GONÇALVES, Danilo Oliveira. Avaliação dos efeitos hipoglicemiante e antiinflamatório da lovastatina em roedores. 2008. 117 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-21T13:48:29Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_dogonçalves.pdf: 1838086 bytes, checksum: 8ebb6c9fbe8314e361bfb22f2d2ba1f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-21T16:27:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_dogonçalves.pdf: 1838086 bytes, checksum: 8ebb6c9fbe8314e361bfb22f2d2ba1f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-21T16:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_dogonçalves.pdf: 1838086 bytes, checksum: 8ebb6c9fbe8314e361bfb22f2d2ba1f2 (MD5) Previous issue date: 2008 / The anti-inflammatory, hypoglicemic and hypolipidemic effects of lovastatin were evaluated on animal models of carrageenan-induced peritonitis and paw edema and alloxan induced diabetes. Lovastatin reduced the paw edema, mL, induced by carrageenan at the doses of 2, 5 and 10 mg/kg during the period of measures: 2nd h (1,33 ± 0,12; 1,03 ± 0,19; 1,19 ± 0,21; respectively), 3rd h (2,30 ± 0,17; 1,76 ± 0,23; 1,93 ± 0,21) and 4th h (2,44 ± 0,12; 1,85 ± 0,21; 2,06 ± 0,35) when compared to control group (1,83 ± 0,21; 2,86 ± 0,24 e 3,26 ± 0,13). Indometacin used as reference drug also reduced the edema (0,96 ± 0,09; 1,28 ± 0,23 e 1,36 ± 0,17). Lovastatin reduced carrageenan-induced neutrophil migration at the doses of 2 mg/kg (16,0 ± 2,1 x 103/mm3), 5 mg/kg (16,1 ± 2,0 x 103/mm3) e 10 mg/kg (15,5 ± 2,3 x 103/mm3) when compared to control group (58,7 ± 10,5 x 103/mm3). Dexametasone used as reference drug showed similar results (14,3 ± 3,5 x 103/mm3). To evaluate the hypoglycemic and hypolipidemic effects a metabolic disorder was induced by injection of alloxan (40 mg/kg, i.v.) and different treatments schedules with lovastatin were used. On curative treatment, lovastatin reduced the alloxan induced-hyperglycemia, mg/dL on the fifth day of treatment at the doses of 2 mg/kg (reduction de 41,7%), 5 mg/ kg (43,3%), 10 mg/kg (45,3%) and 20 mg/kg (42,2%). Control group keep the level of hyperglycemia (334,1 ± 27,7; 335,5 ± 24,1). Similar results were found above triglycerides levels : 2 mg/kg (reduction of 70%), 5 mg/kg (55,4%), 10 mg/kg (47,6%) and 20 mg/kg (31%); Over cholesterol levels: 2 mg/kg (reduction of 33,6%), 5 mg/kg (36,7%), 10 mg/kg (35%) and 20 mg/kg (39,8%); Over AST levels: 2 mg/kg (reduction of 36%), 5 mg/kg (45%), 10 mg/kg (43%) and 20 mg/kg (37,8%). Over ALT levels only the dose of 20 mg/kg showed reduction (38,9%). A five-day preventive treatment with lovastatin (2 mg/kg) was carried out before the diabetes induction. Lovastatin prevent the hyperglycemia (170,7 ± 28,2 mg/dL) when compared to control (312,4 ± 22,0). The same happened to triglycerides 252,8 ± 46,7 e 461,3 ± 34,7, LOV e control, respectively) and cholesterol (112,4 ± 9,7 e 191,6 ± 18,9), however no difference between the groups were found when analyzing AST (34,4 ± 1,3 e 35,7 ± 2,1 UI/L) and ALT (44,2 ± 1,1 e 43,9 ± 1,2 UI/L). Also a subchronic treatment with lovastatin was undertaken. The parameters were evaluated at the day 0, day 5 and day 23. On glycemia lovastatin at the doses of 2 mg/kg (309,2 ± 30,5; 172,0 ± 38,0 e 176,7 ± 33,1) and 5 mg/kg (346,3 ± 21,5; 226,7 ± 25,8 e 125,8 ± 20,4) showed reduction when compared to control group (373,0 ± 47,5; 347,5 ± 26,2 e 338,6 ± 25,3). The same occured with triglycerides: 2 mg/kg (373,1 ± 97,6; 67,0 ± 48,4 e 179,8 ± 40,3), 5 mg/kg (606,9 ± 102,0; 195,2 ± 30,5 e 56,1 ± 10,0) and control (573,0 ± 27,2; 485,7 ± 54,2 e 459,7 ± 33,7); Cholesterol: 2 mg/kg (108,0 ± 8,4; 74,0 ± 5,8 e 73,4 ± 5,1), 5 mg/kg (117,5 ± 7,2; 75,9 ± 4,9 e 74,3 ± 6,4) and control (130,0 ± 6,3; 121,8 ± 4,9 e 116,4 ± 7,8). The treatment showed effect only over AST levels: 2 mg/kg (30,4 ± 2,3; 38,4 ± 3,4 e 29,4 ± 1,1), 5 mg/kg (38,7 ± 7,7; 46,7 ± 3,5 e 32,5 ± 5,5) and control (41,8 ± 1,8; 40,9 ± 6,3 e 69,6 ± 2,4). The association of lovastatin (2 mg/kg) and glybenclamide (5 mg/kg) did not enhance the effects of both drugs alone on glucose levels at the day 5 of treatment: LOV 2 (reduction of 64,5%), GLIB 5 (78%) e LOV + GLIB (77,6%). A similar effect was found when lovastatin was associated to metformin (50 mg/kg): LOV 2 (reduction of 64,5%), METF 50 (72%) e LOV + METF (75%). The results found show that the anti-inflammatory effect of lovastatin is an important parallel action, especially to prevent and treat vascular inflammatory disorders associated to atherosclerosis and diabetes. Besides that, the hypoglycemic effect of the drug seems to be independent of its hypolipidemic actions, suggesting an auxiliary action to treat diabetic patients. / Os efeitos antiinflamatório, hipoglicemiante e hipolipemiante da lovastatina foram avaliados sobre os modelos da peritonite e edema de pata induzidos por carragenina 1% e modelo de diabetes mellitus induzida por aloxano. A lovastatina reduziu o edema de pata, expresso em mL, induzido por carragenina 1% com as doses de 2, 5 e 10 mg/kg na 2ª h (1,33 ± 0,12; 1,03 ± 0,19; 1,19 ± 0,21; respectivamente), na 3ª h (2,30 ± 0,17; 1,76 ± 0,23; 1,93 ± 0,21) e 4ª h (2,44 ± 0,12; 1,85 ± 0,21; 2,06 ± 0,35) em comparação ao grupo controle (1,83 ± 0,21; 2,86 ± 0,24 e 3,26 ± 0,13). A indometacina (20 mg/kg), utilizada como droga de referência, também reduziu o edema nas horas citadas (0,96 ± 0,09; 1,28 ± 0,23 e 1,36 ± 0,17). A lovastatina reduziu a migração de neutrófilos induzida pela carragenina nas doses de 2 mg/kg (16,0 ± 2,1 x 103/mm3), 5 mg/kg (16,1 ± 2,0 x 103/mm3) e 10 mg/kg (15,5 ± 2,3 x 103/mm3) em comparação ao grupo controle (58,7 ± 10,5 x 103/mm3). A dexametasona (1mg/kg) utilizada como padrão apresentou resultado semelhante (14,3 ± 3,5 x 103/mm3). Para avaliação dos efeitos hipoglicemiante e hipolipemiante induziu-se o distúrbio metabólico através da injeção de aloxano (40 mg/kg. i.v.) e utilizou-se diferentes esquemas de tratamento com lovastatina. Sobre o tratamento curativo a lovastatina reduziu a hiperglicemia causada pelo aloxano no quinto dia de tratamento com as doses de 2 mg/kg (redução de 41,7%), 5 mg/ kg (43,3%), 10 mg/kg (45,3%) e 20 mg/kg (42,2%). O controle manteve a hiperglicemia (334,1 ± 27,7; 335,5 ± 24,1). Efeitos semelhantes foram encontrados sobre os níveis de triglicerídeos: 2 mg/kg (redução de 70%), 5 mg/kg (55,4%) e 10 mg/kg (47,6%) e 20 mg/kg (31%); sobre os níveis de colesterol: 2 mg/kg (redução de 33,6%), 5 mg/kg (36,7%), 10 mg/kg (35%) e 20 mg/kg (39,8%); Sobre a AST: 2 mg/kg (redução de 36%), 5 mg/kg (45%), 10 mg/kg (43%) e 20 mg/kg (37,8%). Sobre a ALT somente a dose de 20 mg/kg mostrou redução (38,9%). Foi realizado um tratamento preventivo onde ratos foram previamente tratados por 5 dias com lovastatina 2mg/kg e em seguida induziu-se o diabetes. A lovastatina preveniu o aparecimento da hiperglicemia (170,7 ± 28,2 mg/dL) em comparação ao controle (312,4 ± 22,0). O mesmo ocorreu em relação aos triglicerídeos (252,8 ± 46,7 e 461,3 ± 34,7; LOV e veículo, respectivamente) e colesterol (112,4 ± 9,7 e 191,6 ± 18,9), contudo não houve diferença entre os grupos em relação à AST (34,4 ± 1,3 e 35,7 ± 2,1 UI/L) e ALT (44,2 ± 1,1 e 43,9 ± 1,2 UI/L). Também foi realizado um tratamento sub-crônico por 23 dias com lovastatina após a indução do diabetes. Os parâmetros foram analisados no dia 0, dia 5 e dia 23. Sobre a glicemia as doses de 2 mg/kg (309,2 ± 30,5; 172,0 ± 38,0 e 176,7 ± 33,1) e 5 mg/kg (346,3 ± 21,5; 226,7 ± 25,8 e 125,8 ± 20,4) mostraram redução em comparação ao controle (373,0 ± 47,5; 347,5 ± 26,2 e 338,6 ± 25,3). O mesmo ocorreu com os triglicerídeos: 2 mg/kg (373,1 ± 97,6; 67,0 ± 48,4 e 179,8 ± 40,3), 5 mg/kg (606,9 ± 102,0; 195,2 ± 30,5 e 56,1 ± 10,0) e controle (573,0 ± 27,2; 485,7 ± 54,2 e 459,7 ± 33,7); colesterol: 2 mg/kg (108,0 ± 8,4; 74,0 ± 5,8 e 73,4 ± 5,1), 5 mg/kg (117,5 ± 7,2; 75,9 ± 4,9 e 74,3 ± 6,4) e controle (130,0 ± 6,3; 121,8 ± 4,9 e 116,4 ± 7,8). O tratamento mostrou efeito somente sobre a AST: 2 mg/kg (30,4 ± 2,3; 38,4 ± 3,4 e 29,4 ± 1,1), 5 mg/kg (38,7 ± 7,7; 46,7 ± 3,5 e 32,5 ± 5,5) e controle (41,8 ± 1,8; 40,9 ± 6,3 e 69,6 ± 2,4). A associação da lovastatina (2 mg/kg) com glibenclamida (5 mg/kg) não potencializou o efeito de ambas as drogas sozinhas na redução da glicemia no quinto dia de tratamento: LOV 2 (redução de 64,5%), GLIB 5 (78%) e LOV + GLIB (77,6%). Resultado semelhante foi obtido na associação com metformina (50 mg/kg): LOV 2 (redução de 64,5%), METF 50 (72%) e LOV + METF (75%). Os resultados encontrados demonstram que a ação antiinflamatória da lovastatina é um importante efeito paralelo, principalmente na prevenção e tratamento dos distúrbios inflamatórios vasculares associados com aterosclerose e diabetes. Além disso, o efeito hipoglicemiante mostrado pela droga parece ser independente dos seus efeitos hipolipemiantes, demonstrando uma possível ação auxiliar no tratamento de indivíduos diabéticos.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-16T19:55:24Z No. of bitstreams: 1 2018_KellyAssisRodrigues.pdf: 1974995 bytes, checksum: 94214c05a1fc072d588e7467b369e9ab (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-20T21:10:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_KellyAssisRodrigues.pdf: 1974995 bytes, checksum: 94214c05a1fc072d588e7467b369e9ab (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-20T21:10:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_KellyAssisRodrigues.pdf: 1974995 bytes, checksum: 94214c05a1fc072d588e7467b369e9ab (MD5) Previous issue date: 2018-07-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / Aspergillus terreus é um fungo filamentoso de importância biotecnológica por ser produtor de enzimas de interesse comercial, além de metabolitos secundários como a lovastatina. Esta é utilizada no tratamento de pessoas com hipercolesterolemia uma vez que é um inibidor competitivo da HMG-CoA redutase, enzima responsável pela conversão de HMG-CoA em Mevalonato, diminuindo assim a síntese de colesterol endógeno. Os 18 genes codificadores de enzimas envolvidas na via biosintética de lovastatina estão organizados em um agrupamento gênico de 65 kb no genoma de A. terreus. Dentre esses, genes essenciais já foram identificados, como os genes lovB e lovF, que codificam as principais enzimas da via. Apesar de vários estudos a respeito da via biosintética de lovastatina, ainda existem 10 genes do cluster com a função desconhecida ou predita. Dentre eles a ORF8 (open Reading frame), anotada como um possível gene de resistência. Análises de similaridades mostraram que esta ORF codifica para uma HMG-CoA redutase, sendo que o fungo ainda tem outras duas regiões fora do cluster de lovastatina que também codificam HMG-CoA redutase. Alinhando as três sequências, a ORF8 e as duas enzimas de fora do cluster, foi possível observar que a HMG-CoA redutase, codificada pela ORF8, possui duas mutações no sítio de ligação. Assim, para a caracterização da HMG-CoA redutase, que a ORF8 codifica, foi clonada a sequência no plasmídeo pET28a para expressa-la em Escherichia coli. O plasmídeo foi inserido em quatro linhagens de E. coli, nas quais não foi observada a expressão da proteína. Assim foram desenhados oligonucleotídeos iniciadores para que a ORF8 fosse clonada no vetor p416TEF, que possui a marca de seleção auxotrófica URA3 para inserção na levedura Saccharomyces cerevisiae. No entanto foi possível detectar a produção da enzima em S. cerevisiae pois a ligação do vetor e o inserto não foi alcançada. Outra ORF com função predita é a ORF10, anotada como um possível transportador de lovastatina. Dessa forma, para confirmar sua função biológica, foi realizada sua deleção na cepa ATCC20542, usada como referência para produção de lovastatina. A montagem do cassete de deleção foi realizada em 2 partes, sendo a primeira a amplificação por PCR do cassete de resistência a Higromicina B e dos fragmentos que flanqueiam o gene; e a segunda a fusão dos três fragmentos utilizando a técnica de PCR. O cassete de deleção foi utilizado na transformação da cepa de A. terreus ATCC20542, usada como referência para produção de lovastatina. Após os experimentos de transformação, os 17 clones obtidos foram cultivados em meio definido para quantificação da produção de lovastatina, tanto em sobrenadante quanto em micélio. Dentre os clones avaliados, em 4 clones não foi possível detectar lovastatina no sobrenadante, já em micélio foi observada uma redução de aproximadamente 60% de lovastatina produzida. Estes 4 clones tiveram então seu DNA genômico extraído e usado como molde em reações de PCR. Dessa foram foi possível confirmar que a ORF10 estava realmente deletada nas cepas cuja produção de lovastatina no sobrenadante foi eliminada evidenciando experimentalmente que essa ORF está, de fato, relacionada ao transporte de lovastatina. / Aspergillus terreus is a filamentous fungus of biotechnological importance because it produces enzymes of commercial interest, as well as secondary metabolites like lovastatin. It is used without treatment of people with hypercholesterolemia since it is a competitive inhibitor of HMG-CoA reductase, enzyme responsible for the conversion of HMG-CoA to Mevalonate, thus decreasing as endogenous cholesterol synthesis. The 18 genes encoding enveloping enzymes in the lovastatin biosynthetic pathway are organized into a 65 kb gene cluster in the A. terreus genome. Among these, essential genes have already been identified, as the genes are lovB and lovF, which code as major pathway enzymes. In spite of several genes of the cluster with an unknown or predicted function. There are still 10 cluster genes with an unknown or predicted function. Among them, an ORF8 (open reading frame), annotated as a possible resistance gene. Analyzes of analyzes similar to this ORF code for an HMG-CoA reductase, and the fungus still has other regions for the lovastatin cluster that also encode HMG-CoA reductase. Aligning as three sequences, one ORF8 and two enzymes from outside the cluster, and just like an HFG-CoA reductase encoded by ORF8 does not have two bonds. Thus, for a characterization of HMG-CoA reductase, which is an ORF8 coding, the sequence in plasmid pET28a was cloned to express in Escherichia coli. The plasmid was inserted into four E. coli lines, in which no expression of the protein was observed. Thus, oligonucleotide primers were designed so that the ORF8 was cloned into the p416TEF vector, which has an auxotrophic selection tag URA3 for insertion into the yeast Saccharomyces cerevisiae. However, the possibility of detecting the production of the enzyme in S. cerevisiae at a link of the vector and the insertion was not achieved. Another ORF with predicted function is an ORF10, annotated as a possible lovastatin transporter. Thus, to confirm its biological function, its deletion was carried out in strain ATCC20542, used as reference for lovastatin production. One assembly of a deletion was performed in 2 parts, a first PCR amplification of hygromycin B resistance cassette and fragments flanking the gene; and the second a fusion of the three fragments using a PCR technique. The deletion cassette was used in the transformation of A. terreus strain ATCC20542, used as a reference for lovastatin production. After the transformation experiments, the 17 clones obtained were cultured in defined medium for quantification of lovastatin production, both in supernatant and in mycelium. Among the clones, in 4 clones, it was not possible to detect lovastatin in the supernatant, while in the mycelium a reduction of approximately 60% of lovastatin produced was observed. These 4 clones had their genomic DNA extracted and used as template in PCR reactions. From this it was possible to confirm that ORF10 was indeed deleted in strains whose production of lovastatin in the supernatant was eliminated experimentally evidencing that this ORF is, in fact, related to the transport of lovastatin.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El cáncer mamario es la neoplasia que se presenta con mayor frecuencia en la hembra canina reproductivamente entera. Diversos investigadores han demostrado que lovastatina exhibe un efecto antitumoral in vitro sobre diversas líneas celulares neoplásicas humanas, sin embargo, su potencial efecto aún no ha sido evaluado sobre células de carcinoma mamario canino. Lovastatina inhibe a la enzima hidroxi-metil-glutaril coenzima A (HMG-CoA) reductasa, bloqueando la biosíntesis de colesterol y de sus isoprenoides farnesil pirofosfato (FPP) y geranil-geranil pirofosfato (GGPP), importantes mediadores de algunas vías de transducción de señales asociadas a sobrevida celular. El objetivo de este estudio fue determinar los efectos de lovastatina sobre la proliferación, invasión y apoptosis de células de carcinoma mamario canino CF41.Mg. Se cultivaron células CF41.Mg y se trataron con lovastatina (0-20 μM) por diferentes tiempos. Luego, se evaluó viabilidad celular (método de reducción de MTS), invasión celular (método Transwell) y apoptosis (ensayo de Anexina V/Yoduro de Propidio). Lovastatina indujo una disminución significativa en la viabilidad celular (p ≤ 0.05), efecto que fue dependiente de su concentración y el tiempo. La invasión celular fue inhibida en respuesta a concentraciones no citotóxicas de lovastatina (p ≤ 0.05). Además, esta droga ejerció un efecto pro-apoptótico dependiente del tiempo (p ≤ 0.05). Estos resultados demuestran que lovastatina cumpliría un importante papel sobre la proliferación y capacidad invasiva de células de carcinoma mamario canino CF41.Mg, lo cual sustenta futuros estudios clínicos con esta droga / Mammary cancer is the tumor that occurs most frequently in the reproductively intact female dog. Several researchers have shown that lovastatin exhibits an in vitro antitumor effect on various human neoplastic cell lines, however, its potential effect has not yet been evaluated in canine mammary carcinoma cells. Lovastatin inhibits HMG-CoA reductase, blocking the biosynthesis of cholesterol and its isoprenoids FPP and GGPP, important mediators of some signal transduction pathways associated with cell survival. The aims of this study were to determine the effects of lovastatin on the proliferation, invasion and apoptosis of canine mammary carcinoma cells CF41.Mg. CF41.Mg cells were cultured and treated with lovastatin (0-20 μM) for different times. Then, cell viability (MTS reduction method), cell invasion (Transwell method) and apoptosis (Annexin V/Propidium Iodide assay) were evaluated. Lovastatin induced a significant decrease in cell viability (p ≤ 0.05), an effect that was dependent on its concentration and time. Cell invasion was inhibited in response to non-cytotoxic concentrations of lovastatin (p ≤ 0.05). In addition, lovastatin exerted a pro-apoptotic effect dependent on time (p ≤ 0.05). These results demonstrate that lovastatin would play an important role in the proliferation and invasive capacity of canine mammary carcinoma cells CF41.Mg, which supports future clinical studies with this drug / Proyecto Fondecyt 11110148

Monascus é um fungo ascomiceto tradicionalmente utilizado na China. Os povos orientais utilizam o produto de sua fermentação em arroz não aglutinado, ao qual dão o nome de \"Ang-kak\", e no inglês, \"Red yeast rice\". Sabe-se que este extrato contém substâncias hipocolesterolêmicas, como a Monacolina K, inibidor competitivo da enzima HMG-CoA. Este trabalho se insere neste contexto uma vez que consiste na otimização da fermentação e secagem do extrato de Monascus ruber. Embora já existam estudos sobre a atividade biológica deste extrato, os quais comprovam seus benefícios, não há muitos estudos que visam otimizar a sua fermentação em meio submerso e a secagem do extrato. Para tanto, foram avaliados diversos parâmetros na fermentação através de dois planejamentos fatoriais. No primeiro planejamento, as variáveis estudadas foram o meio de cultura (meio arrozina-glicose e meio sólido de arroz) e agitação (0 rpm e 10 rpm). A agitação promoveu um leve aumento na produção de monacolina-K, já o meio líquido foi mais eficiente na produção desta substância do que o meio sólido de arroz. Baseado neste experimento escolheu-se o meio fermentativo para os demais estudos. No segundo experimento as variáveis estudadas foram a adição no meio arrozina-glicose de zinco, amônio e glutamato. Neste experimento pôde-se verificar que o a produção de monacolina K e de pigmentos foi maior no meio com concentrações intermediárias de zinco e de glutamato e com concentrações maiores de amônio. No estudo da secagem, realizou-se um planejamento Box Benkhin, a fim de se avaliar a influência da proporção do adjuvante: fármaco, do tempo de incorporação do excipiente e da temperatura sobre características do extrato seco como: densidade aparente, densidade de compactação, fator de Hausner, umidade residual, atividade de água, atividade antioxidante e teor de monacolina K. Em relação à proporção do adjuvante: droga pode-se afirmar que a menor produz pós com menor atividade de água e teor de umidade, porém todos os pós obtidos tiveram seu teor de umidade e atividade de água dentro do ideal e a análise estatística mostrou que a proporção do adjuvante: droga não influenciou de forma significativa a atividade de água e o teor de umidade; a proporção 7,5:1 produz melhor rendimento e pós com melhores propriedades de fluxo, por possuírem menores valores de índice de compressibilidade e fator de hausner, já com a proporção 10:1 fornece pós com maior teor de monacolina e maior atividade antioxidante. Em relação à temperatura pode-se afirmar que utilizando-se 50°C obteve-se pós com melhores propriedades de fluxo, ou seja, menor índice de compressibilidade e menor e fator de hausner. Utilizando temperatura de 80°C obteve-se menor atividade antioxidante, maior rendimento e maior teor de monacolina K. Contudo, a análise estatística mostrou que a temperatura não influenciou de forma significativa o teor de monacolina K. Com uma temperatura maior, 110°C obteve-se menor teor de umidade e maior teor de pigmentos vermelhos. Em relação ao tempo de mistura do adjuvante pode-se afirmar que com 1 minuto obteve-se maior teor de pigmentos e pós com melhores propriedades de fluxo, com 5 minutos obteve-se menor teor de pigmentos, maior rendimento, maior teor de monacolina K e menor atividade de água, já com 10 minutos obteve-se menor teor de umidade e maior porcentagem de inibição. A análise estatística demonstrou que o tempo de mistura não influencia de forma significativa a atividade antioxidante. / Monascus ruber is an ascomycete fungus traditionally used in China. Eastern peoples use the product of its fermentation in rice non-agglutinated, which they call Ang-kak (red yeast rice, in English). It is known that this extract contains hypocholesterolemic substances such as the Monacoline K, a competitive inhibitor of the HMG-CoA enzyme. This work comes into this context since it consists in the optimization of the fermentative and drying processes of the Monascus rubers extract. Despite the existence of studies on the biological activity of this extract, which support its benefits, not many aimed at optimizing the fermentative process in submerged conditions and the drying of the extract. This work aimed at optimizing the fermentative process and the drying of the Monascus rubers extract. In order to do such, several parameters of the fermentative process were evaluated through two factorial plannings. In the first one, the variables studied were the modes of culture (liquid culture and solid-state culture) and agitation (0 rpm and 10 rpm). Agitation led to a slight increase in the production of Monacoline-K, and the liquid culture was more efficient in the production of this substance than the solid-state culture. Based on these findings, the fermentative substrate for the following experiments was chosen. In the second experiment, the variables studied were the addition of zinc, ammonium and glutamate in the liquid culture. It was observed that the production of monacoline-k and pigments was increased in the substrates with intermediary concentrations of zinc and glutamate and higher concentration of ammonium. In the drying study, a Box-Benkhin planning was adopted in order to assess the influence of the adjuvant: drug proportion, excipient incorporation time and temperature over the characteristics of the dried extract, such as: apparent density, compactation density, Hausner factor, residual humidity, water activity, antioxidant activity and monacoline-K levels. Regarding the adjuvant: drug proportion, it can be stated that the 5:1 proportion produces powders with smaller water activity and humidity levels, however, all the powders obtained presented humidity levels and water activity within the ideal and, besides that, the statistical analysis showed that the adjuvant: drug proportion had no significant influence on water activity or humidity levels; the proportion of 7,5:1 produces greater quantities and powders with better flow properties, since they have lower values of IC and FH; and with the proportion of 10:1, powders with higher levels of monacoline-K and greater antioxidant activity can be obtained. Concerning temperature, it was observed that powders with better flow properties (lower IC and FH) were obtained at 50°C. At 80°C, lower antioxidant activity, greater quantities and higher levels of monacoline-K were observed, however, the statistical analysis showed that the temperature had no significant effect on the levels of monacoline-K. With a higher temperature (110°C), lower humidity levels and higher red pigment levels were obtained. Concerning the mix time adjuvant: drug proportion, it can be stated that with 1 minute higher levels of pigment and powders with better flow properties were obtained; lower levels of pigment, greater quantities, higher levels of monacoline-K and lower water activity were obtained with 5 minutes and; lower humidity level and greater percentage of inhibition were observed with 10 minutes, however, the statistical analysis showed that the mix time has no significant influence on the antioxidant activity.

Monascus é um fungo ascomiceto tradicionalmente utilizado na China. Os povos orientais utilizam o produto de sua fermentação em arroz não aglutinado, ao qual dão o nome de \"Ang-kak\", e no inglês, \"Red yeast rice\". Sabe-se que este extrato contém substâncias hipocolesterolêmicas, como a Monacolina K, inibidor competitivo da enzima HMG-CoA. Este trabalho se insere neste contexto uma vez que consiste na otimização da fermentação e secagem do extrato de Monascus ruber. Embora já existam estudos sobre a atividade biológica deste extrato, os quais comprovam seus benefícios, não há muitos estudos que visam otimizar a sua fermentação em meio submerso e a secagem do extrato. Para tanto, foram avaliados diversos parâmetros na fermentação através de dois planejamentos fatoriais. No primeiro planejamento, as variáveis estudadas foram o meio de cultura (meio arrozina-glicose e meio sólido de arroz) e agitação (0 rpm e 10 rpm). A agitação promoveu um leve aumento na produção de monacolina-K, já o meio líquido foi mais eficiente na produção desta substância do que o meio sólido de arroz. Baseado neste experimento escolheu-se o meio fermentativo para os demais estudos. No segundo experimento as variáveis estudadas foram a adição no meio arrozina-glicose de zinco, amônio e glutamato. Neste experimento pôde-se verificar que o a produção de monacolina K e de pigmentos foi maior no meio com concentrações intermediárias de zinco e de glutamato e com concentrações maiores de amônio. No estudo da secagem, realizou-se um planejamento Box Benkhin, a fim de se avaliar a influência da proporção do adjuvante: fármaco, do tempo de incorporação do excipiente e da temperatura sobre características do extrato seco como: densidade aparente, densidade de compactação, fator de Hausner, umidade residual, atividade de água, atividade antioxidante e teor de monacolina K. Em relação à proporção do adjuvante: droga pode-se afirmar que a menor produz pós com menor atividade de água e teor de umidade, porém todos os pós obtidos tiveram seu teor de umidade e atividade de água dentro do ideal e a análise estatística mostrou que a proporção do adjuvante: droga não influenciou de forma significativa a atividade de água e o teor de umidade; a proporção 7,5:1 produz melhor rendimento e pós com melhores propriedades de fluxo, por possuírem menores valores de índice de compressibilidade e fator de hausner, já com a proporção 10:1 fornece pós com maior teor de monacolina e maior atividade antioxidante. Em relação à temperatura pode-se afirmar que utilizando-se 50°C obteve-se pós com melhores propriedades de fluxo, ou seja, menor índice de compressibilidade e menor e fator de hausner. Utilizando temperatura de 80°C obteve-se menor atividade antioxidante, maior rendimento e maior teor de monacolina K. Contudo, a análise estatística mostrou que a temperatura não influenciou de forma significativa o teor de monacolina K. Com uma temperatura maior, 110°C obteve-se menor teor de umidade e maior teor de pigmentos vermelhos. Em relação ao tempo de mistura do adjuvante pode-se afirmar que com 1 minuto obteve-se maior teor de pigmentos e pós com melhores propriedades de fluxo, com 5 minutos obteve-se menor teor de pigmentos, maior rendimento, maior teor de monacolina K e menor atividade de água, já com 10 minutos obteve-se menor teor de umidade e maior porcentagem de inibição. A análise estatística demonstrou que o tempo de mistura não influencia de forma significativa a atividade antioxidante. / Monascus ruber is an ascomycete fungus traditionally used in China. Eastern peoples use the product of its fermentation in rice non-agglutinated, which they call Ang-kak (red yeast rice, in English). It is known that this extract contains hypocholesterolemic substances such as the Monacoline K, a competitive inhibitor of the HMG-CoA enzyme. This work comes into this context since it consists in the optimization of the fermentative and drying processes of the Monascus rubers extract. Despite the existence of studies on the biological activity of this extract, which support its benefits, not many aimed at optimizing the fermentative process in submerged conditions and the drying of the extract. This work aimed at optimizing the fermentative process and the drying of the Monascus rubers extract. In order to do such, several parameters of the fermentative process were evaluated through two factorial plannings. In the first one, the variables studied were the modes of culture (liquid culture and solid-state culture) and agitation (0 rpm and 10 rpm). Agitation led to a slight increase in the production of Monacoline-K, and the liquid culture was more efficient in the production of this substance than the solid-state culture. Based on these findings, the fermentative substrate for the following experiments was chosen. In the second experiment, the variables studied were the addition of zinc, ammonium and glutamate in the liquid culture. It was observed that the production of monacoline-k and pigments was increased in the substrates with intermediary concentrations of zinc and glutamate and higher concentration of ammonium. In the drying study, a Box-Benkhin planning was adopted in order to assess the influence of the adjuvant: drug proportion, excipient incorporation time and temperature over the characteristics of the dried extract, such as: apparent density, compactation density, Hausner factor, residual humidity, water activity, antioxidant activity and monacoline-K levels. Regarding the adjuvant: drug proportion, it can be stated that the 5:1 proportion produces powders with smaller water activity and humidity levels, however, all the powders obtained presented humidity levels and water activity within the ideal and, besides that, the statistical analysis showed that the adjuvant: drug proportion had no significant influence on water activity or humidity levels; the proportion of 7,5:1 produces greater quantities and powders with better flow properties, since they have lower values of IC and FH; and with the proportion of 10:1, powders with higher levels of monacoline-K and greater antioxidant activity can be obtained. Concerning temperature, it was observed that powders with better flow properties (lower IC and FH) were obtained at 50°C. At 80°C, lower antioxidant activity, greater quantities and higher levels of monacoline-K were observed, however, the statistical analysis showed that the temperature had no significant effect on the levels of monacoline-K. With a higher temperature (110°C), lower humidity levels and higher red pigment levels were obtained. Concerning the mix time adjuvant: drug proportion, it can be stated that with 1 minute higher levels of pigment and powders with better flow properties were obtained; lower levels of pigment, greater quantities, higher levels of monacoline-K and lower water activity were obtained with 5 minutes and; lower humidity level and greater percentage of inhibition were observed with 10 minutes, however, the statistical analysis showed that the mix time has no significant influence on the antioxidant activity.

Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-11T18:26:28Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Anderson.pdf: 1160119 bytes, checksum: 65c6c27ff6f228d175f7dea3cb9fe485 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T18:26:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Anderson.pdf: 1160119 bytes, checksum: 65c6c27ff6f228d175f7dea3cb9fe485 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / FACEPE / A lovastatina é um inibidor enzimático comumente chamado de estatina e são de grande importância na medicina para redução dos altos níveis de colesterol. É uma potente droga, produzida através do metabolismo secundário de alguns micro-organismos, e atua inibindo a ação da enzima 3-hidroxi-3-metil-glutaril-CoA redutase (HMG-Coa redutase), que tem papel limitante na biossíntese do colesterol. Este estudo avaliou a produção de lovastatina pela linhagem de Aspergillus terreus URM 4317 através de fermentação em estado sólido (FES) utilizando resíduos agroindustriais como meio de produção, bem como otimização de alguns parâmetros de produção (umidade, temperatura e pH) por planejamento fatorial. Os resultados (619,5 μg/g de substrato seco) indicaram que o sabugo de milho foi o melhor substrato para produção de lovastatina, nas condições de humidade 80%, temperatura 30ºC, pH 5,5 e 10 dias de fermentação. As variáveis estudas indicaram que todas apresentaram efeitos significativos, enquanto o pH mostrou efeito negativo, e temperatura e umidade com efeitos positivos. Os resultados mostraram, portanto, que o sabugo de milho pode ser usado como uma fonte alternativa e econômica para produção de lovastatina por A. terreus URM 4317.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29 / Introducao: A inflamacao tem sido relacionada a varias doencas neurodegenerativas e dados clinicos e experimentais sugerem uma funcao crucial nos processos inflamatorios no desenvolvimento da epilepsia, em particular, nos mecanismos geradores de crises (ictogenese) e na transformacao de uma rede neuronal normal a uma rede geradora de crises. A lovastatina, substancia usada na reducao da sintese do colesterol, tambem esta relacionada com a resposta inflamatoria, podendo modular a producao de citocinas e diminuir e o estresse oxidativo. Objetivos: O presente estudo teve como objetivo analisar a acao da lovastatina no desenvolvimento das diferentes fases do modelo de epilepsia, induzido por pilocarpina em ratos. Metodos: Ratos Wistar machos foram analisados nos 3 periodos do modelo da pilocarpina (350mg/kg) fases: aguda (24h), silenciosa (15 dias) e cronica (30 dias apos a 1.a crise espontanea) e para cada periodo do modelo usamos 4 grupos de animais: salina, lovastatina (Lova), pilocarpina (Pilo) e pilocarpina+lovastatina (Pilo+Lova). O tratamento com lovastatina (20 mg/kg) se iniciou 2 h apos o inicio do estado de mal epileptico e foi administrada por 15 dias, duas vezes ao dia nos animais do grupo silencioso e cronico. O cerebro foi processado para realizacao de PCR em tempo real e imuno-histoquimica de IL-1ƒÀ, IL-6, TNF-ƒ¿, IL-10, receptor B1 e B2 de cininas e quantificacao de aminoacidos no hipocampo. Alem disso, o tecido hipocampal foi processado para as tecnicas de Nissl e Neo-Timm modificado. Alem disso, foi medida a temperatura corporea na fase aguda, duracao do periodo silencioso e frequencia de crises na fase cronica. Resultados: O tratamento com a lovastatina no grupo Pilo+Lova mostrou diminuicao da expressao de RNAm e das proteinas IL-1ƒÀ e TNF-ƒ¿ nas 3 fases do modelo Notamos tambem reducao nos niveis do receptor B1 e B2 de cininas na fase aguda e de IL-6 nas fases aguda e silenciosa do modelo. Houve um aumento da expressão de IL-10 na fase crônica e não houve alteração nos níveis dos aminoácidos no hipocampo dos animais desse grupo, quando comparado ao grupo Pilo. Foi observada uma normalização da temperatura corpórea dos ratos submetidos ao SE e tratados com lovastatina. Não houve diferença significativa entre o grupo Pilo e Pilo+Lova na duração da fase silenciosa e na freqüência de crises. Foi observada uma preservação de neurônios em CA1 e também uma diminuição no brotamento de fibras musgosas no grupo Pilo+Lova, quando comparado ao grupo Pilo, na fase crônica do modelo. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o tratamento com a lovastatina diminuiu diversos parâmetros importantes relacionados com o dano neuronal induzido pelo SE, no hipocampo de ratos nas diferentes fases do modelo experimental de epilepsia induzido pela pilocarpina. / Introduction: Inflammation has been associated with several neurodegenerative diseases and experimental and clinical data suggest a crucial role in inflammatory processes in the development of epilepsy, particularly in seizure-generating mechanisms (ictogenesis) and transformation of a normal neuronal network into a network generating seizures. Lovastatin, a drug used in the reduction of cholesterol synthesis, is also related to the inflammatory response and can modulate cytokine production reducing the oxidative stress. Objectives: This study aimed to analyze the action of lovastatin in different stages of development model of epilepsy induced by pilocarpine in rats. Methods: Male Wistar rats were analyzed in three periods of the pilocarpine-induced epilepsy (350mg/kg) into phases: acute (24h), silent (15 days) and chronic (30 days after the 1st spontaneous seizure) and for each period of this model we used 4 groups of animals: saline-treated, lovastatin (Lova), pilocarpine (Pilo) and pilocarpine + lovastatin (Pilo+ Lova). Treatment with lovastatin (20 mg / kg) begun 2 h after the onset of status epilepticus (SE) and was administered for 15 days, twice a day the animals in the silent and chronic phases. The brain was processed for performing real-time PCR and immunohistochemistry of IL-1ƒÀ, IL-6, TNF-ƒ¿, IL-10 and kinin B1 and B2 receptors and quantification of amino acids in the hippocampus. Besides, the hippocampal tissue was processed for Nissl techniques and Neo-Timm. In addition, body temperature was measured in the acute phase and the duration of the silent period and seizure frequency in chronic phase was analyzed. Results: Treatment with lovastatin in Pilo + Lova group showed decreased expression of mRNA and proteins IL-1ƒÀ and TNF-ƒ¿ in the three phases of this model, We also noted reduction of kinin B1 and B2 receptor in the acute and IL-6 into acute and silent periods. There was an increased expression of IL-10 in the chronic phase of this model. There was no change in amino acids levels in the hippocampus of rats from Pilo+Lova group when compared to Pilo group. We observed a normalization of body temperature of rats subjected to SE and treated with lovastatin. There was no significant difference between the group Pilo and Pilo + Lova on the duration of the silent phase and in seizure frequency. We observed a preservation of neurons in CA1 and also a reduction of mossy fiber sprouting in Pilo+ Lova group as compared to the Pilo group in the chronic phase of the model. Conclusion: This study demonstrated that treatment with lovastatin decreased number of important parameters related to the neuronal damage induced by SE in the hippocampus of rats at different stages of the experimental model of epilepsy induced by pilocarpine. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A partir de 280 isolados fúngicos de cana-de-açúcar, 18 cepas foram avaliadas quanto á presença de genes da policetídeo sintase por meio da técnica do PCR. Estes fungos foram identificados taxonomicamente por uma abordagem polifásica, classificando-os dentro de quatro ordens e nove gêneros. A avaliação da atividade biológica demonstrou a presença de metabolitos com propriedades antibióticas quando enfrentados a micro-organismos patogênicos. Segundo a análise de correspondência múltipla, esta atividade poderia estar associada com a local de isolamento dos fungos. Foram detectadas 36 seqüências similares a genes PKS a partir de 17 destes fungos. A análise filogenética do domínio KS, conduzida pelo método de neighbor-joining, indicou que 16 seqüências se acomodaram dentro do grupo monofilético dos PKS envolvidos na produção de policetídeos não reduzidos e as outras 10 seqüências se acomodaram dentro do grupo monofilético dos PKS envolvidos na produção de policetídeos reduzidos. A análise do domínio CMT também apontou que as seqüências podiam se acomodaram em grupos de PKS dependendo do grau de redução do policetídeo, todas as seqüências CMT se relacionaram com PKS envolvidos na produção de policetídeos reduzidos. As análises dos modelos estruturais também demonstraram que as seqüências estavam altamente relacionadas com estruturas protéicas da família das enzimas de condensação, destacando a presença de uma hélice característica que carrega o resíduo de cisteína, responsável pela atividade de condensação. Extratos orgânicos obtidos de cultivos dos fungos foram avaliados parar detectar a presença de compostos tipo lovastatina. Por meio de cromatografia CCDS, detectaram-se bandas de 10 extratos com o mesmo deslocamento que a lovastatina padrão, mas apenas 6 destas foram confirmados por CLAE. O isolado A. flavus CBMAI 1023, foi selecionado para a realização de experimentos de produção a maior escala onde foi possível isolar e caracterizar um novo policetídeo. / From a group of 280 sugarcane-derived fungi 18 strains were assessed for the presence of polyketide synthase genes by PCR approaches. These fungi were identified taxonomically by a polyphasic approach classifying into four orders and nine genres. Biological activity tests showed the presence of antibiotic metabolites against pathogenic microorganisms and the relationship of this activity might be linked with the fungal isolate location by multiple correspondence analyses. 36 sequences similar to PKS genes fragments were detected from 17 of these fungi. A neighbor-joining phylogenetic analysis of the KS domain showed that 16 sequences fit on the monophyletic group of PKS evolved with production of non reduced polyketides, and the other 10 sequences fit on the monophyletic group of PKS evolved with the production of reduced polyketides. CMT domain analysis also pointed that the sequences fit with groups of PKS depending on polyketide reduction grade, all ten related to PKS evolved with the synthesis of reduced polyketides. Protein structural analysis also pointed out that these sequences are closely related with proteins from condensing enzyme family, highlighting the presence of a characteristic helix elbow that bears the cysteine residue responsible for the condensation activity. The fungi were also tested for their capacity of producing lovastatin compounds where chromatographic TLC detected bands from 10 extracts with the same dislocation compared to a lovastatin, but only 6 were confirmed by HPLC. The A. flavus CBMAI (1023) were selected for upscale production experiments, from where it was possible isolate and characterize a new polyketide compound.

A partir de 280 isolados fúngicos de cana-de-açúcar, 18 cepas foram avaliadas quanto á presença de genes da policetídeo sintase por meio da técnica do PCR. Estes fungos foram identificados taxonomicamente por uma abordagem polifásica, classificando-os dentro de quatro ordens e nove gêneros. A avaliação da atividade biológica demonstrou a presença de metabolitos com propriedades antibióticas quando enfrentados a micro-organismos patogênicos. Segundo a análise de correspondência múltipla, esta atividade poderia estar associada com a local de isolamento dos fungos. Foram detectadas 36 seqüências similares a genes PKS a partir de 17 destes fungos. A análise filogenética do domínio KS, conduzida pelo método de neighbor-joining, indicou que 16 seqüências se acomodaram dentro do grupo monofilético dos PKS envolvidos na produção de policetídeos não reduzidos e as outras 10 seqüências se acomodaram dentro do grupo monofilético dos PKS envolvidos na produção de policetídeos reduzidos. A análise do domínio CMT também apontou que as seqüências podiam se acomodaram em grupos de PKS dependendo do grau de redução do policetídeo, todas as seqüências CMT se relacionaram com PKS envolvidos na produção de policetídeos reduzidos. As análises dos modelos estruturais também demonstraram que as seqüências estavam altamente relacionadas com estruturas protéicas da família das enzimas de condensação, destacando a presença de uma hélice característica que carrega o resíduo de cisteína, responsável pela atividade de condensação. Extratos orgânicos obtidos de cultivos dos fungos foram avaliados parar detectar a presença de compostos tipo lovastatina. Por meio de cromatografia CCDS, detectaram-se bandas de 10 extratos com o mesmo deslocamento que a lovastatina padrão, mas apenas 6 destas foram confirmados por CLAE. O isolado A. flavus CBMAI 1023, foi selecionado para a realização de experimentos de produção a maior escala onde foi possível isolar e caracterizar um novo policetídeo. / From a group of 280 sugarcane-derived fungi 18 strains were assessed for the presence of polyketide synthase genes by PCR approaches. These fungi were identified taxonomically by a polyphasic approach classifying into four orders and nine genres. Biological activity tests showed the presence of antibiotic metabolites against pathogenic microorganisms and the relationship of this activity might be linked with the fungal isolate location by multiple correspondence analyses. 36 sequences similar to PKS genes fragments were detected from 17 of these fungi. A neighbor-joining phylogenetic analysis of the KS domain showed that 16 sequences fit on the monophyletic group of PKS evolved with production of non reduced polyketides, and the other 10 sequences fit on the monophyletic group of PKS evolved with the production of reduced polyketides. CMT domain analysis also pointed that the sequences fit with groups of PKS depending on polyketide reduction grade, all ten related to PKS evolved with the synthesis of reduced polyketides. Protein structural analysis also pointed out that these sequences are closely related with proteins from condensing enzyme family, highlighting the presence of a characteristic helix elbow that bears the cysteine residue responsible for the condensation activity. The fungi were also tested for their capacity of producing lovastatin compounds where chromatographic TLC detected bands from 10 extracts with the same dislocation compared to a lovastatin, but only 6 were confirmed by HPLC. The A. flavus CBMAI (1023) were selected for upscale production experiments, from where it was possible isolate and characterize a new polyketide compound.