Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-30T16:18:28Z No. of bitstreams: 1 2016_CatarinaBernardesPereira.pdf: 3123751 bytes, checksum: dccc1336b1d5fde33388bec89c588d2c (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2016-09-30T19:21:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CatarinaBernardesPereira.pdf: 3123751 bytes, checksum: dccc1336b1d5fde33388bec89c588d2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-30T19:21:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CatarinaBernardesPereira.pdf: 3123751 bytes, checksum: dccc1336b1d5fde33388bec89c588d2c (MD5) / Em razão do Brasil exercer grande atividade agrícola, são gerados enormes volumes de resíduos que são rotineiramente acumulados no meio ambiente, com destaque para a soja. O reaproveitamento desses recursos naturais disponíveis abundantemente, possibilita a produção de diversos metabólitos de interesse industrial obtendo produtos de maior valor agregado, através de tecnologias de baixo impacto ambiental, baixo custo, consumindo menos recursos e simplificando o processo. Relatam-se diversas produções enzimáticas através de processos biotecnológicos de fungos filamentosos em meios contendo resíduos da agroindústria. Dentro dessa visão, o trabalho objetivou avaliar a produção de enzimas celulolíticas e hemicelulolíticas de fungos isolados do cerrado, costa marinha brasileira e da Antártica, utilizando casca de soja como substrato. Em sua primeira etapa, foi realizando o isolamento de 58 fungos endofíticos de 13 espécies de plantas nativas do Cerrado. Posteriormente foi realizado o processo de fermentação submersa (SF) de 104 fungos avaliando-se suas capacidades de produção enzimática. Uma triagem foi feita e 3 produtores de cada bioma (9 fungos) passaram também por fermentação em estado sólido (SSF). Os 18 extratos enzimáticos tiveram suas características físico-químicas analisadas quanto ao melhor pH e temperatura. Os resultados obtidos indicam que a casca de soja é um ótimo substrato na produção de xilanase, mananase, carboximetilcelulase (CMCase) e β-glicosidase. Os cultivos apresentaram enzimas com melhor atividade em pH 5,4 para xilabase, mananase e CMCase, e pH 4,8 para β-glicosidase. A faixa de temperatura ótima se manteve entre 40 ºC e 60 ºC para todos as enzimas em ambos os tipos de fermentações. As atividades mensuradas mostraram-se mais expressivas para xilanase atingindo cerca de 14 UI/mL. Foi possível observar um aumento de atividade enzimática nos cultivos de fungos do cerrado quando cultivados em SSF. Dessa forma, os resultados permitem concluir que os fungos estudados apresentam potencial para a produção das enzimas celulolíticas e hemicelulolíticas através de SF e SSF em um meio de baixo valor agregado apresentando assim interesse biotecnológico. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Due to the fact Brazil practices a great agricultural activity, huge volumes of waste are generated and are commonly accumulated in the environment, specially soybeans. The reuse of these highly available natural resources, allows for the production of several metabolites of industrial interest, obtaining products with higher added value, through technologies with low environmental impact and low cost, consuming less resources and simplifying the process. There are reports of several enzymatic productions through biotechnological processes of filamentous fungi in means containing agriculture industry residues. Within this view, the aim of the present work was to evaluate the production of cullulolytic and hemicellulolytic enzymes from isolated fungi in the Brazilian Cerrado and marine coast and in Antarctica, using soy husk as substrate. In its first stage, it performed the isolation of 58 endophytic fungi of 13 species of native plants of the Cerrado. Later it was realized the process of submerged fermentation (SF) of 104 fungi, evaluating their capability of enzymatic production. A selection was made and 3 producers of each biome (9 fungi) additionally went through solid state fermentation (SSF). The 18 enzymatic extracts had its physical-chemical characteristics analyzed as to find the optimum pH and temperature. The results obtained indicate that the soy husk is an great substrate in the production of xylanase, mananase, carboximetilcelulase (CMCase) and β-glicosidase. The enzymes had presented their best activity in pH 5.4 for xylanase, mannanase and CMCase and pH 4.8 for β-glicosidase. The optimum temperature range was kept between 40ºC and 60ºC for all enzymes in both fermentations. The activities measured have been revealed as expressive for xylanase reaching around 14 UI/mL. It was possible to observe an increase of enzymatic activity for the Cerrado fungi when cultivated in SSF. Therefore, the results allow to conclude that the fungi used present potential for the production of cellulolytic and hemicellulolytic enzymes through SF and SSF in a low added value mean, thus presenting biotechnological interest.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Curso de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-03-21T16:12:34Z No. of bitstreams: 1 2015_PedroGoesMesquita_Parcial.pdf: 1129403 bytes, checksum: a14387088014ab4785724b9f6134d718 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-03-22T14:35:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_PedroGoesMesquita_Parcial.pdf: 1129403 bytes, checksum: a14387088014ab4785724b9f6134d718 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T14:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_PedroGoesMesquita_Parcial.pdf: 1129403 bytes, checksum: a14387088014ab4785724b9f6134d718 (MD5) / O diabetes mellitus é uma desordem metabólica que acomete milhões de pessoas no Brasil e no mundo. As tiazolidinadionas melhoram a sensibilização à insulina e a homeostase da glicose mediada pela ativação de receptores ativados por proliferadores peroxissomais γ(PPARγ) em indivíduos com diabetes tipo 2. Entretanto, efeitos adversos graves, como perda da massa óssea, retenção de fluidos corporais, problemas no fígado, no coração e aumento no risco de câncer de bexiga estão associados ao seu uso. Apesar de não haver esclarecimento completo do mecanismo relacionado ao efeito adverso, em parte, ele é atribuído à ativação exagerada do receptor. Agonistas parciais de PPARγ são capazes de promover os efeitos positivos das tiazolidinadionas, mas com menor efeito adverso. Estudos prévios mostraram que extratos das folhas da Bauhinia variegata são capazes de ativar o PPARγ e que ligantes de PPAR podem interferir no estresse oxidativo relacionado a espécies reativas do oxigênio. Sabendo que fungos endofíticos são colonizadores dos tecidos de plantas e possuem um metabolismo particularmente ativo por causa dessa interação, levando à produção de produtos naturais com efeitos biológicos importantes e, muitas vezes similares aos da planta hospedeira, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial dos metabólitos de fungos endofíticos isolados das folhas de Bauhinia variegata como fonte de moléculas antioxidantes e agonistas de receptores nucleares PPAR α, β/δ e γ. Sete extratos de culturas dos fungos endofíticos das folhas de Bauhinia variegata foram avaliados. Todos apresentaram atividade antioxidante no ensaio do sequestro do radical superóxido e seis deles foram capazes de inibir a peroxidação lipídica. Um dos extratos apresentou atividade pan-agonista sobre os PPAR e outro mostrou atividade nas isoformas PPARα e PPARβδ. Os extratos não foram capazes de estimular a diferenciação de pré-adipócitos 3T3-L1. O estudo conjunto da atividade agonista a receptores nucleares e da atividade antioxidante caminha na mesma direção dos achados recentes sobre a relação PPAR/espécies reativas do oxigênio nos processos patológicos do diabetes. A melhor compreensão desta relação poderia auxiliar no entendimento do mecanismo de ação dos antioxidantes no tratamento de diabetes e suas complicações. Além disso, novos compostos com ambas as atividades, antioxidante e agonista de PPARγ, poderiam ser bastante úteis no desenvolvimento de novos medicamentos para tratamento do diabetes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diabetes mellitus is a metabolic disorder that affects millions of people in Brazil and worldwide. Tiazolidinediones (TZD) improve insulin sensitization and glucose homeostasis mediated by the activation of peroxisome proliferator activated receptors γ (PPARγ) in patients with type 2 diabetes. However, severe adverse effects such as loss of bone mass, retention of body fluids, liver and heart problems and increased risk of bladder cancer are associated with their use. Although there is no complete explanation of the mechanism related to TZD side effects, in part, it is attributed to excessive activation of the receptor. Partial PPARγ agonists are capable of promoting the beneficial effects of tiazolidinediones with less adverse effects. Previous studies have shown that extracts of Bauhinia variegata leaves are able to activate the PPARγ and that PPAR ligands can interfere with the oxidative stress related to reactive oxygen species. Knowing that endophytic fungi colonize plant tissues and have a particularly active metabolism caused by this interaction, which lead to the production of natural products with important biological effects, and usually similar to that of the colonized plant, the objective of this study was to evaluate the potential of the metabolites of endophytic fungi isolated from Bauhinia variegata leaves as source of antioxidant molecules and agonists of nuclear receptors PPAR αβδ and γ. Seven extracts produced by endophytic fungi from Bauhinia variegata leaves were evaluated; all of them showed antioxidant activity by scavenging superoxide radical and six of them were able to inhibit lipid peroxidation. One of extracts tested presented pan-agonist activity on PPAR and another one showed activity in PPARα and PPARβδ. The extracts were not able to stimulate the differentiation of 3T3-L1 pre-adipocytes cells. The complete study involving evaluation of agonism to nuclear receptors and antioxidant activity comply with the recent findings about the PPAR/reactive oxygen species relationship in pathological processes of diabetes. A better understanding of this relationship could help to comprehend the mechanism of action of antioxidants in the treatment of diabetes and its complications. In addition, novel compounds having both activities, antioxidant and PPARγ agonist, could be quite useful in the development of new drugs for diabetes treatment.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-16T19:55:24Z No. of bitstreams: 1 2018_KellyAssisRodrigues.pdf: 1974995 bytes, checksum: 94214c05a1fc072d588e7467b369e9ab (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-20T21:10:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_KellyAssisRodrigues.pdf: 1974995 bytes, checksum: 94214c05a1fc072d588e7467b369e9ab (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-20T21:10:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_KellyAssisRodrigues.pdf: 1974995 bytes, checksum: 94214c05a1fc072d588e7467b369e9ab (MD5) Previous issue date: 2018-07-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / Aspergillus terreus é um fungo filamentoso de importância biotecnológica por ser produtor de enzimas de interesse comercial, além de metabolitos secundários como a lovastatina. Esta é utilizada no tratamento de pessoas com hipercolesterolemia uma vez que é um inibidor competitivo da HMG-CoA redutase, enzima responsável pela conversão de HMG-CoA em Mevalonato, diminuindo assim a síntese de colesterol endógeno. Os 18 genes codificadores de enzimas envolvidas na via biosintética de lovastatina estão organizados em um agrupamento gênico de 65 kb no genoma de A. terreus. Dentre esses, genes essenciais já foram identificados, como os genes lovB e lovF, que codificam as principais enzimas da via. Apesar de vários estudos a respeito da via biosintética de lovastatina, ainda existem 10 genes do cluster com a função desconhecida ou predita. Dentre eles a ORF8 (open Reading frame), anotada como um possível gene de resistência. Análises de similaridades mostraram que esta ORF codifica para uma HMG-CoA redutase, sendo que o fungo ainda tem outras duas regiões fora do cluster de lovastatina que também codificam HMG-CoA redutase. Alinhando as três sequências, a ORF8 e as duas enzimas de fora do cluster, foi possível observar que a HMG-CoA redutase, codificada pela ORF8, possui duas mutações no sítio de ligação. Assim, para a caracterização da HMG-CoA redutase, que a ORF8 codifica, foi clonada a sequência no plasmídeo pET28a para expressa-la em Escherichia coli. O plasmídeo foi inserido em quatro linhagens de E. coli, nas quais não foi observada a expressão da proteína. Assim foram desenhados oligonucleotídeos iniciadores para que a ORF8 fosse clonada no vetor p416TEF, que possui a marca de seleção auxotrófica URA3 para inserção na levedura Saccharomyces cerevisiae. No entanto foi possível detectar a produção da enzima em S. cerevisiae pois a ligação do vetor e o inserto não foi alcançada. Outra ORF com função predita é a ORF10, anotada como um possível transportador de lovastatina. Dessa forma, para confirmar sua função biológica, foi realizada sua deleção na cepa ATCC20542, usada como referência para produção de lovastatina. A montagem do cassete de deleção foi realizada em 2 partes, sendo a primeira a amplificação por PCR do cassete de resistência a Higromicina B e dos fragmentos que flanqueiam o gene; e a segunda a fusão dos três fragmentos utilizando a técnica de PCR. O cassete de deleção foi utilizado na transformação da cepa de A. terreus ATCC20542, usada como referência para produção de lovastatina. Após os experimentos de transformação, os 17 clones obtidos foram cultivados em meio definido para quantificação da produção de lovastatina, tanto em sobrenadante quanto em micélio. Dentre os clones avaliados, em 4 clones não foi possível detectar lovastatina no sobrenadante, já em micélio foi observada uma redução de aproximadamente 60% de lovastatina produzida. Estes 4 clones tiveram então seu DNA genômico extraído e usado como molde em reações de PCR. Dessa foram foi possível confirmar que a ORF10 estava realmente deletada nas cepas cuja produção de lovastatina no sobrenadante foi eliminada evidenciando experimentalmente que essa ORF está, de fato, relacionada ao transporte de lovastatina. / Aspergillus terreus is a filamentous fungus of biotechnological importance because it produces enzymes of commercial interest, as well as secondary metabolites like lovastatin. It is used without treatment of people with hypercholesterolemia since it is a competitive inhibitor of HMG-CoA reductase, enzyme responsible for the conversion of HMG-CoA to Mevalonate, thus decreasing as endogenous cholesterol synthesis. The 18 genes encoding enveloping enzymes in the lovastatin biosynthetic pathway are organized into a 65 kb gene cluster in the A. terreus genome. Among these, essential genes have already been identified, as the genes are lovB and lovF, which code as major pathway enzymes. In spite of several genes of the cluster with an unknown or predicted function. There are still 10 cluster genes with an unknown or predicted function. Among them, an ORF8 (open reading frame), annotated as a possible resistance gene. Analyzes of analyzes similar to this ORF code for an HMG-CoA reductase, and the fungus still has other regions for the lovastatin cluster that also encode HMG-CoA reductase. Aligning as three sequences, one ORF8 and two enzymes from outside the cluster, and just like an HFG-CoA reductase encoded by ORF8 does not have two bonds. Thus, for a characterization of HMG-CoA reductase, which is an ORF8 coding, the sequence in plasmid pET28a was cloned to express in Escherichia coli. The plasmid was inserted into four E. coli lines, in which no expression of the protein was observed. Thus, oligonucleotide primers were designed so that the ORF8 was cloned into the p416TEF vector, which has an auxotrophic selection tag URA3 for insertion into the yeast Saccharomyces cerevisiae. However, the possibility of detecting the production of the enzyme in S. cerevisiae at a link of the vector and the insertion was not achieved. Another ORF with predicted function is an ORF10, annotated as a possible lovastatin transporter. Thus, to confirm its biological function, its deletion was carried out in strain ATCC20542, used as reference for lovastatin production. One assembly of a deletion was performed in 2 parts, a first PCR amplification of hygromycin B resistance cassette and fragments flanking the gene; and the second a fusion of the three fragments using a PCR technique. The deletion cassette was used in the transformation of A. terreus strain ATCC20542, used as a reference for lovastatin production. After the transformation experiments, the 17 clones obtained were cultured in defined medium for quantification of lovastatin production, both in supernatant and in mycelium. Among the clones, in 4 clones, it was not possible to detect lovastatin in the supernatant, while in the mycelium a reduction of approximately 60% of lovastatin produced was observed. These 4 clones had their genomic DNA extracted and used as template in PCR reactions. From this it was possible to confirm that ORF10 was indeed deleted in strains whose production of lovastatin in the supernatant was eliminated experimentally evidencing that this ORF is, in fact, related to the transport of lovastatin.

Orientador: Eiko Eurya Kuramae / Resumo: O mal-do-panamá causado por Fusarium oxysporum Schlecht. f. sp. cubense (E. F. Smith) Snyder & Hansen é um dos problemas fitossanitários mais sérios da bananicultura mundial. Devido a esta doença, um dos manejos culturais recomendados para o cultivo da bananeira, é a formação da cultura em locais onde o patógeno ainda não foi detectado. Visando fornecer subsídios para futuros programas de manejo da cultura, este trabalho teve como objetivo avaliar a variabilidade genética entre isolados monospóricos do gênero Fusarium sp., presentes em tecidos de plantas e em diferentes tipos de solo do norte de Minas Gerais. Foram utilizados 19 isolados de tecidos de bananeira, tomateiro, coqueiro e tamareira, e 63 isolados obtidos de solo. Também foram incluídos neste trabalho, 5 isolados de F. oxysporum de diferentes formae speciales (2 isolados de Fusarium oxysporum f. sp. cubense, 1 de Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum, 1 de Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli e 1 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici) e 4 de F. solani de feijoeiro. Através de polimorfismo do DNA amplificado ao acaso (RAPD) e análise das seqüências de nucleotídeos dos espaços transcritos internos (ITS1/ITS2) do DNA ribossomal (5.8S rDNA), avaliou-se a variabilidade genética dos isolados. Foi utilizado o método RAPD com a combinação de sete "primers", o que resultou 72 bandas polimórficas. Através desta análise foi possível obter 3 grupos geneticamente distintos, com ponto de ramificação superior a 50% de similaridade. No sequenciamento, os produtos de PCR foram realizados com os "primers" ITS4 e ITS5 para o rDNA, obtendo fragmentos de 550 a 600 pb em todos os isolados. A análise do consenso das seqüências da região ITS e do gene 5.8S do rDNA foram comparadas com seqüências do GenBank. Os dendrogramas gerado por agrupamento UPGMA com os de RAPD e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Panamá disease caused by Fusarium oxysporum Schlecht. f. sp. cubense (E.F. Smith) Snyder & Hansen is one of the most serious phytosanitary problems of banana culture worldwide. Due to this disease, culture formation in locals where the pathogen has not been detected yet is one of the culture management recommended for banana plant culture. Aiming at providing subsidies for future culture management programs, this work evaluated the genetic variability among monosporous isolate of Fusarium sp. present in plant tissues and in different types of soil in north of Minas Gerais state. Nineteen tissue isolates of banana plant, coconut tree and date palm, and 63 isolates of soil were used. It was also included in this work 5 isolates of F. oxysporum of different formae speciales (2 isolates of F. oxysporum f. sp. cubense, 1 of F. oxysporum f. sp. vasinfectum, 1 of F. oxysporum f. sp. phaseoli and 1 of F. oxysporum f. sp. lycopersici) and 4 of F. solani of bean plant. Through polymorphism of DNA amplified at random (RAPD) and nucleotides sequence analysis of ribossomal DNA (5.8SrDNA) internal transcripted spaces (ITS1/ITS2), isolates genetic variability was assessed. It was used the RAPD method with combination of seven "primers", what resulted in 72 polymorphic ribbons. Through such analysis, it was possible to obtain 3 genetically different groups, with ramification point over 50% of similarity. In the sequence, PCR products were carried out with the "primers" ITS4 and ITS 5 for rDNA, obtaining fragments of 550 to 600 pb in all isolates. Sequences analysis of ITS region and gene rDNA 5.8S was compared to GenBank sequences. The dendrographs generated by UPGMA grouping with the RAPD ones and those of nucleotides sequences were much similar. There was no correlation of the groups formed in the dendrographs concerning geographic location and host plant... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Resumo: Os fungos gasteroides compõem um grupo morfológico de Basidiomycota cuja produção de esporos ocorre em um himênio fechado e a dispersão dos mesmos é passiva. Eram conhecidas, até então, 44 espécies de gasteromicetos no Paraná, porém a maioria dos estudos foi realizada em Florestas Ombrófilas na região de Curitiba. Nesse sentido, este trabalho teve por objetivo realizar um levantamento dos fungos gasteroides no Parque Estadual São Camilo (PESC), unidade de conservação localizada no município de Palotina, oeste do Paraná. As coletas foram realizadas entre junho/2011 e julho/2012, em trilhas na área, depois analisadas macroscopicamente e microscopicamente. O estudo de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) foi realizado a fim de analisar a topografia dos basidiósporos e corroborar as identificações. Os espécimes coletados foram depositados no Herbário do Campus Palotina (HCP), exceto os holótipos, que foram depositados no Herbário do Departamento de Botânica (UPCB), ambos da Universidade Federal do Paraná. Ao todo, foram coletados 137 espécimes, representando 27 espécies de fungos gasteroides, pertencentes às subclasses Agaricomycetidae e Phallomycetidae. Em Agaricomycetidae, todas espécies pertencem à família Agaricaceae (Agaricales) e correspondem aos gêneros Arachnion (1 espécie), Bovista (2), Calvatia (4), Cyathus (2), Lycoperdon (2) e Morganella (3). Duas famílias de Phallomycetidae foram identificadas: Phallaceae (Phallales), com uma espécie de Mutinus, e Geastraceae (Geastrales), com 12 espécies de Geastrum. Duas novas espécies são descritas: Calvatia guzmanii e Morganella sulcatostoma. São novas ocorrências para o Paraná: Arachnion album, Bovista aestivalis, Calvatia fragilis, Cyathus montagnei, Lycoperdon perlatum, Morganella afra, M. pyriformis, Geastrum coronatum, G. lageniforme e G rufescens. Com a realização do presente estudo, foi ampliada a lista de espécies de fungos gasteroides do Paraná de 44 para 56 espécies e a distribuição geográfica de várias espécies, já que a maioria delas não havia sido registrada nessa região do estado.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-03Bitstream added on 2014-06-13T20:56:24Z : No. of bitstreams: 1 baldissera_bl_me_rcla.pdf: 1165282 bytes, checksum: e54d30574e495ef3d4a7a7c98bd8cf32 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Agaricus blazei é uma das espécies de fungo do grupo basidiomiceto nativo do Brasil, popularmente conhecido como cogumelo-do-sol®. O Brasil é considerado um grande fornecedor desse fungo para o mercado internacional cujos padrões de qualidade são bastante restritivos em relação à concentração de metais pesados, principalmente cádmio. Esse fungo possui propriedades medicinais e seus cogumelos são consumidos por grande número de pessoas que procuram melhorar a qualidade de vida. O trabalho objetivou estudar o acúmulo de cádmio, cromo e chumbo por A. blazei. Foram realizados 3 experimentos, utilizando 2 tipos de composto e 3 tipos de solo para cobertura. O fungo foi cultivado em sacos de plástico preto contendo no fundo o composto inoculado, tendo como cobertura diferentes tipos de solo. O solo e o composto foram analisados para quantificação de Cd, Cr, Pb por espectrometria de absorção atômica, propriedades físicas e químicas (Instituto Campineiro de Análise de Solo e Adubo ICASA). Além das quantias de metais encontradas no solo e no composto foram adicionados 66 mg de cloreto de cádmio, 132 mg de sulfato de cromo e 12 mg de nitrato de chumbo ao solo de cobertura. Após a frutificação, os basidiocarpos foram analisados para quantificar proteínas, aminoácidos, metais pesados e identificação de modificações protéicas por espectroscopia de infravermelho (FTIR). O resultado das análises demonstrou que havia acúmulo de metais pesados nos basidiocarpos, ocorrendo maior percentual nos contaminados com cádmio.Além disso, detectou-se nos basidiocarpos contaminados menor teor de proteínas. Através de FTIR não foi possível detectar alterações nas proteínas nos basidiocarpos analisados. / Agaricus blazei is a basidiomycete fungus native from Brazil and popularly known as Cogumelo-do-sol® the sun-mushroom. Brazil is a supplier of this edible mushroom to international markets to which quality standards are very restrictive regarding the concentration of heavy metals, especially cadmium. This fungus exhibits medicinal properties and its fruiting bodies are consumed by a large number of people that seek to improve life quality. The objective of this work was to study the accumulation of cadmium, chromium and lead by A. blazei. Three experiments were made using two composts and three types of covering soil. The fungus was cultivated in black plastic bags contend in the deep inoculated compost and as covering different types of soils. The soil and the compost were analyzed to determine the amount of heavy metals: Cd, Cr and Pb by atomic absorption spectrophotometer, and physical and chemical properties (ICASA). Besides the metal found in the soil and compost, 66 mg of cadmium chloride, 132 mg of chromium sulfate and 12 mg of lead nitrate were also added to the covering soil. After fructification, the fruiting bodies were analyzed to measure the amount of raw proteins, amino acids, heavy metals and proteinic modifications for Spectroscopy of Infra Red (FTIR). The analyses of results showed accumulation of heavy metals in fruiting bodies, occurring a higher percentage in fruiting bodies contaminated of cadmium. Furthermore detected in contaminated fruiting bodies a less drift of raw proteins. Through FTIR was not possible to detect alteration in proteins of fruiting bodies analyzed.

Orientador : Profª. Drª. Sionara Eliasaro / Coorientador : Dr. Emerson Luis Gumboski / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica. Defesa: Curitiba, 18/11/2016 / Inclui referências : f. 34-41;64-68;93-95 / Área de concentração: Taxonomia, biologia e diversidade de algas e liquens / Resumo: As restingas brasileiras abrigam uma grande diversidade de espécies de fungos liquenizados, no entanto, no estado do Espírito Santo, os registros são escassos e pouco explorados. O gênero Cladonia é o mais expressivo dentro da família Cladoniaceae, contando com aproximadamente 500 espécies. É caracterizado pelo talo dimórfico ou também denominado cladoniforme, geralmente apresentando uma estrutura horizontal, crustosa ou esquamulosa, denominado talo primário, e uma estrutura normalmente ereta, denominada talo secundário ou podécio. Este trabalho teve por objetivo ser o primeiro a investigar extensivamente o gênero Cladonia nas restingas capixabas, caracterizando sua morfologia, produção de metabólitos secundários e tendências ecológicas, assim como proporcionar meios para identificação como chaves e ilustrações, contribuindo para o conhecimento da liquenobiota capixaba. Foram realizadas 12 excursões de coleta nos meses de Janeiro, Fevereiro e Julho de 2015. Os exemplares coletados foram depositados nos herbários da Universidade Federal do Paraná (UPCB) e da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (ICN). As análises morfológicas e anatômicas de importâcia taxonômica foram realizadas sob microscópio estereoscópico e óptico. Para as análises químicas, foram realizados testes de coloração do talo, observação sob luz UV e cromatografia em camada delgada. Para as ilustrações foi utilizada câmera fotográfica. Dos 554 exemplares coletados foram identificadas 27 espécies de Cladonia das quais, C. tuberosa Fraga-Junior, Gumboski & Eliasaro e C. capixaba Fraga-Junior, Gumboski & Eliasaro são descritas como novas para a ciência, e nove são novos registros para o estado: C. consimilis Vain., C. corallifera (Kunze) Nyl., C.crustacea Ahti, C. dendroides (Abayes) Ahti, C. pityrophylla Nyl., C. polyscypha Ahti & L. Xavier, C. salzmannii Nyl., C. sphacelata Vain., C. subminiata S. Stenroos. Confirmamos a ocorrência de C. sprucei Ahti e C. rangiferina subsp. abayesii (Ahti) Ahti & DePriest. Não confirmamos a ocorrência das seguintes espécies previamente citadas: C. bahiana Ahti, C. coccifera (L.) Willd., C. kalbii (Ahti) Ahti & DePriest e C. rugicaulis Ahti. Palavras-chave: Cladoniaceae, fungos liquenizados, sudeste brasileiro, taxonomia / Abstract: The Brazilian restinga shelters a great diversity of species of lichenized fungi, however, in the state of the Espírito Santo, the records are scarce and little explored. The genus Cladonia is the most expressive in the Cladoniaceae, with approximately 500 species. It is characterized by dimorphic thallus or also called cladoniiform, usually exhibiting a horizontal thallus, crustose or squamulose called primary thallus, with an usually erect structure, called secondary thallus or podetia. This study aimed to be the first to extensively investigate the genus Cladonia in the restinga vegetation of Espirito Santo, characterizing their morphology, production of secondary metabolites and environmental trends, and provide ways for identification such as identification keys and illustrations, contributing to the knowledge of Espírito Santo state lichenobiota. 12 collection expeditions were held between January, February and July of 2015. The collected specimens were deposited in the herbarium of the Federal University of Paraná (UPCB) and Federal University of Rio Grande do Sul (ICN). The morphological and anatomical analyses were performed under stereoscopic and opitc microscope. For chemical analysis, coloring tests, observation under UV light and thin layer chromatography were done. For the illustrations, a digital camera was used. From the 554 collected specimens, we identified 27 species of Cladonia of which, C. tuberosa Fraga-Junior, Gumboski & Eliasaro and C. capixaba Fraga-Junior, Gumboski & Eliasaro are described as new to science, and nine are new records for the state: C. consimilis Vain, C. corallifera (Kunze) Nyl., C.crustacea Ahti, C. dendroides (Abayes) Ahti, C. pityrophylla Nyl., C. polyscypha Ahti & L. xavier, C. salzmannii Nyl., C. sphacelata Vain., C. subminiata S. Stenroos. We confirmed the occurrence of C. sprucei Ahti and C. rangiferina subsp. abayesii (Ahti) Ahti & DePriest. We could not confirm the occurrence of previously mentioned species: C. bahiana Ahti, C. coccifera (L.) Willd., C. kalbii (Ahti) Ahti & DePriest and C. rugicaulis Ahti. Keywords: Cladoniaceae, lichenized fungi, southeastern Brazil, taxonomy

Resumo: O clado parmelioide, suportado por vários estudos filogenéticos, é o maior em Parmeliaceae, com cerca de 75% das espécies descritas nesta família e caracterizase por possuir talos principalmente foliosos, com rizinas na superfície inferior, apotécios laminais, ascos do tipo Lecanora e ascósporos simples e hialinos. Esta pesquisa teve como objetivo principal realizar um levantamento dos fungos liquenizados parmelioides em costões rochosos presentes nos Estados do Paraná e de Santa Catarina. Bem como caracterizar morfológica, química e ecologicamente as espécies encontradas e proporcionar meios para a identificação das mesmas através de chaves, descrições e ilustrações. Os exemplares identificados foram incorporados ao herbário UPCB. As ilustrações foram feitas através de fotografias em campo e scanner em laboratório. Em laboratório foram realizadas observações morfológicas e anatômicas sob microscópio esteroscópico e fotônico. Para a análise de metabólitos secundários foram utilizados testes de coloração de talo, observação do talo sob lâmpada UV e cromatografia em camada delgada seguindo as técnicas químicas padrões em liquenologia. Foram encontradas 31 espécies distribuídas em nove gêneros: Bulbothrix (1), Canoparmelia (1), Hypotrachyna (2), Parmelinopsis (1), Parmotrema (19), Pseudoparmelia (1), Punctelia (1), Relicina (1) e Xanthoparmelia (4). Dentre as espécies encontradas, cinco são novas para a ciência: Parmotrema adlerae, P. marcellii, Parmotrema sp. 1, Parmotrema sp. 2 e Punctelia sp. Parmotrema laciniellum é citada pela primeira vez fora da localidade tipo (Argentina). Foram encontradas quatro novas ocorrências tanto para o Paraná quanto para Santa Catarina: Parmotrema anchietanum, P. hypermaculatum, P. mordenii e Xanthoparmelia subramigera. Duas novas citações apenas para o Paraná: Pseudoparmelia cubensis e Xanthoparmelia catarinae; e oito para Santa Catarina: Bulbothrix subdissecta, Hypotrachyna osseoalba, Parmotrema dactylosum, P. endosulphureum, P. flavescens, Parmotrema aff. margaritatum, P. ruptum e Relicina abstrusa. Vinte e cinco espécies de fungos liquenizados parmelioides são mencionadas pela primeira vez para costões rochosos brasileiros.

Orientador : Prof. Dr. Vagner Gularte Cortez / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica. Defesa: Curitiba, 07/06/2017 / Inclui referências : f. 53-56 / Resumo: O Paraná possui uma micobiota relativamente bem estudada, possuindo mais de 1700 fungos registrados, porém a maior parte das ocorrências se limita às regiões Litorânea e Metropolitana de Curitiba e suas proximidades, onde predominam Florestas Ombrófilas Mista e Densa. Por outro lado, pouco se conhece sobre os fungos da Floresta Estacional Semidecidual, em especial do Oeste do Paraná. O presente estudo objetivou-se contribuir ao conhecimento da micobiota do Oeste do Paraná, em particular do gênero Pluteus Fr. Os fungos deste gênero se caracterizam pelos basidiomas pluteoides, lamelas livres de cor rosa, basidiósporos lisos, trama da lamela inversa e ausência de véu universal. Pluteus é o maior gênero da família Pluteaceae, com cerca de 300 espécies, das quais 34 são conhecidas no Paraná. O estudo foi realizado em dois fragmentos de Floresta Estacional Semidecidual: Parque Estadual de São Camilo (PESC), unidade de conservação localizada no município de Palotina, e Reserva Particular do Patrimônio Natural Fazenda Açú (RFA), situada no município de Terra Roxa. O material de estudo foi obtido a partir de coletas quinzenais, entre maio/2015 a abril/2016. Espécimes do gênero, depositados no Herbário do Campus Palotina também foram analisados e incluídos neste estudo. Desde o início do trabalho em campo foram realizadas 30 coletas entre as áreas, e como resultado, foram obtidos 52 espécimes; desse total trinta foram analisados. Para a identificação foram avaliadas as características macroscópicas e microscópicas de acordo com técnicas padronizadas para este grupo de fungos. Foram encontradas 18 espécies: Pluteus argentinensis, P. cervinus, P. diptychocystis, P. dominicanus var. hyalinus, P. globiger, P. glaucotinctus, P. riograndensis, P. xylophilus, Pluteus sp. 1, Pluteus sp. 2, Pluteus sp. 3, Pluteus sp. 4, Pluteus sp. 5, Pluteus sp. 6, Pluteus sp. 7, Pluteus sp. 8, Pluteus sp. 9 e Pluteus sp. 10. As últimas espécies definidas como sp. apresentam possíveis novas descobertas para a ciência. A confirmação das novas espécies ampliará o conhecimento do gênero Pluteus em áreas de Floresta Estacional Semidecidual, possibilitando uma caracterização da micobiota local mais detalhada. Palavras chave: Fungos lignícolas, Micobiota, Pluteaceae, Taxonomia. / Abstract: The State of Paraná has a relatively well studied mycobiota, with more than 1700 fungi registered. However, most of the occurrences are limited to the shoreline, the Metropolitan region of Curitiba and its surroundings, where Mixed and Dense Ombrophilous Forests predominate. Little is known about the fungi of the Semideciduous Seasonal Forest, especially in the West of Paraná. This contributes to the knowledge on the Mycobiota of that region, in particular for the genus Pluteus Fr. The fungi of this genus are characterized by pluteoid basidiomas, pink lamellae, smooth basidiospores, reverse lamella weft and absence of universal veil. Pluteus is the largest genus in the Pluteaceae family, with about 300 species, of which 34 are known in Paraná. The study was carried out in two fragments of the Semideciduous Seasonal Forest: São Camilo State Park (PESC), a conservation unit located in the town of Palotina, and the Private Natural Heritage Reserve Açú Farm (RFA), located in the town of Terra Roxa. The study material was obtained from biweekly collections between May 2015 and April 2016. Specimens of the genus deposited in the Universidade Federal do Paraná, Palotina Campus Herbarium were also analyzed and included in this study. A total of 30 collections were carried out in both areas, and 52 specimens were obtained. From this total, 30 were analyzed. For the identification, macroscopic and microscopic characteristics were evaluated according to standardized techniques for this group of fungi. A total of 18 species were identified: Pluteus argentinensis, P. cervinus, P. diptychocystis, P. dominicanus var. hyalinus, P. globiger, P. glaucotinctus, P. riograndensis, P. xylophilus, Pluteus sp. 1, Pluteus sp. 2, Pluteus sp. 3, Pluteus sp. 4, Pluteus sp. 5, Pluteus sp. 6, Pluteus sp. 7, Pluteus sp. 8, Pluteus sp. 9 and Pluteus sp. 10. The last species defined as sp. present possible new discoveries for science. The confirmation and description of the new species will extend the knowledge on the genus Pluteus in areas of Seasonal Semideciduous Forest, enabling a more detailed characterization for the local mycobiota. Key words: Lignicolous fungi, Mycobiota, Pluteaceae, Taxonomy.

Os basidiomicetos Pleurotus sajor-caju e Lentinula edodes despertam grande interesse industrial devido às propriedades nutritivas e terapêuticas e também devido à capacidade de secreção de fenol-oxidases, enzimas com grande potencial biotecnológico. O melhoramento genético torna-se importante para a obtenção de variantes com características de interesse, podendo ser realizado através de protoplastização e mutagênese. No presente estudo o objetivo foi a obtenção de clones com maior atividade de fenol-oxidases (com ênfase para as lacases) e clones com maior produtividade de basidiomas, visando possíveis aplicações biotecnológicas e industriais. As linhagens P. sajor-caju PS-2001 e L. edodes LE-06 foram submetidas às técnicas de protoplastização e mutagênese de protoplastos (radiação UV) e por método seletivo foram isolados clones com maior relação halo/colônia e também com maior diâmetro da colônia em relação aos parentais. Inicialmente realizou-se cultivo submerso em diferentes meios com o intuito de identificar uma condição adequada para a secreção de fenol-oxidases pelas linhagens parentais de L. edodes e P. sajor-caju e neste contexto, o caldo batata dextrose (CBDY) apresentou resultados satisfatórios para ambas as linhagens. Os clones selecionados, dos dois fungos, foram cultivados em estado sólido utilizando serragem como substrato e também a cultivo submerso em meio CBDY para caracterização quanto ao crescimento e secreção de fenol-oxidases. Adicionalmente, os clones também foram cultivados em sacos contendo serragem para a avaliação da produtividade de basidiomas. Um dos clones obtidos em P. sajorcaju, mutante PS UV22, apresentou secreção 1,5 vezes maior de lacases, em relação à linhagem parental em cultivo sólido. Outro mutante, PS UV56, apresentou secreção 2,1 vezes maior de lacases, em relação ao parental em cultivo submerso. Com relação à produtividade de basidiomas, dois clones, (PS3 e PS UV30) apresentaram aumento significativo em relação ao parental PS-2001. Em L. edodes, foram identificados quatro clones (LE UV6, LE UV9, LE UV11 e LE UV20), com aumento significativo na atividade de lacases em relação ao parental LE-06, em cultivo submerso. No cultivo sólido foi selecionado um clone, mutante LE UV23 que apresentou atividade de lacases 2,6 vezes maior que a parental LE-06. A partir dos resultados obtidos, é possível afirmar que as técnicas de protoplastização e mutagênese podem ser utilizadas no melhoramento genético de L. edodes e P. sajor-caju para aumento da atividade enzimática e produtividade de basidiomas. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T13:04:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anameli Lipreri.pdf: 3300819 bytes, checksum: ce60a0054f415dc33b8cca4173ce757f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T13:04:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anameli Lipreri.pdf: 3300819 bytes, checksum: ce60a0054f415dc33b8cca4173ce757f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The basidiomycetes Pleurotus sajor-caju and Lentinula edodes exhibit great industrial interest due to properties nutritional and therapies and also due the secretion capacity of phenoloxidases, enzymes with high biotechnological potential. The improvement genetic becomes important to obtaining variants with features of interest, which can be obtained with protoplastization and mutagenesis techniques. In this study the objective was obtaining clones with increased activity of phenoloxidases (emphasizing laccases) and clones with high productivity of the mushroom, seeking possible biotechnological and industrial applications. The strains P. sajor-caju PS-2001 and L. edodes LE-06 were subjected to protoplastization and mutagenesis of protoplasts by radiation UV method, and, by selective clones were isolated with more relation halo/colony and also the larger diameter of the colony in comparison with their parents. Initially held submerged cultive in different medium in order to identify the more adequate condition for growth and enzyme secretion by parental strains (L. edodes and P. sajorcaju). In this context, the potato dextrose broth (CBDY) showed satisfactory results for both strains. The new selected clones, from the two fungi were submitted to solid-state cultive using sawdust as the substrate and also to the submerged cultive in medium CBDY. In addition, new clones were also grown in bags containing sawdust to evaluate the productivity of the basidiomes. One of the mutants obtained from P. sajor-caju, strain PS UV22, showed 1.5 fold higher secretion of laccase in comparison of the parental strain growing on solid-state cultive. Another mutant, strain PS UV56, showed 2.1 fold higher secretion of laccases, compared to parental submerged cultive. Regarding the productivity of basidiomes, two clones (PS3 and PS UV30), showed a significant increase in comparison with parental PS-2001. In L. edodes, it was identified two clones (LE UV9 and LE UV20), with a significant increase in laccase activity in relation to parental LE-06 in submerged cultive. For solid-state cultive was selected a clone, mutant LE UV23 that showed laccase activity 2.6 times greater than the parental LE-06. From the results obtained in this study, it can be predicate that the protoplast formation and mutagenesis techniques can be used in improvement genetic of L. edodes and P. sajor-caju for enzyme activity and increased productivity of the basidiomes.