Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-05-22T15:13:00Z No. of bitstreams: 1 2014_CaioOliveiraGorgulhoSilva.pdf: 1383360 bytes, checksum: 7977b73e3f596df26a948699c8a4308c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-23T13:52:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CaioOliveiraGorgulhoSilva.pdf: 1383360 bytes, checksum: 7977b73e3f596df26a948699c8a4308c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-23T13:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CaioOliveiraGorgulhoSilva.pdf: 1383360 bytes, checksum: 7977b73e3f596df26a948699c8a4308c (MD5) / O bagaço de cana-de-açúcar é um importante resíduo agroindustrial brasileiro que apresenta grande potencial para ser utilizado como fonte de carbono para produção de holocelulases de interesse industrial por microrganismos. As xilanases, objeto de estudo deste trabalho, são enzimas que apresentam uma série de aplicações biotecnológicas que incluem a produção de etanol de segunda geração, o branqueamento de papel, a produção de sucos e pães e o uso como aditivo em rações animais. O objetivo desta pesquisa foi purificar e caracterizar uma xilanase produzida pelo fungo Emericella nidulans quando cultivado em bagaço de cana, visando o aproveitamento deste resíduo e a avaliação do potencial biotecnológico da enzima. O fungo foi capaz de secretar xilanases a partir do primeiro dia de cultivo sob fermentação submersa utilizando o bagaço. Uma xilanase de 22 kDa foi purificada a partir do extrato bruto obtido no cultivo através de ultrafiltração, precipitação com sulfato de amônio e cromatografias de filtração em gel e troca aniônica. A enzima apresentou alta homologia com endo-β-1,4-xilanase A (XynA) de E. nidulans e desta forma foi chamada. A enzima XynA apresentou maior atividade a 55°C e na faixa de pH 3,0 – 6,5. A enzima se mostrou pouco termoestável, com meiasvidas de 40, 10 e 7 minutos a 28, 50 e 55°C, respectivamente. XynA foi mais ativa sobre a porção solúvel da xilana, com valores de KM e Vmáx 3,39 mg/mL e 0,502 UI/mL, respectivamente. A hidrólise da xilana por XynA gerou xilooligossacarídeos, indicando ação tipo endo. Diferentes compostos fenólicos comumente liberados durante o pré-tratamento de biomassa lignocelulósica causaram efeitos variados sobre XynA. Os ácidos tânico e cinâmico inibiram a enzima, enquanto o ácido 4-hidroxi-benzóico aumentou sua atividade e os ácidos ferúlico, p-cumárico e vanilina não mostraram efeito. O etanol aumentou a atividade, estabilidade e Vmáx da enzima, indicando potencial para aplicação em processos de sacarificação e fermentação simultâneas de biomassa. O ultrafiltrado (uma fração semipurificada de xilanases) foi capaz de hidrolisar polpas de celulose em diferentes etapas do processo Kraft, resultando na liberação de açúcares redutores, cromóforos, pentoses e produtos de hidrólise de xilana sem concomitante liberação de glicose. O extrato bruto se mostrou capaz de degradar bagaço de cana-de-açúcar não-tratado ou sumetido a explosão a vapor, liberando açúcares redutores e produtos de hidrólise de xilana. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Sugarcane bagasse is a major lignocellulosic agroindustrial residue in Brazil with great potencial for utilization as carbon source for production of industrial holocellulases by microrganisms. Xylanases present several biotechnological applications such as in ethanol production, paper bleaching, juice and bread production and utilization as feed additive. The goal of this reseach was to purify and characterize one xylanase produced by the fungus Emericella nidulans when grown on sugarcane bagasse, aiming the use of this residue and the investigation of biotechnological potencials of the enzyme. E. nidulans secreted xylanases from the first day of growth on liquid media containing bagasse as sole carbon source. One 22 kDa xylanase was purified from crude extract through ultrafiltration, ammonium sulphate precipitation, gelfiltration and anion-exchange chromatographies. The enzyme showed significant homology with endo-β-1,4-xylanase A (XynA) from E. nidulans, and was named that way. XynA was most active at 55°C and pH 3,0 – 6,5. Considering its thermostability, XynA presented half-lives of 40, 10 and 7 minutes at 28, 50 and 55°C, respectively. The enzyme was more active on the soluble portion of xylan, with Km and Vmax values 3,39 mg.mL¯ ¹ and 0,502 UI.mL¯ ¹, respectively. Xylan hydrolysis by XynA produced xylooligossacharides, indicating endo-type action. Phenolic compounds released during pre-treatment of lignocellulosic biomass caused different effects on XynA. Tannic and cinnamic acids inhibited XynA, while 4-hidroxibenzoic acid enhanced its activity and ferulic and p-coumaric acids and vanillin caused no effect. Ethanol increased XynA activity, thermostability and Vmax, suggesting potencial for aplication in simultaneous sacharification and fermentation processes. Ultrafiltrate sample (partialy purified xylanases) was able to hydrolyse celullose pulps obtained from different stages of Kraft process, resulting in release of reducing sugars, chromophores, pentoses and xylans degradation products with apparent no release of glucose. E. nidulans crude extract was able to hydrolyse untreated or steam-explosion pretreated sugarcane bagasses, releasing reducing sugars and xylans degradation products.

Para melhor compreender o papel dos micro-organismos nas doenças da cavidade bucal, é necessário inicialmente avaliar a diversidade microbiana naturalmente existente em indivíduos saudáveis, além de sua distribuição espacial na cavidade bucal. Muitos estudos são conduzidos elucidando o papel do biofilme e das bactérias na saúde bucal, porém poucas pesquisas focaram na atuação das leveduras. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a diversidade e distribuição de leveduras do gênero Candida na microbiota bucal de indivíduos saudáveis. Foram coletadas amostras da boca pacientes adultos saudáveis. Foram obtidas amostras de 9 diferentes habitats da boca: bochechas direita e esquerda, assoalho da boca, palato, língua dorsal, língua ventral, dente molar, vestíbulo labial e saliva. Foram avaliados 100 pacientes com uma média de 28 dentes. Quarenta e nove indivíduos apresentaram leveduras na sua microbiota bucal. Candida albicans foi o micro-organismo mais prevalente (49%), seguido de Candida krusei, Candida parapsilosis, Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii), Candida glabrata, Candida tropicalis e Candida dubliniensis. A associação das leveduras encontradas e os habitats bucais sugeriu que comunidades leveduriformes podem distinguir-se entre os diferentes tecidos da cavidade bucal. A língua (dorsal e ventral) apresentou colonização específica, caracterizada pelas espécies C. tropicalis e C. dubliniensis. De forma semelhante, a microbiota dos habitats revestidos por mucosa foi análoga. A microbiota da língua e dos tecidos duros assemelhou-se entre si em menor intensidade. Estes resultados introduzem a dimensão espacial desta diversidade microbiana que vem sendo estudada, complementando as informações obtidas nos estudos do microbioma humano. / To better understand the role of microorganisms in the diseases of the oral cavity, first it is necessary to evaluate the natural microbial diversity in healthy individuals, as well as their spatial distribution in the oral cavity. Many studies are conducted elucidating the role of biofilms and bacteria in oral health, but few research has focused on the yeast’s performance. In this sense, the objective of this study was to evaluate the diversity and distribution of Candida species in the oral microbiota of healthy individuals. Samples were colleted from the mouth of healthy adults. Samples of 9 different mouth habitats were obtained: right and left cheeks, floor of the mouth, palate, dorsal tongue, ventral tongue, molar tooth, labial vestibule and saliva. We evaluated 100 patients with an average of 28 teeth. Forty-nine subjects had yeasts in their oral microbiota. Candida albicans was the most prevalent microorganism (49%), followed by Candida krusei, Candida parapsilosis, Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii), Candida glabrata, Candida tropicalis and Candida dubliniensis. The association found between the yeasts and oral habitats suggested that communities can be distinguished by the different tissues of the oral cavity. The tongue (dorsal and ventral) presented specific colonization, characterized by the species C. tropicalis, and C. dubliniensis. Similarly, the microbiota of the mucous habitats was similar. The microbiota of the tongue and hard tissue resembled each other in a lesser degree. These results introduce the spatial dimension of the microbial diversity that has been studied, complementing the information obtained in the human microbiome research.

Os oceanos constituem 71% da superfície da Terra e muitos microrganismos que provém deste ambiente podem secretar enzimas de alto interesse biotecnológico. As enzimas produzidas por microrganismos marinhos podem ser mais estáveis, devido à alta complexidade deste ambiente. Por este motivo, objetivou-se isolar e identificar os fungos presentes no sedimento marinho e verificar a atividade enzimática da amilase, celulase, lípase e protease dos mesmos em diferentes temperaturas (15°C, 20°C, 25°C e 30°C). As amostras de sedimento foram coletadas com auxilio de seringas estéreis à 10 metros de profundidade, e transportadas até o laboratório em caixas isotérmicas. Após o crescimento, fragmentos de micélio foram repicados no centro de placa de petri para isolamento das amostras. Diferentes substratos foram utilizados para avaliar a atividade da amilase, celulase, lipase e protease dos isolados. A capacidade de hidrolisar os substratos foi verificada em diferentes temperaturas (15°C, 20°C, 25°C e 30°C). Foram isoladas 22 cepas fúngicas, de 14 diferentes espécies, pertencentes a nove gêneros, dentre eles Helicosporium, Helicomyces, Paecilomyces, Phoma, Chaetomium, Geotrichum, duas espécies de Cladosporium sp., Aspergillus sp., Penicillium sp., Penicillium chrysogenum e Penicillium aurantiogriseum. O maior índice de positividade enzimática ocorreu na temperatura de 25°C, na qual 71% dos isolados hidrolisaram o substrato lipídico, seguido de protease com 50%, celulase 43% e amilase 36%. Todos os isolados produziram no mínimo um tipo de enzima, nas temperaturas testadas, ficando evidente a que o ambiente marinho é para descoberta de novas enzimas. / Oceans constitute 71% of the Earth's surface, and many microorganisms from this environment may secrete enzymes of high biotechnological interest. Enzymes produced by marine microorganisms might be more stable due to the great complexity of this environment. Therefore, we aimed at isolating and identifying the fungi present in marine sediment and at verifying the corresponding enzymatic activities of amylase, cellulase, lipase, and protease. Sediment samples were collected with sterile syringes at a depth of 10 meters and transported to the laboratory in cool boxes. After their growth, mycelial fragments were sub-cultured and inoculated in the center of Petri dishes for isolating the samples. Different substrates were used to evaluate the activity of amylase, cellulase, lipase and protease. The ability to hydrolyse the substrates was observed at different temperatures (15°C, 20°C, 25°C e 30°C).Twenty-two fungal strains were isolated from 14 different species belonging to nine genera, including Helicosporium, Helicomyces, Paecilomyces, Phoma, Chaetomium, Geotrichum, two different types of Cladosporium sp., Aspergillus sp., Penicillium sp., Penicillium chrysogenum, and Penicillium aurantiogriseum. The highest enzymatic production rate was found for lipase, produced by 71% of the isolated fungi, followed by protease (50%), cellulase (43%), and amylase (36%). All isolates produced at least one type of enzyme, evidencing that the sea is a environment for discovering new enzymes.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-17T11:47:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Lidia Silva.pdf: 4103104 bytes, checksum: eb5e0fe6bb40a7f4698d819d1e3c3755 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-17T11:47:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Lidia Silva.pdf: 4103104 bytes, checksum: eb5e0fe6bb40a7f4698d819d1e3c3755 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / CNPq / Os Agaricomycetes de solo são representados pelos fungos clavarioides, estereoides, agaricoides e algumas espécies poroides. Esses fungos apresentam um papel fundamental na manutenção desses ecossistemas através da ciclagem de nutrientes e suas diferentes relações ecológicas (saprofitismo, parasitismo e micorrização). Com o objetivo de avaliar a diversidade e as interações ecológicas de Agaricomycetes terrícolas (clavarioides, estereoides e poroides), esses fungos foram investigados em quatro áreas de Mata Atlântica. Das 18 visitas realizadas nas áreas (oito na Reserva Biológica de Saltinho, quatro no Parque Estadual Dois Irmãos, quatro no Jardim Botânico de Recife e duas na RPPN Frei Caneca) entre 2011 e 2012, foram coletados 54 espécimes de Agaricomycetes terrícolas. Além das coletas, foram revisadas 105 exsicatas depositadas do Herbário URM, resultando em um total de 159 espécimes. Foram identificadas 54 espécies distribuídas em 19 gêneros e 10 famílias. Foram encontrados 12 novos registros para a Região Nordeste e um para o bioma Mata Atlântica. Dos 54 espécimes coletados, foram obtidos sete isolados em meio de cultura, distribuídos em quatro gêneros e cinco espécies. Esses isolados foram testados para celulase, amilase, protease, lacase e peroxidase. Todas as cinco espécies foram negativas para a produção de celulase, amilase e protease e positivas para lacase e peroxidase. Em relação aos aspectos ecológicos, verificou-se que o número de espécimes e espécies coletados foi significativamente maior no período chuvoso. Dos 54 espécimes coletados e dos sete isolados, foram obtidas 17 sequencias da região ITS: cinco sequencias de Amauroderma schomburgkii, duas de A. praetervisum, uma de A. sprucei, uma de Clavulina amazonensis, uma de Clavulinopsis aff. flavella, uma de Clavariaceae, três de Hymenochaete damicornis, uma de Lachnocladium schweinfurthianum, uma de Podoscypha sp1, uma de Ramaria aff. tubulosa e duas de Podoscypha cf. tomentipes (substrato de madeira).

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T14:45:27Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Gustavo da Silva.pdf: 2208057 bytes, checksum: c820059808bed300dcbbb54ebff0550f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Gustavo da Silva.pdf: 2208057 bytes, checksum: c820059808bed300dcbbb54ebff0550f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE / O interesse por pesquisas relacionadas aos endofíticos e às suas propriedades biotecnológicas aumenta, à medida que surge a necessidade pela busca de novos metabólitos bioativos, produzidos por essas espécies, e que possam combater micro-organismos multirresistentes. Micro-organismos endofíticos foram isolados de folhas sadias de Schinus terebinthifolius Raddi (Aroeira-Vermelha) e avaliados quanto à atividade antimicrobiana, frente a micro-organismos patogênicos, através de um ensaio primário com blocos de gelose, fermentação líquida e testes realizados com seus extratos. Os extratos foram analisados através de prospecção química e bioautografia em camada delgada. Obteve-se 237 isolados fúngicos, 67 bacterianos e 13 de actinobactérias. Dos quarenta fungos e 13 actinobactérias testados, 8 (20%) e 13 (100%) apresentaram atividade inibitória, respectivamente. Foi realizada fermentação líquida com o fungo (Mycelium stereo F-61) e a actinobactéria (S. kunmingensis Act-3) os quais obtiveram melhores halos de inibição. As frações etéreas (pH 7,0 – 48 h) provenientes do M. stereo F-61, inibiram S. aureus (20 mm), E. coli (23 mm) e S. aureus resistente à meticilina (MRSA) (23 mm). As frações de acetato de etila (pH 7,0 – 48 h) oriundas da S. kunmingensis (NBRC 14463), inibiram S. aureus (29 mm) e S. aureus (MRSA) (20 mm). Esses extratos apresentaram CMI para a S. kunmingensis Act-3 frente à S. aureus (62 μg mL−1) e S. aureus (MRSA) (125 μg mL−1), e para M. stereo F-61 contra S. aureus (125 μg mL−1), S. aureus (MRSA) (500 μg mL−1) e E. coli (500 μg mL−1). A prospecção química dos extratos do M. stereo F-61 detectou açúcares redutores e compostos fenólicos no extrato metanólico, e de triterpenos, esteroides, mono/sesquiterpenos e compostos fenólicos no extrato etéreo. A bioautografia constatou que os princípios ativos produzidos pela S. kunmingensis Act-3 e pelo M. stereo F-61 não são semelhantes aos da planta. Conclui-se que os isolados produzem metabólitos secundários bioativos com ação antimicrobiana, e apresentam potencial para a descoberta de nova substância bioativa de interesse biotecnológico.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-03-04T17:08:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese GRAYCE KELLI BARBOSA .pdf: 1866188 bytes, checksum: e2c5a335e7cddd3d95f8df41a3add9ed (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-04T17:08:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese GRAYCE KELLI BARBOSA .pdf: 1866188 bytes, checksum: e2c5a335e7cddd3d95f8df41a3add9ed (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES / Biossurfactantes são compostos de superfície ativa produzidos por micro-organismos e que têm recebido crescente interesse nas últimas décadas, considerando as vantagens sobre os surfactantes químicos, destacando-se baixa toxicidade, biodegrabilidade, estabilidade sob condições extremas de pH e temperatura e salinidade e produção a partir de fontes renováveis. A busca de agentes tensoativos naturais (biossurfacantes) tem sido de grande interesse na biotecnologia. Tendo em vista as propriedades aplicadas na agricultura, nas indústrias de alimentos, papel, metal, têxtil e farmacêuticas, apresentando maior potencial de aplicação na indústria petrolífera. Nesta tese, realizou-se o isolamento de Aspergillus niger oriondo de solos da caatinga de Pernambuco, Brasil, através da técnica de diluição seriada e meios seletivos. A identificação dos micro-organimos foi realizada através das análises morfológicas e moleculares. A seleção do micro-organismo produtor de biossurfactante foi realizada através do teste de hemólise, tensão superficial e índice de emulsificação. O meio de produção do biossurfactante foi constituído por uma base de sais (elementos traços), suplementado com 10% de farelo de trigo, tendo como variáveis cloreto de sódio, extrato de levedura e óleo de soja pos-fritura, de acordo com o planejamento fatorial 23, como variavél resposta a composição do meio de produção de biossurfactante, o biossurfactante foi isolado e caracterizado quanto as propriedades físico-químicas e avaliado quanto ao quanto ao potencial de aplicação na formulação de detergentes. O líquido metabólico livre de células contendo o biossurfactante na condição selecionada, após 96 horas de cultivo a 150 rpm, apresentou tensão superficial para 29 mN/m, e interfacial 15,3 mN/m. O biossurfactante demonstrou estabilidade em condições extremas de pH (2-12), temperatura (0,5,70 e 100ºC) e salinidade (2 – 12%). O rendimento do biossurfactante de 3,2 g/L, Concentração Micelar Crítica (CMC) de 1,5%. De caracter polimérico e aniônico, constituído de lípidos (31,5%), carboidratos (10,8%) e proteínas (14,8%). O teste de dispersão do petróleo demonstrou um halo de 21,03cm2, além de apresentar atividade antiadesiva para os micro-organismos Bacillus subtilis, Salmonella enterica, Pseudomonas aeruginosa, Echerichia coli, Serratia marcescens, Staphylococcus aureus. Os resultados obtidos indicaram que o biossurfactante não apresentou efeito inibitório sobre a germinação das sementes e sobre o elongamento das raízes, como também a letalidade das larvas de Artemia salina. O Biossurfactante testado apresentou ausência de citotoxicidade para as células. O biossurfactante quando aplicado na formulação de um biodetergente mostrou-se mais eficiente no poder espumante, emulsificante e ação detergente quando comparado a um detergente sintético comercial. Os resultados obtidos demonstraram o potencial biotecnológico promissor do biossurfactante produzido por A. niger sugerindo diferentes aplicabilidades em setores industriais e ambientais. / Biosurfactants are composed of active surface produced by microorganisms and have received increasing interest in recent decades, considering the advantages over chemical surfactants, especially low toxicity, biodegradability, stability under extreme conditions of pH and temperature and salinity and production from renewable sources. The search for natural surfactants (biosurfactants) has been of great interest in biotechnology. In view of the properties applied in agriculture, in the food, paper, metal, textile and pharmaceutical, with higher potential for the oil industry. In this thesis, there was the isolation of Aspergillus niger of savanna soils of Pernambuco, Brazil, by serial dilution technique and selective media. The identification of microorganisms was based in their morphological and molecular analyzes. The selection of the biosurfactant producing microorganism was performed by hemolysis test, surface tension and emulsification index. The biosurfactant production medium was composed of a base salt (trace elements), supplemented with 10% wheat bran, having as variables sodium chloride, yeast extract and soybean oil post frying in accordance with the planning factor 23 as the response variable composition of the biosurfactant production medium, the biosurfactant was isolated and characterized as the physicochemical properties and evaluated for the potential application as detergents in the formulation. The metabolic free liquid in the cells containing the biosurfactant selected condition after 96 hours of cultivation at 150 rpm and presented surface tension to 29.0 mN/m and the interfacial 15.3 mN/m. The biosurfactant showed stability at extremes of pH (2-12), temperature (0, 5, 70 and 100 °C) and salinity (2 - 12%). The yield of the biosurfactant of 3.2 g / L Critical Micelle Concentration (CMC) by 1.5%. And polymeric anionic character, composed of lipids (31.5%), carbohydrates (10.8%) and proteins (14.8%). The oil dispersion test showed a halo of 21.03 cm2, and to provide anti adhesive microorganisms Bacillus subtilis, Salmonella enterica, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Serratia marcescens, Staphylococcus aureus. The results indicated that the biosurfactant showed no inhibitory effect on seed germination and the elongation of roots, as well as the mortality of the larvae of Artemia salina. The biosurfactant tested showed no cytotoxicity to the cells. The biosurfactant when applied in formulating a biodetergent was more efficient in the sparkling power, emulsifier and detergent action when compared to a commercial synthetic detergent. The results demonstrated the promising biotechnological potential of the biosurfactant produced by A. niger suggesting applicability in different industrial and environmental sectors.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4618_1.pdf: 1668956 bytes, checksum: 475f45fbe2d47d809e4f06a7fdac1669 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos podem ser encontrados nos mais diversos habitats, incluindo a rizosfera, que é caracterizada pela intensa atividade microbiana. Na região do Vale do Submédio São Francisco (Petrolina, Pernambuco, Brasil) a goiabeira representa a terceira fruteira mais cultivada; entretanto, a cultura vem diminuindo drasticamente em produtividade e área plantada devido ao ataque das raízes por fitonematóides. Este trabalho teve como objetivo identificar espécies de fungos filamentosos isoladas da rizosfera de goiabeiras sadias e atacadas por fitonematóides e de sete vegetais nativos de caatinga na região. Amostras compostas de rizosfera das goiabeiras sadias, infestadas e da caatinga foram coletadas até 20cm de profundidade, em novembro/2005. O solo foi processado pelo método de diluição sucessiva e semeado em meio de Sabouraud suplementado com antibiótico, permanecendo em temperatura ambiente por 72 horas. As colônias foram isoladas, purificadas e transferidas para meios de cultura específicos e os fungos identificados por observações macroscópicas e microscópicas. Das áreas com goiabeiras sadias e infestadas foram isolados 39 e 28 táxons, respectivamente; da área de caatinga foram isolados 23 táxons. De acordo com a distribuição das espécies, os fungos isolados do solo das três áreas foram classificados principalmente como ocasionais e abundantes. O índice de similaridade de táxons foi maior entre as áreas com goiabeiras sadias e infestadas (68,7%), enquanto a diversidade de táxons foi maior na área infestada (4,59 bits/indivíduo). Aspergillus e Penicillium foram os gêneros mais representativos nas três áreas

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo532_1.pdf: 5130503 bytes, checksum: e33c8d155e5e443a6bfd70fd16a7cbcd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dentre as variedades de algodoeiro transgênico, o Bt (=Bacillus thuringiensis) oferece resistência aos principais lepidópteros pragas do algodoeiro por expressar a proteína Cry1Ac (=crystal protéico). Tendo em vista que a produção dessa proteína pelo vegetal geneticamente modificado pode influenciar a capacidade da planta em alocar fungos endofíticos, o objetivo do presente estudo foi investigar as possíveis alterações na composição de fungos endofíticos associados ao algodoeiro transgênico (Bt) em comparação ao não-transgênico (não-Bt). Desse modo, coletas foram realizadas nos estádios de desenvolvimento da planta. Em cada coleta foram selecionadas amostras de folhas, caules, raízes, flores e sementes de algodoeiro Bt e não-Bt, cultivados simultaneamente. Foram isolados 23 taxa de fungos endofíticos pertencentes aos grupos Zygomycota, Ascomycota, Coelomycetes, Hyphomycetes e Blastomycetes. E 17 gêneros foram encontrados: Acremonium, Cladosporium, Colletotrichum, Curvularia, Fusarium, Glomerella, Guignardia, Lecanicillium, igrospora, Pestalotiopsis, Phoma, Phomopsis, Rhizopus, Rhodotorula, Talaromyces, Tritirachium e Xylaria. As espécies mais frequentes de fungos de acordo com o órgão vegetal foram Phomopsis archeri em folhas e caules, Phoma destructiva em raízes, igrospora sphaerica em flores e Curvularia lunata var. aeria em sementes. A abundância e diversidade de fungos endofíticos associados ao algodoeiro Bt e ao não-Bt aumentam com o envelhecimento da planta, porém não houve diferença significativa entre a composição de fungos endofíticos associados aos dois tipos de algodoeiro, indicando que a expressão da proteína Cry1Ac não afeta a capacidade do algodoeiro em alocar os fungos endofíticos e que os efeitos detectados relacionados à composição da comunidade fúngica estão associados à idade e órgão da planta. A ocorrência de fungos endofíticos em sementes de algodoeiro sugere que há transmissão vertical desses microrganismos entre as plantas de uma geração para a outra. Dos fungos endofíticos obtidos, quarenta isolados foram avaliados quanto à produção qualitativa das enzimas hidrolíticas extracelulares lipase, protease e amilase. E o melhor resultado foi apresentado por isolados de Cladosporium cladosporioides obtidos de raiz de algodoeiro Bt e do não-Bt, que apresentaram um índice enzimático alto para duas das três enzimas testadas, sendo um microrganismo promissor a ser usado em diferentes setores da indústria biotecnológica

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo535_1.pdf: 3371000 bytes, checksum: febaed24d114c7c2a823b525626f77e7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os fungos gasteróides são caracterizados principalmente pelo basidioma angiocárpico e liberação passiva dos basidiosporos. Até o momento, 232 espécies de fungos gasteróides estão registradas para o Brasil, sendo que o conhecimento do grupo vem aumentando desde o início do século XXI. Com o objetivo de conhecer melhor estes organismos no Brasil, a diversidade e aspectos ecológicos de fungos gasteróides foram investigados em quatro remanescentes de Mata Atlântica no estado de Pernambuco. Um transecto de 20 × 500 m foi delimitado em cada área de estudo e estes foram percorridos em cada saída de campo, totalizando 36 visitas. Foram coletados 229 espécimes de fungos gasteróides, correspondendo à 16 espécies distribuídas em cinco gêneros e cinco famílias. Dentre as espécies identificadas, Cyathus setosus representa novo registro para o Brasil, enquanto quatro espécies são novos registros para o Nordeste e três para Pernambuco. Geastraceae foi a família com maior número de espécies (9). A RPPN Carnijó apresentou maior número de espécies (12), e somente duas espécies foram comuns às quatro áreas de estudo. A composição de espécies do Brejo dos Cavalos foi estatisticamente distinta de Dois Irmãos e Carnijó, e não houve diferença significativa na diversidade de espécies entre as épocas de coleta (meses secos e meses chuvosos) nas quatro localidades

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-12T19:39:14Z No. of bitstreams: 1 TESE Rosilma de Oliveira Araujo Melo.pdf: 9735947 bytes, checksum: 870f605bce15d8ff10d70fe0bc62ddbc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T19:39:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Rosilma de Oliveira Araujo Melo.pdf: 9735947 bytes, checksum: 870f605bce15d8ff10d70fe0bc62ddbc (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / FACEPE / Não existem estudos no que se refere à identificação de micro-organimos endofíticos de Bauhinia monandra, embora sejam relatados diversos estudos farmacológicos realizados com essa espécie. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi à prospecção de micro-organismos endofíticos de folhas de B. monandra, no intuito de identificar estes endofíticos, bem como explorar o potencial biotecnológico das actinobactérias endofíticas para produção enzimática e antimicrobiana. Folhas de B. monandra coletadas no Campus da Cidade Universitária (Recife, PE) foram desinfectadas, maceradas e semeadas em meios de cultura específicos. Após a purificação, as colônias bacterianas e fúngicas foram submetidas à identificação morfológica macroscópica e microscópica. As actinobactérias endofíticas foram avaliadas quanto à produção de enzimas; bem como foi realizada a avaliação antimicrobiana para seleção da estirpe com elevado potencial antimicrobiano e posterior produção de metabólitos ativos em cultivo submerso, seguido de processos de extração e separação cromatográfica dos compostos antimicrobianos obtidos do melhor meio de cultura. No presente estudo, as estirpes de fungos filamentosos endofíticos (59,7%) pertenciam aos gêneros Penicillium, Curvullaria e Aspergillus. As bactérias não-filamentosas endofíticas (26,9%) foram agrupadas nos gêneros Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. E cepas de actinobactérias endofíticas (13,4%) foram classificadas como Streptomyces e Nocardiopsis. A metodologia utilizada para verificar quantitativamente a capacidade de produção enzimática foi eficiente, demonstrando que todas as actinobactérias endofíticas (n=9) das folhas de B. monandra foram capazes de hidrolisar amido, pectina, Tween 20 e 80; e celulose, confirmando a presença de amilase, pectinase, lípase, esterase e celulase, respectivamente. Na avaliação da produção de caseinase todas as actinobactérias endofíticas foram positivas, no entanto, para a degradação da gelatina apenas Nocardiopsis spp. 2F foi negativo, bem como no ensaio de tirosina todas as estirpes foram positivas exceto Streptomyces spp. 1F. A avaliação da atividade antimicrobiana primária das actinobactérias endofíticas de folhas de B. monadra, realizada pelo teste de bloco de gelose mostrou que as cepas endofíticas Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F e Streptomyces spp. 8F, possuíam atividade antimicrobiana apenas diante de bactérias Gram-positivas, principalmente cepas de Staphylococcus aureus (n=16) isolados clínicos multiressistentes e oxacilina resitente (ORSA). A estirpe endofítica Streptomyces spp. 5F destacou-se como melhor produtor de substâncias antimicrobianas em 11 dos 12 meios de cultura submersa perante cinco cepas de S. aureus isolados clinicos, selecionando o meio ISP-3 com melhor desempenho produtivo. O processo extrativo dos produtos ativos com solventes foi bem sucedido com a massa micelial, destacando-se o metanol. Segundo separação cromatográfica de alta eficiência dos extratos brutos: aquoso do líquido metabólico (EAL) e metánolico da massa (EMM), o fracionamento demonstrou que os dois extratos apresentavam compostos com natureza polar. Estes resultados demonstram que a prospecção de micro-organismos endofíticos constitui uma fonte valiosa na obtenção de novas espécies e novos metabólitos bioativos, bem como a descoberta de moléculas com atividade enzimática e antimicrobiana promissora diante de bactérias multirresitentes do gênero Staphylococcus. / There are no studies regarding the identification of endophytic microorganisms of Bauhinia monandra, although several pharmacological studies with this species are reported. In this way, the objective of this work was to prospect endophytic microorganisms from B. monandra leaves, in order to identify these endophytes, as well as to explore the biotechnological potential of endophytic actinobacteria for enzymatic and antimicrobial production. B. monandra leaves collected at Campus Cidade Universitária (Recife, PE) were disinfected, macerated and seeded in specific culture media. After purification, bacterial and fungal colonies were submitted to macroscopic and microscopic morphological identification. Endophytic actinobacteria were evaluated for enzyme production; As well as the antimicrobial evaluation for selection of the strain with high antimicrobial potential and subsequent production of the active metabolites in submerged culture, followed by extraction and chromatographic separation of the antimicrobial compounds obtained from the best culture medium. In the present study, strains of endophytic filamentous fungi (59.7%) belonged to the genera Penicillium,Curvullaria and Aspergillus. Endophytic non-filamentous bacteria (26.9%) were grouped in the genera Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. And strains of endophytic actinobacteria (13.4%) were classified as Streptomycesand Nocardiopsis. The methodology used to verify quantitatively the enzymatic production capacity was efficient, demonstrating that all the endophytic actinobacteria (n = 9) of B. monandra leaves were able to hydrolyze starch, pectin, Tween 20 and 80, and cellulose, confirming the presence of amylase, pectinase, lípase, esterase and cellulase, respectively. In the evaluation of the caseinase production, all the endophytic actinobacteria were positive, however, for the degradation of the gelatin only Nocardiopsis spp. 2F was negative, as well as in the tyrosine assay all strains were positive except Streptomyces spp. 1F. The evaluation of the primary antimicrobial activity of the endophytic actinobacteria of B. monadra leaves, performed by the gel block assay showed that the endophytic strains Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F and Streptomyces spp. 8F, had antimicrobial activity only against Gram-positive bacteria, mainly strains of Staphylococcus aureus (n = 16), multiresistant clinical isolates and resistant oxacillin (ORSA). The endophytic strain Streptomyces spp. 5F was the best producer of antimicrobial substances in 11 of the 12 submerged culture media against five strains of S. aureus isolates clinically, selecting ISP-3 medium with better productive performance. The extractive process of the active products with solvents was successful with the mycelial mass, standing out the methanol. According to the high efficiency chromatographic separation of the crude extracts: aqueous of the metabolic liquid (AEL) and mass methanol (MME), the fractionation showed that the two extracts presented compounds with polar nature. These results demonstrate that the prospection of endophytic microorganisms is a valuable source in the acquisition of new species and new bioactive metabolites, as well as the discovery of molecules with promising enzymatic and antimicrobial activity against multiresistant bacteria of the genus Staphylococcus.