania (L.) infantum, but did not show selectivity. From the crude extract of Neopestalotiopsis sp. (code AM29), a compound with molecular mass 366.0570 Da (which can be unpublished in the literature) was isolated, which presented inhibitory activity to the plant pathogen P. sojae, with MIC of 312 &mu;g mL-1. From the crude extracts of Aspergillus sp. and Diaporthe sp. 9 compounds were isolated, whose precursor fractions showed activity against the biofilm forming bacteria S. aureus and P. aeruginosa. For the identification of these compounds, additional analyzes need to be performed. This is the first report of the isolation of the compounds 5,7-dimethoxyphthalide and methyl orselinate from the basidiomycete Hymenochaete-like. The antifungal activity of trilongins to C. gloeosporioides and against the proteasome target is also being reported for the first time, as well as the isolation of a possible new compound from Neopestalotiopsis sp. and its activity against P. sojae.

Atualmente a soja é uma das principais culturas de interesse econômico cultivadas no Brasil, sendo que o país configura como o segundo maior produtor da oleaginosa, ficando atrás apenas da produção obtida pelos Estados Unidos da América. Para se proteger essa alta produtividade e manter o Brasil em um cenário econômico competitivo, os produtores brasileiros utilizam diversos defensivos agrícolas. Destes, os fungicidas são principalmente utilizados de maneira preventiva, ou seja, sem a presença do patógeno alvo, isso ocorre principalemnte devido ao modo de ação dos princípios ativos disponíveis comercialmente na atualidade. Essa utilização preferencial de fungicidas de maneira preventiva, fez com que crescesce também o interesse pelo estudo dos efeitos, sejam eles positivos ou negativos, na fisiologia e bioquímica das plantas cultivadas. O presente experimento foi instalado em casa de vegetação no município de Holambra-SP, tendo por objetivo avaliar os efeitos fisiológicos e bioquímicos provocados pela aplicação dos fungicidas benzovindiflupir+azoxistrobina (STL+AZT) e protioconazol+trifloxistrobina (PTZ+TFS), na cultura da soja. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados contando com seis repetições cada. Os tratamentos com fungicidas utilizados foram: [T1] controle (testemunha); [T2] plantas que receberam aplicação de STL+AZT (30 + 60 g de ingrediente ativo por hectare), com adição do adjuvante Nimbus a 600 ml por hectare, conforme recomendação do fabricante; [T3] plantas que receberam aplicação de PTZ+TFS (70 + 60 g de ingradiente ativo por hectare), com adição do adjuvante Aureo a 400 ml por hectare, confrome recomendação do fabricante. Foram realizadas duas aplicações, sendo a primeira 42 dias após a emergência das plantas, quando estas se encontravam na fase de início de florescimento (R1) e a segunda com 15 dias de intervalo da primeira. Os tratamentos foram avaliados atraves de trocas gasosas, fluorescência da clorofila a e enzimas do sistema antioxidante. Não foram observadas alterações significativas na eficiência quântica potencial (Fv/Fm) e eficiência quântica máxima (Fv\'/Fm\') do fotossistema II (PSII) para nenhum dos fungicidas testados. Entretanto observou-se que a utilização de PTZ+TFS reduziu de maneira significativa no rendimento quântico efetivo do PSII (&Phi;PSII), na taxa aparente de transporte de elétrons (ETR) e na proporção de centro de reações do PSII \"abertos\" (qP), sendo que reduções na condutância estomática (gs), transpiração (E), taxa de assimilação de CO2 (A) e na velocidade máxima de carboxilação da rubisco (Vcmáx) também foram observadas quando se aplicou esse fungicida. Além das reduções observadas, constatou-se também que esse fungicida provoca uma elevação da temperatura foliar (Tf). Além dessas alterações fotoquímicas, foi também observado um aumento da atividade das enzimas dismutase da superoxido (SOD) e glutationa redutase (GR). Em contrapartida a utilização de STL+AZT aumentou &Phi;PSII, ETR e qP, assim como elevação em gs, E, Vcmáx e consequentemente em A também foram observados. / Currently soybean is one of the main crops of economic interest cultivated in Brazil, and the country is the second largest producer of this oilseed, behind only of the production obtained by the United States of America. In order to protect this high productivity and keep Brazil in a competitive economic scenario, brazilian growers use several agricultural pesticides. Among these pesticides, fungicides are mainly used in a preventative way, that is, without the presence of the target pathogen, this is mainly due to the mode of action of the currently commercially available active ingredients. This preferential use of preventative fungicides has also increased the interest in studying the effects, whether positive or negative, on the physiology and biochemistry of cultivated plants. The present experiment was carried out in a greenhouse in the municipality of Holambra-SP, Brazil, to evaluate the physiological and biochemical effects of the fungicides benzovindiflupir + azoxystrobin (STL+AZT) and prothioconazole + trifloxystrobin (PTZ +TFS) on soybeans. The experimental design was a randomized block design with six replicates each. The treatments with fungicides used were: [T1] control (control); [T2] plants receiving STL + AZT (30 + 60 g of active ingredient per hectare), with addition of the Nimbus adjuvant at 600 ml per hectare, according to the manufacturer\'s recommendation; [T3] plants receiving PTZ + TFS (70 + 60 g active in per hectare), with addition of the Aureo adjuvant at 400 ml per hectare, according to the manufacturer\'s recommendation. Two applications were performed, the first was 42 days after the emergence of the plants when they were in the begning of flowering (R1) and the second after 15 days of the first one. The treatments were evaluated through gas exchange, chlorophyll a fluorescence and antioxidant system enzymes. No significant changes were observed in the potential quantum efficiency (Fv/Fm) and the maximum quantum efficiency (Fv\'/Fm\') of photosystem II (PSII) for none of the fungicides tested. However, it was observed that the use of PTZ+TFS significantly reduced the effective quantum yield of PSII (&Phi;PSII), the apparent electron transport rate (ETR) , and reductions in stomatal conductance (gs), transpiration (E), CO2 assimilation rate (A) and the maximum rate of carboxylation of rubisco (Vcmáx) were also observed when applying this fungicide. In addition to the observed reductions, it was also verified that this fungicide causes a rise in leaf temperature (Tf). In addition to these photochemical alterations, an increased activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD) and glutathione reductase (GR) was also observed. In contrast, the use of STL + AZT increased &Phi;PSII, ETR and qP, as well as elevation in gs, E, Vcmax and consequently in A were also observed.

O controle da podridão parda do pessegueiro (Monilinia fructicola) é realizado essencialmente por aplicações preventivas de fungicidas, em sua maioria sistêmicos com modo de ação específico. O uso contínuo desses fungicidas pode levar à seleção de indivíduos resistentes ao ingrediente ativo e, consequentemente, à perda da eficiência do controle nos pomares. A evolução da população de isolados resistentes ao longo do tempo, na ausência do fungicida, pode ser prevista com estudos de habilidade competitiva entre isolados resistentes e sensíveis. Portanto, a quantificação da adaptabilidade (fitness) e da estabilidade, necessárias para caracterizar os isolados encontrados em campo, auxiliarão nas estratégias antirresistência. Embora a importância da determinação da adaptabilidade de isolados resistentes seja reconhecida, há poucos métodos descritos para a análise da habilidade competitiva. Assim, esse trabalho verificou a adaptabilidade, a estabilidade e a habilidade competitiva de isolados de M. fructicola com diferentes níveis de sensibilidade à azoxistrobina em experimentos in vitro e em frutos de pêssegos (in natura e enlatado) utilizando metodologias de avaliação diversas. A caracterização dos isolados foi realizada in vitro, in vivo e molecularmente. Foram avaliados o diâmetro da colônia e a esporulação in vitro; o período de incubação e de latência, a incidência e a severidade da doença e a esporulação in vivo dos isolados separadamente. Os dados de esporulação in vitro foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis e os dados de crescimento micelial ao teste de Tukey com 5% de probabilidade. Para a análise dos dados in vivo, utilizou-se a análise multivariada. Dez transferências em meio de cultura sem fungicida foram realizadas para o estudo da estabilidade de dois isolados resistentes (SP08435 e SP09839) e um sensível (PR09638). A esporulação, a porcentagem de germinação de conídios e o diâmetro da colônia dos isolados em meio de cultura com fungicida foram avaliados em quatro transferências (inicial, terceira, sexta e última transferência). A habilidade competitiva foi verificada pela evolução da porcentagem de indivíduos resistentes no tempo entre um isolado resistente (SP09839) e um sensível à azoxistrobina (PR09638). Modelos lineares ou modelos lineares generalizados (GLM) foram utilizados para descrever o progresso da proporção do isolado resistente ao longo do tempo. Os isolados resistentes exibiram esporulação in vitro e taxa de crescimento micelial semelhantes aos sensíveis, além de apresentarem-se no mesmo grupo de similaridade que os isolados sensíveis. Nenhuma mutação no cyt b foi associada à resistência de M. fructicola à azoxistrobina (G143A, G137R, e F129L) e em todos os isolados foi observado o íntron antes do códon 143. Mesmo após 10 transferências em meio de cultura sem fungicida, os isolados resistentes à azoxistrobina não reduziram sua sensibilidade nem sua capacidade de esporulação e crescimento fora do pêssego. Independentemente da metodologia utilizada para avaliar a habilidade competitiva, a resistência à azoxistrobina não correspondeu a um custo adaptativo para M. fructicola, pois a proporção do isolado resistente manteve-se inalterada ao longo das transferências. O uso de pêssego enlatado é recomendado na substituição de frutos in natura para experimentos de habilidade competitiva. / Control of brown rot in peaches (caused by Monilinia fructicola) is mainly by preventive applications of fungicides, mostly single-target site. Repeated use of these fungicides can, however, select for resistant pathogen populations, which may result in failure of disease control. The evolution of resistant isolates in a population over time can be predicted with competitive ability assays between sensitive and resistant isolates. Therefore, studies quantifying pathogen fitness and stability are necessary to characterize field isolates and improve anti-resistant strategies. However, there are limited reports concerning the methodology used in competitive ability assays. This study determined the fitness of M. fructicola isolates with different levels of sensitivity to azoxystrobin in trials in vitro and in vivo (in natura and canned peaches) with different monocyclic components. Isolates characterization were carried out in vitro, in vivo and molecularly. Mycelial growth rate and sporulation were estimated in vitro, and disease incidence, severity, lesion sporulation, incubation and latent period were evaluated in peach fruit for sensitive and resistant isolates. Sporulation in vitro data were analyzed by Kruskal-Wallis test and mycelial growth rate with the Tukey test at 5% probability. For the in vivo experiments, multivariate analysis were carried out. Ten consecutive transfers on non-amended media were conducted to determine the stability of isolates (two resistant and one sensitive). Sporulation, percent spore germination and colony diameter on azoxystrobin amended media were also evaluated four times (the first, the third, the sixth and the last transfer). Competitive ability was investigated by testing the percentage increase of resistant individuals five generations after inoculation with a mix of azoxystrobin sensitive and resistant isolates. The competitive ability of sensitive and resistant isolates were compared with different variables as colony-forming unit and spore germination. Linear or generalized linear models (GLM) were adjusted to compare the progress of resistant isolates over time. All resistant isolates had in vitro sporulation and mycelial growth rate similar to sensitive isolates. All isolates sequenced presented an intron close to codon 143 and did not have any of the point mutations commonly associated with resistance to QoI fungicides (G143A, G137R, and F129L). After 10 transfers in PDA, colony diameter of resistant isolates was not reduced in azoxystrobin-amended media with 1 &mu;g.ml-1 nor was their sporulation in vitro For all parameters used to measure competitive ability, no fitness cost was associated to M. fructicola isolates resistant to azoxystrobin. Canned peach is a viable option for studies aiming to determine fitness cost of resistant isolates.