92 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-27T12:58:42Z No. of bitstreams: 1 Carine Oliveira dos Santos.pdf: 675472 bytes, checksum: a74a06d34619d585d8afdce45b616b22 (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-01T17:49:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carine Oliveira dos Santos.pdf: 675472 bytes, checksum: a74a06d34619d585d8afdce45b616b22 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-01T17:49:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carine Oliveira dos Santos.pdf: 675472 bytes, checksum: a74a06d34619d585d8afdce45b616b22 (MD5) / Capes / As geléias são produtos oriundos de frutas inteiras ou em partes com ou sem sementes, com ou sem casca, ou ainda subprodutos destas obtidos por processos tecnológicos considerados seguros para a produção de alimentos. O aproveitamento de subprodutos e resíduos é uma oportunidade de diversificação para a indústria beneficiadora de alimentos, devido às possibilidades de desenvolvimento de novos produtos. Na etapa que antecede ao processo de fermentação do cacau é gerado um subproduto conhecido popularmente como “mel” de cacau proveniente da prensagem das sementes de cacau em caixas de prensas ou prensas comuns. O “mel” de cacau é composto por água, açúcares fermentáveis, ácidos não voláteis e pectina. Essas características da sua composição são ideais para o aproveitamento deste material na produção de geléias. Com o intuito de acrescentar mais um produto na cadeia produtiva do cacau, este estudo teve como objetivo o desenvolvimento de formulações de geléia com “mel” de cacau adicionada cacau em pó sem adição de açúcar. O “mel” de cacau utilizado foi proveniente de uma fazenda de Cacau da região Sul da Bahia coletado no período entre dezembro a abril, safra 2010/2011. A análise microbiológica do mel de cacau apresentou conformidade para coliformes totais, coliformes fecais e salmonella. As análises físico químicas apresentaram um teor de pectina 0,8g 100g -1, acidez total titulável em ácido cítrico 0,7 e pH 3,6, além de um teor de sólidos solúveis 11,5º Brix. Valores de açúcares redutores e não-redutores 8,6 g 100g -1 e 11,3 g 100g - 1respectivamente. As fibras totais apresentaram valor de 0,23 g 100g -1 e sódio 0,35 g 100g -1. Três formulações foram realizadas com associação de edulcorantes e espessantes. Formulação F1 com associação dos edulcorantes taumatina e sucralose, a formulação F2, taumatina e acessulfame K e a formulação F3, acessulfame K e sucralose. Utilizou-se como espessantes a polidextrose, maltitol e o sorbitol e como conservantes o sorbato de potássio. Uma formulação F4 denominada de padrão com sacarose foi realizada com o objetivo de obter um tratamento controle para comparação com as demais formulações em estudo. Foram realizadas análises física, físico-químicas e sensorial. Segundo as análises a formulação padrão (F4) apresentou maiores valores para sólidos solúveis, atividade de água, umidade, açúcares redutores e teor de lipídeos. A formulação (F1) obteve maior acidez titulável em ácido cítrico, pectina e proteínas. A formulação (F2) apresentou maior teor de cinzas e fibras. A formulação (F3) obteve valores para textura mais próximos da formulação padrão e maiores valores para aceitação e intenção de compra. As geléias foram definidas segundo a literatura como geléia diet, light em relação ao padrão e fonte de fibras de acordo com a legislação vigente. O “mel” de cacau é uma matéria-prima viável para o desenvolvimento de novos produtos como por exemplo, geleia dietética. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2012.

67 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-27T13:42:54Z No. of bitstreams: 1 Priscilla Pereira dos Santos.pdf: 1657272 bytes, checksum: f4598deae9dac5b281816007402625ab (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-01T17:52:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Priscilla Pereira dos Santos.pdf: 1657272 bytes, checksum: f4598deae9dac5b281816007402625ab (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-01T17:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Priscilla Pereira dos Santos.pdf: 1657272 bytes, checksum: f4598deae9dac5b281816007402625ab (MD5) / Capes / A umbucajazeira é uma espécie nativa da região semiárida nordestina, explorada economicamente com base em seus frutos, consumidos em grande parte “in natura”. Os frutos apresentam grande potencial agroindustrial, principalmente para produção de geléia, agregando valor a essa fruteira. Objetivou-se com esse estudo, avaliar sensorialmente a elaboração de duas geléias de umbu-cajá, sendo uma dietética utilizando-se o xilitol como opção de substituição dos açúcares por apresentar menor valor calórico e ter o mesmo poder de doçura da sacarose e a outra convencional, oriundas de dois acessos e dois estádios de maturação. Os frutos procedentes do município de Itaberaba, BA, foram despolpados e congelados a -18oC até o momento da utilização. Para o processamento da geléia, utilizou-se a proporção polpa/açúcar ou xilitol/pectina: 50:50:0,5. A mistura foi concentrada até a obtenção de 63 ºBrix. As geléias de umbu-cajá foram avaliadas por 50 provadores não treinados, usando escala hedônica de nove pontos, tendo como atributos aparência, cor, aroma, sabor e textura. As notas médias variaram de 6,33 a 7,57; não houve diferença significativa para textura (p>0,05). As polpas de umbu-cajá verde e madura apresentaram valores de sólidos solúveis totais (SST), acidez total titulável (ATT) e pH, variando entre 10,75 e 11,33 oBrix; 1,42 e 2,83 g de ácido cítrico por 100 g de polpa; 2,36 e 2,65, respectivamente. Os resultados das análises físicas e físicoquímicas evidenciaram que os valores da composição das geléias elaboradas com sacarose estão próximos a preparada com xilitol, com exceção dos açúcares totais e valor energético. As geléias apresentaram valores de pH entre 2,39 e 2,81; acidez total titulável (ATT) entre 0,64 e 0,77 g de ácido cítrico por 100 g de polpa; sólidos solúveis totais (SST) entre 60,92 e 65,08 oBrix, respectivamente. Na análise de cor, foram encontrados baixos valores de a* e b*, tendo o segundo maior predomínio, indicando uma tendência para a cor amarela. Quanto à textura, a geléia com maior firmeza e consistência foi a Preciosa Convencional Polpa Madura (PCPM). Os frutos da umbucajazeira mostraram-se promissores para a elaboração de geléia, pois tiveram boa aceitação sensorial. O uso do xilitol mostrou-se satisfatório para obtenção de um produto com características de geléia e sabor similar ao convencional com baixo valor energético. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2010.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-01-17T14:01:33Z No. of bitstreams: 1 2012_HumbertoGonczarowskaJorge.pdf: 4182565 bytes, checksum: 32af60ccdfdd2ecfee93fbb6d0737438 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-01-24T13:04:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_HumbertoGonczarowskaJorge.pdf: 4182565 bytes, checksum: 32af60ccdfdd2ecfee93fbb6d0737438 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-24T13:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_HumbertoGonczarowskaJorge.pdf: 4182565 bytes, checksum: 32af60ccdfdd2ecfee93fbb6d0737438 (MD5) / Polifenismo é a habilidade de um genoma expressar múltiplos fenótipos morfológica e comportamentalmente distintos. Em abelhas Apis mellifera¸ o polifenismo é essencial, uma vez que gera divisão de tarefas na colméia, vital para sua viabilidade. A plasticidade fenotípica das abelhas é mediada nutricionalmente pela geleia real (GR). A major royal jelly protein 1 (MRJP1) é a mais abundante proteína da GR, e é descrita como o principal fator ativo na diferenciação de castas de Apis mellifera. A MRJP1 é uma glicoproteína que se liga fortemente a um peptídeo chamado apisimina (5,5 kDa) e se auto-associa, formando complexos de diferentes tamanhos, podendo se apresentar em diversas formas moleculares numa única solução. O objetivo deste trabalho foi caracterizar associações de MRPJ1 sob diversas condições. MRJP1 foi purificada em um único passo de cromatografia de troca iônica. Por cromatografia de exclusão molecular foi possível observar que a MRJP1 tende a se oligomerizar ou até mesmo a se agregar em tampões ácidos, em amostras aquecidas a 60ºC ou em tampões com alta molaridade de sal (2 M de NaCl) ou de glicina (2 M),. Em tampão PBS pH neutro e tampão carbonato/bicarbonato pH 10,0, a MRJP1 está presente em três formas -pentâmero (290 kDa), dímero (120 kDa) e monômero (55 kDa). Ao se adicionar 0,5 M de glicina em tampão carbonato/bicarbonato pH 10,0, a MRJP1 se dissocia, apresentando-se mais abundante nas formas dimérica e monomérica. A presença dos surfactantes dodecil sulfato de sódio, Tween® 20 e Brij 35 induz um aumento na massa dos complexos de MRJP1, causado provavelmente pela ligação de moléculas do detergente com a proteína, podendo também induzir oligomerização ou agregação. Logo, conclui-se que a liofilização e aquecimento das amostras de MRJP1 induzem oligomerização e agregação da amostra. Não liofilizar o monômero e mantê-lo em baixas temperaturas mantém a amostra nesta forma molcular. O tampão carbonato/bicarbonato, pH 10,0, contendo glicina 0,5 M foi o melhor para se obter menor quantidade de formas de MRJP1 em solução com grande quantidade de monômero. O processo de ultrafiltração impede a purificação de MRJP1 em cromatografia de troca-iônica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Polyphenism is the hability of a genome to express multiple phenotypes with different morphologies and behaviors. In Apis mellifera bees, the polyphenism is essential, once it generates labor division in the hive, vital to its viability. The bee s phenotypic plasticity is nutritionally mediated by royal jelly (GR). The major royal jelly protein 1 (MRJP1) is the most abundant protein in GR, and it is described as the main active factor in differentiating Apis mellifera castes. The MRJP1 is a glycoprotein that binds strongly to a peptide named apsimin (5,5 kDa) and self-associates, forming complexes of various sizes, and may present itself in different molecular forms in one solution. The purpose of this study was to characterize MRJP1 associations under different conditions. MRJP1 was purified in a single step of ionic exchange chromatography. By size exclusion chromatography, it was possible to observe the MRJP1 oligomerization or even aggregation in acid buffers, in samples heated to 60ºC or in buffers with high salt molarity (2 M of NaCl) or glycine (2 M). In PBS buffer at neutral pH and carbonate/bicarbonate pH 10,0 buffer, MRJP1 was present in three forms - pentamer (290 kDa), dimer (120 kDa) or monomer (55 kDa). By adding 0.5 M of glycine in carbonate/bicarbonate pH 10,0 buffer, MRJP1 dissociates, leading to monomer and dimmer as the most abundant forms. The presence of the surfactants sodium dodecyl sulfate, Tween® 20 and Brij 35 induces a mass increase in the MRJP1 complex, probably caused by the binding of detergent molecules to the protein. Detergents may also induce oligomerization or aggregation. Therefore, it is concluded that lyophilization and heating the MRJP1 samples induce oligomerization and aggregation of the sample. To not lyophilize the monomer and keep it at low temperatures maintains the sample in this molecular form. The carbonate/bicarbonate buffer, pH 10.0, containing 0.5 M of glycine was the best for obtaining fewer MRJP1 forms in solution with high amounts of monomer. The ultrafiltration process prevents MRJP1 purification by ion exchange chromatography.

Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Resumo: Foram utilizadas 12 colônias distribuídas de forma aleatória e divididos entre 4 grupos experimentais, com 3 repetições cada: P0, P23, P25 e P27, contendo 0, 23, 25 e 27% de proteína bruta (PB) na ração, respectivamente. Foram fornecidos 30 gramas de cada ração por enxame a cada 3 dias durante o período de 36 dias. Ao final do período experimental, foram coletadas 10 abelhas de cada tratamento com seis dias de idade para análises morfológicas da glândula mandibular (GM). Observou-se aumento significativo na área da GM para os grupos que receberam ração proteica, em relação ao P0. Com relação à altura da célula secretora da GM, todos os enxames que receberam ração proteica apresentaram aumento significativo em relação ao P0; entretanto, o grupo P23 promoveu aumento significativo da altura da célula secretora em relação aos demais grupos. Na análise de regressão, o nível ideal de proteína na ração para o desenvolvimento da GM é de 22,2% PB. Pode-se concluir que o uso de ração proteica promove aumento da área do reservatório e altura da célula secretora da glândula mandibular em abelhas operárias com seis dias de idade. / Mestre

Orientador: Regildo Marcio Gonçalves da Silva / Banca: Dario Abel Palmieri / Banca: Valter Henrique Marinho dos Santos / Resumo: O estresse oxidativo está correlacionado ao aparecimento de doenças, e pode ser intensificado devido à exposição a fatores ambientais, como estresse, abuso de drogas, radiação solar, poluição entre outros. Estudos com vegetais têm demonstrado que os mesmos podem conter compostos antioxidantes passíveis de remediar ou prevenir tais complicações. Nesse contexto o presente trabalho avaliou a atividade antioxidante, antiglicante, fotoprotetora e verificou-se a presença de compostos polifenólicos dos extratos aquoso, etanólico e hidroalcoólico de frutos de Chrysophyllum cainito L, Hancornia speciosa Gomes. e P. glomerata Berg., além disso foram produzidas e analisadas geleias desses frutos. Compostos fenólicos foram determinados por técnicas espectrofotométrica e HPLC (High performance liquid cromatography). Foi verificada a presença de compostos fenólicos, incluindo flavonoides, para todos os de frutos avaliados, com destaque para os extratos de C. cainito (casca), que apresentou os maiores valores com o extrato hidroetanólico dessa espécie. Quanto a atividade antioxidante, novamenta a espécie de C. cainito obteve os mais valores entre os resultados para os diferentes testes realizados, sequestro do radical livre DPPH, potencial redutor de ferro (FRAP - ferric reducing antioxidant power), inibição da peroxidação lipídica (TBARS - thiobarbituric acid reactive substances), e sequestro do NO, entretanto os demais extratos avaliados para as outras espécies, H. speciosa e P. glomerata... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Oxidative stress is correlated with the onset of disease, and can be intensified due to exposure to environmental factors such as stress, drug abuse, solar radiation, pollution, among others. Studies with vegetables have shown that they may contain antioxidant compounds likely to remedy or prevent such complications. In this context, the present work evaluated antioxidant, antiglican and photoprotective activity and verified the presence of polyphenolic compounds of the aqueous, ethanolic and hydroalcoholic extracts of fruits of Chrysophyllum cainito L., Hancornia speciosa Gomes. and P. glomerata Berg. in addition, jellies of these fruits were produced and analyzed. Phenolic compounds were determined by spectrophotometric techniques and HPLC (High performance liquid chromatography). It was verified the presence of phenolic compounds, including flavonoids, for all evaluated fruits, especially the extracts of C. cainito (peel), which presented the highest values with the hydroethanolic extract of this species. As for the antioxidant activity, again the C. cainito species obtained the highest values among the results for the different tests performed, DPPH free radical sequestration, ferric reducing antioxidant power (FRAP), inhibition of lipid peroxidation (TBARS - thiobarbituric acid reactive substances), and NO scavenging. However, the other extracts evaluated for the other fruit species, H. speciosa and P. glomerata also obtained significant results. These results Indicate antioxidant potential for the fruits of these species tested and that are possibly related to the presence of phenolic compounds. Only the hydroethanolic (70%) extract of P. glomerata indicated antiglication activity at the concentration of 10mg.mL-1. As for the jellies produced, the C. cainito jelly also obtained prominent results for both nutritional and functional constituents, but the P. glomerata one presented... / Mestre

Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Resumo: As glândulas hipofaringeanas das abelhas Apis mellifera L. possuem diversas funções importantes para o desenvolvimento das colônias, sendo a mais importante delas a produção da fase proteica da geleia real, a qual é o ponto de partida das diferentes rotas de desenvolvimento das abelhas. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivos estudar possíveis variáveis que possam afetar, ao longo do tempo, a morfologia das glândulas hipofaringeanas (área e número de seus ácinos). Em vista disso, no Capítulo II, foram investigados se os nutrientes e origem botânica do pólen podem afetar o desenvolvimento das glândulas hipofaringeanas ao longo das estações do ano. A qualidade deste recurso floral é determinante para o crescimento das glândulas hipofaringeanas em abelhas operárias e, cada tipo polínico oferece aporte nutricional específico, o qual pode variar de acordo com a origem botânica dos vegetais estações do ano. Dessa maneira, foi realizado estudo morfológico das glândulas hipofaringeanas de abelhas com seis dias de idade ao longo de um ano. O “pão de abelhas” foi colhido durante um ano e, foram feitas análises de proteína total, cinzas, flavonoides totais, compostos fenólicos e análises palinológicas. Verificou-se que a GH teve maior área e número de ácinos na estação do verão (P < 0,05). O teor de proteína bruta e cinzas não mostraram variações ao longo do ano. O teor de flavonoides totais do pólen foi maior no verão (P < 0,05). Foram identificados três grupos de compostos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Rogério Lopes Vieites / Banca: Elisangela Marques Jeronimo Torres / Banca: Flavia Queiroga A. de Almeida / Resumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma geleia light de maná cubiu adoçada com sucralose, avaliar sua composição e aceitabilidade. No fruto in natura e na polpa branqueada de maná cubiu foram realizadas as seguintes análises físico-químicas (Sólidos Solúveis, pH, Acidez Titulável, açúcar redutor), quantificação da cor instrumental e análises bioquímicas (Compostos Fenólicos Totais e Atividade Antioxidante pelo método DPPH). As geleias foram preparadas com uma concentração de 60:40 (polpa:açúcar cristal) para a convencional e 60:40 (polpa:açúcar cristal + sucralose) para as geleias light. Para que ocorresse a geleificação das mesmas, foi utilizada pectina cítrica. A geleia foi envasada à quente em embalagens de vidro com capacidade para 320g, previamente esterilizadas fechadas e invertidas. Após o envase as geleias foram resfriadas naturalmente e estocados à temperatura ambiente. Nas geleias foram feitas as seguintes análises: físico-químicas (Sólidos Solúveis, pH, Acidez Titulável, açúcar redutor e açúcar redutor total), quantificação da cor instrumental, análises bioquímicas (Compostos Fenólicos Totais e Atividade Antioxidante pelo método DPPH), análise microbiológica e análise sensorial, durante o período de armazenamento de 120 dias. Os teores de Sólidos Solúveis aumentaram durante o tempo de armazenamento. Os tratamentos que apresentaram adição de edulcorante (formulações light), ocasionou pequena elevação do valor do pH quando comparados com a geleia convencional. Durante o período de armazenamento houve pequena elevação nos teores de Acidez Titulável, principalmente nas formulações light. Os Compostos Fenólicos Totais apresentaram redução significativa nos primeiros quinze dias de armazenamento para todos os tratamentos, já o antioxidantes não sofreram alterações ... / Abstract: The objective of this work was to develop a light jelly manna cubiu sweetened with sucralose, evaluate its composition and acceptability. In the fresh fruit and bleached pulp manna cubiu were held the following physico-chemical analysis (soluble solids, pH, Acidity, reducing sugar), quantification of instrumental color and chemistries (Phenolic Compounds and Antioxidant Activity Totals by DPPH method). The jellies were prepared with a concentration of 60:40 (pulp crystallized sugar) for conventional and 60:40 (pulp: Crystal + sucralose sugar) for light jellies. For gelation thereof occur, citrus pectin was used. The jelly was bottled in the hot glass containers with a capacity of 320g, pre-sterilized closed and inverted. After filling the jellies were cooled naturally and stored at room temperature. Jelly were asked the following analyzes: Physical and chemical (soluble solids, pH, Acidity, reducing sugar and total reducing sugar), quantification of instrumental color, biochemical (Phenolic Compounds and Antioxidant Activity Totals by DPPH method), and microbiological analysis sensory analysis for the storage period of 120 days. The Soluble Solids content increased during the storage time. The treatments showed that the addition of sweetener (formulations light) caused a small increase of the pH value when compared with the conventional jelly. During the storage period, there was a small increase in Titratable Acidity levels, especially in light formulations. The Phenolic Compounds Total fell significantly in the first fifteen days of storage for all treatments, as the antioxidants did not change significantly during storage. The results of the gel did not show any microbiological contamination until 120 days of storage, appearing in satisfactory sanitary conditions. The Jelly Light 2 (60% + 28% sucrose pulp + 12% sucralose), showed greater acceptance and according to the assessment of purchase ... / Mestre

Orientador: Rogério Lopes Vieites / Banca: Elisangela Marques Jeronimo Torres / Banca: Flavia Aparecida de Carvalho Mariano Nasser / Resumo: O presente trabalho visou o desenvolvimento, aceitabilidade, análise nutricional e vida de prateleira de geleia convencional e light de uva cultivar BRS Violeta, utilizando a sucralose como edulcorante. Foram avaliados quatro tratamentos, sendo T1 - Convencional (60 % polpa: 40 % açúcar cristal), T2 - Light 1 (60 % polpa: 30 % açúcar cristal + 10 % sucralose), T3 - Light 2 (60 % polpa: 28 % açúcar cristal + 12 % sucralose), T4 - Light 3 (60 % polpa: 24 % açúcar cristal + 16 % sucralose). Para ocorrer à formação do gel característico da geleia, foram adicionados às formulações, pectina cítrica e ácido cítrico. As geleias foram avaliadas quanto teores de sólidos solúveis, pH, acidez total titulável, açúcar redutor e açúcar total, compostos fenólicos totais, atividade antioxidante total, pigmentos e flavonoides, cor instrumental, análise microbiológica, análise sensorial e avaliação energética, durante um período de 120 dias de armazenamento. Os teores de sólidos solúveis diminuíram durante o tempo avaliado. Houve pequena elevação nos teores de acidez total titulável, principalmente nas formulações light. Os compostos fenólicos e os antioxidantes decaíram durante o armazenamento. As versões de geleia Convencional e Light 2 demonstraram maior estabilidade no tempo armazenado, considerando assim viáveis para fabricação. Não ocorreu contaminação microbiológica nas geleias até os 120 dias de armazenamento, apresentando-se satisfatórias ao consumo. Todas as versões de geleias foram ... / Abstract:This work aimed at the development, acceptability, nutritional analysis and shelf life of conventional and light grape jam BRS Violeta using sucralose as a sweetener. We evaluated four treatments: T1 - Conventional (60% pulp: 40% crystal sugar), T2 - Light 1 (60% pulp: 30% granulated sugar + 10% sucralose), T3 - Light 2 (60% pulp: 28% crystal sugar + 12% sucralose), T4 - Light 3 (60% pulp 24% granulated sugar + 16% sucralose). For the formation of the characteristic occurs gel jam were added to the formulations, citric pectin and citric acid. The jams were evaluated for soluble solids, pH, titratable acidity, reducing sugar and the total sugar, total phenolics, total antioxidant activity, pigments and flavonoids, instrumental color, microbiological analysis, sensory analysis and energy assessment for a period of 120 days' storage. The soluble solids decreased during the evaluated time. There was a slight increase in levels of total acidity, especially in light formulations. The phenolics and antioxidants declined during storage. The Conventional and Light 2 jam versions showed greater stability in storage time, thus considering feasible to manufacture. There was no microbiological contamination jam until 120 days of storage, presenting satisfactory consumption. All versions of jams were well accepted by the consumer showing potential commercial value... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3094_1.pdf: 1812433 bytes, checksum: 9e653e1c540a89a588becea9f2d123a8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As células-tronco são dotadas de capacidade de auto-renovação e diferenciação, que têm os tecidos adultos como uma de suas fontes. Essas células podem ser expandidas em cultura e dar origem a múltiplas linhagens. Dentre as células-tronco adultas, as mesenquimais ocupam posição de destaque, uma vez que são células multipotentes com capacidade de originar osteoblastos, adipócitos, condrócitos, neurônios e hepatócitos. Células-tronco mesenquimais derivadas de cordão umbilical são funcionalmente similares às derivadas de medula óssea (fonte clássica). Esse tecido apresenta-se como atraente fonte alternativa dessas células também por: existir em abundância, ser normalmente descartado pós-parto, além do procedimento para sua coleta não ser invasivo. No momento, a terapia celular representa grande esperança na medicina regenerativa devido à perspectiva de se reparar a perda de tecidos e/ou até mesmo órgãos nobres do corpo. As pesquisas com células-tronco ainda estão num estágio onde muitas questões científicas precisam ser resolvidas até suas aplicações se tornarem definitivas. Existem inúmeros métodos de isolamento dependendo tanto da origem do tecido, quanto dos procedimentos adotados pelos laboratórios. Neste trabalho analisamos a obtenção de células-tronco da geléia de Wharton de cordão umbilical humano através do método da migração espontânea . Todos os experimentos foram realizados de acordo com protocolo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFPE (n°.420/2007). O isolamento de células-tronco foi feito a partir da população primária de células mesenquimais. Utilizamos, para isso uma nova metodologia da seleção celular - imunomagnética columnfree conhecida como EasySep Magnet - EMA , no modo de seleção positiva pelo CD44 ou CD90. A eficácia do isolamento foi comprovada por citometria de fluxo (FACSCalibur). A mesma metodologia foi utilizada para detecção da expressão dos marcadores de superfície nas membranas citoplasmáticas das células (fenotipagem). A diferenciação osteogênica foi induzida durante três semanas com meio de cultura suplementado com indutores: ácido ascórbico, dexametasona e &#946;-glicerofosfato. Observamos que as células primárias da migração espontânea (terceira passagem) mostraram presença até 70-80% de células positivas aos marcadores das células-tronco mesenquimais. Todavia, nas culturas das células selecionadas mais de 90% das células foram positivas para os marcadores das células-tronco mesenquimais (CD90+; CD44+; CD29+) e negativas para as de origem hematopoéticas (CD45-; CD34- e CD31-). O tempo de duplicação das células-tronco foi de 2-3 dias. As células tiveram morfologia fibroblastóide e possuíram potencial de diferenciação pronunciado. Especificamente, o estímulo osteogênico originou características osteoblásticas que foram comprovadas por coloração citohistoquímica (von Kossa) onde se observou o aparecimento de cristais de hidroxiapatita na matriz extracelular. Desta forma, estabelecemos que a migração espontânea é um método relativamente simples, que requer menos tempo de processamento e resulta em considerável quantidade das células com alto índice de marcadores específicos das células-tronco já na população primária obtida. A seleção positiva com partículas magnéticas é capaz de aumentar ainda mais a pureza das células-tronco isoladas de cordão umbilical humano

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3132_1.pdf: 3125724 bytes, checksum: 3bf874d76ef407eac106e41b1d8b6065 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Canais iônicos são proteínas integrais, formadoras de poros na membrana plasmática das células e são de extrema importância para as funções intra e extracelulares. Os poros ajudam no transporte rápido e seletivo dos íons, nutrientes e metabolitos pela membrana plasmática, portanto estão diretamente relacionados a diferentes funções no organismo como, transmissão sináptica, contração muscular, secreção hormonal, regulação do volume celular, proliferação celular e diferenciação. Podemos classificar os canais iônicos de acordo com seu principal estímulo para ativação: temos os canais ativados por ligantes intracelulares, canais ativados por ligantes extracelulares, canais de potássio e cloreto ativados por cálcio, canais sensíveis a ácidos e canais dependentes de voltagem (Na+, K+, Ca+ e Cl-). Os canais iônicos têm sido extensamente estudados, e novas informações vêm sendo acumuladas nos últimos anos, mostrando a importância da participação destes canais em processos relacionados à homeostase, como também sua contribuição na proliferação e diferenciação celular. Nesse trabalho procuramos identificar os níveis de RNAm em quatro tipos de canais iônicos, canal de potássio de alta condutância ativado por cálcio (MaxiK), canal aniônico dependente de voltagem (pl-VDAC), Canal de cloreto ativado por cálcio (CLCA1) e Canal de potássio dependente de voltagem (hEAG1) nas células-tronco mesenquimais de cordão umbilical, a partir da geléia de Wharton (hwCTMs), nas diferentes fases do ciclo (G0/G1, S e G2/M) e diferenciação celular (adipo- e osteogênica), visando contribuir no processo de terapia celular. O RNA total de hwCTMs foi extraído utilizando RNeasy mini kit (QIAGEN). O RNA transcrito em cDNA com superScript reverse (Invitrogen). PCR em Tempo Real foi realizada no ABI prisma 7500 (Applied Biosystems) usando supermix UDG (Invitrogen). Em acordo com os dados publicados, o estímulo osteogênico originou características osteoblásticas das células comprovadas por coloração histoquímica (alizarin red S) onde se observou o aparecimento células alongadas com presença de granulações escuras (cristais de hidroxiapatita) na matriz extracelular. A comprovação da diferenciação adipogênica foi feita por coloração histoquímica com oil red O, mostrando células com morfologia mais arredondada e presença de vacúolos de gordura. Estabelecemos que entre os quatro canais estudados, dois, CLCA1 e hEAG1, não se expressaram, enquanto a expressão dos MaxiK e pl-VDAC foi consideravelmente alto atingindo ~10% do valor de housekeeping gene Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). Encontramos que a expressão dos MaxiK e pl-VDAC aumentaram durante a progressão do ciclo celular (G0/G1, S e G2/M) nas hwCTMs. Detectamos que a diferenciação muda a expressão dos canais MaxiK e pl-VDAC de maneira oposta: o canal MaxiK aumenta enquanto que o pl-VDAC diminui. Os dados ampliam o conhecimento sobre os tipos dos canais iônicos e o nível da expressão nas hwCTMs aumentando a compreensão da biologia de células-tronco mesenquimais