Thesis (Ph.D.)--Murdoch University, 2004. / Thesis submitted to the Division of Health Sciences. Includes bibliographical references (leaves 145-167).

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (Ph. D.)--University of Texas at El Paso, 2009. / Title from title screen. Vita. CD-ROM. Includes bibliographical references. Also available online.

Doutor -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 2002.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-23Bitstream added on 2014-06-13T20:00:43Z : No. of bitstreams: 1 tashima_nt_dr_arafcf.pdf: 1639832 bytes, checksum: 4ebbfa8c2c4802ba76fbdfe822f9a1f3 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O estudo epidemiológico da giardíase empregando técnicas moleculares, como o RAPD (Randomly Amplified Polimorphic DNA), fornece subsídio para identificação dos fatores de transmissão da G. lamblia. Este trabalho teve como objetivo estudar a epidemiologia da G. lamblia em uma creche infantil de Presidente Bernardes, SP, Brasil, no ano de 2006, por meio de um inquérito epidemiológico e tipagem molecular das cepas isoladas empregando a técnica de RAPD. A análise dos perfis genéticos obtidos foi realizada com auxílio de um dendrograma de similaridade obtido pelo programa Gel Compar II versão 2.0 para Windows (Applied MATHS). Foram realizados exames parasitológicos de fezes de 101 crianças freqüentadoras da creche infantil. A partir desses exames, 15 amostras que apresentavam cistos de G. lamblia foram purificadas para posterior extração do DNA. Os pais e irmãos das 15 crianças parasitadas, assim como os cães de estimação e também dos funcionários da creche tiveram suas fezes coletadas para posterior exame parasitológico. Das mesmas extraíram-se DNA das amostras que apresentavam cistos de G. lamblia. Entre as 31 amostras positivas para G. lamblia obtida entre as crianças e seus respectivos pais e irmãos, concluiu-se que a transmissão do parasita ocorreu entre as crianças provavelmente no convívio da creche, mas não no convívio familiar. / Epidemiological studies on giardiasis by using molecular techniques such as RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) give information on factors related to the transmission of G. lamblia. The aim of this work was to assess the G. lamblia epidemiology in a day care center in Presidente Bernardes, SP, Brazil, in 2006, by means of an epidemiological inquiry and molecular typing of the isolated strains by using the RAPD technique. The genetic profiles were analyzed by means of a dendrogram of similarity obtained with the software Gel Compar II v. 2.0 for Windows (Applied MATHS). Parasitological examinations were made on feces samples taken from 101 children attended in the day care center. After examinations, 15 samples that presented G. lamblia cysts were purified for further DNA extraction. The respective relatives and brothers of the 15 children, in addition to their pets and the day care center s workers had their feces collected for further parasitological examination. Samples in which G. lamblia cysts were found were also submitted to DNA extraction. Among the 31 samples positive for G. lamblia obtained from the children and their respective parents and brothers, it was concluded that the transmission of the parasite occurred between children probably during the cohabitation in the day care center, but not inside the family.

Made available in DSpace on 2015-11-18T13:18:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 andres_quesne_ioc_mest_2014.pdf: 2284982 bytes, checksum: 60f23c8536661b9357f727cee49ed7ee (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Giardia intestinalis (G. intestinalis) é o parasita gastrointestinal mais comum que coloniza o trato intestinal humano onde permanece extracelular e aderido às células intestinais. O parasita tem uma distribuição mundial, causando um número estimado de 2.8x108 casos por ano e recentemente a doença foi incluída como parte da Iniciativa das Doenças Negligenciadas da Organização Mundial de Saúde. As manifestações clínicas da giardíase são variáveis, e vão desde a ausência de sintomas até diarreias agudas ou crônicas. Adicionalmente, estudos recentes indicam que distúrbios gastrintestinais funcionais, tais como a síndrome do intestino irritável, e o déficit de crescimento em crianças podem ser associados com a infecção por G. intestinalis. Apesar da alta prevalência e das consequências desta doença, os mecanismos fisiopatológicos subjacentes na giardíase ainda permanecem incompreendidos. Os trofozoítos causam a doença sem penetrar no epitélio intestinal, nem entrar na corrente sanguínea e sem secretar nenhuma toxina conhecida. Nos últimos anos, tem sido descrito que as vesículas extracelulares podem participar na interação parasita-célula hospedeira. As vesículas extracelulares podem ser: microvesículas (MVs) e derivadas da membrana plasmática; exosomos, pequenas vesículas originadas a partir de membranas de endossomos; e corpos apoptóticos contendo material do núcleo celular. As MVs têm sido mostradas como importantes fatores na interação parasita-célula hospedeira No presente trabalho, foi utilizada uma combinação de metodologias, incluindo citometria de fluxo, microscopia de fluorescência, proliferação celular, análises de proteoma e ensaios de aderência celular para investigar o papel das microvesículas liberadas por trofozoítos de G. intestinalis nas propriedades patogênicas deste parasita. Demonstramos que G. intestinalis produz e secreta microvesículas com exposição superficial de fosfatidilserina. Além disso, o processo de liberação de MVs é dependente do tempo e da concentração de cálcio, envolve microdomínios de membrana e as microvesículas contêm RNA de baixo peso molecular. Observamos também que os microdomínios de membrana estão envolvidos na adesão do parasita à células Caco-2. Nossa análise proteômica preliminar sugere presença de componentes do citoesqueleto, alfa giardinas, enzimas metabólicas e proteínas variáveis de xi superfície (VSP) nas MVs isoladas de G. intestinalis. Foi demonstrado também que as MVs de G. intestinalis interagem com as células do hospedeiro aumentando a proliferação destas e incrementado também o número de trofozóitos aderidas à estas células. O presente estudo é o primeiro a sugerir um papel potencial para as microvesículas de G. intestinalis na colonização do hospedeiro. Uma melhor compreensão do papel das MVs liberadas pelo parasita na interação com a célula hospedeira poderá fornecer novas perspectivas sobre patogênese e possivelmente novas ferramentas para o diagnóstico e a terapia da doença / Giardia intestinalis ( G. intestinalis ) is the most common gastrointestinal parasite that colonizes the human intestinal tract where it remains extracellular and adheres to intestinal cells . The parasite has a global distribution causing an estimated 2.8x10 8 cases per year and the illness was recently included in the World Health Organization Neglected Disease Initiative . Clinical manifestations of giardiasis are quite variable, and range from the absence of symptoms to acute or chronic diarrhea. Aditionally, r ecent studies indicate that functional gastrointestinal disorders , such as irritable bowel syndrome , and failure of children to thrive can be associated with G. intestinalis infection . Even though the high prevalence and consequences of this disease , pathophysiological mechanisms underlying symptomatic giardiasis remain incompletely understood . Trophozoites cause disease without penetrating the intestinal epithelium , entering the bloodstream or secreting toxin s . In recent years it has been described that extracellular ves icles could participate in parasite - host cell interaction. The extracellular vesicles ma y be: microvesicles (MVs) and derived f rom the plasma membrane; exosome s, small vesicles originated from endosomal limiting membrane ; and apoptotic bodies containing nuclear material. MVs have been shown to be important factors in the parasite - host cell in teraction. Here, we used a combination of methodologies including flow cytometry, fl u orescence microscopy, cell proliferation, proteomics analysis and cell adherence assays to investigate the role of released microvesicles from G. intestinalis trophozoites on the pathogenic properties of this parasite . We have found that G. intestinalis produces and secretes microvesicles with superficial exposition of phosphatidilserine. Additionally , the shedding process was calcium and time - dependent , involve s membrane microdomains and the microvesicles contain low - molecular weight RNA . We also observed that membrane microdomains are involved in parasite attachment to Caco - 2 cells. Our preliminary proteomic analysi s suggested the presence of cytoskeleton components, alpha giardins, metabolic enzymes and variant - specific surface protein ( VSP ) in the isolated MVs from G. intestinalis. We demonstrate that G. intestinalis microvesicles interact with host cells xiii increasing their prolifer ation and augment ing the number of trophozoites adhered t o these cells . The present study is the first to suggest a potential role for G. intestinalis microvesicles in host cell colonization. A better understanding of the role of the released microvesicles by the parasite on the host - cell interaction will provide insights into pathogenesis and possibly new tools for diagnosis and therapy

O estudo teve por objetivo determinar a eficácia do teste de ELISA para Giardia duodenalis e identificar os genótipos do protozoário em amostras fecais de crianças e cães na cidade de Lages, Santa Catarina. Foram avaliadas 1085 amostras fecais distribuídas em quatro grupos: crianças (Grupo I) matriculadas no ensino fundamental das Escolas Municipais de Ensino Básico (EMEB); amostras fecais de crianças obtidas em um laboratório particular da cidade (Grupo II); cães em ambientes domiciliados (Grupo III) e cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (Grupo IV). Todas as amostras foram processadas pelos métodos coproparasitológicos de flutuação e sedimentação para determinar a presença de cistos de G. duodenalis. As amostras processadas pelos exames coproparasitológicos foram posteriormente analisadas pelo teste de ELISA e as amostras positivas genotipadas. A prevalência de amostras positivas para o parasito foi de 7,19% (78/1085). Das 430 amostras fecais de crianças e cães analisadas pelo teste de ELISA; 19,07% (82) foram positivas para G. duodenalis. A sensibilidade do teste de ELISA foi de 66%, 100% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN) de 100%, valor de Kappa = 0,93 e acurácia de 93%. Em relação às populações, o teste de ELISA para o diagnóstico de Giardia em amostras fecais de crianças apresentou sensibilidade de 60% e especificidade de 100%; para cães a sensibilidade foi de 73% e especificidade também de 100%. Conclui-se que o teste de ELISA apresentou alta especificidade, porém não apresentou boa sensibilidade em relação ao exame parasitológico, que aliado ao alto custo faz com que os exames de rotina laboratoriais na área humana e animais baseados na microscopia ainda são a opção mais eficaz para o diagnóstico de G. duodenalis. Em relação à identificação genotípica de isolados de G. duodenalis, através da PCR-RFLP usando o gene gdh, o genótipo (assemblage) A foi identificado nos Grupos I e II em 59,41% (22/39) das amostras com pequena prevalência para o subgenótipo AI (54,55%); o genótipo B foi diagnosticado em 43,59% (17/39) com maior prevalência para o subgenótipo BIV (58,82%). Nos grupos caninos III e IV o genótipo com características zoonóticas (A e B) foi diagnosticado em 64,10% (25/39), sendo diagnosticado AI com 53,85% e 10,26% de BIV. Em relação aos genótipos específicos de carnívoros (C e D) a prevalência foi de 35,90% (14/39) com predominância do genótipo C (71,43%) e 28,57% para o genótipo D. O estudo identificou uma variedade de genótipos em crianças e cães, com elevada prevalência de genótipos de características zoonóticas nos cães. / The study aimed to determine the efficacy of the ELISA test for G. duodenalis and identify the genotypes of the parasite in stool samples from children and dogs in the city of Lages, Santa Catarina. We evaluated 1085 faecal samples divided into four groups: Children (Group I) enrolled in basic public education; faecal samples obtained from children in a private laboratory in the city (Group II ) domiciled dogs ( Group III) and dogs from the Center for Zoonosis Control (Group IV). All samples were processed by the methods of faecal flotation and sedimentation to determine the presence of cysts of G. duodenalis. The samples processed by fecal examinations were subsequently analyzed by ELISA and positive samples genotyped. The prevalence of samples positive for the parasite was 7.19% (78/1085). Of the 430 stool samples from children and dogs analyzed by ELISA; 19.07% (82) were positive for G. duodenalis. The test sensitivity was 66%, specificity 100%, positive predictive value (PPV) and negative (NPV) of 100%, Kappa value = 0.93 and 93% accuracy. In relation to the population, the ELISA test showed sensitivity of 60% and specificity of 100%, for children and sensitivity was 73% and specificity of 100% for dogs. We conclude that the ELISA test is highly specific but less sensitivity to parasitological examination, so the routine tests in laboratory animals and human area-based microscopy are still the most efficient option for the diagnosis of G. duodenalis. Regarding the identification of G. duodenalis genotypes, by PCR-RFLP using the gdh gene, genotype (assemblage) A was identified in Groups I and II in 59.41% (22/39) samples with low prevalence to subgenotype Al (54.55%) , genotype B was diagnosed in 43.59% (17/39) with higher prevalence in subgenotype BIV (58.82%). Canine groups III and IV genotype with zoonotic characteristics (A and B) was diagnosed in 64.10% (25/39) was diagnosed with AI 53.85% and 10.26% of BIV. In specific genotypes of carnivorous (C and D) the prevalence was 35.90% (14/39) with predominant genotype C (71.43%) and 28.57% for genotype D. The study identified a variety of genotypes in children and dogs, with a high prevalence of genotypes characteristics zoonotic in dogs.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T09:27:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A diarréia é responsável por mais de 3 milhões de mortes ao ano no mundo e a maioria dos casos ocorre em crianças de países em desenvolvimento. A diarréia em crianças, além dos problemas relacionados à desidratação, ainda pode ocasionar má absorção dos nutrientes causando um quadro de desnutrição afetando, até mesmo, as funções cognitivas. Muitos patógenos causadores de diarréia podem ser veiculados pela água e por alimentos contaminados. Eles podem ser vírus, bactérias e parasitas. Os protozoários Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia são importantes causadores de diarréia, principalmente em crianças. Estima-se que no Brasil a prevalência destes patógenos seja de 8% e 28,5%, respectivamente. Devido a cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium serem estruturas muito pequenas, sua detecção torna-se difícil, já que as fezes naturalmente possuem muitos detritos e microrganismos que podem mascarar ou ser confundidos com estes protozoários. Para facilitar e tornar mais eficiente este diagnóstico, este trabalho teve por objetivo padronizar a Técnica de Imunoseparação Magnética (IMS) acoplada à Imunofluorescência (IFA) para o diagnóstico de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em fezes humanas, além de avaliar sua eficiência quando comparada às Técnicas Clássicas descritas por Faust et al. (1939) e por Lutz (1919), ou Hoffman Pons & Janner (1934), quando utilizadas para o diagnóstico da giardíase; e por fim avaliar as prevalências de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em uma creche e em ambulatórios de dois Hospitais da Grande Florianópolis-SC. Os resultados da Padronização da Técnica, utilizando-se 4 tratamentos com 3 repetições para cada, demonstraram que a IMS-IFA foi capaz de recuperar oocistos de Cryptosporidium spp. (média de 4,7%) e cistos de Giardia lamblia (média de 1,3%) em fezes humanas. Quando comparadas, as recuperações das duas espécies, não apresentaram diferenças significativas (F > 0,05). Ao se comparar o desempenho das Técnicas de IMS-IFA com a de Faust et al. e a de Lutz no diagnóstico de G. lamblia, utilizando-se 127 amostras de fezes de crianças, percebeu-se que a primeira deteve vantagem quando comparada às outras duas técnicas em conjunto, mas quando se comparou a recuperação de cistos pela primeira em relação à soma dos resultados da segunda (confirmados ou não pela Técnica de Lutz) observou-se que as diferenças não foram significativas (?2< 0,05). Avaliando-se as prevalências de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia encontradas em 77 crianças de uma creche e de 50 crianças de ambulatório, ambos na Grande Florianópolis, observou-se que para Cryptosporidium spp. estas foram baixas e próximas nas duas populações (1,3% e 2% respectivamente). Para Giardia lamblia, elas se comportaram de forma bastante distinta (45,5% e 2% respectivamente) e estatisticamente significativa. Também se detectou diferenças quando foram comparadas crianças menores com as maiores de 5 anos de idade dentro da mesma população (creche ou ambulatório) e na prevalência de giardíase comparando-se as faixas etárias analisadas das duas populações. A IMS-IFA mostrou-se capaz de detectar cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium em fezes humanas e, devido a sua especificidade, não se fez necessária a confirmação através de outras metodologias de diagnóstico para Cryptosporidium.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:02:01Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_tb_dr_botfm.pdf: 1064227 bytes, checksum: 6970ff58c4a9d38097a4690dd21b1c4a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Entre os alvos mais promissores para o desenvolvimento de novos agentes antiparasitários, destacam-se as proteases que nos protozoários participam de processos metabólicos e fisiológicos, atuando como importantes fatores de virulência. Como a atividade dessas moléculas pode ser controlada por inibidores específicos, essas substâncias têm sido avaliadas quanto ao potencial terapêutico em diferentes infecções parasitárias, inclusive por Giardia. O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito in vitro dos inibidores de cisteína (IAA e E-64) e serina-proteases (antipaina, leupeptina e TLCK) sobre o crescimento, aderência, viabilidade e ultraestrutura de trofozoítos de cepa de Giardia isolada e axenizada em Botucatu. Para isso, trofozoítos foram incubados em meio contendo os inibidores a diferentes concentrações durante 24, 48 e 72 horas. Nos ensaios de crescimento e aderência, o número de trofozoítos foi estimado a partir de contagens em hemocitômetro, enquanto que a viabilidade celular e as alterações ultraestruturais foram avaliadas, respectivamente, pelo método de redução do MTT e por microscopia eletrônica de transmissão. De acordo com as observações feitas no presente estudo, todos os inibidores de proteases apresentaram efeito sobre o crescimento, aderência e viabilidade dos trofozoítos. Entretanto, melhor desempenho quanto à capacidade de reduzir os parâmetros avaliados foi demonstrado nos ensaios com os inibidores de cisteína-proteases, especialmente a IAA. As maiores porcentagens de inibição do crescimento e aderência e as menores taxas de viabilidade foram observadas após o tratamento com IAA. Da mesma forma, as alterações ultraestruturais mais marcantes ficaram a cargo deste inibidor, principalmente após exposição a 100 μM, quando foi possível... / The quest for new antiparasitic alternatives has led researchers to base their studies on insights into biology, host-parasite interactions and pathogenesis. In light of this, the proteolytic enzymes or proteases have excited the researcher’s interest, once they have been identified as important virulence factors as well as potential chemotherapeutic targets in parasites. Considering that proteases are naturally regulated by specific inhibitors, these substances have been evaluated for their therapeutic potential in parasitic infections including Giardia. In this way, we proposed to evaluate the in vitro effect of inhibitors of cysteine (IAA and E-64) and serine proteases (antipain, leupeptin and TLCK) on growth, adherence, viability and ultrastructure of Giardia trophozoites of a strain isolated and axenized in Botucatu. For this, trophozoites were incubated in medium containing the inhibitors at various concentrations for 24, 48 and 72 hours. In growth and adherence assays, the number of trophozoites was estimated microscopically in a haemocytometer, whereas cell viability and ultrastructural changes were evaluated, respectively, by the method of MTT and transmission electron microscopy. In this study, all protease inhibitors showed effect on growth, adherence and viability of trophozoites. However, better performance in their ability to reduce the parameters assessed was demonstrated in experiments with cysteine proteases inhibitors, especially IAA. The highest rates of growth and adhesion inhibition and the lowest rates of viability were detected in the IAA-treated cultures. Likewise, ultrastructural changes were most marked with this inhibitor, especially after exposure to 100 μM, when it was possible to demonstrate strong nuclear and cytoplasmic disorganization and drastic changes in... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-12Bitstream added on 2014-06-13T19:14:36Z : No. of bitstreams: 1 coelho_wmd_me_araca.pdf: 275699 bytes, checksum: bb07e28839059ea06a2205b9ed0a0f18 (MD5) / Formas evolutivas parasitárias são eliminadas nas fezes dos animais, propiciando a contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência de parasitos causadores de zoonoses em gatos entregues ao Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) do Município de Andradina, SP, no período de março a novembro de 2007. Amostras de sangue, medula óssea, linfonodos e fezes foram submetidas a análises laboratoriais. Para o diagnóstico coproparasitológico associou-se as técnicas de Willis e Faust, observando-se uma ocorrência de 96,1% dos animais para Ancylostoma spp., 43,1% para Toxocara spp., 43,1% para Cystoisospora spp., 21,6% para Dipylidium caninum e 5,9% para Giardia spp. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados em 3,9% das amostras pela técnica de verde malaquita. Por meio do ELISA direto, constatou-se uma ocorrência de 5,8% para Cryptosporidium spp. e 13,7% para Giardia spp. Dos animais, 3,9% foram reagentes para anticorpos anti-Leishmania spp. pela técnica de ELISA indireto. Foi observada presença de forma amastigota de Leishmania spp. em “imprint”de linfonodo de um único animal. Não foi verificada associação significativa entre a ocorrência de endoparasitos e a raça, sexo e idade dos animais analisados. Os resultados obtidos confirmam que os felinos de Andradina, SP, são importantes hospedeiros de parasitos, alguns destes com elevado potencial zoonótico. / Forms evolving parasitic are eliminated in the feces of animals, promoting the environmental contamination. The purpose of this study was to verify the occurrence of the parasites that cause zoonoses in cats delivered to the Center for Zoonoses Control (CCZ) of the Andradina City, SP, in the period from March to November 2007. Samples of blood, bone marrow, lymph nodes and feces were subjected to laboratory tests. For the diagnosis coproparasitológics was associated with the techniques of Willis and Faust, observing the occurence of 96.1% of the animals to Ancylostoma spp., 43.1% for Toxocara spp., 43.1% for Cystoisospora spp. , 21.6% to Dipylidium caninum and 5.9% for Giardia spp. Oocysts of Cryptosporidium spp. were detected in 3.9% of the samples by the technique of malachite green. By the technique of direct ELISA, it is 5.8% of positive for Cryptosporidium spp. and 13.7% for Giardia spp. Of the animals, were reagents in 3.9% for antibodies anti- Leishmania spp. the technique of indirect ELISA. It was observed presence of amastigote form of Leishmania spp. in lymph nodes. There was no significant association between the occurrence of endoparasite and breed, gender and age of animals tested. The results confirm that the feline from Andradina City, SP, are important hosts of parasites, some of those with high potential zoonotic.