Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-11-01T21:20:28Z No. of bitstreams: 1 2006_Débora Ferreira Melo.pdf: 1522748 bytes, checksum: 2a32aa3ef9b97ee6a36270f439cb589e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-11-27T14:22:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Débora Ferreira Melo.pdf: 1522748 bytes, checksum: 2a32aa3ef9b97ee6a36270f439cb589e (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-27T14:22:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Débora Ferreira Melo.pdf: 1522748 bytes, checksum: 2a32aa3ef9b97ee6a36270f439cb589e (MD5) Previous issue date: 2006 / Dicyma pulvinata é um micoparasita encontrado em diferentes áreas geográficas do Brasil e em outros países, porém ainda pouco estudado. Esse fungo apresenta potencial para biocontrole do mal-das-folhas da seringueira, doença causada por Microcyclus ulei, que vem limitando a produção de látex e a implantação de novos seringais, especialmente nas regiões úmidas do Brasil e da América Latina. O presente trabalho teve por objetivo a realização de estudos sobre D. pulvinata, buscando o desenvolvimento de uma tecnologia de uso massal desse agente de biocontrole. Para tanto, avaliou-se o efeito de diferentes substratos, dos métodos de produção, regimes de luz, temperatura e das fontes nutricionais no crescimento e esporulação do antagonista, bem como, métodos de secagem e armazenamento dos esporos produzidos. Estudou-se, ainda, a compatibilidade do fungo com agrotóxicos e o efeito da adição de adjuvantes ao inóculo. Quatro linhagens do micoparasita foram avaliadas sob condições de campo. Finalmente, instabilidade genética de duas linhagens de D. pulvinata mantidas em coleção, após repicagens sucessivas, foi determinada através das técnicas moleculares RAPD e RFLP. O método mais eficiente para produção de D. pulvinata em larga escala foi o de cultivo em sacos de polipropileno, utilizando arroz parboilizado como substrato. As fontes de carbono glicose e sacarose foram responsáveis pelo maior crescimento das colônias, enquanto a sacarose e o amido elevaram a esporulação do fungo. Em arroz parboilizado não houve diferença entre testemunha e as fontes de carbono. Sulfato de amônio destacou-se entre as fontes de nitrogênio testadas. Fotoperíodos de 0 e 6 horas de luz promoveram maior crescimento micelial do fungo e luz contínua favoreceu a esporulação das linhagens avaliadas. Com relação à temperatura, observou-se que o fungo cresce, esporula e germina entre 19 e 25 ºC. Nos experimentos de secagem, três dias em dessecador foi o período mais adequado. Na germinação, com seis horas de incubação a 25 ºC obtiveram-se mais de 90 % de esporos germinados. Com relação ao armazenamento, o período de esporos viáveis após estocagem revelou ser curto, mostrando a necessidade de se desenvolver preparações formuladas. Resultados obtidos com o Biodac mostraram que esse material poderá se constituir em alternativa como suporte para cultivo e veiculação do hiperparasita. A ação do D. pulvinata em campo foi comprovada, destacando-se as linhagens CEN 62 e CEN 93 com controle semelhante ao fungicida. O agente de controle demonstrou incompatibilidade com os agrotóxicos avaliados, exceto com Malathion. Quanto ao efeito da adição de adjuvantes às suspensões de esporos do antagonista, não houve inibição do crescimento e esporulação, indicando que qualquer um desses produtos poderia ser usado como componente de um formulado à base de esporos de D. pulvinata. No que se refere aos estudos relativos à estabilidade desenvolvidos com duas linhagens de D. pulvinata, verificou-se que este fungo, quando mantido em meio de cultivo e após cultivos sucessivos, apresenta alterações morfológicas de colônias, caracterizadas por formação de setores. Alterações genéticas também foram evidenciadas pelos diferentes padrões de bandas obtidos nas análises de RAPD e RFLP. Neste trabalho foram estabelecidas às condições ideais de produção e armazenagem, a eficiência em campo e a estabilidade genética de linhagens de D. pulvinata, que certamente irá contribuir para o estabelecimento de uma tecnologia de uso do D. pulvinata como agente de biocontrole para o mal-das-folhas da seringueira. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Dicyma pulvinata is a mycoparasite found in different geographic areas of Brazil and in other countries; however, it is still little studied. This fungus shows potential for the biocontrol of South American Leaf Blight of the rubber tree, Hevea brasiliensis, caused by Microcyclus ulei. This disease severely limits latex production and restricts the development of new plantations in the humid regions of Brazil and Latin America. The objective of the present work was to study D. pulvinata, to develop technology for massproduction of this biocontrol agent. In this way, the effect of different substrates, production methods, regimes of light, temperature and nutritional sources in the growth and sporulation of the antagonist was evaluated, as well as methods of drying and storage of the produced spores. The compatibility of the fungus with agrotoxins as well as the effect of the addition of adjuvant to inoculum was also studied. Four strains of the mycoparasite were evaluated under field conditions. Finally, genetic instability of two strains of D. pulvinata from our collection was determined after successive replications using the molecular techniques, RAPD and RFLP. The method found to be most efficient for large-scale production of D. pulvinata was culture in polypropylene bags, using parboiled rice as substrate. The carbon sources glucose and sucrose allowed the fastest growth of the colonies, while sucrose and starch improved the sporulation of the fungus. In parboiled rice, additional carbon sources produced no difference from the control while ammonium sulphate was the most favourable among the tested nitrogen sources. Photoperiods of 0 and 6 hours of light promoted greater mycelial growth of fungus and continuous light favoured sporulation. In relation to temperature, it was observed that the fungus grows and germinates between 19 and 25 ºC. In spore drying experiments, three days in a desiccator was the optimum period. In the germination tests, with six hours of incubation at 25 ºC, 90 % of spores germinated. In storage, spores after harvest were found to be to be short-lived, indicating the necessity of developing formulated preparations. Results obtained with Biodac showed that this material is a viable alternative as support for culture and propagation of the hyperparasite. The action of D. pulvinata in the field was proven, where strains CEN 62 and CEN 93 had similar control levels to the usual fungicide. The control agent, however, demonstrated incompatibility with the evaluated agrotoxins, except with Malathion. The addition of adjuvants to the suspensions of spores of the antagonist did not inhibit growth and sporulation, indicating that any one of these products could be used as a component in the formulations of spores of D. pulvinata. Studies on the stability of two strains of D. pulvinata, showed that this fungus readily presents alterations of colonial morphology, characterized by the formation of sectors. Strains producing sectors were shown to possess genetic alterations as evidenced by variations in bands obtained in RAPD and RFLP analyses. In this work, methods of production and storage have been optimised, the efficiency in field and the genetic stability of D. pulvinata strains demonstrated. These data may then contribute to the establishment of the use of D. pulvinata as an agent of biocontrol for leaf blight of rubber.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-24T21:01:09Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-11-25T15:41:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-25T15:41:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5) Previous issue date: 2006 / Nove espécies de fungos da Ordem Erysiphales foram estudadas em treze hospedeiros nativos do Bioma Cerrado. O material estudado foi proveniente tanto de áreas nativas quanto de arborização urbana e viveiro de mudas, e foi depositado na Coleção Micológica de Referência da Universidade de Brasília (CMRUnB). Foram propostas quatro espécies novas de Oidium sp. encontrados associados aos hospedeiros Astronium fraxinifolium e Myracrodruon urundeuva, Caryocar brasiliense, Pouteria ramiflora, e Pterogyne nitens. Uma espécie nova de Erysiphe foi encontrada parasitando duas espécies de Bauhinia. A espécie Phyllactinia paulowniae cf. foi encontrada parasitando Tabebuia avellanadae, T. impetiginosa, e T.serratifolia e descreveu-se pela primeira vez a fase anamórfica de Erysiphe alvimii encontrada sobre Bowdichia virgilioides e o primeiro relato de um membro da ordem Erysiphales na família Caryocaraceae. Para os gêneros botânicos Astronium, Brosimum, Myracrodruon, Pouteria, e Pterogyne relatou-se pela primeira vez o gênero Oidium. Erysiphe peruviana foi relatado pela primeira vez em T. ochracea, assim como o anamorfo Ovulariopsis em T.caraiba. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nine fungi species belonging to the Erysiphales were investigated here in association with thirteen native hosts from the Brazilian Cerrado. The specimes came from native areas, urban trees and nurseries and are stored at the Coleção Micológica de Referência da Universidade de Brasília (CMRUnB). Four new species of Oidium have been proposed having the following plants as hosts: Astronium fraxinifolium and Myracrodruon urundeuva, Caryocar brasiliense, Pouteria ramiflora, and Pterogyne nitens. A new species of Erysiphe was found growing in two Bauhinia species. Phyllactinia paulowniae cf. was found growing on Tabebuia avellanadae, T. impetiginosa, T.serratifolia. The anamorphic stage of Erysiphe alvimii was found for the first time in association with Bowdichia virgilioides and a first report of a member of the Erysiphales attacking a host in the Caryocaraceae family. Oidium sp. was found for the first time attacking members of the following genera: Astronium, Brosimum, Myracrodruon, Pouteria, and Pterogyne. In addition, Erysiphe peruviana was also reported on Tabebuia ochracea, as well as the anamorph Ovulariopsis on T.caraiba.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T13:37:00Z No. of bitstreams: 1 2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-02T02:17:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-02T02:17:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5) Previous issue date: 2008-10-30 / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, a micose sistêmica com maior prevalência na América Latina. A patogenia deste fungo parece estar diretamente ligada ao processo dimórfico. A expressão diferencial de genes é essencial em diversos processos biológicos como resposta ao estresse, diferenciação celular, interação hospedeiro-patógeno, entre outros. P. brasiliensis, é capaz de sobreviver e se replicar no interior dos macrófagos do hospedeiro. Nesse sentido, genes ortólogos a potenciais fatores de virulência de outros microrganismos patogênicos são encontrados em P. brasiliensis. Nesse contexto, esse trabalho analisa a regulação do gene quitina sintase 4 (CHS4), responsável pela polimerização da quitina, um polímero que atua na biosíntese da parede celular. Visando a análise da função promotora do gene CHS4, um fragmento de DNA contendo a região promotora deste gene foi clonado e transformado em A. nidulans utilizando o gene repórter lacZ. Os transformantes foram cultivados em meios contendo diferentes fontes de carbono. Os resultados sugerem que o precursor de quitina, Nacetilglicosamina, ativa o promotor de CHS4. Também foi realizada uma busca por regiões consenso a sítios de ligação para fatores de transcrição. Foram encontrados vários sítios para fatores de transcrição diversos e selecionado uma região que continha um elemento consenso ao sítio de ligação a PacC e dois sítios consenso para STRE. Para essa região foi sintetizado um oligonucleotídeo utilizado como sonda para o experimento de retardo de mobilidade eletroforética (EMSA). Os resultados do EMSA sugerem uma interação DNA-proteína específica em ambas as fases e outra interação micélio específica. Esses resultados nos mostram que a região utilizada como sonda pode estar atuando na regulação transcricional do gene CHS4, mas ainda são dados insuficientes para determinar qual proteína está interagindo com a região promotora deste gene. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of the paracoccidioidomycosis, the major systematic mycosis prevalent in Latin America. This fungus is able to survive and replicate in the interior of the host macrophages, and its pathogenesis seems to be directly correlated with its dimorphism for which differential gene expression is essential. The differential gene expression is also crucial in different biological processes such as stress-response, cellular differentiation, host-pathogen interactions, and others. Furthermore, orthologs genes to potential virulence factors in other pathological microorganisms are found in P. brasiliensis. In this context, this work analyses the regulation of chitin synthase 4 (CHS4), responsible for the polymerization of chitin - a polymer which acts in the biosynthesis of the cellular wall. In the attempt to analyse the promoter function of the CHS4 gene, a DNA fragment containing the promoter region of this gene was cloned and transformed in Aspergillus nidulans, using lacZ as the gene reporter. The transformants were cultivated in broth containing different sources of carbon. The results from these experiments suggest that the chitin precursor, N-acetylglucosamine, activates the promoter of CHS4 gene. A search for consensus regions to transcriptional factors’ binding sites was also performed and assorted sites for diverse transcriptional factors were found. A region which contained a consensus element to the binding site of PacC and two consensus sites for STRE was selected for further investigation. An oligonucleotide, for this region, was synthesized to be used as a probe for the electro mobility shift assay (EMSA). The results suggest two specific protein- DNA interactions, one in both phases and another peculiar to the mycelium phase. This would suggest the region used as a probe may act in the transcriptional regulation of the CHS4 gene; nevertheless the results so far are insufficient to determine which protein is interacting with the promoter region.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-02T17:37:55Z No. of bitstreams: 1 2009_BrunoEduardoCardozodeMiranda.pdf: 380294 bytes, checksum: d08149d5e6c27e168c35e437390e766c (MD5) / Rejected by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br), reason: Colocar abstract da pag. 14 (xii). on 2010-03-03T00:55:09Z (GMT) / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-03T17:52:50Z No. of bitstreams: 1 2009_BrunoEduardoCardozodeMiranda.pdf: 380294 bytes, checksum: d08149d5e6c27e168c35e437390e766c (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-05T18:46:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_BrunoEduardoCardozodeMiranda.pdf: 380294 bytes, checksum: d08149d5e6c27e168c35e437390e766c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-05T18:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_BrunoEduardoCardozodeMiranda.pdf: 380294 bytes, checksum: d08149d5e6c27e168c35e437390e766c (MD5) Previous issue date: 2009-03 / O tomate (Solanum lycopersicum) é uma das hortaliças mais atacadas por doenças de diversas etiologias, sendo que os fungos causam a maior parte destas doenças. Destacam-se entre estas a murcha-de-verticílio (Verticillium dahliae) e a mancha-de-estenfílio (Stemphylium solani e S. lycopersici). A melhor forma de controle destas doenças é o plantio de cultivares resistentes. Os genes de resistência Ve e Sm conferem resistência à murcha-deverticílio e à mancha-de-estenfílio, respectivamente. O surgimento e o estabelecimento da raça 2 de V. dahliae, para a qual não existe cultivares de tomateiro resistentes, e a ocorrência de surtos epidêmicos da mancha-deestenfílio, que sugere a ausência do gene Sm em muitas cultivares utilizadas e erros de identificação e de controle do patógeno, têm causado muitos prejuízos aos produtores das principais regiões produtoras da hortaliça no Brasil. Tendo como base os problemas citados, teve-se como objetivo identificar acessos de tomateiro selvagens e domésticos disponíveis no banco de germoplasma da Embrapa Hortaliças com resistência a V. dahliae (capítulo 1) e à S. solani e a S. lycopersici (capítulo 2). Todos os experimentos foram conduzidos em casa-devegetação. No capítulo 1, 100 acessos de tomateiro foram testados quanto à resistência a um isolado de V. dahliae raça 1, sendo que a inoculação foi feita através do método de imersão de raízes. Os genótipos foram avaliados 30 dias após a inoculação, através de um corte na base do caule para a verificação de escurecimento vascular, atribuindo às plantas uma escala de notas que varia de 1 (plantas sadias) a 5 (plantas mortas). Os acessos que demonstraram resistência foram reavaliados com o mesmo isolado para confirmação de resistência e mais outros quatro, pertencentes às raças 1 e 2 e de diferentes localidades, considerando-se também nessa etapa os parâmetros epidemiológicos período de incubação (PI) e índice de doença (ID). Verificou-se que houve reação diferencial dos genótipos aos isolados de cada raça (resistente à raça 1, suscetível a raça 2 e vice-versa), verificando-se também uma maior freqüência de acessos resistentes à raça 1 do patógeno. Alguns genótipos apresentaram resistência do tipo “vertical” a todos os isolados inoculados. A maior parte dos genótipos resistentes pertencia a acessos da espécie S. lycopersicum. No capítulo 2, 109 acessos de tomateiro foram testados quanto à resistência a um isolado de S. solani e a outro de S. lycopersici, através de pulverização da suspensão do inóculo em folíolos de tomate até o escorrimento. Aos 15 dias após a inoculação as plantas eram avaliadas através da visualização de sintomas foliares, sendo que as plantas resistentes apresentaram folhas sadias ou com pequenas pontuações necróticas, caracterizando reação de hipersensibilidade. Os genótipos considerados resistentes foram reavaliados com os mesmos isolados para confirmação da resistência, considerando-se os padrões epidemiológicos PI, área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) e ID. A maior parte dos genótipos confirmou a resistência verificada na pré-seleção. Alguns demonstraram suscetibilidade na seleção definitiva, sendo que a “resistência” inicial ocorreu devido a escapes, ou resistência do tipo “horizontal”. Verificou-se resistência aos patógenos em acessos das espécies S. lycopersicum, S. pimpinellifolium (provavelmente portadores do gene Sm), S. habrochaites e S. peruvianum (provavelmente portadores de novos alelos/genes de resistência). Os genótipos resistentes a ambas as doenças podem ser utilizados em programas de melhoramento genético e manejo integrado da doença. Para a confirmação da presença dos alelos/genes de resistência à V. dahliae e à Stemphylium nas fontes promissoras identificadas, é necessária a caracterização genética, além do teste em condições de campo sob diferentes intensidades das doenças. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tomato (Solanum lycopersicum) is one of the vegetables most affected by diseases of different etiologies, and the fungi cause most of these diseases, as Verticillium wilt (Verticillium dahliae) and gray leaf spot (Stemphylium solani and S. lycopersici). The best way to control these diseases is to use resistant cultivars. The Ve and Sm genes confer resistance to Verticillium wilt and gray leaf spot, respectively. The emergence and establishment of race 2 of V. dahliae, for which there is no resistant cultivars of tomato, and the occurrence of epidemic outbreaks of gray leaf spot, which suggests the absence of Sm gene in many cultivars used and errors in identification and control of the pathogen, have caused damage to many producers of the main vegetable producing regions of Brazil. Based on these problems, the main objective was to identify Solanum (section Lycopersicon) accessions of wild and domestic tomatoes available in the germplasm bank of Embrapa Vegetables with resistance to V. dahliae (Chapter 1) and S. solani and S. lycopersici (Chapter 2). All experiments were conducted in greenhouse. In Chapter 1, 100 accessions of tomato were tested for resistance to an isolate of V. dahliae race 1, and the inoculation was made by the root dipping method. Disease assessment was done 30 days after inoculation through a cut in the base of the stem to verify vascular browning, giving the plants a scale of grades ranging from 1 (healthy plant) to 5 (dead plants). A second assessment was done with the same isolate for confirmation of resistance and another four, belonging to races 1 and 2 and in different locations, based upon the epidemiological parameters incubation period (IP) and disease index (DI). Sources of race-specific resistance and also with resistance to both races were identified. The most resistant accessions belonged to S. lycopersicum In Chapter 2, 109 accessions of tomato were tested for resistance to a strain of S. solani and the other from S. lycopersici, by spraying the suspension of the inoculum on tomato leaves. At 15 days after inoculation the plants were assessed by visualization of leaf symptoms, and the resistant plants had healthy leaves or with small necrotic scores, featuring a hypersensitivity reaction. The genotypes considered resistant were evaluated with the same isolates for confirmation of resistance, considering the epidemiological patterns IP, area under the disease progress curve (AUDPC) and DI. Promising sources of resistance were identified in accessions of S. lycopersicum, S. habrochaites, S. peruvianum and S. pimpinellifolium. The S. pimpinellifolium and S. lycopersicum accessions probably have the resistance gene Sm. However, S. habrochaites and S. peruvianum might be potential new sources of gene/alleles that confer resistance to both fungi. The resistant genotypes may be useful for tomato breeding programs and integrated management of disease. To confirm the presence of alleles/genes for resistance to V. dahliae and Stemphylium in these genotypes, a genetic characterization is required in addition to testing in the field under different intensities of disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-10T18:11:30Z No. of bitstreams: 1 2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T13:47:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T13:47:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5) Previous issue date: 2009 / Paracoccidioides brasiliensis, o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), é um fungo termodimórfico que cresce como micélio à temperatura ambiente e se diferencia para levedura em culturas a 37°C e no tecido do hospedeiro. A transição dimórfica de P. brasiliensis está associada com alterações na parede celular. Quando o fungo se diferencia de micélio para levedura, o conteúdo de quitina é aumentado e a composição de glicana é alterada, reduzindo o conteúdo de 1,3-b-glicana e aumentando o conteúdo de 1,3-a-glicana. Em P. brasiliensis, um homólogo do gene de 1,3-b-glicana sintase (Pbfks1) e seis genes de quitina sintase (Pbchs1, Pbchs2, Pbchs3, Pbchs4, Pbchs5 e Pbchs6) foram identificados. Em nosso estudo, nós investigamos a região promotora dos genes Pbfks1 e Pbchs4. Por meio de ensaio de retardo da mobilidade eletroforética (EMSA), analisamos sondas referentes aos promotores desses dois genes e identificamos prováveis sítios regulatórios. A análise da região promotora do gene Pbfks1 indica um TATA Box que pode ser funcional, e sugerimos que o promotor do gene Pbchs4 possa estar sendo regulado pelo elemento de resposta ao estresse (STRE). Além disso, demonstramos também que o domínio de ligação ao DNA de PacC de P. brasiliensis reconhece um sítio descrito para PacC de A. nidulans, porém, a proteína não reconheceu uma variação na seqüência consenso presente no promotor do gene Pbchs4. Observamos que uma sonda referente ao promotor do gene Pbchs4 que contém um sítio para o fator de transcrição CreA não interage com o domínio de ligação ao DNA de CreA de Humicola grisea, mas apresenta interações DNA-proteína específicas nas fases de micélio e levedura. Adicionalmente, resultados de RT-PCR em tempo real revelaram que o gene Pbfks1 é mais expresso em meio com acetato do que em meio com glicose como fonte de carbono. Portanto, o trabalho desenvolvido em nosso grupo de pesquisa fornece dados que podem contribuir para a compreensão da regulação dos promotores dos genes 1,3-b-glicana sintase e quitina sintase 4 em P. brasiliensis. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis, the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), is a thermal dimorphic fungus which grows as a mycelium at room temperature and differentiates to yeast in cultures at 37°C and in the host tissue. The dimorphic transition of P. brasiliensis is associated with changes in the cell wall. When the fungus differentiates from mycelium to yeast, the chitin content is increased and the composition of glucan changes, reducing the 1,3-β-glucan content and enhancing the content of 1,3-α-glucan. In P. Brasiliensis, one homologous of 1,3-β-glucan synthase gene (Pbfks1) and six genes of chitin synthase (Pbchs1, Pbchs2, Pbchs3, Pbchs4, Pbchs5 e Pbchs6) were identified. In our study, we investigated the promoter region of Pbfks1 and Pbchs4 genes. By means of Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA), we analyzed probes referring to promoters of these two genes and we identified probable regulatory sites. The analysis of the promoter region of the Pbfks1 gene indicates one TATA Box that could be functional, and we propose that the Pbchs4 promoter may be regulated by the stress responsive elements (STRE). Furthermore, we also demonstrated that the PacC DNA binding-domain of P. brasiliensis recognizes one A. nidulans’s PacC described site, nevertheless, the protein didn’t recognize one variation in the consensus sequence in the Pbchs4 promoter. We observed one Pbchs4 promoter probe with one CreA transcription factor site doesn’t interact with the CreA DNA bind-domain of Humicola grisea, but shows specific DNA-protein interactions in mycelium and yeast phases. Additionally, results of Real Time RT-PCR disclosed that Pbfks1 gene is more expressed in medium with acetate then in medium with glucose as a carbon source. Therefore, the work developed in our research group provides data which may contribute for the comprehension of 1,3-β-glucan synthase and chitin synthase 4 promoters’ regulation in P. brasiliensis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-24T18:02:11Z No. of bitstreams: 1 2009_JanaynaNunesReis.pdf: 1420472 bytes, checksum: 7304e910ea878ca163555f1fe65a4206 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-06T19:31:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_JanaynaNunesReis.pdf: 1420472 bytes, checksum: 7304e910ea878ca163555f1fe65a4206 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-06T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_JanaynaNunesReis.pdf: 1420472 bytes, checksum: 7304e910ea878ca163555f1fe65a4206 (MD5) Previous issue date: 2009 / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo intracelular facultativo causador da Paracoccidioidomicose (PCM), doença crônica e granulomatosa, frequente na América Latina. O principal mecanismo de defesa do hospedeiro contra a PCM é a imunidade celular mediada principalmente por macrófagos ativados por IFN-γ. A interação inicial entre macrófago-fungo é mediada pelas interações entre proteínas de superfície, tais como as moléculas de adesão β2 integrinas. Os mecanismos pelos quais as integrinas interferem no curso da PCM são desconhecidos até o momento. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a participação da β2 integrina na evolução da PCM. Para isso, foram utilizados camundongos C57BL/6 selvagens (WT) e geneticamente deficientes para a produção dessa proteína (β2-/-), ambos infectados com 1x106 células do isolado virulento P. brasiliensis (Pb18) por via endovenosa. Após 15, 30 e 60 dias de infecção os animais foram sacrificados e a análise histológica e histocitométrica de tecidos do fígado e pulmão foi realizada. A carga fúngica, os níveis de NO3, a concentração de anticorpos no soro e de citocinas em sobrenadante de culturas também foram determinados. Os resultados encontrados mostraram que nos camundongos β2-/- a carga fúngica foi menor quando comparada aos animais WT. No 15° dia após a infecção, tecidos do fígado de ambos os grupos de animais analisados apresentaram lesões granulomatosas bem caracterizadas; além disso, nesse mesmo período, o tamanho da área granulomatosa de tecido pulmonar foi significantemente maior nos camundongos β2-/- do que nos WT. No 60° dia após infecção, camundongos β2-/-apresentaram lesões granulomatosas mais compactas, bem formadas no tecido pulmonar, caracterizada por pouco espaço alveolar e presença de muito fungo nas lesões. Os níveis de NO3 detectados nos períodos de 15 e 60 dias após infecção foram significativamente menores em camundongos β2-/-. Os níveis de anticorpos IgG1 foram significativamente maiores em animais β2-/-. A produção de IL-12 e IL-10 foi semelhante em ambos os grupos, mas o estímulo específico com antígenos protéicos da parede celular de Pb18 induziu um leve aumento da produção apenas de IL-10. A capacidade de proliferação celular avaliada em linfócitos do baço estimulados com extrato protéico da parede celular do fungo foi mais significativa em animais β2-/-, quando comparados aos animais WT. Finalmente, foi observado que macrófagos de ambos os grupos de animais estudados, infectados in vitro com P. brasiliensis aumentaram o número de leveduras internalizadas após o tempo de 24 horas de co-cultivo. Nossos dados sugerem que as β2 integrinas participam do processo de internalização de leveduras de P. brasiliensis, contribuindo para a permanência do fungo no interior dos macrófagos e conseqüente sobrevivência do fungo. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis is a facultative intracellular fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic and granulomatous disease, frequently diagnosed in Latin America. As in other systemic mycoses, the host's principal defense mechanism against PCM is the cellular immunity mediated mainly by IFN-gamma activation of macrophages. Macrophages appear to play a fundamental role in this infection acting as the first line of defense for organism. The first interaction between macrophages-fungi is very important in this mycosis progression and this interaction is mediated by surface proteins, like β2 integrin. The role of β2 integrin in the curse of PCM is still unclear, then in the present study the importance of β2 integrin to progression of the disease was investigated. We used β2 - deficient (β2-/-) and wildtype (WT) C57BL/6 mice both endovenous infected with 1x106 the virulent P. brasiliensis strain (Pb18). After 15, 30 and 60 days post infection the mice were killed and we evaluated the disease progression by histology and histocytometry of liver and lung sections and also the fungal burden. Besides we analyzed the NO3 levels, antibodies in the serum and the production of cytokines. Our data showed that in the β2-/- mice there was less fungal burden when compared with the WT mice. After 15 days of infection, liver sections from both mouse groups presented granulomatous lesions well characterized with organized cells. Conversely, 60 days post infection we observed less alveolar space and many fungi inside the lesions in lung tissue from β2-/- mice. The size of granulomas from lung sections was significantly higher in β2-/- mice than in the WT only 15 days after infection, and this result was inverted in the 60º day post infection. Analysis of the NO3 levels from WT mice showed incresead after 8 weeks post infection; moreover IgG1a and IgG2 levels were higher in β2-/-mice. IL-12 and IL-10 production was similar in both groups, but the specific stimulus with the fungi antigens increased the IL-10 production. The spleen cell proliferation stimulated by protein extract from fungus (Pb 1:500) was more significative in β2-/- mice, while WT mice presented less efficient linfoproliferative response. We also observed that macrophages infected with P. brasiliensis in vitro from the two mouse strains had increased in internalized yeasts after 24h of co-culture. Our data suggest that β2 integrins that are probably involved with the fungi internalization contribute with the survival of the fungi inside macrophages and this phagocytosis may serve as a protected environment for the P. brasiliensis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-04-19T17:39:44Z No. of bitstreams: 1 2009_PrisciladaSilvaLima.pdf: 1572149 bytes, checksum: 33500bc789c2fabbdcfba622796b2d27 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-03T20:34:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_PrisciladaSilvaLima.pdf: 1572149 bytes, checksum: 33500bc789c2fabbdcfba622796b2d27 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-03T20:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_PrisciladaSilvaLima.pdf: 1572149 bytes, checksum: 33500bc789c2fabbdcfba622796b2d27 (MD5) Previous issue date: 2009-07 / Lacases são enzimas de ampla aplicação biotecnológica, como na remoção de lignina da polpa de celulose e biorremediação de compostos fenólicos de indústrias farmacêuticas e têxteis. Em um estudo iniciado por Garcia e colaboradores (2006), o fungo filamentoso Pycnoporus sanguineus foi descrito como produtor de lacases aplicadas no tratamento de efluentes fenólicos industriais. Dando continuidade a este estudo, um gene de lacase de P. sanguineus foi isolado, clonado e expresso na levedura metilotrófica Pichia pastoris, visando a produção desta enzima em larga escala para aplicação na biorremediação de efluentes fenólicos industriais, assim como, no branqueamento de papel e delignificação de biomassa lignocelulósica para produção de bioetanol. O cDNA da lacase foi obtido através de uma reação de RT-PCR utilizando primes específicos desenhados com base na seqüência de uma lacase de P. sanguineus depositada no banco de dados de seqüências no Genbank. Como produto da RT-PCR foi amplificado um segmento de DNA com 1500 pb. O cDNA foi, clonado no vetor PGEM-T e utilizado na transformação de células de Escherichia coli, sendo obtidos 18 clones positivos. Destes o clone denominado PGLac 1 foi utilizado para a obtenção das construções 1 e 2. Na construção1 o inserto obtido na clonagem em pGEM-T foi subclonado em pPICZA e utilizado na transformação de Pichia pastoris. Para esta construção, não foram detectados clones de P. pastoris produtores de lacases. Na construção 2, o cDNA foi subclonado utilizando-se o vetor de expressão pPIC9. Em seguida, foi realizada a transformação de P. pastoris GS115. Os transformantes foram plaqueados em meio seletivo sólido (MD) contendo o substrato AzBTS, sendo observados clones com a atividade enzimática de interesse. O cDNA clonado no vetor pPICZA10 foi seqüenciado. A seqüência obtida apresentou identidade de 97% com as lacases de P. sanguineus e P. cinnabarinus e 79% com uma lacase de Trametes sp. Além disto, a seqüência protéica predita possui 502 aminoácidos, 3 domínios conservados de cobre-oxidases, massa molecular de 58,8 KDa e ponto isoelétrico de 5,7. A seqüência predita foi modelada utilizando-se a ferramenta SPDBV, tendo como base a estrutura de uma lacase de C. cinereus. A lacase heteróloga tem 57% de identidade com a seqüência molde e uma estrutura semelhante a de outras lacases de fungos da podridão branca. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Lacases are enzymes with potential application in a set of industrial processes. Some authors described their use in bioremediation of phenolic compounds of pharmaceutical and dyes industries and in the removal of lignin of the cellulose pulp. In this study a laccase from Pycnoporus sanguineus previously described by Garcia and co-workers 2006), was expressed in the metylhothrofic yeast Pichia pastoris, aiming their production for biotechnological purposes. The laccase cDNA was obtained by RT-PCR and cloned using the vector PGEM-T. Escherichia coli harbouring the construction were selected and the clone called PGLac 1 was used for further experiments (subcloning and sequencing). Two different vectors were used for P. pastoris transformation, pPIC9 e pPICZ-A. The laccase activity was detected only for P. pastoris harbouring the construction 2 (pPIC9/laccase cDNA). The heterologous laccase presents identity with lacases from P. sanguineus, P. cinnabarinus (97%) and Trametes sp. (79%). Moreover, the predicted protein has 502 amino acids, 3 cupric-oxidase conserveddomains, molecular mass of 58,8 KDa and isoelectric point of 5,7. The molecular modelling revelead a globular protein with a active site containing copper atoms, coordinated by histidin and cistein residues.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-11-20T00:21:50Z No. of bitstreams: 1 2006-Tereza Cristina Vieira de Rezende.pdf: 3693859 bytes, checksum: 931204476ebc225e7238b8afde44e9c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-12-03T00:40:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Tereza Cristina Vieira de Rezende.pdf: 3693859 bytes, checksum: 931204476ebc225e7238b8afde44e9c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-12-03T00:40:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Tereza Cristina Vieira de Rezende.pdf: 3693859 bytes, checksum: 931204476ebc225e7238b8afde44e9c0 (MD5) / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico agente causador da paracoccidioidomicosse (PCM), uma micose que afeta 10 milhões de indivíduos na América Latina. A infecção é adquirida pela inalação de propágulos aéreos produzidos pela forma miceliana do fungo, os quais se convertem à morfologia leveduriforme na temperatura do hospedeiro. P brasiliensis expressa in-vivo importantes genes que podem contribuir para a patogênese do fungo. Nós utilizamos a tecnologia do antígeno induzido in-vivo (IVIAT) para identificar novos genes de P. brasiliensis que podem ser expressos durante o processo de infecção. A técnica IVIAT é uma modificação do rastreamento imunológico que evita o uso de modelo animal e permite a identificação de antígenos expressos em vários estágios da infecção. Nós utilizamos a estratégia de IVIAT para identificar genes possivelmente induzidos in-vivo. Usando esta técnica nós selecionamos proteínas imunogênicas que poderiam ser expressas especificamente durante a infecção e não durante o crescimento sob condições padrões do laboratório. O soro de onze pacientes com PCM obtidos em Goiânia, foram combinados e, em seguida, adsorvidos com extratos de células totais e lisados de células leveduriformes cultivadas in-vitro. Esses soros foram utilizados para rastrear proteínas de uma biblioteca de cDNA da fase leveduriforme de P. brasiliensis construída no vetor ZAPII. Clones foram obtidos e caracterizados. O cDNA que codifica para uma proteína de 174 resíduos de aminoácidos foi caracterizado como lumazina sintase (PbLS) de P.brasiliensis (GenBank: DQ081183). Análises comparativas entre a PbLS e outros organismos foram feitas. Essa proteína catalisa o penúltimo passo na síntese de riboflavina em plantas, fungos e bactérias. Para produzir anticorpos contra a PbLS recombinante, uma construção no pGEX-4T-3-LS foi realizada e introduzida dentro das células de Escherichia coli e a expressão e purificação da proteína recombinante foi obtida. A análise da reatividade imunológica da proteína recombinante mostrou que esta é reconhecida por soros de pacientes com PCM e não é reativa com soros de indivíduos controle. Para analisarmos a expressão do gene Pbls nas duas formas de P.brasiliensis utilizamos a técnica RT-PCR semiquantitativo. Os transcritos para LS foram preferencialmente expressos na forma leveduriforme do fungo. Pneumócitos humanos infectados com P.brasiliensis foram utilizados para investigar a expressão dos transcritos num modelo de infecção. O gene Pbls foi detectado em células de pneumócitos humanos infectados com células leveduriformes. A LS representa um alvo atrativo para o desenvolvimento de drogas contra patógenos, visto que, bactérias, fungos e plantas são dependentes da síntese endógena da vitamina B2. Estudos mostram que a LS recombinante são fortemente imunogênicos e elucidam resposta immune celular e humoral, conferindo proteção em camundongos. Esses dados são muito interessantes e despertam o interesse em se estudar essa proteína do fungo P. brasiliensis. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis is a thermally dimorphic fungus causing paracoccidioidomycosis (PCM), a mycosis that affects 10 million individuals in Latin America. The infection is acquired by inhaling airborne propagules produced by the fungal mycelium which transforms into the pathogenic yeast form, when at the body temperature. P brasiliensis expresses invivo many important virulence genes that may contribute to the overall fungus pathogenesis. We utilized in vivo-induced antigen technology (IVIAT) to identify new P. brasiliensis antigens that could be expressed during the infection process. IVIAT is a modified immunoscreening that circumvents the need for animal models and permits identification of antigens expressed at various stages of infection. We used the IVIAT strategy to identify P. brasiliensis genes putatively induced in vivo. Using this technique we selected immunogenic proteins which should be expressed specifically during human infection and not during growth under standard laboratory conditions. Sera from eleven patients with PCM infection obtained in Goiânia were pooled and after that were adsorbed with whole cells and lysates of the in vitro cultured yeast phase. These sera were probed to induced proteins from a cDNA expression library of the yeast phase of P. brasiliensis constructed in ZAPII. Clones were obtained and characterized. Of special note is a cDNA (Pbls) encoding a 174 amino acid residues protein characterized as lumazine synthase (PbLS) homologue of P.brasiliensis (GenBank: DQ081183).This protein catalyzes the penultimate step in the synthesis of riboflavin in plants, fungi, and microrganisms. In order to produce antibodies against the recombinant PbLS the expression construct pGEX-4T-3-LS was introduced into Escherichia coli cells and the expression and purification of the recombinant protein was obtained. The analysis of the immunological reactivity of the recombinant protein showed that this is recognized by sera of patients with PCM and is not reactive with sera of control individuals. To analyze the expression of the Pbls gene in the two forms of P.brasiliensis we use semiquantitative RT-PCR. The transcripts for LS had been preferentially expressed in the yeast form of fungus. Human pneumocytes infected with P.brasiliensis had been used to investigate the expression of transcripts in an infection model. The Pbls gene was detected in yeast cells infecting human pneumocytes. The lumazine synthase represents an attractive targets for the development of drugs against pathogens, since bacteria, fungus and plants are dependent of the endogenous synthesis of the B2 vitamin. Studies shown that recombinant lumazine synthase is strongly immunogenic and elicits both humoral and cellular immune responses confering protection in mice. Those data make very interesting the study of this protein in P. brasiliensis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2011. / Submitted by Matheus Denezine (matheusdenezine@yahoo.com.br) on 2011-06-20T14:22:46Z No. of bitstreams: 1 2011_LeilaTerezinhaPereiradosSantos.pdf: 4567249 bytes, checksum: ca608071a79eea08220853bdaa0a54dd (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-06-20T18:53:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LeilaTerezinhaPereiradosSantos.pdf: 4567249 bytes, checksum: ca608071a79eea08220853bdaa0a54dd (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-20T18:53:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LeilaTerezinhaPereiradosSantos.pdf: 4567249 bytes, checksum: ca608071a79eea08220853bdaa0a54dd (MD5) / Salacia crassifolia (Celastraceae) ou ―bacupari do Cerrado‖ é uma planta nativa com frutos saborosos semelhantes aos de lichia, além de ser utilizada na medicina popular, portanto com potencial para exploração em fruticultura. Um estudo da sua micobiota foliícola foi realizado analisando 21 coletas de folhas de S. crassifolia, provenientes do Distrito Federal, Minas Gerais, Goiás e Mato Grosso, contendo fungos a elas associados. Como resultado descreveu-se 32 fungos sendo 11 celomicetos, (Dinemasporium cytosporoides, duas espécies de Geastrumia, Leptothyrium sp., Ciferrioxyphium sp., Scolecoxyphium sp., Peltasteropsis sp., Phomopsis sp., Setodochium sp., Stigmopeltis sp. e um provável gênero novo de celomiceto), hifomicetos (Eriocercospora sp., Zygosporium sp., Chalara sp.) e 16 ascomicetos (Asterina salaciae, Micropeltis heptaphyllica, Staibia connari, Uleothyrium amazonicum, Chaetothyrina sp., Dysrhynchis sp., Lembosia sp., Meliola sp., Nectriopsis sp., Nematostigma sp., Schizothyrium sp., Scopinella sp., duas espécies de Stomiopeltis e um provável gênero novo de Phyllachoraceae) e 3 anamorfos associados (Asterostomella sp.– anamorfo de Asterina; Septothyrella uleana– anamorfo de Uleothyrium; além de um celomiceto anamorfo de Lembosia sp.). Assim, foram estudadas 7 espécies conhecidas, descritas 23 prováveis novas espécies, 2 prováveis novos gêneros e uma provável nova combinação. As amostras analisadas constituem cerca de 20 % das exsicatas disponíveis na Coleção Micológica do Herbário UB e, por isso, este trabalho necessita ter continuidade para que componha uma visão mais precisa e ampla da micobiota associada a S. crassifolia e gerar dados de interesse também biogeográfico. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Salacia crassifolia (Celastraceae) commonly known as ―bacupari do cerrado‖ is a native plant with fruits that taste as those of liche nesisdes being utilized in popular medicine, thus being potentially a new fruit crop. A study of its foliicolous mycobiota based on 21 samples of S. crassifolia leaves from Distrito Federal, Minas Gerais, Goiás e Mato Grosso, revealed 32 fungi, being 11 coelomyces (Dinemasporium cytosporoides, two Geastrumia species, Leptothyrium sp., Ciferrioxyphium sp., Scolecoxyphium sp., Peltasteropsis sp., Phomopsis sp., Setodochium sp., Stigmopeltis sp. and a probably new genus of coelomycete), three hyphomycetes (Eriocercospora sp., Zygosporium sp., and a Chalara sp.), and 16 ascomycetes (Asterina salaciae, Micropeltis heptaphyllica, Staibia connari, Uleothyrium amazonicum, Chaetothyrina sp., Dysrhynchis sp., Lembosia sp., Meliola sp., Nectriopsis sp., Nematostigma sp., Schizothyrium sp., Scopinella sp., two Stomiopeltis species and a probably new phyllachoraceous genus). Thus, seven know species, 23 probably new species, two probably new genera, and a probably new combination. The samples make up 20% of the total available in the Mycological Collection of the Herbarium UB, thus the need for a continuation of the research in order to provide a detailed vision of the nationwide biogeographical distribution of the fungi on the leaves of S. crassifolia.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Gabriela Ribeiro (gaby_ribeiro87@hotmail.com) on 2011-09-19T14:27:28Z No. of bitstreams: 1 2011__LorenadaSilveiraDerengowski.pdf: 32990320 bytes, checksum: c97d5b1085b1631222dd3fd50cc78787 (MD5) / Approved for entry into archive by Repositorio Gerência(repositorio@bce.unb.br) on 2011-10-25T20:14:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011__LorenadaSilveiraDerengowski.pdf: 32990320 bytes, checksum: c97d5b1085b1631222dd3fd50cc78787 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-25T20:14:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011__LorenadaSilveiraDerengowski.pdf: 32990320 bytes, checksum: c97d5b1085b1631222dd3fd50cc78787 (MD5) / Nas últimas décadas, a relevância clínica do Reino Fungi vem aumentando, principalmente em virtude da maior incidência de micoses sistêmicas e do número limitado de fármacos eficazes no tratamento de infecções fúngicas. Dentre os fungos de importância médica podemos destacar o fungo dimórfico e oportunista Candida albicans, o qual é capaz de infectar uma ampla gama de tecidos, além de ser um dos principais agentes causadores de infecções nosocomiais. A maioria das septicemias nosocomiais causadas por esse microrganismo deve-se à formação de comunidades microbianas denominadas biofilmes. A formação de biofilme confere ao patógeno maior resistência a terapias antifúngicas e às defesas do hospedeiro. Nesse contexto, avaliamos o efeito do propranolol, um antagonista beta-adrenérgico, na formação do biofilme de C. albicans. Os resultados indicaram que o propranolol desempenha um efeito inibitório na filamentação e na adesão de C. albicans a superfícies, inibindo assim a formação do biofilme por esse fungo. A inibição da formação de biofilmes por C. albicans também é mediada pelo farnesol, uma molécula autoindutora produzida por esse patógeno. Nesse trabalho foi também demonstrado o potencial antimicrobiano do farnesol no fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis, o qual é descrito como o agente etiológico da paracoccidioidomicose. Nossos resultados mostraram que o farnesol desempenha um significante efeito fungicida em P. brasiliensis, provavelmente por desencadear a degradação de organelas intracelulares. Além disso, o farnesol, assim como o sobrenadante de uma cultura crescida de C. albicans, inibem o processo de transição morfológica de P. brasiliensis, sugerindo um possível envolvimento dessa molécula em interações interespecíficas entre esses fungos. Os resultados obtidos tanto para o propranolol quanto para o farnesol mostramse promissores e devem ser melhor explorados, principalmente tendo-se em mente o alto custo e a alta toxicidade geralmente apresentados pelas drogas antifúngicas atualmente disponíveis. Outro fungo patogênico e oportunista que merece destaque é Cryptococcus neoformans. Esse fungo é capaz de sobreviver e se replicar no interior de macrófagos, revelando a existência de mecanismos que permitem sua adaptação ao ambiente inóspito do fagossomo da célula hospedeira. Uma hipótese é de que os atributos necessários para a sobrevivência de C. neoformans ao ambiente do interior de macrófagos foram previamente selecionados a partir de interações entre esse fungo e predadores ambientais, como amebas. A fim de verificarmos essa hipótese, comparamos a resposta transcricional de C. neoformans ao microambiente de macrófagos e de amebas. Nossos resultados sugerem que, embora o fungo expresse alguns grupos de genes específicos em resposta a um dado fagócito, de modo geral a responda metabólica de C. neoformans a amebas e macrófagos é bastante similar, indicando privação nutricional e estresse oxidativo nesses ambientes. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In recent decades, the clinical relevance of the Fungi Kingdom is increasing, mainly due to higher incidence of systemic mycoses and the limited number of effective drugs to treat fungal infections. Among the medically important fungi, we can highlight the opportunistic dimorphic fungus Candida albicans, which is able to infect a wide range of host tissues, besides being one of the major causative agents of nosocomial infections. C. albicans is associated to nosocomial infections in part due its ability to adhere to a variety of biomaterials such as catheters, forming biofilms. Biofilms have clinical repercussions mainly due to their notorious resistance to antimicrobials agents and host immune defenses. The difficulty in treating biofilm-associated infections emphasizes the importance of studying drugs that are active against its formation. In this context, we evaluated the effects of propranolol, which has been used clinically as a beta-adrenergic receptor antagonist, in C. albicans adherence and biofilm formation. Here, we demonstrate that propranolol inhibits germ tubes formation and the adherence of C. albicans cells on abiotic surfaces as well as on epithelial cells, resulting in decreased in biofilm formation. C. albicans biofilm development can also be inhibited by the autoinducer farnesol as quorum-sensing mechanism. Moreover, studies revealed that farnesol affect the growth of a number of bacteria and fungi, pointing to a potential role as an antimicrobial agent. In this sense, we evaluated the effects of farnesol on the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, the etiologic agent of the most prevalent mycosis in Latin America, paracoccidioidomycosis. Our data indicate that farnesol acts as a potent antimicrobial agent against P. brasiliensis. The fungicide activity of farnesol reduces the viability of this pathogen and delays the dimorphism, suggesting an antimicrobial activity against P. brasiliensis, probably due the massive cytoplasmic organelles degeneration. The results showed by both propranolol and farnesol are particularly interesting, since it could be further explored in order to evaluate the possible use of these compounds as antimicrobial agents. Another pathogenic and opportunistic fungus of clinical relevance is the yeast Cryptococcus neoformans. This fungus is able to survive and replicate within the phagossome of macrophages, revealing that it have evolved mechanisms allowing its survival within the phagocytic cells, which are considered an inhospitable habitat. Since replication in an animal host is not essential as part of C. neoformans life cycle, it was proposed that fungal virulence for mammals originated from selection by environmental predators, such as amoebas. In this perspective, we compared the transcriptional response of C. neoformans after interaction with macrophages and amoebas. Our results suggest a conserved metabolic response of C. neoformans to the environment of both phagocytic cells by the expression of genes related with nutritional and oxidative stress.