A serapilheira depositada sobre a superfície do solo apresenta quantidades significativas de nutrientes, que podem ser reciclados pela decomposição microbiana, principalmente pelos fungos do solo. Sabendo-se da dependência entre a produtividade do sítio, a ciclagem de nutrientes e o processo de decomposição da serapilheira acumulada, o conhecimento da micobiota responsável pela decomposição é o caminho adequado para se obter respostas sobre a produtividade florestal e a demanda de nutrientes. O objetivo desse estudo foi conhecer a diversidade e sucessão dos fungos durante a decomposição da serapilheira de acículas de Pinus taeda, ao longo de 12 meses. Assim como, estabelecer uma relação entre a presença dos fungos e as condições climáticas locais. O estudo foi estabelecido em um plantio experimental de P. taeda, com 4 anos de idade, localizado em Três Barras, SC. Para acompanhar a sucessão, acículas senescentes foram coletadas das árvores e colocadas em sacolas seletivas para microrganismos, deixadas sob a floresta. A primeira amostra foi levada ao laboratório e o restante foi mantido in situ para que as acículas continuassem seu processo de decomposição natural, sendo coletadas a cada três meses. No laboratório, a cada coleta, as acículas foram submetidas a 20 lavagens sucessivas e retirados fragmentos, os quais foram inseridos em placas de Petri contendo meio Extrato de Malte 2% e incubados sob condição ambiente. Dados referentes a temperatura e precipitação pluviométrica da área experimental foram comparados com o número de registros dos fungos isolados para fins de correlação estatística. Durante a sucessão fúngica, foram identificados 13 gêneros fúngicos: Acremonium, Alternaria, Epiccoccum, Cladosporium, Coletotrichum, Gliocladium, Fusarium, Penicillium, Pestalotia, Trichoderma (Deuteromycetes), Mucor (Zygomycetes) e Rhizoctonia (Basidiomycetes). Os gêneros significativamente mais abundantes foram Trichoderma, Fusarium e Verticillium. Sobre a correlação entre os fatores climáticos e a presença dos fungos, verificou-se que somente as temperaturas média e máxima influenciaram significativamente a abundância dos fungos em acículas de pínus em decomposição, durante o período estudado

Orientadora : Profª. Drª. Ida Chapaval Pimentel / Coorientador : Prof. Dr. Álvaro Figueredo dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 19/02/2016 / Inclui referências : f. 72-82 / Área de concentração / Resumo: A peroba rosa (Aspidosperma polyneuron) é uma espécie florestal nativa da Floresta Estacional Semidecidual, que encontra-se ameaçada de extinção devido à intensa exploração predatória. Com a intensificação da procura por sementes, surge a necessidade de ampliar os conhecimentos sobre a qualidade das sementes de espécies florestais nativas. Frente a isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade sanitária e fisiológica de dez lotes de sementes de peroba rosa, identificando e avaliando fungos que são transmitidos pelas sementes e que possam causar danos à germinação e desenvolvimento das plantas. Foram utilizadas sementes oriundas de quatro regiões do Paraná (Oeste, Sudoeste, Centro-Sul e Noroeste). Para a germinação e vigor foram realizadas seis repetições de 25 sementes em rolos de papel, mantidas em germinador a 25°C por 26 dias com luz contínua. Os parâmetros de vigor avaliados foram a primeira contagem com 12 dias, índice de velocidade de germinação e comprimento de parte aérea e raiz. As análises sanitárias consistiram na detecção de fungos endofíticos e epifíticos, a qual requer níveis diferentes de desinfestação prévia das sementes. Para a detecção de fungos endofíticos (álcool 70% - 1 minuto; hipoclorito de sódio 1% - 4 minutos; álcool 70% - 30 segundos) e epifíticos (álcool 70% - 30 segundos; hipoclorito de sódio 1% - 1 minuto) foi utilizado meio de batata-dextrose-ágar (BDA) e meio seletivo de Fusarium (MSF). O material foi incubado a 20 °C, fotoperíodo de 12 horas de luz/ 12 horas de escuro, por sete dias. Em seguida, determinou-se a incidência (%) dos fungos. Para a transmissão, as sementes não desinfestadas foram semeadas em vermiculita. Avaliou-se a presença de sintomas nas plântulas. Aos 60 dias após a semeadura, as sementes não germinadas foram removidas e colocadas em câmara úmida para observação. Quanto à patogenicidade o teste foi realizado em mudas de peroba rosa, com ferimentos prévios nas folhas e inoculou-se um disco de meio BDA com micélio em crescimento ativo. As mudas foram colocadas em câmara úmida por 72 horas e mantidas por 30 dias em casa de vegetação. Os isolados de Fusarium spp. e Phomopsis spp. selecionados foram identificados por meio de sequências das regiões ITS1-5,8S e ITS2 do DNA ribossomal e região parcial do fator de elongação 1-alpha. A germinação das sementes de peroba rosa variou de 9,3% a 60%. Fusarium spp. e Phomopsis spp. foram os fungos fitopatogênicos encontrados como epífitos nas sementes de peroba rosa, com incidência entre 52 e 25%, respectivamente. Como endófitos apresentaram valores entre 5 e 65%, respectivamente. Houve transmissão de Fusarium spp. e Phomopsis spp. das sementes para as plântulas causando necrose de raízes e cotilédones. 27 isolados de Fusarium spp. e 26 de um total de 32 isolados de Phomopsis spp. foram patogênicos. Por meio das características morfológicas e moleculares foram identificadas sete espécies de Fusarium - Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium verticillioides, Fusarium equiseti, Fusarium fujikuroi, Fusarium pseudocircinatum e Fusarium subglutinans, associadas às sementes de peroba rosa. Quanto à Phomopsis spp., foram identificadas duas espécies: Diaporthe paranensis e Diaporthe oxe. Palavras-chave: Patologia de sementes, sementes florestais nativas, fungos endofíticos. / Abstract: The peroba rosa (Aspidosperma polyneuron) is a forest specie, native from the semideciduous forest, which is threatened of extinction due the intense predatory exploitation. The increasing on the demand for seeds arises the need to increase knowledge about the quality of seeds of native forest species. Based on that, the aim of this study was to check the sanitary quality and physiological of ten peroba rosa seed lots, identifying and assessing fungi what are transmitted for seeds and that can cause damage to the germination and development of plants. Ten lots of seeds from four regions of Paraná (West, Southwest, South Central and Northwest) were used. For germination and vigor, six repetitions of 25 seeds were performed in rolls of paper, maintained in germinator at 25 °C for 26 days with continuous light. The vigor parameters evaluated were the first count with 12 days, germination speed index and length of shoot and root. The sanitary analysis consisted in detecting endophytic and epiphytic fungi, which requires different levels of prior disinfection of the seeds. For detection of endophytic fungi (70% alcohol - 1 minute; 1% sodium hypochlorite - 4 minutes; 70% alcohol - 30 seconds) and epiphytic (70% alcohol - 30 seconds; 1% sodium hypochlorite - 1 minute) potato-dextrose-agar (PDA) and Fusarium selective medium (MSF) were used. The material was incubated at 20 °C, with photoperiod of 12 hours light / 12 hours dark, for seven days. Then, it was determined the incidence (%) of fungi. For the transmission test, the non-disinfested seeds were sown in vermiculite. The presence of symptoms in seedlings was evaluated. At 60 days after sowing, the non-germinated seeds were removed and placed in a humid chamber for observation. The pathogenicity test was performed in seedlings of peroba rosa, with previous injuries in the leaves where a disk of PDA with mycellium in active growth was inoculated. The seedlings were placed in humid chamber for 72 hours and maintained for 30 days in a greenhouse. The isolates of Fusarium spp. and Phomopsis spp. selected were identified by sequences of rDNA regions ITS1-5,8S and ITS2 and partial region of the elongation factor 1-alpha. The germination of seeds of peroba rosa ranged from 9.3% to 60%. Fusarium spp. and Phomopsis spp. were the phytopathogenic fungi found as epiphytes in peroba rosa, with incidence between 52 and 25%, respectively. As endophytes, they showed values between 5 and 65%, respectively. There was transmission of Fusarium spp. and Phomopsis spp. from the seeds to seedlings causing necrosis in roots and cotyledons. 27 isolates of Fusarium spp. and only 26 out of 32 isolates of Phomopsis spp. were pathogenic. Through morphological and molecular and characteristics, seven Fusarium species were identified - Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium verticillioides, Fusarium equiseti, Fusarium fujikuroi, Fusarium pseudocircinatum and Fusarium subglutinans, all associated with peroba rosa seeds. Regarding the Phomopsis spp., two species were identified: Diaporthe paranensis and Diaporthe oxe. Keywords: Seed pathology, native forest seeds, endophytic fungi.

Resumo: Diplodia pinea é um patógeno que causa doença em vários gêneros de coníferas e perdas em plantações comerciais de Pinus devido à seca de ponteiros. D. pinea se reproduz apenas assexuadamente, sendo comum a presença de linhagens clonais (morfotipos A e C) apresentando diferenças no potencial de agressividade com relação ao hospedeiro. Diante da importância econômica do gênero Pinus para o Brasil e no potencial do D. pinea em causar danos nesse gênero, o objetivo deste estudo foi efetuar uma caracterização morfofisiológica, patogênica e molecular de 20 isolados de D. pínea obtidos das regiões Sul e Sudeste do Brasil. O aspecto micelial dos isolados foi avaliado em placas com meio BDA e EMA,a temperatura ótima de crescimento dos isolados, em meio BDA e a esporulação em meio APA, nas temperaturas de 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40 °C. Foram avaliados 100 conídios por isolado quanto às dimensões, numero de septos, espessura e aspecto da parede, sob microscópio ótico e eletrônico de varredura. Avaliou-se, também, a parede dos conídios quanto à presença de perfurações. A agressividade dos isolados foi avaliada em mudas de Pinus taeda e Pinus elliottii var. elliottii. A caracterização molecular dos isolados foi realizada através do sequenciamento da região ITS1--5,8S-ITS2 do rDNA. Os isolados apresentaram em meio BDA e EMA micélio algodoado inicialmente branco mudando-se para cinza chumbo. Os conídios avaliados apresentaram dimensões entre 30-39,9 x 12,9-16,5 ?m de largura, principalmente sem septos ou uniseptados. A microscopia eletrônica revelou conídios com parede lisa e sem a presença de pontuações, típica para o morfotipo A. O crescimento dos isolados foi verificado de 12 a 36 °C e a formação de picnídios de 12 a 32 °C, mas os conídios maturos foram observados a 20, 24 e 28 °C. O isolado B11 foi o mais agressivo nas duas espécies de Pinus testadas e a existência de interação foi verificada entre isolados e espécies de Pinus. O sequenciamento formou um clado monofiletico agrupando os isolados de Diplodia pínea. Os resultados indicam que os isolados pertencem ao morfotipo A de D. pinea.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-18Bitstream added on 2014-06-13T19:14:50Z : No. of bitstreams: 1 terrasan_crf_me_rcla.pdf: 391328 bytes, checksum: cd22c1774316d416bfb6f9f645077ac6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Especies de Penicillium estao entre os fungos mais comumente encontrados na natureza. Sao eximios degradadores de materia organica apresentando, assim, papel fundamental nos habitat que ocupam. Neste trabalho, uma linhagem de Penicillium janczewskii, isolada do solo da Mata Atlantica, foi avaliada quanto a producao de xilanases e ß-xilosidases, enzimas responsaveis pela degradacao da xilana presente na materia vegetal. Alem disso, o outro objetivo desse trabalho foi caracterizar ambas as atividades no filtrado de cultura. A xilana de aveia mostrou-se a melhor fonte de carbono para inducao dessas enzimas seguida do farelo de trigo. A producao enzimatica tambem foi induzida, em niveis inferiores, por outros substratos lignocelulosicos. Ressalta-se ainda que nao houve producao de celulases, exceto em meios com farelo de trigo, farelo de aveia e lactose, nos quais baixos niveis foram produzidos. O estudo cinetico das atividades enzimaticas indicou niveis mais elevados de xilanase em culturas de 7 dias de idade, e de ß-xilosidases em culturas de 8 dias. A linhagem se desenvolveu bem na faixa de pH entre 3,0 e 9,0 em temperaturas entre 20 e 35 °C, sendo selecionados o pH 6,5 e 30 °C e o pH 5,0 e 25 °C como condicoes para producao das maiores atividades xilanasica e ß-xilosidasica, respectivamente. As condicoes otimas de atividade xilanasica foram pH 5,0 e 50 °C, e para a ß-xilosidase foram pH 4,0 e 75 °C, temperatura bastante elevada considerando o carater mesofilico desse microrganismo. A atividade xilanasica apresentou-se mais estavel em pHs de 6,0 a 9,5, enquanto a atividade ß-xilosidasica apresentou-se mais estavel em pHs acidos, de 1,6 a 5,5, faixa na qual manteve praticamente 100 % da atividade. As meias-vidas da atividade xilanase a 40, 50 e 60 °C foram de 183, 15 e 2,8 min, respectivamente. A atividade ß-xilosidasica apresentou... / Species of Penicillium are among the most common fungi found in the nature. They are excellent organic matter degraders, playing an important role in the habitat they live. In this work, a Penicillium janczewskii strain, isolated from soil of Atlantic Forest, was valuated for the production of xylanase and ß-xylosidase, enzymes responsible for degradation of xylan present in the vegetal material. Moreover, another aim of this work was to characterize both activities in the culture filtrate. Oat spelts xylan was the best inducer carbon source to these enzymes, followed by wheat bran. The enzymatic production was also induced, in inferior levels, for others lignocellulosic substrates. It was observed that the strain did not produce celulases, except when cultivated in medium with wheat bran, oat bran and lactose, in which low levels were produced. The kinetic study of the enzymatic activities indicated higher levels of xylanase in 7 days-old cultures and higher levels of ß-xylosidase in 8 daysold cultures. The strain developed well in pH between 3.0 and 9.0 and in temperature between 20 and 35 °C. It was selected pH 6.5 and 30 °C, and pH 5.0 and 25 °C as the conditions for highest production of xylanase and ß-xylosidase activities, respectively. The optima conditions for xylanase activity were pH 5.0 and 50 °C, and for ß-xylosidase activity were the pH 4.0 and 75 °C, an elevated temperature considering the mesophilic character of this microorganism. The xylanase activity was more stable in pH from 6.0 to 9.5, while the ß-xylosidase activity was more stable in acid pH, between 1.6 and 5.5, maintaining practically 100 % of the activity in this range. The half-lives of the xylanase activity at 40, 50 and 60 °C was 183, 15 and 2.8 min, respectively. The ß-xylosidase activity presented T50 of 144, 7.6 and 4.2 min at 50, 65 and 75 °C, respectively... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:51:43Z : No. of bitstreams: 1 madeira_s_me_botfm.pdf: 346816 bytes, checksum: c441db20f2f626542c6470c22fc1ba8e (MD5) / O presente estudo teve por objetivos avaliar a susceptibilidade de camundongos isogênicos das linhagens BALB/c e B10.A à infecção pelo fungo Lacazia loboi (L. loboi), mediante estudo do aspecto histopatológico das lesões produzidas, número de fungos e índice de viabilidade obtidos nos diferentes períodos de sacrifício e também verificar se o padrão de resposta aos parâmetros avaliados, nos animais isogênicos, é homogêneo, de modo a permitir correlação dos resultados entre si. Ambos coxins plantares traseiros de quarenta e quatro camundongos BALB/c e quarenta e quatro B10.A foram intradermicamente inoculados com 0,03ml de uma suspensão fúngica. A suspensão foi obtida a partir de um único fragmento de lesão, coletado de um paciente portador da doença de Jorge Lobo. A biópsia foi macerada em solução salina 0,85% para obtenção da suspensão, sendo imediatamente submetida à técnica de coloração vital com diacetato de fluoresceína-brometo de etídeo para determinação do índice de viabilidade. A concentração fúngica foi estimada utilizando-se câmara de Neubauer e os resultados foram expressos em números absolutos. A suspensão possuía 9 x 105 fungos/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) e 45% de índice de viabilidade. Os animais foram sacrificados vinte e quatro e setenta e duas horas, sete e quinze dias, um, quatro, sete, dez, treze, dezesseis e dezoito meses após inoculação. Ambos coxins plantares foram excisados, sendo um deles enviado para análise histopatológica e o outro macerado em solução salina para determinação do número de fungos e do índice de viabilidade. A linhagem BALB/c apresentou extenso infiltrado... / The objectives of the present study were to evaluate the susceptibility of the inbred mice strains BALB/c and B10.A to the infection by the fungus Lacazia loboi (L. loboi) studying the histopathological aspects of lesions produced, number of fungi and viability index at each time of sacrifice, and also verify if the pattern of response among the isogenic strains is homogeneous, allowing a correlation of the results. Both hind foot pads of 44 BALB/c and 44 B10.A mice were intradermically inoculated with 0,03 ml of a fungal suspension. The fungal suspension was obtained from a single lesion fragment of a Jorge Lobo’s disease patient. The biopsy was macerated in 0.85% saline and the suspension was immediately submitted to viability determination through the ethidium bromidefluorescein diacetate vital staining. The fungal concentration was estimated in Neubauer chamber and the results expressed in absolute numbers. The suspension contained 9x105 fungi/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) and 45% of viable fungi. The animals were sacrificed at 24 and 72 hours, 7 and 15 days, 1, 4, 7, 10, 13, 16 and 18 months after inoculation. Both foot pads were excised, being one submitted to histopathological examination and the other macerated for fungal counting and viability index determination. The BALB/c strain presented an extensive granulomatous... (Complete abstract, click electronic access below)

Resumo: O objetivo principal deste trabalho foi testar diferentes linhagens fúngicas do gênero Rhizopus sp. em diferentes substratos, dentre eles a soja. 17 linhagens do gênero Rhizopus sp. foram selecionadas para estudos por fermentação no estado sólido. Durante o processo de fermentação no estado sólido utilizando as linhagens foram realizadas análises de quantificação de atividade antioxidante pelo método de DPPH, degradação de fator antinutricional pela determinação de atividade de fitases e atividade proteolítica. Dentre as 17 linhagens, duas linhagens Rhizopus LPB-R.5 e LPB-R.6 apresentaram grande potencial para a produção de substâncias antioxidantes durante a fermentação. Os processos de fermentação FES e FSm utilizando diferentes substratos foram estudados. Estudos cinéticos do processo de FES foram realizados com misturas de substratos: mistura de grãos de soja e arroz integral, mistura de soja e milho, as quais foram comparadas com os resultados das fermentações realizadas somente com a soja como substrato. A quantificação de compostos antioxidantes bem como a identificação da natureza destas substâncias produzidas durante a fermentação também foram realizadas. O maior incremento de compostos fenólicos foi observado após 60 horas de FES utilizando a linhagem Rhizopus LPB-R.05. As substâncias antioxidantes produzidas durante a fermentação no estado sólido foram identificadas: ácido gálico, ácido ferrúlico, rutina, miricetina, ácido trans-cinâmico, quercetina e caempferol. A substância antioxidante produzida em maior concentração foi o ácido trans-cinâmico (124,7 mg/L) em fermentação de soja e (103,3 mg/L) em FES utilizando mistura de soja e arroz por Rhizopus LPB-R.05. Além destas substâncias foram identificadas e quantificadas as isoflavonas genisteína e daidzeína.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-23. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:37Z : No. of bitstreams: 1 000865823.pdf: 5047827 bytes, checksum: 7241f7404337551244539558f049d97c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Hypotrachyna foi descrito por Vainio em 1890 como Parmelia subgênero Parmelia seção Hypotrachyna, que dividiu nos subgrupos Irregularis, Cychlocheila e Sublinearis. Hale e Kurokawa, em 1964, entenderam que o subgrupo Sublinearis representava muito bem a seção e elegeram Parmelia brasiliana como tipo do subgênero Hypotrachyna, que dez anos depois Hale elevou a gênero. Hoje estima-se que o gênero seja um dos maiores dentro da família Parmeliaceae com cerca de 270 espécies. Estudos filogenéticos recentes comprovaram que esse gênero é polifilético e necessita de uma melhor compreensão. Hypotrachyna é um gênero com centro de dispersão nas américas, onde está o maior número de espécies endêmicas. Em toda a história da liquenologia brasileira não se deu especial atenção às espécies saxícolas de fungos liquenizados pela dificuldade de coleta e transporte. O objetivo do trabalho foi estudar a taxonomia do gênero Hypotrachyna no Brasil, com ênfase nas espécies saxícolas do sudeste brasileiro. Para tanto foram realizadas expedições a localidades da Serra da Mantiqueira, Serra do Caraça e arredores para obtenção de material, que foi estudado de acordo com o protocolo desenvolvido pelo GEL, que sofreu várias atualizações e aprimoramentos decorrentes do desenvolvimento desta tese. Como resultado foram criados os gêneros Hypotrachynella, Lyngenella, Martiana e Vainia, todos segregados de Hypotrachyna s.l., e descobertas 27 espécies novas, sendo que dez pertencem a Hypotrachyna s.l. (H. corrugata, H. etii, H. fracta, H. iarae, H. martiana, H. nashii, H. palui, H. protentoides, H. serrana, e H. vexillina); cinco estão em Hypotrachynella, que compreende espécies com ácidos girofórico e lecanórico (H. caapora, H. marcellii, H. mogiana, H. oreadica, e H. puiggarii); duas em Lyngenella, com espécies produzindo ácido livídico (L. damazioi e L. subsipmanii); cinco em Martiana, de espécies com ácidos evérnico e... / FAPESP: 10/52169-0

Orientador: Lara Durães Sette / Coorientador: Eleonora Cano Carmona / Banca: Rubens Monti / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Resumo: Lipases são hidrolases (triacilglicerol acil hidrolases, EC 3.1.1.3) capazes de hidrolisar ésteres carboxílicos de cadeia longa liberando monoacilgliceróis, diacilgliceróis, ácidos graxos e glicerol. Em adição, as lipases são eficientes em reações de síntese como esterificação, glicerólise, aminólise e transesterificação, essa capacidade relacionada ao deslocamento do equilíbrio da reação no sentido de hidrólise ou síntese dependendo da concentração de água presente no meio, característica que as tornam biocatalizadores muito versáteis, com importantes aplicações biotecnológicas, como em indústrias de alimentos, detergentes, farmacêutica, couro, têxtil, cosméticos e papel. O presente trabalho objetivou identificar as seis espécies de fungos lipolíticos, otimizar a produção dessa enzima pela linhagem selecionada, bem como purificar e caracterizar parcialmente a lipase produzida em condição otimizada. A atividade lipase foi determinada após cultivos submersos, objetivando o aumento da produção da enzima. Os fatores avaliados no processo de otimização da produção de lipase foram: meios minerais, tempo de cultivo, fontes de carbono e nitrogênio e suas concentrações, pH e inóculo. A avaliação das melhores condições de cultivo foi realizada pela atividade lipase, determinada pelo íon ρ-nitrofenol (pNP) liberado na hidrólise do substrato sintético ρ-nitrofenil palmitato a 37 °C. O uso de marcadores moleculares permitiu identificar os seis fungos lipolíticos até espécie, exceto para a linhagem Fusarium sp. CBMAI 1227. A metodologia de triagem dos fungos para produção de lipase em meio neutro permitiu a seleção do isolado Trichodemra harzianum CBMAI 1229 como melhor produtor. A melhor condição para produção de lipase (231,58 ± 35,59 U mL-1) foi alcançada após 120 horas de cultivo a 25 °C e 150 rpm de agitação utilizando meio mineral Olson e Johnson (1948), suplementado com óleo... / Abstract: Lipases are hydrolases (triacylglycerol acylhydrolases EC 3.1.1.3) capable of hydrolyzing carboxyl esters of long-chain acylglycerol release mono- or diacyglycerol, free glycerol and fatty acid. In addition, the lipases are effective for synthesis reactions such as esterification, glycerolysis, transesterification and aminolysis, this capability related to the displacement of the equilibrium of the reaction towards synthesis or hydrolysis inherent in the concentration of water present in the medium, the characteristic that makes biocatalysts very versatile, with important biotechnological applications. Such as food, detergents, pharmaceutical, textile, leather, paper and cosmetics industries. This work aimed to identify six species of fungi that produce lipase, optimize the production of this enzyme by lineage selected and purify and characterize partially the lipase produced in optimal condition. Enzyme activity was determined after submerged cultures, aiming to increase enzyme production. The factors measured in this optimization process of lipase production were: mineral components, time of cultivation, source of carbon and nitrogen and their concentration, pH and inoculum. The use of molecular markers allowed us to identify the six lipolytic fungi until species, except for strain Fusarium sp. CBMAI 1227. The methodology of screening of fungi for the production of lipase in neutral medium allowed the selection of the isolated Trichodemra harzianum CBMAI 1229 as best producer. The evaluation of improved cultivation conditions was assayed by lipase activity, determined through hydrolysis releasing íon ρ-nitrofenol (pNP) of ρ-nitrophenyl-palmitate (pNPP) as substrate synthetic at 37 °C. The best condition for lipase production (231,58 ± 35,59 U mL-1) was reached after 120 hours of cultivation, 25 °C and 150 rpm in medium mineral Olson & Johnson (1948), suplemented with sunflower oil 3,0% (v/v), peptone 2,0% (w/v), yeast extract 0,2%... / Mestre

Orientador: Eleonora Cano Carmona / Banca: Silvio Silvério da Silva / Banca: Maria Antonia Pedrine Colabone Celligoi / Banca: Elisa Helena Giglio Ponsano / Banca: Roberto da Silva / Resumo: Xilanases e β-xilosidases são as principais enzimas responsáveis pela degradação da xilana, o segundo principal constituinte da parede celular vegetal. Tanto a produção destas enzimas por micro-organismos, quanto a caracterização bioquímica das mesmas têm sido amplamente estudadas devido às suas inúmeras aplicações biotecnológicas. Neste trabalho, as principais xilanase e β-xilosidase produzidas por uma linhagem de Penicillium janczewskii em meio de cultura líquido foram purificadas por métodos clássicos de purificação de proteínas, sendo, posteriormente, caracterizadas bioquimicamente. A xilanase apresentou atividade ótima em pH 6,0 e a 65 °C e a β-xilosidase em pH 5,0 e a 75 °C. Ambas as enzimas apresentaram características interessantes principalmente com relação à atividade ótima de ambas as enzimas em elevadas temperaturas, a prolongada estabilidade da β-xilosidase a 60 °C, e a estabilidade da xilanase em pH mais alcalinos, considerando-se algumas de suas possíveis aplicações. Visando uma futura aplicação, a produção destas enzimas foi avaliada em cultivos sólidos utilizando-se como substrato o bagaço de malte, resíduo da indústria cervejeira. As melhores condições para produção enzimática foram: utilização da umidade inicial do substrato de 50% fornecida com solução de sais de Vogel, tempo de cultivo de sete dias a 25 °C para produção de xilanases e a 20 °C para produção de b-xilosidases. O material fermentado apresentou aumento no teor protéico, na quantidade de alguns aminoácidos essenciais e ausência de micotoxinas. Ainda com um enfoque ambiental o filtrado de cultura de P. janczewskii, produzido em condições anteriormente selecionadas, foi aplicado no biobranqueamento de uma polpa kraft de eucalipto pré-branqueada com oxigênio, sendo realizados ensaios para seleção da concentração de xilanases e do tempo de reação / Abstract: Xylanases and β-xylosidases are the main enzymes responsible for the degradation of xylan, the second main constituent of plant cell walls. The production of these enzymes by microorganisms, and their biochemical characterization has been extensively studied due to their wide range of biotechnological applications. In this work, the main xylanase and β-xylosidase produced in liquid cultures by a Penicillium janczewskii strain were purified by classical methods of protein purification, and further biochemically characterized. The xylanase showed optimal activity at pH 6.0 and 65 °C and β-xylosidases at pH 5.0 and 75 °C. Considering some possibilities of applications, the enzymes presented interesting characteristics especially in relation to the optimal activity at high temperatures, the prolonged stability of the β-xylosidase at 60 °C, and the stability of the xylanase in alkaline pH. Aiming at a future application, the production of these enzymes was investigated in solid state fermentation using brewer's spent grain, a residue of the brewing industry, as substrate. The optimized conditions were: 50% initial substrate moisture supplied by Vogel's salt solution, culturing for 7 days at 25 °C for xylanase production and at 20 °C for b-xylosidase production. The fermented substrate showed increase in protein content, in the amount of some essential amino acids, and absence of mycotoxins. Maintaining the environmental focus, the P. janczewskii crude filtrate, produced under previously selected conditions, was applied in the biobleaching of eucalyptus kraft pulp pre-bleached with oxygen. Trials were conducted for the selection of xylanase concentration and reaction time / Doutor

Orientador: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Carlos Renato Corso / Banca: Sérgio Florentino Pascholati / Resumo: Agaricus blazei é uma das espécies de fungo do grupo basidiomiceto nativo do Brasil, popularmente conhecido como cogumelo-do-sol®. O Brasil é considerado um grande fornecedor desse fungo para o mercado internacional cujos padrões de qualidade são bastante restritivos em relação à concentração de metais pesados, principalmente cádmio. Esse fungo possui propriedades medicinais e seus cogumelos são consumidos por grande número de pessoas que procuram melhorar a qualidade de vida. O trabalho objetivou estudar o acúmulo de cádmio, cromo e chumbo por A. blazei. Foram realizados 3 experimentos, utilizando 2 tipos de composto e 3 tipos de solo para cobertura. O fungo foi cultivado em sacos de plástico preto contendo no fundo o composto inoculado, tendo como cobertura diferentes tipos de solo. O solo e o composto foram analisados para quantificação de Cd, Cr, Pb por espectrometria de absorção atômica, propriedades físicas e químicas (Instituto Campineiro de Análise de Solo e Adubo ICASA). Além das quantias de metais encontradas no solo e no composto foram adicionados 66 mg de cloreto de cádmio, 132 mg de sulfato de cromo e 12 mg de nitrato de chumbo ao solo de cobertura. Após a frutificação, os basidiocarpos foram analisados para quantificar proteínas, aminoácidos, metais pesados e identificação de modificações protéicas por espectroscopia de infravermelho (FTIR). O resultado das análises demonstrou que havia acúmulo de metais pesados nos basidiocarpos, ocorrendo maior percentual nos contaminados com cádmio.Além disso, detectou-se nos basidiocarpos contaminados menor teor de proteínas. Através de FTIR não foi possível detectar alterações nas proteínas nos basidiocarpos analisados. / Abstract: Agaricus blazei is a basidiomycete fungus native from Brazil and popularly known as Cogumelo-do-sol® the sun-mushroom. Brazil is a supplier of this edible mushroom to international markets to which quality standards are very restrictive regarding the concentration of heavy metals, especially cadmium. This fungus exhibits medicinal properties and its fruiting bodies are consumed by a large number of people that seek to improve life quality. The objective of this work was to study the accumulation of cadmium, chromium and lead by A. blazei. Three experiments were made using two composts and three types of covering soil. The fungus was cultivated in black plastic bags contend in the deep inoculated compost and as covering different types of soils. The soil and the compost were analyzed to determine the amount of heavy metals: Cd, Cr and Pb by atomic absorption spectrophotometer, and physical and chemical properties (ICASA). Besides the metal found in the soil and compost, 66 mg of cadmium chloride, 132 mg of chromium sulfate and 12 mg of lead nitrate were also added to the covering soil. After fructification, the fruiting bodies were analyzed to measure the amount of raw proteins, amino acids, heavy metals and proteinic modifications for Spectroscopy of Infra Red (FTIR). The analyses of results showed accumulation of heavy metals in fruiting bodies, occurring a higher percentage in fruiting bodies contaminated of cadmium. Furthermore detected in contaminated fruiting bodies a less drift of raw proteins. Through FTIR was not possible to detect alteration in proteins of fruiting bodies analyzed. / Mestre