Introdução - Giardia é um protozoário que parasita o intestino de quase todas as classes de vertebrados, podendo causar giardíase. Dentre os sete agrupamentos da espécie G. duodenalis, nomeados de A a G, apenas A e B foram encontrados no homem. Por se tratar de um patógeno de veiculação hídrica, a pesquisa de cistos desse microorganismo em água e esgoto é de interesse para a saúde pública. Uma vez que os métodos convencionais utilizados para a detecção desse protozoário em amostras ambientais não permitem diferenciar os isolados de Giardia potencialmente patogênicos para o homem dos demais, o emprego de técnicas que possibilitam a caracterização molecular do parasita em questão se torna necessário, principalmente no Brasil, onde as informações sobre os genótipos de Giardia do ambiente são escassas. Objetivos - Detectar a presença e identificar os genótipos de Giardia sp. em amostras de água e esgoto provenientes do estado de São Paulo, discutindo a importância dos achados para a saúde pública, bem como elaborar uma estratégia que possibilite a realização de tal proposta. Método - Amostras de esgoto bruto (5) e tratado (6), de águas superficiais (11), de poço (3) e de nascente (1) foram coletadas e concentradas pela técnica de membrana filtrante modificada ou por centrifugação. O DNA genômico foi extraído pelo método de fenol/clorofórmio/álcool-isoamílico. A amplificação do fragmento de 890pb do gene gdh, que codifica a produção de glutamato desidrogenase, foi realizada por nested PCR, seguida por clonagem e seqüenciamento de nucleotídeos. Resultados - Onze dentre as vinte e seis amostras analisadas (42,3por cento) foram confirmadas como sendo positivas para a presença de Giardia duodenalis. Os agrupamentos A, genótipo AII, e B foram encontrados. Conclusão - Esses achados indicam que, no estado de São Paulo, isolados de Giardia associados a giardíase humana estão presentes em esgoto tratado e em água superficial e de poço, de modo que o contato com esse tipo de matriz pode representar risco para a saúde pública. Além disso, a estratégia proposta possibilita a caracterização molecular de isolados de Giardia de amostras de água e esgoto. / Introduction - Giardia is a protozoan that parasitizes almost all classes of vertebrates, causing giardiasis. Among the seven assemblages of G. duodenalis, named A to G, only A and B have been found in humans by this moment. As considered a waterborne pathogen, the detection of cysts in water and sewage samples is of interest for public health. Once conventional methods are not able to distinguish Assemblages A and B of G. duodenalis from others, the application of techniques that allow a molecular characterization of Giardia isolates is an important issue, especially in Brazil, where there is scarce information about the genotypes of this parasite in the environment. Objective - To detect and identify Giardia genotypes in water and sewage samples from São Paulo state, discussing the importance of findings for public health, as well as develop a strategy that makes it possible. Method - Raw (5) and treated (6) sewage, surface (11), well (3) and spring (1) water samples were collected and concentrated by modified membrane filtration technique or centrifugation. Genomic DNA was extracted using phenol/chloroform/isoamilic alcohol method. A 890bp fragment of gdh gene, that codes the glutamate dehydrogenase production, was amplified by nested PCR. Cloning and sequencing were subsequently done. Results - 11 out of 26 (42,3 per cent) samples were confirmed to be positive for the presence of G. duodenalis. Assemblages A, genotype AII, and B were found. Conclusions - These findings indicate that, in São Paulo state, Giardia isolates associated to human giardiasis are present in treated sewage and in surface and well water. Thereby, the contact with these matrices can offer risk for public health. Besides, the approach described here allows the molecular characterization of Giardia isolates from water and sewage samples.

O protozoário flagelado Giardia duodenalis é um parasito intestinal que pode infectar uma ampla variedade de mamíferos, incluindo os humanos e os animais domésticos e selvagens. Devido à carência de informações a respeito da caracterização molecular de amostras de Giardia spp. no Brasil, o presente estudo teve como objetivo analisar 113 amostras de fezes positivas para Giardia spp. de origem humana e animal. Um segmento do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase (gdh) dos isolados provenientes de 37 humanos, 31 cães, 20 gatos, 12 bugios, cinco bezerros, três chinchilas, duas avestruzes, dois cachorros-do-mato e uma onça-pintada foi amplificado e seqüenciado. A análise da seqüência de nucleotídeos do gene gdh mostrou que estes isolados foram divididos em seis linhagens genéticas principais (Assemblages A, B, C, D, E, F). O genótipo AII foi identificado apenas nas amostras de humanos, enquanto o genótipo AI foi detectado nos isolados de origem animal (gato, bezerro, onça-pintada). Os isolados de Giardia spp. provenientes dos humanos, bugios, chinchilas e avestruzes foram caracterizados como pertencente ao genótipo BIV. Entretanto, os demais Assemblages foram identificados apenas em um grupo específico de hospedeiros. Assemblage C e D foram encontrados nas amostras de cães e cachorros-do-mato, Assemblage F nas amostras de gatos e Assemblage E nas amostras de bezerros. A caracterização molecular das amostras de Giardia spp. gera uma importante contribuição para o conhecimento da especificidade de hospedeiro dos diferentes genótipos. / The flagellated protozoan Giardia duodenalis is an intestinal parasite that can infect a broad variety of mammalian hosts, including humans and domestic and wild animals. Due the lack of information about the molecular characterization of Giardia spp. in Brazil, this study aimed to analyse 113 stool samples from human and animals, all positive to Giardia spp. A segment of the glutamate dehydrogenase gene (gdh) of isolates from 37 humans, 31 dogs, 20 cats, five calves, 12 wild monkeys, three chinchilas, two ostrichs, two crab-eating-foxes and one jaguar was amplified and sequenced. Nucleotide sequences analysis of gdh gene showed that these isolates could be divided into six main genetic lineage (Assemblages A, B, C, D, E, F). The genotype AII was identified only in human isolates, whereas genotype AI was detected in a variety of animals (cat, calf, jaguar). In adition, Giardia spp. isolates recovered from human, wild monkeys, chinchila and ostrichs were characterized as genotype BIV. However the other Assemblages identified were confined to restrict host species. Assemblages C and D were found in isolates from dogs and crab-eating-foxes, Assemblage F from cats and Assemblage E from calves. The molecular characterisation of Giardia spp. isolates has made a major contribution to our understanding of the host specificity of different genotypes.

Giardia duodenalis é um protozoário de distribuição mundial responsável por causar infecções entéricas em uma grande variedade de mamíferos, incluindo os humanos. Mesmo apresentando pouca variação em sua morfologia, os isolados podem ser diferenciados, de acordo com análises de proteína e polimorfismo de DNA, em pelo menos oito agrupamentos genéticos distintos, denominados assemblages (A-H). Apenas os assemblages A e B têm sido reportados em humanos e outros mamíferos. Isolados de assemblage A podem, ainda, ser divididos em quatro sub-assemblages (AI, AII, AIII e AIV). Sequencias heterogêneas têm sido frequentemente identificadas em estudos de caracterização molecular envolvendo amostras contendo múltiplos cistos do parasita. Buscando estudar a ocorrência dos eventos de heterozigose de sequencia alélica (ASH) e recombinação gênica, o presente trabalho teve como objetivo isolar cistos de G. duodenalis empregando-se a técnica de micromanipulação e caracterizá-los molecularmente através da análise multilócus envolvendo os genes gdh, tpi, orfC4 e bg. Dez cistos foram individualizados e utilizados na pesquisa. Todos foram igualmente identificados por todos os genes, nove cistos caracterizados como assemblage AII e um cisto caracterizado como assemblage B. Os cromatogramas oriundos do cisto identificado como assemblages B apresentaram diversos sítios heterogêneos nos genes gdh, bg e orfC4, sendo que, nesses dois últimos, observaram-se sobreposições dos alelos AII e B no produto sequenciado (heterozigose inter assemblage). Os produtos de PCR foram clonados e as sequencias obtidas revelaram a ocorrência dos dois alelos neste único cisto. Os sítios polimórficos encontrados nas sequencias do gene gdh indicaram heterozigose intra assemblage B. Embora ASH já tenha sido relatada em cistos individualizados de G. duodenalis, estes são os primeiros resultados indicando a presença dos dois alelos, simultaneamente, em um único indivíduo. Esses resultados demonstram fortes evidências que ocorre troca genética entre indivíduos geneticamente distintos de G. duodenalis / Giardia duodenalis is a worldwide distribution enteric protozoan responsible for causing infections in a wide variety of mammals, including humans. Even showing little change in their morphology, isolates can be distinguished, according to the analysis of proteins and DNA polymorphisms in at least eight distinct genetic groups, known assemblages (A - H). Only assemblages A and B have been reported in humans and other mammals. Isolates of assemblage A also can be divided into four sub-assemblages (AI, AII, AIII and AIV). Heterogeneous sequences have been frequently identified in studies involving molecular characterization of samples containing multiple cysts of the parasite. Seeking to study the occurrence of allelic sequence heterozygosity (ASH) and genetic recombination events, the present study aimed to isolate G. duodenalis cysts employing the micromanipulation technique and characterize them molecularly through multilocus analysis involving gdh, tpi, orfC4 and bg genes. Ten cysts were individualized and used in the research. All cysts were equally identified for all genes; nine cysts were characterized as assemblage AII and one characterized as assemblage B. The chromatograms derived from the cyst identified as assemblage B presented many heterogeneous sites in gdh, bg and orfC4 genes, and in these last two, there were overlaps of alleles AII and B in the sequenced product (heterozygous inter assemblage). PCR products were cloned and the sequences obtained revealed the occurrence of two alleles at this single cyst. The polymorphic sites found in the sequences of the gdh gene indicated intra heterozygosity assemblage B. Although ASH has already been reported in G. duodenalis individualized cysts, these are the first results indicating the presence of two alleles simultaneously in a single individual. These results demonstrate strong evidence that genetic exchange occurs between individuals genetically distinct of G. duodenalis

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eleniralvesmachadogodoy_tese.pdf: 3122950 bytes, checksum: 6689a740cf3688e175794a873791beb4 (MD5) Previous issue date: 2012-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Giardia duodenalis is the protozoan frequently found in the intestinal infection causing gastroenteritis worldwide. The G. duodenalis is complex specie with at least seven different assemblages. The A and B assemblages have been associated with infections in human as well as in other mammals, while the other assemblages have demonstrated to prefer different animal species. Genotypes C and D was include isolated of dogs; E is related to production animals, such as, goats, pigs, sheeps and bovines and genotypes F and G are exclusive of domestic felines and rats, respectively. Molecular studies had also disclosed that the genotype presents two sub-groups; A-I and A-II and B; BIII and BIV. Objective: The present study objectified to study domestic, the epidemiology of the G. intestinalis genotypes in human beings, canines, domestic felines, ovines, bovines and caprines, specifically in relation to the standards of transmission in the Northwestern region of the São Paulo State, Brazil, and to evaluate the hypothesis of zoonotic infection. Methods: During the period of July 2009 to October 2010 they had been studied fecal samples of 61 animals and 154 human beings proceeding from the city of Araçatuba, State of São Paulo. The feaces samples of the animals had been gotten in the Control center of Zoonoses of the city and in the Veterinarian Hospital of Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho . The human fecals specimens had been collected in day-care centers in the periphery of the city and laboratories of Clinical Analysis of the private net of the city. The parasitologic diagnosis was made by optic microscopy, by the techniques of Faust and Hoffmann, Pons & Janer. The genotypes of G. intestinalis had been characterized by PCR-RFLP and confirmed by sequencing analysis of the ß-giardin gene. Results: The human beings samples had shown a positivity of 25.3% (39/154), of these, the percentage in children was of 26.8% (36/134), and in adults got 15% of positive samples (3/20). The frequency of G. intestinalis between the studied animals was of 23% (14/61). A total of 32 isolated of G. intestinalis obtained from human beings feces and 6 of the dogs and cats had been characteristic only of the genotype A (AI and AII/AIII). Conclusions: Regarding the Giardíase frequency, our results are similar to the majority of described percentages in children and adults from São Paulo State and other States of Brazil. The prevalence observed in the animal population is in accordance with the described worldwide. The present study was made possible the detention of the considered genotypes zoonotics of G. intestinalis, circulating between the domestic and human animals of the city of Araçatuba, inferring the possibility of zoonotic transmission of the parasite in the northwest region of the State of São Paulo. The absence of these genotypes in production animals offers the perspective that those are not involved in the chain of transmission to the man in the same locality. / Introdução: Giardia intestinalis tem sido associada a episódios diarréicos em inquéritos epidemiológicos. Pesquisas moleculares evidenciaram que G. intestinalis apresenta sete genótipos: A, B, C, D, E, F e G. Somente os genótipos A e B foram detectados em humanos, mas também em outros hospedeiros mamíferos, sendo considerados, portanto zoonóticos. Genótipos C e D incluem isolados de cães; E é relacionado a animais de produção; porcos, ovelhas, bovinos e caprinos e os genótipos F e G são exclusivos de felinos domésticos e ratos, respectivamente. Estudos moleculares também revelaram que o genótipo A apresenta dois subgrupos; A-I e A-II e B; BIII e BIV. Objetivo: O presente trabalho objetivou estudar a distribuição dos genótipos de G. intestinalis em humanos, caninos, felinos domésticos, ovinos, bovinos e caprinos, especificamente em relação aos padrões de transmissão no noroeste do Estado de São Paulo, Brasil, e avaliar a hipótese de infecção zoonótica. Métodos: No período de julho de 2009 a outubro de 2010 foram estudadas amostras fecais de 61 animais e 154 humanos provenientes do município de Araçatuba, Estado de São Paulo. As amostras de fezes dos animais foram obtidas no Centro de Controle de Zoonoses do município e no Hospital Veterinárío da Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho . Os espécimes fecais humanos foram coletados em creches na periferia da cidade e em laboratórios de Análises Clínicas da rede privada do município. O diagnóstico parasitológico foi feito por microscopia óptica, pelas técnicas de Faust e Hoffmann, Pons & Janer. Os genótipos de G. intestinalis foram caracterizados por PCR-RFLP e confirmado por seqüenciamento do gene ß-giardina. Resultados: As amostras humanas mostraram uma positividade de 25.3% (39/154), destas, a percentagem em crianças foi de 26.8% (36/134), já em adultos obteve-se 15% de amostras positivas (3/20). A frequência de G. intestinalis entre os animais estudados foi de 23% (14/61). Um total de 32 isolados de G. intestinalis obtidos a partir de fezes humanas e seis de cães e gatos foram característicos apenas do genótipo A (AI e AII/AIII). Conclusão: Com relação à frequencia da Giardíase, nossos resultados são semelhantes à maioria das porcentagens descritas em crianças e adultos do Estado de São Paulo e de outros Estados do Brasil. A prevalência observada na população animal está de acordo com as taxas de infecção mundiais descritas. Foram detectados genótipos considerados zoonóticos de G. intestinalis, circulando entre os animais domésticos e humanos da cidade de Araçatuba, inferindo a possibilidade de transmissão zoonótica do parasito na região noroeste do Estado de São Paulo. A ausência destes genótipos em animais de produção oferece a perspectiva de que os mesmos não estão envolvidos na cadeia de transmissão ao homem na mesma localidade.

Introdução - Giardia é um protozoário que parasita o intestino de quase todas as classes de vertebrados, podendo causar giardíase. Dentre os sete agrupamentos da espécie G. duodenalis, nomeados de A a G, apenas A e B foram encontrados no homem. Por se tratar de um patógeno de veiculação hídrica, a pesquisa de cistos desse microorganismo em água e esgoto é de interesse para a saúde pública. Uma vez que os métodos convencionais utilizados para a detecção desse protozoário em amostras ambientais não permitem diferenciar os isolados de Giardia potencialmente patogênicos para o homem dos demais, o emprego de técnicas que possibilitam a caracterização molecular do parasita em questão se torna necessário, principalmente no Brasil, onde as informações sobre os genótipos de Giardia do ambiente são escassas. Objetivos - Detectar a presença e identificar os genótipos de Giardia sp. em amostras de água e esgoto provenientes do estado de São Paulo, discutindo a importância dos achados para a saúde pública, bem como elaborar uma estratégia que possibilite a realização de tal proposta. Método - Amostras de esgoto bruto (5) e tratado (6), de águas superficiais (11), de poço (3) e de nascente (1) foram coletadas e concentradas pela técnica de membrana filtrante modificada ou por centrifugação. O DNA genômico foi extraído pelo método de fenol/clorofórmio/álcool-isoamílico. A amplificação do fragmento de 890pb do gene gdh, que codifica a produção de glutamato desidrogenase, foi realizada por nested PCR, seguida por clonagem e seqüenciamento de nucleotídeos. Resultados - Onze dentre as vinte e seis amostras analisadas (42,3por cento) foram confirmadas como sendo positivas para a presença de Giardia duodenalis. Os agrupamentos A, genótipo AII, e B foram encontrados. Conclusão - Esses achados indicam que, no estado de São Paulo, isolados de Giardia associados a giardíase humana estão presentes em esgoto tratado e em água superficial e de poço, de modo que o contato com esse tipo de matriz pode representar risco para a saúde pública. Além disso, a estratégia proposta possibilita a caracterização molecular de isolados de Giardia de amostras de água e esgoto. / Introduction - Giardia is a protozoan that parasitizes almost all classes of vertebrates, causing giardiasis. Among the seven assemblages of G. duodenalis, named A to G, only A and B have been found in humans by this moment. As considered a waterborne pathogen, the detection of cysts in water and sewage samples is of interest for public health. Once conventional methods are not able to distinguish Assemblages A and B of G. duodenalis from others, the application of techniques that allow a molecular characterization of Giardia isolates is an important issue, especially in Brazil, where there is scarce information about the genotypes of this parasite in the environment. Objective - To detect and identify Giardia genotypes in water and sewage samples from São Paulo state, discussing the importance of findings for public health, as well as develop a strategy that makes it possible. Method - Raw (5) and treated (6) sewage, surface (11), well (3) and spring (1) water samples were collected and concentrated by modified membrane filtration technique or centrifugation. Genomic DNA was extracted using phenol/chloroform/isoamilic alcohol method. A 890bp fragment of gdh gene, that codes the glutamate dehydrogenase production, was amplified by nested PCR. Cloning and sequencing were subsequently done. Results - 11 out of 26 (42,3 per cent) samples were confirmed to be positive for the presence of G. duodenalis. Assemblages A, genotype AII, and B were found. Conclusions - These findings indicate that, in São Paulo state, Giardia isolates associated to human giardiasis are present in treated sewage and in surface and well water. Thereby, the contact with these matrices can offer risk for public health. Besides, the approach described here allows the molecular characterization of Giardia isolates from water and sewage samples.

A crescente urbanização associada à multiplicação do número de cidades e o aumento populacional, especialmente nos países em desenvolvimento, têm favorecido o surgimento e o crescimento desordenado das comunidades com consequente dificuldade de acesso aos serviços básicos, inadequadas condições de moradia e exposição a diversos contaminantes ambientais que contribuem para a baixa qualidade de vida e saúde. As parasitoses intestinais apresentam íntima relação com as condições sanitárias, constituindo um relevante problema de saúde pública com maior prevalência entre indivíduos de baixo nível socioeconômico. A ocorrência e manifestação da sintomatologia decorrente de uma infecção parasitária também se associa, principalmente, com a imaturidade do sistema imunológico em crianças com idade ntre 0 e 6 anos, que têm no ambiente de creches e pré-escolas outro importante fator que pode contribuir para a contaminação. Embora sejam crescentes os relatos de parasitismo intestinal em crianças que frequentam creches, ainda são escassas as pesquisas direcionadas aos pré- escolares da região Sul da Bahia, Brasil. Por essa razão, o objetivo deste estudo foi identificar a prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em crianças de 0 a 6 anos que frequentam creches municipais de Itabuna, cidade localizada na região Sul do estado da Bahia. Para atender aos objetivos propostos foram aplicados dois questionários, um as diretoras das creches/pré-escolas, visando realizar o levantamento das condições de saneamento e práticas de higiene alimentar no ambiente escolar e outro aos responsáveis legais das crianças, com o intuito de conhecer as condições individuais e familiares dos participantes. Para pesquisa de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foram coletadas três amostras fecais por sujeito da pesquisa, processadas e analisadas pelos métodos de Ziehl- Neelsen adaptado e Mariano & Carvalho, respectivamente. A prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foi de 39,10% e 29,49%, respectivamente. A grande maioria das crianças é de famílias de baixa condição social e baixo nível de escolaridade, possuem alta quantidade de moradores por residência (transmissão interpessoal). Estes aspectos constituem fatores facilitadores para a disseminação desses parasitas na população estudada. O hábito de não lavar as mãos com água e sabão também se mostrou um fator facilitador a infecção por Giardia lamblia e Cryptosporidium spp., manter as unhas cortadas e limpas diminui a exposição dos indivíduos a infecção por Giardia lamblia. Diante dos resultados, a investigação das enteroparasitoses, em especial da criptosporidíase e giardíase em pré- escolares de Itabuna, Bahia, Brasil é fundamental, devido o alto índice de positividade dos exames coproparasitológicos. Tal aspecto, aliado à escassez de estudos sobre o tema nessa região, mostra claramente que se trata de um problema de saúde pública e que se tornam necessárias melhorias no planejamento estratégico da aplicação dos recursos financeiros em prol do controle das parasitoses no município / Increasing urbanization linked to the multiplication of the number of cities and population growth, especially in developing countries, have favored the emergence and the uncontrolled growth of communities resulting in poor access to basic services, inadequate housing conditions and exposure to several environmental contaminants that contribute to poor quality of life and health. The Intestinal parasitosis shows a close relationship with sanitary conditions representing an important public health problem with higher prevalence among individuals of low socioeconomic status. The occurrence and presenting of symptoms resulting from a parasitic infection are also mainly associated with the immune system immaturity in children aged between 0 and 6 years, who have in their daycare and kindergarten environment another important determinant that could contribute to contamination. Although the reports about intestinal parasitism in children attending day care centers are increasing, there is still scarse research addressing kindergarten children in Southern Bahia, Brazil. Therefore, the aim of this study was to identify the prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia in children aged fron 0 to 6 years old who are attended in some of Itabuna\'s daycare centers. Itabuna city is located in the southern area of Bahia state. To meet the objectives proposed two questionnaires were applied , one to the daycare / kindergarten directors, in order to survey the conditions of sanitation and food hygiene practices in the school environment and other to the legal guardians, in order to find out the individual and family conditions of the participants. For the detection of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia three fecal samples were collected for each research subject, processed and analyzed by the Ziehl-Neelsen adapted, and Mariano & Carvalho methods, respectively. The prevalence of Cryptosporidium spp. Giardia lamblia were 39,10% and 29,49%, respectively. The large majority of children come from families of low social status, and educational level, live in enviroment with a high number of residents per household (person transmission). These aspects are factors that facilitate the spreading of these parasites in the studied group. The habit of not washing hands with soap and water was also a facilitating factor to infection by Giardia lamblia and Cryptosporidium spp., keep nails clean and cut decreases the exposure of individuals to infection by Giardia lamblia. Given the results, the investigation of intestinal parasites, especially giardiasis and cryptosporidiosis in the kindergarten schools Itabuna, Bahia, Brazil is critical, because of the high rate of positive results of fecal examinations. This aspect, together with the scarcity of studies on the subject in this region, clearly shows that it is a public health problem and that improvements are required in the strategic planning of the financial resources uses to the control of parasitic diseases in the city

Estudos de revisão sobre surtos associados à transmissão hídrica revelaram que os protozoários parasitas Cryptosporidium parvum e Giardia duodenalis (sinonímia: G. lamblia e G. intestinalis) são os principais responsáveis pelo maior número de casos registrados em todo o mundo. A contaminação das águas superficiais que servem ao abastecimento público por estes protozoários representa risco à saúde humana e animal, pois ambos parasitas apresentam resistência à cloração, processo convencional utilizado para desinfecção em Estações de Tratamento de Água (ETAs).Em vista desta lacuna, o presente estudo propõe identificar espécies e genótipos de Cryptosporidium e Giardia a partir de 128 amostras de águas superficiais de 11 mananciais do estado de São Paulo, de acordo com o Método 1623.1 (USEPA, 2012). Para identificar estes parasitas, foi realizada a recuperação dos (oo) cistos a partir de lâminas raspadas, seguindo o protocolo adaptado da USEPA, em seguida, utilizou-se o PCR em tempo real para identificar os genes 18S rRNA para Cryptosporidium e SSU para Giardia. Os resultados mostraram que a frequência de ocorrência desses protozoários nos pontos de captação foi de 29,7% para Giardia e 30,4% para Cryptosporidium. Os cistos estavam presentes em 10 dos 11 pontos de captação com frequências que variaram de 17 a 100%, e concentrações que variaram de <0,1 (Limite de Detecção=0,1) a 17,7 cistos /L, o que evidenciou a baixa qualidade dessas águas. Os oocistos ocorreram em uma frequência de 17 a 50% nas amostras positivas com concentrações que variaram de <0,1 a 11,5 oocistos/L. O ensaio de PCR em tempo real detectou um total de 81,4% (57/70) de amostras positivas para Cryptosporidium hominis-parvum-meleagridis e 21,4% (15/70) amostras positivas para Giardia duodenalis. A frequência de ocorrência desses agentes patogênicos e as altas concentrações de espécies antrópicas encontradas constituem um cenário de grande preocupação do ponto de vista da saúde pública, considerando-se que amostras foram coletadas dos locais de captação para o abastecimento público de água. / Review studies on waterborne outbreaks have been showing that Cryptosporidium parvum and Giardia duodenalis (synonym: G. lamblia and G. intestinalis) are the primarily responsible for the highest number of the cases recorded worldwide. Contamination of surface waters catchments by these protozoa is a risk factor to human health because both parasites are resistant to chlorination, which is a conventional process used for disinfection in water treatment plants (WTP). The present study aimed to identify species of Cryptosporidium and Giardia recovered from surface water catchment samples from 11 municipalities from the State of São Paulo, totalizing 128 samples. Quantification of both parasites was carried out according to method 1623.1 (USEPA, 2012). In order to identify parasites, the recovering of (oo)cysts from slides followed USEPA´s protocol by scraping slides, then Real Time PCR using the 18S rRNA genes for Cryptosporidium and SSU for Giardia were carried out. Results showed that the frequency of occurrence of these protozoa at the catchment points was 29,7% for Giardia and 30,4% for Cryptosporidium. Cysts were present in 10 of 11 catchments points with frequencies varying from 17 to 100% with concentrations ranging from <0.1 (Limit of Detection=0.1) to 17.7 cysts/L, which put in evidence the low quality of water. Oocysts occurred in a frequency from 17 to 50% in positive samples with concentrations ranging from <0.1 (LD) to 11.5 oocysts/L. The real-time PCR assay detected a total of 81.4% (57/70) of positive samples for Cryptosporidium hominisparvum- meleagridis and 21.4% (15/70) samples positive for Giardia duodenalis. The frequency of occurrence of these pathogens and the high concentrations of anthropic species found is a concerning scenario for human health, considering samples have been collected from catchment sites for public water supply.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

A crescente urbanização associada à multiplicação do número de cidades e o aumento populacional, especialmente nos países em desenvolvimento, têm favorecido o surgimento e o crescimento desordenado das comunidades com consequente dificuldade de acesso aos serviços básicos, inadequadas condições de moradia e exposição a diversos contaminantes ambientais que contribuem para a baixa qualidade de vida e saúde. As parasitoses intestinais apresentam íntima relação com as condições sanitárias, constituindo um relevante problema de saúde pública com maior prevalência entre indivíduos de baixo nível socioeconômico. A ocorrência e manifestação da sintomatologia decorrente de uma infecção parasitária também se associa, principalmente, com a imaturidade do sistema imunológico em crianças com idade ntre 0 e 6 anos, que têm no ambiente de creches e pré-escolas outro importante fator que pode contribuir para a contaminação. Embora sejam crescentes os relatos de parasitismo intestinal em crianças que frequentam creches, ainda são escassas as pesquisas direcionadas aos pré- escolares da região Sul da Bahia, Brasil. Por essa razão, o objetivo deste estudo foi identificar a prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em crianças de 0 a 6 anos que frequentam creches municipais de Itabuna, cidade localizada na região Sul do estado da Bahia. Para atender aos objetivos propostos foram aplicados dois questionários, um as diretoras das creches/pré-escolas, visando realizar o levantamento das condições de saneamento e práticas de higiene alimentar no ambiente escolar e outro aos responsáveis legais das crianças, com o intuito de conhecer as condições individuais e familiares dos participantes. Para pesquisa de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foram coletadas três amostras fecais por sujeito da pesquisa, processadas e analisadas pelos métodos de Ziehl- Neelsen adaptado e Mariano & Carvalho, respectivamente. A prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foi de 39,10% e 29,49%, respectivamente. A grande maioria das crianças é de famílias de baixa condição social e baixo nível de escolaridade, possuem alta quantidade de moradores por residência (transmissão interpessoal). Estes aspectos constituem fatores facilitadores para a disseminação desses parasitas na população estudada. O hábito de não lavar as mãos com água e sabão também se mostrou um fator facilitador a infecção por Giardia lamblia e Cryptosporidium spp., manter as unhas cortadas e limpas diminui a exposição dos indivíduos a infecção por Giardia lamblia. Diante dos resultados, a investigação das enteroparasitoses, em especial da criptosporidíase e giardíase em pré- escolares de Itabuna, Bahia, Brasil é fundamental, devido o alto índice de positividade dos exames coproparasitológicos. Tal aspecto, aliado à escassez de estudos sobre o tema nessa região, mostra claramente que se trata de um problema de saúde pública e que se tornam necessárias melhorias no planejamento estratégico da aplicação dos recursos financeiros em prol do controle das parasitoses no município / Increasing urbanization linked to the multiplication of the number of cities and population growth, especially in developing countries, have favored the emergence and the uncontrolled growth of communities resulting in poor access to basic services, inadequate housing conditions and exposure to several environmental contaminants that contribute to poor quality of life and health. The Intestinal parasitosis shows a close relationship with sanitary conditions representing an important public health problem with higher prevalence among individuals of low socioeconomic status. The occurrence and presenting of symptoms resulting from a parasitic infection are also mainly associated with the immune system immaturity in children aged between 0 and 6 years, who have in their daycare and kindergarten environment another important determinant that could contribute to contamination. Although the reports about intestinal parasitism in children attending day care centers are increasing, there is still scarse research addressing kindergarten children in Southern Bahia, Brazil. Therefore, the aim of this study was to identify the prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia in children aged fron 0 to 6 years old who are attended in some of Itabuna\'s daycare centers. Itabuna city is located in the southern area of Bahia state. To meet the objectives proposed two questionnaires were applied , one to the daycare / kindergarten directors, in order to survey the conditions of sanitation and food hygiene practices in the school environment and other to the legal guardians, in order to find out the individual and family conditions of the participants. For the detection of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia three fecal samples were collected for each research subject, processed and analyzed by the Ziehl-Neelsen adapted, and Mariano & Carvalho methods, respectively. The prevalence of Cryptosporidium spp. Giardia lamblia were 39,10% and 29,49%, respectively. The large majority of children come from families of low social status, and educational level, live in enviroment with a high number of residents per household (person transmission). These aspects are factors that facilitate the spreading of these parasites in the studied group. The habit of not washing hands with soap and water was also a facilitating factor to infection by Giardia lamblia and Cryptosporidium spp., keep nails clean and cut decreases the exposure of individuals to infection by Giardia lamblia. Given the results, the investigation of intestinal parasites, especially giardiasis and cryptosporidiosis in the kindergarten schools Itabuna, Bahia, Brazil is critical, because of the high rate of positive results of fecal examinations. This aspect, together with the scarcity of studies on the subject in this region, clearly shows that it is a public health problem and that improvements are required in the strategic planning of the financial resources uses to the control of parasitic diseases in the city

Giardia duodenalis é um protozoário de distribuição mundial responsável por causar infecções entéricas em uma grande variedade de mamíferos, incluindo os humanos. Mesmo apresentando pouca variação em sua morfologia, os isolados podem ser diferenciados, de acordo com análises de proteína e polimorfismo de DNA, em pelo menos oito agrupamentos genéticos distintos, denominados assemblages (A-H). Apenas os assemblages A e B têm sido reportados em humanos e outros mamíferos. Isolados de assemblage A podem, ainda, ser divididos em quatro sub-assemblages (AI, AII, AIII e AIV). Sequencias heterogêneas têm sido frequentemente identificadas em estudos de caracterização molecular envolvendo amostras contendo múltiplos cistos do parasita. Buscando estudar a ocorrência dos eventos de heterozigose de sequencia alélica (ASH) e recombinação gênica, o presente trabalho teve como objetivo isolar cistos de G. duodenalis empregando-se a técnica de micromanipulação e caracterizá-los molecularmente através da análise multilócus envolvendo os genes gdh, tpi, orfC4 e bg. Dez cistos foram individualizados e utilizados na pesquisa. Todos foram igualmente identificados por todos os genes, nove cistos caracterizados como assemblage AII e um cisto caracterizado como assemblage B. Os cromatogramas oriundos do cisto identificado como assemblages B apresentaram diversos sítios heterogêneos nos genes gdh, bg e orfC4, sendo que, nesses dois últimos, observaram-se sobreposições dos alelos AII e B no produto sequenciado (heterozigose inter assemblage). Os produtos de PCR foram clonados e as sequencias obtidas revelaram a ocorrência dos dois alelos neste único cisto. Os sítios polimórficos encontrados nas sequencias do gene gdh indicaram heterozigose intra assemblage B. Embora ASH já tenha sido relatada em cistos individualizados de G. duodenalis, estes são os primeiros resultados indicando a presença dos dois alelos, simultaneamente, em um único indivíduo. Esses resultados demonstram fortes evidências que ocorre troca genética entre indivíduos geneticamente distintos de G. duodenalis / Giardia duodenalis is a worldwide distribution enteric protozoan responsible for causing infections in a wide variety of mammals, including humans. Even showing little change in their morphology, isolates can be distinguished, according to the analysis of proteins and DNA polymorphisms in at least eight distinct genetic groups, known assemblages (A - H). Only assemblages A and B have been reported in humans and other mammals. Isolates of assemblage A also can be divided into four sub-assemblages (AI, AII, AIII and AIV). Heterogeneous sequences have been frequently identified in studies involving molecular characterization of samples containing multiple cysts of the parasite. Seeking to study the occurrence of allelic sequence heterozygosity (ASH) and genetic recombination events, the present study aimed to isolate G. duodenalis cysts employing the micromanipulation technique and characterize them molecularly through multilocus analysis involving gdh, tpi, orfC4 and bg genes. Ten cysts were individualized and used in the research. All cysts were equally identified for all genes; nine cysts were characterized as assemblage AII and one characterized as assemblage B. The chromatograms derived from the cyst identified as assemblage B presented many heterogeneous sites in gdh, bg and orfC4 genes, and in these last two, there were overlaps of alleles AII and B in the sequenced product (heterozygous inter assemblage). PCR products were cloned and the sequences obtained revealed the occurrence of two alleles at this single cyst. The polymorphic sites found in the sequences of the gdh gene indicated intra heterozygosity assemblage B. Although ASH has already been reported in G. duodenalis individualized cysts, these are the first results indicating the presence of two alleles simultaneously in a single individual. These results demonstrate strong evidence that genetic exchange occurs between individuals genetically distinct of G. duodenalis