Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Priscilla Brito Oliveira (priscilla.b.oliveira@gmail.com) on 2009-11-13T22:24:33Z No. of bitstreams: 1 2006_Rosângela Vieira de Andrade.pdf: 1964649 bytes, checksum: 02d5cbead8298816e470ce3372c02313 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-02-25T23:59:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Rosângela Vieira de Andrade.pdf: 1964649 bytes, checksum: 02d5cbead8298816e470ce3372c02313 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-02-25T23:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Rosângela Vieira de Andrade.pdf: 1964649 bytes, checksum: 02d5cbead8298816e470ce3372c02313 (MD5) Previous issue date: 2006-06 / Paracoccidioides brasiliensis, um fungo dimórfico, termo-regulado, é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica de alta prevalência na América Latina. Presume-se que a sua patogenicidade seja uma conseqüência do processo de diferenciação celular, da forma de micélio para a de levedura, que ocorre neste fungo durante a infecção humana. O presente trabalho iniciou-se com o Projeto Genoma Funcional e Diferencial do P. brasiliensis, no qual foram seqüenciadas 25.597 Expressed Sequence Tags (ESTs). Destas, 19.718 ESTs possuíam PHRED 20 e foram agrupadas em 6.022 grupos (genes), dos quais 2,655 eram contigs (grupos com mais de uma EST) e 3,367 eram singlets (grupos com apenas uma EST). Os 6,022 grupos representam aproximadamente 80% do genoma estimado deste fungo. Estes genes foram anotados e categorizados funcionalmente (MIPS) de acordo com o processo celular no qual estavam envolvidos: virulência (28 genes), genes potencialmente envolvidos em alvos para drogas (17 genes), vias de transdução sinal (37 genes), transportadores tipo MDR (multidrugs resistence) (20 genes), genes de choque térmico (48 genes) e estresse oxidativo (23 genes), entre outros. Genes diferencialmente expressos em células de micélio e levedura foram identificados usando duas metodologias de análises da expressão gênica em larga escala: subtração in silico e microarranjos de cDNA. A subtração in silico foi baseada no cálculo do número de ESTs de micélio e de levedura em cada contig. Contigs formados por 100% da mesma forma ou por um número maior de ESTs em uma das fases foram considerados diferencialmente expressos. Esta análise indicou 417 genes diferencialmente expressos, sendo 178 de micélio e 239 de levedura. Para os microarranjos de cDNA, 1.152 genes foram selecionados, sendo 565 contigs formados por 6 ou mais ESTs de micélio e levedura, 39 contigs formados por 2, 3, 4 ou 5 ESTs exclusivos de micélio ou levedura e 548 singlets que apresentavam anotação funcional. Nos microarranjos, os fragmentos de cDNA foram amplificados por PCR e hibridados com RNA total das duas formas. Destes genes, 328 mostraram-se diferencialmente expressos, sendo 58 de micélio e 270 de levedura. Estas duas estratégias identificaram 110 genes diferencialmente expressos em micélio e levedura. Dentre estes, foram selecionados para análise os genes classificados em três categorias MIPS. Na categoria metabolismo, foram selecionados 12 genes, sendo 5 (icdh, scs, tal, adk, udk) mais expressos em micélio e 7 (icl, acylcs, pdh, adh, papsr, aca, amt) mais expressos em levedura. Na categoria metabolismo e transporte de íons, foram selecionados 5 genes, sendo 2 (chs, ats) da via de síntese de novo de cisteína do metabolismo de enxofre e 3 (isc, ktp, pct) envolvidos no transporte de íons. Na categoria controle e organização celular - parede celular, membrana e citoesqueleto, foram selecionados 5 genes: ags, pcd, vrp bgl e hex. O caráter diferencial de todos estes genes foi confirmado por experimentos de northern blot. Estas análises mostraram que: células de micélio apresentam uma tendência para o metabolismo aeróbico enquanto um metabolismo anaeróbico é sugerido para as células de levedura; a super expressão em levedura dos genes que codificam as enzimas ATP sulfurilase, APS quinase, PAPS redutase e coline sulfatase, pertencentes ao metabolismo de enxofre, mostram a importância do enxofre orgânico para os processos de crescimento e diferenciação deste patógeno; a expressão diferencial de genes envolvidos na organização celular é essenciais para o processo de diferenciação celular, virulência e conseqüentemente patogenicidade de P. brasiliensis. Neste contexto, o conjunto das informações geradas neste trabalho fornece novos caminhos para o entendimento da transição dimórfica do P. brasiliensis, bem como identifica novos genes importantes para a virulência/patogenicidade deste fungo, que constituem potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Priscilla Brito Oliveira (priscilla.b.oliveira@gmail.com) on 2009-11-19T11:12:03Z No. of bitstreams: 1 2006_Saulo José Linhares de Siqueira.pdf: 1655265 bytes, checksum: 8e88bcc077de7db3a8c96fb0dd47d4ce (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2010-03-17T15:59:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Saulo José Linhares de Siqueira.pdf: 1655265 bytes, checksum: 8e88bcc077de7db3a8c96fb0dd47d4ce (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-17T15:59:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Saulo José Linhares de Siqueira.pdf: 1655265 bytes, checksum: 8e88bcc077de7db3a8c96fb0dd47d4ce (MD5) Previous issue date: 2006-03 / Humicola grisea var. thermoidea é um fungo termofílico que apresenta um sistema celulolítico com potencial para aplicação em processos de degradação de material lignocelulósico para produção de etanol. O crescente interesse nesse combustível e a abundância de materiais lignocelulósicos que podem ser usados como matéria-prima (como rejeitos agrícolas) fez aumentar o interesse no estudo de celulases. A expressão de celulases em S. cerevisiae é interessante pois esse microrganismo pode ser utilizado diretamente em processos de sacarificação e fermentação simultâneas (SSF) para produção de etanol. Anteriormente os cDNA da cbh1.2 e bgl4 de H. grisea var. thermoidea foram expressos em levedura. Neste trabalho o cDNA do gene de egl2 desse fungo foi amplificado por RT-PCR e clonado no vetor de expressão pAAH5 de Saccharomyces cerevisiae. Este vetor foi utilizado para transformar a linhagem MFL de S. cerevisae com genótipo leu2-. A atividade enzimática dos transformantes foi detectada por ensaio com Congo Red em placas contendo carboximetilcelulose (CMC) como substrato. A endoglicanase 2 de H. grisea var. thermoidea foi expressa em S. cerevisiae sob controle do promotor ADH1 e a levedura produziu a enzima em sua forma ativa. A enzima EGL2 recombinante possui massa molecular de 55 kDa e sua atividade enzimática foi caracterizada. Essa enzima apresentou atividade ótima em pH 5,0 e em temperaturas entre 50 e 60° C. EGL2 manteve aproximadamente 80% de sua atividade após pré-incubação a 50 °C por 6 horas, mostrando-se estável nessa temperatura. A enzima apresentou atividade sobre papel de filtro e atividade significativa sobre celulose microcristalina. Esta enzima foi capaz de hidrolisar o substrato sintético MUC, indicando que a enzima tem atividade sobre pequenos celo-oligossacarídeos. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Humicola grisea var. thermoidea is a thermophilic fungus that produces high levels of cellulases which has high potential for use in lignocellulose degradation for ethanol production. With the increasing interest on this fuel and the amount of lignocellulosic wastes that can be used as raw material, new cellulases are characterized each day. Strains of S. cerevisiae expressing cellulases can be used in simultaneous saccharification and fermentation process (SSF) for ethanol production. Previously, cbh1.2 and bgl4 cDNAs from H. grisea var. thermoidea was expressed in yeast. In this work, egl2 cDNA from this fungus was obtained by RT-PCR and inserted into a Saccharomyces cerevisiae expression vector. The resulting molecular construction was introduced into a leu2 S. cerevisiae strain. Enzymatic activity in the transformants were detected by the Congo red assay using carboxymethil cellulose (CMC) as substrate. Endoglucanase 2 from H. grisea var. thermoidea was expressed in S. cerevisiae under the control of ADH1 promoter and the enzyme was in its active form. Recombinant EGL2 presented a molecular mass of 55 kDa. This enzyme has an optimal pH of 5.0 and optimal temperatures between 50 and 60 °C. Recombinant EGL2 retained 80% of the initial activity after incubation at 50 °C up to 6 hours. The enzyme showed high activity toward filter paper and significantly activity toward microcrystalline cellulose. The activity toward the synthetic substrate MUC was observed, indicating that this enzyme can hydrolize small cellooligosaccharides.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-02T19:14:30Z No. of bitstreams: 1 2009_CalliandraMariadeSouzaSilva.pdf: 1487096 bytes, checksum: d710a5d028048014f75d9399e8d27530 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-02T22:57:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_CalliandraMariadeSouzaSilva.pdf: 1487096 bytes, checksum: d710a5d028048014f75d9399e8d27530 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-02T22:57:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_CalliandraMariadeSouzaSilva.pdf: 1487096 bytes, checksum: d710a5d028048014f75d9399e8d27530 (MD5) Previous issue date: 2009 / O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM) – a micose sistêmica mais comum na América Latina. O tratamento é prolongado e traz severos efeitos secundários. Além disso, a resistência a medicamentos usados tem sido demonstrada em P. brasiliensis. O farnesol, conhecido componente de óleos essenciais, exerce um papel crítico no quorum-sensing e na virulência de Candida albicans. Dados da literatura relataram um efeito antimicrobiano do farnesol para diversos microrganismos. O efeito fungicida deste composto, bem como seu papel no retardo da transição dimórfica do isolado Pb18, pertencente à espécie críptica S1 de P. brasiliensis, foi descrito recentemente por nosso grupo de pesquisa. Neste trabalho estendemos esta análise para representantes de outras espécies crípticas, o isolado Pb01 do grupo “Pb01-like” e o isolado Pb3 do grupo PS2. Em concordância com nossos estudos prévios, confirmamos o efeito fungicida para estes dois outros isolados de P. brasiliensis. A concentração inibitória mínima (MIC90) de farnesol, que inibe 90% do crescimento de P. brasiliensis, tanto para o isolado Pb01 quanto para o isolado Pb3 é de 20μM, enquanto a concentração letal mínima (MLC90) de farnesol para o isolado Pb01 é de 30μM e para o isolado Pb3 é de 40μM. Neste trabalho, analisando o efeito do farnesol na transição dimórfica dos isolados Pb01 e Pb3, observamos que este também retarda a transição de levedura para micélio destes dois isolados. Diante da expectativa de uso deste sequisterpeno como um adjuvante terapêutico, analisamos o seu efeito em associação com alguns antifúngicos empregados no tratamento da PCM. Nossos dados indicam uma ausência de efeito sinergístico entre o farnesol e os antifúngicos da família dos azóis (fluconazol e cetoconazol), além de um possível efeito protetor para o fungo quando associado a uma dada faixa de concentração (0,0312 a 0,125μg/mL) de anfotericina B. Estes resultados sugerem, fortemente, que o farnesol não deve ser utilizado como um adjuvante terapêutico no tratamento da PCM sistêmica. Uma vez que dados da literatura descreveram a indução de apoptose em Aspergilus nidulans pelo farnesol, analisamos a expressão de alguns genes de P. brasiliensis relacionados a este processo. Nenhuma alteração significativa no padrão de expressão dos genes analisados foi observada. No entanto, ainda não podemos descartar a possível ativação deste processo de morte celular em P. brasiliensis em resposta ao tratamento com farnesol. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM) – the most prevalent systemic mycosis in Latin America. Its treatment is usually long and frequently results in several side effects. Besides, some isolates of P. brasiliensis have developed resistance to many of the anitimicribial agents used. Farnesol, a known component of essential oils, is a quorumsensing molecule and a virulence factor of Candida albicans. It was demonstrated that farnesol exerts an antimicrobial activity in a number of microorganisms. The fungicide effect of this compound, as well as its role in the delay of the dimorphic transition in the isolate Pb18, belonging to the S1 cryptic species of P. brasiliensis, has been recently describe by our research group. In this work, we expanded our analyzes to other cryptic species of P. brasiliensis found in Brazil, namely the isolates Pb01 from “Pb01-like” group and Pb3 from the PS2 cryptic species. In accordance to our previous results, we confirmed the fungicide effect of farnesol in the other two isolates of P. brasiliensis. The minimum inhibitory concentration (MIC90) of farnesol, the concentration that inhibits 90% of growth, was 20μM for both isolates, while the minimum lethal concentration (MLC90) of farnesol were 30μM and 40μM for the isolates Pb01 and Pb3, respectively. Additionally, in this study it was also analyzed the effect of farnesol on the dimorphic transition of the isolates Pb01 and Pb3, which results also reveal that farnesol promotes a delay in the transition from yeast to mycelium of these isolates. Based on its fungicide activity, the use of farnesol has been proposed as a possible adjuvant in the treatment of bacterial and fungal diseases. In this sense, we analysed its effect in association with some fungicides commonly used in the treatment of PCM. Nonetheless, we found an absence of synergism between farnesol and the azole family of fungicides (fluconazole and ketoconazole). Curiously, a protective effect to the fungus was observed when farnesol was associated to amphotericin B in concentrations of 0,0312 to 0,125μg/mL. These results suggest that farnesol should not be used as therapeutic adjuvant in the treatment of PCM. The effect of farnesol as an apoptosis inducer in Aspergillus nidulans was described. In this context, we analysed the expression of some P. brasiliensis’ genes related to the process of programmed cell death. Although no significant alteration was observed in the gene expression pattern, the possible role of farnesol in inducing apoptosis in P. brasiliensis cannot be ruled out.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2010-03-25T19:07:34Z No. of bitstreams: 1 2009_HugoCostaPaes.pdf: 1466586 bytes, checksum: 1606d978954121d718e5bb816fef2e6e (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T13:59:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_HugoCostaPaes.pdf: 1466586 bytes, checksum: 1606d978954121d718e5bb816fef2e6e (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T13:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_HugoCostaPaes.pdf: 1466586 bytes, checksum: 1606d978954121d718e5bb816fef2e6e (MD5) Previous issue date: 2009-02-20 / O presente trabalho foi o primeiro a caracterizar o fator de choque térmico (Hsf) em um fungo patogênico para humanos. O gene de Paracoccidioides brasiliensis isolado 01 (Pb01) teve sua seqüência determinada e analisada por ferramentas de bioinformática. Constatou-se que os domínios regulatórios da proteína são divergentes dos de Saccharomyces cerevisiae e similares aos de outros membros da superclasse Eurotiomycetidae, sugerindo especialização evolutiva. O cistron do Hsf de Pb01 foi clonado num vetor epissomal de expressão em S. cerevisiae, e a clonagem do plasmídio resultante na levedura foi capaz de resgatar a perda do gene nativo, que normalmente seria letal. Isso comprova que a proteína de P. brasiliensis reteve seu papel funcional. Uma varredura computacional de promotores de Pb01, em busca de elementos de resposta ao choque térmico (HSE), resultou na constatação de que uma diversidade de genes maior que a vista em levedura contém HSEs em suas regiões regulatórias, embora sejam necessários estudos funcionais para confirmar esse achado. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This work is the first to characterise the heat shock factor (Hsf) in a fungal pathogen of humans. The gene of Paracoccidioides brasiliensis isolate 01 (Pb01) had its sequence determined and analysed by bioinformatics tools. Its regulatory domains are distinct from those of the Hsf from Saccharomyces cerevisiae and similar to those of other Eurotiomycetidae, suggesting evolutionary specialisation. The cistron of the Pb01 Hsf was cloned into an episomal expression vector for S. cerevisiae, and the final construct was able to rescue the otherwise lethal loss of the native gene in yeast, thus proving that the Pb01 protein retained its function. A computational screening of Pb01 promoters for heat shock 7 elements (HSE) showed that a greater proportion of genes contains these regulatory regions than in budding yeast. However, functional studies will be necessary to confirm this finding.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-05-05T17:59:58Z No. of bitstreams: 1 2009_MiriandeAlmeidaCosta.pdf: 2348662 bytes, checksum: 4b8ef6174a1bbbaa174884e3b1acd778 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-06T17:21:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_MiriandeAlmeidaCosta.pdf: 2348662 bytes, checksum: 4b8ef6174a1bbbaa174884e3b1acd778 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-06T17:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_MiriandeAlmeidaCosta.pdf: 2348662 bytes, checksum: 4b8ef6174a1bbbaa174884e3b1acd778 (MD5) Previous issue date: 2009 / No presente estudo, amostras de madeiras de marupá (Simarouba amara Aublet.) e andiroba (Carapa guianenis Aublet.), foram submetidas ao ataque dos fungos Trametes versicolor (Linnaeus ex Fries) Pilát (podridão branca) e Gloeophylum trabeum (Persoon ex Fries) Murrill (podridão parda). O objetivo do trabalho foi caracterizar o apodrecimento de madeiras através de técnicas alternativas, não-destrutivas. A colorimetria foi utilizada para determinar as cores das madeiras antes e após o ataque dos fungos, utilizando o Sistema CIELAB 1976. Para acompanhar a variação do teor dos compostos químicos nas amostras foi utilizada a técnica de espectroscopia de refletância difusa no infravermelho médio com transformada de Fourier. As madeiras de marupá e andiroba foram consideradas não resistentes ao fungo de podridão branca, com perdas de massa de 63,88 e 51,33% respectivamente; para o fungo de podridão parda, a andiroba foi considerada resistente, e o marupá, não resistente, com perdas de massa de 17,51 e 52,96% respectivamente. Ambas as espécies de madeira se apresentaram mais escuras após o ataque do fungo Gloeophyllum trabeum de podridão parda, com o marupá apresentando L* = 31,07, a*=5,40, b* = 10,48, C* = 11,84 e h* = 62,22 e a andiroba apresentando L* = 26,69, a*=4,52, b* = 6,19, C*=7,97 e h* = 50,44. Após o ataque do fungo Trametes versicolor a madeira da andiroba apresentou-se mais clara, com L* = 41,22, a* = 8,43, b* = 14,17, C*= 16,51 e h* = 59,27; o marupá escureceu ligeiramente, apresentando L* = 51,88, a* = 4,99, b* = 20,45, C*=21,05 e h* = 76,30. A análise dos espectros de infravermelho mostrou que em ambas as espécies de madeira houve uma redução na intensidade das bandas de celulose, hemicelulose e lignina após o ataque do Trametes versicolor, e uma redução na intensidade da banda de celulose após o ataque do Gloeophyllum trabeum. De uma forma geral, as técnicas da colorimetria e do infravermelho médio mostraram-se eficientes para a caracterização do ataque dos fungos nas madeiras de marupá e andiroba. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In the present study wood samples of marupá (Simarouba amara Aubl.) and andiroba (Carapa guianenis Aubl.) were submitted to Trametes versicolor (Linnaeus ex Fries) Pilát (white rot) and Gloeophylum trabeum (Persoon ex Fries) Murrill (brown rot) fungi. This research aimed to characterize the wood decaying using nondestructive alternative techniques. Colorimetry was used to determine the color of the woods after and before wood decaying fungi using the CIELAB 1976 system. To evaluate the changes in chemical compounds levels in the wood samples the diffuse reflectance medium infrared Fourier transform spectroscopy was used. Samples of marupá and andiroba was non resistant against white rot fungi with a weight loss of 63.88 and 51.33% respectively; and against brown rot fungi attack andiroba was resistant and marupá was considered non resistant, with a weight loss of 17.51 and 52.96% respectively. Both wood species were darker after the brown rot fungi Gloeophyllum trabeum, where marupa presented L* = 31,07, a*=5,40, b* = 10,48, C*=11,84 and h* = 62,22 and andiroba presented L* = 26,69, a*=4,52, b*=6,19, C* = 7,97 and h* = 50,44. After the white rot fungi Trametes versicolor attack, the andiroba wood was lighter, with L* = 41,22, a* = 8,43, b* = 14,17, C*= 16,51 and h*=59,27; the marupa was slightly darken, with L* = 51,88, a* = 4,99, b* = 20,45, C*=21,05 and h* = 76,30. The analisys showed a reduction in the peak intensity of cellulose, hemicellulose and lignin, for both species, after T. versicolor attack and a reduction in the peak intensity of cellulose after G. trabeum attack. In general colorimetry and medium infrared spectroscopy techniques were efficient to characterize both fungi attack in marupá and andiroba wood samples.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-07-12T18:42:51Z No. of bitstreams: 1 2009_AnselmoResende.pdf: 2705302 bytes, checksum: 598be20abed7e9478b176c2f5cb3e174 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-07-18T21:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_AnselmoResende.pdf: 2705302 bytes, checksum: 598be20abed7e9478b176c2f5cb3e174 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-18T21:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_AnselmoResende.pdf: 2705302 bytes, checksum: 598be20abed7e9478b176c2f5cb3e174 (MD5) Previous issue date: 2009 / A soja [Glycine max (L) Merril] é um produto de grande expressão na economia mundial em função de seu conteúdo nutricional e uso múltiplo. O seu cultivo constante tem levado ao aparecimento de doenças que tem comprometido a produtividade e qualidade do produto. O oídio (Erysiphe diffusa (Cooke & Peck)) e a ferrugem asiática (Phakopsora pachyrhizi (Syd. & P. Syd)) estão dentre os principais problemas fitossanitários da cultura. Este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de uso do hipoclorito de sódio como redutor dessas doenças na soja. Foi verificada a ação do hipoclorito de sódio nas concentrações de 0,2%, 0,4% e 0,6%, como fungicida, no combate a ambos os patógenos e sua possível influência na absorção de minerais. A solução 0,6% foi eficiente no combate ao oídio na entressafra de 2008 e todas as demais concentrações sem aplicação do fungicida mostraram resultados eficientes na safra 2008/2009. Em relação à ferrugem asiática, as concentrações utilizadas mostraram-se ineficientes. O tratamento 0,2% + fungicida reduziu a absorção de cobre na safra 2008/2009 enquanto o tratamento 0,6% + fungicida aumentou a concentração de silício na safra de 2008. São necessários mais estudos no sentido de verificar outras concentrações de hipoclorito de sódio, aumentando o espectro de ação do produto e seu efeito sobre outras pragas e avaliar a composição nutricional do produto final. Com isso, procura-se despertar o interesse dos produtores por produtos alternativos no sentido de se reduzir a utilização de defensivos agrícolas. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Soybean [Glycine max (L) Merril] is a crop with great world economic expression due to its nutritional content and multiple usages. Its constant cultivation has lead to the development of many diseases affecting yield and quality. Powdery mildew (Erysiphe diffusa (Cooke & Peck)) and asian soybean rust (Phakopsora pachyrhizi (Syd. & P. Syd)) are among the most important diseases of this particular crop. This research was carried out aiming to evaluate the potential use of sodium hypochlorite as a reducing factor of these diseases in the crop. Concentrations of sodium hypochlorite of 0,2%, 0,4% and 0,6%, as a fungicide, and a possible decrease in nutrients uptake by the crop were evaluated. The concentration of 0,6% was efficient in the control of powdery mildew in the winter season of 2008 and the other doses, with no fungicide, were also efficient on 2008/2009 crop season. Considering asian rust, the concentrations used were inefficient for disease control. The treatment with 0,2% + fungicide reduced absorption of cupper in 2008/2009 season. The treatment of 0,6% + fungicide increased silicon uptake in 2008 winter season. More studies are necessary aiming to evaluate different concentrations of sodium hypochlorite, increasing the action spectrum of the product and its effects on other pests and also the nutritional content of the final product. This should be done to call farmers attention to control alternative methods and reduce pesticides use in this particular crop.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-10-24T17:57:02Z No. of bitstreams: 1 2006-Gina Camilo de Oliveira.pdf: 655367 bytes, checksum: 40e91312e15ca06d389e0b1649a314b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-10-27T23:55:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Gina Camilo de Oliveira.pdf: 655367 bytes, checksum: 40e91312e15ca06d389e0b1649a314b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-27T23:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Gina Camilo de Oliveira.pdf: 655367 bytes, checksum: 40e91312e15ca06d389e0b1649a314b9 (MD5) / O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica e endêmica na América Latina. Estima-se que 10 milhões de indivíduos estejam infectados, mas apenas 2% desenvolvem a doença. A forma miceliana encontrada na natureza constitui a fase infectiva que diferencia para a forma de levedura no pulmão humano estabelecendo a infecção. O fungo promove uma resposta imunitária mediada por células e uma resposta inflamatória no pulmão. Os macrófagos são células efetoras do sistema imunitário que reconhecem e eliminam patógenos invasores. Inicialmente identificada como uma citocina de linfócitos T, o fator inibitório de macrófago (MIF) é também uma citocina do macrófago e atua como um importante mediador da inflamação, devido às suas características imunomodulatórias. MIF apresenta atividade enzimática de tautomerase, conferida pelo aminoácido Prolina conservado na posição 2 e também tem uma participação importante no ciclo celular por meio da inibição da apoptose ao inativar p53. O Projeto Genoma Funcional e Diferencial de P. brasiliensis realizado no Laboratório de Biologia Molecular da Universidade de Brasília junto à Rede Genoma Centro-Oeste permitiu a geração de ESTs (do inglês “Expressed Sequence Tags”) a partir de bibliotecas de cDNA das formas de micélio e levedura de P. brasiliensis. Não há relatos na literatura de homólogos de MIF em fungos, porém, no genoma do P. brasiliensis foi descrito uma seqüência que possui similaridade gênica significativa com o MIF de mamíferos, indicando um envolvimento potencial na patogênese do P .brasiliensis. O fragmento encontrado (contig 1528: pbmif) é de aproximadamente 400 pares de bases, diferencialmente expresso na fase de levedura de P.brasiliensis. MIF é uma proteína que possui homólogos em plantas, nematóides e vertebrados. O objetivo desse trabalho é identificar e caracterizar possíveis clones de cDNA (PbMIF) homólogos a MIF isolado da biblioteca de P. brasiliensis. Um clone de cDNA de MIF foi seqüenciado e identificado como similar a MIF humano. A expressão do mRNA é diferencial em levedura, como detectado por Northern Blot. A sequência de aminoácidos de MIF do P. brasiliensis tem similaridade de 56% (32% de identidade) com o MIF de Mus musculus. Para a produção da proteína recombinante em Escherichia coli, o cDNA de MIF foi clonado no vetor de expressão (pET21). A detecção e caracterização de um homólogo de fator inibitório de macrófago (MIF) no P. brasiliensis é um relato inédito descrito em fungos e o papel de MIF mimetizando uma citocina pode revelar novos fatores de virulência para a infecção pelo P. brasiliensis. Portanto, pela coevolução com o sistema imunitário, patógenos poderiam desenvolver relevantes estratégias para evasão das defesas do hospedeiro desenvolvendo moléculas homólogas a citocinas, como seria o caso do MIF de P. brasiliensis. O papel do MIF de P.brasiliensis é desconhecido, assim sua caracterização favorecerá o desenvolvimento de informações sobre o mecanismo de patogenicidade do fungo . _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a fungal disease that is endemic in Latin America. This infection affects 10 million individuals but only 2% develop the disease. The mycelia found in nature constitute the infective phase that differentiates to yeast form in the human lungs to establish the infection. The fungus promotes a cell mediated immune and inflammatory pulmonary response. Macrophages are pivotal effector cells of the innate immune system, recognizing and eliminating invasive microbial pathogens. Initially identified as a T-cell cytokine, the Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) is also a macrophage cytokine and an important mediator of inflammation, it has immunomodulatory characteristics. MIF has enzymatic activity relationed to the Nterminal proline residue in the position 2 and MIF can inhibit apoptosis through the inactivity of p53. From the project “Functional and Differential Genome of P. brasiliensis” ESTs (Expressed Sequence tags) database we discover a putative fungi homologue to the mammalian MIF. There are no previous reports in the literature of MIF homologues in fungi, however the sequence described in the genome of P. brasiliensis has sequence similarity to MIF genes found in animal, nematode and plant. The aim of this work is to investigate the gene encoded by the Pb MIF homolog in order to characterize its coding sequence and predicted polypeptide and characterize the differential expression. A MIF related cDNA clone was fully sequenced and the predicted MIF homolog was identified. The mRNA expression is restricted to the yeast form, as detected by Northern Blot. Sequence analysis indicated that the predicted amino acid sequence has a similarity of 56% (32% identical) with the MIF of Mus musculus. The Pb MIF CDS (coding sequence) was subcloned into bacterial expression vector (pET21) fused to a histidine tag. This CDS was expressed in Escherichia coli to produce recombinant protein. We have detected and characterized a Pb MIF putative homolog. This is the first report of a MIF homolog among fungi and its role as a cytokine mimetic may reveal new virulent factors for P. brasiliensis infection. During the co-evolution with immune system, pathogens must had developed relevant strategies of evasion of host response. Though incorporating cytokines homologs may be a successful strategy for P. brasiliensis infection. The Pb MIF homolog may be part of an unknown strategy for P. brasiliensis survival inside the mammalian host.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Patologia Molecular, 2010. / Submitted by Jadiana Paiva Dantas (jadi@bce.unb.br) on 2011-06-30T00:12:53Z No. of bitstreams: 1 2010_ LauraMariaBarbosaGoncalves.pdf: 1387249 bytes, checksum: 55e77b2f20ba208c8e0b1f186285b97d (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-07-14T22:29:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_ LauraMariaBarbosaGoncalves.pdf: 1387249 bytes, checksum: 55e77b2f20ba208c8e0b1f186285b97d (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-14T22:29:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_ LauraMariaBarbosaGoncalves.pdf: 1387249 bytes, checksum: 55e77b2f20ba208c8e0b1f186285b97d (MD5) / Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), doença granulomatosa crônica que acomete principalmente os pulmões, pele, mucosas e linfonodos. O fungo P. brasiliensis apresenta dimorfismo termo-dependente, desenvolvendo-se na forma de levedura em vida parasitária ou quando cultivado em meios de cultura a 37ºC. A adesão e invasão de células são eventos essenciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. A ativação adequada dos macrófagos alveolares e a expressão de genes que ativam os mecanismos microbicidas dos macrófagos são elementos chaves na erradicação desta doença. Dados previamente descritos na literatura demonstram que a fração F1 isolada do fungo, cujo principal componente é a β-1,3-glicana, é um importante imunomodulador, promovendo o recrutamento de células inflamatórias e estimulando a produção de citocinas pró-inflamatórias incluindo o Tnf-α. Outro componente importante na interação entre o hospedeiro e o fungo é a fração F2, constituída pela α-1,3-glicana que está comumente relacionada à virulência. A mudança na composição da parede celular durante a infecção, como ocorre em P. brasiliensis, pode ser considerada como um mecanismo de escape da resposta imune inata. Com o objetivo de compreender melhor os eventos iniciais desse processo infectivo, o RNA total dos macrófagos tratados e não tratados foram analisados por meio do RT-PCR em Tempo Real avaliando a expressão de genes chaves TNF-α e Cxcl4 (pró-inflamatórios), CD14, Clec2 e Itga5 (proteínas de membrana), Stat6 (transdução de sinal), Nfkb e Nfkr (regulação transcricional), Toll2 e Toll4 (receptores de reconhecimento padrão), MyD88 (molécula adaptadora) envolvidos no processo inflamatório utilizando macrófagos alveolares-MHS numa cinética de interação de 6, 24 e 48 horas com P. brasiliensis e seus componentes de parede. O estudo revelou a indução de genes responsáveis por processos quimiotáticos que facilitam a adesão célula-célula e genes relacionados à internalização e adesão do patógeno como Clec2, sendo importante no intenso recrutamento de fagócitos para o sítio da infecção. Os genes dos receptores de reconhecimento padrão (Toll2, Toll4) e a molécula adaptadora MyD88, não apresentaram um papel relevante no sentido do estabelecimento da imunidade protetora contra o P. brasiliensis. Desta forma este trabalho revelou a indução de genes que codificam para proteínas que irão participar do processo de inflamação tais como migração celular e ativação da capacidade microbicida dos macrófagos, principalmente durante o estágio inicial da cinética de interação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Paracoccidiodes brasiliensis is the agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic granulomatous disease that affects mainly the lungs, skin, mucous membranes and lymph nodes. The fungus P. brasiliensis shows thermo dependent dimorphism, growing as yeast in parasitic life or when cultured in medium at 37°C. The adhesion and invasion of host cells are essentials events involved in infection and dissemination of pathogen. The adequate activation of alveolar macrophages and expression of genes that activate the microbicidal mechanisms of macrophages are key elements in the eradication of this disease. Data previously reported demonstrated that the F1 fraction extracted the fungus, whose the major component is the β-1,3-glucan, is an important immunomodulator by promoting the inflammatory cells recruitment and stimulating the proinflammatory cytokines production, including TNF–α. Another important component in interaction of host and fungus is the fraction F2, consisting of α-1,3-glucan, that is usually associated with virulence. The change in cell wall composition during infection, as occurs in P. brasiliensis, can be considered as escape mechanism to innate immune response. In order to better understand the initial events of this infectious process, total RNAs of macrophages treated and non-treated were analyzed by Real-Time RT-PCR and were evaluated the key genes TNF-α and Cxcl4 (proinflamatory), CD14, Itga5 and Clec2 (membrane proteins), STAT6 (signal transduction), NFkB and Nfkr (transcriptional regulation), Toll2 and Toll4 (pattern recognition receptors), MyD88 (adapter molecule) expression involved in inflammatory process. In these experiments were used alveolar macrophages (MHS) incubated with P. brasiliensis and its wall components, in the interaction kinetics (6, 24 and 48 hours). The study demonstrated gene induction involved in chemotaxis processes, which facilitate cell-cell adhesion, and gene induction related to pathogen internalization and adherence, as Clec2, that triggers intense phagocytes recruitment to the infection site. The genes of pattern recognition receptors (Toll2, Toll4) and the adapter molecule MyD88, did not show significant role towards establishment of protective immunity against P. brasiliensis. Thus this study revealed induction of genes that code for proteins that will participate in the process of inflammation such as cell migration and activation of microbicide activity of macrophage, especially during the initial stage of the kinetic of interaction.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-13T15:57:01Z No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-10-03T11:53:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T11:53:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / O advento de pacientes portadores do HIV e de pacientes imunocomprometidos provocou um aumento na incidência de micoses fúngicas, como a criptococcose. Existem várias classes de antifúngicos disponíveis comercialmente para o tratamento dessas infecções que são utilizadas de acordo com a patologia e o patógeno. No entanto, são relatados casos de resistência a essas drogas e existe uma grande preocupação em relação aos efeitos adversos que elas podem causar nos pacientes. Nesse contexto, o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas poderia ser uma solução para a problemática atual das drogas disponíveis e isso requer o estudo de novos alvos moleculares. O gene ERG6 codifica a enzima esterol C-24 metiltransferase que atua na conversão de zimosterol em fecosterol. Constitui uma etapa que ocorre em fungos para a biossíntese do ergosterol, mas não ocorre nos hospedeiros animais, que possuem enzimas específicas para a conversão do zimosterol até colesterol. No presente trabalho, a função do gene ERG6 foi investigada e caracterizada no fungo Cryptococcus neoformans demonstrando que a ausência desse gene gera diversas alterações fenotípicas, tais como sensibilidade ao estresse osmótico, ao estresse oxidativo e maior susceptibilidade a diferentes drogas antifúngicas. Além disso, foi ainda observado que a capacidade de crescer em meios contento diferentes estressores de parede se mostra alterada. Em relação aos fatores de virulência conhecidos para C. neoformans, o fungo foi incapaz de crescer a temperatura de 37°C, porém não teve sua produção de cápsula ou melanina afetadas. No entanto, em testes para observação da sua capacidade de virulência in vitro utilizando macrófagos e in vivo com lagartas da espécie Galleria mellonella mostraram uma redução na virulência em mutantes de ERG6. Por fim a análise dos esteróis de membrana mostrou que ocorre uma alteração em toda a composição de esteróis da membrana celular. Dessa forma, por ser uma enzima encontrada principalmente em fungos, a Erg6 pode ser um alvo molecular potencial para drogas antifúngicas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The advent of HIV patients and immunocompromised patients caused an increase in the incidence of fungal mycoses, such as cryptococcosis. There are several antifungal agents commercially available for the treatment of such infections that are chosen based on the disease and the pathogen. However, cases of resistance are reported to these drugs and there is great concern about the adverse effects that they can cause on patients. In this context, the development of new antifungal drugs could be a solution to the current problem of the available drugs and it requires the study of potential molecular targets. The gene ERG6 encodes the sterol C-24 methyltransferase, an enzyme that acts on the conversion zimosterol in fecosterol. This is a step that occurs in fungi in the ergosterol biosynthesis, but does not occur in the animal hosts which have specific enzymes for the conversion of zymosterol to cholesterol. In this study, gene function of ERG6 was investigated and characterized in the Cryptococcus neoformans demonstrating the absence of this gene generates several phenotypic changes, such as sensitivity to osmotic stress, oxidative stress and increased susceptibility to different antifungal drugs. Furthermore, it was also observed that the ability to grow on media with different cell wall stressors was also altered. It was observed that the lack of ERG6 greatly affects the permeabillity of the membrane resulting in osmotic and oxidative stress sensitivity and changing antifungal drugs susceptibility. Furthermore, it was also observed that the ability to grow in medium with cell wall stressor was altered. About the virulence factor, C. neoformans was unable to grow at 37°C, but it had not affected the production of melanin or capsule. However, virulence tests in vitro with macrophages and in vivo with Galleria mellonella caterpillars showed a decrease in the virulence of ERG6 mutants. Finally, the membrane sterols analysis demonstrated a change in the membrane sterol composition. Thus, being an enzyme found especially fungi, the Erg6 may be a potential molecular target for antifungal drugs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-03-13T14:30:42Z No. of bitstreams: 1 2013_PolyanaAraujoAssis.pdf: 6275537 bytes, checksum: b3eb36d0078ca843176751945075ea1c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-17T13:30:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PolyanaAraujoAssis.pdf: 6275537 bytes, checksum: b3eb36d0078ca843176751945075ea1c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-17T13:30:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PolyanaAraujoAssis.pdf: 6275537 bytes, checksum: b3eb36d0078ca843176751945075ea1c (MD5) / As infecções fúngicas são responsáveis por grandes agravos à saúde humana e acometem principalmente pessoas imunocomprometidas. Mundialmente, tem-se observado o aumento na incidência das infecções fúngicas e de cepas resistentes aos agentes antifúngicos utilizados na terapia. Diante desse panorama, faz-se necessária a busca por novos recursos terapêuticos. Uma importante fonte de novas susbtâncias são os metabólitos secundários vegetais. Desse modo, este trabalho avaliou a atividade antifúngica de 183 extratos vegetais pertencentes ao Banco de Extratos do Bioma Cerrado do Laboratório de Farmacognosia da Universidade de Brasília. A concentração inibitória mínima (CIM) em leveduras e fungos filamentosos foi determinada utilizando as técnicas de microdiluição descritas nos protocolos do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Todas as espécies estudadas apresentaram em pelo menos um dos seus extratos forte atividade antifúngica (CIM ≤ 125 µg/mL). O extrato etanólico da casca da raiz de Matayba guianensis foi selecionado para o estudo fitoquímico considerando a atividade antifúngica, a quantidade disponível no Banco e os resultados das revisões bibliográficas. Foram isoladas as substâncias inéditas, denominadas matayosídeo E (1) e matayosídeo F (2), e as substâncias conhecidas cupaniosídeo (3) e estigmasterol (4). A atividade das substâncias 1, 2 e 3 foi avaliada em Candida parapsilosis ATCC 22019 e em células mononucleadas de sangue periférico humano. Os matayosídeos E e F apresentaram atividade antifúngica e ausência de citotoxicidade. Os resultados encontrados reforçam a importância dos estudos com plantas do bioma Cerrado. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The fungal infections are responsible for major human health problems and affect mainly immunocompromised persons. Worldwide, it has been observed an increased incidence of infections and fungal strains resistant to antifungal agents used in therapy. Against this background, it is necessary to research new therapeutic resources. An important source of new compounds are plant secondary metabolites. Thus, this study evaluated the antifungal activity of 183 plant extracts belonging to the Bank of extracts from the Cerrado biome of the Laboratory of Pharmacognosy, University of Brasília. The minimum inhibitory concentration (MIC) in yeast and filamentous fungi was determined using the microdilution techniques described in the protocols of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). All species showed at least one of its extracts strong antifungal activity (MIC ≤ 125 mg/mL). The ethanol extract of the root bark of Matayba guianensis was selected for phytochemical study considering the antifungal activity, the amount available in the Bank and the results of literature reviews. The new compounds have been isolated and named matayoside (1) and matayoside F (2), and the compounds already known, cupanioside (3) and stigmasterol (4). The activity of compounds 1, 2 and 3 was evaluated in Candida parapsilosis ATCC 22019 and mononuclear cells of human peripheral blood. The matayoside E and F showed antifungal activity and no cytotoxicity. The results reinforce the importance of studies with plants of the Cerrado biome.